Cad iad na Buntáistí a bhaineann le Cistanche Polysaccharide Ar Fheidhm Imdhíonachta

Teagmháil: emily.li@wecistanche.com

Gníomhaíocht imdhíoneolaíoch agus meicníocht Cistanche Polysaccharide

Zeng Qunli, Zheng Yifan, Lu Zhiliang

[Achoimre]Cuspóir: Chun staidéar a dhéanamh ar animdhíonachgníomhaíocht deCistanchePolaisiúicríd(CDPS) agus an mheicníocht aimdhíonachrialachán in vitro. Modhanna: Baineadh úsáid as an modh dathmhéadrach gorm thiazole (MTT) chun éifeacht rialála CDPS (Polysaccharide Cistanche) ar IQS DEX TNF cosc ​​a chur ar iomadú limficítí thymic luiche in vitro; CDPS (Polysaccharide Cistanche) chun anailís a dhéanamh ar thimthriall cille agus ar thimthriall cille ag baint úsáide as cíteiméadracht sreafa. Ca2 intracellular a chinneadh. Torthaí: CDPS (Polysaccharide Cistanche) is féidir le tiúchan níos airde seasamh in aghaidh éifeacht coisctheach ISQDEX ar iomadú limficítí agus éifeacht coisctheach TNF ard-tiúchan ar iomadú limficítí, agus sineirgíocht a dhéanamh ar éifeacht cur chun cinn iomadú tiúchan íseal TN F ar limficítí; 100ug/ml 200 ug/ml CDPS (Polysaccharide Cistanche) is féidir leis na cealla a mhéadú go suntasach sa chéim roinnte; tiúchan níos airde (100ug/ml) CDPS (Polysaccharide Cistanche) is féidir leis an tiúchan de ian Ca i thymocytes luiche a chur chun cinn go suntasach. Conclúid: CDPS (Polysaccharide Cistanche) cealla a chur chun cinn chun dul isteach sa chéim roinnte, agus tá sé tátal go bhfuil a éifeacht chun cinn ar an iomadú na limficítí thymic luch a bhaineann le a chur chun cinn scaoileadh cailciam i limficítí thymic luch.

Cistanche(CistancheDeserticolaIs ábhar míochaine Síneach luachmhar é YC Ma) i mo thír féin. Tá sé liostaithe mar an grád is airde i "Shen Nong's Materia Medica".Cistanchetá feidhmeanna aige maidir le fuil a chothú, an duán a chothú agus cabhrú le yang, moisturizing an intestines, agus moill a chur ar aosú. Léiríonn taighde cógaseolaíochta nua-aimseartha go bhfuilCistanchePolaisiúicrídis féidir feabhas a chur ar an gcomhlachtimdhíonachfeidhm, sintéis DNA a chur chun cinn, neart fisiceach a neartú, faisnéis a fheabhsú, agus tá éifeachtaí frith-aosaithe soiléire [1]. Rinne an t-údar staidéar ar rialáil CDPS(Polaisiúicríd Cistanche), comhpháirt polaisiúicríde deCistanche, ar animdhíonachfeidhmde limficítí luiche.

Polysaccharide Cistancheag cur chun cinniomadúlimficítí

1 Ábhar agus modhanna

1.1 Imoibrithe agus drugaí.

RPM, I 1640 meán: GIB-CO; HEPES: FARCO; L-glutamine: Shanghai Dongfeng Imoibrí Monarcha; Peinicillin agus Streptomycin: Monarcha Cógaisíochta na Síne Thuaidh; Concanavalin (ConA), MTT: Cuideachta SIGM A; Phytohemagglutinin (PHA): Saotharlann Leighis Shanghai; Isoproterenol (ISO): Shanghai Tianfeng Pharmaceutical Factory; Mercaptoethanol: Cuideachta Fluka; Séiream lao nuabheirthe: Cuideachta Bithinnealtóireacht Sijiqing; Bhronn an Dr. Ma Liang, an Chéad Ospidéal Cleamhnaithe de Scoil Leighis Ollscoil Zhejiang Dexamethasone (DEX); Soláthraíodh Fachtóir Suppressor Tumor (TNF) ag Yu Yuehan, Ollamh, Roinn na gCealla, Scoil na nEolaíochtaí Beatha, Ollscoil Zhejiang; Is gráid anailíseacha intíre iad an chuid eile de na himoibrithe.

1.2 Ainmhithe turgnamhacha.

Ceannaíodh lucha ICR, fireannach, 68 seachtaine d'aois, ar mheá 18-20g, 22, ó Zhejiang Experimental Animal Centre.

1.3 Baint Cistanche Pholaisiúicríd [2]:

CistanchePolaisiúicrída bhaintear ag ár saotharlann! Tar éis an druga amh a bhrúCistanche, tá sé tumtha in eatánól te, a bhaintear i fiuchphointe uisce, agus deasctha in eatánól. Einsím neodrach in éineacht le modh Sewag do dhíphróitéiniú, crómatagrafaíocht malartaithe anion DEAE-Sephadex A- 50 agus crómatagrafaíocht scagacháin glóthach Sephacry S-200 chun comhpháirt amháin de CDPS a fháil (Polysaccharide Cistanche)). Coinnigh tirim, bain úsáid as RPMI1640 neamhiomlán chun tiúchan áirithe a dhéanamh roimh úsáid, agus steiriliú trí ultrafiltration

1.4 Linfocítí an spleen agus an thymus a ullmhú [3]:

The mice were sacrificed by neck removal. The spleen or thymus was taken aseptically and sieved through a 200-mesh steel mesh. The Hanks solution containing porridge newborn calf serum was used to prepare a single-cell suspension. After centrifugation at 1500 r/min for 10 min, red blood cells were lysed with 0.01 mol/L Tris-NHCl hypotonic solution for 1 min, and then washed with Hanks liquid centrifugation. Finally, the cells were suspended in RPMI1640 containing 10% fresh calf serum for complete culture Solution (containing 2 mmol/LL glutamine, 100 mmol/L sodium pyruvate, 1 mmol/L mercaptoethanol, add penicillin 100 U/ml and streptomycin 100 μg/ml just before use), trypan blue count, live For cells>93, coigeartaigh tiúchan na gcealla spleen go X 10 /ml agus an tiúchan thymocytes go × 10 céim /ml

1.5 Imoibriú iomadú limficítí:De réir modh Mosmanmn [4] Feabhsú: 96-pláta saothraithe cille tobair, cuir fionraí cille spleen 10/ml nó uisce fionraí thymocyte 10/ml 100M1 agus tiúchan éagsúla drugaí 10041 i ngach tobar. Saothrú i gorlann CO2.37C ar feadh 72 uair an chloig. 4 uair an chloig roimh dheireadh an chultúir, cuir 8μ1 de MTT (5 mg/ml) le gach tobar. Ag deireadh an chultúir, asúigh 150"1 den shástán ó gach tobar, agus cuir 0.5N hidreaclóiríd isopropanol 150M1. Croith go réidh ar an micrea-chrithteoir chun na criostail ghorm a thuaslagadh go hiomlán. Tomhais an OD570 ar an léitheoir micreaphláta. Socraigh gach turgnamhach pointe mar thrí thoibreacha mhacasamhlú.

1.6 An tionchar ar thimthriall na gceall a chinneadh [5]:

{{0}}pláta saothraithe cille tobair, cuir 4 10 fionraí thymocyte céim /ml 1ml le gach tobar, cuir imoibrithe éagsúla agus tuaslagán polaisiúicríde go 2ml in CO láidir, 37 gorlainne Tar éis saothraithe ar feadh 72h, lártheifneoir ag 1500r/nóim ar feadh 15nóim, caith amach an comhshnámh, cuir 7 eatánól leis na cealla deasctha a shocrú, stóráil ag 4C le haghaidh tástála fuireachais, nigh na cealla faoi dhó le PBS, lártheifneoir ag 1500r/nóim ar feadh 15 nóiméad, caith an supernatant, agus cuir leis Tar éis 0.5ml0.1 díleáite RNaseA ag 4C ar feadh 30 nóiméad, dhaite 50ug/ml bróma-aicéatáit ar feadh 30 nóiméad ag 4C, agus rinneadh déine fluaraiseachta na samplaí cille a thomhas ar an cítoiméadar sreafa FACScan. Bailíodh 10,000 pointe tástála cille do gach sampla, agus úsáideadh na sonraí anailís bogearraí Il-trírothach.

1.7 Tiúchan ian cailciam intracellular a chinneadh [6]

Tóg thymocytes luiche ar an mbealach céanna mar atá thuas. Cuir ar fionraí i meán cultúir RPMIl640 neamhiomlán agus coigeartaigh an tiúchan cille go × 10'/ml. Cuir 1 ml fionraí thymocyte agus 1 μM le gach feadán turgnamhach Fliú-3Tuaslagán ruaimniú AM 5μ1, 2 faoin gcéad F-275μ1, tar éis gortha ag 37 ar feadh 30 nóiméad, nigh faoi dhó le RPM1640, 1500r/ neamhiomlán min, lártheifneoir ar feadh 10 nóiméad, caith an sásar, agus cuir tiúchain dhifriúla polaisiúicrídí agus polaisiúicrídí chuig na cealla deasctha Tar éis ConA, tomhaiseadh an déine fluaraiseachta ar an gcítiméadar sreabhadh FACScan. Bailíodh sonraí 10,{16}} phointe tástála cille do gach sampla agus rinne bogearraí CELLQUEST anailís orthu. 1.8 Baineadh úsáid as modhanna staitistiúla le haghaidh anailíse athraithis, agus rinneadh anailís ar thimthriall cille agus tomhas ian cailciam ag bogearraí an chitoiméadar sreafa.

Cistanche Polysaccharide ó cistanche deserticola

2 Torthaí

2.1 Coscann Cistanche Polysaccharide in vitro iomadú limficítí tímeacha luiche ag ISO DEX TNF

Cuireann an agonist receptor -adrenergic isoproterenol (ISO) agus aicme de cortex adrenal dexamethasone (DEX) bac ar iomadú limficítí CDPS (Polysaccharide Cistanche) ag tiúchan níos airde (75 125ug/ml) is féidir leis cur i gcoinne éifeacht choisctheach ISO DEX ar iomadú limficítí (P<0.01) as="" shown="" in="" figure="" 1.="" tumor="" necrosis="" factor="" (tnf="" β)="" on="" lymphocytes="" at="" high="" concentration="" cdps="">Cistanche Polaisiúicríd) (125ug/ml) ag tiúchan níos airde in aghaidh éifeacht coisctheach TNF , agus iomadú limficítí le tiúchan íseal TNF a chur chun cinn go sineirgistíoch (Fíor 2)

2.2 Rialáil Cistanche Polysaccharide ar thimthriall limficítí thymus

CDPS (CistanchePolaisiúicríd) 25ug/ml 100ug/ml 200#g/ml gníomhaíodh trí thiúchan ar limficítí thymic na luiche ar feadh 72 uair, tomhaiseadh an t-ábhar DNA sna cealla ag FACS, agus ríomhadh an t-innéacs iomadú (PI). de réir na foirmle. Léiríonn na torthaí gur féidir le 100ug/ml agus 200ug/ml na cealla a mhéadú go suntasach sa chéim roinnte, agus tá an t-innéacs iomadú (68.0 faoin gcéad , 56.6) den dá cheann i bhfad níos airde ná an grúpa rialaithe (44.6), agus an 200ug/ml Tá an grúpa beagán níos ísle ná an grúpa 100ug / ml mar, ag an tiúchan de 200ug/ml, tá a éifeacht ar iomadú cille tar éis éirí mar threocht anuas [7]. Ní raibh luach PI (47.5 faoin gcéad) an ghrúpa 25ug/ml i bhfad níos airde ná luach an ghrúpa rialaithe.

2.3 Éifeacht Cistanche Polysaccharide ar an tiúchan ian cailciam i thymocytes luiche

Léiríonn na torthaí turgnamhacha go bhfuil tiúchan níos airde (100 ug/ml) de CDPS (Cistanche Polysaccharide) is féidir leis an méadú ar an tiúchan ian cailciam i thymocytes luch a chur chun cinn go suntasach I gcomparáid leis an ngrúpa rialaithe, tá difríocht shuntasach (P<0.01), and="" there="" is="" a="" certain="" effect="" relationship="" with="" the="" action="" time="" (figure="">

3 Plé

Cistanche, ar a dtugtar go coitianta" ginseng fásaigh", is gas méithe tirim, scagach deCistanche.CistancheTá feidhmeanna an yang duáin nourishing, bunúsach nourishing, fola agus inní. Baineann sé le cineál spleodar an cortex pituitary-adrenal nó tá éifeacht cosúil le hormón cosúil leis an cortex adrenal. A leigheas Sínis luachmhar is féidir a rialáil animdhíonachfeidhmden chorp. Léiríonn ár dtorthaí taighde roimhe seo go bhfuil CDPS (Polysaccharide Cistanche) in vitro in ann iomadú limficítí thymic T nach bhfuil gníomhachtaithe nó gníomhachtaithe ag ConA PHA a chur chun cinn. In éineacht le ConA PHA, tá dhá chineál spreagthóir cealla T, creidimid go bhfuil CDPS (Polysaccharide Cistanche) is Badjuvant do chealla T, agus fuaireamar amach freisin go bhfuil CDPS (Polysaccharide Cistanche) méadú suntasach a dhéanamh ar an secretion de limficítí splenic luch ag tiúchan níos airde [8]

Fuarthas amach i roinnt staidéar go bhféadfadh TNF athchuingreach a bheith ina chúis le apoptosis de ghnáth-chnuasaigh limficítí luiche agus T daonna in vitro, agus d’fhéadfadh IIL-2 IL-1 IFN agus IIL-4 an éifeacht seo a chosc. le dexamethasone (DEX) Is féidir leis iomadú limficítí a chosc trí shloinneadh limficítí agus secretion IL-2 a chosc agus táirgeadh IL-2R ard-chleamhnas a laghdú. Fuarthas amach sa turgnamh seo go raibh tiúchan níos airde de CDPS (CistanchePolaisiúicríd) in aghaidh éifeachtaí tiúchan ard TN F ar iomadú limficítí. Cosc, sineirgisteacha le tiúchan íseal TNF chun iomadú limficítí a chur chun cinn, agus is féidir leis an éifeacht coisctheach ISQ DEX ar iomadú limficítí a chomhrac. Déantar na héifeachtaí seo go beacht trí CDPS (CistanchePolaisiúicríd) chun iomadú limficítí T a chur chun cinn agus déantar uathchríonadh orthu ag cealla T IL-2 agus cítocíní eile le cur i gcrích.

Le blianta beaga anuas, rinneadh go leor staidéar ar éifeachtaí imdhíon-chógaiseolaíochta na polaisiúicrídí plandaí, ach is beag staidéar a rinneadh ar animdhíonachmeicníocht rialaithe na polaisiúicrídí, go háirithe an chonair aistrithe comhartha de pholaisiúicrídí ag gníomhú ar limficítí le Ca2 mar an dara teachtaire. Níl aon tuairisc. Rinne an turgnamh seo réamhthaighde sa réimse seo. I measc na móilíní comharthaíochta intracellular tá cAM R Ca", IP3 DG cGMP, etc., ina measc tá éifeacht fiseolaíoch thar a bheith tábhachtach ag Ca" ar chealla. Feiniméan tábhachtach é an méadú ar thiúchan Ca² intracellular i gcéim luath gníomhachtaithe agus iomadú limficítí. Tarlaíonn an próiseas seo go príomha sna chéad deich soicind go nóiméid nuair a ghníomhaíonn spreagthóirí cealla. Is é an bealach clasaiceach de ghníomhachtú cille T fosfatidylinositol (PIB) chun muscle phosphatidyl a mheitibiú. Is féidir leis an meitibilít alcóil 1,4.5-inositol triphosphate (IP3) scaoileadh Ca" atá stóráilte sa mhogalra istigh a chur chun cinn trí cheangal a dhéanamh ar na gabhdóirí mogalra istigh, ag méadú leibhéal Ca2 intracellular, agus tiúchan Ca intracellular. * méaduithe Is féidir le hard táirgeadh NF-AT (fachtóir nudeic de chill T gníomhachtaithe) a chur chun cinn), tá an éifeacht ag an dara ceann léiriú géine IIL-2 a chur chun cinn. Léiríonn torthaí turgnamhacha go bhfuil tiúchan níos airde (100ug/ml ) den CDPS (CistanchePolaisiúicríd) éifeachtach ar feadh 5 10 nóim Tá éifeacht shuntasach ag am ar mhéadú an tiúchan Ca* i dtimicítí luiche, agus tá éifeacht sineirgisteacha aige le ConA. Mar sin, déanaimid tuairimíocht go bhfuil CDPS (Polysaccharide Cistanche) cuireann sé scaoileadh cailciam i limficítí thymic na luiche chun cinn chun an tiúchan ian cailciam intracellular a mhéadú. Cothaíonn an méadú léiriú géine IL-2 agus mar thoradh ar iomadú cealla T, atá ar cheann de bhunsraitheanna teoiriciúlaCistanchePolaisiúicríd'séifeacht rialála ar an gcomhlacht

Polysaccharide Cistanche

Tagairtí

1. IN XiuHin, SU Yuke (Staid ghinearálta taighde cógaseolaíochta arCistancheTá 【J】. Drugaí Sínise Traidisiúnta agus Luibhe ((leighis luibhe na Síne). 1993.24(10. 550-552(i Sínis))

2. ZHANG Weijiee (Teicneoir bithcheimiceach de pholaisiúicríd cumaisc [M]. Hangzhou Zhejiang University Pres (Zhejiang University Press), 1994.16-17 (i Sínis)

3. MA Bo- (Ma Baoli).Teicneolaíocht imdhíoneolaíochta【M1. Shanghai Medical University Pres (Shanghai Medical University Press), 1984 188-190. (n Chines))

4. Measúnacht Mosmann T. Rapiloloimeric le haghaidh fáis agus marthanachta níos éasca a chur i bhfeidhm ar iomadú agus cíteatocsaineacht[JJ Immun Meth.1983,6 55- 58.

5. WU is-hi, WU shailing, Acai-n, et al (Wu Jiahui, Wu Shuibing. Li Carian, etc.), An éifeacht zin ar iomadú cealla timthriallach iimdhíonachanailís orgán ag baint úsáide as cíteiméadracht sreafa [J]. Imdhíoneolaíocht na Síne (Chinese Journal of Immunology), 1994, 10X5: 278-281. (sa tSine)

6. aisín TAO. JIYong-yong, GAO Qi-rong, et al (Tao Jiaxian, Ji Yongpu Gao Qirong, etc.). Anailís FACS ar athruithe i C2 incheallach le linn leictrithe[J] Irisleabhar na Síne imdhíoneolaíochta (China Journal of Immunology), 1993, 9 (2): 97-10L. (i Sínis)

7. ZENGQu-li.MAO Jum-hao, LU suchiang; Íonú d polaisiúicrídí deCistancheDeserticolaYC Mfa agus a éifeachtaí imdhíonmhodúla ar Tellfunction[J].burnal de chuid Ollscoil Leighis Zhejiang (Iris Ollscoil Leighis Zhejiang), 1998.27 (3: 108-111. (i Sínis)

8. Sarin A, Michelle C C. Perre AH Citotocsaineach Efed de TNF agus Lymphotoxin ar T Lymphoblak. J Immunol, 1995, 1553716-3721.