Éifeachtaí Cosanta Micrimhilseogra Cille Sinsear Inotelial Ar Dhíobháil Ceall Ratach Duán de bharr Ang II
Mar 11, 2022
Teibí.Is féidir le Hipirtheannas Ainsealach mar thoradhdamáiste duáin,ar a dtugtar nephropathy hypertensive nó hypertensive nephrosclerosis. Tá tuiscint bhreise ar na meicníochtaí móilíneacha trína bhforbraítear nephropathy hipirtheannas riachtanach chun diagnóis agus cóireáil éifeachtach a dhéanamh. Rinne an staidéar seo imscrúdú ar na meicníochtaí trína ndeisíonn cealla giniúna inotelial (EPCanna) francach príomhúilduáncealla (PRKs). Baineadh úsáid as ELISA, Kit Counting Cell-8 agus measúnuithe cíteaiméadrachta sreafa chun anailís a dhéanamh ar éifeachtaí EPCanna nó EPC-MVanna ar an strus ocsaídiúcháin, athlasadh, iomadú cille, apoptosis agus timthriall PRKanna a tharlódh ag AngII. Bunaíodh múnla díobhála PRK ag baint úsáide as angiotensin II (Ang II). Tar éis ionduchtú Ang II, laghdaíodh iomadú PRK, méadaíodh apoptosis agus cuireadh bac ar an timthriall cille ag an gcéim G1 roimh dul isteach sa chéim S. Fuarthas amach gur mhéadaigh leibhéil na speiceas ocsaigin imoibríoch agus malondialdehyde, agus laghdaíodh leibhéil glutathione peroxidase agus superoxide dismutase. Ina theannta sin, méadaíodh go suntasach leibhéil na cítocíní athlastacha IL-1 , IL-6 agus TNF-. Mar sin, rinne Ang II damáiste do PRKanna trí strus ocsaídiúcháin a spreagadh agus an freagra athlastach a chur chun cinn. Mar sin féin, nuair a rinneadh PRKanna a chomhshaothrú le EPCanna, laghdaíodh an damáiste a tharlódh ó Ang II go suntasach. Bhailigh an staidéar reatha na micrishicle (MVanna) a bhí faoi rún ag EPCanna agus a chomhshaothraíodh iad le PRKanna spreagtha ag Ang II, agus shainaithníodh gur choinnigh EPC-MVanna a n-éifeacht chosanta ar PRKanna. Mar fhocal scoir, cosnaíonn EPCanna PRKanna ó dhamáiste de bharr Ang II trí MVanna rúnda.
Feabhsaíonn an CISTANCHE GALAR Duán/Duánach
Réamhrá
Is fachtóir riosca é Hipirtheannas maidir le minicíocht galair cardashoithíoch agus cerebrovascular, agus an mortlaíocht a bhaineann leo (1). Tá anduáinIs féidir le Hipirtheannas a chur faoi deara agus tá siad ar cheann de na sprioc-orgáin damáiste Hipirtheannas (2). ainsealachgalar duáin(CKD) ar cheann de na príomhchúiseanna le básmhaireacht mhéadaithe i measc daoine aonair a bhfuil brú fola ard acu ar fud an domhain le fiche bliain anuas (3,4). Mar sin, tá géarghá le cóireáil nephropathy hipirtheannas a chur chun cinn agus staidéar a dhéanamh ar a meicníocht paiteolaíoch. Léirigh staidéir roimhe seo go ndearna angiotensin II (Ang II) damáiste soithíoch agus go raibh ról lárnach aige i galair soithíoch trí mheicníochtaí éagsúla, mar shampla apoptosis a aslú (5), gabháil timthriall cille (6), méadú ar leibhéil speiceas ocsaigin imoibríoch (ROS). 7), an freagra ar strus ocsaídiúcháin a chur chun cinn trí mhéadú ar an secretion malondialdehyde (MDA), agus laghdú ar an secretion glutathione peroxidase (GSH-Px) agus superoxide dismutase (SOD) (8,9). Cuireann Ang II chun cinn freisin táirgeadh fachtóirí a bhaineann le athlasadh, amhail IL-6, IL-1 agus TNF- (10-12). Mar sin baineadh úsáid as damáiste de bharr Ang II chun hipirtheannas in vitro a shamhaltú, lena n-áirítear i bhfrancach príomhúilduáncealla (PRKanna) (13,14).
D'othair lefeidhm duánachIs iad lagú, damáiste do chealla endothelial agus athghiniúint agus deisiú laghdaithe na príomhchúiseanna le cailliúint microvesicles peritubular (MVanna) (15). Is féidir le cealla progenitor endothelial (EPCs) a dhíorthaítear ó smeara deisiú endothelial a chur chun cinn (16,17). Léirigh staidéir roimhe seo gur féidir le EPCanna athghiniúint cardashoithíoch a fheabhsú (18) agus angiogenesis a rialáil (19), chomh maith le héifeachtaí teiripeacha a imirt ar ghéarmhíochaine.duánachgortú ischemia-reperfusion (20) agus in othair letrasphlandú duánach(21). Mar sin féin, chomh fada agus is eol dúinn, níor tuairiscíodh éifeacht EPCanna ar nephropathy hipirtheannas roimhe seo. Rinneamar hipitéisiú go bhféadfadh éifeacht chosanta a bheith ag EPCanna i gcoinne nephropathy hipirtheannas iduánachcealla. Tá MVanna secreted go leanúnach ag éagsúlacht cealla sa chorp, mar shampla cealla epithelial, cealla meall agus gaschealla, agus tá siad ann i roinnt sreabhán coirp, mar shampla fuil, fual agus bainne, áit a ndéanann siad idirghabháil ar fheidhmeanna bitheolaíocha (22). Thug fianaise carntha le fios go bhfuil dlúthbhaint ag éifeacht chosanta EPCanna le scaoileadh MVanna (23,24) Sa staidéar seo, rinneadh scrúdú ar chur i bhfeidhm ionchasach EPC-MVanna do chóireáil nephropathy hipirtheannas trí imscrúdú a dhéanamh ar na héifeachtaí agus na meicníochtaí cosanta. trína gcosnaíonn EPC-MVanna ar ghortú PRK de bharr Ang II, chun bonn teoiriciúil bitheolaíoch a sholáthar do chóireáil nephropathy hipirtheannas.
Eochairfhocail:EPC-MVs, nephropathy hipirtheannas, Ang II, ROS, MVs, athlasadh, duán, duánach
abhair agus modhanna
Ainmhithe.Fuarthas iomlán de 12 8-seachtain d’aois fireann Wistar-Kyoto (WKY) francaigh saor ó phataigin ar leith (meáchan, 80-120 g) ó Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd. (ceadúnas SCXK, Guangdong, 2015-0063). Cuireadh na francaigh i seomra le teocht agus taise leanúnach (teocht, 23±2˚C; taise, 50±10 faoin gcéad ), faoi thimthriall éadrom/dorcha 12-h le rochtain ad libitum ar bhia caighdeánach francach agus uisce i caighean polaistiréin. D'fhormheas Coiste um Chúram agus Úsáid Ainmhithe Ollscoil Leighis Hainan (Haikou, an tSín; formheas uimhir. HYLL-2021-053) na turgnaimh ainmhithe go léir, agus rinneadh iad de réir threoirlínte na nInstitiúidí Náisiúnta Sláinte (25).
Feabhsaíonn CISTANCHE FEIDHM Duán/Duánach
Leithlisiú agus cultúr PRKanna.WKY francaigh a bhfuil rochtain saor in aisce ar uisce tar éis troscadh ar feadh 12 h roimh an turgnamh. Rinneadh lucha WKY a eothánú trí úsáid a bhaint as instealladh ionperitoneal de sóidiam pentobarbital (200 mg/kg meáchan coirp), ansin anduáinbaineadh aiseipteach, agus an chuid cortical denduánexcised agus trasphlandú isteach eascra beag. Tá anduánachGearradh cortex ina blúirí fíocháin de ~1 mm3 , nite faoi thrí le PBS (Gibco; Thermo Fisher Scientific, Inc.), lártheifneoirithe ag 1,000 xg ag 25˚C ar feadh 5 nóiméad agus caitheadh suas an súthach. Cuireadh na blúirí fíocháin le collagenase cineál I (Gibco; Thermo Fisher Scientific, Inc.) ag tiúchan deiridh 1 g/l, agus rinneadh na blúirí fíocháin a ascalaíodh agus a dhíleá ag 37˚C ar feadh 30 nóim. Tar éis scagachán trí scáileán cruach dhosmálta 200-mogalra (0.075 mm), scartha na cealla le lártheifneoiriú grádán dlúis Ficoll (Sigma-Aldrich; Merck KGaA) (26). Tar éis lártheifneoraithe ag 1,000 xg ag 25˚C ar feadh 2 nóiméad, bailíodh an fionraí idirmheánach agus meascadh é le meán MEM/F12 (Gibco; Thermo Fisher Scientific, Inc.), ionaclaithe i bpláta 6 tobar agus saothraithe ag 37˚C faoi 5 faoin gcéad CO2. Tar éis 24 h, baineadh an meán agus cuireadh meán úr ina ionad, agus an neamhcheangailteduánachCaitheadh cealla agus fíocháin. Tar éis 48 h, baineadh an meán arís, nitear na cealla faoi dhó le PBS agus sainíodh iad mar PRKanna (27,28); ba é an príomh-chomhdhéanamh cealla mesangial glomerular francach. Saothraíodh PRKanna ar feadh trí ghlúin agus cuireadh cóireáil orthu le Ang II (1 µM; Sigma-Aldrich; Merck KGaA) ag 37˚C ar feadh 24 h chun an PRK a bhunúdamáiste duánachMionsamhail. An athlasadh de bharr Ang II i bhfrancachduánachrinneadh cealla epithelial tubular mar a thuairiscigh Nair et al (29) roimhe seo.
Sainaithníodh PRKanna trí úsáid a bhaint as measúnacht imdhíonfhluaraiseachta (IF).Tar éis sruthlú trí huaire le PBS agus a shocrú le paraformaldehyde 4 faoin gcéad ag 25˚C ar feadh 1 h, gor na cealla (25˚C) le Triton X-100 ar feadh 2 h, agus ina dhiaidh sin 5 faoin gcéad BSA (Beijing Solar Science & Technology Co., Ltd.) ag 25˚C ar feadh 30 nóiméad. Ansin goradh na PRKanna thar oíche sa dorchadas le ‑actin matán réidh (‑SMA; 1 µg/ml; cat. uimh. ab7817; Abcam) agus vimitín (1:250; cat. uimh. ab92547; Abcam) ag 4˚C. Tar éis sruthlú trí huaire le PBS, goradh na cealla le antasubstaintí tánaisteacha Alexa Fluor® 488- (1:100; cat. uimh. ab150077; Abcam) nó lipéadaithe 647 (1:200; cat. uimh. ab150075; Abcam) ag 37 ˚C ar feadh 1 h. Ansin, daiteadh na cealla le DAPI (0.5 µg/ml; Institiúid Biteicneolaíochta Beyotime) ag 25˚C ar feadh 5 nóiméad. Ar deireadh, gabhadh íomhánna ag baint úsáide as micreascóp fluaraiseachta (méadú, x400; Leica Microsystems GmbH).
Cultúr agus sainaithint EPCanna.Rinneadh an femur francach agus an tibia a roinnt agus rinneadh PBS steiriúil a shruthlú ar gach feadán smior. Rinneadh an meascán a bhí mar thoradh air a lártheifneoiriú (1,000 xg; 25˚C; 15 min) agus cuireadh na cáithníní ar fionraí arís i meán MEM/F12. Rinneadh cealla a leithlisiú le lártheifneoiriú grádán dlúis Ficoll (Sigma-Aldrich; Merck KGaA) (1,000 xg; 25˚C; 20 min) agus cuireadh i bhfleascán cultúir 25-cm2 atá brataithe le fibronectin (BD Biosciences). Coinníodh cealla i meán iomlán faoi choinníollacha caighdeánacha (37˚C; 5 faoin gcéad CO2). Athraíodh an meán cultúir tar éis 4 lá, agus saothraíodh na cealla greamaitheacha ar feadh 3 lá breise (30). Úsáideadh staining lipoprotein ísealdlúis aicéitilated Dil (Dil-Ac-LDL) (Beijing Solar Science & Technology Co., Ltd.) chun EPCanna a shainaithint. Maidir leis an gcóras comhchultúr, cuireadh PRKanna (1x104 ) leis an seomra íochtair de phláta comhshaothraithe (Corning, Inc.) ar feadh 24 h agus ansin cuireadh Ang II (1 µM) nó 200 µl PBS agus EPCanna (3x104 ). curtha leis an seomra uachtarach agus gortha ag 37˚C ar feadh 24 h sular rinneadh anailís bhreise ar fheidhm na cille. Agus PRKanna á scagadh agus an chomhréir is fearr de EPCanna, ba iad na comhréireanna líon cille ná 2:1, 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6 agus 1:7.
EPC-MVanna a ullmhú. Saothraíodh EPCanna ar feadh 7 lá mar a thuairiscítear roimhe seo (30), nite faoi dhó le PBS agus serum-starradh ar feadh 12 h. Ina dhiaidh sin, bailíodh agus lártheifneoiríodh meán MEM/F12 ina raibh EPCanna saothraithe ag 4˚C (1,000 xg; 15 nóim), agus asbhaineadh an comhshnáthán ag 4˚C (100,{{10} xg; 60 nóim) chun EPC-MVanna rúnda a bhailiú. Tar éis é a leabú i roisín eapocsa Pon 812 (Structure Probe, Inc.), cuireadh é ag 37˚C thar oíche. Ansin, cuireadh réiteach fosaithe leictreon micreascóp (Wuhan Service Technology Co., Ltd.) ar feadh 4 h, agus aicéatáit úráiniam (2 faoin gcéad; Wuhan Service Technology Co., Ltd.) agus chiotráite luaidhe (Wuhan Service Technology Co., Ltd.) ) a dhaite ag 25˚C ar feadh 15 nóiméad. Deimhníodh MVanna trí mhicreascópacht leictreoin tarchurtha. Sa chóras comhchultúr, cuireadh 50 µg/ml EPC-MVs (31) leis an seomra uachtarach de phláta measúnachta Transwell, agus cuireadh páirceanna leis an seomra íochtair mar a thuairiscítear roimhe seo, agus goraíodh iad ar feadh 24 h.
Measúnacht iomadú cille.Díleádh PRKanna le trypsin, ionaclaithe i bplátaí 96-tobar ag dlús 3x103 cealla/tobar agus saothraíodh iad ar feadh 24 h. Tomhaiseadh an dlús optúil ag 450 nm trí úsáid a bhaint as imoibrí 10 µl Cell Counting Kit-8 (CCK-8; Beijing Solar Science & Technology Co., Ltd.) ag 37˚C ar feadh 60 nóiméad, de réir threoracha an mhonaróra, chun an ráta iomadú cille.
Feabhsaíonn CISTANCHE Péine Duán/Duánach
Measúnacht apoptosis cille.Rinneadh measúnacht apoptosis cille ag baint úsáide as trealamh Braite Apoptosis V-FITC (BD Biosciences) de réir threoracha an déantóra. Baineadh PRKanna, nite faoi dhó le PBS fuar oighir (Gibco; Thermo Fisher Scientific, Inc.) agus cuireadh ar fionraí arís iad i maolán ceangailteach 500 µl. Ansin goradh na PRKanna athfhionraí le 5 µl Annexin V-FITC agus 5 µl PI sa dorchadas ar feadh 15 nóiméad ag 23±2˚C. Rinneadh measúnú ar apoptosis cille ag baint úsáide as cíteiméadracht sreafa (FCM; FACSCanto II; bogearraí BD FACSChorus™, leagan: 1.0; BD Biosciences).
comhleá EPC-MV agus PRK.Chun breathnú ar cé acu an raibh EPC-MVanna comhleádh le PRKanna, lipéadaíodh EPC-MVanna le dath fluaraiseach leabaithe membrane lipid (PKH26) roimh chomhghorthú. Go hachomair, cuireadh 50 µg/ml EPC-MV le chéile le 2 ml PKH26 (2x10-6 M; Sigma-Aldrich; Merck KGaA) agus measctha ag 23±2˚C ar feadh 5 nóiméad. Cuireadh an meascán lipéadaithe le 2 ml 1 faoin gcéad BSA (v) agus lártheifneoirithe ag 100,000 xg ag 4˚C ar feadh 60 nóiméad, ansin rinsithe le PBS fuar. Cuireadh an deascán ar fionraí i meán 1 ml MEM/F12, curtha le PRKanna agus gor ag 37˚C ar feadh 24 h. Ar deireadh, cuireadh 1 µg/ml DAPI le haghaidh staining núicléach ag 25˚C ar feadh 15 nóiméad. Fuarthas íomhánna cille ag baint úsáide as micreascóp fluaraiseachta (méadú, x400; Leica Microsystems GmbH).
Measúnacht timthriall cille.Rinneadh an measúnú ar thimthriall cille ag baint úsáide as an trealamh Braite Timthriall Cille (BD Biosciences). Baineadh EPCanna nó PRKanna (1x106 ) , iad a ní faoi dhó le PBS agus ansin seasta iad i 500 µl 70 faoin gcéad eatánól fuar oighir ar feadh 2 h ag 25˚C. Ansin nite na cealla faoi dhó le PBS fuar agus goraíodh iad in PI (400 µl) agus RNase (100 µl) ar feadh 30 nóiméad ag 37˚C sa dorchadas. Braitheadh an comhartha PI ag baint úsáide as FCM (FACSCanto II). Rinneadh na céatadáin de na cealla sa chéim G1, S agus G2 a chomhaireamh agus a chur i gcomparáid le bogearraí FlowJo (leagan 10.0.6; FlowJo LLC).
Tomhas ROS de réir FCM.Saothraíodh na PRKanna go 60-70 faoin gcéad comhlí agus baineadh iad trí trypsinúchán. Goradh gach cill le 1.0 µM 2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate ar feadh 15 nóiméad ag 37˚C. Ansin nite cealla faoi dhó le PBS agus rinneadh anailís orthu trí FCM chun ROS a bhrath ag baint úsáide as léasair 488 nm le haghaidh excitation agus léasair 535 nm chun é a bhrath.
ELISA.Tar éis lártheifneoraithe (1,000 xg; 25˚C; 5 min), bailíodh forshnaidhm cille gach foghrúpa chun anailís a dhéanamh ar leibhéil MDA, GSH-Px, SOD agus na fachtóirí athlastacha IL-6, IL- 1 agus TNF- . Úsáideadh na feisteáin seo a leanas de réir threoracha an déantóra: Trealamh measúnaithe Micrimhilseogra MDA (cat. uimhir. BC0020; Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd.), trealamh measúnaithe GSH-Px (cat. uimh. BC1195; Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd.), trealamh braite gníomhaíochta SOD (cat. uimh. BC0170; Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd.), paca francach IL-1 ELISA (cat. uimh. RLB{ {13}}; R&D Systems, Inc.), paca francach IL-6 Quantikine ELISA (cat. uimh. R6000B; R&D Systems, Inc.) agus fearas francach TNF Quantikine ELISA (cat. uimh. RTA00; R&D Systems, Inc. ).
Anailís staitistiúil.Rinneadh na turgnaimh go léir arís faoi thrí, agus cuirtear na sonraí go léir in iúl mar an meán ± SD. Rinneadh anailís ar na sonraí trí úsáid a bhaint as bogearraí SPSS leagan 21.0 (IBM Corp.). Rinneadh measúnú ar dhifríochtaí idir grúpaí iolracha trí úsáid a bhaint as tástáil aontreo ANOVA agus Dunnett i ndiaidh hoc. p<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistically="" significant="">
Torthaí
Identification of isolated EPCs and PRKs. The isolated EPCs were identified using Dil‑Ac‑LDL staining (Fig. 1A). Microscopic counting revealed that the degree of coincidence between red (Dil‑Ac‑LDL staining) and blue (nuclear staining with DAPI) fluorescence was >90 faoin gcéad , ag deimhniú go raibh EPCs scoite amach go rathúil . Rinneadh anailís ar PRKanna ar leithlis trí IF (vimentin/ -SMA). Léirigh na torthaí go raibh leibhéal slonn na vimentin/ -SMA i PRKanna ard agus dearfach, rud a thugann le tuiscint gur leithlisiú rathúil PRKanna (Fíor 1B).
An cóimheas is fearr idir EPCanna agus PRKanna.Scrúdaíodh an éifeacht a bhaineann le comhréireanna éagsúla PRKanna/EPCanna a chomhcheangal i gcóras comhchultúr, agus fuarthas amach nach raibh rátaí iomadaithe méadaithe ag PRKanna a d’fhás ag cóimheas de 1:3 PRK/EPCanna i gcomparáid le PRKanna a d’fhás le 2: Cóimheas 1, 1:1 nó 1:2 de PRK/EPCs (Fíor 1C). Ina theannta sin, tháinig méadú suntasach ar iomadú PRK i gcomparáid le EPCanna (1:3) mar thoradh ar chomhréireanna méadaitheacha EPCanna (1:4, 1:5, 1:6 agus 1:7). Mar sin, roghnaíodh cóimheas de 1:3 PRK/EPC le haghaidh staidéar breise chun trasnaíocht fhéideartha ó EPCanna iomarcacha i dturgnaimh ina dhiaidh sin a chosc.
Éifeacht chomhchultúr an EPC ar dhamáiste de bharr Ang II.Rinneadh PRKanna (1x104 ) a ionaclú 24 h roimh ré isteach san urrann íochtair de phláta Transwell. Bhí 200 µl PBS sa seomra uachtarach sa ghrúpa rialaithe agus 200 µl EPC (3x104 ) sa ghrúpa turgnamhach. Chun samhaildamáiste duáin,Cuireadh 1 µM Ang II leis an urrann íochtair. Tar éis 24 h, rinneadh measúnachtaí CCK-8 agus FCM chun ráta iomadaithe PRKanna a thomhas. Bhí laghdú suntasach tagtha ar PRKanna a fuair Ang II in éagmais EPCanna (P<0.05) proliferation="" rate="" (fig.="" 1d),="" and="" increased="" apoptosis="" rate="" (fig.="" 1e)="" and="" cell="" cycle="" arrest="" in="" the="" g1="" phase="" (fig.="" 1f)="" compared="" with="" the="" control="" group,="" while="" prks="" co‑cultured="" with="" epcs="" receiving="" ang="" ii="" showed="" the="" reverse="" effects.="" these="" results="" indicated="" that="" co‑culture="" with="" epcs="" can="" reduce="" the="" damage="" induced="" by="" ang="" ii="" in="" a="" rat="">duánsamhail cille.
Cosnaíonn EPCanna PRKanna ó dhamáiste a tharchuirtear le Ang II, scrúdaíodh na leibhéil struis ocsaídiúcháin a chothaíonn Ang II i PRKanna atá comhshaothraithe le EPCanna. Léirigh torthaí an mheasúnaithe FCM gur tháinig méadú suntasach ar Ang II (P<0.05) the="" levels="" of="" ros="" in="" prks="" in="" the="" absence="" of="" epcs,="" while="" prks="" co‑cultured="" with="" epcs="" had="" comparatively="" lower="" ros="" levels="" (fig.="" 2a).="" similarly,="" the="" elisa="" results="" indicated="" that="" the="" levels="" of="" secreted="" mda="" (fig.="" 2b)="" were="" increased="" and="" gsh="" and="" sod="" (fig.="" 2c="" and="" d)="" levels="" were="" decreased="" in="" prks="" receiving="" ang="" ii,="" while="" prks="" receiving="" ang="" ii="" and="" co‑cultured="" with="" epcs="">
Figure 1. Recovery of PRKs by co‑culture with EPCs following injury induced by Ang II. (A) Confirmation of the isolation of EPCs via Dil‑Ac‑LDL staining. Magnification, x100. (B) Confirmation of the isolation of PRKs using an immunofluorescence assay. Magnification, x400. (C) CCK‑8 analysis of the effects of different proportions of co‑cultured EPCs on the proliferation of PRKs. NS P>0.05 vs. PRKanna: EPCanna, grúpa 2:1; *P<0.05 vs.="" prks:epcs,="" 2:1="" group.="" (d)="" cck‑8="" analysis="" of="" the="" effects="" of="" co‑cultured="" epcs="" on="" the="" proliferation="" rate="" of="" ang="" ii‑treated="" prks.="" fcm="" analysis="" of="" the="" effects="" of="" co‑cultured="" epcs="" on="" the="" (e)="" apoptosis="" and="" (f)="" cell="" cycle="" of="" ang="" ii‑treated="" prks.="" *=""><0.05 vs.="" control;="" #=""><0.05 vs.="" ang="" ii.="" ang="" ii,="" angiotensin="" ii;="" epcs,="" endothelial="" progenitor="" cells;="" prks,="" primary="" rat="">duáncealla; FCM, cíteiméadracht sreafa; CCK-8, Trealamh Comhairimh Cille-8; Dil-Ac-LDL, Dil lipoprotein ísealdlúis aicéitilithe casta; OD, dlús optúil; -SMA, -actin matán réidh; NS, ní suntasach. torthaí contrártha maidir le secretion na n-einsímí. Mar sin d’fhéadfadh go mbeadh baint ag giniúint ROS le damáiste cille de bharr Ang II, agus is féidir é a fheabhsú trí chomhchultúr le EPCanna.
Is féidir le Ang II damáiste a dhéanamh freisin do chealla trí secretion cytokines athlastacha a chur chun cinn, agus is féidir le EPCanna athlasadh a chosc (32). Ina dhiaidh sin, fiosraíodh an gcuireann Ang II an rún de chitocíní athlastacha chun cinn i PRKanna, agus an bhféadfadh EPCanna a ról cosanta a fheidhmiú trí chosc a chur ar an secretion cytokines athlastacha. Rinneadh an secretion IL-1 , IL-6 agus TNF- a uasrialú go suntasach i PRKanna trí Ang II a chur leis. I gcodarsnacht leis sin, i PRKanna atá comhshaothraithe le EPCanna, bhí na leibhéil IL-1 , IL-6 agus TNF- ( Fíor 2E - G ) i gcomparáid níos ísle (P<0.05) than="" those="" in="" prks="" cultured="" alone.="" therefore,="" the="" damage="" induced="" by="" ang="" ii="" in="" prks="" was="" also="" associated="" with="" pro‑inflammatory="" cytokines,="" and="" co‑culture="" with="" epcs="" exerted="" protective="" effects="" by="" reducing="" the="" secretion="" of="" these="">
Cuirtear éifeacht chosanta EPCanna i bhfeidhm trí MVanna.Na meicníochtaí trína gcuireann EPCs éifeachtaí cosanta i bhfeidhm ar ANG II-spreagthaduánrinneadh anailís bhreise ar chealla trí MVanna a leithlisiú ó EPCanna (Fíor 3A). Lipéadaíodh EPC-MVanna le PKH26 agus cuireadh le PRKanna iad in éineacht le Ang II i pláta Transwell, mar a thuairiscítear roimhe seo. Braitheadh fluaraiseacht PKH26 i gcíteaplasma PRKanna (Fíor 3B), rud a thugann le fios go raibh EPC-MVanna comhleádh le PRKanna. Ansin, fuarthas amach go raibh EPC-MVanna (Fíor 3C-E) bac ar ráta laghdaithe iomadú spreagtha Ang II, a chuir apoptosis chun cinn agus gabháil timthrialla sa chéim G1. Cosúil le PRKanna arna gcomhshaothrú le EPCanna, bhí PRKanna a d’fhás i láthair EPC-MVanna agus faoi lé Ang II tar éis leibhéil laghdaithe ROS agus MDA (Fíor 4A agus B), leibhéil GSH agus SOD méadaithe (Fíor 4C agus D). agus laghdaigh secretion na cítocíní athlastacha IL-1 , IL-6 agus TNF- (Fíor 4E-G), i gcomparáid leis an ngrúpa Ang II.
Plé
Chomh fada agus is eol dúinn, léirigh an staidéar seo don chéad uair gur féidir le EPCanna PRKanna a chosaint ó dhamáiste cille de bharr Ang II. Déantar an éifeacht chosanta seo a idirghabháil, go páirteach ar a laghad, le MVanna atá faoi rún ag EPCanna agus a chomhcheanglaíonn PRKanna le linn comhchultúr. Trí MVanna saibhrithe a chur le PRKanna atá faoi lé Ang II, fuarthas amach go bhféadfadh EPC-MVanna amháin PRKanna a chosaint ó dhamáiste de bharr Ang II trí strus ocsaídiúcháin agus athlasadh a chosc. Sainmhínítear MVanna mar nana-bhris membrane (0.05-1 µm) (33), agus cailltear iad ó dhromchla na cille tar éis gníomhachtaithe, struis nó apoptóis. Ina theannta sin, is féidir MVanna a dhíorthú ó chineálacha éagsúla cille, mar shampla pláitíní, cealla endothelial, EPCanna agus cealla fola bána (34,35). Cuireann MVanna marcóirí sonracha dromchla cille in iúl, a athraíonn de réir na cille tionscnaimh agus a bhfoirmiú agus is féidir éifeachtaí frith-athlastacha, frith-theaglaithe agus angóigineacha a bheith acu (36). Is féidir le MVanna a scaoiltear ó EPCanna faisnéis bhitheolaíoch a dtuismitheoirí a iompar, agus mar sin feidhm den chineál céanna a bheith acu ar na spriocchealla (33). Mar shampla, cosnaíonn EPC-MVanna cardiomyocytes ó hipertróf agus apoptosis spreagtha ag Ang II (28), feabhas a chur ar fheidhm endothelial agus an cumas angiogenesis a rialáil (37), agus maolú a dhéanamh ar mhífheidhm endothelial de bharr strus ocsaídiúcháin (38). Mar sin féin, chomh fada agus is eol dúinn, níor tuairiscíodh éifeacht EPC-MVanna ar nephropathy hipirtheannas roimhe seo. Mar sin, bhí sé mar aidhm ag an staidéar reatha imscrúdú a dhéanamh ar na héifeachtaí cosanta a d’fhéadfadh a bheith ag EPCanna agus EPC-MVanna idíobháil cille duánach.
Sa staidéar reatha, bunaíodh samhail díobhála PRK trí damáiste a spreagadh le Ang II. Ag teacht le tuarascálacha roimhe seo (26,39), laghdaigh Ang II iomadú PRK, mhéadaigh apoptosis agus gabhadh an timthriall cille ag an gcéim G1 sula ndeachaigh sé isteach sa chéim S. Bunaithe ar na marcóirí seo a bhaineann le Hipirtheannas, thángthas ar an gconclúid gur éirigh leis an tsamhail hipirtheannas PRK spreagtha ag Ang II a bhunú. Ina theannta sin, socraíodh go gcosnódh comhchultúr le EPCanna PRKanna ó dhamáiste de bharr Ang II. Tar éis comh-goir EPCanna le PRKanna móide Ang II, tháinig laghdú ar leibhéil na n-einsímí strus ocsaídiúcháin agus fachtóirí athlastacha sna PRKanna. Mar sin, d’fhéadfadh go mbeadh rialáil strus ocsaídiúcháin agus athlasadh i gceist leis na meicníochtaí féideartha trína bhfeidhmíonn EPCanna a n-éifeachtaí cosanta ar PRKanna. Chomh fada agus is eol dúinn, léirigh an staidéar reatha don chéad uair gur féidir le EPCanna freagairt ar strus ocsaídiúcháin spreagtha ag Ang II agus athlasadh i PRKanna a fheabhsú.
Cosnaíonn EPCanna go héifeachtachfeidhm duánachi CKD (40) agus feidhmíonn sé ról mór maidir le sláine soithíoch a chothabháil agus díobháil endothelial a dheisiú (15), chomh maith le sceitheadh soithíoch a laghdú, feidhm orgán a fheabhsú agus ráta marthanais a mhéadú i sepsis (41). Tugann fianaise carntha le fios go bhféadfadh ról cosantach a bheith ag EPCanna trí MVanna a dhéanamh (37,42,43). Chun éifeacht chosanta EPC-MVanna i PRKanna a thástáil, rinneadh EPC-MVanna a leithlisiú agus a lipéadú le PKH26, agus ansin rinneadh na MVanna lipéadaithe a chomhghoir le PRKanna móide Ang II. Chomhleasc na EPC-MVanna le PRKanna agus chuir siad bac suntasach ar an bhfreagairt ar strus ocsaídiúcháin agus ar athlasadh a spreag Ang II, agus tá na torthaí seo cosúil le torthaí Fu et al (44). Ba mhó an éifeacht coisctheach a bhí ag EPC-MVanna ar leibhéil na n-einsímí struis ocsaídiúcháin ná mar a bhí ag EPCanna amháin; is féidir é seo a chur i leith na MVanna a bheith i láthair ag tiúchan níos airde sna PRKanna a chóireáiltear le EPC-MVanna ná mar atá sna MVanna atá comhshaothraithe le EPCanna. Tugann na torthaí seo le tuiscint go bhféadfadh éifeacht chosanta EPCanna ar PRKanna i gcoinne damáiste cille spreagtha ag Ang II a bheith ag brath ar MVanna rúnda. Teorainn leis an staidéar reatha ná nach ndearnadh scrúdú iomlán ar na meicníochtaí féideartha trína rialaíonn EPC-MVanna microRNAs/mRNAs/aiseanna trasduchtúcháin comharthaí. An ról agus na meicníochtaí trína ndéanann EPC-MVanna cosaint ina gcoinnedamáiste duáina mheas i múnla ainmhithe de nephropathy hypertensive, a bhfuil tuar dóchais inti le haghaidh taighde sa todhchaí. Mar fhocal scoir, léirigh an staidéar reatha gur féidir le EPCanna PRKanna a chosaint ó strus ocsaídiúcháin de bharr Ang II agus ó athlasadh méadaithe trí MVanna a chur faoi rún. Soláthraíonn sé seo treoir nua maidir le cóireáil nephropathy hipirtheannas agus bunaítear samhail in vitro chun staidéar a dhéanamhgortú duáin.
