ABSTRACT

Cúlra:Rinneadh bis resorcinol a leithlisiú mar phríomh-chomhábhar stoc na gcríochfort Heliciopsis (Proteaceae). Le déanaí, cuirtear resorcinol i bhfeidhm mar ghníomhaire whitening gníomhach i dtáirgí cosmaideacha éagsúla. Mar gheall ar aithris struchtúrach resorcinol, léiríodh buntáistí an bis resorcinol mar fhrithghníomhaí einsím aosaithe sa staidéar seo.

De réir staidéir ábhartha, is luibh choitianta é cistanche ar a dtugtar "an luibh mhíorúilteach a shíneann an saol". Is é a phríomh-chomhpháirt cistanoside, a bhfuil éifeachtaí éagsúla cosúil le frithocsaídeach, frith-athlastach, agus cur chun cinn feidhm imdhíonachta. Tá an mheicníocht idir cistanche agus whitening craicinn san éifeacht frithocsaídeach de gliocóisídí cistanche. Déantar melanin i gcraiceann an duine a tháirgeadh trí ocsaídiú tyrosine arna chatalú ag tyrosinase, agus éilíonn an t-imoibriú ocsaídiúcháin rannpháirtíocht ocsaigine, agus mar sin bíonn na fréamhacha saor ó ocsaigine sa chorp ina fhachtóir tábhachtach a dhéanann difear do tháirgeadh melanin. Tá cistanche ag cistanoside, ar frithocsaídeoir é agus is féidir leis giniúint fréamhacha saor in aisce sa chorp a laghdú, rud a chuireann cosc ​​ar tháirgeadh melanin.

Cliceáil ar Cistanche Tubulosa le haghaidh Bánú

Tuilleadh eolais:

david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

Modhanna:Rinneadh an bis resorcinol a íonú ón sliocht amh-eatánólach de thaca críochfoirt H. trí eastóscadh tuaslagóra agus crómatagrafaíocht ullmhúcháin, faoi seach. Rinneadh imscrúdú ar ghníomhaíocht choisctheach ar collagenase, elastase, agus tyrosinase an chomhdhúil trí úsáid a bhaint as teicníc speictreascópach eile. Rinneadh docadh móilíneach chun idirghníomhaíochtaí féideartha na substainte thart ar shuíomhanna gníomhacha na heinsíme a thuar.

Torthaí:Ba iad na luachanna IC50 ar cholangáis an bis resorcinol agus an aigéid chaffeic ná 156.7 ± 0.7 agus 308.9 ± 1.6 µmól L−1, faoi seach. Maidir le gníomhaíocht elastase, rinneadh an IC50 de 33.2 ± 0.5 agus 34.3 ± 0.3 µmole L−1 a chinneadh faoi seach don bis resorcinol agus aigéad ursolic. Bhí an bis resorcinol coisctheach do tyrosinase tríd an IC50 de 22.8 µcaochÚn L -1 a thaispeáint, agus bhí 78.4 µmole L−1 i láthair le haghaidh -arbutin. Tá an bis resorcinol faoi cheangal collagenase, elastase, agus tyrosinase agus na fuinneamh ceangailteacha faoi seach de −5.89, −5.69, agus −6.57 kcal mol−1. Bhí na fuinneamh ceangailteach seo sna raonta céanna le coscairí tástáladh. Bhí na grúpaí feanóil aramatacha sa struchtúr freagrach as prionsabal chomh maith le tacú le hidirghníomhaíochtaí ceangailteacha le heinsímí. Chuir ceangal hidrigine de bharr grúpaí hiodrocsaile agus fórsaí tarraingteacha a bhaineann le π ó fháinne aramatacha ar fáil solúbthacht cheangailteach do bis resorcinol.

Conclúid:D'fhéadfadh an bis resorcinol arna íonú ó chríochfoirt H. a bheith úsáideach lena áireamh i dtáirgí cosmaideacha mar fhrithghníomhaí einsímí aosaithe.

Ábhair Bithcheimic, Bithfhaisnéisíocht, Bitheolaíocht na gCeall, Deirmeolaíocht, Mianadóireacht Sonraí, agus Foghlaim Meaisíní

EochairfhocailCríochfoirt Héilicipsis, Bisresorcinol, Collagenase, Elastase, Tyrosinase, Maoin fhrith-aosaithe, Á Mhóilíneach, Cosc ar einsím

RÉAMHRÁ

A bis resorcinol, (8′Z)-3,5-dé-hiodrocsa-1-[16′-(3″, 5″-dé-hiodrocsa feinil)-8′-hexadecen{{ 11}}′-il] beinséin, scoite amach mar chomhábhar flúirseach ó stoc críochfoirt Heliciopsis (Kurz) Sleumer, ar planda de theaghlach Proteaceae agus atá in úsáid ag daoine eitneacha i Vítneam le haghaidh éifeacht hepatoprotective. Go dtí seo, soiléiríodh in vitro agus in vivo buntáistí míochaine an chomhdhúil seo mar ghníomhaire frith-athlasadh, cosc ​​ar tháirgeadh malondialdehyde (MDA), agus hepatoprotection (Giang et al., 2{019). Tá sé soiléir sa mhéid is go bhfuil dhá mhóilín resorcinol (CE Uimh 203-585-2) i móilín den bis resorcinol), nasctha le chéile le nasc meta-C7H14C=CC7H14 (Fíor 1A). Cuirtear resorcinol i bhfeidhm le déanaí i bhfoirm serum tiubhaithe aghaidhe le haghaidh teiripe bán. Bunaithe ar an gCoiste Eolaíoch um Shábháilteacht Tomhaltóirí, an Bhruiséil, an Bheilg (SCCS 1270/09, an Coimisiún Eorpach, An Coiste Eolaíoch um Shábháilteacht Tomhaltóirí, 2010), tá resorcinol rialaithe mar ocsaídeoir i dtáirgí atá beartaithe le haghaidh dathú fabhraí ag raonta tiúchana suas le 1.25 faoin gcéad. , nó i lóiseanna gruaige agus seampúnna ag raonta tiúchana suas le 0.5 faoin gcéad. Dá bhrí sin tá iarratais chosmaideacha resorcinol éagsúil. Maidir le gníomhairí whitening, glactar leis go bhfuil cosc ​​​​ar shintéis melanin ag melanocytes a chónaíonn i gciseal cille basal an eipideirm. Is eochair-einsím é Tyrosinase (CE 1.14.18.1) chun melanogenesis a chatalú ina n-úsáidtear L-tyrosine mar an tsubstráit. Cé go gcabhraíonn melanin leis an gcraiceann a chosaint ó dhamáiste ó ghhathanna UV, is féidir le táirgeadh iomarcach melanin hyperpigmentation, freckle, agus spotaí aoise a chur faoi deara. Chomh maith le resorcinol, tá sé léirithe go léiríonn comhdhúile sintéiseacha agus nádúrtha éagsúla le struchtúir cheimiceacha ar leith gníomhaíocht frith-tyrosinase (Dobos et al., 2015).

Is fachtóir seachtrach mór é radaíocht UV a chuireann faoi deara dul in aois craiceann. Ina áit sin, is féidir le craicne aois le himeacht ama ag speicis ocsaigin imoibríoch (ROS) agus sárocsaídí lipid a tháirgtear go hinmheánach tar éis nochtadh UV. Is féidir le táirgí tánaisteacha ó mheitibileacht sárocsaíd lipid damáiste a dhéanamh do shnáithíní elastin agus collagen de mhaitrísí eischeallacha (ECManna). Dá bhrí sin, is féidir díhiodráitiú, leaisteachas a chailleadh, chomh maith le wrinkles an chraiceann a bheith mar thoradh ar nochtadh do ghhathanna UV. Go dtí an t-eolas atá againn, déantar na ECManna a athmhúnlú go tréimhsiúil chun gnáthstruchtúir fíocháin a chothabháil in éineacht leis go ndéantar próitéiní fíocháin atá imithe in éag a dhíghrádú i gceart ag meiteaphróitéineasaí maitrís, amhail collaiginí, agus próitéisí serine cosúil le leaisteáin (Thring, Hili & Naughton, 2009). Ina theannta sin, tá méadú tagtha ar chainníochtaí agus ar ghníomhaíochtaí na n-einsímí aosaithe le strus ocsaídiúcháin, rud a fhágann go bhfuil díghrádú fairsing ECM agus aosú forásach (Sherratt et al., 2019). Dá bhrí sin, meastar go mbeidh comhdhúile ar féidir leo coimpléisc a dhéanamh le hiain miotail coisctheach ar cholangáise, leaistéisí, agus tyrosinase dá réir sin (Selvaraj et al., 2014). Tá sé mar aidhm ag an tionscadal seo éifeachtaí bitheolaíocha bis resorcinol ar tyrosinase, collagenase, agus elastase in vitro a chinneadh, agus cuireadh teicníocht dhugála i gcrích chun a n-idirghníomhaíochtaí ag leibhéil mhóilíneacha a shoiléiriú. Táthar dóchasach go gcuirfear moill ar an bpróiseas aosaithe agus feabhas a chur ar chuma an chraiceann le bis resorcinol.

ÁBHAR & MODHANNA

Ceimiceáin agus uirlisí

Íonú cumaisc, sainaithint, agus daingniú

Fuarthas an t-amhshliocht in eatánól de stoc teirminéil H. go fial ón Ollamh PM Giang, Dámh na Ceimice, Ollscoil Náisiúnta Vítneam, Hanoi, Vítneam agus an uimhir dearbháin HNIP-18473 aige. Ansin, rinneadh é a dheighilt i meatánól/n-heacsán faoi thrí arís agus arís eile. Galú an ciseal meatánóil go dtí beagnach tirim agus deighilt ina dhiaidh sin é in aicéatáit eitile/1-bútán. Galaíodh an ciseal aicéatáit eitile go dtí gur laghdaíodh a toirt 80 faoin gcéad. Glanadh an leacht slaodach mar thoradh air sin ar cholún glóthach shilice ag baint úsáide as leachtú grádán clóraform/meatánóil mar a leanas: 100 faoin gcéad clóraform, 30:1, 20:1, 10:1, 7:1, 5:1, 3:1, 3 :2, agus 2:1 de chlóraform/meatánól, agus 100 faoin gcéad meatánóil, faoi seach. Bailíodh an t-eilimint ón tuaslagóir measctha 5:1 agus galaithe go dtí an ceathrú toirt, agus ina dhiaidh sin scaradh ar an gcolún ODS ag baint úsáide as elution grádán meatánóil agus aicéatón. Fuarthas an cumaisc atá ag teastáil, ie, bis resorcinol (Fíor 1), ó eluents ina raibh 70 faoin gcéad aicéatón agus deimhnithe ag speictreascópachtaí MS, NMR, agus IR maidir leis na sonraí leabharlainne uirlise. Baineadh úsáid as crómatagrafaíocht tanaíchiseal chun a íonacht a mheas.

Measúnachtaí ar ghníomhaíocht bhitheolaíoch

In vitro, rinneadh turgnaimh a bhí comhdhéanta de thástálacha einsím-choiscthe ar collagenase, elastase, agus tyrosinase don bis resorcinol agus coscairí aitheanta mar seo a leanas.

Cosc collagenase

Athraíodh an measúnú frith-collagenase le déanaí ón gceann a ndearna Widyowati et al. (2016). Go hachomair, baineadh úsáid as 50 mmol L -1 maolán tricine pH 7.5 arna fhorlíonadh le 400 mmol L -1 NaCl agus 10 mmol L -1 CaCl2 mar an caolaitheoir maolánach. Rinneadh collagenase ó Clostridium histolyticum (EC.3.4.24.3) a thuaslagadh sa mhaolán go tiúchan 1 mg L−1. Rinneadh an tsubstráit einsíme, MOCAc-PRO-Leu-Gly-Leu-A2pr (Dnp)-Ala-Arg-NH2, a thuaslagadh roimhe seo i DMSO agus caolaíodh é ina dhiaidh sin sa mhaolán go tiúchan 1 mmol L−1. Caolaíodh sampla tuaslagtha in DMSO go tiúchain éagsúla trí úsáid a bhaint as an maolán. Goradh tuaslagán samplach 2-µl le tuaslagán einsíme 100 µl ag 37 ○C ar feadh 10 nóiméad. Ansin, cuireadh substráit 50-µl leis agus rinneadh é a mheascadh go críochnúil. Taifeadadh astaíocht fhluaraiseachta (F) ag 405 nm láithreach agus rinneadh monatóireacht leanúnach ar feadh 30 nóiméad ag baint úsáide as tonnfhad 320 nm le haghaidh excitation. Baineadh úsáid as aigéad caiféin mar rialú suímh (Fíor 1). Rinneadh rialú diúltach le huisce. Ríomhadh an cosc ​​faoin gcéad ( faoin gcéad ) ón gcothromóid thíos:

faoin gcéad Cosc {{0}}{1 - (Fsam; 30 - Fsam; 0)÷(Fcont; 30 - Fcont; 0)} ×100.

Cosc ar elastase

Cuireadh an mheasúnacht de réir Abhijit & Manjushree (2010) i bhfeidhm le roinnt modhnuithe. Go hachomair, ba é 0.2 mM maolán Tris-HCl (pH 8.0) an córas maoláin. Ullmhaíodh tuaslagán de 1 µg mL−1 elastase pancreatach muc (EC.3.4.21.36) in uisce steiriúil. Rinneadh an tsubstráit einsíme, N-Succinyl-Ala-Ala-Ala-p-nitroanilide (SANA), a thuaslagadh sa mhaolán go tiúchan 80 mmol L−1. Caolaíodh sampla tuaslagtha in DMSO go tiúchain éagsúla trí úsáid a bhaint as an maolán. Meascaíodh tuaslagán samplach 100-µl le tuaslagán einsíme 50 µl agus gor é ar feadh 15 nóiméad. Ina dhiaidh sin cuireadh 50 µl de thuaslagán an tsubstráit einsíme leis agus meascadh go maith é. Tomhaiseadh an OD410 láithreach (0 min) agus tar éis gor thar oíche (o/n) ag 37 céim trí úsáid a bhaint as léitheoir micreaphláta. Baineadh úsáid as aigéad ursolic mar rialú dearfach (Fíor 1), agus baineadh úsáid as uisce mar rialú diúltach. Ríomhadh an céatadán coiscthe ( faoin gcéad ) ag an gcothromóid seo a leanas:

faoin gcéad Cosc {{0} {1 - [(Asam; o/n - Asam; 0)÷(Acont; o/n - Acont; 0)]} ×100:

Cosc ar Tyrosinase

Rinneadh an measúnú coisctheach tyrosinase a úsáideadh a oiriúnú ón modh a ndearnadh cur síos air roimhe seo (Jiratchayamaethasakul et al., 2020). Go hachomair, rinneadh an mheasúnacht i 0.05 mol L−1 maolán fosfáite pH 6.8. Tuaslagadh tyrosinase muisiriún (EC.1.14.18.1) sa mhaolán go tiúchan 100 aonad mL-1. Ullmhaíodh L-tyrosine, substráit einsíme, go tiúchan de 0.25 mg ml -1 sa mhaolán. Caolaíodh comhdhúil tástála tuaslagtha in DMSO go tiúchain idir 0.625 agus 10 mg mL−1. I tobar de 96-phlátaí tobair, rinneadh sampla 10 µl agus tuaslagán L-tyrosine 40 µl a mheascadh agus a ghoradh ar feadh 10 nóiméad ag teocht an tseomra. Ina dhiaidh sin rinneadh tuaslagán einsíme 50 µl a ionaclú agus a mheascadh go críochnúil. Cuireadh stop leis an imoibriú ina dhiaidh sin trí gor ar oighear ar feadh 1 nóiméad. Tomhaiseadh an OD475 ag baint úsáide as léitheoir micreaphláta. -Baineadh úsáid as Arbutin agus uisce mar rialú dearfach (Fíor 1) agus contrapháirt diúltach, faoi seach. Ríomhadh an céatadán coiscthe ( faoin gcéad ) de réir na cothromóide mar seo a leanas:

STAIDÉAR MÓILEACH AR CUR CHUN CINN

Ullmhú ligands agus gabhdóirí

Íoslódáladh struchtúir thríthoiseacha (3D) de bis resorcinol (CID 8917124) agus comhdhúile tagartha, lena n-áirítear foshraitheanna agus coscairí, ó bhunachar sonraí PubChem le haghaidh staidéar docking mhóilíneach. Ullmhaíodh struchtúr ligand i gcomhad formáide Banc Sonraí Próitéin (PDB) ag baint úsáide as Aistritheoir SMILES Ar Líne agus Gineadóir Comhad Struchtúr. Fuarthas struchtúir chriostail na n-einsímí, mar shampla collagenase (PDB ID 2Y6I), elastase (PDB ID 1BRU), agus tyrosinase (PDB ID 2Y9X) ó bhunachar sonraí próitéin RCSB. Rinneadh an t-uisce agus na móilíní ceangailte a scaradh ó gach struchtúr próitéine roghnaithe. Idir an dá linn, chuir AutoDockTools 1.5.6 adaimh hidrigine polacha leis na struchtúir próitéine criostalaithe. Sábháladh comhaid de spriocphróitéiní agus comhdhúile eile a úsáideadh i bhformáid PDBQT sular rinneadh an t-adhmáil mhóilíneach.

Roghnú na n-iarmhar láithreáin gníomhacha agus an dug mhóilíneach

Ullmhaíodh prótacail greille agus duga de na tuartha suímh ghníomhacha ag baint úsáide as AutoDockTools 1.5.6. Socraíodh suíomhanna greille le spásáil de 0.375 Å. Socraíodh na toisí xyz mar 126-135-160 Å3 le haghaidh collagenase, 130-120-126 Å3 le haghaidh elastase, agus 80-80-80 Å3 le haghaidh tyrosinase. Ba iad lárionaid na mbosca eangaí (le luachanna fritháirimh in AutoDockTools) ná 31.869 (5.000), −19.41 (−25.{{20}}), agus 17.815 le haghaidh collaigine , 30.048 (−0.972), 51.253 (−2.722), 17.6 le haghaidh leaisteáis, agus −8.407 (−1.000), −23.795 (−0.253), 0.3−0.253), 0.3−0. ) le haghaidh tyrosinase, faoi seach. Baineadh úsáid as an struchtúr próitéine mar aonán docht agus socraíodh an cumaisc ligand mar mhóilín solúbtha. Baineadh úsáid as an algartam géiniteach Lamarckian (GA) arna chur i bhfeidhm ag AutoDock4 leagan 4.2 sa staidéar um dhuga. Ba é líon na ritheanna GA ná 50 le méid tóir de 200. Rinne ADT anailís ar an bhfuinneamh ceangailteach (ΔGbind). Léiríodh an t-idirghníomh(í) agus úsáid á baint as BIOVIA Discovery Studio (BIOVIA, 2020). Rinneadh anailís agus léirshamhlú ar an idirghníomhaíocht mhóilíneach idir an cumaisc agus gabhdóir próitéine ag baint úsáide as bogearraí BIOVIA Discovery Studio (BIOVIA, 2020). Rinneadh struchtúr an chomhdhúil láithreáin ceangailteach próitéine a léirshamhlú ag baint úsáide as an bpacáiste Amhairc Dhinimic Mhóilíneach (VMD) (Humphrey, Dalke & Schulten, 1996).

Anailís staitistiúil

TORTHAÍ

D'éirigh le comhábhar mór a íonghlanadh ó thaca críochfoirt H. trí úsáid a bhaint as eastóscadh tuaslagóirí agus teicnící HPLC céim droim ar ais, faoi seach. Cuireadh speictream 1 H-NMR agus 13C-NMR a fuarthas i gcomparáid leo siúd de shubstaintí tagartha tríd an SciFinder (https://scifinder.cas.org/) agus fuarthas go gcomhfhreagraíonn siad le (8′Z)-1,{ {6}}dé-hiodrocsai-5- [16′-(3″,5″-dihyroxyphenyl)-8′-heicseádcen-1′-il] beinséin (Chaturvedula et al., 2{{ 23}}02). Rangaíodh é mar cheann de na bisresorcinols. Bhí an fhoirmle mhóilíneach C28H40O4 ag an bis resorcinol seo le déanaí le meáchan móilíneach de 463.2819 Dalton. Ríomhadh an toradh eastósctha a bheith 0.086 faoin gcéad , bunaithe ar mheáchan triomaithe an trunk. Ba é an íonacht níos mó ná 98 faoin gcéad , maidir leis an speictrim 1 H agus 13C-NMR a fuarthas (féach Figs. S1 agus S2 ).

Anailís bithghníomhaíochta in vitro

Cinneadh éifeachtaí freasúla an bisresorcinol ar einsímí aosaithe, mar shampla collagenase, elastase, agus tyrosinase in vitro trí úsáid a bhaint as modh speictreascópach ar leith. Rinneadh achoimre ar na torthaí i dTábla 1 agus Fíor 2. Le haghaidh cosc ​​collaigine, ullmhaíodh samplaí tástála i raon 50–550 µmol L−1 ag baint úsáide as MOCAc-PRO-Leu-Gly-Leu-A2pr (Dnp)-Ala Arg-NH2 mar an tsubstráit einsím agus aigéad caffeic mar inhibitor einsím. Tugadh le fios gur laghdaigh an bisresorcinol ag tiúchan 156.7 µmol L -1 an ghníomhaíocht einsím faoi 50 faoin gcéad (IC50). Ina áit sin, b'ionann an IC50 d'aigéad caiféin agus 308.9 ± 13.7 µmol L−1. Mar sin, bhí gníomhaíocht frith-collagenase an bisresorcinol i bhfad níos láidre ná aigéad caffeic.

Tuilleadh eolais: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501