Maolaíonn Pinocembrin Teip Croí Iar-Infarct Trí Chonair Chomharthaíochta Nrf2/HO-1 a Ghníomhachtú Cuid 1

Déan teagmháil le do thoiloscar.xiao@wecistanche.comle haghaidh tuilleadh eolais

Teibí

Cúlra:Is fachtóir tábhachtach é strus ocsaídiúcháin a bhaineann le dul chun cinn cliseadh croí. Rinneadh an staidéar reatha chun imscrúdú a dhéanamh an raibh pinocembrin in ann cliseadh croí iar-infarct (PIHF) agus na meicníochtaí bunúsacha a fheabhsú.

Cliceáil anseo le do thoil chun tuilleadh eolais a fháil

Modhanna:Rinneadh na francaigh ligation artaire íslitheach chlé roimhe a chothaíonn infarction miócairdiach agus ina dhiaidh sin ardaithe ar feadh 6 seachtaine chun cliseadh croí ainsealach a tháirgeadh. Ansin riaradh pinocembrin gach lá eile ar feadh 2 sheachtain. Rinneadh measúnú ar na héifeachtaí ag echocardiography, blot an iarthair, staining Masson, scrúduithe bithcheimiceacha, imdhíon-histochemistry, agus fluaraiseacht. In vitro, rinneamar freisin cairdiomyocytes H9c2 agus miofibroblasts cairdiacha a chothú chun na meicníochtaí a fhianú a thuilleadh.

Torthaí:Fuaireamar amach gur tháinig feabhas suntasach ar mheathlaithe feidhmeanna cairdiacha de bharr PIHF trí pinocembrin a riar. Ina theannta sin, mhaolaigh cóireáil pinocembrin sil-leagan collagen agus gabhdóir fachtóir fáis endothelial soithíoch 2 sa chrios teorann infarct mar aon le apoptosis caolaithe, a bhain le maolú ar strus ocsaídiúcháin a léiríodh trí laghdú ar speicis ocsaigine imoibríocha (ROS) i bhfíochán croí. agus malondialdehyde (MDA) i serum, agus méadú superoxide dismutase (SOD). In éineacht leis seo, rinneadh an chonair fachtóir núicléach erythroid 2 (Nrf2)/heme oxygenase-1(HO-1)a uasrialáil. Fuaireamar amach i dturgnaimh in vitro gur chuir coscaire Nrf2 ar leith siar go suntasach na héifeachtaí a d’eascair as pinocembrin lena n-áirítear frithocsaídeach, frith-apoptosis, frith-fiobróis, agus neovascularization, rud a léirigh a thuilleadh go raibh feabhsú PIHF ag pinocembrin i Nrf2/HO{{2 cosán-spleách ar bhealach.

Is féidir le Cistanche díolúine a fheabhsú

Conclúid:Feabhsaigh Pinocembrin feidhmeanna cairdiacha agus athmhúnlú mar thoradh ar PIHF trí scaveneáil ROS agus gníomhachtú conair Nrf2/HO-1 a mhaolaigh tuilleadh sil-leagan snáithíní collaigine agus apoptosis, agus a d’éascaigh angiogenesis.

Eochairfhocail:Pinocembrin, Cliseadh croí, strus ocsaídiúcháin, Nrf2/HO-1

Réamhrá

Tá cliseadh croí (HF), arb iad is sainairíonna é raon siondróim chliniciúla críochfoirt mar thoradh ar lagú struchtúrach agus/nó feidhmiúil an chroí, fós ina ualach sláinte domhanda, agus infarction miócairdiach (MI) mar an phríomhchúis (Ziaeian agus Fonarow 2016; Galli agus Lombardi 2016; Rengo et al.2013). In ainneoin an dul chun cinn mór atá déanta i dteiripí agus i gcáilíocht an chúraim i HF, meastar go bhfuil 37.7 milliún duine ann gach bliain ar fud an domhain, mar aon le básmhaireacht 50 faoin gcéad ag 5 bliana tar éis diagnóis HF (Go et al). .2014). D'fhéadfadh an aincheist atá ann faoi láthair a chur i bpáirt leis an HF iar-infarct (PIHF) comhdhéanta de raon leathan meicníochtaí paiteolaíocha nach bhfuil modhanna teiripeacha atá ann faoi láthair in ann tagairt iomlán a dhéanamh dóibh.

Tá sé léirithe ag staidéir charntha go bhfuil baint go príomha ag strus ocsaídiúcháin (OS) le dul chun cinn paiteolaíoch PIHF (Dubois-Deruy et al.2020; Ma et al. 2019; Bubb et al.2017; Habtemariam 2019).OS, curtha i láthair go príomha ag an Tá bunús le carnadh iomarcach fréamhacha saor in aisce/speicis ocsaigine imoibríocha (ROS) ina bhfuil radacach hiodrocsaile, sárocsaíd, ocsaíd nítreach, srl. , próitéiní, agus DNA, le neamhoird organelle, athlasadh, apoptosis i myocytes agus fiobróis interstitial supervening (Dubois-Deruy et al.2020; Bubb et al.2017; Hermida et al. 2018). De bhua éifeachtaí díobhálacha iolracha ROS, tá frithocsaídeoirí curtha san áireamh sna teiripí PIHF a bhfuil na meicníochtaí comhdhéanta de scavening ROS díreach agus/nó spreagadh cosanta frithocsaídeach ina bhfuil glutathione, superoxide dismutase(SOD), catalase, etc.( Habtemar-iam 2019). Mar sin féin, ba chúis aiféala é nár éirigh le cur i bhfeidhm roinnt frithocsaídeoirí, vitimín E (Lee et al.2005) ná resveratrol (Made et al. 2015; Olesen et al. 2014), sásamh a bhaint as teiripe na ngalar cardashoithíoch, is léir ón teip i bhfeabhsú feidhmeanna cairdiacha. Dá bhrí sin, tá gá le frithocsaídeoirí níos éifeachtaí i dteiripe PIHF.

Is comhdhúil flavonoid nádúrtha é Pinocembrin (Pino)(léirítear an struchtúr ceimiceach i bhFíor.1A), a d'fhéadfaí a bhaint as mil, propolis, agus roinnt plandaí eile (Lan et al.2015; Rasul et al.2013) chomh maith le sintéis shaorga (Costa agus Leitao 2011), a fheidhmíonn éifeachtaí frith-athlastacha, antibacterial, frith agus frith-ailse (Rasul et al.2013; Ye et al.2019), chomh maith leis an éifeacht frithocsaídeach béime (Kim et al.2020; Sangweni et al .2020). Mar a léiríodh roimhe seo, tá struchtúr feanólach Pino atá freagrach as díothú díreach ROS chomh maith le struchtúir feanólacha agus neamhfheanólacha araon a dhianaíonn an chosaint frithocsaídeach (Habtemariam 2019) cuntas ar éifeacht frithocsaídeach Pino, trína ndéantar staidéar agus cur i bhfeidhm ar Pino i réimse leathan. galair éagsúla, mar shampla galair neurodegenerative, atherosclerosis, tocsaineacht cardiomyocyte spreagtha doxorubicin (Sangweni et al. 2020; Sang et al.2012; Liu et al.2014). Mar sin féin, ós rud é go bhfuil roinnt frithocsaídeoirí le haghaidh infarction miócairdiach agus HF neamhbhailí nó neamhleor le hathrú go húsáid chliniciúil, ní thuigtear cé acu an bhféadfaí éifeacht frithocsaídeach Pino a chomhlíonadh i dteiripe PIHF. Rinneadh an taighde seo mar sin chun imscrúdú a dhéanamh an bhféadfadh riaradh Pino éifeachtaí tairbheacha a imirt ar PIHE, agus gealltanas á thabhairt aige gur úrscéal nua é, nó mura mbeadh ceannasach ann ach cóireáil chúnta ar a laghad.

Modhanna agus ábhair

Samhail ainmhithe agus prótacal turgnaimh

56 francach fireann Sprague-Dawley, a ceannaíodh ó ionad turgnamh ainmhithe na Síne Three Gorges University,

ardaíodh i riarachán ainmhithe Ospidéal Wuhan Uimh.3. Ceadaíodh na turgnaimh go léir go hoifigiúil agus rinneadh iad in Hubei Key Laboratory of Cardiology, chloígh siad leis an Treoir um Chúram agus Úsáid Ainmhithe Saotharlainne arna fhoilsiú ag Institiúidí Náisiúnta Sláinte SAM (Foilseachán NIH Uimh.82-23, leasaithe i 1996).

Ar dtús fuair na francaigh ligation artaire corónach íslitheach roimhe (LAD) chlé nó máinliacht sham. Go hachomair, rinneadh ainéistéitic ar fhrancaigh ag 3 faoin gcéad pentobarbít (2 mL/kg; Sigma-Aldridge, St.Louis, SAM, intraperitoneal), agus ina dhiaidh sin intubation tracheal agus tacaíocht riospráide (toirt taoide: 5-10 mL, ráta: 70 uair/nóiméad). Rinneadh nochtadh croí ina dhiaidh sin agus ligeadh an LAD le 7-0 comhuaimeacha níolóin monafilament. Léirigh tarlú paleness an ingearchló apexcordis nó ST-deighleog ar an luaidhe I de electrocardiogram an ionduchtú MI. Chuaigh an oibríocht sham faoi nósanna imeachta comhionanna seachas an ligation LAD. Instealladh peinicillin (200,000 IU) go ionmhatánach uair sa lá ar feadh seachtaine tar éis na hoibríochta.

Afterward, the rats were carefully raised for 6 weeks to produce PIHF. Rats were then randomly split into 4 groups:(i) sham+saline (sham group);(i)sham+Pino group;(ii)LAD ligation+saline(HF group);(iv)LAD ligation+Pino(HF+Pino group). Pinocembrin(5 mg/kg, purity>98 faoin gcéad ; Sigma-Aldridge) nó an méid céanna salainn a instealladh go hinfhéitheach tríd an vein eireaball gach lá eile ar feadh 2 sheachtain. Thagair an dáileog do staidéar roimhe seo (Lan et al.2017). Léiríodh an prótacal i bhFíor.1B.

Bhí 3 ghrúpa i bhfrancaigh rialaithe dearfacha: sham móide seile (grúpa sham); Ligation LAD móide saline (grúpa HF); Ligation LAD móide enalapril (grúpa HF móide ACEI). Chuaigh na francaigh faoi na hoibríochtaí comhfhreagracha ach amháin gur tugadh 20 mg/kg enalapril do francaigh an ghrúpa HF móide ACEI ó bhéal.

Tomhais echocardiography

Rinneadh measúnú ar na feidhmeanna cairdiacha ag macallacardagrafaíochta trasthoracach ag baint úsáide as córas íomháithe ultrafhuaime (Vevo 2100, Visual Sonics Inc., Toronto, Ceanada), mar a tuairiscíodh roimhe seo inár ngrúpa (Fo et al.2020). Taifeadadh toise inmheánach na ventricular clé ag an gcéim dheiridh dhiastólach (LVIDd) agus ag an gcéim dheiridh systolic (LVIDs), toirt an systolic deiridh ventricular chlé agus an deireadh diastólach (LVESV agus LVEDV) le macallagrafa dhá-mhód M ar feadh 3 ar a laghad. timthriallta as a chéile do gach francach. Ríomhadh ina dhiaidh sin codán díshealbhaithe ventricular chlé (LVEF) agus giorrú codánach (FS), a léirigh an fheidhm systolic.

Ullmhúchán samplach

Tar éis tástálacha Pino agus echocardiography a thabhairt, rinneadh ainéistéitic ar fhrancaigh arís. Gabhadh níos mó ná 2 ml d’fhuil venous ón bhféith eireaball isteach go haigéad eitileediaminetetraaicéiteach (EDTA) – ina bhfuil feadáin bhailithe fola i bhfolús le lártheifneoiriú comhleanúnach ag luas 3000 r/nóim ar feadh 15 nóiméad agus ag teocht 4 céim C, agus ina dhiaidh sin leithlisiú serum supernatant agus caomhnú ag-80 "C. Ansin baineadh na gcroí go tapa. Rinneadh cuid de chrios teorann infarct gach croí a ghearradh amach agus a reoite i nítrigin leachtach le haghaidh anailíse blot an iarthair, agus an fíochán croí eile socraithe i 4 faoin gcéad paraformaldehyde ar feadh níos mó ná 24 h.

staining Masson

Rinneamar staining Masson chun an sil-leagan collaigine a bhrath i gcrios teorann an infarct. Bhí ventricles paraformaldehyde-seasta leabaithe ag pairifín agus ansin gearrtha i 5- codanna μm. Daiteadh na hailt ina dhiaidh sin le trichrome Masson áit a raibh an collaigine daite i gorm, an miócairdiam i bándearg, agus an núicléas i dubh. Ríomhadh an cion sil-leagan collaigine ag bogearraí Image J (NIH, Bethesda, MD) ag méadú × 200.

Anailís imdhíon-aisticeimiceach

Rinneadh anailís imdhíon-cheimiceach chun measúnú a dhéanamh ar dhlús receptor fachtóir fáis endothelial soithíoch 2 (VEGFR2) a chuir a n-uasrialú chun cinn angiogenesis a bhí tairbheach agus tábhachtach maidir le maolú athmhúnlú (Rengo et al. 2013). Rinneadh na codanna ventricular cosúil leis na cinn a rinneadh i staining Masson, agus díphairifíníodh agus athhiodráitithe ina dhiaidh sin. Ansin fuair na hailt aisghabháil frith-gen teas-mheánaithe agus déileáladh leo le 3 faoin gcéad H, O, chun peroxidase ingenous a bhlocáil, le gor 1 ug/mL antashubstaint VEGFR2 (Abcam, ab9530) ar feadh 12h ag 4 céim comhlíonta. Ina dhiaidh sin, bhí na hailt gortha ag capall-raidis peroxidase (HRP)-lipéadaithe antashubstaint tánaisteach (1:200, Seirbhís, G1213) ar feadh 50 nóiméad ag 37 céim. Chomh maith leis sin, baineadh úsáid as 3,3'-diaminobenzidine a fhorbairt staining dearfach a bhí léirithe i breacadh an lae. Ar deireadh, rinne bogearraí Image-Pro Plus 6.0 (Media Cybernetics, USA) anailís agus ríomh meándlúis optúla VEGFR2.

Measúnacht lipéadaithe leas-deiridh de chuid teirminéil-deoxynucleotidyl transferase-mediated (TUNEL)

Braitheadh ​​​​measúnú TUNEL ina dhiaidh sin apoptosis. Gearradh maiseanna pairifín a monaraíodh roimhe seo a leabaíonn fíochán ventricular i slisní eile le haghaidh measúnacht TUNEL, agus staining TUNEL ina dhiaidh sin de réir threoracha an déantóra ar an trealamh measúnaithe tráchtála (Roche, An Eilvéis; 11684817910). Go hachomair, bhí na hailt ventricular faoi lé imoibrí TUNEL, áit a raibh TdT agus dUTP measctha le cion de 1:9, for1 h ag teocht an tseomra, tar éis goir proteinase K agus réabfaidh an membrane cille. Ar deireadh, breathnaíodh na híomhánna fluaraiseacha ag tonnfhad 530 nm a spreag tonnfhad astaithe de 450 nm (× 400 formhéadú). Rinne Bogearraí Íomhá anailís agus ríomh ráta apoptotic na bhfíochán ventricular i ngach grúpa.

blot an iarthair

Cuirimid blot an iarthair i bhfeidhm chun na meicníochtaí bunúsacha trína ndearna Pino feabhas ar PIHF a shoiléiriú. Bhí nósanna imeachta eastóscadh agus ullmhú samplaí próitéine cosúil leis na cinn a tuairiscíodh roimhe seo inár staidéar (Chen et al.2020a). Scrúdaíodh na seicní le antasubstaintí i gcoinne an fhachtóra núicléach erythroid 2-fachtóir gaolmhar 2(Nrf2), heme oxygenase{{ 4}}(HO-1; 1:2000, Abcam, ab189491), p53(1:1000, teicneolaíocht comharthaíochta cille, 2524S), BCL-2 (1:1000, teicneolaíocht comharthaíochta cille,2870P) ,bax (1:1000, Abcam, ab32503), caspase scoilte-3(1:1000, teicneolaíocht comharthaíochta cille, 9664 T), collaigine I(1:1000, Affinity, AF7001), glicealdéad-3- fosfáit díhidrigineáis (GAPDH, Seirbhís, GB12002), agus léirshamhlú ina dhiaidh sin ag antasubstaintí tánaisteacha lipéadaithe HRP (Seirbhís, G1213 agus G1214) agus imoibrithe braite ceimiléasachta. Rinneadh anailís agus cainníochtú ar na híomhánna blot ar deireadh le bogearraí Image J.

Saothrú agus diúscairt cardiomyocytes H9c2 in vitro Saothraíodh na cardiomyocytes H9c2 de bhunadh ventricular croí francach, a ceannaíodh ón mBailiúchán Cultúir de Chineál Meiriceánach (CRL-1446), chun na héifeachtaí a d'fheidhmigh Pino in vitro a fhíorú tuilleadh. Saothraíodh cardiomyocytes H9c2 i meán modhnaithe Eagle (DMEM)/F12 e Dulbecco a chuimsigh séiream bó féatais 10 faoin gcéad (Sijiqing, Hangzhou, an tSín) faoi theocht 37 céim agus atmaisféar 95 faoin gcéad aeir agus 5 faoin gcéad CO. Na cealla a síolaíodh go 6-plátaí tobair tar éis fás go 90 faoin gcéad , ina theannta sin, cuireadh meán séiream ina raibh 25 uM isoprenaline (ISO) in ionad gnáthmheán i 3 thobair chun na cealla a ghoradh ar feadh 48 h chun aithris a dhéanamh ar staid HF ó shin. Tá HF tréithrithe freisin ag róghníomhachtú ton báúil agus spreagadh - gineann gabhdóir adrenergic ROS (Velusamy et al.2020). Ansin bhí scoilte na cealla i 6 ghrúpa: (i) grúpa rialaithe; (ii) mheán rialaithe leis le 25 μM Pino ar feadh 4 h (rialú móide Pino grúpa); （i） meán rialaithe comh-ghorthaithe ag 25 μM Pino agus 5 μM ML385 le haghaidh 4 h (Coiscín Nrf2; MCE, New Jersey, SAM) (grúpa control plus Pino plus ML385); (iv)grúpa ISO; v. Meán ISO le 4-h gor faoi 25 μM Pino (ISO plus Pino group); vi. ISO móide 25 μM Pino móide 5 μM ML385 grúpa. Rinneadh tagairt do thiúchan agus am goir na ndrugaí do staidéir roimhe seo nó do na treoracha (Jin et al.2015; Oliveira et al.2017).

Cultúr miofibroblasts cairdiach francach nua-naíoch agus measúnacht ar iomadú

Saothraíodh miófhiobrablastaí cairdiacha francacha nua-naíoch (CMFanna) le hiniúchadh a dhéanamh ar éifeachtaí Pino ar secretion collaigine. Scaradh na CMFanna trí úsáid a bhaint as francaigh nuabheirthe 3 lá d’aois, ag tagairt do mhodhanna a léiríodh roimhe seo (Cui et al. 2{021). Díleádh na croíthe scoite agus mionfheoil le 0.125 faoin gcéad trypsin agus ina dhiaidh sin mhanglaim ina raibh 0.25 faoin gcéad trypsin agus 0.08 faoin gcéad collagenase arís agus arís eile, agus lártheifneoiriú agus trasphlandú chuig mias Petri a rinneadh ina dhiaidh sin chun an bailiú an cealla ón supernatant. Ansin cuireadh meán serum in ionad na meáin cosúil leis an gceann a úsáidtear do chultúr cardiomyocytes H9c2 tar éis greamaitheacht 90 min. Fuair ​​na CMFanna diúscairtí comhionanna leo siúd ar chardaimíicítí H9c2. Chuireamar i bhfeidhm freisin trealamh comhairimh ceall-8(CCK-8) (Dojindo, an tSeapáin) chun iomadú CMFanna a bhrath agus dlús 1.5×10 céim á bhaint amach i ngach tobar, trí leas a bhaint as léitheoir micreaphláta ag tonnfhad 450 nm, nuair a léirigh luach níos airde gníomhaíocht iomadaithe méadaithe.

Brath ROS

Tomhaiseadh cumas Pino chun ROS a scamhadh ag probe fluaraiseacha dihydroethidium (DHE; Beyotime, Shanghai, An tSín). Caolaíodh DHL, a tuaslagtha i DMSO, go 5 μM le haghaidh hailt reoite nó cuireadh leis an meán serum a chaolú go dtí an tiúchan céanna de réir na dtreoracha. Bhí na croíthe paraformaldehyde reoite agus ina dhiaidh sin slisnithe suas go dtí codanna 4-μm. Comh-ghlaiseadh na hailt nó cardiomyocytes H9c2 le tuaslagán DHE ar feadh 30 nóiméad ag teocht 37 céim , íomháithe ina dhiaidh sin ag micreascóp fluaraiseacha inbhéartaithe (IX70; Olympus, Tóiceo, an tSeapáin). Go hachomair, dathaíodh an núicléas a líonadh le DNA agus RNA i ndath dearg ar leith de bharr cleamhnais idir aigéad núicléasach agus DHE. Ina theannta sin, léirigh déine fluaraiseachta níos láidre carnadh níos mó de ROS.

Scrúduithe bithcheimiceacha

Rinneadh scrúduithe bithcheimiceacha chun athruithe serum BNP, SOD, agus malondialdehyde (MDA) i séiream agus forshnáthán ceallach a léirigh feinitíopa HF agus an chosaint ocsaídeach, faoi seach. Rinneadh an tiúchan a thomhas trí úsáid a bhaint as feisteáin mheasúnachta bithcheimiceacha comhfhreagracha de réir threoracha an mhonaróra (Jiancheng, Nanjing, an tSín).

Baintear an t-alt seo as Chen et al. Mol Med (2021) 27:100 https://doi.org/10.1186/s10020-021-00363-7