Cuireann Líonrín Úrscéal-1-Peiptíde Díorthaithe le Cosaint ar Bhás Néarónach agus Maolaítear Hemorrhage Incerebral i Lucha Cuid 3

Tugadh grúpaí cóireála de saline, TAT, nó TE1 (tuaslagtha i saline) do lucha 2 h tar éis ICH agus gach lá ar feadh 5 lá trí instealladh intraperitoneal ag toirt iomlán de 0.1 mLper ainmhithe. Tugadh peptides ar bhealach dalláilte ag dáileoga 12 mg/kg.

Is maolán fiseolaíoch a úsáidtear go coitianta é saline fiseolaíoch, a úsáidtear go forleathan i dturgnaimh leighis agus bitheolaíocha. Ach an raibh a fhios agat? Is féidir le saline fiseolaíocha ár gcuimhne a fheabhsú freisin!

Ar an gcéad dul síos, tá ról tábhachtach ag saline fiseolaíocha i ngnáthfheidhm na gcealla. Féadann sé gnáthbhrú osmotic cille a choimeád agus gnáth-mhoirfeolaíocht agus feidhm na gcealla a chothabháil. San inchinn, tá gá le líon mór cealla nerve saline fiseolaíocha mar shubstaint bhunúsach, agus is féidir le forlíonadh saline fiseolaíocha gnáthoibriú cealla inchinn a chur chun cinn, dóthain ocsaigine agus cothaithigh a sholáthar don inchinn, agus an inchinn a dhéanamh níos sláintiúla.

Ar an dara dul síos, is féidir le saline fiseolaíoch tarchur comhartha a chur chun cinn idir néaróin inchinn agus feabhas a chur ar chumas foghlama na hinchinne. Tá sé léirithe ag staidéir gur féidir le hinstealladh salanda fiseolaíocha éifeacht foghlama na bhfoghlaimeoirí a fheabhsú go suntasach, agus staid mhothúchánach na bhfoghlaimeoirí a fheabhsú, imní agus strus foghlama a laghdú. Ag an am céanna, is féidir le saline fiseolaíocha méadú freisin ar líon na néaróin agus ar chastacht na néaróin sa hippocampus, rud a chabhródh le foirmiú agus cothabháil cuimhne.

Ina theannta sin, is féidir le saline fiseolaíocha timpeallacht meitibileach na hinchinne a fheabhsú agus éifeachtaí díobhálacha éagsúla ar an inchinn a laghdú, mar shampla damáiste, loit, ischemia, agus hypoxia. Is fachtóirí iad seo a d'fhéadfadh an inchinn a ghortú, agus féadann instealladh salanda fiseolaíocha feabhas a chur ar chumas déileáil na hinchinne agus a damáiste a laghdú, rud a fheabhsóidh cuimhne agus cumas smaointeoireachta na hinchinne.

Go ginearálta, is substaint iontach é saline chun cuimhne a fheabhsú. Is féidir leis an iliomad éifeachtaí dearfacha a bheith aige ar an inchinn, lena n-áirítear líon agus castacht na néaróin a mhéadú, an timpeallacht meitibileach a fheabhsú, agus tarchur comhartha idir néaróin a chur chun cinn. Mar sin, nuair is gá dúinn ár gcuimhne a fheabhsú, d'fhéadfaimis smaoineamh freisin ar shalainn a instealladh chun cosaint agus tacaíocht níos fearr a sholáthar dár n-inchinn. Is féidir a fheiceáil go gcaithfimid ár gcuimhne a fheabhsú, agus is féidir le Cistanche ár gcuimhne a fheabhsú go suntasach toisc go bhféadfaidh sé cothromaíocht neurotransmitters a rialáil freisin, mar shampla leibhéil acetylcholine agus fachtóirí fáis a mhéadú, atá an-tábhachtach don chuimhne agus don fhoghlaim. Ina theannta sin, is féidir le Cistanche sreabhadh fola a fheabhsú freisin agus seachadadh ocsaigine a chur chun cinn, rud a d'fhéadfadh a chinntiú go bhfaigheann an inchinn cothú agus fuinneamh leordhóthanach, rud a fheabhsóidh beogacht agus seasmhacht na hinchinne.

Cliceáil fios bealaí chun do chuimhne a fheabhsú

4.13. Múnla Luiche a Spreagtar Collagenase de ICH

Úsáidtear instealladh collagenase go coitianta chun ICH a aslú [60]. Rinneadh ainéistéiseach ar lucha fireann C57BL/6 (8 go 12 seachtaine d’aois) le isaflurane (2 go 5%) agus cuireadh ar fhráma steiréatacsach iad.

Le linn an nós imeachta, coinníodh teocht an choirp gach ainmhí ag 37 ◦C le blaincéad homeothermic. Ag baint úsáide as uirlis steiréatachtach (Ruiwode Life ScienceCo., Ltd., Shenzhen, an tSín) agus steallaire (Hamilton Company, Reno, NV, USA), 0.3 µLof collagenase (0.{{12) }}Insileadh 45 IU; Sigma-Aldrich, St Louis, MO, SAM) isteach sa cheartatriatum (AP: +0.2 mm; ML: −2.3 mm; DV: −3.5 mm) ag ráta sreafa de 0.1 µL/nóim.

Iomlán de 0.3 µL de shalainn a insileadh isteach in ainmhithe rialaithe. Rinneadh gach gnáthamh máinliachta faoi choinníollacha aiseiptigh. Sa staidéar seo, baineadh úsáid as níos mó ná 66 lucha fireann, agus sannadh ainmhithe go randamach do ghrúpaí roimh gach turgnamh [57].

4.14. Anailís Iompraíochta

Braitheadh ​​​​anailís néareolaíoch iompraíochta na lucha tar éis foirmiú hematoma inchinn ag an tástáil a bhaint téip ghreamaitheach [61] agus tástáil sorcóir [60]. Rinneadh an tástáil barrchaolaithe ghreamaitheacha tríd an téip ghreamaitheach a chur ar an réigiún plandálaí de gach forepaw (ar dheis agus ar chlé) de na lucha.

Cuireadh gach luch i gcliabhán nua.

Taifeadadh an t-am ón uair a cuireadh an téip i bhfeidhm go dtí gur éirigh leis an luch a bhaint di, do gach lapa. Ceadaíodh uasmhéid de 300 s do gach lapa. Idir turgnaimh, cuireadh na hainmhithe ina gcliabhán tí i saoráid saor ó phataigin.

Rinneadh an tástáil sorcóir trí luch a chur i sorcóir gloine aicrileach trédhearcach (trastomhas: 8 cm; airde: 25 cm) os comhair 2 scáthán agus ceamara ar feadh 5 min. Cuireadh an ceamara go lárnach os comhair an 2 scáthán agus an sorcóir chun an físeán optamach a fháil.

Chun measúnú a dhéanamh ar úsáid neamhspleách forelimb, (1) cumas na lucha teagmháil a dhéanamh leis an mballa sorcóir le forelimb amháin le linn tógáil iomlán agus (2) cumas na lucha tuirlingthe gan ach amháin forelimb ar an urlár tar éis tógáil iomlán a mheas. Áiríodh ar a laghad 20 pointe teagmhála do gach forelimb trí úsáid a bhaint as gluaisne mhall.

Le haghaidh anailíse bonnlíne roimh máinliacht, rinneadh an tástáil faoi dhó in aghaidh na lucha le briseadh 1 h idir trialacha. Sloinntear forelimbuse mar chóimheas úsáide neamhspleách forelimb ar thaobh na láimhe deise agus an taobh clé.

4.15. Anailís Imleabhar Hematoma

Chun a chinneadh an laghdaigh na cóireálacha an méid hematoma, rinneadh lucha a íobairt 5 lá tar éis ICH; Baineadh an brains agus reo splanc san OCT. Gearradh na codanna corónacha ar thiús 30 µm agus cuireadh iad go díreach ar na sleamhnáin ghloine. Chun an toirt hematoma a chainníochtú, rinneadh na hailt a dhigitiú ag leibhéil choróin chaighdeánaithe.

Thomhais an t-úsáideoir dallóg na comhrianta agus an hematoma sna leathsféar clé agus ar dheis i ngach cuid. Tomhaiseadh agus ríomhadh toirt an hematoma agus an at ag baint úsáide as ImageJ (NIH).

Rinneadh ar a laghad 5 brains in aghaidh an ghrúpa tomhais hematoma, agus rinneadh an hematomavolume a thomhas ar fud na hinchinne.

4.16. Fluoro-Jade C staining

De réir phrótacal an mhonaróra [62], rinneadh measúnú ar néar-ghiniúint i lucha i lucha tar éis ICH spreagtha le collagenase trí smálú le Kit Staining Réidh le Caolú C Fluoro-jade (TR-100-FJT, Biosensis, Thebarton, An Astráil) [62].

Go hachomair, íobairt lucha rialaithe agus ICHmice (±ip peptide) 5 lá tar éis samhaltú, agus próiseáladh na brains de réir an phrótacail a úsáideadh don turgnamh imdhíon-cheimic.

Rinneadh rannáin inchinne ar snámh a thumadh i dtuaslagán hiodrocsaíd sóidiam 1% ar feadh 5 nóiméad, a rinseáil ar feadh 2 nóiméad i 70% eatánól, agus ansin rinsíodh iad ar feadh 2 nóiméad in uisce driogtha. Ansin, tumtha na hailt ar snámh i dtuaslagán sármhanganáite potaisiam 0.06% (KMnO4 in uisce driogtha) ar feadh 10 min.

Niteadh na codanna le ddH2O sular tumtha iad i 0.0001% tuaslagán ruaimnithe fluoro-jade (Fluoro-jade C in uisce driogtha) ar feadh 20 nóiméad le croitheadh ​​milis sa dorchadas.

Níodh na hailt le ddH2O, suite ar shleamhnáin brataithe, agus triomaíodh iad ag teocht an tseomra thar oíche sa dorchadas. Scrúdaíodh staining Fluoro-Jade C laistigh den réigiún perihematomal ag baint úsáide as micreascóp comhfhócasach Zeiss LSM 880. Rinneadh cainníochtú Fluoro-jade Cstaining ag baint úsáide as bogearraí ImageJ.

4.17. Imdhíonfluaraiseacht Fíocháin

Rinneadh ruaimniú imdhíonfhluaraiseachta fíocháin agus úsáid á baint as sraith de ranna 30-µm-tiumhais. Goradh codanna leis na príomhantasubstaintí seo a leanas: antasubstaintí frith-NeuN luiche (1:500, Millipore, MAB377, Billerica, MA, SAM) nó luch frith-GFAP (1:200, SigmaAldrich, G3893, St Louis, MO, SAM) ag 4 ◦C thar oíche. Tar éis níocháin le PBS, goraíodh codanna ansin le antashubstaint frith-luiche asail chomhchuingeach Alexa Fluor (1:1000; Invitrogen, A21202, Carlsbad, CA, SAM).

4.18. TUNEL Measúnacht

Baineadh úsáid as measúnacht críochfoirt deoxynucleotidyl transferase-mediated deoxyuridine triphosphate (dUTP) leas-lipéadaithe deiridh (TUNEL) chun cealla apoptotic a bhfuil ilroinnt DNA núicléach acu a aithint i réigiún perihematomal na hinchinne.

Rinneadh staining ag baint úsáide as trealamh tráchtála aon-chéim TUNEL apoptosis measúnachta (Beyotime, C1090, Nanjing, an tSín) agus a dhéantar de réir threoracha an mhonaróra. Tar éis imdhíonfluaraiseacht fíocháin, rinneadh imoibriú TUNEL.

Gortaíodh na hailt inchinn le meascán imoibriúcháin TUNEL (1 h ag 37 ◦C), agus ansin nite na hailt le PBS agus frithdhaite le DAPI. Scrúdaíodh comhlonnú staining NeuN-TUNEL ag baint úsáide as micreascóp comhfhócasach Zeiss LSM 880.

Rinneadh néaróin TUNEL-dearfach (NeuN deimhneach) sa réigiún perihematomal taobh istigh den striatum a chainníochtú trí úsáid a bhaint as bogearraí ImageJ ar thrí phictiúr dhifriúla in aghaidh an luch a tógadh faoi chuspóir 20X. Bhí comhlonnú staining GFAP-TUNEL cosúil leis an staining NeuN-TUNEL.

4. 19. Measúnacht Tréscaoilteachta Bacainn Fola-Bainte In Vivo

In Vivo, rinneadh Measúnachtaí Tréscaoilteachta Bacainn Fola-inchinn mar a thuairiscítear roimhe seo [63-65]. Go hachomair, rinneadh lucha rialaithe agus lucha ICH (±ip peptide) a instealladh intraperitoneally le 4 kDa dextran lipéadaithe FITC (100 µL de stoc 2 mM i PBS, Sigma Aldrich, 46944-100 MG-F, St Louis, MO, USA) tar éis 5 lá a shamhaltú, agus ainéistéise 5 minlater ina dhiaidh sin.

Tar éis am scaipeadh 10 min don rianaire, ullmhaíodh na hainmhithe le haghaidh perfusion trascairdiach, agus bailíodh ~ 300 µl fola ón gcuas cófra díreach tar éis atrialpuncture, agus ina dhiaidh sin perfusion ar feadh 3 nóiméad le PBS. Bailíodh Hemibrain (saor ó na lobes olfactory, cerebellum, agus hindbrain) agus duán amháin agus reoitear nítrigin neamhleachtach láithreach agus stóráiltear iad ag −80 ◦C.

Chun an fhluaraiseacht a thomhas, rinneadh samplaí leáite oighir, a mheá, agus a homogenized i PBS (400 µL le haghaidh hemicerebrum agus 600 µL le haghaidh duáin), agus lártheifneoiriú ina dhiaidh sin ar feadh 20 nóiméad ag 4 ◦C agus 15,000 × g.

Lódáltar súiteoirí (100 µL), chomh maith le toirteanna comhionanna séiream (1/5 caolú i PBS), isteach i 96-phláta dubh tobair, agus tomhaiseadh fluaraiseacht ag an excitation comhfhreagrach (490 nm)/astú(520 nm). ) i léitheoir pláta (Tecan, Männedorf, an Eilvéis). Baineadh úsáid as ainmhithe seamhan (gan rianinstealladh) chun luachanna uathfhluaraiseachta a dhealú. Ríomhadh an t-innéacs tréscaoilteachta (mL/g) mar an cóimheas idir RFUanna fíocháin/g meáchain fíocháin le serum RFUs/mL serum.

4.20. Staining Lectin Fluaraiseacha

Chun micrea-soithí inchinn a shamhlú, d'úsáideamar Lycopersicon esculentum lectin comhchuingeach fluorescein (1:200, Vector Laboratories, FL-1171, Burlingame, CA, USA) chun codanna tumtha ar snámh ar feadh 1 h.

Rinneadh íomhánna de na codanna ar mhicreascóp comhfhócasach Zeiss LSM 880 faoi chuspóir 20 ×, agus próiseáladh íomhánna le suíomh gáma 1.3. Tógadh trí íomhá ó 3 limistéar réamhshonraithe sa réigiún perihematomal den inchinn choróineach peranimal. Rinne imscrúdaitheoir dallta pointí brainse soithí a chainníochtú i ngach inchinn. Sainmhíníodh pointe brainse mar árthach aonair lipéadaithe fluaraiséis a scaradh go suntasach ina 2 rian soithigh ar leith agus ar leith [66].

4.21. Anailís Staitistiúil

Rinneadh na nósanna imeachta turgnamhacha go léir a dhalladh agus rinneadh iad 3 huaire go neamhspleách mar a thuairiscítear roimhe seo [67]. Cuirtear sonraí i láthair mar mheán ± SEM.Rinneadh anailís staitistiúil ag One-way ANOVA, Two-way ANOVA, agus Student'st-test, mar is cuí, ag baint úsáide as GraphPad Prism v7 (GraphPad Software Inc., San Diego, CA, USA ) agus leagan bogearraí SPSS 20.0 (SPSS, Inc., Chicago, IL, USA).

Is féidir na paraiméadair staidrimh a fháil sna finscéalta figiúirí ábhartha. Socraíodh tábhacht staitistiúil ag *p < {{0}}.05; ** p < 0.01; *** p < 0.001; **** p < 0.0001.]

5. Conclúidí

Tá fearann ​​EGF3 Netrin-1 ríthábhachtach maidir le hidirghníomhú Netrin-1 le DCC agus is féidir conairí comharthaíochta éagsúla a ghníomhachtú. Déanann peiptíd teasctha E1 de Netrin-1 (iarmhair 407–422) idirghníomhú le DCC chun néaróin a chosaint ó thocsaineacht heimín-spreagtha.

Feabhsaíonn cur i bhfeidhm peptide E1 aisghabháil feidhme i múnla turgnamhach ICH. Ina theannta sin, is féidir le peptide E1 néaróin a chosaint ó dhíghiniúint agus apoptosis tar éis ICH.

Ranníocaíochtaí Údair: Coincheapú, LL, Z.-XH agus X.-JZ; modheolaíocht, LL, K.-JL agusJ.-BC; bailíochtú H.-LY agus X.-XH; imscrúdú, X.-JZ; coimeád sonraí, JY; acmhainní LL andZ.-XH; ag scríobh LL, Z.-XH agus X.-JZ; maoirseacht, Z.-XH, X.-JZ; éadáil maoinithe, Z.-XHand X.-JZ Tá leagan foilsithe na lámhscríbhinne léite agus aontaithe ag na húdair go léir.

Maoiniú: Maoiníodh an taighde seo ag Fondúireacht Eolaíochta Nádúrtha Náisiúnta na Síne (31671065 agus 32071018), Plean Forbartha Eolaíochta agus Teicneolaíochta Cúige Jilin (202520YY01017404).

Ráiteas an Bhoird Athbhreithnithe Institiúideach: D'fhaomh an Coiste Institiúideach um Chúram agus Úsáid Ainmhithe de chuid na Gnáth-Ollscoil Oirthuaisceart na nósanna imeachta go léir (NENU/IACUC, AP2016200299). Ba é Caighdeáin Náisiúnta Dhaon-Phoblacht na Síne (GB/T 35892–2018), Treoirlíne Saotharlainne Ainmhithe le hAthbhreithniú Eiticiúil ar Leas Ainmhithe, an treoir dár gcúram agus ár bprótacail ainmhithe.

Ráiteas um Toiliú Feasach: Neamhbhainteach.

Buíochas: Thacaigh Fondúireacht Náisiúnta Eolaíochta Nádúrtha na Síne (31671065 agus 32071018) agus Plean Forbartha Eolaíochta agus Teicneolaíochta Cúige Jilin (202520YYY01017404) leis an obair seo.

Coinbhleachtaí Leasa: Ní dhearbhaíonn na húdair aon choinbhleacht leasa. Ní raibh aon ról ag na maoinitheoirí i ndearadh an staidéir; maidir le bailiú, anailísiú nó léirmhíniú sonraí; i scríbhinn na lámhscríbhinne, nó sa chinneadh na torthaí a fhoilsiú.

Tagairtí

1. Kirshner, HS Bainistíocht leighis ar hemorrhage intracerebral: Ar ais go dtí an Basics. Int. J. Clin. Cleachtadh. 2008, 62, 521–522.[CrossRef] [PubMed]

2. Anderson, CS; Heeley, E.; Huang, Y. ; Wang, J.; Stapf, C. ; Delcourt, C. ; Lindley, R.; Robinson, T.; Lavados, P.; Neal, B. ; et al. Ísliú tapa brú fola in othair a bhfuil hemorrhage géarmhíochaine intracerebral orthu. N. Béarla. J. Med. 2013, 368, 2355–2365. [CrossRef][PubMed]

3. Qureshi, AI; Mendelow, AD; Hanley, DF Hemorrhage intracerebral. Lancet (Lond. Engl.) 2009, 373, 1632–1644. [CrossRef]

4. Coinnigh, RF; Hua, Y.; Xi, G. Hemorrhage intracerebral: Meicníochtaí gortaithe agus spriocanna teiripeacha. Lancet Neurol. 2012, 11,720–731. [CrossRef]

5. Schrag, M. ; Kirshner, H. Bainistíocht Hemorrhage Intracerebral: Seimineár Fócais JACC. J. Am. Colla. Cairdiol. 2020, 75, 1819–1831.[CrossRef] [PubMed]

6. Kandasamy, R. ; Idris, Z. ; Abdullah, JM Máinliacht Hemorrhage Intracerebral. I Máinliacht Néar-shoithíoch Cur Chuige Máinliachta do Ghalair Néar-shoithíoch; Iúil, J., Wahjoepramono, EJ, Eds.; Springer: Singeapór, 2019; lgh 201–210.7. Broughton,

7. Broughton, BR; Reutens, DC; Sobey, meicníochtaí CG Apoptotic tar éis ischemia cheirbreach. Stróc 2009, 40, e331–e339. [CrossRef][PubMed]

8. Kristiansen, M.; Graversen, JH; Jacobsen, C. ; Sonn, O.; Hoffman, HJ; Dlí, SK; Moestrup, SK Aithint an ghabhdóra scavenger haemaglóibin. Nádúr 2001, 409, 198–201. [CrossRef]

9. Madangarli, N.; Bonsack, F. ; Dasari, R. ; Sukumari-Ramesh, S. Hemorrhage Intracerebral: Comhpháirteanna Fola agus Neurotoxicity.Brain Sci. 2019, 9, 316. [CrossRef]

10. Deiner, MS; Ceanadach, TE; Fazeli, A. ; Serafini, T. ; Tessier-Lavigne, M.; Déanann Sretavan, DW Netrin-1 agus CCDnG treoir axon a idirghabháil go háitiúil ag an diosca snáthoptaice: Tarlaíonn hipoplasia an nerve snáthoptaice mar thoradh ar chailliúint feidhme. Néaróin 1997, 19, 575–589. [CrossRef]

11. Ceanadach, TE; Serafini, T. ; de la Torre, JR; Tessier-Lavigne, M. Is fachtóirí ceimeatrópacha idirleata iad Netrins le haghaidh axonsin commissural chorda an dromlaigh suthach. Cill 1994, 78, 425–435. [CrossRef]

12. Flores, C. Ról netrin-1 in eagrú agus feidhm an chórais dopaimín mesocorticolimbic. J. Síciatracht Neurosci. Jpn.2011, 36, 296–310. [CrossRef]

For more information:1950477648nn@gmail.com