Cás Úrscéal d'Easpag Slabhra Alfa-Glacadóir Béite Homozygous Interferon (IFNAR1) Le Limfhhistiocytosis Haemagaicíteach

(Féach an Tráchtaireacht Eagarthóireachta le Mogensen ar leathanaigh 140–3.)

Cuirimid i láthair cás d’easnamh iomlán sa slabhra alfa gabhdóra interferon-alfa/beta (IFNAR1) i leanbh a bhfuil hipearathlasadh sistéamach marfach aige, a spreagtar de réir dealraimh le vacsaíniú víreasach beo-mhaolaithe. Tá hyperinflammation pathologic den sórt sin, a chomhlíonann critéir le haghaidh lymphohistiocytosis hemophagocytic, ina fheinitíopa atá ag teacht chun cinn a ghabhann le hearráidí sa bhroinn de dhíolúine interferon cineál I.

Is galar annamh ar an gcóras imdhíonachta é limfhistiocytosis haemagocytic (HIVEL/T-LGL) a bhfuil dlúthbhaint aige le himdhíonacht. Tá baint ag tarlú HIVEL/T-LGL le neamhord an chórais imdhíonachta, arb é is cúis leis go príomha ná iomadú neamhghnácha agus gníomhachtú cealla T. Cuirfidh an t-iomadú agus an gníomhachtú neamhghnácha seo faoi deara go ndéanfaidh cealla T ionsaí ar ghnáthchealla sa chorp, rud a dhéanfaidh dochar d'fheidhm an chórais imdhíonachta, rud a léiríonn tábhacht na díolúine dúinn. In ár saol laethúil, ba cheart dúinn aird a thabhairt freisin ar dhíolúine a fheabhsú. Is féidir le Cistanche díolúine a fheabhsú. Is féidir leis na polaisiúicrídí san fheoil freagairt imdhíonachta an chórais imdhíonachta daonna a rialáil, cumas strus na gcealla imdhíonachta a fheabhsú, agus éifeacht steiriliú na gcealla imdhíonachta a fheabhsú.

Cliceáil cistanche tubulosa cheannach

Eochairfhocail.

IFNAR1; cineál I interferon; HLH; earráid díolúine sa bhroinn.

Comharthaíonn interferons de Chineál I (lena n-áirítear fochineálacha IFN- agus 13 IFN-) trí ghabhdóir amháin arna chur in iúl go uileláithreach comhdhéanta d’fho-aonaid ísealchleamhnais agus ard-chleamhnais, IFNAR1 agus IFNAR2. Is cosúil go bhfuil IFNanna de Chineál I ríthábhachtach maidir le himdhíonacht fhrithvíreasach mamaigh, bunaithe ar staidéir fhairsing ar lucha easnamhacha Ifnar, ach bhí a ról beacht i ndaoine neamhchinnte go dtí seo [1].

Thug ár bhfionnachtain ar easnamh iomlán IFNAR2 daonna i leanbh le galar víreasach marfach tánaisteach don vacsaíniú beo-mhaolaithe don leicneach agus don bhruitíneach dhearg (MMR) feidhm fhrithvíreasach riachtanach [2]. Mar sin féin ba shuntasaí é nár léirigh an probhanna so-ghabhálacht víreasach follasach roimh nochtadh MMR. Chonacthas an feinitíopa seo den ghalar a spreag vacsaíniú víreasach beo-mhaolaithe sistéamach i 2 othar a raibh easnamh IFNAR1 orthu, agus bhí an dá cheann sláintiúil mar an gcéanna go dtí an vacsaíniú [3].

Mar sin féin, le sainaithint leaganacha IFNAR1 le déanaí in 2 othar a bhfuil géar-shiondróm riospráide géarchorónach 2 (SARS-CoV-2) acu, leagtar béim ar an tábhacht bhreise a bhaineann le IFNanna de chineál I maidir le díolúine ó víris a fhaightear go nádúrtha [4].

Sa staidéar seo, rinneamar imscrúdú ar bhuachaill míosa d'aois a bhí go maith roimhe seo 15- a d'fhorbair tinneas tromchúiseach tar éis an vacsaínithe MMR, a chuimsigh hipearathlasadh forásach agus marfach ar deireadh a chomhlíon na critéir dhiagnóiseacha le haghaidh limfhistiocytosis hemophagocytic (HLH; féach achoimre an cháis, Fíor 1A, Tábla Forlíontach). E1). Níor thug anailís ar serum (Tábla Forlíontach E2) agus sreabhán cerebrospinal (Tábla Forlíontach E3) fianaise ar mhacasamhlú víreasach faoi bhrú vacsaíne, agus níor aithníodh etiology ionfhabhtaíoch eile, seachas athghníomhú víreas Epstein-Barr ar leibhéal íseal (EBV). Léirigh feinitíopáil imdhíonachta mionsonraithe monocytosis agus lymphocytosis T-chealla, le líon íseal cealla B agus cDC1 (Fíor Forlíontach E1, Tábla Forlíontach E4).

Despite aggressive antiviral, immunomodulatory therapy, and intravenous immunoglobulins (IVIG), he developed encephalopathy with abnormal neuroimaging and succumbed suddenly approximately 6  months after presentation (Supplementary Figure E2–E4). Rapid diagnostic whole exome sequencing revealed a novel homozygous nonsense variant (c.922C>T) in IFNAR1, ag tabhairt isteach códón stad roimh am sa tríú fearann ​​extracellular de phróitéin IFNAR1 (p.Gln308Ter, Fíor 1B).

Ní raibh an t-athróg seo ar fáil ó bhunachar sonraí GnomAD agus tuartha go mbeadh sé díobhálach ag uirlisí in silico (Tábla Forlíontach E5). Níor aimsíodh aon táirge próitéine agus lísáit fibroblast deirmeach príomhúil á scrúdú le hantasubstaint N-críochfort (Fíor 1C) nó C-críochfort IFNAR1 (Fíor Forlíontach E5), rud a léiríonn easnamh iomlán IFNAR1. Níor tugadh le fios ó ghrinnscrúdú a rinneadh ar phainéal cuimsitheach géinte a bhaineann le hearráidí díolúine sa bhroinn laistigh de shonraí exome an othair aon éagsúlachtaí iarrthóra breise is cúis le galair.

Nuair a dhéantar an ligand a cheangal, cuireann coimpléasc thrínártha IFNAR1-IFNIFNAR2 tús le heascadh comharthaíochta intracellular ina ndéantar trasfhosfarú cómhalartach na gcineanna a bhaineann leis an ngabhdóir JAK1 agus TYK2 ag fosfarú na dtrasduchtóirí comhartha agus gníomhaithe an trascríobh STAT1 agus TYK2. Tá an chuid is mó den fhreagra tras-scríofa ar IFN- inchurtha i leith an heitriméadar déanta de STAT1 agus STAT2 fosfarlaithe mar aon le IRF9.

Aistríonn an casta seo, ar a dtugtar fachtóir géine spreagtha interferon 3 (ISGF3), go dtí an núicléas áit a n-idirghníomhaíonn sé le heilimintí freagartha interferon-íogair (ISREs) chun trascríobh líon mór géinte spreagtha interferon (ISGanna) a ghníomhachtú. Ina ionad sin, déantar homodimerizes ar chodán den phosphoSTAT1 chun fachtóir gníomhachtaithe IFN- (GAF) a fhoirmiú, ag géarú sraith shainiúil ach forluiteach de ghéinte a bhfuil suíomhanna gníomhachtaithe IFN- (GAS orthu), a bhaineann go hiondúil le comharthaíocht cineál II IFN (IFN- ). Is é an éifeacht atá tuartha d’easnamh IFNAR1 ná cosc ​​a chur ar chomharthaíocht agus ar fhreagraí feidhmiúla iartheachtacha ar IFN- ach freagraí slána a fhágáil ar IFN- .

Fíor 1. A, Pedigree. B, dearbhú seicheamhaithe Sanger ar athraitheach le fearainn próitéin IFNAR1. C, easnamh IFNAR1 (immunoblot). D, Comharthaíocht le IFN- 2b nó IFN- (1000 IU/mL, 30 m, imdhíonblot). E, ionduchtú ISG ag IFN- 2b nó IFN- (1000 IU/mL, 16 h, imdhíonblot). F, measúnacht cosanta citopathic EMCV. G, clúdach ZIKV (ENV), ISG15, RSAD2, agus abairt MX1 (immunoblot) i fibroblasts (H) measúnacht citopathic ZIKV. Cosaint i gcoinne ZIKV ag IFN- 2b nó IFN- (MOI 1.0, 1000 IU/mL, 24 h) trí (I) imdhíonblot agus (J) measúnacht inmharthanachta. Déanann comhlánú le IFNAR1 ach ní veicteoir folamh (VEC) (K) ionduchtú ISG a athbhunú trí IFN- 2b (1000 IU/mL, 16 h, imdhíonoblot) agus (L) IFN- 2cosaint trí mheán b-idirghabhála in aghaidh EMCV. Déantar na turgnaimh go léir n = 3 uair in II:1 agus rialaítear fiobblastaí príomhúla. Meán ± SD. ****P< .001, 2-way ANOVA with Tukey's post-test. *nonspecific band. Abbreviations: ANOVA, analysis of variance; EMCV, encephalomyocarditis virus; IFN, interferon; IFNAR1, interferon alpha/beta receptor alpha chain; ISG, interferon-stimulated gene; MOI, the multiplicity of infection; ZIKV, Zika virus.

Ag teacht leis an réamh-mheastachán seo, bhí fosfarylation JAK1 agus a spriocanna iartheachtacha STAT1 agus STAT2 do-bhraite i IFNAR1-fibroblasts othar easnamhach a nochtar do IFN 2b ar feadh 30 nóiméad, mar a nochtadh trí imdhíonadh lysates cille iomlán, agus fosfarylation JAK1 agus STAT1 ar nochtadh do IFN- caomhnaíodh é (Fíor 1D). Breathnaíodh an patrún céanna trí anailís a dhéanamh ar fhosfarylation STAT1 i limficítí othar agus monaicítí de réir cítoiméadracht phospho-flow (Fíor Forlíontach E6). Dá réir sin, léirigh imdhíonadh mainneachtain táirgí próitéine ISG a aslú i IFNAR1- fibroblasts othair easnamhacha a nochtar thar oíche do IFN- 2b ainneoin freagairtí slána ar IFN- (Fíor 1E).

Chun aghaidh a thabhairt ar an tionchar feidhmiúil, thugamar dúshlán do chealla leis an víreas einceifeilimíocarditis picornavirus (EMCV). Sa turgnamh seo, rinneadh réamhchóireáil ar fibroblasts le IFN- 2b nó IFN- thar oíche roimh ionfhabhtú, ag dáileog a cinneadh roimhe seo chun éifeacht cíteapatach (CPE) a chosc i gcealla rialaithe, agus ansin scrúdaíodh iad ag iar-ionfhabhtú 24 uair an chloig. Bhí cealla easnamhacha IFNAR so-ghabhálach do CPE in ainneoin nochtadh IFN- 2b ach tarrtháil iad trí chóireáil IFN, rud a dhearbhaigh locht sonrach díolúine frithvíreasach IFN (Fíor 1F).

Chun na torthaí seo a leathnú agus a dhearbhú, rinneamar cealla ionfhabhtaithe leis an víreas flavivirus Zika (ZIKV) ag iolrachtaí éagsúla ionfhabhtaithe, ag scrúdú léiriú próitéine clúdaigh víreasach agus ISGanna trí imdhíonadh ag 48 uair an chloig iar-ionfhabhtaithe (Fíor 1G). I gcealla othair, chonaiceamar léiriú próitéine víreasach iomarcach (Fíor Forlíontach E7), in éineacht leis an teip ar léiriú ISG15, RSAD2, agus MX1 a aslú, rud a léiríonn locht ar fhriotaíocht fhrithvíreasach IFNAR-idirghabhála agus comhghaolú le so-ghabhálacht i leith cíteatocsaineacht víreasach (Fíor 1H). ). Chuir cóireáil ar chealla othair le IFN eisghineacha- ach gan IFN- 2b cosc ​​ar ionfhabhtú ZIKV (Fíor 1I) agus CPE (Fíor 1J).

Chun a chruthú go cinntitheach gurbh é caillteanas IFNAR1 a bhí freagrach, chomhlánaíomar cealla fibroblast an othair le IFNAR1 daonna lán-fhad seachadta trí aistriú lentiviral. Aistriú lentiviral de IFNAR1 i fibroblasts othar, ach ní veicteoir folamh, ionduchtú athshlánaithe ISGanna (Fíor 1K) agus foirmiú staid fhrithvíreasach mar fhreagra ar IFN- 2b (Fíor 1L), rud a dhearbhaíonn an comhlachas géinitíopa-feinitíopa.

Tuairiscímid cás nua d'easnamh iomlán IFNAR1, ag comhlánú tuarascáil le déanaí maidir le heasnamh homaisigeach IFNAR1 i 2 leanbh neamhghaolmhara [3]. Sna 3 chás seo go léir agus cosúil le hothair easnamhacha IFNAR [2], níor tháinig so-ghabhálacht víreasach chun solais ach amháin tar éis ionaclaithe le vacsaíní víreasacha beo-mhaolaithe. Ar an gcéad amharc, tá sé seo i gcodarsnacht leis an so-ghabhálacht níos leithne d’othair easnamhacha STAT2- nó IRF{{9-[5–7] i leith víris a gcastar orthu go nádúrtha ag dromchlaí mucosal, a d’fhéadfadh a bheith inmhínithe i dtéarmaí iomarcaíochta feidhme idir cineál I agus cineál III IFNs ag an mhúcóis [1].

Mar sin féin, tugann fionnachtain 2 chás eile d’easnamh IFNAR1 le déanaí i measc daoine ar a bhfuil galar trom coronavirus 2019 (COVID-19) le tuiscint, i gcás SARS-CoV{5}} ar a laghad, go bhféadfaidh ról sainithe a bheith ag IFNanna de chineál I. i bhfreagra an óstaigh ar phataiginí nádúrtha [4]. Tugtar tacaíocht bhreise don chonclúid seo trí antasubstaintí neodraithe a bhrath i gcoinne IFNanna de chineál I ach gan IFNanna de chineál III a bhrath i 10 faoin gcéad de chásanna tromchúiseacha COVID-19 [4], chomh maith le comhartha comhlachais ar fud an ghéanóim le IFNAR2 i gcohórt neamhspleách. [8].

Leathnaíonn ár gcás speictream feinitíopach easnamh IFNAR1 chun hipearathlasadh cosúil le HLH a áireamh, a tugadh faoi deara roimhe seo in easnamh IFNAR2 agus a aithnítear níos mó i lochtanna eile díolúine IFN mar lochtanna STAT2 nó IRF9 [7, 9]. Is réimse tábhachtach oibre amach anseo é paiteolaíocht an hipearathlasta a shainiú sa chomhthéacs seo, go háirithe an gaol atá aige le comharthaíocht athlastach dírialaithe agus/nó macasamhlú víreasach. In ainneoin an bhaint ama a bhí againn le vacsaíniú, bhí ár gcás suntasach mar gheall ar an easpa scaipeadh inbhraite de bhrú na vacsaíne. Tá pictiúr den chineál céanna tugtha faoi deara i roinnt othar STAT1- agus STAT{2-le hipearathlasadh [12, 11].

Cé nach bhféadfaimis ranníocaíocht d'athghníomhachtú EBV íseal-leibhéil a eisiamh, tháinig uath-athlasadh steiriúil chun cinn mar fheinitíopa cliniciúil ar leith maidir le lochtanna comharthaíochta IFN [7]. Tugann sé sin le tuiscint go bhfuil meicníocht níos casta ag baint le cailliúint IFN- rialachán [1]. Ar an aghaidh, tá sé seo paradoxical toisc go bhfuil baint ag comharthaíocht IFN-neamhrialaithe féin le athlasadh steiriúil cosúil le HLH [12]. Ach rialaíonn IFN- conairí éagsúla cítocine go diúltach freisin, lena n-áirítear interleukin (IL)-1 [13] agus IL-17 [14]. Saothraítear airíonna imdhíonachta IFN- i teiripe do ghalair imdhíonachta-idirghabhála amhail scléaróis iolrach. Tugann an fhreagairt chliniciúil pháirteach ar corticosteroidí agus imshuí IL{-1 inár gcás tacaíocht éigin don hipitéis go gcuireann cailliúint comharthaíochta IFN le gníomhaíocht líonra imdhíonachta neamhord. I gcomhthéacs galair víreasacha, tá an chuma ar an scéal go bhfuil gá le freagra IFN atá calabraithe i gceart chun imdhíonphaiteolaíocht a chosc. Is é seo prionsabal "Goldilocks" homeostasis imdhíonachta, áit a gcuireann gníomhaíocht neamhleor agus iomarcach le galair.

Tá hipearathlasadh lárnach don phataigineas de dhroch-COVID-19, mar atá léirithe ag éifeachtacht chliniciúil corticosteroidí. Nochtann ár gcás nua d’easnamh IFNAR1 ról féideartha do IFN- maidir le hipearathlasadh a chosc, ní hamháin trí rialú díreach a dhéanamh ar mhacasamhlú víreasach [2, 3] ach b’fhéidir freisin trína ghníomhaíocht imdhíonrialaithe i dtreo cítocíní eile. D’fhéadfadh sé go gcuirfeadh cailliúint an dá ghné d’fheidhm IFN le so-ghabhálacht othar a bhfuil lochtanna IFNAR1 orthu maidir le COVID- trom-19 [4, 9]. Beidh sé ríthábhachtach na naisc cheallacha agus mhóilíneacha idir comharthaíocht lochtach IFN agus athlasadh pataigineach a thuiscint chun teiripe a threorú le haghaidh galar víreasach tromchúiseach.,

Sonraí Forlíontacha

Tá ábhair bhreise ar fáil ag Galair Thógálacha Cliniciúla ar líne. Comhdhéanta de shonraí a chuir na húdair ar fáil chun tairbhe an léitheora, ní dhéantar na hábhair a phostáiltear a chóipeáil agus is iad na húdair amháin atá freagrach as, mar sin ba cheart ceisteanna nó tuairimí a chur chuig an údar comhfhreagrach.

Nóta

Coinbhleachtaí leasa féideartha. Fuair ​​F. G. maoiniú ón Deutsche Forschungsgemeinschaft (GO2955/1-1) chomh maith leis an Bubble Foundation. C. Tá FH maoinithe ag scoláireacht ón gComhairle um Thaighde Míochaine (MR/N013840/1). Tá V. K., E. F., agus M. F. maoinithe ag Aireacht Sláinte Phoblacht na Seice (NV19-05-00332). Tá S. H. agus C. JA D. maoinithe ag Iontaobhas Wellcome (207556/Z/17/Z agus 211153/Z/18/Z, faoi seach).

Níl aon choinbhleachtaí féideartha ag gach údar eile. Tá Foirm ICMJE chun Coinbhleachtaí Leasa Féideartha a Nochtadh curtha isteach ag gach údar. Nochtadh coinbhleachtaí a mheasann na heagarthóirí a bheith ábhartha maidir le hábhar na lámhscríbhinne.

Tagairtí

1. Duncan CJA, Randall RE, Hambleton S. Loit ghéiniteacha de chineál I interferon comharthaíochta i imdhíonacht antiviral daonna. Treochtaí Genet 2020; 1–13.

2. Duncan CJA, Mohamad SMB, Young DF, et al. Easnamh IFNAR2 daonna: ceachtanna le haghaidh imdhíonacht frithvíreasach. Sci Transl Med 2015; 7:307r154.

3. Hernandez N, Bucciol G, Moens L, et al. Oidhreacht easnamh IFNAR1 in othair atá sláintiúil ar bhealach eile a bhfuil frithghníomhartha díobhálacha don bhruitíneach agus vacsaíní beo fiabhras buí. J Exp Med 2019; 216: 2057-70.

4. Zhang Q, Bastard P, Liu Z. Earráidí sa bhroinn de chineál I díolúine IFN le COVID atá bagrach don bheatha-19. Eolaíocht 2020; 21:1-9.

5. Hambleton S, Goodbourn S, Young DF, et al. Easnamh STAT2 agus so-ghabhálacht i leith tinnis víreasach i ndaoine. Proc Natl Acad Sci USA 2013; 110:3053–8.

6. Hernandez N, Melki I, Jing H, et al. Pneumonitis fliú bagrach don bheatha i leanbh a bhfuil easnamh IRF9 oidhreachta aige. J Exp Med 2018; 215: 2567-85.

7. Bravo García-Morato M, Calvo Apalategi A, Bravo-Gallego LY, et al. Rialú lagaithe ar ionfhabhtuithe víreasacha iolracha i dteaghlach le heasnamh iomlán IRF9. J Ailléirge Clin Immunol 2019; 144:309–312.e10.

8. Pairo-Castineira E, Clohisey S, Klaric L, et al. Meicníochtaí géiniteacha tinneas criticiúil i COVID-19. medRxiv 2020; do: 10.1101/2020.09.24.20200048. \

9. Alosaimi MF, Maciag MC, Platt CD, Geha RS, Chou J, Bartnikas LM. Athróg nua i STAT2 a chuireann i láthair le lymphohistiocytosis hemophagocytic. J Ailléirge Clin Immunol 2019; 144:611–613.e3.

10. Burns C, Cheung A, Stark Z, et al. Cur i láthair nua ar shóchán homaisigeach caillteanas feidhm STAT-1 i naíonán a bhfuil hipearathlasadh air: tuairisc ar chás agus athbhreithniú ar an litríocht. J Cleachtadh Imdhíonachta Clin Ailléirge 2016; 4:777-9.

11. Shahni R, Cale CM, Anderson G, et al. Is neamhord núíosach d’eamhnú mitochondrial é an trasduchtóir comhartha agus an t-easnamh atá gníomhach ar thrascríobh 2. Inchinn 2015; 138:2834-46. 12. Duncan CJA, Thompson BJ, Chen R, et al. Idirfearónapaite trom de chineál I agus comharthaíocht neamhshrianta interferon mar gheall ar shóchán aonchineálach germlíne in STAT2. Sci Immunol 2019; 4. doi: 10.1126/sciimmunol.aav7501.

13. Reboldi A, Dang EV, McDonald JG, Liang G, Russell DW, Cyster JG. Athlasadh. 25-Sochtann hidroxycholesterol athlasadh faoi thiomáint idirleacáin le sruth de chineál I interferon. Eolaíocht 2014; 345:679-84.

14. Liu L, Okada S, Cong XF, et al. Déanann sócháin daonna gnóthachan feidhme STAT1 dochar do dhíolúine IL-17 agus tá siad mar bhun le hiarrthóiriasis mhúcraicneach ainsealach. J Exp Med 2011; 208: 1635-48.

Florian Gothe, 1,2, Catherine F. Hatton,1, Linh Truong,1 Zofia Klimova,3 Veronika Kanderova,4 Martina Fejtkova,4 Angela Grainger,1 Venetia Bigley,1,5 Joanna Perthen,6 Dipayan Mitra,6 Ales Janda, 7 Eva Fronkova,4 Dusana Moravcikova, 3 Sophie Hambleton1,8, agus Christopher J. A. Duncan1,9.

1 Téama Imdhíonachta agus Athlasadh, Institiúid Taighde Aistritheach agus Cliniciúil, Ollscoil Newcastle, Newcastle upon Tyne, RA, 2 An Roinn Péidiatraiceach, Ospidéal na Leanaí Dr. von Hauner, Ospidéal na hOllscoile, Ludwig-Maximilians-Universität München, München, an Ghearmáin, 3 Banská Bystrica Ospidéal Ollscoile na Leanaí, Banská Bystrica, an tSlóvaic, 4 Roinn Haemaiteolaíochta agus Oinceolaíochta Péidiatraiceach, 2ú Dámh an Leighis, Ollscoil Charles agus Ospidéal na hOllscoile Mótar, Prág, Poblacht na Seice, 5 Ionad Thuaisceart le haghaidh Trasphlandú Smeara, Ospidéal Freeman, Newcastle upon Tyne Iontaobhas Fondúireachta NHS na nOspidéal, Newcastle upon Tyne, an Ríocht Aontaithe, 6 Roinn Néar-radiology, Newcastle upon Tyne NHS Foundation Foundation Trust, Newcastle upon Tyne, UK, 7 Roinn Péidiatraiceach agus Leigheas Ógánach, Ionad Leighis na hOllscoile Ulm, an Ghearmáin, 8 Seirbhís Imdhíoneolaíochta Leanaí, Great North Children's Hospital, Newcastle upon Tyne NHS Foundation Foundation Trust, Newcastle upon Tyne, an RA, agus 9 Ionfhabhtaithe agus Leigheas Trópaiceach, Otharlann Ríoga Victoria, Iontaobhas Fondúireacht NHS Ospidéil Newcastle upon Tyne, Newcastle upon Tyne, an Ríocht Aontaithe.

For more information:1950477648nn@gmail.com