Ról LncRNA in Aosú Duán a Thuar Bunaithe Ar Sheicheamhú RNA Ⅱ

Comhghaol idir lncRNA Gm43360 agus a sprice féideartha mRNAs

Roghnaíodh LncRNA Gm43360 chun staidéar a dhéanamh air toisc gur cheangail sé dhá líonra comhexpression lncRNA-mRNA. Comhghaolaíodh leibhéal slonn Adra1a go dearfach (rho=0.8650, p=0.026) le leibhéal Gm43360, Csnk1a1 (casein kinase 1A1) go diúltach (rho{{12) }}.8084, p=0.0084) (Fíor 5a). Chun comhghaolú lncRNA Gm43360 agus a sprioc ionchasach mRNAs Adra1a agus Csnk1a1 a fhíorú tuilleadh, ceapadh plasmid ró-eisbhrú de lncRNA Gm43360 sa staidéar seo. Laghdaigh slonn Csnk1a1 mar a bhíothas ag súil leis, agus tháinig laghdú ar shloinneadh Adra1a freisin, ach ní raibh sé suntasach. Ansin, leagamar síos lncRNA Gm43360 le siRNA chun a fháil amach an raibh tionchar ag slonn a sprice mRNA. De réir mar a bhíothas ag súil leis, méadaíodh Csnk1a1 i gcealla leagain lncRNA Gm43360 i gcoibhneas leis an ngrúpa rialaithe siRNA diúltach (Fíor 5b). Deich gcinn, bhraitheamar ról lncRNA Gm43360 sa timthriall cille. Léirigh torthaí an trealamh comhairimh ceall-8 (CCK-8) gur chuir lncRNA Gm43360 inmharthanacht cille chun cinn (Fíor 5c). Léirigh na torthaí gur mhéadaigh lncRNA Gm43360 céatadán na gcealla céim S agus laghdaigh céatadán na gcealla céim G1 i gcomparáid leis an rialú diúltach (Fíor 5d). Bhí baint ag próitéiní te p53 agus p21 le rialáil an timthriall cille agus mar sin bhí siad ina marcanna ar aosú cille. Tháinig laghdú suntasach ar na leibhéil slonn de p53 agus p21 sa ghrúpa ró-bhrú i gcoibhneas leis an ngrúpa rialaithe. Méadaíodh na leibhéil slonn de p53 agus p21 go suntasach sa ghrúpa siRNA i gcomparáid leis an ngrúpa rialaithe siRNA (Fíor 5e). Laghdaigh ró-eisiúint lncRNA Gm43360 líon na gceall SA{- -gal-dearfach, agus tháinig méadú ar chealla -gal-dearfach sa ghrúpa transfect Gm43360 (Fíor 5f). Nuair a chuirtear le chéile iad, léirigh na torthaí seo gur chuir lncRNA Gm43360 bac ar sheanaoise cealla epithelial tubular duánach trícosc ar shloinneadh Csnk1a1.

Cliceáil anseo chun Sliocht CISTANCHE ORGÁNACHA NÁDÚRTHA A FHÁIL LE 25% ECHINACOSIDE AGUS 9% ACTEOSIDE CHUN FEIDHM DUINE

Plé

Sa staidéar seo, rinneamar measúnú ar na sonraí slonn mRNA ó na duáin luiche óg agus aosta agus rinneamar anailísí bithfhaisnéise a nocht feidhmeanna na mRNAs a cuireadh in iúl go beacht. Thugamar faoi deara 347 mRNA uasrialaithe agus 355 mRNA íosrialaithe chomh maith le 130 lncRNAs íosrialaithe agus 91 lncRNA íosrialaithe iduáin luiche d'aois i gcomparáid le duáin luiche óga. Ina theannta sin, léiríodh go raibh baint ag na mRNAanna seo le conairí a bhaineann le haosú, mar shamplafosfarylation ocsaídiúcháin, an cosán comharthaíochta AMPK, an cosán comharthaíochta Wnt, an cosán comharthaíochta Rap1, agus galair a bhaineann le haois, a léirigh feidhmeanna mRNA a cuireadh in iúl go difreálach i bpataigineas an aosaithe duánach.

Is fachtóir cosanta é an noncoding fada RNA NEAT1 maidir le dul chun cinn fiobróis duáin i gcealla epithelial tubular duánach [21]. Go comhthráthach, inár dtorthaí seicheamhaithe, léiríodh lncRNA NEAT1 ag leibhéil níos ísle i nduáin lucha aosta ná mar a bhí i lucha óga, rud atá comhsheasmhach le torthaí roimhe seo. Luathaíonn LincRNA-Gm4419 infamation agus fiobróis trí mheicníochtaí inflammasome-mediated NF-kB/NLRP3 i nephropathy diaibéitis [22]. Inár dtorthaí seicheamhaithe, fuaireamar amach freisin go raibh léiriú Gm4419 níos airde i duáin lucha d'aois ná i lucha óga, ach ní raibh aon difríocht shuntasach ann. Tá LncRNA Gm43360 suite ar chrómasóim 5 (Chr5: 122494022–122,494,908, 2887 bp). De réir Brabhsálaí Géanóim UCSC, tá Gm43360 suite in intron na géine códaithe próitéine Atp2a2. Mar sin féin, ní raibh aon tuairiscí faoi rannpháirtíocht lncRNA Gm43360 i galair go dtí seo. Sa staidéar seo, chothaigh an laghdú ar lncRNA Gm43360 senescence cille epithelial tubular duánach. Ina theannta sin, shainaithnímid go leor lncRNAs a léiríodh go difreálach sna torthaí seicheamhaithe agus rinneamar imscrúdú orthu.

Aicmíodh LncRNAs i cis-rialáil nó tras-rialáil bunaithe ar mheicníochtaí rialála lncRNA. D’fhéadfadh lncRNAnna cis-ghníomhaithe tionchar a imirt ar léiriú na ngéinte comharsanacha trí bheith ag brath ar ghnéithe cis-ghníomhaithe, amhail tionscnóirí, feabhsaitheoirí, agus seichimh rialála, ar achair níos lú ná 100 kb iad idir lncRNAs agus mRNAs. Tagraíonn lncRNAanna trasghníomhaíochta do lncRNAs a fhágann an suíomh aistrithe agus ag feidhmiú ag suíomhanna i bhfad i gcéin (ie, tá an fad idir lncRNAs agus mRNAs níos mó ná 100 kb) [23]. Méadaíonn an lncRNA MAAT léiriú na géine comharsanacha Mbnl1 trí mhodúl cis-rialála [24]. Tá ról ag an lncRNA Pnky mar rialtóir tras-ghníomhaíochta i bhforbairt cortical [25]. Sa staidéar seo, bhí caidreamh trasrialála idir lncRNA Gm43360 agus Csnk1a1. Is géine suppressor meall é Csnk1a1 [26] a ionchódaíonn próitéin a ghlacann páirt sa timthriall cille agus sa phróiseas rannáin cille [27]. Cothaíonn íosrialáil Csnk1a1athlastacha a bhaineann le senescencefreagra le gabháil fáis i siadaí colorectal [26]. Rinneadh íosrialáil ar Csnk1a1 nuair a uasrialaíodh Gm43360; mar sin, is dócha go nglacann lncRNA Gm43360 páirt iag dul in aois duáinleag rialú slonn Csnk1a1.

Conclúidí

Ár n-imscrúdú ar an líonra comhexpression lncRNA-mRNA iag dul in aois duáinnocht lncRNA, lncRNA Gm43360, ról cosantach in aosú duán agus leathnaigh sé ár dtuiscint ar na meicníochtaí a bhaineann leag dul in aois duáin

abhair agus modhanna

Ceannaíodh samplaí lucha C57BL/6J fireann óg (3-mí d'aois) agus sean (24-mí d'aois) ó Ionad Ainmhithe Turgnamhach Ollscoil Xiamen agus tógadh iad i dtimpeallacht chaighdeánach. Bhí rochtain saor in aisce ag lucha ar bhia agus ar uisce. Bhí na lucha i dtaithí ar an áis nua ar feadh míosa sular íobairt iad. Rinneadh ainéistéisiú ar na lucha le húireatán trí instealladh intrapeireatóineach ag dáileog 750 mg/kg roimh bhailiú eiseamail. Íobairtí lucha óg agus aosta an lá céanna.Duán luch iarmharachBaineadh úsáid as fíochán le haghaidh seicheamhú i ngach measúnacht. Rinneadh RNA-seq agus histeapaiteolaíocht arduáin ar leithas an luch céanna. Bailíodh fíocháin duáin ó lucha. Rinneadh duán amháin a thumadh láithreach i formalin maolánach 10% neodrach le haghaidh leabú alt ina dhiaidh sin, agus roinntear an duáin eile i roinnt fíocháin agus cuireadh láithreach i nítrigin leachtach é agus ansin é a stóráil ag -80 céim . Thacaigh Coiste Eitice an Chéad Ospidéal Cleamhnaithe in Ollscoil Xi'an Jiaotong (Shaanxi, an tSín) (Uimh. 2018-G-164) leis an staidéar. Rinneadh na modhanna uile de réir na dtreoirlínte agus na rialacháin um eitic ainmhithe. Rinneadh an staidéar seo de réir threoirlínte ARRIVE.

Histeapaiteolaíocht na duáin

Socraíodh samplaí fíocháin duánach de lucha óg agus aosta i dtuaslagán paraformaildéad 10% thar oíche. Díhiodráitíodh deich gcinn de na codanna, rinneadh iad a neadú le pairifín, agus rannpháirtíodh iad ag tiús 4-µm. Baineadh úsáid as prótacail chaighdeánacha trí ruaimniú tríchrómatach PAS agus Masson. Gabhadh íomhánna ag an gceamara, agus tomhaiseadh an limistéar staining-dearfach. Ríomhadh limistéar na n-íomhánna ceamara histeapaiteolaíochta le Image-Pro Plus 6.0.

staining SA‑ -gal

Rinneadh anailís ar ghníomhaíocht SA{{{0}}ag baint úsáide as trealamh staining gal SA{- -(Cell Signaling Technology #9860) de réir phrótacal an déantóra. Tomhaiseadh an t-achar ruaimnithe deimhneach, agus ríomhadh cealla SA- -gal-dearfach ag baint úsáide as Image-Pro Plus 6.0.

Tógáil agus seicheamhú leabharlainne astarraingthe RNA

Samples (each 5 mice in young and old mice) were used for lncRNA and mRNA expression analyses. Young mice were numbered 3M1, 3M2, 3M3, 3M4, and 3M5, and old mice were numbered 24M1, 24M2, 24M3, 24M4, and 24M5. Total RNA was extracted using Trizol reagent (thermofsher, 15,596,018) following the manufacturer's instruction. The total RNA quantity and purity were analyzed of Bioanalyzer 2100 and RNA 6000 Nano LabChip Kit (Agilent, CA, USA, 5067−1511), and high-quality RNA samples with RIN number>7.0 chun leabharlann seicheamhaithe a thógáil. Tar éis eastóscadh RNA iomlán, íonaíodh mRNA ó RNA iomlán (5ug) ag baint úsáide as Dynabeads Oligo (dT) (Thermo Fisher, CA, SAM) le dhá bhabhta íonúcháin. Tar éis íonú, roinntear an mRNA ina blúirí gearra ag baint úsáide as caitiúcháin défhiúsacha ag teochtaí arda (Modúl Ilroinnte RNA Maignéisiam (NEB, cat. e6150, SAM) faoi 94 céim 5-7 nóim). Ansin rinneadh na blúirí RNA scoilte a aisiompú chun an cDNA a fháil le SuperScript™ II Reverse Transcriptase (Invitrogen, cat. 1,896,649, SAM), a úsáideadh an chéad uair eile chun DNA dara-snáithe U-lipéadaithe a shintéisiú le DNA polymerase I (E. coli). NEB, cat.m0209, SAM), RNase H (NEB, cat.m0297, SAM) agus dUTP Réiteach (Termo Fisher, cat.R0133, USA). Cuireadh bonn A ansin le foircinn mhaol gach snáithe, ag ullmhú iad le haghaidh ligation chuig na hoiriúnóirí innéacsaithe. Bhí barrachas T-bonn i ngach cuibheoir chun an cuibheoir a cheangal leis an DNA ilroinnte A-tailed. Rinneadh cuibheoirí dé-innéacs a cheangal leis na blúirí, agus rinneadh roghnú méide le coirníní AMPureXP. Tar éis an einsím teas-labile UDG (NEB, cat.m0280, USA) a chóireáil ar na DNA dara-snáithe U-lipéadaithe, rinneadh na táirgí ligated a mhéadú le PCR faoi na coinníollacha seo a leanas: dínádúrú tosaigh ag 95 céim ar feadh 3 nóiméad; 8 timthriall dínádúraithe ag 98 céim ar feadh 15 s, annealing ag 60 céim ar feadh 15 s, agus síneadh ag 72 céim ar feadh 30 s; agus ansin síneadh deiridh ag 72 céim ar feadh 5 nóiméad. Ba é an meánfhad ionsáite do na leabharlanna cDNA deiridh ná 300±50 bp. Ar deireadh, rinneamar an seicheamh deireadh péireáilte 2 × 150 bp (PE150) ar Illumina Novaseq ™ 6000 (LC-Bio Technology CO., Ltd., Hangzhou, an tSín) de réir phrótacal an mhonaróra [28].

Anailís bhithfhaisnéisíochta Seicheamh agus scagadh Léamh Glan

Leabharlann cDNA tógtha ag teicneolaíocht ón RNA comhthiomsaithe ósamplaí duáinde lucha a sheicheamh agus a rith leis an ardán seicheamh Illumina NovaseqTM 6000. Ag baint úsáide as an gcur chuige péireáilte-deireadh RNA-seq Illumina, rinneamar an transcriptome a sheicheamhú, ag giniúint iomlán de mhíle lon 2 × 150 bp péireáilte-deireadh léann. I measc na léamha a fhaightear ó na meaisíní seicheamhaithe tá léamha amh ina bhfuil cuibheoirí nó bunanna ar chaighdeán íseal a mbeidh tionchar acu ar an gcóimeáil agus ar an anailís seo a leanas. Mar sin, chun léamha glana ar ardchaighdeán a fháil, rinne Cutadapt [29] na léamha a scagadh tuilleadh (https://cutadapt.readthedocs.io/en/stable/, version:cutadapt-1.9). Bhí na paraiméadair mar seo a leanas:

1) léamha a bhfuil cuibheoirí iontu a bhaint;

2) léamha ina bhfuil polyA agus polai a bhaint;

3) léamha a bhfuil níos mó ná 5 % de núicléatídí anaithnide (N iontu) a bhaint;

4) léamha ar cháilíocht íseal a bhaint ina bhfuil níos mó ná 20% de bhunanna ar cháilíocht íseal (Q-luach Níos lú ná nó cothrom le 20).

Fíoraíodh cáilíocht deich seicheamh le FastQC [30] (http://www.bioinformatics.babraham.ac.uk/projects/ fastqc/, 0.11.9). lena n-áirítear ábhar Q20, Q30, agus GC na sonraí glan. Ina dhiaidh sin, táirgeadh G bp de léitheanna glanta, péireáilte. Tá na sonraí seichimh amh curtha faoi bhráid thacair sonraí Omnibus Léirithe Géine (GEO) an NCBI leis an uimhir aontachais GSE154223.

Ba é Mus_musculus.GRCm38 an géanóm/anótáil tagartha. Ba é Ensembl_v88 foinse agus leagan an nóta géine a úsáideadh le haghaidh anailísí.

Tionól tras-scríbhinní

Ar an gcéad dul síos, baineadh úsáid as Cutadapt [29] chun na léith a raibh éilliú cuibheora iontu, bunanna ar chaighdeán íseal, agus bunanna neamhchinntithe a bhaint. Cuireadh an-chothú ar cháilíocht deich seicheamh ag baint úsáide as FastQC (http://www.bioinformatics.Babra ham.ac.uk/projects/fastqc/). D’úsáideamar Bowtie2 [31] agus Hisat2 [32] chun léamha a mhapáil go géanóm na luiche. Cuireadh na léamha léarscáilithe de gach sampla le chéile ag baint úsáide as StringTie [33]. Deich, gach tras-scríbhinn ósamplaí duáincumasc chun tras-scríbhinn cuimsitheach a athchruthú ag baint úsáide as scripteanna Perl. Tar éis an transcriptome deiridh a ghiniúint, baineadh úsáid as StringTie [33] agus edgeR [34] chun leibhéil slonn na n-athscríbhinní go léir a mheas.

Sainaithint LncRNA

Ar an gcéad dul síos, caitheadh ​​amach tras-scríbhinní a bhí forluiteach le mRNAanna aitheanta agus tras-scríbhinní níos giorra ná 200 bp. Ansin úsáideamar CPC [35] agus CNCI [36] chun athscríbhinní a bhfuil cumas códaithe acu a thuar. Gach tras-scríbhinn le scór CPC<-1 and CNCI score<0 were removed. The remaining transcripts were considered as lncRNAs.

Anailís géinte anailíse arna léiriú go difreálach (DGEs).

StringTie [33] was used to perform expression levels for mRNAs and lncRNAs by calculating FPKM [37]. Genes differential expression analysis was performed by DESeq2 software between two different groups (and by edgeR between two samples) [34, 38]. The genes with the parameter of q value below 0.6 and absolute fold change>Measadh go raibh 2 géinte curtha in iúl go difreálach.

Tuar géine sprice agus anailís fheidhmiúil ar lncRNAs

Chun feidhm fheidhm lncRNAs a iniúchadh, rinneamar géinte cis-sprioc na lncRNAs a thuar. D’fhéadfadh ról cis a bheith ag LncRNAnna agus iad ag gníomhú ar sprice ghéinte comharsanachta. Sa staidéar seo, roghnaigh Perl géinte códaithe i 100,000 in aghaidh an tsrutha agus le sruth. Ansin, léirigh muid anailís fheidhmiúil ar na géinte sprice le haghaidh lncRNAs trí úsáid a bhaint as na scripteanna an BLAST2GO [39]. Ba é an nasc iomlán orduithe leis an bhfearann ​​​​poiblí ná Jie-Li/README.md ag príomh · dandan-li/Jie-Li (github.com).

Catagóirí ontology géine (GO) agus anailís Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG).

Rinneadh an anailís bhithfhaisnéisíochta do sheicheamhú RNA ag baint úsáide as uirlisí OmicStudio (http://www.omicsudio.cn/tool). Baineadh úsáid as anailís saibhrithe feidhme Ontology Géine (GO) agus anailís saibhrithe Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG) [37-39] chun anailís a dhéanamh ar fheidhmeanna bitheolaíocha na spriocghéine réamh-mheasta. Soiléiríonn anailís GO na príomhphróisis bhitheolaíocha trí ghné: comhdhéanamh cille, feidhmeanna móilíneacha, agus próisis bhitheolaíocha (http://www.geneontology.org/). Cuireann an anailís frst na géinte agus na géinte cúlra go léir a chuirtear in iúl go difreálach i mbunachar sonraí GO. Déantar gach mír a mhapáil, ríomhtar líon na ngéinte i ngach ítim, agus úsáidtear an dáileadh hypergeometric chun tástáil hipitéise a dhéanamh chun luach P an toradh saibhrithe a fháil. Dá ísle luach P, is ea is suntasaí an toradh saibhrithe. Is acmhainn bhunachar sonraí é KEGG a dhéanann anailís ar na mRNAanna a chuirtear in iúl go difreálach de réir bitheolaíocht ghéiniteach chun bealaí tábhachtacha a bhaineann le spriocghéin a fhiosrú (https://www.genome.jp/kegg/). Cuirtear na torthaí in iúl le p-luachanna; dá ísle an p-luach, is ea is suntasaí an toradh saibhrithe.

qRT – PCR

Baineadh úsáid as GAPDH mar an rialú ingenous. Ansin, ríomhadh na leibhéil léirithe coibhneasta de ghéinte anaithnid. Dearadh agus sintéisíodh gach primer go sonrach don turgnamh seo. Tá tráchtálú déanta ar bhunaitheoirí GAPDH. Aithníodh sainiúlacht na bpriméirí Adra1a agus Csnk1a1 ag buaic aonair an chuair leáite.

Tóg líonra comhexpression mRNA-lncRNA

Bhí an tras-rialú bunaithe ar thaighde, agus ansin ríomhadh an tras-fhuinneamh. Dá lú an trasfhuinnimh, is amhlaidh is airde an fhéidearthacht de cheangal. Ansin, ríomhadh comhéifeacht comhghaoil ​​mRNA-lncRNA freisin. Tógadh an líonra mRNA-lncRNA trí chomhéifeacht comhghaolaithe Spearman a sháraigh 0.9. Tógadh an líonra comhexpression mRNA-lncRNA ag baint úsáide as bogearraí Cytoscape (v3.7.1).

Cultúr cille

Saothraíodh cealla epithelial feadánacha proximal duánach luiche (MRPT-EpiCs) i meán-ainmhí cille epithelial (EpiCM-a, Cat. #4131) ina raibh 2% de shéiream bó-ainmhithe féatais (FBS, Cat. #0010) agus Forlíonadh Fás Cille Epithelial (EpiCGS-a, Cat. #4182) gan antaibheathaigh i gorlann humidithe ag 37 céim agus 5% CO2. Athraíodh an meán cultúir gach 2-3 lá. Bhí na cealla sa chéim fáis logartamach fo-shaothraithe nuair a shroich an fás 90%. Cuireadh an fionraí cille díleáite ag trypsin i 6-plátaí tobair le 2 *104 -5*104 cill i ngach tobar. Bhí na cealla a úsáideadh le haghaidh aistrithe ar fad idir na glúnta 2 agus 5.

Tógáil plasma agus aistriú cille

Is é GeneChem (Shanghai, an tSín) a thóg an plasmid ró-eisbhrú lncRNA Gm43360. Ba é GV658 an cnámh droma plasmid, agus thiomáin an tionscnóir CMV léiriú lncRNA. Cuirtear an seicheamh nucleotíde clónáilte ar fáil san ábhar forlíontach. Le haghaidh leagain lncRNA Gm43360, NÍ MÓR trí lncRNA ENS00000197656-sprioc siRNAs (lncRNA Gm43360- siRNA1, 5'-CCUUCACUCCAGCUGGUAATT-3'; lncRNA Gm43360-siRNA2, 5'-CCCUGUCACUCA Rinneadh UGAAGUUTT-3'; agus lncRNA Gm43360-siRNA3, 5'-GGUCAAAUAACUCAAUGGGTT-3') a dhearadh agus a shintéisiú ag GenePharma (Shanghai, an tSín). De réir phrótacal an mhonaróra, aistríodh cealla le 2500 ng de plasmid nó 100 pmol de siRNA le 6 µl de Imoibrí Aistrithe Lipofectamine™ 2000 (Invitrogen, USA) in aghaidh an tobair. Braitheadh ​​leibhéil léirithe RNA agus próitéine ag 48 h tar éis aistrithe, agus rinneadh gach turgnamh arís trí huaire ar a laghad. Baineadh úsáid as PCR cainníochtúil fíor-ama chun éifeachtúlacht ró-eisiúint agus leagain lncRNA Gm43360 a bhailíochtú.

Anailís blot an Iarthair

Nitear cealla saothraithe le PBS fuar oighir, cuireadh 120 µl de mhaolán RIPA (Croí, an tSín) leis, agus cuireadh cosc ​​​​prótease agus PMSF (Croí, an tSín) ar feadh 30 nóiméad ar oighear. Tar éis cealla a bhailiú i bhfeadáin microcentrifuge éagsúla, rinneadh an tiúchan próitéine a chainníochtú. Cuireadh maolán luchtaithe le gach sampla agus ansin boil ar feadh 7 nóiméad. Scaradh tríocha microgram den sampla le 12% SDS–PAGE (Beyotime, an tSín) agus aistríodh iad leictrileictreach go seicní PVDF (Thermo Fisher, SAM). Ansin, cuireadh bac ar na seicní le bainne 5%. Bhí na seicní gortha le príomhantasubstaintí sonracha: frith-p21 (1:1000, Abcam, ab109199), frith-p53 (1:1000, Proteintech, 10442-1-AP), agus frith-GAPDH (1:3000, Profintech , 60004-1-Ig) thar oíche ag 4 chéim . Tar éis níocháin le TBST, goraíodh na seicní le antasubstaint thánaisteach ar feadh 1 h ag teocht an tseomra. Breathnaíodh bannaí próitéine ag baint úsáide as trealamh chemiluminescence (Millipore, SAM). Baineadh úsáid as an abairt GAPDH chun leibhéil próitéin a normalú.

Measúnacht iomadú cille

Cinneadh acmhainn iomadú cille ag an measúnú trealamh comhairimh ceall-8 (CCK-8). Daichead a hocht n-uaire tar éis aistrithe, cuireadh 90 µl de mheán nua agus 10 µl de thuaslagán CCK-8 le gach tobar (Beyotime, C0042). Goradh na cealla ar feadh 1-4 h ag 37 céim i 5% CO2 agus tomhaiseadh iad ag 450 nm ag léitheoir micreaphláta uilíoch (Bio-Tek, SAM).

Anailís chitiméadrach sreafa

Plátáladh cealla i 6-phlátaí tobair an lá roimh an aistriú. Daichead a hocht n-uaire tar éis aistrithe, rinneadh na cealla a trypsinized agus a lártheifneoiriú ag 1000 rpm ar feadh 5 nóiméad. Ansin, socraíodh na cealla in eatánól 70% ag 4 céim ar feadh 4 h ar a laghad. Tar éis lártheifneoirithe, cuireadh tuaslagán ruaimnithe RNase A agus iaidíd propidium (PI) leis na cealla, agus goraíodh na cealla ansin ar feadh 30 nóiméad ag teocht an tseomra sa dorchadas. Rinneadh anailís ar chealla te-dhaite ag baint úsáide as NovoCyte ACEA (Biosciences, USA).

Anailís staitistiúil

Cuirtear na sonraí tomhais de réir an ghnáthdháilte i láthair mar mheán±SD. Rinneadh an difríocht idir an dá ghrúpa éagsúla a chinneadh trí úsáid a bhaint as t-thástálacha an Dalta dhá earball gan phéire, agus measadh go raibh tábhacht staitistiúil ag p-luach < 0.05. Rinneadh gach ríomh trí úsáid a bhaint as GraphPad Prism 8 (GraphPad Software, Inc., USA).

Tagairtí

1. Docherty MH, O'Sullivan ED, Bonventre JV, Ferenbach DA. Seanchas Ceallach sa Duán. J Am Soc Nephrol. 2019; 30(5):726–36.

2. Partridge L, Deelen J, Slagboom PE. Aghaidh a thabhairt ar dhúshláin dhomhanda an aosaithe. Dúlra. 2018; 561(7721):45–56.

3. Pan JX. Cuireann LncRNA H19 chun cinn atherosclerosis trí bhealaí comharthaíochta MAPK agus NF-kB a rialáil. Eur Rev Med Pharmacol Sci. 2017; 21(2):322–8.

4. Wasson CW, Abignano G, Hermes H, Malaab M, Ross RL, Jimenez SA, Chang HY, Feghali-Bostwick CA, Del Galdo F. Tiomáineann RNA HOTAIR fada neamhchódaithe gníomhachtú myofibroblast i gcórasach EZH2-spleách. scléaróis trí ghníomhachtú miRNA 34a-spleách NOTCH. Ann Rheumatic Dis. 2020; 79(4):507–17.

5. Luo J, Wang K, Yeh S, Sun Y, Liang L, Xiao Y, Xu W, Niu Y, Cheng L, Maity SN, et al. Athraíonn LncRNA-p21 an difreáil néar-inchríneacha ailse phróstataigh de bharr antaandrogen enzalutamide-spreagtha trí chomharthaíocht EZH2/STAT3 a mhodhnú. Cumann Nat. 2019; 10(1): 2571.

6. Wang Y, Yang L, Chen T, Liu X, Guo Y, Zhu Q, Tong X, Yang W, Xu Q, Huang D, et al. Cuireann lncRNA nua MCM3AP-AS1 fás carcanóma hepatocellular chun cinn trí dhíriú ar ais miR-194-5p/FOXA1. Ailse Mol. 2019; 18(1):28.

7. Wu BB, Kuo HC. Róil agus líonraí feidhmiúla de RNAanna neamhchódaithe i bpataigineas galair néar-mheathlúcháin. J Biomed Sci. 2020; 27(1):49.

8. Li Z, Wang Z. Duán Aosú agus Galar a Bhaineann le hAosú. Adv Experiment Med Biol. 2018; 1086: 169-87.

9. Wang X, Vrtiska TJ, Avula RT, Walters LR, Chakkera HA, Kremers WK, Lerman LO, Riail AD. Tá baint éagsúil ag aois, feidhm na nduán, agus fachtóirí riosca le méideanna cortical agus medullary an duán. Duán Int. 2014; 85(3):677–85.

10. Lín Q, Hou S, Dai Y, Jiang N, Lín Y. Díríonn LncRNA HOTAIR miR-126-5p chun dul chun cinn galar Parkinson a chur chun cinn trí RAB3IP. Bithcheimic. 2019; 400(9):1217–28.

Seirbhís Tacaíochta Wecistanche-An t-onnmhaireoir cistanche is mó sa tSín:

Ríomhphost:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Teil:+86 15292862950

Siopa Le haghaidh Sonraí Breise:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop