SLC37A2, Móilín Móilín a Bhaineann le Fosfar i gCealla Matán Míne san Aorma Calcaithe

Calcification soithíochis foinse mhór degalar cardashoithíochin othair a bhfuil galar duáin ainsealach orthu.Hyperphosphatemiamar thoradh ar sní isteach fosfar intracellular méadaithe, as a dtagann méadú ar osteoblast-mhaith cealla i soithíoch cealla muscle réidh. Aistríonn PiT-1 fosfáit i gcealla matán míne soithíoch. Mar sin féin, ní thuigtear go hiomlán meicníocht calcification soithíoch. Rinne an staidéar seo imscrúdú ar mhóilíní a bhfuil baint acu le fosfar is iarrthóirí seachas PiT-1. hypothesized againn go fosfar a bhaineann móilíní a bhaineann leis ansolute-iompróir(SLC) bheadh ​​baint ag superteaghlach le calcification soithíoch. Mar thoradh ar anailís microarray DNA, dhíríomar ar SLC37A2 agus léirigh sé gur mhéadaigh léiriú mRNA de na cealla seo ar chealla matán mín aortach cailcithe (AoSMC). Tuairiscíodh go n-iompraíonn SLC37A2 malartuithe glúcóis{-6-fosfáit/fosfáit agus fosfáit/fosfáit araon. Léirigh anailís in vitro nach raibh tionchar ag athlasadh ar AoSMC ar SLC37A2expression. Mhéadaigh léiriú SLC37A2 mRNA agus próitéin in AoSMC cailcithe. In vivo, léirigh anailís go bhfuil slonn mRNA SLC37A2 san aorta degalar duáin ainsealachcomhghaolaíodh francaigh le géinte marcála oistéigineacha. Ina theannta sin, cuireadh SLC37A2 in iúl sa limistéar calcification soithíoch ifrancaigh galar duáin ainsealach. Mar thoradh air sin, léirigh muid go bhfuil SLC37A2 ar cheann de na móilíní a mhéadaíonn lecalcification soithíochin vitro agus in vivo.

Eochairfhocail: SLC37A2,calcification soithíoch, cealla matán míne aortach,galar duáin ainsealach, hipearfosfáit

Cliceáil anseo chun Sliocht CISTANCHE ORGÁNACHA NÁDÚRTHA A FHÁIL LE 25% ECHINACOSIDE AGUS 9% ACTEOSIDE CHUN FEIDHM DUINE

Seirbhís Tacaíochta Wecistanche-An t-onnmhaireoir cistanche is mó sa tSín:

Ríomhphost:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Teil:+86 15292862950

Siopa Le haghaidh Sonraí Breise:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

Mar líon na n-othar a bhfuilgalar duáin ainsealach(CKD) méaduithe, líon na n-otharéilíonn scagdhealúbeidh méadú chomh maith. An chuid is mó básanna in othair ag dul faoiscagdhealaithemar gheall argalair cardashoithíochmarteip cairdiach, neamhoird cerebrovascular, nó infarction miócairdiach. (,2) Príomhfhoinse degalar cardashoithíochis calcification ectopic é,() mínormáltacht de bharr foirmiú agus sil-leagan criostail fosfáit chailciam i bhfíocháin bhoga. (4 6) Fachtóirí éagsúla ar nós athlasadh. strus ocsaídiúcháin, agus méaduithe ar leibhéil cailciam plasma (Ca) agus fosfar (P) ag gabháil le dul chun cinn calcification soithíoch. I measc na bhfachtóirí seo, is le calcification soithíoch is mó a bhaineann hyperphosphatemia. (7.8) Is éard is cúis le hipearfosfáitím ná iontógáil iomarcach P i láthair feidhm duánach laghdaithe. Mar sin, ní mór d’othair atá ag dul faoi scagdhealú teorainn a chur le hiontógáil P. (79-12) Mar sin féin, tuairiscíodh gocalcification soithíochag dul chun cinn cheana féin nuair a chuirtear tús le scagdhealú; tá sé le feiceáil freisin in othair a bhfuil CKD luathchéime acu nuair nach bhfuil hyperphosphatemia soiléir. (3) Dá bhrí sin, tá sé tábhachtach calcification soithíoch a chosc in othair le CKD luathchéime chun prognóis saoil a fheabhsú.

as a dtagann sní isteach méadaithe P isteach i gcealla matán míne soithíoch (VSMC). Déantar sní isteach P trí PiT-1, iompróir ar dhromchla membrane cille VSMC. Is ball é PiT- den superfamily iompróir tuaslagáit (SLC), lena n-áirítear iompróir fosfáit sóidiam ionchódaithe ag SLC20A1.04 PiT- iompraíonn fosfáit ar fud na seicní cille Na-spleách agus ina dhiaidh sin mianrú maitrís mar gheall ar leibhéil p ardaithe. s) Mar intracellular Méadaíonn leibhéil P, tosaíonn VSMC ag cur fachtóirí trascríobh osteogenic in iúl, mar fhachtóir trascríobh a bhaineann le runt 2(Runx2)(16) Tar éis an éifeacht seo tá léiriú méadaithe ar ghéinte osteoblast-shonrach, mar osteopontin agus osteocalcin. Ina theannta sin, laghdaigh léiriú próitéiní réidh muscle-sonrach. ar nós próitéin matán mín 22-0 (SM22-0), tarlaíonn sé. Mar thoradh air sin, déantar VSMC a chlaochlú i gcealla cosúil le osteoblast. (1718)Tá sé léirithe ag staidéir chliniciúla le déanaí go bhfuil leibhéil cailciam san fhuil. cáithníní próitéine (CPP), a léiríonn cáithníní colóideach fosfáit chailciam, méadú le laghdú ar fheidhm duánach. (19-21)Chomh maith leis sin, tuairiscíodh comhghaolta le leibhéil fola CPP agus P.2o2i) D'fhéadfadh go spreagfadh an CpP dul chun cinn an chailcithe soithíoch.22-24)

Mar sin féin, breathnaíodh calcification soithíoch in othair le CKD luathchéime le gnáthleibhéil plasma P. (13) Ina theannta sin.PiT-1 cuirtear mRNA in iúl go uileláithreach i ngach fíochán. Mar sin féadfaidh móilín eile gníomhú go príomha i réimse an chailcithe soithíoch. Tá tuairiscí ann goathlasadhcuireann sé calcification soithíoch chun cinn. Fachtóirí athlastacha ar nós interleukin (IL)-1B, IL-6, agus necrosis fachtóir-alfa meall (TNF-a) difreáil spreagtha VSMC isteach i gcealla osteoblast-mhaith (2s26) TNF-a iondúil calcification soithíoch tríd an gcosán cAMP, a bhfuil ról aige i idirdhealú oistéablast.2728) Rialaíonn IL-6 cosáin éagsúla as a dtagann cailciú soithíoch VSMC2-31) Ina theannta sin. Is fachtóirí iad IllB, IL-6, agus TNF-a freisin a bhaineann le cailciú soithíoch méadaithe de bharr leibhéil arda p.3233) Mar sin féin. ní mhíníonn sonraí reatha meicníocht soithíoch go hiomlán

calcification de bharr na bhfachtóirí seo. Rinneamar hipitéisiú go bhféadfadh móilíní eile a bhaineann le P a bheith ann, mar iad sin san supertheaghlach SLC, a bhfuil baint acu le cailciú soithíoch. Dhíríomar ar phróitéiní membrane san fhotheaghlach SLC agus rinneamar imscrúdú ar mhóilíní ionchasacha a bhaineann le P seachas PiT-1 le haghaidh rannpháirtíochta i gcalcúchán soithíoch. Ina theannta sin, scrúdaíomar an gaol idir móilíní iarrthóra agus cailciú soithíoch san fhíseán agus in vivo.

Abhair agus modhanna

Cultúr cille. Fuarthas gnáthchealla matán-matáin daonnúla (AoSMC) ó Lonza (Basel, an Eilvéis) Saothraíodh AoSMC de réir threoracha an déantóra. Coinníodh AoSMC i meán fáis (meán basal cille matán réidh arna fhorlíonadh le séiream bó féatais 5% (FBS), fachtóir fáis eipideirm, inslin, fachtóir fáis fibroblast-B, agus gentamicin / amphotericin-B). Athraíodh na meáin gach lá eile. Fásadh AoSMC i gorlann taisithe 5% CO ag 37 céim agus coinníodh é go dtí gur baineadh an cumar amach agus ansin úsáideadh é i dturgnaimh.

AoSMC Calcaithe.Tógadh calcúchán AoSMC mar a thuairiscítear roimhe seo.435) Saothraíodh AOSMC i meán Eagle de chuid Dulbecco arna fhorlíonadh le 15% FBS agus peinicillin-streiptimícin agus saothraíodh iad le 2.6 mM P ar feadh 3, 6, 9, 12 agus 14 lá. Coigeartaíodh an tiúchan P leis an maolán P NaH, PO/Na, agus HPO. pH 7.2). Ní raibh AoSMCanna eile saothraithe le 2.6 mM P.

Micrea-eagar DNA. Úsáideadh RNA iomlán de shamplaí AoSMC saothraithe agus nár saothraíodh le 2.6 mM P. Iomlán RNA 5.0 Rinneadh anailís ar ug ag baint úsáide as micrea-eagar DNA (Agilent Technologies, Tokyo. Japan). SurePrint G3 Daonna GE 8 x 60k leagan. 2 Baineadh úsáid as Microarray chun thart ar 26,000 ghéin a scrúdú. Ríomhadh an cóimheas tríd an leibhéal slonn AoSMC saothraithe le 2.6 mM ar feadh 12 lá a roinnt ar an leibhéal slonn AoSMC neamhshaothraithe le2.6 mM P

Micrea-eagar DNA

Úsáideadh RNA iomlán de shamplaí AoSMC saothraithe agus nár saothraíodh le 2.6 mM P. Iomlán RNA 5.0 Rinneadh anailís ar ug ag baint úsáide as micrea-eagar DNA (Agilent Technologies, Tokyo. Japan). SurePrint G3 Daonna GE 8 x 60k leagan. 2 Baineadh úsáid as Microarray chun thart ar 26,000 ghéin a scrúdú. Ríomhadh an cóimheas tríd an leibhéal slonn ar AoSMC saothraithe a roinnt le 2.6 mM ar feadh 12 lá ar an leibhéal slonn ar AoSMC neamhshaothraithe le 2.6 mM P.Expression SLC37A2 in athlasadh soithíoch. Chun freagairt athlastach a spreagadh in AoSMC, saothraíodh cealla le meán fáis go dtí gur shroich siad cumar agus ansin cóireáilte le 1 lipopolysaccharides ugmL (LPS)(LPS) ó escherichia coli O111:B4; Sigma, St. Louis, MO) do 24 agus 72 gan mhoill. 2.6 mM P. Ní raibh AoSMC eile saothraithe le hanailís imoibriú slabhra polaiméaráise fíor-ama (PCR). Baineadh RNA iomlán as AoSMC cóireáilte le LPS ar feadh 24 agus 72 h agus cealla nár chóireáil le LPS. Rinneadh PCR cainníochtúil fíor-ama glas-bhunaithe SYBR ag baint úsáide as cDNA sintéiseithe agus sraith primer cuí do gach géine sprice le córas PCR fíor-ama aStepOnePlus (Bithchórais Fheidhmeach, FosterCity, CA). Ba iad seo a leanas na seichimh primer: IL daonna-6.5-AATTCGGTACATCCTCGACGG-3' agus 5-GCCATCTTTGGAAGGTTCAGG-3'; daonna SLC37A2,5TCACTTTAGTGCCAAGGAGGC-3' agus 5CCATTGGTGTAGTCAGAGACG-3'; glyceraldehyde-3-fosfáit díhidriginease (GAPDH5'-CTGCACCACCAACTGCTTAGC- agus 5-CTTCTGGGIGGCAGTGATGGC-3.IL-6 agus SLC37A2 ríomhadh leibhéil slonn mRNA tar éis normalaithe le GAPDH.Expression of calcified SLCc37A2 Baineadh an t-iomlán as AoSMC nach bhfuil saothraithe le 2.6 mM P agus cealla AoSMC saothraithe le 2.6 mM P ar feadh laethanta 3, 6, 9, 12 agus 14. Rinneadh PCR fíor-ama ag baint úsáide as an cDNA sintéiseithe. seo a leanas: human Runx2, 5-TGAGCCGCTTCTCCAACCC-3', agus 5-CTCTGGCTTTGGGAAGAGCCG{67}} Ríomhadh na leibhéil slonn mRNA Runx2 agus SLC37A2 tar éis normalaithe le APPH.

Anailís blotála an Iarthair.

Bailíodh próitéin iomlán ó shamplaí AoSMC saothraithe faoi na coinníollacha céanna a úsáidtear le haghaidh anailís PCR fíor-ama. Rinneadh na samplaí seo a líseáil trí úsáid a bhaint as saline maolánach Tris (pH 75) arna fhorlíonadh le 5% NP-40 agus manglam coscaire próitéáis 1%. Rinneadh na samplaí tiúchan próitéine a thomhas ag baint úsáide as an BCA Protein Assay Kit (Thermo FisherScientific.Waltham, MA). agus coigeartaíodh an tiúchan le blotting an iarthair, scartha 10 ugs próitéine i glóthach polyacrylamide 10% ag baint úsáide as leictreafóiréis glóthach dodecyl sulfáit-polyacrylamide sóidiam. Cóireáladh an scannán le antashubstaint SLC37A2 (Novus Biologicals, Centennial, CO) nó GAPDH (GeneTex, Irvine, CA) mar antashubstaintí príomhúla, gortha le antasubstaint comhchuingeach coinín lgG Horseradish peroxidase (Córais T&D, Minneapolis, MN) mar antasubstaint thánaisteach. agus léirshamhlaithe ag baint úsáide as Amersham ECL Select (GE Healthcare. Buckinghamshire, Sasana) agus anailísí íomhá lonrúil (LAS-1000 móide, FUNIFILM, Tóiceo, an tSeapáin). Rinneadh an banna a chainníochtú le lmagel.

Turgnamhach

D'fhaomh Coiste Eitice Ollscoil Hyogo, Scoil na hEolaíochta Daonna agus an Chomhshaoil, gach prótacal staidéir. Ceannaíodh francaigh fireann dhá sheachtain déag, Sprague-Dawley ón tSeapáin SLC (Shizuoka, an tSeapáin). Coinníodh francaigh ar 12-timthriall éadrom, 12-h dorcha (09:00-21:00) agus ligeadh rochtain saor in aisce ar bhia agus ar uisce seach-ghlan.

Áirítear leis na aistí bia turgnamhacha aiste bia rialaithe P (1.0% P, 0.6Ca, 20% próitéin), aiste bia adenine (0.75% adenine , 1.0% P, 0.6%Ca, 2.5% próitéin), aiste bia íseal-P (LP) (0.2% P,0 .6% Ca, 10% próitéin), agus aiste bia ard-P (HP) (1.0% P, 0.6% Ca, 10% próitéin) bunaithe ar an aiste bia AIN{93-G (Oriental Giosta, Tóiceo, an tSeapáin) le cáiséin mar fhoinse próitéine.3637) Tuairiscíodh go gcuireann aiste bia ísealphróitéine cailciú soithíoch chun cinn i bhfrancaigh le teip duánach de bharr aidinín, agus mar sin rinneadh srianadh próitéine.3738)Roimh ghrúpáil, bhí gach francach (n Tugadh gnáth-aiste bia MF (Giosta Oirthearach) do=23) ar feadh seachtaine chun dul i dtaithí air. Ag 13 seachtaine d'aois, roinneadh na francaigh ina 2 ghrúpa: an grúpa rialaithe (n=5) agus an grúpa CKD spreagtha adenine (n=18). Fuair ​​an grúpa rialaithe an aiste bia rialaithe P ar feadh 6 seachtaine . Fuair ​​an grúpa CKD spreagtha adenine an aiste bia adenine ar feadh thart ar 3 seachtaine agus ansin roinneadh tuilleadh ina 2 fhoghrúpa: an grúpa CKD-LP (n=8) nó an grúpa CKDHP (n=10). Fuair ​​​​rats an ghrúpa CKD-LP agus grúpa CKD-HP an aiste bia LP agus aiste bia HP ar feadh 3 seachtaine, faoi seach le linn na tréimhse turgnamhacha, taifeadadh iontógáil bia laethúil. Le linn an aiste bia adenine, bailíodh samplaí fola ón vein eireaball idir 10:00 AM agus 11:00 AM uair sa tseachtain go dtí an dara seachtain, agus ina dhiaidh sin uair amháin gach 2 lá chun monatóireacht a dhéanamh ar leibhéil plasma. Le linn an aiste bia LP nó aiste bia HP, bailíodh samplaí fola uair sa tseachtain. Bailíodh samplaí fuail agus taifeadadh toirt fuail uair sa tseachtain. Rinneadh francaigh a íobairt le ainéistéiseach ag baint úsáide as isoflurane (Wako Pure Chemical Industries. Osaka Japan) agus laparotomies. Bailíodh samplaí fola a tógadh ón vena cava inferior agus ón aorta thoracobdominal le haghaidh anailíse.

Slonn SLC37A2 ar an aorta.

Baineadh úsáid as thart ar aon trian den aorta thoracoabdominal a bailíodh chun cailciú a shamhlú agus chun imdhíonadh a dhéanamh. Leabaíodh an t-aorta i bpaifín agus gearradh 4-ranna um. Dathaíodh codanna ag baint úsáide as Modh Von Kossa le haghaidh Kit Cailciam (Polysciences. Warrington, PA) de réir threoracha an déantóra. rinneadh anailís imdhíonta le hailt sraitheach. Goradh na hailt le antasubstaint SLC37A2 thar oíche ag 4 céim agus ansin cóireáilte le Histofine Simple Stain Rat MAX-POMULTI) (Nichirei Biosciences, Tóiceo, an tSeapáin) ar feadh 30 nóiméad ag teocht an tseomra. Ina dhiaidh sin, déileáladh le hailt le trealamh DABsubstráit (Nichirei).

Baineadh RNA iomlán as an gcuid eile den aorta thoracoabdominal reoite. Rinneadh PCR fíor-ama ag baint úsáide as an cDNA sintéiseithe. Ba iad seo a leanas na sraitheanna primer: osteo-pontin francach, 5ACCCATCTCAGAAGCAGAATC-3' agus 5ATCCATGTGGTCATGGCTTTC-3' agus; francach SLC37A2,5-TAGTCCCAGCTTCGAGTACGG-3' agus 5'-CTGATGGGCTTTCTGGACATG-3.Ríomhadh leibhéil slonn osteopontin mRNA agus SLC37A2 tar éis normalaithe le GAPDH

Anailís staitistiúil.

Cuirtear sonraí i láthair mar mheán + SE. Rinneadh anailís ar dhifríochtaí idir grúpaí ag baint úsáide as an t-tástáil. I dturgnaimh AoSMC calcaithe fosfáite-spreagtha, rinneadh anailís ar dhifríochtaí trí úsáid a bhaint as anailís aontreo ar an éagsúlacht agus modh Dunnett ina dhiaidh sin. I dturgnaimh mhúnla CKD, rinneadh anailís ar dhifríochtaí ag baint úsáide as an tástáil K ruskal-Wallis agus an modh Steel-Dwass ina dhiaidh sin. Cinneadh comhéifeachtaí comhghaoil ​​(rs) trí úsáid a bhaint as tástáil céime comhghaoil ​​Spearman. I gcás gach tástálacha. luachanna p dhá eireaball<0.05 were considered statistically significant.