Teibí:Is é príomhchuspóir an staidéir seo meastachán a dhéanamh, trí anailís dhifreálach, ar ghníomhaíochtaí bitheolaíocha éagsúla ar ábhar iomlán feanólachta in eastóscáin alcólacha de chineálacha pailme trí dháta atá íogair nó frithsheasmhach in aghaidh Fusarium oxysporum. sp Albidinis. Anseo, bhí táirgí stilbene le cumas frithocsaídeach agus bithghníomhacha le feiceáil san éagsúlacht frithsheasmhach Taabdount (TAAR). Ina theannta sin, tá táirge suntasach sa chodán meatánólach den éagsúlacht pailme dáta TAAR-resistant, arna chinneadh ag LCMS/MS agus 1H, 13C NMR, a bhaineann leis an teaghlach hiodrocsa stilbenes, a thaispeánann cumas frithocsaídeach, bac ar ghníomhaíocht tyrosinase muisiriún, agus a ghníomhaíonn. agus cuireann sé éifeacht chosanta i bhfeidhm ar dhamáiste a tharchuirtear le fochlóirít i bpróitéasóim 20S d’aoischealla fibroblast deirmeach daonna. San iomlán, léiríonn na torthaí reatha gur cheart staidéar a dhéanamh ar hiodrocsatolúéin atá i láthair i dactylifera L. Fhionnuisce frithsheasmhach chun tuiscint a fháil ar an mbealach a bhféadfadh an stilbene cumas frith-aosaithe a fheidhmiú.

Is féidir le glycoside cistanche méadú freisin ar ghníomhaíocht SOD i bhfíocháin chroí agus ae, agus laghdaítear go mór an t-ábhar lipofuscin agus MDA i ngach fíocháin, ag scavening go héifeachtach fréamhacha ocsaigine imoibríocha éagsúla (OH-, H₂O₂, etc.) agus a chosaint i gcoinne damáiste DNA a dhéantar. ag OH-radacach. Tá cumas láidir scavenging fréamhacha saor in aisce ag gliocóisídí cistanche feinileatánóideach, cumas laghdaithe níos airde ná vitimín C, feabhas a chur ar ghníomhaíocht SOD i bhfionraí sperm, laghdaigh ábhar MDA, agus tá éifeacht chosanta áirithe acu ar fheidhm membrane sperm. Is féidir le polaisiúicrídí cistanche feabhas a chur ar ghníomhaíocht SOD agus GSH-Px in erythrocytes agus fíocháin scamhóg lucha senescent turgnamhacha de bharr D-galactós, chomh maith le hábhar MDA agus collagen sa scamhóg agus plasma a laghdú, agus ábhar elastin a mhéadú. éifeacht scavenging maith ar DPPH, fadú am hypoxia i lucha senescent, feabhas a chur ar ghníomhaíocht SOD i serum, agus moill a chur ar dhíghiniúint fiseolaíoch na scamhóg i lucha senescent turgnamhach Le díghiniúint moirfeolaíoch cheallacha, tá sé léirithe ag turgnaimh go bhfuil an cumas frithocsaídeach maith ag Cistanche. agus tá an cumas aige a bheith ina dhruga chun galair aosaithe craicinn a chosc agus a chóireáil. Ag an am céanna, tá cumas suntasach ag echinacoside i Cistanche fréamhacha saor in aisce DPPH a scavening agus tá an cumas aige speicis ocsaigine imoibríocha a scaveneáil agus cosc ​​a chur ar dhíghrádú collagen saor ó radacach saor in aisce, agus tá éifeacht mhaith deisiúcháin aige freisin ar damáiste anion radacach saor ó thymine.

Cliceáil ar rou cong rong benefits

【Le haghaidh tuilleadh eolais:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

Eochairfhocail:Fhionnuisce dactylifera L.; Fusarium oxysporum. sp Albidinis (FoA); gníomhaíochtaí frithocsaídeacha; gníomhaíocht frith-tyrosinase; gníomhachtú proteasome; anailís LC-MS/MS; díorthaigh stilbene

1. Réamhrá

Monacó ilbhliantúil ón teaghlach Arecaceae is ea pailme an dáta (Phoenix dactylifera L.). Tá an crann seo thar a bheith tábhachtach i saol na bpobal Sahára i ndeisceart agus in oirdheisceart Mharacó, go heacnamaíoch agus go sóisialta. Galar Bayoud, a thugann an fungas ithreach Fusarium oxysporum f. sp Albidinis (FoA) [1], tá laghdú suntasach tagtha ar an toradh palms dáta Mharacó le blianta beaga anuas [2]. Meastar go bhfuil FoA imithe ó dhá thrian d'oidhreacht Fhionnuisce Mharacó ach leanann sé ag scriosadh idir 4.5 faoin gcéad go 12 faoin gcéad de na cultivars tráchtála cáilíochta is airde de palms dáta [2]. Tá go leor iarrachtaí déanta chun an galar seo a chomhrac agus roinnt meicníochtaí cosanta pailme dáta a leathnú [3]. Leag na chéad staidéir ar mheicníochtaí cosanta féideartha an phailme dáta béim ar ról na gcomhdhúile feanólacha agus an cumas frithocsaídeach maidir le caoinfhulaingt ar FoA [4,5]. Ba é an anailís bithcheimiceach ar shaothraí cumaisc feanólacha fréamhacha frithsheasmhacha agus íogaire an chéad staidéar bithcheimiceach a léirigh leas meicníochtaí cosanta an phailme dáta. Go deimhin, tugann an litríocht le fios go bhfuil saothróga fréimhe frithsheasmhacha níos saibhre in 5-aigéad caffeoile shikimic agus a shuíomh isiméirí ná na saothróga fréimhe íogaire [5]. Léirigh na comhdhúile seo go héifeachtach gníomhaíocht antifungal féideartha in vitro i gcoinne FoA [6].

Is é an cumas iontach atá ag frithocsaídeoirí nádúrtha fréamhacha saor in aisce a scavening is cúis leis an méadú atá orthu i gcúrsaí bia agus staidéir leighis [7-10].

Mar shampla, is fachtóirí géaraithe iad speicis ocsaigine imoibríocha maidir le gortú ceallacha agus próisis aosaithe [11] agus mar sin tá baint acu le go leor galair. Mar thoradh air sin, féadfaidh móilíní frithocsaídeacha cabhrú le sláinte an duine trí ghalair degenerative a chosc agus iarmhairtí aosaithe a mhoilliú [12]. Sa staidéar seo, tá suim againn i gcumas frithocsaídeoirí gníomhachtú an 20S-proteasome a chur chun cinn agus cosaint a dhéanamh i gcoinne damáiste ocsaídiúcháin de. Cuireann an proteasome go deimhin le cothabháil hoiméastáis cheallacha trí phróiseas imréiteach na gcealla próitéiní damáiste a chumasú agus scrios rialaithe próitéiní gearrshaolacha [13]. Dá bhrí sin, d'fhéadfadh gur straitéis frith-aosaithe nua é an proteasome a ghníomhachtú le frithocsaídeoirí [14]. Ina theannta sin, tá sé beartaithe ag an obair seo iniúchadh a dhéanamh ar an bpoitéinseal a bhaineann le hábhar feanólach na bhfréamhacha frithsheasmhacha don FoA mar chomhdhúile gníomhacha bitheolaíocha.

2. Ábhair agus Modhanna

2.1. Sampla Gléasra

Rinneadh an staidéar do gach sampla le hábhar ó 10 shaothraí pailme dáta fásta (Phoenix dactylifera L.) a d’fhás ó dháileachtaí éillithe nó neamhéillithe atá suite ag an Palmaria Figuig, Oirdheisceart Maracó. Ritheann na príomhfhréamhacha (lena n-áirítear a gcuid fréamhacha aer-análaithe) ar trastomhas ó 0.5 go 2 cm de chineálacha so-ghabhálach, mar shampla charas Bouffegous ionfhabhtaithe (BI) nó na cinn neamhionfhabhtaithe (BNI). Ina theannta sin, bailíodh an cultivar FoA-resistant Taabdount (TAAR), agus baineadh úsáid as duilleoga dhá phlandaí íocshláinte go háitiúil mar chóireáil fiseolaíoch i gcoinne FoA. Ina theannta sin, bailíodh rósmary (R, Rosmarinus officinalis) agus pomegranate (G, Punica granatum L.) [15] freisin sa dáileacht neamhéillithe céanna trína ndearnadh anailís orthu agus inar úsáideadh iad mar rialú. Tógadh samplaí le linn dhá thréimhse den bhliain, i mí Mheán Fómhair agus go déanach i mí Eanáir (idir 2013 agus 2015), agus stóráiltear iad go heirméiteach ag teocht an tseomra. Toisc go bhfuarthas na samplaí ó palmer, tá siad deimhnithe go cuí (a aithint agus a aicmiú) ag Aire Talmhaíochta Maracó [16].

2.2. Ullmhú na Sleachta

Tar éis nigh go forleathan le huisce, triomaíodh na fréamhacha nó na duilleoga sa scáth, ansin talamh suas i cumascóir. I gcás gach sampla (BI, BNI, TAAR, R, agus G), cuireadh 10 mL meatánóil le 1 g d’ábhar tirim agus ansin fágadh é á chorraí ar feadh 4 h ag teocht an tseomra. Ansin, rinneadh iad a scagadh agus a ghalú ag 37 ◦C le gal rothlach. Cuireadh an t-úsc tirim i dtuaslagán meatánóil ag tiúchan deiridh de 10 mg/mL nó 50 mg/mL (a úsáideadh níos déanaí chun gníomhaíochtaí bitheolaíocha in vitro a mheas). Rinneadh trí eastóscadh neamhspleácha do gach sampla do na measúnachtaí gníomhaíochta bitheolaíocha.

2.3. Gníomhaíochtaí Bitheolaíochta

2.3.1. Ábhar Feanólach agus Gníomhaíochtaí Frithocsaídeacha

An nós imeachta atá leagtha amach ag Nacoulma et al. Cuireadh i bhfeidhm é chun feanólacht iomlán agus ábhar flavonoid iomlán gach sleachta a mheas [17], le hoiriúnú deiridh ar na méideanna ag 200 µL le húsáid ar léitheoir micreaphláta. Cinneadh an t-ionsúchtúchán ag 760 nm agus 510 nm, faoi seach, i gcoinne bán meatánóil. Cuairí caighdeánacha calabraithe d'aigéad galach (0–300 mg/L) (y=0.0083x móide 0.9106, r2=0.978) agus quercetin (0–100 mg/L) (y {{14) Úsáideadh }}.0008x móide 0.0597, r2=0.994), faoi seach.

Ag baint úsáide as an 1,1-défheinile{-2-bíicricrihiodrasil saor-radacach, rinneadh imscrúdú ar ghníomhaíocht scabhála frithocsaídeach (DPPH). Ag baint úsáide as oiriúnú deiridh toirteanna ag 300 µL agus 275 µL, faoi seach, chun léitheoir microplate a fhostú, rinneadh measúnú ar chumas na n-sleachta chun iarann ​​(III) a laghdú, mar a thuairiscíonn Nacoulma et al. [17]. I gcomparáid le bán meatánóil, tomhaiseadh an t-ionsúchtúchán ag 517 nm agus 700 nm, faoi seach. Ansin, ag baint úsáide as an gcothromóid seo a leanas, measadh gníomhaíocht scavenging radacach saor in aisce gach tuaslagáin mar chéatadán den chosc:

Fuarthas cuar caighdeánach calabraithe ag baint úsáide as aigéad ascorbach ({{0}}–100 mg/L) mar chaighdeán frithocsaídeach (y=0.0014x móide 0.0875, r2=0.998).

2.3.2. Measúnacht Cosc ar Fhás Héiliam FoAMyc

Le modhnú beag, tá an modh cur síos ag Neri et al. [18] chun a chinneadh an méid a chuir ceimiceáin íonacha bac ar fhás pór FoA. I gcultúr 7-lá d'aois de FoA cuireadh cúig mhilliméadar de dhioscaí miceilia ar miasa Petri le meán PDA arna fhorlíonadh leis na ceimiceáin íona atá liostaithe thuas ag 50, 75, agus 100 µg/mL. Goradh na plátaí ar feadh 5 lá ag 28 ◦C. Baineadh úsáid as meántrastomhas an choilíneachta arna thomhas ag dhá dhronuillinn chun cosc ​​a chur ar fhás pór FoA an FoA a mheas. Bhí trí thástáil i ngach cóireáil ag baint úsáide as trí shraith FoA éagsúla: FoA 41818, FoA 41814 (BCCM, an Bheilg), agus FoA Local (Palemeraie of Figuig, Maracó), chomh maith le rialú diúltach ag baint úsáide as meán nár cuireadh leis.

2.3.3. Inmharthanacht na gCeall agus Gníomhaíocht Próteasome 20S

Baineadh úsáid as gnáthfhibrblastaí deirmeacha daonna ó {{{0}}fhear bliana d'aois (NHDF) (Promocell, Heidelberg, an Ghearmáin) trínar cuireadh cealla ag dlús 1{00,{{3 }} cealla / ml i RPMI 10 faoin gcéad arna fhorlíonadh le 10 faoin gcéad (w / v) FBS, 1 faoin gcéad (w / v) L-glutamine, 100 aonad / mL peinicillin, agus 100 µg / mL streptomycin. Coinníodh iad i bplátaí 96-microwelle bán nó trédhearcacha ar feadh 24 h ag 37 ◦C i gorlann le timpeallacht humidithe 5 faoin gcéad CO2. Maidir leis an measúnú gníomhaíochta proteasome, chomh maith le meastóireacht a dhéanamh ar éifeachtaí cosanta ar dhamáiste de bharr fochlóiríte, déileáladh le cealla ansin le hábhair tástála (comhdhúil íon ó 5 go 50 µg/mL, rialú dearfach ag 0.5 agus/nó 1 µM, agus eastóscáin phlandaí meatánólacha ó 15 go 50 µg/mL) ar feadh 24 h le huasmhéid 0.3 faoin gcéad de DMSO sa tiúchan deiridh, ag an am céanna, gan athruithe, maidir leis an rialú diúltach. Mar gheall ar imscrúdú a dhéanamh ar éifeachtaí cosanta sliocht TAAR nó comhdhúile íon ar ghníomhaíocht proteasome bhí cealla fibroblast faoi réir 50 µM OCl - níos déanaí ar feadh 35 min (roghnaithe mar optamach, gan tocsaineacht cille, bac ocsaídeach ar riocht proteasome 20S) [19]. Críochnaíodh na céimeanna turgnamhacha seo a leanas le modheolaíocht an tsoláthraí (Proteasome-Glo Chymotrypsin-Cosúil le Cille-Bhunaithe, Promega Corporation, SAM): Ar an gcéad dul síos, turgnamh inmharthanachta cille comhthráthach a d'úsáid measúnuithe dathmhéadracha violet criostail nó MTT a rinneadh faoi choinníollacha comhchosúla. Baineadh úsáid as chun an measúnú cealla-bithluminescence seo a normalú. Taispeántar na diallais chaighdeánacha agus an mheánfhluaraiseacht i samplaí faoi thrí ó dhá thástáil ar leith (n=6). Rinneadh gach tomhas agus turgnamh neamhspleách (n=2) faoi dhó.

2.3.4. Tionchar Cosc ar Tyrosinase Muisiriún Gan Cille

Chun an éifeacht ar ghníomhaíocht na heinsíme a imscrúdú, rinneadh na hábhair tástála (frithocsaídeoirí íon nó sleachta plandaí meatánóil) a réamh-ghlais le heinsímí i maolán fosfáit ag teocht an tseomra. Go hachomair, cuireadh 300 mL de thuaslagán L-DOPA 5 mM ag maolán fosfáite 50 mM (pH 6.5) le nó gan ábhair tástála i dtiúchain éagsúla le a 96-micreaplate tobair mar aon le 100 ml de thuaslagán uiscí de tyrosinase muisiriún (20 aonad). Ar feadh 40 nóiméad, goradh an meascán measúnachta ag 25 ◦C. Tar éis gortha, rinneadh leibhéal táirgthe dopacróim an mheascáin imoibrithe a thomhas go speictrophotometric ag 492 nm [20]. Breacáladh cuar caighdeánach calabrúcháin le haigéad gaileach (0–1000 µg/mL) (y=−0.087 × móide 0.45; r2=0.97). Rinneadh gach tomhas agus turgnamh neamhspleách (n=2) faoi dhó.

2.4. Anailís, Leithlisiú, agus Nósanna Imeachta um Mhíniú Struchtúr

Baineadh an fhréamh talún (20 g) le 200 mL meatánóil, corraithe ar feadh 24 h ag teocht chomhthimpeallach, scagtha, lártheifneoirithe ag 10, 000 × g ar feadh 15 nóiméad, agus ansin galú ag 35 ◦C ag baint úsáide as rothlacha. gaireas galú bhfolús. Caolaíodh an sliocht amh le 20 ml d'uisce driogtha, ath-eastóscadh 2 × 20 mL d'aicéatáit eitile, agus ansin comhchruinníodh é ag baint úsáide as córas galú bhfolús rothlach ag 35 ◦C. Rinneadh an príomhtháirge a íonú le HPLC ullmhúcháin ag baint úsáide as colún Waters C18 (SymmetryPrep 150 × 19 mm, méid na gcáithníní 7 µm) leis na coinníollacha grádáin LC céanna a úsáideadh thuas agus ráta sreafa de 5 mL/nóim. Bhí an buaic ag RT idir 38.8 agus 40.8 min, a bailíodh idir 39.2 agus 40.2 min; Rinneadh an bailiúchán toirte iomlán a lyophilized chun 27 mg den chomhdhúil a thabhairt. D’aithin MS agus NMR 1H agus 13C é ansin.

Rinneadh anailísí le córas sraithe LC 1200 meartaifeach ag baint úsáide as brathadóir eagair dé-óid (DAD) a úsáidtear chun monatóireacht a dhéanamh ar speictream UV ag 320 nm (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, SAM). Rinneadh scaradh cumaisc ar cholún Beckman C18 (ULTRASPHERE 250 mm × 4.6 mm, méid na gcáithníní 5 µm) ag baint úsáide as grádán 47 min d'aicéatáit amóiniam 10 mM / 0.2 faoin gcéad d'aigéad formach in uisce (v/v), pH 2.9 ({{{}). 13}}tuaslagóir A), agus 30/70 aicéataitrile/meascán meatánóil (=tuaslagóir B). Ba é an ráta sreafa ná 0.8 mL/min, agus ardaíodh tuaslagóir B ó 5 go 35 faoin gcéad i 45 min agus athchothromaíodh é ar feadh 2 nóiméad. I sraith le DAD, baineadh úsáid as sraith ESI-QTOF 6520 (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, SAM) le haghaidh anailísí ardtaifigh ar MS agus spriocdhírithe tandem MS (MS/MS). Fuarthas speictrim ar mhodhanna éadála diúltacha agus ardtaifigh (4 GHz).

Taifeadadh speictream 1H NMR agus 13C NMR ar speictriméadar Bruker Avance 300 a oibríonn ag 300 MHz. Próiseáladh saorlobhálacha ionduchtaithe le sraith MestreNova 5.3.2 NMR ó MestreLab Research SL.

2.5. Anailís staitistiúil

Rinneadh na turgnaimh neamhspleácha go léir i dtrí chóip. Cuireadh na sonraí go léir i láthair mar na meánluachanna ± SD. Ag baint úsáide as leagan 6 den chlár GraphPad Prism, rinneadh anailís ar na torthaí ag baint úsáide as an tástáil neamhparaiméadrach Kruskal-Wallis mar aon le tástáil chomparáide iolrach Dunn. Meastar luachanna p-0.05 agus níos ísle a bheith suntasach.

3. Torthaí agus Plé

3.1. Ábhar Feanólacha agus Flavonoid Iomlán na Sleachta meatánólacha

Mar gheall ar a n-airíonna redox, fuarthas amach go bhfuil éagsúlacht de thionchair bhitheolaíocha ag comhdhúile feanólacha plandaí, lena n-áirítear gníomhaíocht frithocsaídeach [21]. Léiríonn Tábla 1 cion feanólach iomlán na n-eastóscáin fhréamh meatánóil (500 µg/mL) de chineálacha so-ghabhálach de ghagras Bouffegous ionfhabhtaithe (BI) agus neamhionfhabhtaithe (BNI) ag an FoA nó frithsheasmhach mar Taabdount (TAAR). Bhí a dtiúchan éagsúil ó 171 ± 14 go 253 ± 47 mg d'aigéad gallach eq./g. Fuarthas an méid is airde de na comhdhúile seo sa éagsúlacht BNI, agus tháinig an tiúchan is ísle ó fhréamhshliocht meatánóil BI. Bhí éagsúlacht idir líon na flavonoids sna sleachta céanna seo (Tábla 1)) ó 240 ± 25 go 406 ± 66 mg de quercetin eq./g, agus, arís eile, cuireadh an méid is airde i leith an éagsúlacht BNI. Tá caillteanas de thart ar 1/3 de líon iomlán polyphenols agus flavonoids idir cineálacha neamhionfhabhtaithe (BNI) agus cineálacha ionfhabhtaithe (BI) nó resistant (TAAR) don FoA. Dá bhrí sin, is fiú a thabhairt faoi deara conas a d'fhéadfadh tionchar a bheith ag caillteanas comhdhúile, a thuairiscítear mar ríthábhachtach do chumas frithocsaídeach an ghléasra, ar ghníomhaíochtaí bitheolaíocha a bhfuil suim againn iontu.

3.2. Acmhainneacht Frithocsaídeach de Sleachta meatánóil

Is modh é gníomhaíocht scavenging radacach DPPH a úsáidtear go forleathan chun gníomhaíocht frithocsaídeach sleachta plandaí a scagadh [22]. Cinneann an tástáil seo an bhfuil ceimiceáin frithocsaídeacha a fhaightear sna sleachta in ann an speiceas radacach cobhsaí DPPH a scavening. Nochtann na sonraí turgnamhacha (Fíor 1) gur dócha go mbeidh an éifeacht ag na sleachta meatánóil go léir (ag 100 nó 500 µg/mL) fréamhacha saor in aisce a scavening leis na gníomhaíochtaí scavening DPPH is airde a breathnaíodh i bhfréamhacha TAAR (87.0 faoin gcéad den chosc ar DPPH). Dealraíonn sé nach bhfuil gníomhaíocht frithocsaídeach ag brath ar láithreacht méid iomlán na gcomhdhúile polyphenolic nó flavonoid. Mar sin féin, d'fhéadfadh gníomhaíocht níos fearr na n-eastóscán meatánóil fréimhe TAAR bheith mar gheall ar níos mó comhpháirteanna deonaithe hidrigine atá sa sliocht.

Déantar an chumhacht laghdaitheora a mheas trí chumas an eastóscáin meatánóil an Fe (III) a athrú go Fe (II). Féadfar an cumas seo chun Fe (III) a laghdú a chur i leith líon agus suíomh na ngrúpaí hiodrocsaile atá i láthair i gcomhdhúile feanólacha agus a gcumas hidrigin a bhronnadh [23]. Léirigh Tábla 2 gníomhaíochtaí laghdaithe eastóscáin meatánóil dár samplaí plandaí i gcomparáid le haigéad ascorbic mar chaighdeán. Tá laghduithe arda (95 ± 1 mg d'aigéad ascorbic eq./g) i sleachta meatánóil de fhréamhacha TAAR, agus fuarthas an t-ábhar is ísle ó eastóscáin fréamhacha BNI (27 ± 2 mg d'aigéad ascorbic eq./g).

Rinneadh anailís aischéimniúcháin chun na torthaí a fuarthas a chomhghaolú (comhéifeacht comhghaoil ​​(R)). Fuarthas comhghaolta líneacha suntasacha idir ábhar iomlán feanólach agus flavonoid (R {{0}}.849, p < 0.05) agus idir DPPH agus measúnú cumhachta laghdaithe (R=0. 816, p < 0.05), ach ní raibh aon cheann idir na hábhair feanólacha nó flavonoid de na sleachta meatánólacha agus a ngníomhaíochtaí frithocsaídeacha. Mar fhocal scoir, léirigh na sleachta meatánóil go léir gníomhaíochtaí frithocsaídeacha suntasacha i gcoinne gníomhaíocht scavenging radacach DPPH agus measúnú cumhachta a laghdú, ach is cosúil nach mbaineann na gníomhaíochtaí frithocsaídeacha seo le hábhar iomlán feanólach nó flavonoid. Dá bhrí sin, tugann na torthaí seo le tuiscint gur dócha go bhfuil cineál ceimiceach ar leith, seachas cainníocht na gcomhdhúile feanólacha nó flavonoid a fhaightear inár n-sleachta éagsúla, freagrach as gníomhaíocht frithocsaídeach na n-sleachta plandaí atá faoi athbhreithniú. D'fhéadfadh tionchar a bheith ag roinnt comhpháirteanna feanólacha a ndearnadh cur síos orthu roimhe seo agus ar daoine aonair an-ghníomhacha iad freisin ar ghníomhaíocht frithocsaídeach sleachta plandaí: Neamhspleách ar a dtiúchan, féadfaidh na comhdhúile feanólacha a fhaightear i bhfíon dearg d'aois airíonna frithradacach éagsúla a bhaineann lena ngnéithe struchtúracha a thaispeáint [ 24].

Léiríonn an éagsúlacht TAAR FoA-resistant an ghníomhaíocht frithocsaídeach is airde i measc na gcineálacha éagsúla palms dáta. Ag tagairt don litríocht, féadfar forbairt friotaíochta sna palms dáta áirithe seo a chur i leith méadú ar an méid isiméirí suímh éagsúla d'aigéad shikimic caffeoyl [5].

3.3. Gníomhaíocht Muisiriún Tyrosinase

Déanann gníomhaíocht diphenolase tyrosinase muisiriún catalú ocsaídiú dhá dhíorthaigh dopaquinone as a dtiocfaidh sintéis melanin. Léiríonn na torthaí a chuirtear i láthair i dTábla 3 cumas na gcomhdhúile atá i láthair i sleachta meatánóil de TAAR, BI, agus BNI cur isteach ar hiodrocsailiú l-DOPA trí ghníomhaíocht tyrosinase muisiriún a chosc. Ina theannta sin, léiríonn na torthaí seo go bhfuil sliocht meatánólach TAAR níos gníomhaí go staitistiúil ná sleachta BI (p < 0.05) agus BNI (p < 0.05) ar ghníomhaíocht tyrosinase muisiriún. Mar sin, is cosúil go leanann cumas na n-sleachta fréamhacha pailme dáta bac a chur ar ghníomhaíocht tyrosinase an treocht chéanna leis na cumais frithocsaídeacha.

Baineann tyrosinases go príomha le lí an chraiceann, na súl agus na gruaige. Go deimhin, is einsímí melanogenesis iad tyrosinases a bhfuil baint acu leis na chéad chéimeanna de biosintéis melanin, agus tá baint ag melanin le cosaint i gcoinne radaíochta ultraivialait (UV), gréine, nó gáma, so-ghabhálacht cheallacha laghdaithe, agus friotaíocht balla cille i gcoinne einsímí hidrolytic [20]. Os a choinne sin, d'fhéadfadh ról a bheith ag ró-tháirgeadh melanin in aimhrialtachtaí craiceann nó galair níos tromchúisí cosúil le hailse (m.sh., Melanoma), agus d'fhéadfadh galar neurodegenerative a bheith mar thoradh ar bharrachas dopaquinone (m.sh., galar Parkinson) [20,25]. Thairis sin, tuairiscíodh go bhfuil melanogenesis sárocsaíd hidrigine agus ROS eile a tháirgeadh, ag nochtadh melanocytes daonna do leibhéil arda strus ocsaídiúcháin [26]. Chuir roinnt comhdhúile frithocsaídeacha nádúrtha (feanólaic, flavonoids, agus daoine eile) a fuarthas ó phlandaí bac ar ghníomhaíocht feanóláis tyrosinase [27,28]. Anseo, tá an chuma ar an sliocht TAAR go bhfuil comhdhúil(í) ann a d’fhéadfadh aosú craicinn agus meileanogenesis a chosc.

3.4. Gníomhaíocht Próitéatóime de Sliocht Palm Dáta Fréamh meatánólach

Tuairiscíodh go mbíonn lamháltas méadaithe i leith strus ocsaídiúcháin mar thoradh ar leibhéil ardaithe de phróteasóim 2{0S [13]. Dá bhrí sin, rinneadh imscrúdú ar rialáil ghníomhaíocht proteasome trí fhréamhshleachta de shaothraí BI, BNI, agus TAAR. Tá baint ag an ngníomhaíocht tomhaiste proteasome 20S le gníomhaíocht chymotrypsin-mhaith (CT-L) i gcealla aois NHDF (féach Ábhair agus Modhanna). Mar a léirítear i bhFíor 2A, léirigh cealla cóireáilte le 50 µg/mL de eastóscáin meatánóil ar feadh 24 h gníomhachtú suntasach ar an CT-L le haghaidh eastóscáin BI agus TAAR agus cosc ​​ar BNI gan níos mó ná 30 faoin gcéad de thocsaineacht cille a ghiniúint. Léirigh sliocht fréimhe TAAR gníomhachtú próitéamómach i gcomparáid le 1µM d’aigéad lipoic (Ct móide ) (212 faoin gcéad agus 248 faoin gcéad, faoi seach). Is coimpléasc próitéináise sorcóireach é an proteasome ina bhfuil croí de cheithre fháinne cruachta atá freagrach as deireadh a chur le próitéiní próitéamacha díghrádaithe mínormálta (26S) agus próitéiní damáiste ocsaídiúcháin (20S croí-choimpléasc próitéalaíocha) (Ciechanover, 1998). Mar a chuirtear i láthair i saothar Hwang [29], d'fhéadfadh go gcuirfeadh mífheidhmiú proteasome le dul in aois craiceann an duine. Go deimhin, léiríodh go bhfuil laghdú tagtha ar ghníomhaíocht proteasome mar aon le leibhéil próitéine i bhfo-aonaid proteasome i gcealla seanaoise aosaithe agus macasamhail. Tugann an fhíric go bhfuil an dá próitéiní ceallacha ocsaídithe agus / nó damáiste carntha níos minice sna cealla le fios go bhfuil an cosán ubiquitin-proteasome de díghrádú próitéine bainteach le próisis aosaithe intreach. Léiríonn Fíoracha 2B, agus C an cumas atá ag eastóscán meatánóil TAAR cealla d’aois NHDF a chosaint ó chosc ar ghníomhaíocht proteasome 20S ag OCl− oxidant. Go deimhin, cuireann OCl - oxidant bac ar ghníomhaíocht proteasome na gceall rialaithe (Ct) ag 50 faoin gcéad, agus ní mhainníonn an gníomhaí 20S-proteasome is airde (aigéad lipoic ag 1 µM, Ct móide ) le níos mó ná 50 faoin gcéad den ghníomhaíocht choisc an cosc ​​a aisiompú. den ghníomhaíocht próteasome 20S ag an OCl−, ach is cosúil go n-aisiompaíonn na tiúchain eile a tástáladh (15, 50, agus 75 µg/ml) de eastóscán meatánólach TAAR an cosc ​​seo (0 go 19 faoin gcéad den chosc). Tugann na torthaí seo le tuiscint go bhféadfadh móilíní a bheith i sleachta fréimhe TAAR a d’fhéadfadh moill a chur ar aosú craiceann ní hamháin trí ghníomhaíocht proteasome a threisiú ach freisin trí dhul i ngleic le héifeachtaí coisctheacha oibreán ocsaídeach. I measc na móilíní seo, is dóichí go bhfuil aigéad shikimic caffeoyl i láthair, chomh maith le comhdhúile eile. Ina theannta sin, rinneadh anailísí LC-DAD-MS (MS) agus NMR chun príomh-chomhdhúile na n-eastóscanna a shainaithint agus pléitear leis seo iad sa chéad chuid eile.

3.5. Anailísí Speictriméadracha

3.5.1. Anailís LC-DAD-MS ar Sleachta meatánóil

Níor léirigh an staidéar comparáideach ar fhréamhacha pailme dáta aon difríochtaí cáilíochtúla, ach, ina ionad sin, tugadh faoi deara go pointe áirithe difríochtaí leathchainníochtúla (i chromatograms DAD agus MS) idir na cultivars (Fíor 3A, D). Go deimhin, ní cheadaíonn na torthaí atá ann faoi láthair nasc idir friotaíocht na bosa dáta agus méadú ar an méid isiméirí suímh éagsúla d'aigéad shikimic caffeoile toisc go léiríonn an saothrán frithsheasmhach (TAAR) an raidhse coibhneasta is ísle de na comhdhúile seo (Fíor 3C). D'aithin a speictream MS/MS gach ceann de na trí isiméir shuímh d'aigéad caffeoile shikimic (m/z=335.0768 le hearráid 1.2 ppm) lena speictream MS/MS (Fíor S6) le blúire ag m/z 179.0340, a fhreagraíonn do bhlúire d'aigéad caiféin A (C9H7O4) agus blúire ag m/z 135.0443, a fhreagraíonn do dhícharbocsailiú aigéad caiféin (C8H7O2). Mar sin féin, is cosúil go bhfuil idirdhealú soiléir idir comhdhúil eile nach gcomhfhreagraíonn d’aigéid shikimiceacha caffeoile (Fíor 3C) agus a bhfuil a n-am coinneála 29 min le m/z=259.0607 (nó 373.0543 i gcás adduct TFA), idir shaothraithe éagsúla. (Fíor 3D). D'fhéadfadh an difríocht i carnadh an chomhdhúil seo i bhfréamhacha cultivars íogair agus resistant (0.135 faoin gcéad ), le cóimheas timpeall 1:35 (ó m/z=259.06, sonraí MS), míniú a thabhairt ar na bitheolaíocha feiceálach. gníomhaíochtaí a breathnaíodh le haghaidh sliocht meatánólach na fréimhe seo.

【Le haghaidh tuilleadh eolais:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】