Dhá Thritéarpeanóid Ó Dhuilleoga Rubus Fraxinifolius Agus A nGníomhaíochtaí Coscacha Tyrosinase Agus Elastase

Déan teagmháil le do thoiloscar.xiao@wecistanche.comle haghaidh tuilleadh eolais

Tá go leor comhdhúile teiripeacha scoite amach ó acmhainní orgánacha atá flúirseach go nádúrtha, a d'fhéadfadh foinsí eacnamaíocha agus inbhuanaithe de chomhdhúile a thairiscint le gníomhaíochtaí bitheolaíocha sábháilte agus éifeachtacha. Sa tionscal cosmaidí, lorgaítear comhdhúile nádúrtha le gníomhaíochtaí frith-aosaithe go fonnmhar. Mar sin, d’ullmhaigh muid sleachta éagsúla ó dhuilleoga Rubusfraxinifolius agus d’úsáideamar measúnachtaí coiscthe einsímí chun comhdhúile a bhfuil éifeachtaí cosanta acu in aghaidh aosaithe craicinn a leithlisiú. Rinneadh dhá thriterpenoid a leithlisiú ó Rubus fraxinifolius Poir. duilleoga. Ba shaintréithe na struchtúr ná anailísí speictreascópacha (LC-ESI-MS, 1D/2D NMR) agus comparáid le sonraí tuairiscithe. Cinneadh Comhdhúile 1 agus 2 mar 2,3-glycól O-eitiléine,19-hiodrocsaiurs-12-ga-23,28-aigéad dé-each agus 2,{{15} }O-propanediol,19-hiodrocsaiurs-12-ga-28-aigéad óiceach. Rinneadh measúnú ar eastóscán meatánóil agus aonróga maidir lena n-éifeachtaí coisctheacha ar elastase agus tyrosinase. Chuir comhdhúile 1 agus 2 bac ar elastase le ICso 122.199 ug/mL agus 98.22 ug/mL, agus chuir siad cosc ​​freisin ar tyrosinase le ICso 207.79 ug/arm agus 221.51 ug/mL, faoi seach. Cruthaíodh go raibh baint ag an dá chomhdhúil leis na heinsímí leis an mbá móilíneach.

Cliceáil anseo le do thoil chun tuilleadh eolais a fháil

Cé go bhfuil sé dúshlánach iad a bhaint amach, is féidir substaintí nádúrtha frith-aosaithe atá sábháilte do dhaoine a bhaint go heacnamaíoch agus go hinbhuanaithe ó acmhainní nádúrtha flúirseacha. Tá thart ar 700 speiceas Rubus (Rosaceae) scaipthe ar fud an domhain, cé nach bhfuil mórán speiceas le fáil sna trópaicí. Tá cothaithigh sa ghéineas seo (siúcra, vitimíní, etc.), meitibilítí tánaisteacha (triterpenoids, flavonoids, polyphenols, etc.), agus tá go leor gníomhaíochtaí frith-aosaithe aige (frithocsaídeach, ant elastase, ant tyrosinase, anti-collagenase, anti-UV, frith-athlastach, leigheas créachta, etc.)1. Ina theannta sin, thuairiscigh speicis Rubus freisin go raibh triterpenes éagsúla le gníomhaíochtaí bitheolaíocha éagsúla -'.

San Indinéis, R. fraxinifolius Poir. (Rosaceae) a dháileadh i Java, Borneo, etc., agus ar a dtugtar go coitianta mar 'uirbeach.cad é cisteánThairis sin, fómharann ​​roinnt feirmeoirí áitiúla na plandaí seo, agus is gnách go gcaitear na torthaí caora úr nó reoite. Léirigh ár staidéar roimhe seo go bhfuil an ghníomhaíocht ag sliocht gas R. frascinifolius chun elastase, tyrosinase, agus mar fhrithocsaídeach a chosc8. Léirigh roinnt imscrúduithe eile freisin go bhfuil gníomhaíocht fhrithocsaídeach láidir ag duilleoga agus torthaí R. fraxinifolius? 10. Mar sin féin, is beag taighde a rinneadh ar staidéar R. fraxinifolius, agus níor tuairiscíodh aon staidéar ar chomhpháirteanna ceimiceacha.

Is féidir le Cistanche frith-aging

Is einsím serine protease é Elastase, a bhfuil ról ríthábhachtach aige i roic an chraiceann nó sagging trí shnáithín leaisteacha deirmeach (elastin) a dhíghrádú agus a fhágann go gcailltear leaisteachas craiceann. Is é ceann díobh seo leaisteáis díorthaithe fibroblast craicinn. Mar sin, mar mhodhnóirí ar dhíghrádú snáithíní elastin a chuireann faoi deara aosú craiceann, tá aird tarraingthe ar choscóirí elastase mar oibreáin d’ullmhóidí cosmaideacha,12. Déantar melanogenesis a idirghabháil ag tyrosinase agus rialaíonn sé biosintéis melanin trí imoibriú dhá chéim. Sa chéad chéim, déantar L-tyrosine a hiodrocsailiú go L-3,4-dihydroxyphenylalanine (L-DOPA).Sa dara céim, déantar L-DOPA a ocsaídiú go dtí an O-quinone comhfhreagrach. Dá bhrí sin, úsáidtear comhdhúile nádúrtha le gníomhaíocht choisctheach tyrosinase go coitianta i gcosmaidí a chuireann bac ar hyperpigmentation le melanin agus mar sin is fearr le whitening craiceann.Ciste frith-aosaitheD’fhéadfaí na coscairí elastase agus einsímí tyrosinase a fhorbairt mar oibreáin ghealúcháin craicinn, frith-aosaithe, nó frithroctha chun neamhoird dheirmeolaíocha a chóireáil44.

Rinne an staidéar seo triterpenoids úráin a leithlisiú ó dhuilleoga R.fraxinifolius agus léirigh siad a gcuid struchtúr in anailísí speictreascópacha ag baint úsáide as mais-speictreascópacht ianaithe leictrispré (ESI-MS) agus 'H NMR,|3CNMR, agus 2D NMR (DEPT, HSQC, HMQC, agus HMBC). Ina dhiaidh sin, rinneamar measúnachtaí ar ghníomhaíochtaí coisctheacha elastase agus tyrosinase ar eastóscáin amh, codáin, agus comhdhúile scoite.

Breathnaíodh gníomhaíocht dhá chomhdhúil roghnaithe freisin trí mhodh in silico sa taighde seo. Baineadh cur chuige múchta móilíneach le DockThorl516.Fuarthas na macramóilíní a úsáideadh sa taighde seo ó bhanc sonraí próitéine (RCSB PDB, 2000) le féiniúlachtaí 2y9x agus 3hgp do tyrosinase agus elastase, faoi seachl718.The macramóilíní optamaithe inUCSF Chimera agus na torthaí docking móilíneach breathnaíodh le PyMOL1920.

Torthaí agus plé

The ethyl acetate and methanolic extracts of R. fraxinifolius leaves showed potential as elastase inhibitors with percent inhibitory>40 faoin gcéad i 100 ug/ml, ach ní raibh aon ghníomhaíocht ag sliocht n-heacsán (Fíor 1). Léirigh roinnt Rubus freisin gníomhaíocht coisctheach elastase den sórt sin R. Sanctus (cosc faoin gcéad 14.68-49.20 i 100 ug/mL）, R.compactus,R. strongus, etc.221. Dá bhrí sin, rinneamar na hextracts gníomhacha a chodánú ag baint úsáide as crómatagrafaíocht folúis-leachtach/VLC agus bhailíomar codáin ll ó gach ceann acu. Léirigh codáin ó sliocht aicéatáit eitile gníomhaíochtaí coisctheacha lag elastase (<20% in="" 100="" ug/ml),but="" some="" methanol="" fractions="" showed="" potential="" activity="" in="" these="" assays.="" we="" choose="" metha-nol="" fraction="" 8(m8)for="" further="" isolation="" because="" it="" hadthe="" largest="" yield(57%)="" and="" also="" have="" elastase="" inhibitory="" activity(44.82%).m8="" was="" further="" partitioned="" and="" purified="" over="" silica="" gel="" and="" through="" a="" sephadex="" column,="" and="" two="" amorphous="" powders="" were="">

Aithníodh agus sainaithníodh aonrúcháin trí úsáid a bhaint as mais-speictreascópacht crómatagrafaíochta leachtaigh (LCMS), 'H agus 13CNMR, DEPT, comhghaolú candamach aonair heitrea-núicléach (HSQC), comhghaol candamach iolrach heitrea-núicléach (HMQC), agus comhghaol bannaí iolracha heitrea-núicléacha (HMBC). Léirigh Tábla 1 sonraí speictreach NMR na gcomhdhúile.

Comhdhúil 1: leithlisíodh é mar phúdar bán éagruthach. Thaispeáin speictream LCMS-ESI don chomhdhúil seo buaic iain mhóilíneach ag m/z 543.32[MH]t, ag moladh an fhoirmle mhóilíneach C32H48O- le naoi speictrim neamhsháithiúcháin neamhsháithithe. Nocht speictrim IR uasta ionsúcháin a chomhfhreagraíonn le hiodrocsaile (3.343.4 cm-l) agus grúpaí feidhme oilifíneacha (1.684 cm-1). Thairis sin, 'Nocht H NMR speictream de chomhdhúile prótón meatine (CH) comhartha singil ag 2.6, sainchomhartha don H-18 de chineál úráin triterpenes le 19-O-ionadaigh. Tá comhartha prótón tipiciúil ag an gcineál triterpene 19a-hydroxy-ursane freisin sa cheantar timpeall ou 2.6 ppm. Is féidir go mbeadh difríocht shuntasach idir an comhartha díshraitheach seo agus gnáthchomharthaí prótóin meitiléine eile, le hathrú sainiúil mar gheall ar phrótón olaifíneach (H12) ag ou 5.28(t,J=6Hz).sochair cisteancheChuidigh speictream HMQC(13Cx'H) agus HMBC(15Cx'H) iomlán agus aonchiallach 'H agus l3C aistrithe ceimiceacha. {5}}(Fíor 2a). Fuarthas saincharachtair eile do na cúig shingil meitile ag 1.89,1.02,0.82,1.32,1.20(gach,H{24-27;29),dúbailt meitile ag og 0.92(d, J=6 Hz), agus an comhartha prótóin oilifíneach ag 5.30(t, J=7 Hz, H{-12). Taispeánann an speictream láithreach13CNMR 32 athshondas carbóin, agus le speictream DEPT agus HMQC, taispeántar dhá charbón carbónile (δC183.70,C-28 agus 8-178.96,C-23), carbón olaifíneach ag oc 127.23,C-12,carbón ceathartha oilifíneach(oc139.49,C{-13),carbón ceatharthach a bhfuil ocsaigin aige （o-72.7,C-19 ）, deich meitiléine alafatacha agus sé charbón meitile. Bhí an dá charbón olaifíneach ag δ-127.23（C-12） agus 139.49(C-13) ina saintréith den chineál úráin-triterpenoid. Léirigh comhartha eile láithreacht glycol eitiléine (-OCH-CH-O-) ag comharthaí ag δ4.62 （d, J=11.5 Hz）,4.05 (d, J=11. 5 Hz）,3.52（d, J=11.5Hz) agus 4.06 (d, J=11.5Hz) agus tacaithe le δ61.27 (t) agus 63.20 (t）.Bhí sé suite ag C-2agusC-3 bunaithe ar láithreacht comhghaol fadraoin i speictrim HMBC. Mar sin, sainaithníodh comhdhúil 1 mar 2,3-glycol O-eitiléine,19-hiodrocsaiurs{-12-ga-23),28-aigéad déach (Fíor 3a).

Comhdhúil 2: fuarthas mar phúdar bán éagruthach.MS-ESI m/z 527.33 [MH]t(calcd.For 528.3815). I speictrim LCMS-ESI, tá buaic iain mhóilíneach i láthair ag m/z 527.33 [MH]t, rud a léiríonn an fhoirmle mhóilíneach CH Os, a raibh 8 gcéim neamhsháithithe de dhíth uirthi." {15}})grúpaí feidhmeacha olaifíneacha(1,686cm-1). Thairis sin, thaispeáin speictrim HNMR do chomhdhúil 2 singil ag 2.42, arb é is sainairíonna é don H18 de thriterpéin de chineál úráin le {{24 }}O-ionadach.Sliocht Cistanche Frith-radaíochtÁiríodh le speictrim shaintréithe eile láithreacht sé shingil meitile ag og1.22 0.76,0.97,0.69,1.30agus 1.17(gach ceann,H). -24-28,H-30), dúbailtet meitile ag 0.91 (d,J{=7Hz), agus an comhartha prótón oilifíneach ag ou 5.37 (d, J=7 Hz, H-12). Léiríonn speictrim chomhfhreagrach l3(CNMR agus DEPT 33 athshondas carbóin, agus léiríonn speictream HSQC agus HMQC láithreacht carbóinile charbóin (oc 182.23, C{-28), carbón olaifíneach （δ{-129.36, C -12）, carbón ceathartha oilifíneach (δ-140.24, C-13）, carbón ceatharthach a bhfuil ocsaigin aige (oc73.68, C-19), alafatach aon cheann déag meitiléine, agus seachtarbóin mheitile.Léirigh na sonraí seo go n-iompraíonn comhdhúil 2 cnámharlach úráin-tríterpenoid. Léirítear sna comharthaí eile láithreacht 1,3-grúpa feidhme própaindiol, ag og 3.22(d,J{{{{{{{{{=11)) .5 Hz), 3.42(d,J=10.5 Hz),1.38(m),1.51(m)agus 4.02(d,J=11.5Hz)agus 3.36(t,J{ {57}}.5Hz). Tá comhghaol fadraoin ag a ghrúpa feidhme le C2-C3. Bunaithe ar na torthaí seo, sainaithníodh comhdhúil 2 mar 2,3-O-Propanediol,{{ 66}hiodrocsaiúir-12-ga-28-aigéad óiceach(Fíoracha.2b agus 3b). Is comhdhúil chomhchosúil é 2,3-aigéad torments O-Iseapróipilídíne, scoite ó Rubus xanthocarpus.7

I dTábla 1, rinneadh comparáid idir gach speictream NMR ‘H agus’’ C le haigéad torment (TA/2a,3a, 19-tríhidroxy-12-ursen-28-aigéad oic）², arb é a triterpenoid ursane a fuarthas i roinnt speiceas Rubus-p Bhí cosúlachtaí láidre ag aigéad tormentach le comhdhúile 1 agus 2, ach amháin go raibh difríocht idir aistrithe ceimiceacha a bhaineann le C-23 agus C31-33. Turgnaimh DEPT, HMQC, agus HMBC (Fíor 2).

Déantar aigéad torments triterpenoid a dháileadh go forleathan i mbianna plandaí nádúrtha. Tá bithghníomhaíochtaí éagsúla aige: laghdaigh éifeachtaí hipoglycaemacha, airíonna frith-athlastacha, agus frith-atheróigineacha iomadú cille matán mín soithíoch, agus gníomhaíochtaí frith-iomaíochas i línte cille ailse duánach, próstatach agus melanóma2426. Mar sin, toisc go bhfuil an chnámharlach céanna ag na comhdhúile seo, ní féidir go bhfuil gníomhaíochtaí féideartha oiriúnacha féideartha acu.

Léiríonn Figiúr 4, gníomhaíocht coisctheach elastase agus tyrosinase aonráití. Cuireadh na sonraí a fuarthas ó thástálacha ar chosc einsímí in vitro in iúl mar an diall caighdeánach (SD). Chuir comhdhúile 1 agus 2 bac ar elastase le ICso 122.199 agus 98.22 ug/mL, agus chuir siad bac freisin ar tyrosinase le ICso 207.79 agus 221.51 ug/mL, faoi seach. Thuairiscigh roinnt triterpenoids peinteacyclic (aigéad ursolic agus aigéad oileanólach) go raibh gníomhaíocht choiscthe elastáis acu2728. Tá luach coiscthe elastase chomh maith de chomhdhúil 2 níos ísle ná an chomhdhúil 1. Bhí an dá chomhdhúil níos lú gníomhaíochta coiscthe ná an t-aigéad oleanóileach rialaithe deimhneach, a raibh luach ICso de 90.39 ug/mL aige. I gcomhaontú, léirigh staidéir roimhe seo ICso d’aigéad oileanólach de 76.5 ug/mL agus luach ICso de 31.0 ug/ml d’aigéad ursolic28. Léirigh anailísí cinéiteach a tuairiscíodh roimhe seo ar triterpenes peinteacyclic go gcuireann na comhdhúile seo bac ar neodrófail elastase ar bhonn iomaíoch agus inchúlaithe. Sa staidéar céanna, thaispeáin turgnaimh um dhugáil mhóilíneach go bhfuil an scafall móilíneach 28-COOH agus naisc dhúbailte i dtríipéiní peinteacyclic riachtanach dá ngníomhaíochtaí coisctheacha.

Ceann de na fadhbanna a thagann chun cinn le haois a mhéadú ná hyperpigmentation.luibh cistánachDá bhrí sin, tá cuardach leanúnach ar siúl le haghaidh oibreáin éadromaithe craicinn nó dílípéadaithe nua. Is féidir le forlíonadh tyrosinase gníomhú i gcoinne melanogenesis ". Mar a thaispeántar i bhFíor.4, léirigh sliocht meatánóil agus comhdhúile I agus 2 gníomhaíochtaí measartha mar choscóirí tyrosinase.

Sa taighde seo, úsáideadh docadh móilíneach freisin chun anailís a dhéanamh ar ghníomhaíochtaí ceangailteacha comhdhúile roghnaithe go tyrosinase agus elastase mar a spriocanna. Ba iad na struchtúir chriostail a úsáideadh ná 2Y9X, struchtúr criostail tyrosinase ó Agaricus bisporus le inhibitor tropolone; agus BHGP, struchtúr criostail de elastase pancreatic porcine casta le inhibitor peptidyl potent FR130180. Roghnaíodh an dá cheann toisc go bhfuarthas iad ón orgánach céanna a úsáideadh do mheasúnú in vitro an taighde seo. Tá na macramóilíní ceangailte freisin dá gcoscairí faoi seach ionas go bhféadfaí staid ghníomhach na bhfoirmíochtaí einsíme a fháil. Baineadh úsáid as na cocrystals mar lár an sprioc dhuála mhóilíneach chun na dóchúlachtaí nasctha cumaisc a laghdú ionas go n-éireoidh an próiseas scórála níos éifeachtaí.

Ón ndugáil mhóilíneach, fuarthas meánchleamhnas ceangailteach don dá chomhdhúil mar a thaispeántar i bhFíor 5 agus i bhFíor 6. Úsáidtear an tuar cleamhnais chun ligandí éagsúla a rangú ag smaoineamh ar staidear fuinnimh barr gach comhdhúil, taispeántar tuar ar staidear fuinnimh níos fearr le scóir chleamhnais cheangailteach níos ísle16. Rinneadh athdhuchtú ar thrópolóin an choscóra ainmnithe le meánchleamhnas ceangailteach de -7.41 kcal/mol. Ba iad na meán-chleamhnais cheangailteach de chomhdhúile 1 agus 2 le tyrosinase ná-7.84 kcal/mol agus-8.37 kcal/mol, faoi seach (Tábla 2). Tuar go raibh cleamhnas níos fearr ag an dá chomhdhúil ná an t-inhibitor.

Idir an dá linn, ba é -7.84 kcal/mol meánchleamhnas ceangailteach an elastaseredocking. Ba iad na meán-chleamhnachtaí ceangailteacha de chomhdhúile 1 agus 2 le elastase ná-7.58kcal/mol agus -8.06 kcal/mol, faoi seach. Cé gur léirigh an toradh go bhfuil cleamhnas níos ísle ag comhdhúil 1 ná an cocrystal, tá sé beagán difriúil (<0.5 kcal/mol)compared="" to="" the="" inhibitor="" used="" hence="" the="" scores="" may="" ovelrlap31.="" these="" scores="" showed="" that="" both="" compounds="" were="" predicted="" to="" have="" affinities="" toward="" the="" enzymes,="" which="" is="" in="" conjunction="" with="" the="" in="" vitro="" assay="">

Modhanna

Nósanna imeachta turgnamhacha ginearálta. Taifeadadh speictream 'H agus ' NMR ag 500 MHz ag baint úsáide as ionstraim JEOL JNM-ECZ500R/S1. Tomhaiseadh speictream infridhearg (IR) le FTIR, IRPrestige-21, Shimadzu. Rinneadh anailísí eile trí úsáid a bhaint as uirlis Waters UPLC-MIS XEVO G2-XS QTof, léitheoir Microplate VersaMax agus Léitheoir Microplate BioTek ELX800, leatháin alúmanaim sean-brataithe TLC-Silica gel 60 GF254 (Merck, Darmstadt, an Ghearmáin) , rinneadh crómatagrafaíocht colún (CC) ag baint úsáide as glóthach shilice 60 (Merck, Darmstadt, an Ghearmáin) le 70-230 mogalra le haghaidh crómatagrafaíocht oscailte agus 230-400 mogalra le haghaidh crómatagrafaíocht folúis. Ábhair phlandaí. Bailíodh duilleoga R. fraxinifolius ó limistéar plandála i Mount Pangrango, Iarthar Java ag airde 4,343 troigh, i mí na Nollag 2018. D'aithin luibheolaí (Dr. Joni Setijo) an t-eiseamal ag an Ionad Taighde Bitheolaíochta, Institiúid Indinéisis Eolaíochtaí, an Indinéis, le heiseamal uimhir 033/IPH.1.01/If.07.Fuair ​​bailiú ábhar planda cead ón bhfeirmeoir agus chloígh sé le rialacháin agus treoirlínte institiúideacha.

Eastóscadh agus leithlisiú. Baineadh úsáid as gaireas Soxhlet le tuaslagóir grádán (n-hexane, EtOAc, agus MeOH) chun duilleoga faoi seach a sholáthar, agus ansin galaithe le galú rothlach. agus oigheann bhfolús. Rinneadh an t-eastóscán meatánóil (291 g) agus an t-eastóscán aicéatáit eitile (65 g) a asaithe ar an nglóthach shilice agus rinneadh crómatagrafaíocht folúis-leachtach/VLC, ag eluting le grádán céim ar chéim EtOAc: MeOH (ó 1:0 go 0:1) go codáin a tháirgeadh do gach sliocht (Eal-Hall agus M1-Mill agus). Comhcheanglaíodh codáin chosúla a raibh imoibrithe dearfacha acu le himoibrithe sulfarach fanailin i TLC. Toradh codáin: Eal-3 (2.27 g);Ea4-6(8.47 g);Ea7-8(12.9 g);Ea9-11 (22.3 g); agus M1-3 (4.89 g);M4-5 (5.1 g);M6-7 (6.02g);M8(166.42g);M9(10.53g);M{{38 }}(2.9g).Cuireadh isteach na codáin go léir le haghaidh gníomhaíochta coscaire elastase, an tAth. Thug M8 an toradh is mó agus bhí gníomhaíocht chumhachtach aige. Fr. M8 a dheighilt tuilleadh as a chéile ag CC thar glóthach shilice (eluent CH2Cl2/MeOH le grádán céim ar chéim) agus íonaithe ag baint úsáide as colún Sephadex LH-20 (eluting le CHCl3-MeOH 100:10, v/v. Dhá chodán léirigh nádúr soladach agus criostalaíodh iad le clóraform agus meatánól chun dhá aonróg a fháil: cumaisc 1 (18 mg) agus: 2 (31 mg) Rinneadh measúnú ar íonacht na n-aonráití go léir le TLC déthoiseach agus léirshamhlú an láthair ag baint úsáide as 5 faoin gcéad sulfarach aigéad i meatánól, agus ansin téitear na plátaí ag 110 céim ar feadh 5 nóiméad.

Aithníodh agus tréithríodh na criostail trí úsáid a bhaint as crómatagrafaíocht leachtach-mhais-speictreascópacht (LCMS), LH, agus '3C saobhadh feabhsaithe trí aistriú polaraithe (DEPT) NMR, comhtháthú chandamach aonair heteronuclear (HSQC), comhghaol candamach iolrach heteronuclear (HMQC), agus il heteronuclear. comhghaol bannaí (HMBC).

Measúnacht ar chosc ar elastase. Rinneadh measúnú coiscthe leaisteáis mar a thuairiscítear roimhe seo le roinnt modhnuithe32. Go hachomair, i Nunc-96 plátaí tobair mhicritiriteora,20- μL slánchuid de 0.8-aonaid/mL PPE i maolán bonn céime Trizma (pH 8.0) ） a mheascadh le 20- samplaí μL, agus caolaíodh na meascáin ansin go 180 μL i maolán bonn céime Trizma. Réamhghortaíodh sleachta tástála le heinsím le haghaidh 15 nóiméad, agus cuireadh 20- slánchuidithe μL den tsubstráit N-succinyl-Ala-Ala-Ala-p-nitroanilide(A3PVN; 2.9mM) leis agus gor iad ar feadh 15 nóiméad eile. Rialú dearfach agus toibreacha bán a bhí aigéad oleanolic agus uisce, faoi seach. Rinneadh turgnaimh faoi thrí, agus socraíodh rátaí coisc de réir ionsú; ance ag 401 nm ag baint úsáide as léitheoir microplate VersaMax. Ríomhadh an cosc ​​céatadáin ag baint úsáide as an gcothromóid seo a leanas:

áit a bhfuil E an ionsúiteacht an imoibrithe einsíme, is é Eb ionsúchán na heinsíme bán, is é T ionsúchán an tsampla tástála, agus is é Tb ionsúchán an fholamh tástála. freisin socraíodh luachanna ó ghraf líneach de chosc ar chéatadán elastáis i gcoinne tiúchan(50,75,100,125,150 ug/mL). Measúnacht ar chosc Tyrosinase. Cinneadh cosc ​​Tyrosinase ag baint úsáide as an modh foirmithe DOPA-chrome mar a thuairiscítear roimhe seo le mionathruithe l3. Go hachomair, i 96-plátaí tobair, meascadh slánchodanna 20 μL de DMSO (rialú) nó comhdhúile tástála ag comhchruinnithe éagsúla le slánchodanna 40 μL de 30 U/mL tyrosinase muisiriún (Sigma Aldrich) agus 100- μL de 0.1-M maolán fosfáite (pH 6.8）. Réamh-ghéaraíodh iad ar feadh 10 nóiméad ag teocht an tseomra. Cuireadh tús le frithghníomhartha trí slánchodanna addirg4μL de 10mML-DOPA chuig gach tobar agus gor ag 37 céim ar feadh 20 nóiméad. Cinneadh gníomhaíocht Tyrosinase ansin trí ionsúchán a thomhas ag 475 nm. Baineadh úsáid as aigéad Kojic mar rialú dearfach. Rinneadh trialacha faoi thrí. Ríomhadh an céatadán de chosc ar tyrosinase ag baint úsáide as an gcothromóid seo a leanas:

áit arb é E ​​ionsúchán an imoibrithe einsíme, is é Eb ionsúchán na heinsíme bán, is é T ionsúiteacht an tsampla tástála, agus is é Tb ionsúchán an fholamh tástála. freisin socraíodh luachanna ó ghraf líneach de chosc ar an gcéad leaisteáis in aghaidh tiúchana (250,125,62.5,31.25,15.6 ug/mL).

Ámháil mhóilíneach. Sa taighde seo, rinneadh réamh-mheastachán ar ghníomhaíocht chógaseolaíoch in silico le dul chun cinn móilíneach ag baint úsáide as dochtúir. Rinneadh dúnáil mhóilíneach spriocdhírithe trí úsáid a bhaint as ligand cocriostalach mar lárionad an tsuímh ghníomhaigh. Baineadh úsáid as Struchtúr 2Y9X le haghaidh múchadh móilíneach tyrosinase le tropolone, inhibitor tyrosinase muisiriún, mar a chocrystal. Sainmhínítear lár an tsuímh dhugála mhóilíneach ag-10.032;-28.769 agus-43.467 mar thoisí X, Y, agus Z faoi seach. Scaradh slabhra A le húsáid agus baineadh an adamh Holmium as an struchtúr ag baint úsáide as UCSF Chimera.

Baineadh úsáid as struchtúr 3HGP, elastase muc sa taighde seo freisin.FR130180, toisc gur úsáideadh an cocrystal mar lárionad an tsuímh dála mhóilíneach. Ba iad na comhordanáidí ná 12.453,9.237, agus 1.199 do thoisí X,Y,Z, faoi seach. Rinneadh anailís ar an gcleamhnas ceangailteach ó na deich gcomhréir is fearr i ngach ríomh um chuaráil mhóilíneach.

Baintear an t-alt seo as Scientif Reports|(2021) 11:20452|https://doi.org/10.1038/s41598-021-99970-x