Coimriú:Tá staidéar déanta go forleathan ar Quercetin le haghaidh a éifeachtaí frith-Aois Galar Alzheimer (AD) agus frith-aosú. Fuair ​​​​ár staidéir roimhe seo amach gur féidir le quercetin agus ina fhoirm glycosíde, rutin, an fheidhm proteasome i gcealla neuroblastoma a mhodhnú. Bhí sé mar aidhm againn iniúchadh a dhéanamh ar éifeachtaí quercetin agus rutin ar homeostasis redox intracellular na hinchinne (glutathione laghdaithe / glutathione ocsaídithe, GSH / GSSG), a chomhghaol le gníomhaíocht einsím scoilte APP 1 (BACE1) -site, agus próitéin réamhtheachtaithe amyloid (APP). léiriú i lucha TgAPP transgenic (ar a bhfuil sóchán Sualainnis daonna APP transgene, APPswe). Ar an mbonn go bhfuil próitéin BACE1 agus próiseáil APP á rialú ag an gcosán ubiquitin-proteasome agus go gcosnaíonn forlíonadh le GSH néaróin ó chosc próteasóim, rinneamar imscrúdú ar cé acu an laghdaíonn aiste bia ina bhfuil quercetin nó rutin (30 mg/kg/lá, 4 seachtaine) roinnt mhaith. comharthaí luath AD. Rinne PCR anailísí géinitíopála ar ainmhithe. Chun hoiméastáis ocsaí intracellular a chinneadh, glacadh le modhanna speictrifluaraiméadracha chun leibhéil GSH agus GSSG a chainníochtú ag baint úsáide as o-phtalaldehyde, agus fuarthas an cóimheas GSH/GSSG. Socraíodh leibhéil TBARS mar mharcáil sárocsaídiúcháin lipid. Socraíodh gníomhaíochtaí einsímeacha SOD, CAT, GR, agus GPx sa cortex agus sa hippocampus. Rinneadh gníomhaíocht BACE1 a thomhas trí fhoshraith a bhain go sonrach le secretase comhchuingeach le dhá mhóilín tuairisceora (EDANS agus DABCYL). Sloinneadh géine de na príomh-einsímí frithocsaídeacha: APP, BACE1, fearann ​​Disintegrin agus metalloproteinase ina bhfuil próitéin 10 (ADAM10), caspase-3, caspase-6, agus cítocíní athlastacha a chinn RT-PCR. Ar dtús, laghdaigh ró-eisiúint APPswe i lucha TgAPP cóimheas GSH/GSSG, mhéadaigh leibhéil malonaldehyde (MDA), agus, ar an iomlán, laghdaigh príomhghníomhaíochtaí einsímí frithocsaídeacha i gcomparáid le lucha de chineál fiáin (WT). Mhéadaigh cóireáil lucha TgAPP le quercetin nó rutin GSH/GSSG, laghdaigh leibhéil MDA, agus bhí sé i bhfabhar acmhainn frithocsaídeach na heinsíme, go háirithe le rutin. Ar an dara dul síos, laghdaíodh léiriú APP agus gníomhaíocht BACE1 araon le quercetin nó rutin i lucha TgAPP. Maidir le ADAM10, bhí claonadh ann méadú ar lucha TgAPP le cóireáil rutin. Maidir le slonn caspase-3, léirigh TgAPP méadú a bhí a mhalairt le rutin. Ar deireadh, laghdaíodh an méadú ar léiriú na marcóirí athlastacha IL-1 agus IFN- i lucha TgAPP ag quercetin agus rutin araon. I dteannta a chéile, tugann na torthaí seo le tuiscint go bhféadfaí rutin, den dá flavonoids, a áireamh i réim bia ó lá go lá mar chineál teiripe aidiúvach in AD.

Cliceáil Ar Antioxidant Cistanche Chemist Warehouse

【Le haghaidh tuilleadh eolais:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

Eochairfhocail:quercetin; rutin; glutathione; APPswe; BACE1; Galar Alzheimer

1. Réamhrá

Is symptom neurodegeneration cliniciúil bunúsach é an meath ar fheidhm chognaíoch a bhaineann go docht le haois [1]. Is ábhar atá ag méadú i gcónaí é tionchar an chothaithe ar mheath cognaíocha a bhaineann le haois, toisc gur fachtóir ríthábhachtach é is féidir a mhodhnú go héasca. Tarlaíonn athruithe paiteolaíocha san inchinn a breathnaíodh le linn meath cognaíocha go maith roimh aon léiriú cliniciúil, a tharlaíonn den chuid is mó i seanaois. Soláthraíonn sé seo tréimhse níos faide chun straitéisí coiscthe a bhunú maidir le meath cognaíocha aois-choibhneasa agus néaltrú, ar ábhar imní mór é don tsláinte phoiblí [2]. Le blianta fada anuas, rinneadh dian-thaighde ar chomhdhúile de bhunús nádúrtha, a fhaightear in aistí bia ó lá go lá, ar theiripe feabhsaithe cognaíocha [3].

Ceann de na galair néar-mheathlúcháin is coitianta a bhaineann le haois ná galar Alzheimer (AD), arb iad is sainairíonna é dhá shainmharc néarphaiteolaíocha: plaiceanna amyloid- (A ) agus tangles neurofibrillary. I dtéarmaí taighde ar ainmhithe, is féidir le samhlacha ainmhithe an chéim asymptomatic de AD a ionsamhlú trí phróitéin réamhtheachtaithe A (APP) a mhodhnú, mar shampla [4,5].

Go suntasach, rinneadh scagadh ar roinnt fíteasceimiceach bithghníomhacha a dhíorthaítear ó phlandaí a bhfuil baint acu le sochair sláinte éagsúla agus riosca laghdaithe go leor galair chun coimpléisc neamhchomhfhiúsacha a fhoirmiú leis an peptide amyloid- (A ) [3].

Cé go bhfuil dul chun cinn mór léirithe ag go leor leigheasanna traidisiúnta agus táirgí aiste bia nádúrtha i dtreo mhaolú na paiteolaíochta AD, táimid go hiomlán ar an eolas faoi na teorainneacha atá le samhlacha ainmhithe AD, ós rud é nach mbíonn éifeachtaí gealladh na substaintí sin in-athdhéanta i gcónaí i staidéir dhaonna [6]. Mar sin féin, mar gheall ar an deacracht a bhaineann le hanailís a dhéanamh ar fhíochán inchinne i ndaoine, go háirithe ag céimeanna an-luath den dul chun cinn, tá gá le staidéir ar mhúnlaí creimirí. Mar thoradh air sin, féadfaidh na samhlacha turgnamhacha seo tacú le forbairt gníomhairí úsáideora ó leigheasanna traidisiúnta agus comhdhúile nádúrtha sábháilte chun moill a chur ar dhul chun cinn galair neurodegenerative. Dá bhrí sin, ba cheart tosaíocht a thabhairt do thástáil na gcomhdhúile nádúrtha, a fhaightear in aistí bia laethúla, chun galair a chosc agus chun an riosca AD a chosaint.

I measc na ngníomhairí nádúrtha cothaitheacha tábhachtacha seo tá quercetin, arb é an príomh-fhlavonoid polyphenolic i roinnt torthaí agus glasraí [7]. Tá quercetin i láthair go príomha ina fhoirm glycosíde, ie, rutin. Maidir leis, léirigh rutin (quercetin-3-O-rutinoside) éifeachtaí as cuimse ar na feidhmeanna ceallacha éagsúla atá mar bhonn agus thaca ag roinnt riochtaí paiteolaíocha, eadhon frithmhiocróbach, frithcharcanaigineach, friththrombotic, cardioprotective, agus neuroprotective. Baineann na héifeachtaí cógaseolaíochta seo go príomha le gníomhaíochtaí frith-athlastacha agus frithocsaídeacha rutin. Mar gheall ar a chumas an bacainn fola-inchinn, agus/nó a meitibilítí, a thrasnú, tá sé léirithe gur féidir le rutin comharthaí cognaíocha agus iompraíochta de ghalair néar-mheathlúcháin a athrú [8].

Fuair ​​​​ár staidéir roimhe seo go bhfuil tionchar ag flavonoids, quercetin, agus rutin araon, ar bhealaí comharthaíochta éagsúla agus ar líonraí móilíneacha a bhaineann le modhnú feidhmeanna proteasome i gcealla neuroblastoma [9]. Ina theannta sin, tá sé léirithe go bhfuil abairt BACE1 agus próiseáil APP á rialú ag an gcosán ubiquitin-proteasome [10] agus go bhfuil forlíonadh le néaróin laghdaithe glutathione (GSH) cosanta ó chosc proteasome [11]. Is toradh coitianta é ídiú GSH san inchinn in othair a bhfuil galair néar-mheathlúcháin orthu, mar AD, agus féadann sé néar-mheathlú a chur faoi deara sula dtosaíonn an galar [12]. Cuireann uileláithreacht BACE1 agus bac ar an gcosán ubiquitin-proteasome bac ar dhíghrádú BACE1 agus, mar thoradh air sin, táirgeacht mhéadaithe de ghníomhaíocht einsímeach BACE1 [10].

Bunaithe ar na torthaí seo, agus go bhféadfadh tionchar a bheith ag nósanna cothaithe agus forlíonta ar an stádas ocsaí ceall, bhí sé mar aidhm againn iniúchadh a dhéanamh ar na héifeachtaí a bhíonn ag aiste bia ina raibh quercetin nó rutin ar homeostasis redox intracellular na hinchinne (GSH/GSSG), a chomhghaolmhaireacht le gníomhaíocht BACE1, agus léiriú APP i múnlaí lucha AD (ar a bhfuil sóchán Sualainnis daonna Amyloid Precursor Protein APP transgene, APPswe).

Ar deireadh, toisc go bhfuil fianaise dhiongbháilte ann maidir le héifeacht forlíonta flavonoid maidir le réimsí cognaíocha sonracha agus / nó torthaí MRI a fheabhsú [13], rinneamar iarracht aithris a dhéanamh, in ainmhithe, ar idirghabháil trí aiste bia sláintiúil a sheachadadh ina raibh méideanna measartha d'acmhainneacht ghníomhach áirithe. comhábhar (quercetin nó rutin) mar straitéis éifeachtach chun léiriú marcóirí AD a chosc.

2. Torthaí

2.1. Géinitíopáil lucha

Forbraíodh an choilíneacht luiche TgAPP inár saotharlann ó fhir heitrisigeach Tg2576 agus baineannaigh de chineál fiáin. Rinneadh géinitíopáil lucha chun daoine trasgineacha a bhrath. As na lucha go léir a tástáladh, fuarthas amach go raibh thart ar 40 faoin gcéad trasgenic (TgAPP).

Scaradh na táirgí PCR a fuarthas trí leictreafóiréis i glóthacha agarose 1.5 faoin gcéad i 0.5X TBE (Tris-Borate-EDTA) maolán ag 70 V (voltas seasmhach) agus ansin íomháíodh iad trí staining le GelRed (Millipore). Léirítear an phróifíl aimpliúcháin do lucha trasgenacha agus WT i bhFíor 1.

2.2. Glutathione

Chun hoiméastáis redox intracellular a mheas i néaróin i lucha TgAPP, rinneadh leibhéil GSH agus GSSG a chainníochtú, agus socraíodh an cóimheas GSH/GSSG mar chomhartha ar chumhacht laghdaithe cealla i bhfir agus i mná araon (Fíor 2).

Agus measúnú á dhéanamh ar éifeacht an transgene ar an gcóras glutathione, chonacthas laghdú ar an gcumhacht laghdaithe cealla (GSH/GSSG) i lucha TgAPP maidir le hainmhithe WT, i bhfireannaigh agus i mná agus sa dá réimse den inchinn (Fíor 2C3, H3), go háirithe sa hippocampus. I lucha WT agus TgAPP araon, bhí an cóimheas GSH/GSSG i bhfad níos ísle i measc fireannaigh ná i mná (Fíor 2C3, H3; p < 0.05). Cé go bhfuil an laghdú seo i measc na mban TgAPP mar thoradh ar leibhéil GSH níos ísle (Fíor 2C1, H1), i bhfireannaigh TgAPP is é an méadú ar leibhéil GSSG is mó a chuirtear i leith é (Fíor 2C2, H2).

Tá athruithe ar leibhéil GSH agus GSSG lucha TgAPP, faoi seach, ar chóireáil quercetin nó rutin, níos suntasaí i bhfir ná i mná. Dealraíonn sé go méadaíonn quercetin leibhéil GSH (Fíor 2C1, H1; p < 0.05) agus rutin chun leibhéil GSSG a ísliú (Fíor 2C2, H2; p < 0.05).

Bhí cóireálacha quercetin agus rutin, i bhfireannaigh agus i mná araon, in ann an titim sa chóimheas GSH/GSSG sa hippocampus (Fíor 2H3) a aisiompú áit a raibh aisghabháil cumhachta ocsaí suntasach i gcomparáid le lucha TgAPP neamhchóireáilte. Maidir le fireannaigh, bhain an t-innéacs seo luachanna comhchosúla amach le luachanna lucha WT sa hippocampus (H3). I measc na mban, cé nach n-ardaítear an cóimheas seo go dtí lucha WT, chuir cóireáil le quercetin agus rutin go mór leis i gcomparáid le lucha TgAPP ina hippocampi (H3: quercetin, p < 0.{{ 6}}01; rutin, p < 0.05).

2.3. Substaintí Imoibríocha Aigéad Tiobarbituric (TBARanna)

Socraíodh leibhéil TBARanna mar mharcáil sárocsaídiúcháin lipid. Ag baint úsáide as cuair chalabrú, cuireadh na torthaí in iúl mar thiúchan malondialdehyde (MDA) (Fíor 3).

Tar éis ró-eisiúint APP, breathnaíodh méadú suntasach ar leibhéil MDA i gcomparáid le lucha WT sa cortex (Fíor 3C) agus sa hippocampus (Fíor 3H), agus i bhfireannaigh agus i mná araon (p < {{ }} .001). .

I measc na mban TgAPP, rinne cóireálacha quercetin agus rutin araon leibhéil MDA a athchóiriú beagnach mar an gcéanna leo siúd a bhaineann le lucha WT (Fíor 3C, H). I bhfireannaigh TgAPP, mar an gcéanna, déanann cóireálacha quercetin agus rutin araon leibhéil MDA a athbhunú go dtí an leibhéal céanna leo siúd a bhaineann le lucha WT sa cortex (Fíor 3C) agus laghdaítear iad níos mó fós sa hippocampus (Fíor 3H). I lucha WT agus TgAPP araon, neamhchóireáilte agus flavonoid cóireáilte ar aiste bia, bhí leibhéil MDA ag brath ar ghnéas (Fíor 3C, H; p < 0.05), ach amháin i gcás na lucha TgAPP cóireáilte le quercetin sa hippocampus.

2.4. Gníomhaíocht Einsíme agus Léiriú Einsímí Frithocsaídeacha

Chun aghaidh a thabhairt ar cibé an dtarlaíonn rialáil na gníomhaíochta einsímeacha nó léiriú géine na bpríomh-einsímí frithocsaídeacha, nó an dá cheann, ar aiste bia quercetin nó rutin, rinneadh an ghníomhaíocht einsímeach agus leibhéil mRNA a chinneadh.

Taispeánann Figiúr 4 gníomhaíochtaí einsímeacha SOD, CAT, GR, agus GPx, arna chinneadh i lucha baineann agus fireann, sa cortex cerebral (Fíor 4a) agus an hippocampus (Fíor 4b).

Mar thoradh ar ró-eisiúint APP, níor breathnaíodh ach laghdú suntasach ar ghníomhaíocht CAT i lucha TgAPP i gcomparáid le lucha WT sa cortex (Fíor 4a(C2); p < 0.05) agus an hippocampus (Fíor 4b(H2); p < 0.05).

Níor tháirg cóireáil quercetin aon éagsúlacht shuntasach i ngníomhaíochtaí einsíme i gcomparáid le lucha TgAPP, i bhfireannaigh nó i mná, sna réimsí inchinn a ndearnadh staidéar orthu. I gcodarsnacht leis sin, tháinig méadú ar ghníomhaíocht CAT sa cortex (Fíor 4a(C2)) agus i ngníomhaíocht GR sa hippocampus (Fíor 4b(H3)) i bhfireannaigh agus i mná (p < 0 in ainmhithe a cuireadh cóireáil orthu le rutin. .05). Ina theannta sin, mhéadaigh rutin gníomhaíocht CAT hippocampal i bhfireannaigh TgAPP (Fíor 4b(H2)) agus gníomhaíocht GPx i mná (Fíor 4b(H4)).

Taispeánann Figiúr 5 léiriú géine na bpríomh-einsímí frithocsaídeacha, SOD, CAT, GR, agus GPx, arna chinneadh i lucha baineann agus fireann, sa cortex cerebral (Fíor 5a) agus an hippocampus (Fíor 5b).

Ní thugtar faoi deara aon difríochtaí i slonn géine idir lucha TgAPP agus WT do na príomh-einsímí frithocsaídeacha (Fíor 5a,b). Thaispeáin fireannaigh TgAPP cóireáilte le rutin méadú suntasach ar léiriú CAT sa hippocampus (Fíor 5b(H2)). Maidir leis an GPx hippocampal, breathnaíodh patrún cosúil le CAT, cé nach raibh an méadú suntasach (Fíor 5b(H4)).

2.5. Próiseáil APP: BACE1 agus ADAM10

Léirítear torthaí ghníomhaíocht einsímí BACE1 sa choirtéis cheirbreach agus sa hippocampus i bhfireannaigh agus baineannaigh i bhFíor 6, arna shloinneadh mar chéatadáin gníomhaíochta a bhaineann le lucha TgAPP neamhchóireáilte.

I bhFíor 6, fuarthas go raibh méadú thart ar 10 faoin gcéad ar ghníomhaíocht einsím BACE1 i lucha TgAPP i gcomparáid le lucha WT, sna réimsí inchinne atá faoi imscrúdú agus sa dá inscne, agus fuarthas go raibh siad suntasach go staitistiúil (lch. < 0.05).

Laghdaíodh an méadú ar ghníomhaíocht a breathnaíodh i lucha trasgenacha le cóireálacha quercetin agus rutin araon, sa cortex agus sa hippocampus. Mar sin féin, d'fhéadfaí a thabhairt faoi deara go raibh éifeacht rutin beagán níos mó ná an quercetin i bhfireannaigh.

Nuair a bhí gníomhaíocht BACE1 ar eolas, shocraigh muid go ndéanfaí an staidéar géine-léiriú ar APP, príomhthréith an tsamhail ainmhithe transgenic, agus a phríomh-einsímí próiseála: BACE1 agus ADAM10. Taispeánann Figiúr 7 na torthaí a fuarthas i lucha baineann agus fireann, sa cortex agus sa hippocampus araon.

Sa dá inscne, breathnaíodh méadú suntasach ar léiriú APP níos mó ná 85 faoin gcéad maidir le lucha WT, rud a léirigh ró-eisiúint na géine sa cortex cerebral (Fíor 7C1; p < 0.05) agus sa hippocampus (Fíor 7H1; p < 0.05). Bhí cóireálacha le quercetin agus rutin in ann an slonn seo a laghdú níos mó ná 45 faoin gcéad (p <0.05) do lucha fireann agus baineann araon sa dá réimse inchinn atá faoi imscrúdú (Fíor 7C1, H1), leis na héifeachtaí a bheith níos suntasaí sa hippocampus (Fíor 7C1, H1). Fíor 7H1).

Maidir leis an slonn próitéine BACE1, cé gur athraíodh gníomhaíocht BACE1, ní raibh aon difríochtaí suntasacha idir lucha trasgenacha agus neamh-trasgenacha beag beann ar ghnéas agus ar chóireáil flavonoid a scrúdaíodh.

Mar sin, rinneamar measúnú ar an slonn ADAM10 a bhaineann le próiseáil neamh-amyloidogenic APP. Cé nach raibh na hathruithe i slonn ADAM10 i lucha TgAPP i gcomparáid le lucha WT suntasach go staitistiúil, breathnaíodh laghdú beag. Maidir leis na cóireálacha flavonoid, léirigh rutin treocht mhéadaitheach i slonn ADAM10, i bhfireannaigh agus i mná araon agus sa dá réimse den inchinn (Fíor 7C3, H3).

【Le haghaidh tuilleadh eolais:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】