Laghdaíonn Sliocht Meatánólach Spionáiste an Díghiniúint Reitineach i bhFrancaigh Diaibéiteacha

Déan teagmháil le do thoiloscar.xiao@wecistanche.comle haghaidh tuilleadh eolais

Coimriú:Tá sé molta go gcuireann sliocht meatánóil spionáiste (SME) bac ar fhoirmiú táirgí deiridh glycation chun cinn (AGEs), a mhéadaítear le linn dul chun cinn diaibéiteas, agus mar sin tá sé tábhachtach go mbeadh a fhios an bhfuil éifeachtaí tairbheacha ag FBManna ar an reitine diaibéitis. Sa staidéar seo, léirigh measúnachtaí in vitro go gcuireann GBM cosc ​​ar ghlication, foirmiú grúpa carbónil, agus ídiú grúpa laghdaithe-thiol in albaimin séiream buaibheach gortha siúcraí laghdaithe nó meitilglyoxal. Rinneadh staidéar freisin (n=10) ar an éifeacht FBM i reitine na bhfrancaigh diaibéitis streptozotocin-spreagtha (STZ2) sa ghrúpa normoglycemic, STZ, STZ francaigh cóireáilte le SME, agus francaigh STZ cóireáilte le aminoguanidine (tagairt frith-AGEs). grúpa) le linn 12 seachtaine. Rinneadh an reitine a roinn agus a imdhíonadh le haghaidh Ne-carboxymethyl lysine (CML), RAGE receptor, NADPH-Nox4, sintase ocsaíd nítreach induchtaithe (iNOS), 3-nítrityrosine (NT), NF-kB núicléach, fachtóir fáis endothelial soithíoch ( VEGF), próitéin aigéadach fibrillary glial (GFAP), próitéin S100B, agus measúnacht TUNEL. Socraíodh sárocsaídiú lipid sa reitine iomlán ag leibhéil malondialdehyde (MDA). Léirigh na torthaí, sa reitine diaibéitis, gur laghdaigh SME comhlonnú CML-RAGE, strus ocsaídiúcháin (NOX4, iNOS, NT, MDA), athlasadh (NF-B, VEGF, S10B, GFAP), agus apoptosis (lch.<0.05).therefore, smes="" could="" attenuate="" retinal="" degeneration="" by="" inhibiting="" cml-rage="">

Eochairfhocail:spionáiste; reitineapaite diaibéiteach; táirgí deiridh glycation chun cinn; strus ocsaídiúcháin; athlasadh; RAGE; carboxymethyl L-Lisine

Cliceáil anseo le do thoil chun tuilleadh eolais a fháil

1. Réamhrá

Tá baint ag aistí bia plandaí-bhunaithe le riosca níos ísle maidir le galair ainsealacha a fhorbairt mar raimhre, diaibéiteas cineál 2, agus galar corónach croí. Is glasraí duilleacha inite é an spionáiste (Spinacia oleracea L.) a chaitear ar fud an domhain mar gheall ar mhéid suntasach snáithíní, vitimíní agus mianraí a sholáthar [1,2]. Aithníodh go leor dá fíteiceimiceach, lena n-áirítear clóraifill, carotenoidí (lúitéin agus zeaxanthin) [3], agus comhdhúile feanólacha (flavones, flavonoids, cúmarins) [4-8] (féach forlíonadh 1). Tuairiscíodh go bhfuil spionáiste, nuair a ionghabháil mar bhia, sliocht intuaslagtha in uisce, nó i bhfoirm reo-triomaithe, agus a thylakoids airíonna frith-ailse, frith-otracht, agus hypoglycemic [9]. Tá éifeacht frith-athlastach na spionáiste léirithe i múnlaí endotoxemia ainmhithe, ainmhithe otrach, agus daoine sláintiúla [9]. Rinneadh staidéar ar a éifeacht frithocsaídeach i gcealla carcinoma próstatach daonna, samhlacha ainmhithe le murtall, lucha ionradaithe UV, agus adenocarcinoma an próstatach luch transgenic [9,10]. Rinneadh staidéar ar éifeachtaí frith-glycation agus frith-athlastacha sliocht meatánóil spionáiste (SME) i múnla diaibéiteas spreagtha glúcóis i zebrafish agus necróis miócairdiach spreagtha isoproterenol i bhfrancaigh, faoi seach [11,12]. Laghdaigh SME na leibhéil haemaglóibin glycosylated agus fruchtosamine, lena n-áirítear na leibhéil próitéin glycated, trí ghníomhaíocht aldose reductase a laghdú sa lionsa ocular [11]. Tugann na torthaí thuas le fios go bhféadfadh tionchar coisctheach a bheith ag FBManna ar dhul chun cinn aimhréidh diaibéiteas mellitus amhail reitineapaite diaibéiteach (DR).

De réir a chéile, cailleann DR géire radhairc nó daille a bhaineann le hathlasadh, le strus ocsaídiúcháin, agus le carnadh táirgí deiridh glycation ardleibhéil (AGEanna)[13,14]. Cothaíonn na AGEanna trasnascadh próitéine, athraíonn struchtúr/feidhm agus a láimhdeachas/imréiteach. Is féidir AGEanna a tháirgeadh trí imoibriú neamh-einsímeach idir an glúcós le grúpa aimín saor próitéiní, rud a fhoirmíonn idirmheánacha inchúlaithe amhail bunanna Schiff agus táirgí Amadori (fructosamine)[15]. I measc na meicníochtaí eile chun AGEanna a fhoirmiú tá an cosán “strus carbóinile”, áit a gcruthaíonn ocsaídiú siúcraí agus lipidí comhdhúile décharbóinile idirmheánacha amhail glyoxal agus methylglyoxal (MGO), as a dtagann foirmiú AGEanna mar an N:-carboxymethyl lysine(CML)[ 16]. Is féidir le leibhéil mhéadaithe CML i serum agus vitreous a bheith ina marcóir bithcheimiceach le haghaidh cuma agus dul chun cinn DR [17,18]. Sa reitine, de bharr gníomhachtú gabhdóra RAGE ag AGEs (AGEs-RAGE) is cúis le ró-eisiúint próitéine aigéadach fibrillary glial (GFAP) agus fachtóirí pro-athlastacha, arna rialú ag an bhfachtóir nu-soiléir kappa-light-slabhra-feabhsaithe de B gníomhachtaithe cealla(NF-kB)[19]. Rialaíonn NF-kB léiriú RAGE go dearfach trí ghníomhú mar mheicníocht aiseolais dhearfach [20].cad é cisteánAr an láimh eile, d'fhéadfadh tiúchan ard de S100B, próitéin atá ceangailteach le cailciam, NF-kB a ghníomhachtú freisin, rud a d'fhéadfadh neuroinflammation agus gníomhachtú cille glial [21]. Spreagann overexpression S100B in astrocytes éifeachtaí néarthocsaineacha arna léiriú ag astrogliosis reitineach [22].

Is féidir le Cistanche frith-aging

Forbraíodh go turgnamhach straitéisí chun damáiste reitineach a chosc. Bhí baint ag roinnt fíteasiceimiceach spionáiste atá scoite amach ó phlandaí eile le cosc ​​ar AGEanna agus strus ocsaídiúcháin [8,23-26]. Chosain Lutein, astaxanthin, agus kaempferol cealla epithelial lí reitineacha daonna-díorthaithe (ARPE-19) ó dhamáiste trína n-airíonna frith-AGEanna, frithocsaídeacha agus frith-apoptóis [26-28]. Tugann na torthaí seo le fios go bhfuil ról ábhartha ag fíteasiceimiceacha spionáiste chun díghiniúint reitineach a chosc mar DR. Tá straitéis eile ag baint úsáide as aminoguanidine (AG) mar choscóir potent ar glycation agus gníomhaíocht iNOS, ag maolú ar charnadh CML agus ar fhoirmiú réamhtheachtaithe décharbóiniceacha imoibríocha i bhfrancaigh [29]. Mar sin féin, i dtriail chliniciúil multicentric agus randamach le 690 othar diaibéitis, níor bunaíodh an éifeacht tairbhiúil go soiléir [30].

Is beag staidéar a rinneadh ar na hathruithe ar dhíghiniúint reitineach faoi choinníollacha hipearglycemic. Dá bhrí sin, tá sé suimiúil go mbeadh a fhios má chosnaíonn SME sraitheanna reitineacha ó dhamáiste a bhaineann lena n-airíonna frith-AGEanna, frithocsaídeacha, agus frith-athlastacha i reitine francaigh diaibéitis streptozotocin-spreagtha.

2. Ábhair agus Modhanna

2.1.Sliocht meatánólach de spionáiste (SME) a ​​ullmhú

Baineadh duilleoga úra spionáiste (S.oleracea L.) i séasúr an fhómhair-gheimhridh i réimse talmhaíochta i gCúige Puebla, Meicsiceo, agus d'aithin luibheolaí iad in luibhriam na hInstitiúide Polaiteicnice Náisiúnta (IPN, Cathair Mheicsiceo,). Meicsiceo). Taisceadh eiseamal dearbhán uimhir 4532 i luibhiam Scoil Náisiúnta na nEolaíochtaí Bitheolaíochta IPN.

Bhí na duilleoga díhiodráitithe agus meilte go mín. Maolaíodh na duilleoga triomaithe le meatánól ag teocht an tseomra, scagadh trí scagairí ceallalóis(Whatman, Maidstone, UK), agus triomaíodh iad ag baint úsáide as folúsghalaitheoir rothlach(BUCHI Rotavapor R{{0}}, an Eilvéis) ag 45 céim go dtí tabhair guma glas (95.0g/kg duilleoga tirime).Ciste frith-aosaitheStóráladh an GBM sa dorchadas ag 4 céim go dtí go n-úsáidfí é. I gcás gach measúnachta, rinneadh an sliocht a athdhéanamh in uisce driogtha[11].

2.2.Measúnachtaí In Vitro ar Ghníomhaíocht Fhrith-ghleacaithe GBM

2.2.1. Foirmiú Ard-Tháirgí Deiridh Glication a Dhíorthú ó Albam Séiream Bólachta (BSA-AGEanna)

Rinneadh an measúnú BSA-AGEs, mar a thuairiscítear roimhe seo [31]. Go hachomair, cuireadh 10 mg/mL BSA(codán V; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, SAM)i glúcóis D 0.5 M, D-fhruchtós {{12 }}.5 M, nó meitilglyoxal 2.5 mM, agus déanta i dtuaslagán 0.1 M PBS (pH 7.4) agus 0.02 faoin gcéad azide sóidiam. Cuireadh tiúchan SME (5, 10,25, 50, 100, agus 200 mg/mL) le gach meascán agus ansin goradh iad ag 37 céim ar feadh 4 seachtaine. Ina dhiaidh sin, baineadh na siúcraí neamh-imoibrithe trí scagdhealú in aghaidh uisce driogtha ar feadh dhá lá ag 4 céim . Socraíodh leibhéil BSA-AGE ag speictreafótaiméadracht fhluaraiseachta (Ex370/Em 440 nm; samhail LS 30, PerkinElmer LAS Ltd., Buckinghamshire, RA)[32]. Ba rialú dearfach é glycation próitéin BSA trí shiúcraí a laghdú agus MGO (BSA glycated), agus baineadh úsáid as gor BSA glycated le aminoguanidine (1 mg / mL) mar an rialú diúltach (BSA glycated-AG). Rinneadh na measúnachtaí i dtrí chóip.

2.2.2. Measúnacht Fructosamine

Socraíodh an leibhéal fructosamine ag an measúnacht nitro gorm tetrazolium (NBT) [33], atá bunaithe ar chumas fructosamine chun NBT a laghdú, ag foirmiú formazan, táirge deiridh daite faoi choinníollacha alcaileach. Cuireadh deich micrilítear de cheachtar de na rialtáin nó de thiúchan GBM glycaithe BSA-ghlais (BSA-SME) le 90 μL de NBT ag 2.5 mM, ullmhaithe i maolán carbónáit (0.1 M; pH 10.3); goradh iad go léir ag 37 céim C ar feadh 30 nóiméad. Tomhaiseadh an ionsúchán ag 530 nm. Ríomhadh tiúchain fruchtosaimín (nmol/mg) de réir cuar caighdeánach formazan.

2.2.3. Foirmiú Grúpaí Carbóinile a Chinneadh agus Ídiú Grúpaí Thiol i BSA-AGEanna

Tomhaiseadh tiúchan grúpa carbónile i BSA-SME agus rialaíonn sé samplaí, de réir Levine et al. [34]. Cuireadh tuaslagán 2,4-dinitrophenylhydrazine (DNPH; 10 mM) i 400 μL de 2.5 M HCl le 100 μL gach sampla agus gor sa dorchadas ar feadh 60 nóiméad ag teocht an tseomra.sochair cisteancheAnsin, cuireadh 500 μL d'aigéad tríchlóraaicéiteach (20 faoin gcéad w/v) leis agus coinníodh ar oighear é ar feadh 5 nóiméad. Rinneadh na samplaí a lártheifneoiriú ag 420 rpm ar feadh 15 nóiméad, agus nigh an millín próitéine trí huaire le haicéatáit eitile/eatánól(1:1 v/v). Ina dhiaidh sin, cuireadh na samplaí ar fionraí i hidreaclóiríd guanidine 250μL go 6 M. Ríomhadh an tiúchan de ghrúpaí carbóinile (próitéin nmol/mg) trí speictrophotiméadracht ag ionsúiteacht 370 nm (EON, BioTek Instruments, Inc., Winooski, VT, SAM) ag baint úsáide as an comhéifeacht ionsúcháin DNPH (22,000 M-1 cm-1).

De réir mhodh Ellman, rinneadh ídiú grúpa thiol i samplaí BSA-SME agus rialaithe a chinneadh. Go hachomair, 10 μL de 5,5'-Disulfanediylbis (2-aigéad nítribenzoic) (DNTB; 10 mM, ullmhaithe i PBS) le 50 μL de shamplaí glycated gor ar feadh 15 nóiméad ag teocht an tseomra, ansin tomhaiseadh an ionsúchán ag 410 nm. Ríomhadh leibhéal na ngrúpaí thiol saor in aisce ag baint úsáide as cuar caighdeánach L-cysteine ​​（0.4-11 μM） agus arna shloinneadh i próitéin nmol/mg [34].

2.3. Tionchar GBM ar Reitine na bhFrancach Diaibéitis 2.3.1.Ionduchtú Diaibéiteas sna Francaigh

Baineadh úsáid as francaigh fireanna Wistar ar mheá 250 ± 10 gr(N=40) a bhí troscadh ar feadh 8 h. Riaradh dáileog intraperitoneal de streptozotocin (60 mg/kg) i maolán citrate (10 mM, pH 4.5)(Sigma-Aldrich, Inc., St. Louis, MO, SAM) [35]. Trí lá ina dhiaidh sin, tomhaiseadh an leibhéal glúcóis (glúcóiméadar; ACCU-CHEK gníomhach; Roche Diagnostics, GmbH, Mannheim, an Ghearmáin) trí bhraoin de shampla fola a bhailiú ón eireaball. Earcaíodh ainmhithe le leibhéil glycemic níos airde ná 350mg/dL don staidéar. Tomhaiseadh an glúcós san fhuil go seachtainiúil ar feadh 12 sheachtain.

2.3.2. Dearadh Turgnamhach

Roinneadh na francaigh diaibéitis streptozotocin-spreagtha (STZ) go randamach sna grúpaí seo a leanas (n =10): STZ cóireáilte intragastrach le 2 mL uisce óil (STZ); cóireáilte le STZ le SME ag 400 mg/kg (STZ-SME); francaigh normoglycemic (NG); agus STZ cóireáilte le 50 mg/kg aminoguanidine (AG; Sigma-Aldrich, Inc.)(STZ-AG). Baineadh úsáid as STZ-AG mar ghrúpa tagartha frith-AOIS. Riaradh na dáileoga sannta gach 24 h (9:00 am) ar feadh 12 sheachtain. Rinneadh monatóireacht seachtainiúil ar an leibhéal glycemic i ngach grúpa. Bhí réimeas dáileog SME ag 400 mg/kg bunaithe ar na nithe seo a leanas: Faightear 7 g de GBM ó 100g de spionáiste úr (níl sonraí ar taispeáint). Tá an méid seo comhionann le tomhaltas laethúil duine ar an meán de 70 kg i réim bia Mheiriceá [36], a fhreagraíonn do 100 mg de sliocht / kg de mheáchan coirp.Sliocht Cistanche Frith RadaíochtaAr an láimh eile, mar gheall ar an difríocht i meitibileacht luathaithe na francaigh, moltar tomhaltas aon sliocht nádúrtha a mhéadú suas le 6.4 uair le haghaidh staidéir chomparáide le daoine [37]. Bhí an dáileog de 400 mg/kg a d’úsáideamar bunaithe go príomha ar na torthaí a fuarthas i múnla de neacróis miócairdiach a tharlódh i bhfrancaigh Wistar, a léirigh go bhfuil éifeacht frith-athlastach SME níos suntasaí ag 300 mg/kg [12].

2.3.3. Meastóireachtaí Histeolaíochta agus Imdhíon-cheimice

Socraíodh súile enucleated i formalin neodrach agus ansin díhiodráitíodh iad in alcól grádaithe agus leabaithe i pairifín. Suiteáladh codanna histeolaíocha de 2 μm ar shleamhnáin leictreamhuirearaithe, díothaíodh iad, agus athhiodráitíodh iad suas go dtí réiteach aisghabhála antaigin (K035; 10 × citrate Maolán, pH6; Bithchórais Diagnóiseacha, Pleasanton, CA, SAM). Baineadh úsáid as córas braite imdhíonachta polaiméire (córas braite DAB PolyVuemouse/coinín, Bithchórais Diagnóiseacha). Úsáideadh na príomh-antasubstaintí seo a leanas: próitéin aigéadach fibrillary glial (frith-GFAP; MAB360; Chemicon International, Inc., Temecula, CA, SAM); fachtóir fás endothelial soithíoch (frith-VEGF; sc-7269; Santa Cruz Biotechnology, Inc., Dallas, TX, USA), S100 próitéin ceangailteach cailciam B (frith-S100B; ab52642; Abcam PLC, Cambridge, RA) , agus fachtóir núicléach kappa-light-slabhra-feabhsaithe de chealla B gníomhachtaithe (frith-NF-kB p65; sc-8008). Bhí gach caolú ag 1:200 agus gor thar oíche ag 4 céim . Cuireadh antasubstaint tánaisteach (Luch/Coinín PolyVueTM) leis de réir threoracha an tsoláthraí.luibh cistánachBhí na codanna daite le substráit DAB móide/crómaigin agus hematocsailín. Rinneadh breathnuithe histeolaíocha agus gabháil íomhánna i micreascóp Carl Zeiss (Carl Zeiss Microscopy GmbH, Jena, an Ghearmáin).

Le haghaidh staining inmunofluorescence, goraíodh na sleamhnáin thar oíche ag 4 céim C leis na príomhantasubstaintí seo a leanas: carboxymethyl Lysine (frith-CML; ab124145; Abcam PLC, Cambridge, UK), receptor AGE (frith-RAGE; sc-365154), NADPH oxidase 4 (frith-Nox4; ab133303), 3-nítrotyrosine (frith-NT; ab110282), agus ocsaíd nítreach synthase (inducible)(frith-iNOS; A00368-1; Boster Bio, Pleasanton, CA , SAM). Ansin, úsáideadh na hantasubstaintí tánaisteacha seo a leanas: le haghaidh frith-RAGE, frith-luch gabhar lgG(FITC)-réimneach(1:200; Santa Cruz, Biotechnology, Inc.); le haghaidh frith-CML agus frith-NT, luch frith-choine IgG-PE (SC-3753); agus maidir le frith-iNOS agus frith-Nox4, m-IgGkBP-PE (Sc-516141). Goradh iad go léir ag teocht an tseomra ar feadh 60 nóiméad. Ina dhiaidh sin, suiteáladh na codanna i meán ina raibh 4',6-Dé-aimidín-2'-féinilindól déhidreaclóiríd (DAPI). Rinneadh antasubstaintí frith-CML agus frith-RAGE a chomh-hibridiú sa sleamhnán céanna. Baineadh úsáid as Stáisiún Íomháú Cealla FLoidTM (Teicneolaíochtaí Beatha Carlsbad, San Diego, CA, SAM) le haghaidh íomhánna fluaraiseachta.

2.3.4.Meastóireacht Apoptóis

Braitheadh ​​apoptosis na gcealla reitineacha de réir an lámhleabhair a ndearna an teirminéal deoxynucleotidyl transferase(TdT)-mediated deoxyuridine triphosphate (dUTP) lipéadú leas-deireadh (TUNEL) úsáid as an bhFearas Braite Báis In Situ Cell, TMR (tetramethyl-rhodamine{{ 3}}dUTP) dearg, leagan 12 (12156792910; Roche Diagnostics). Go hachomair, rinneadh na sleamhnáin dewaxed a athhiodráitiú agus a rinsiú faoi dhó le PBS. Ansin, bhí siad gortha leis an meascán imoibriúcháin TUNEL in atmaisféar humidified ar feadh 60 nóiméad ag 37 C. Ina dhiaidh sin, suitear ailt le DAPI agus breathnaíodh i micreascópacht fhluaraiseachta (Stáisiún Íomháú Cill FLoidTM). Ríomhadh IOD le haghaidh TUNEL le haghaidh sraitheanna reitineacha.

2.3.5. Measúnacht sárocsaídiúcháin lipid

Le haghaidh meastóireachta ar leibhéil malondialdehyde (MDA) i bhfíochán reitineach, rinneadh thart ar 3 mg de fhíochán úr (n=3) a aonchineálú agus a phróiseáil mar a ath-phortaíodh roimhe seo [38]. Rinneadh leibhéil MDA a chainníochtú de réir threoracha an tsoláthraí feiste (trealamh measúnachta OXItek-TBARS, Enzo Life Sciences, Farmingdale, NY, USA).

2.4.Anailís Staidrimh

Le haghaidh anailís staitistiúil, gabhadh gach micreagraif reitineach le méid 200× ag 100 μm thar réigiún na néarán snáthoptaice. Rinneadh anailís ar thart ar 40 íomhá in aghaidh an ghrúpa ainmhithe (n=7). Rinneadh anailís íomhá le bogearraí Image-Pro Premier Version 9.0 (Media Cybernetics, Inc., Rockville, MD, USA). D’úsáideamar bogearraí GraphPad Prism (La Jolla, CA, SAM; leagan 8.0). Léiríonn na figiúirí luachanna grafáilte i gceapacha bosca agus guairneáin (meán, ceathrú ceathrú, íos-uasluach) don chiseal ganglion cille (GCL), ciseal núicléach inmheánach (INL), agus ciseal núicléach seachtrach (ONL). Taispeántar an meán agus an diall caighdeánach (meán ± SD) in Aguisín A (Táblaí A1-A3). I ngach cás, rinneadh tástáil ANOVA aontreo agus tástáil Tukey ina dhiaidh sin. lch<0.05 was="" considered="" statistically="">