Cuireann Serovars Salmonella Enterica in Easpa Géin Ttra agus PduA Freagra Imdhíonachta na Cille le linn Ionfhabhtuithe Silíní

Salmonella spp. ar cheann de na pataiginí bia-iompartha is mó atá freagrach as caillteanais eacnamaíocha a chur faoi deara don tionscal éanlaithe clóis agus as iarmhairtí a thabhairt do shláinte an phobail freisin. Tá ról lárnach ag cumas marthanais pataigin sa timpeallacht intestinal le linn athlasadh chomh maith lena gcaidreamh leis an gcóras imdhíonachta óstach le linn ionfhabhtuithe in éanlaith chlóis. Ba é cuspóir an staidéir seo ná láithreacht na macrafagaí agus na daonraí cealla CD4+ /CD8+ a chainníochtú ag baint úsáide as an teicníc imdhíon-histochemistry, i línte tráchtála sicíní ionfhabhtaithe go turgnamhach ag cineálacha fiáine agus cineálacha mutant Salmonella Enteritidis agus Salmonella Typhimurium easpa géinte ttrA agus pduA. Spreag Salmonella Enteritidis ∆ttrA∆pduA céatadán níos airde den limistéar daite ná an cineál fiáin, cé is moite de chearca ag leagan solais. Salmonella Typhimurium brú de chineál fiáin agus ionfhabhtuithe Salmonella Typhimurium ∆trA∆pduA mar thoradh ar phatrún comhchosúil inar léirigh, ag 1 agus 14 dpi, na tonsilí caecach agus ileum na n-éan achar daite níos sainráiteach i gcomparáid le 3 agus 7 dpi. Sna línte go léir a ndearnadh staidéar orthu, breathnaíodh insíothlú feiceálach ar mhacrophages i gcomparáid le cealla CD4+ agus CD8+. Tríd is tríd, léirigh ainmhithe a bhí ionfhabhtaithe ag an brú mutant limistéar a bhí dhaite go dearfach níos airde ná an cineál fiáin. Mar thoradh ar scriosadh i ngéinte ttra agus pduA araon, rinneadh insíothlú níos déine ar mhacrophages agus cealla CD4+ agus CD{{8+ sna héin óstacha, rud a thugann le tuiscint nach raibh aon mhaolú paitigin ann, fiú i gcineálacha éagsúla Salmonella.

sochair cistanche d'fhir-neartú córas imdhíonachta

Is pataigin bia-iompartha é Salmonella enterica a spreagann caillteanais do bheostoc chomh maith le tionchar díreach ar shláinte an phobail. Salmonella enterica subsp. enterica serovar Enteritidis (Salmonella Enteritidis) agus Typhimurium (Salmonella Typhimurium) is mó a bhaineann le hionfhabhtuithe bia le blianta fada anuas. Idir 1995 agus 2010, aithníodh Salmonella Enteritidis i 34,2% de na samplaí go léir a bhí dearfach do Salmonella spp1. Ina theannta sin, d'fhoilsigh Winter et al.2 staidéar substaintiúil ag fiosrú ról géine ionchódaithe tetrathionate, ag roghnú an séiritíopa Salmonella Typhimurium ach ag baint úsáide as lucha mar mhúnla turgnamhach. Agus é seo á chur san áireamh, d’fhéadfadh ár n-eolas ar idirghníomhaíocht óstaigh-pataigine a dhoimhniú cabhrú le tomhais rialaithe agus díothaithe a fheabhsú. Tá baint ag roinnt fachtóirí le pataigineas salmonellosis, mar shampla cumas na pataigin a mhacasamhlú i dtimpeallacht mhúcasach inlasta, ag brath ar fháil cothaitheach agus riospráid anaeróbach2. Mar sin féin, ní ráthaíonn infhaighteacht cothaitheach maireachtáil baictéarach i dtimpeallacht iomaíoch ina bhfuil daonra dlúth ag miocrorgánaigh eile. Dá bhrí sin, tugann cumas Salmonella enterica chun tetrathionate a mheitibiliú trí úsáid a bhaint as tetrathionate reductase chun 1,2-propanediol a tháirgeadh mar fhoinse fuinnimh, buntáiste aclaíochta. Tá an einsím seo comhdhéanta de TtrA, TtrB, agus TtrC. Baineann an chéad fho-aonad a luadh leis an supertheaghlach molybdopterin (MPT) agus tá fearann ​​teorannú FeS aige a bhfuil baint aige le laghdú teititiaináit go tiasulfáit (S2O3 2−)2–4. Úsáideann micrea-ranna baictéaracha (MCP) te 1, própanediol. Tá an struchtúr seo comhdhéanta de sheacht bpróitéin dhifriúla, agus ina measc is é PduA an phríomh-chomhpháirt de struchtúr an MCP5. Ar an gcéad dul síos, tiontaítear 1,2-propanediol go propionaldehyde, a laghdaítear ina dhiaidh sin go própánól agus própionáit trí ghníomhaíocht díhiodráitis própánóil. Gineann an próiseas seo ATP trí fhosfarylation, grádán leictreon (1-propanol) d'athghiniúint NAD, agus idirghabhálaí (propionyl-CoA) is féidir a úsáid mar fhoinse carbóin agus fuinnimh ar fud chiotráite meitile trí, ag brath ar vitimín B12 sintéiseithe. ar bhealach endogenous6. Le linn ionfhabhtuithe sicín, tar éis imghabháil imdhíon-fhreagairt7 leanann imghabháil freagairt imdhíonachta cumas Salmonella enterica serovars ionradh agus maireachtáil laistigh de na cealla epithelial intestinal agus macrophages7. Sa chomhthéacs sin, is céim chriticiúil é an t-ionfhabhtú a bhraitheann ar an idirghníomhú idir cealla baictéaracha agus óstacha agus an cumas baictéarach chun bacainní an epithelium intestinal a shárú chun a choilíniú agus a mhacasamhlú a ráthú. Mar sin féin, gníomhaíonn sé na freagairtí athlastacha agus imdhíonachta8 as a dtagann endocytosis agus fagaicíotóis trí chealla epithelial agus antaiginí (APCanna), faoi seach. Spreagann gníomhaíocht fhrithmhiocróbach na gceall seo freagairt dhúchasach trí mhacrophages agus braitheann an tionól imdhíonachta oiriúnaitheach ar ghníomhachtú CD4+ agus CD8+9. Chun léargas a thabhairt ar na hidirghníomhaíochtaí óstaigh-pataigine taobh thiar d’ionfhabhtú intestinal Salmonella i sicíní, déanaimid measúnú ar dhaonra cealla an chórais imdhíonachta le linn coilíniú putóige agus ionfhabhtú sistéamach in éin de shínte tráchtála a bhfuil dúshlán ag cineálacha mutant fiáin de Salmonella Enteritidis agus Salmonella Typhimurium. , ag iompar scriosta i ngéinte a bhaineann le meitibiliú tetrathionate (ttrA) agus 1,2-propanediol (PDU).

cistanche tubulosa-feabhas a chur ar chóras imdhíonachta

Torthaí

Turgnamh 1—Dúshlán Salmonella Enteritidis.

Léirítear na torthaí maidir le láithreacht na gcealla freagartha imdhíonachta a chainníochtú i tonsils caecal, caecum, ileum, agus ae ó broiler, cearca leagan éadrom, agus cearca leagan leath-trom i dTáblaí 1, 2, agus 3. Fuaireamar níos mó CD 4+ agus insíothlú cille macraphage ó shíoga ar tugadh dúshlán dóibh le Salmonella Enteritidis ∆ttrA∆pduA (SEΔttrAΔpduA) ná ó shíoga ar tugadh dúshlán dóibh le brú de chineál fiáin Salmonella Enteritidis (wt-SE) nó éin neamh-ionfhabhtaithe, i ngach fíochán measúnaithe. Fuarthas eisceacht le haghaidh insíothlú cille CD4+ ag 3 dpi sna tonsilí caecach, ileum, agus ae, agus le haghaidh insíothlú macraphage ag 3 agus 14 dpi san ae ó SEΔttrAΔpduA broilers dúshlánacha. Ina theannta sin, breathnaíodh líon na gcealla CD8+ insíothlaithe i gcainníocht níos mó ó éin ar tugadh dúshlán dóibh le SEΔttrAΔpduA ag 1 agus 7 dpi sa caecum agus san ae, ag 3 dpi sna tonsilí caecach, agus 14 dpi san ileum. I gcodarsnacht leis sin, bhí insíothlú ard de chealla CD8+ ag éin a raibh dúshlán wt-SE orthu san ileum agus tonsils caecal ag 1 agus 7 dpi, faoi seach (Cluaisín 1; Fíor Forlíontach S1). Léiríonn Tábla 2, agus Fíor Forlíontach S2 an CD4+ agus CD8+, agus insíothlú macrafáis a fhaightear i bhfíocháin na gcearc breithe leathtrom. Go ginearálta, bhí éagsúlacht mhór idir réimsí na n-infiltrates cille maidir leis an brú dúshlánach agus na fíocháin a ndearnadh staidéar orthu. Léirigh éin a ndearnadh dúshlán SEΔttrAΔpduA réimsí níos airde clúdaithe ag cealla CD4+ (i ileum ag 1 agus 14 dpi, agus ae ag 7 dpi), agus macrophages (i ileum ag 7 dpi, agus ae ag 3, 7, agus 14 dpi), ná sa fíochán céanna na n-éan dúshlán wt-SE. Ar an láimh eile, fuarthas méideanna níos mó i gcealla CD{8+ i tonsilí caecal (ag 1 agus 7 dpi) agus caecum (ag 3 dpi) éan a ndearnadh dúshlán orthu le brú wt-SE. Go héagsúil faoi deara i sicíní breithe broiler agus leathtrom, spreag Salmonella Enteritidis ∆ttrA∆pduA réimsí cille freagartha imdhíonachta nach raibh chomh dian leis an gcineál fiáin, sa dúshlán ó chearca breithe éadroma. Thaispeáin éin Wt-SEchallenged limistéir insíothlaithe CD4+ níos mó i tonsilí caecal (ag 1 agus 3 dpi), caecum (ag 3, 7, agus 14 dpi), ileum (ag 1 agus 7 dpi), agus ae (ag 14 pso). Ar an gcaoi chéanna, tá mar thoradh ar dhúshláin le SEΔttrAΔpduA go bhfuil limistéir insíothlaithe laghdaithe den CD8+ i tonsilí caecaíocha (ag 1 dpi) agus ileum (ag 7 agus 14 dpi), agus macrophages i tonsils caecach agus caecum (ag 3 dpi), i gcomparáid le héin dúshlán wt-SE. Níor breathnaíodh aon athruithe suntasacha ar limistéar cealla an chórais imdhíonachta de chealla CD8+ agus macrophage san ae ó éin SEΔttrAΔpduA agus wt-SE araon. Léirítear torthaí mionsonraithe an dúshláin le cearca leagan solais i dTábla 3 (féach Fíor Fhorlíontach. S3).

Tábla 1. Léiriú ar an difríocht shuntasach a bhaineann le dáileadh cainníochtúil na gcealla freagartha imdhíonachta éagsúla in orgáin gríoscáin atá ionfhabhtaithe le Salmonella Enteritidis tréithchineálacha fiáine agus mutant ag laethanta éagsúla tar éis an ionfhabhtaithe. DPI, laethanta iar-ionfhabhtaithe; ∆-SE, Salmonella Enteritidis ∆trA∆pduA; wt-SE, Salmonella Enteritidis de chineál fiáin; ns, gan aon difríocht shuntasach. Laistigh de gach orgán agus PSO, ciallaíonn * difríocht ag ANOVA déthreo agus ansin tástáil chomparáide Bonferroni idir luachanna tréithchineálacha fiáine agus mutant (*P Níos lú ná nó cothrom le 0.05; **P Níos lú ná nó cothrom le 0.01; ***P Níos lú ná nó cothrom le 0.001; ****P Níos lú ná nó cothrom le 0.0001). Is é an brú a chuirtear i láthair sa tábla (∆-SE nó wt-SE) mar rud suntasach laistigh den orgán agus PSO a thaispeánann an limistéar insíothlaithe mór do gach cill.

Tábla 2. Léiriú ar an difríocht shuntasach a bhaineann le dáileadh cainníochtúil na gcealla freagartha imdhíonachta difriúla in orgáin na gcearc breithe leathtrom atá ionfhabhtaithe le Salmonella Enteritidis tréithchineálacha fiáine agus mutant ag laethanta éagsúla tar éis an ionfhabhtaithe. DPI, laethanta iar-ionfhabhtaithe; ∆-SE, Salmonella Enteritidis ∆trA∆pduA; wt-SE, Salmonella Enteritidis de chineál fiáin; ns, gan aon difríocht shuntasach. Laistigh de gach orgán agus PSO, ciallaíonn * difríocht ag ANOVA dhá-threo agus ansin tástáil chomparáide Bonferroni idir luachanna tréithchineálacha fiáine agus mutant (*P Níos lú ná nó cothrom le 0.{{1{-}}5 ; **P Níos lú ná nó cothrom le 0.01; ***P Níos lú ná nó cothrom le 0.001; ****P Níos lú ná nó cothrom le 0.0001). Is é an brú a chuirtear i láthair sa tábla (∆-SE nó wt-SE) mar rud suntasach laistigh den orgán agus PSO a thaispeánann an limistéar insíothlaithe mór do gach cill.

Tábla 3. Léiriú ar an difríocht shuntasach a bhaineann le dáileadh cainníochtúil na gcealla freagartha imdhíonachta difriúla in orgáin na gcearc ag leagan solais atá ionfhabhtaithe le Salmonella Enteritidis tréithchineálacha fiáine agus mutant ag laethanta éagsúla tar éis an ionfhabhtaithe. DPI, laethanta iar-ionfhabhtaithe; ∆-SE, Salmonella Enteritidis ∆trA∆pduA; wt-SE, Salmonella Enteritidis de chineál fiáin; ns, gan aon difríocht shuntasach. Laistigh de gach orgán agus PSO, ciallaíonn * difríocht le ANOVA déthreo agus ansin tástáil chomparáide Bonferroni idir luachanna tréithchineálacha fiáine agus mutant (*P Níos lú ná nó cothrom le 0.{{10}}5 ; **P Níos lú ná nó cothrom le 0.01; ***P Níos lú ná nó cothrom le 0.001; ****P Níos lú ná nó cothrom le 0.0001). Is é an brú a chuirtear i láthair sa tábla (∆-SE nó wt-SE) chomh suntasach laistigh den orgán agus den PSO ná a thaispeánann an mórlimistéar insíothlaithe do gach cill.

cistanche córas imdhíonachta a mhéadú plandaí

Cliceáil anseo chun táirgí Cistanche Feabhsú Díolúine a fheiceáil

【Iarr tuilleadh】 Ríomhphost:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Turgnamh 2—Dúshlán Salmonella Typhimurium.

Léirítear i dTáblaí 4, 5, agus 6, faoi seach, na torthaí a bhaineann le láithreacht na gcealla freagartha imdhíonachta a chainníochtú i tonsils cecal, caecum, ileum, agus ae ó ghríoscáin, cearca leagan leathtrom, agus cearca breithe éadroma. Ar an iomlán, léirigh gríoscáin a raibh an brú mutant orthu limistéar marcáilte dearfach níos airde ná iad siúd ar tugadh dúshlán dóibh le brú de chineál fiáin Salmonella Typhimurium (wt-STM), ar na ceithre lá samplála. Ina theannta sin, níor breathnaíodh aon athruithe ar chealla imdhíonfhreagartha sna grúpaí rialaithe neamhionfhabhtaithe. Bhain achar cille Te CD4+ amach i ngach fíochán gríoscáin difríocht staitistiúil ag 1 dpi, le insíothlú níos mó don dúshlán le Salmonella Typhimurium ∆ttrA∆pduA (STM∆ttrA∆pduA). Bhí difríocht shuntasach idir réimse na freagairt imdhíonachta cainníochtaithe ó éin dúshlánacha STM∆ttrA∆pduA- agus wt-STM-dúshlán, le insíothlú níos mó nuair a bhí an dúshlán leis an brú mutant sa caecum agus ileum ag 1 dpi, agus ae. ag 14 dpi (CD8+ cealla); sa caecum, ileum, agus ae ag 1 agus 14 dpi (macrophages) (Tábla 4; Fig. Forlíontach S4). Níor léirigh torthaí na n-éan leagan leathtrom aon difríocht staitistiúil idir dúshláin brú mutant agus cineál fiáin do chealla CD{4+ sa caecum, agus cealla CD{8+ sna tonsilí caecach agus ileum i ngach 4 lá iar-ionfhabhtuithe measúnaithe (Tábla 5; Fíor Forlíontach S5). Mar sin féin, nuair a breathnaíodh limistéar comhchruinnithe suntasach de chealla an chórais imdhíonachta, thug STM∆ttra∆pduA dúshlán do na cearca breithe leathtroma: mórlimistéar insíothlaithe macrophages sna fíocháin go léir a ndearnadh staidéar orthu (ag 1 agus 14 dpi); limistéar mór insíothlaithe de chealla CD4+ sna tonsils caecaíocha agus san ae (ag 1, 7, agus 14 dpi) (Tábla 5; Fíor Forlíontach S5). Taispeánann Tábla 6, agus Fíor Fhorlíontach S6 an CD4+, CD8+, agus insíothlú macrafáis a fhaightear i bhfíocháin na gcearc breithe solais. Thaispeáin na héin a ndearnadh agóid orthu le STM∆ttrA∆pduA limistéar mórchealla an chórais imdhíonachta de CD4+ agus cealla macrophage i tonsils caecaoil agus caecum (ag 14 dpi), agus ileum (ag 1 agus 14 dpi) i gcomparáid le cealla imdhíon-fhreagairt limistéar de na fíocháin chéanna ó éin dúshlán wt-STM. Ní bhfuarthas aon difríocht staitistiúil don limistéar insíothlaithe CD{{8+ sna tonsilí caecach, caecum, agus ileum ó éin a raibh dúshlán fúthu. I gcodarsnacht leis na torthaí a fuarthas i bhfíocháin eile, bhí achar daite níos sainráiteach de chealla freagairt imdhíonachta do chealla CD4+ agus CD{8+ ag na ceithre dpi ar fad ag an ae ó éin a raibh dúshlán STM∆trA∆pduA orthu, agus macrophages ag 1 agus 14 dpi.

Tábla 4. Léiriú ar an difríocht shuntasach a bhaineann le dáileadh cainníochtúil na gcealla freagartha imdhíonachta éagsúla in orgáin gríoscáin atá ionfhabhtaithe le Salmonella Typhimurium tréithchineálacha fiáine agus mutant ag laethanta éagsúla tar éis an ionfhabhtaithe. DPI, laethanta iar-ionfhabhtaithe; ∆-STM, Salmonella Typhimurium ∆ttrA∆pduA; wt-STM, Salmonella Typhimurium cineál fiáin; ns, gan aon difríocht shuntasach. Laistigh de gach orgán agus PSO, ciallaíonn * difríocht ag ANOVA déthreo agus ansin tástáil chomparáide Bonferroni idir luachanna tréithchineálacha fiáine agus mutant (*P Níos lú ná nó cothrom le 0.05; **P Níos lú ná nó cothrom le 0.01; ***P Níos lú ná nó cothrom le 0.001; ****P Níos lú ná nó cothrom le 0.0001). Is é an brú a chuirtear i láthair sa tábla (∆-STM nó wt-STM) mar rud suntasach laistigh den orgán agus PSO a thaispeánann an t-achar insíothlaithe móra do gach cill.

Tábla 5. Léiriú ar an difríocht shuntasach a bhaineann le dáileadh cainníochtúil na gcealla freagartha imdhíonachta difriúla in orgáin na gcearc breithe leathtrom atá ionfhabhtaithe le Salmonella Typhimurium tréithchineálacha fiáine agus mutant ag laethanta éagsúla tar éis an ionfhabhtaithe. DPI, laethanta iar-ionfhabhtaithe; ∆-STM, Salmonella Typhimurium ∆ttrA∆pduA; wt-STM, Salmonella Typhimurium cineál fiáin; ns, gan aon difríocht shuntasach. Laistigh de gach orgán agus PSO, ciallaíonn * difríocht ag ANOVA dhá-threo agus ansin tástáil chomparáide Bonferroni idir luachanna tréithchineálacha fiáine agus mutant (*P Níos lú ná nó cothrom le 0.{{1{-}}5 ; **P Níos lú ná nó cothrom le 0.01; ***P Níos lú ná nó cothrom le 0.001; ****P Níos lú ná nó cothrom le 0.0001). Is é an brú a chuirtear i láthair sa tábla (∆-STM nó wt-STM) mar rud suntasach laistigh den orgán agus PSO a thaispeánann an t-achar insíothlaithe móra do gach cill.

Tábla 6. Léiriú ar an difríocht shuntasach a bhaineann le dáileadh cainníochtúil na gcealla freagartha imdhíonachta difriúla in orgáin na gcearc éadrom atá ionfhabhtaithe le Salmonella Typhimurium tréithchineálacha fiáine agus mutant ag laethanta éagsúla tar éis an ionfhabhtaithe. DPI, laethanta iar-ionfhabhtaithe; ∆-STM, Salmonella Typhimurium ∆ttrA∆pduA; wt-STM, Salmonella Typhimurium cineál fiáin; ns, gan aon difríocht shuntasach. Laistigh de gach orgán agus PSO, ciallaíonn * difríocht le ANOVA déthreo agus ansin tástáil chomparáide Bonferroni idir luachanna tréithchineálacha fiáine agus mutant (*P Níos lú ná nó cothrom le 0.{{10}}5 ; **P Níos lú ná nó cothrom le 0.01; ***P Níos lú ná nó cothrom le 0.001; ****P Níos lú ná nó cothrom le 0.0001). Tá an brú a chuirtear i láthair sa tábla (∆-STM nó wt-STM) chomh suntasach laistigh den orgán agus den PSO a thaispeánann an limistéar insíothlaithe mór do gach cill.

Plé

Nuair a nochtar baictéir do riochtaí anaeróbacha, féadfaidh siad úsáid a bhaint as foshraitheanna tetrathionáit agus 1,2-propanediol le haghaidh foinsí fuinnimh agus riospráid10. Mar sin, tá Salmonella spp. Tá sé faoi réir imscrúduithe le fada an lá ar conas a chuirfí isteach ar a n-mharthanacht san óstaigh dá scriosfaí géinte arb eol dóibh a bheith freagrach as na conairí seo. Chomh fada agus is eol dúinn, níor foilsíodh ach staidéar amháin a rinne imscrúdú ar róil ghéine ionchódaithe tetrathionate- agus própánaidiol ag an am céanna. Thuairiscigh ár ngrúpa taighde éifeachtaí na scriosta seo trí mheasúnú a dhéanamh ar ionfhabhtú sistéamach agus eisfhearadh fecal Salmonella Enteritidis agus Salmonella Typhimurium i lineages tráchtála sicíní11. Chun an plé ar an ábhar seo a mhéadú, léirigh na torthaí reatha an chill imdhíonachta insíothlaithe i bhfíocháin éagsúla de shínte silíní a bhfuil dúshlán ag baint leo le tréithchineálacha de chineál fiáin agus mutant araon a iompraíonn scriosadh i ngéinte ttrA agus pduA. Thar 2-turgnamh na seachtaine, leanann na hachair dhaite deimhneacha de chealla CD4+ agus CD{8+ patrún comhchosúil den chuid is mó, ina dtugann 1 agus 14 dpi líon níos airde freagairt imdhíonachta i láthair cealla. Is féidir é seo a mhíniú trí theagmháil phríomha an chórais cosanta óstach nuair a ionraíonn an pataigin. Léiríodh sa tuarascáil roimhe seo gur féidir le swab cloacal ó 13 dpi12 a bheith dearfach i sicíní ionfhabhtaithe, fiú nuair nach bhfuil Salmonella eisfhearadh ag 12 dpi, ag míniú cén fáth go raibh limistéir chealla an chórais imdhíonachta ag 3 agus 7 dpi níos ísle ach ar ais go dtí méadú. . Ar an gcéad amharc, bheifí ag súil go laghdófaí freagairt an óstaigh nuair a scriosfaí pduA agus ttrA araon ós rud é go bhfuil ról tábhachtach ag na géinte seo maidir le maireachtáil le linn ionfhabhtaithe le Salmonella2,4,13-15. Mar sin féin, léirigh ár dtorthaí i gcomparáid le tsóiteáin dúbailte a raibh an dá ghéin ann a mhalairt, spreag na cineálacha mutant de Salmonella Enteritidis agus Salmonella Typhimurium cealla freagairt imdhíonachta níos airde ná na cineálacha fiáine tréithchineálacha.

Buntáistí cistanche tubulosa- an córas imdhíonachta a neartú

D’fhéadfadh líon ard coilíneachtaí ar an gconair intestinal a bheith mar thoradh ar limistéar daite is giorra, rud a thacódh le staidéar a rinneadh roimhe seo, inar gnóthaíodh líon níos airde cineálacha Salmonella Enteritidis ∆ttrA∆pduA agus Salmonella Typhimurium ∆ttrA∆pduA ó táithíní cloacal ná a gcineál fiáin11 . Is féidir le Salmonella é féin a iompar mar bhaictéar eischeallach nó infhéitheach, ag brath ar an stór cothaitheach atá ar fáil, agus tarlaíonn sé mar aistriú idir coilíniú stéigeach agus inmheánú isteach i gcealla óstaigh16. Nuair a dhéantar na baictéir a ionghabháil agus a mharú le macrophages, aistrítear roinnt blúirí peiptíde go dromchla na cille a chuireann antaigin i láthair, á ionchódú ag an gcoimpléasc histocompatibility mór (MHC), aicme II. Spreagann an ceangal peptíde-MHC II seo na limficítí T CD4+. Mar sin féin, má chinneann na baictéir ionradh a dhéanamh ar an gcill óstaigh, agus iad ag dul isteach i gcíteaplasma na macraphage, spreagann an nasc peptide le cineál eile MHC, aicme I, táirgeadh limficítí T CD8+17. Suimiúil go leor, cuireann cealla CD4+ agus CD8+ an patrún céanna de na macrophages i láthair le linn an turgnaimh, fiú ag léiriú freagraí imdhíonachta éagsúla. Ós rud é go léiríonn cealla CD4+ agus CD8+ den chuid is mó limficítí T atá mar chuid den fhreagra imdhíonachta oiriúnaitheach, is cuid den fhreagra imdhíonachta dúchasach iad na macrophages9. Ina theannta sin, thugamar faoi deara go bhfuil limistéir mharcáilte dearfacha níos léirithe ag gríoscáin ná cearca breith, arna dhearbhú ag staidéar roimhe seo inar léirigh gríoscáin a raibh dúshlán orthu le tréithchineálacha mutant, mar shampla, coilíniú stéigeach níos ionraí agus ionfhabhtú sistéamach11. Tugann ár dtorthaí le fios go soláthraíonn an cur chuige imdhíonhistochemistry faisnéis suimiúil faoi iompar na gceall imdhíon-fhreagairt ar orgánaigh iolracha de línte tráchtála éagsúla le linn ionfhabhtaithe le serovars Salmonella enterica. Ina theannta sin, de bharr fianaise an staidéir atá ann faoi láthair gur scriosadh an dá ghéin, fiú amháin i dtréithchineálacha éagsúla Salmonella, ba chúis le baictéir a d’fhág go raibh cill freagartha imdhíonachta níos airde san ósta, rud a léiríonn nach bhfuil an pataigin maolaithe. Is féidir linn a mheas go mb’fhéidir go raibh Salmonella in ann teacht ar mheicníocht marthanais eile ag éirí níos pataiginí fós. Léiríodh sa staidéar roimhe seo go bhfuil gá le riospráid anaeróbach16 go bhfuil gá le hobair riospráid anaeróbach16 a úsáid i gcomhthonnaíocht le hóipérainn cob agus pdu16, rud a fhágann go gcreidimid go bhfuil gá ní hamháin le níos mó géinte a scriosadh ó gach operon18, ach tá againn freisin. smaoineamh ar an tsraith iomlán seo a scriosadh, chun teacht ar níos lú tréithchineálacha pataigineacha de Salmonella enterica.

abhair agus modhanna

D’fhormheas an Coiste Eiticiúil um Úsáid Ainmhithe in Ollscoil Stáit São Paulo (CEUA/Próiseas Unesp—006621/18; an 10 Bealtaine, 2018) na turgnaimh, a rinneadh de réir treoirlínte agus rialacháin ábhartha, sa Phaiteolaíocht Éanúil. Saotharlann de chuid na Roinne Paiteolaíochta, Teriogenology, agus One Health ó Scoil na nEolaíochtaí Talmhaíochta agus Tréidliachta, Ollscoil Stáit São Paulo (FCAV/ Unesp), Jaboticabal, an Bhrasaíl.

Amhrán baictéarach agus tógáil mutant.

Stóráladh na tréithchineálacha baictéaracha a úsáideadh anseo laistigh de mheán cryoprotectant arna chomhdhlúthú ag brat Lysogeny (LB; BD DifcoTM, SAM) arna fhorlíonadh le 30% de ghliocról (Merck, BR-H30402394 228) agus a stóráil i reoiteoir ultra (− 80 céim ) ag an tSaotharlann Paiteolaíochta Éanlaithe ó FCAV/UNESP. Salmonella Enteritidis P125109 (uimhir aontachais: AM933172) agus Salmonella Typhimurium str. Spreagadh 9819 d’fhriotaíocht aigéid nalidixic agus speictinomycin (Nalr Spcr ) agus sholáthair siad an cúlra géiniteach chun tréithchineálacha mutant a thógáil trí theicníc Lambda-dearg20 le mionathruithe, a gcuirtear síos orthu in Saraiva et al.11. Aithnítear baictéar sócháin a tógadh anseo ar an téacs mar SEΔttrAΔpduA (Salmonella Enteritidis ∆ttra∆pduA) agus STMΔttraΔpduA (Salmonella Typhimurium ∆ttrA∆due).

Turgnamh in vivo.

Turgnamh 1 - Salmonella Enteritidis. Fuarthas 1-sicín is tríocha 1-lá ó gach ceann de thrí shínte dhifriúla (srícíní, cearca breithe leathtroma, agus cearca breithe éadroma), arbh fhiú céad agus a hocht n-ainmhí san iomlán, ó ghorlanna tráchtála. Nuair a tháinig siad, scrúdaíodh bun na mboscaí cártaí iompair chun stádas saor ó Salmonella na n-éan a dheimhniú21, agus cuireadh na hainmhithe i gcliabháin mhiotalacha taobh istigh den seomra oiriúnaithe agus fuair siad beatha gan antaibheathach agus uisce ad libitum. Roghnaíodh clár solais 24-h ar an gcéad lá chun an t-ionghabháil uisce agus bia is fearr a chinntiú, ansin glacadh le clár solais 12-h sa chéad seachtain, ag laghdú go 8 h ar na laethanta a bhí fágtha. Ullmhaíodh an inoculum de réir Berchieri Junior et al.22. Chuige seo, rinneadh na cultúir reoite a ionaclú in LB agus goraíodh iad thar oíche ag 37 céim faoi 150 rpm. An lá dár gcionn, aistríodh na cultúir baictéarach isteach i meáin úra agus gor iad ar feadh 18 h faoi na coinníollacha céanna a bhí roimhe seo. Ansin, rinneadh 0.2 ml ó na cultúir ina raibh 108 aonad foirmithe coilíneachta in aghaidh an ml (CFU/ml) a ionaclú ó bhéal le gavage miotalach go díreach isteach i mbarr na n-éan. Cruthaíodh naoi ngrúpa (A go I) agus roinneadh iad go randamach de réir na línte agus na dtréithchineálacha éagsúla (Tábla 7). Ag lá amháin, trí, seacht, agus 14-i ndiaidh an ionfhabhtaithe (dpi), rinneadh trí éan in aghaidh an ghrúpa gach lá, go maidin, trí dhíshuíomh ceirbheacsach chun an chuid medial de tonsils caeca, caecum, a bhaint, agus ileum, agus an chuid distal den ae ar chlé lobe le haghaidh tuilleadh anailíse imdhíon-histochemistry (IHC). Chuige seo, cuireadh samplaí faoi uisce laistigh de n-Hexane pa (n-Hexano pa, Synth, an Bhrasaíl) a bhí cuisnithe roimhe seo i nítrigin leachtach. Díreach tar éis an reo fíocháin, aistríodh é isteach i cryotube 2 mL (Corning, SAM) agus coinníollaithe i nítrigine leachtach. Tar éis na samplála, stóráiltear na fíocháin ag −80 céim go dtí an próiseas le haghaidh IHC.

Turgnamh 2 - Salmonella Typhimurium. Rinneadh an turgnamh seo de réir na saintréithe céanna a luadh thuas i dTurgnamh 1. Roinneadh sé sicín is tríocha (1 lá d'aois) go randamach i naoi ngrúpa (A go I) bunaithe ar a línte agus a dtréithchineálacha (Tábla 7).

Tábla 7. Grúpaí bunaithe de réir na línte agus na tréithchineálacha éagsúla. SE∆ttrA∆pduA, Salmonella Enteritidis ∆ttra∆pduA; STM∆ttra∆pduA, Salmonella Typhimurium ∆ttra∆pduA; wt-SE, Salmonella Enteritidis de chineál fiáin; wt-STM, Salmonella Typhimurium cineál fiáin; NC, rialú diúltach.

Imdhíon-cheimic.

Alt fíocháin. Aistríodh na samplaí a bailíodh ó −80 céim go cryostat (Leica CM1860, Leica Biosystems Nussloch GmbH, an Ghearmáin) ag −22 céim áit ar cuireadh bac ina n-aonar i gcomhdhúil OCT (Tissue-Tek®, Sakura Finetek Europe BV, an Ísiltír) in aghaidh an 30 nóiméad roimhe sin. go dtí alt 6 µm ag baint úsáide as lanna indiúscartha próifíl íseal (Leica 819, Leica Biosystems Nussloch GmbH, an Ghearmáin). Is fiú a thabhairt faoi deara go ndearnadh ailt ag −22 céim , ach amháin codanna ae, a rinneadh ag −15 céim . Ullmhaíodh sleamhnáin ina raibh trí athrá de roinn gach orgán in aghaidh na cille imdhíonachta marcáilte, le tanú idir gach athrá. Ag baint úsáide as scuab péinte, cuireadh na gearrthacha rannáin fíocháin ar sleamhnáin histeolaíocha réamhchóireáilte le polai-l-lísín (Sigma-Aldrich, An Ríocht Aontaithe, Cat uimh. P4832) e silane (Sigma-Aldrich, SAM. Cat uimh. 440574). Stóráladh na sleamhnáin ag −20 céim ina dhiaidh sin go dtí go staining IHC. Staining cealla imdhíonachta. Ar an gcéad dul síos, cuireadh na sleamhnáin faoi uisce in aicéatón cuisnithe 200 ml (Aicéatón PA-ACS, Synth, an Bhrasaíl) agus goraíodh iad ag −20 céim ar feadh 10 nóiméad. Tar éis sin, aistríodh na sleamhnáin isteach i seomra taise (EasyPath®, an Bhrasaíl) ag teocht an tseomra ar feadh 5 min chun na samplaí a thriomú. Nitear na sleamhnáin ina dhiaidh sin le PBS agus fágadh lochán ar feadh 5 nóiméad chun díhiodráitiú fíocháin a sheachaint. Deich, cuireadh fíocháin faoi uisce i 200 ml de 4% H2O2 in aghaidh 10 nóiméad in áit dorcha agus nite arís le PBS. Triomaíodh an limistéar timpeall na gcodanna fíocháin le páipéar ionsúiteach agus seachnaíodh an sampla le peann hidreafóbach (Dako Pen, Dako Denmark A/S, an Danmhairg). Rinneadh an chéim níocháin ag fágáil locháin arís agus arís eile mar a bhí roimhe seo. Baineadh úsáid as an trealamh saor ó bhiotín Luiche agus Coinín Sainiúil HRP/DAB IHC Braite-Micripolaiméir (Abcam ©, SAM) chun na cealla imdhíonachta a stainiú, ag roghnú modh Coimpléasc Avidin-Biotin Streptavidin Peroxidase (ABC). Chun seo, baineadh an lochán, agus cuireadh braoiníní imoibrí blocála dath cúlra neamh-shonracha leis na fíocháin. Coinníodh na sleamhnáin taobh istigh den seomra taise in áit dorcha ar feadh 30 nóiméad, rinneadh an chéim níocháin arís agus arís eile, agus 200 µL d'antasubstaint phríomhúil (CD Frith-Chicken Luiche4-UNLB; Luiche Frith-Chicken CD{{34} } UNLB; Monaicítí Frith-Chicken Luiche/Macrophage-UNLB, Southern Biotech, SAM) caolaithe i gcion 1:200 (v/v) san imoibrí caolaithe antashubstainte (caolaitheoir antashubstaintí, Abcam©, SAM) ina dhiaidh sin. Goradh na sleamhnáin ag 4 céim ar feadh 18 h. An lá dár gcionn, nigh na sleamhnáin mar a bhí roimhe seo. Cuireadh deich braoin den antashubstaint thánaisteach (Reveal Complement, Abcam©, USA) leis tar éis an PBS breise a bhaint, agus cuireadh an seomra taise i dtimpeallacht dorcha ar feadh 30 nóiméad. Ina dhiaidh sin, caolaíodh titim de 3,3′-diaminobenzidine (DAB Chromogen 50×, Abcam©, USA) i 1 ml d’fhoshraith (DAB Substrate, Abcam©, USA), cé acu toirt is leor do thrí shleamhnán, agus cuireadh leis é. na hailt fíocháin. Nóiméad ina dhiaidh sin, cuireadh na sleamhnáin faoi uisce i 200 ml dH2O ar feadh 5 nóiméad. Tar éis sin, aistríodh iad chuig ciúb plaisteach ina raibh Harris hematoxylin (Êxodo Científca, an Bhrasaíl) agus fágadh iad ar feadh 1 nóiméad. Níos déanaí, nite na sleamhnáin ar feadh 10 nóiméad faoi uisce reatha ag brú íseal. Cuireadh na sleamhnáin faoi bhráid an tsraith alcóil-xilene (70% Alcól, 90% Alcól, 100% Alcól, Xylene I, agus Xylene II). Sa deireadh, cuireadh na clúdaigh clúdaigh ar na sleamhnáin tar éis titim de mheán gléasta gan uisce a chur leis (Entellan®, Merck, an Bhrasaíl). Tógadh íomhánna ó na codanna fíocháin go randamach, ag roghnú cúig réimse radhairc randamacha, ag baint úsáide as micreascóp optúil (lionsa 400 ×) (Coleman®, samhail N-120) le hoiriúnóir ceamara digiteach, le haghaidh tuilleadh anailíse staitistiúla (Fíor 1). ).

Anailís sonraí.

cistanche tubulosa-feabhas a chur ar chóras imdhíonachta

Ríomhadh céatadán na gcealla agus na macraphages CD{{0}} agus CD8+ trí úsáid a bhaint as Image-Pro Plus v.4.5.0.29 (MediaCybernetics, USA). Rinneadh iad a chainníochtú mar luachanna céatadáin de réir limistéar dearfach marcóir cille imdhíonachta/achar iomlán. Rinneadh anailís staitistiúil agus grafaic ag baint úsáide as na bogearraí GraphPad Prism v.8.0.1 le haghaidh macOS (GraphPad Sofware, La Jolla California, SAM) agus cuireadh sonraí isteach chuig Anailís Athraitheas (ANOVA) agus ilchomparáidí Bonferroni ina dhiaidh sin, ag cur san áireamh leibhéal suntasachta níos ísle ná 5% (P Níos lú ná nó cothrom le 0.05).

Figiúr 1. Cuid den caecum de broiler ionfhabhtaithe le Salmonella Typhimurium ∆trA∆pduA a thaispeánann imdhíon-imoibrithe i macrófagáin, 7 lá iar-ionfhabhtaithe (×400; Avidin-Biotin Streptavidin Peroxidase, frithdhaite le Hematoxylin).

Tagairtí

1. Freitas Neto, OC, Penha Filho, RC & Barrow, PA Foinsí de salmonellosis neamh-tíofóideach daonna: Athbhreithniú. Braz. J. Poult. Sci. 12(1), 1–11. https://doi.org/10.1590/S1516-635X2010000100001 (2010).

2. Geimhreadh, SE et al. Soláthraíonn athlasadh putóige glacadóir leictreon riospráide do Salmonella. Dúlra 467, 426–429. https://doi.org/ 10.1038/nature09415 (2010).

3. Hinsley, AP & Berks, BC Sainiúlacht na gconairí riospráide a bhaineann le laghdú comhdhúile sulfair ag Salmonella enterica. Micribhitheolaíocht (Léamh) 148, 3631–3638. https://doi.org/10.1099/00221287-148-11-3631 (2002).

4. Tiennimitr, P. et al. Ligeann athlasadh stéig Salmonella ethanolamine a úsáid chun dul san iomaíocht leis an micribiota. Proc. Natl. Acad. Sci. Stáit Aontaithe Mheiriceá 108, 17480–17485. https://doi.org/10.1073/pnas.1107857108 (2011).

5. Staib, L. & Fuchs, Rialachán TM ar fhúcóis agus 1,2-úsáid própánaidiol ag Salmonella enterica serovar Typhimurium. Tosaigh. Micribhiol. 6, 1116. https://doi.org/10.3389/fmicb.2015.01116 (2015). 6. Horswill, AR & Escalante-Semerena, JC Catabólacht Propionate i Salmonella Typhimurium LT2: Cuimsíonn dhá aonad éagsúla tras-scríofa an lócas prp ag 8.5 ceinteasóm, ionchódaíonn prpR ball den teaghlach gníomhaithe sigma-54, agus an prp ionann operon. J. Baictéariol. 179, 928–940. https://doi.org/10.1128/jb.179.3.928-940.1997 (1997).

7. Soria, MC, Soria, MA, Bueno, DJ & Terzolo, AD Comparáid a dhéanamh idir 3 mhodh cultúir agus measúnachtaí PCR maidir le Salmonella Gallinarum agus Salmonella Pullorum a bhrath i mbeatha éanlaithe clóis. Éanlaith. Sci. 92, 1505–1515. https://doi.org/10.3382/ps.2012-02926 (2013).

8. Van Immerseel, F. et al. Dinimic insíothlú cille imdhíonachta i lamina caecal propria sicíní tar éis ionfhabhtú nua-naíoch le brú Salmonella Enteritidis. Dev. Comp. Imdhíonól. 26, 355–364. https://doi.org/10.1016/s0145-305x(01)00084-2 (2002).

9. Montassier, HJ Fisiopatologia do sistema imdhíonachta. In Doenças das Aves (eagráin AndreattiFilho, RL et al.) 467–489 (FACTA, 2020).

10. Price-Carter, M., Tingey, J., Bobik, TA & Roth, JR Tacaíonn an glacadóir leictreon eile tetrathionate le B12-fhás anaeróbach cleithiúnach Salmonella enterica serovar Typhimurium ar eatánólamine nó 1,{{4} }própanediol. J. Baictéariol. 183, 2463–2475. https://doi.org/10.1128/JB.183.8.2463-2475.2001 (2001).

11. Saraiva, M. et al. Ról na ngéinte ttrA agus pduA le haghaidh serovars Salmonella enterica i múnla ionfhabhtaithe sicín a mhíniú. Pathol Éanúil. https://doi.org/10.1080/03079457.2021.1909703 (2021).

12. Beal, RK, Wigley, P., Powers, C., Barrow, PA & Smith, AL Freagraí imdhíonachta tras-imoibríocha ceallacha agus humoral ar serovars Salmonella enterica Typhimurium agus Enteritidis a bhaineann le cosaint ar athdhúshlán heitreolaíoch. Tréidlia. Imdhíonól. Imdhíonpathol. 114, 84–93. https://doi.org/10.1016/j.vetimm.2006.07.011 (2006).

13. Geimhreadh, SE & Bäumler, AJ Gacht iontach: Chun dul san iomaíocht leis an micribiota gut, tiomáineann Salmonella a óstach chun glacadóir leictreoin riospráide a sholáthar. Miocróib Gut 2, 58–60. https://doi.org/10.4161/gmic.2.1.14911 (2011).

14. Rivera-Chávez, FI et al. Úsáideann Salmonella tacsaithe fuinnimh chun leas a bhaint as athlasadh intestinal. PLoS Pathog. 9, 1003267. https:// doi.org/10.1371/journal.ppat.1003267 (2013).

15. Khan, CM Te Idirghníomhartha Dinimiciúla idir Salmonella agus an microbiota, laistigh de nideoige dúshlánach an chonair gastrointestinal. Int. Sc. Res. Ní. 2014, 1–23. https://doi.org/10.1155/2014/846049 (2014).

16. Yoo, W., Kim, D., Yoon, H. & Ryu, S. Einsím IIANtr rialaíonn ionradh Salmonella trí 1,2-catabolism própánáideach agus propionáit. Sci. Rep. 7, 44827. https://doi.org/10.1038/srep44827 (2017).

17. Salyers, AA & Whitt, LL Cosaintí Óstach i gcoinne pataiginí baictéaracha: Cosaintí fíocháin agus fola. In Pathogenesis Baictéarach: Cur Chuige Móilíneach (eag Salyers, AA & Whitt, DD) 16–29 (ASM Press, 1994).

18. Góes, V. et al. Caillteanas géine taobh-chéim Salmonella Heidelberg ar riachtanais riospráide i múnla ionfhabhtú sicín. Microb Pathog. 171, 105725. https://doi.org/10.1016/j.micpath.2022.105725 (2022).

19. Barrow, PA, Hassan, JO & Berchieri, A. Jr. Laghdú ar eisfhearadh fecal de bhrú Salmonella Typhimurium F98 i sicíní vacsaínithe le beatha agus maraíodh orgánaigh S. Typhimurium. Eipidéim. Infect. 104, 413–426. https://doi.org/10.1017/s095026880 0047439 (1990).

20. Datsenko, KA & Wanner, BL Díghníomhú aonchéime de ghéinte crómasómacha in Escherichia coli K-12 ag baint úsáide as táirgí PCR. Proc. Natl. Acad. Sci. Stáit Aontaithe Mheiriceá 97, 6640–6645. https://doi.org/10.1073/pnas.1201632977 (2000).

21. Zancan, FB, Berchieri Junior, A., Fernandes, SA & Gama, NMSQ Salmonella spp. imscrúdú i mbosca iompair na n-éan lae. Braz. J. Micribhith. 31, 230–232. https://doi.org/10.1590/S1517-83822000000300016 (2000).

22. Berchieri, A. Jr., Murphy, CK, Marston, K. & Barrow, PA Tuairimí ar marthanacht agus tarchur ingearach Salmonella enterica serovars Pullorum agus Gallinarum i sicíní: Éifeacht an chúlra géiniteach baictéarach agus óstach. Pathol Éanúil. 30, 221–231. https://doi.org/10.1080/03079450120054631 (2001).