Rinne Pentraxin-3-Gníomhachtú Comhlánaithe a idirghabháil i Múnla Muc d'Ischemia Duánach/Díobháil reperfusion

Teagmháil: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Ríomhphost:audrey.hu@wecistanche.com

Chiara Divella et al

Teibí

Is teaghlach de mhóilíní aitheanta patrún atá caomhnaithe go héabhlóideach iad pentraxins a bhfuil róil lárnacha acu maidir le himdhíonacht dhúchasach agus athlasadh, mar shampla opsonization pataiginí le linn ionfhabhtuithe baictéarach agus víreasach. Go háirithe, tá sé léirithe go rialaíonn an Pentraxin fada 3 (PTX3) roinnt gnéithe de athlasadh soithíoch agus fíocháin le linn trasphlandú orgáin soladach.

Rinne ár staidéar imscrúdú ar ról PTX3 mar mhodhnóir féideartha ar ghníomhachtú Comhlánaithe i múnla muc d'ischemia duánach/ath-fhrithshruthú (I/T). Léiríomar go raibh taiscí luath PTX3 de bharr gortú I/R ag leibhéil ribeach imeallacha agus glomerular. Nocht micreascóp scanadh léasair comhfhócasach taiscí PTX3 ag comhlonnú le CD31 móide cealla endothelial. Ina theannta sin, bhí baint ag PTX3 le macrophages insíothlaithe (CD163), cealla dendritic (SWC3a), agus myofibroblasts (FSP1). Go háirithe, léirigh muid gníomhachtú suntasach PTX trí mheán na bealaí Comhlánaithe clasaiceacha (idirghabhálaithe C1q) agus lectin (MBL-idirghabhála). Is díol spéise é go bhfuil taiscí PTX3 comhlonnaithe le gníomhachtú an choimpléasc Comhlánaithe teirminéil (C5b-9) ar chealla endothelial, rud a thugann le fios gur ag an leibhéal soithíoch duánach go príomha a tharla gníomhachtú comhlántach trí mheán PTX. Mar fhocal scoir, léiríonn na sonraí seo go bhféadfadh PTX3 a bheith ina sprioc theiripeach ionchasach chun gortú I/R de bharr Comhlánú a chosc.

Comhfhreagras chuig:Giuseppe Castellano

Eochairfhocail:gortú ischemia/athfhriotú, córas comhlántach, pentraxin 3,duán, cosán clasaiceach

Coscann Cistanche tubulosa galar duáin, cliceáil anseo chun an sampla a fháil

RÉAMHRÁ

Léiríonn gortú ischemia-reperfusion (I/T) príomhchúis na géarmhíochaineduángortútar éis trasphlandúcháin agus tá sé tréithrithe ag gníomhachtú suntasach ar an gcóras comhlántach [1, 2]. Sa chás seo, tá ról ríthábhachtach ag cealla endothelial (CE) i ndeisiú maladaptive tar éis I/R, as a dtiocfaidh fiobróis luath trí aistriú endothelial go mesenchymal (EndMT) [3]. Le linn na céime reperfusion, cuireann Comhlánú próisis imdhíoneolaíocha agus athlastacha ar bun, ag cur le galair imdhíonachta agus athlastacha éagsúla [2-5]. Déantar comhpháirteanna riachtanacha eile de lámh humoral an chórais imdhíonachta dúchasach a léiriú ag pentraxins a mheastar go bhfuil ról lárnach acu i mbitheolaíocht soithíoch [6].

Is teaghlach de phróitéiní intuaslagtha iliméireacha iad pentraxins [6] a aicmítear i dteaghlaigh ghearr agus fhada bunaithe ar a struchtúr [7]. Is éifeachtóirí géarchéim iad na próitéiní seo a chaomhnaítear go héabhlóideach, a fheidhmíonn mar braiteoirí chun athlasadh a thionscnamh agus a mhéadaíonn plasma go tapa le linn ionfhabhtaithe [8]. Is móilín aitheantais patrún intuaslagtha é an pentraxin fada 3 (PTX3) atá ríthábhachtach maidir le cosaint imdhíonachta dúchasach agus is féidir leis an gcóras comhlántach a ghníomhachtú [9–11].

Go háirithe, spreag PTX3 gníomhachtú cosán clasaiceach agus lectin trí cheangal le C1q, MBL, Ficolin-2 agus tá sé in ann tionchar a imirt ar an gcosán malartach trí CFH [10-12].

I gcodarsnacht le pentraxins eile a tháirgtear ae sa tsruth fola (ie CRP), is féidir le cealla cónaitheacha PTX3 a scaoileadh laistigh den suíomh athlasadh, mar shampla ó phagocytes mononuclear, cealla dendritic, fibroblasts, agus EC [9] ag gníomhú ar bhealach paracrine. [13]. Stóráiltear PTX3 freisin i bhfoirm réamhdhéanta i neutrophils, logánaithe i gráinníní ar leith, agus secreted mar fhreagra ar aithint moieties miocróbach [14]. Sa CE, tá an abairt PTX3 ionduchtaithe go héasca ag TNF- agus IL-1 , rud a thugann aistriú ó fheinitíopa quiescent, frith-athlastach, go dtí staid procoagulant agus proinflammatory, rud a rialaíonn go láidir an fheidhm microvascular [7, 8 ]. Ar an ábhar sin, tá cur síos déanta ar leibhéil PTX3 marainsealachduángalar, tá an méadú ar leibhéil próitéine PTX3 comhghaolaithe le laghduithe GFR agus aimhréidh cardashoithíoch, áfach, is beag atá ar eolas go fóill faoi ról PTX3 sna suíomhanna luatha mar ghéarmhíochaine spreagtha I/R.duángortú [15, 16].

Tá ról PTX3 i ngalar athlastacha duánach défhiúsach, ó thaobh is féidir leis an bpróitéin cosáin clasaiceacha agus lectin a ghníomhachtú a chuireann athlasadh agus gortú tosaigh chun cinn [10-12]. Ar an taobh eile, mhaolaigh fearann ​​N-críochfort PTX3 gníomhachtú comhlántach modhnaithe earcaíocht leukocyte maolaithe agus chuir sé bac ar fhiobróis idirstitial i ngéarghortú duánach chun deisiú fíocháin a chur chun cinn [17-20].

Tá ról lárnach ag comhlánú i phaitifiseolaíocht ghéarmhíochaine I/R de bharr gortúduángortú[21, 22]. I múnla muc de ghortú duánach I/R, léirigh muid an ról lárnach atá ag gníomhachtú an chórais Comhlánaithe maidir le EndMT agus fiobróis luath a aslú, le baint ag bealaí clasaiceacha agus lectin araon [23]. Thairis sin, léirigh muid gur tháinig laghdú suntasach ar thaisceadh comhlántach mar gheall ar chosc teiripeach ar na bealaí comhlántacha seo trí C1-INH (rhC1INH) athchuingreach, le laghdú ar earcú cealla athlastacha insíothlaithe agus damáiste tubulointerstitial [23]. Dheimhnigh Delpech PO et al [24] na torthaí seo freisin; rinneadh measúnú ar mhodhnú suntasach i sil-leagan glomerular agus feadánacha C1q, MASP, agus C4d tar éis 30 nóim iar-ath-athfhuinnimh rud a léirigh ról lárnach C1-INH chun gníomhú in aghaidh conairí clasaiceacha agus lectin.

Sa staidéar seo, rinneamar imscrúdú ar an mbaint a d’fhéadfadh a bheith ag PTX3 in idirghabháil a dhéanamh ar ghníomhachtú Comhlánaithe luath i ngortú duánach I/R, arb iad is sainairíonna iad na foinsí ceallacha éagsúla PTX3.

TORTHAÍ

Cuirtear PTX3 in iúl trí chealla endothelial agus cealla insíothlaithe imdhíonachta i múnla muc de ghortú I/R

Ar dtús, rinneamar imscrúdú ar láithreacht PTX3 i múnla muc de ghortú duánach te de bharr I/R. Thugamar faoi deara taiscí PTX3 an-teoranta i bhfíochán gnáth (Fíor 1A). Bhí gortú I/R ina chúis le sil-leagan idirleata de PTX3 cheana féin ag 15 nóiméad tar éis athfhruiliú (Fíor 1B, 1C) sa limistéar tubulointerstitial (Fíor 1E), ag ribeadáin imeallacha (Fíor 1D; saighead), agus ag leibhéil glomerular (Fíor 1D). Bhí taiscí PTX3 fós inbhraite 1 uair tar éis reperfusion ag leibhéal na ribeadáin periubular (Fíor 1G). Inár gcuid oibre roimhe seo [23] léirigh muid gurb iad na príomhghnéithe a bhaineann le díobháil I / R ná apoptosis cille epithelial feadánacha agus earcú cealla athlastacha insíothlaithe cosúil le monocytes, cealla dendritic, agus limficítí. Mar sin féin, trí ghnáthmheastóireacht histeolaíoch (Figiúr Forlíontach 1), léirigh muid go raibh 30 nóiméad d’ischemia te agus 15 nóiméad de dhamáiste idir-stitial tubule luath de bharr reperfusion-spreagtha, arb iad is sainairíonna plódú ribeach níos mó agus folúntas cíteaplasmach fócasach an epithelium tubule duánach, i gcomparáid le basal. riocht.

Chun logánú ceallacha taiscí PTX3 a thréithriú tuilleadh agus chun a éifeacht féideartha a mheas maidir le freagairt athlastach agus gortú a mhodhnú, rinneamar anailís ar mhicreascópacht imdhíonta dúbailte agus comhfhócasach. Braitheadh ​​abairt próitéin PTX3 sa chuid is mó den CE ag leibhéil ribeadáin peritubular (Fíor 2A) agus glomerular (Fíor 2B), 15 nóiméad tar éis reperfusion.

Tá sé ar eolas go maith go bhfuil gortú I/R tréithrithe ag gníomhachtú méadaithe na bhfreagraí imdhíonachta dúchasacha agus oiriúnaitheacha, lena n-áirítear gáinneáil cille athlastach isteach san orgán ghalraithe a mhéadaíonn gortú trí chealla imdhíonachta agus an córas Comhlánaithe a thuilleadh [25]. Inár múnla muc, thugamar faoi deara freisin, cheana féin 15 nóiméad tar éis reperfusion, insíothlú dlúth athlastach comhdhéanta den chuid is mó de macrophages agus cealla dendritic sa limistéar tubule-interstitial. Fuair ​​​​muid amach go raibh léiriú PTX3 méadaithe mar thréith ag na cealla seo a chuireann antaigin i gcomparáid le T0 ó chonaic muid líon méadaithe CD163 móide /PTX3 móide (Fíor 2E, 2F, 2K) agus SWC3a móide /PTX3 móide (Fíor 2G, 2H, 2L) cealla ag leibhéil interstitial tubule ag T15.

Is féidir le slonn PTX3 cur le EndMT i ngortú I/R

I dtuairimí roimhe seo, léirigh muid go raibh díobháil I/R freagrach as EndMT [26, 27], arb iad is sainairíonna é éadáil feinitíopa mesenchymal ag EC le caillteanas marcóirí endothelial sonracha agus gnóthachan marcóirí mesenchymal, mar shampla fibroblast-shonrach. próitéin 1 (FSP-1), cadherin néarónach (N-cadherin) agus actin matán alfa-réidh (alfa-SMA). Mar sin, rinneamar imscrúdú an bhféadfadh tionchar a bheith ag léiriú PTX3 ag CE ar an bpróiseas seo. De réir mar a bhíothas ag súil leis, nuair a rinneamar imscrúdú ar léiriú alfa-SMA, mar mharcóirí myofibroblast gníomhachtaithe, níor aimsigh muid aon chomhlonnú idir alfa-SMA agus PTX3 (Fíor 2C, 2D). Os a choinne sin, thugamar faoi deara méadú ar FSP1 tubulointerstitial móide /PTX3 móide myofibroblasts le linn na tréimhse breathnadóireachta (Fíor 2K-2M).

Tá baint ag taiscí PTX3 le gníomhachtú an chórais chomhlánaithe

Ar deireadh, rinneamar imscrúdú an raibh baint ag taiscí PTX3 le gníomhachtú Comhlánaithe. Go deimhin, mar atá le comhpháirteanna eile den teaghlach pentraxin, is féidir le PTX3 gníomhachtú an chosáin chomhlánú clasaiceach a rialáil [7]. Chun an gaol idir gníomhachtú PTX3 agus Comhlánú a shainiú, rinneamar inmunofluorescence lipéad dúbailte chun léiriú PTX3 agus an teirminéal a mheas. Coimpléasc comhlántach, C5b-9, ag baint úsáide as antashubstaint atá dírithe ar C9-neopitóp. Thugamar faoi deara comhlonnú suntasach de thaiscí PTX3 agus C5b-9 (Fíor 3A, 3B). Bhí an coimpléasc críochfoirt Comhlánaithe logánaithe ag an leibhéal imeallach agus laistigh de na ribeadáin imeallacha chomh maith leis an gciseal cille endothelial, mar a léirigh muid roimhe seo [23, 28]. Ós rud é gur féidir le PTX3 an córas Comhlánaithe a ghníomhachtú trí na cosáin clasaiceacha agus lectin, rinneamar measúnú ar sil-leagan C1q agus MBL i parenchyma duánach. Suimiúil go leor, fuarthas taiscí C1q (Fíor 3E, 3F) agus MBL (Fíor 3C, 3D) go príomha ag an leibhéal interstitial agus ribeach (Fíor 3C trí 3F), mar a thuairiscítear roimhe seo [23] agus colocalized le taiscí PTX3.

Cuireann an coscóir C1- isteach ar cheangal PTX3 ar chealla inotelial

Inár gcuid oibre roimhe seo [23] thaispeáin muid gur tháinig laghdú suntasach ar thaisceadh comhlántach mar thoradh ar riarachán coiscthe C1-, le hearcú laghdaithe de chealla athlastacha insíothlaithe agus damáiste tubulointerstitial. Mar sin, scrúdaíomar an leibhéal slonn PTX3 in ainmhithe cóireáilte rhC1-INH. Fuaireamar amach gur laghdaigh insileadh coisctheora C{1-taiscí PTX3 ag ribeadáin imeallacha agus ag leibhéal idir-rannóg tar éis 15 nóiméad iar-ath-fhrithshruthaithe (Fíor 4A).

Ina theannta sin, chun tacú leis an hipitéis go raibh baint ag laghdú taiscí PTX3 in ainmhithe cóireáilte rhC1-INH le cosc ​​ar dhamáiste inotelial, rinneamar turgnaimh in vitro agus rinneamar measúnú ar rhC1-INH agus PTX3 ceangailteach ar. EC saothraithe faoi ghnáthchoinníollacha nó i láthair strus ceallacha (Fíor 4B). Thaispeáin anailís FACS nach raibh EC i ngnáthchoinníollacha ina gceangal RHC1-INH agus PTX3 araon. De réir ár staidéar roimhe seo [26], thugamar faoi deara ceangal ceallach méadaithe rhC1-INH ar H2O{2-spreagtha EC i gcomparáid le coinníollacha basal. Ina theannta sin, in éagmais rhC1-INH, d'fhéadfadh PTX3 EC gníomhachtaithe a cheangal. Is díol suntais é, nuair a bhí PTX3 agus rhC1-INH gníomhachtaithe H2O á ghortú, thugamar faoi deara go raibh C1INH in ann EC a chosaint nuair a bhí bac ar cheangal PTX3.

PLÉ

Sa staidéar seo, léirigh muid sil-leagan PTX3 sa chéim luath de ghortú duánach I/R agus an rannchuidiú a d’fhéadfadh a bheith aige le forbairt EndMT. Suimiúil go leor, fuaireamar amach go dtarlaíonn gníomhachtú Comhlánaithe trí mheán PTX go príomha ag an leibhéal soithíoch, ag comhlonnú le C1q agus MBL, na móilíní aitheantais de bhealaí clasaiceacha agus lectin den easghluaiseachta Comhlánaithe.

Spreagann gortú I/R freagra athlastach marcáilte arb é is sainairíonna é gníomhachtú Comhlánaithe, fréamhacha saor ó ocsaigine, agus táirgeadh cítocín pro-athlastach, rud a fhágann gníomhachtú endothelium soithíoch agus leucocytes forimeallach [29, 30]. Le linn gortú I/R, mar thoradh ar ghníomhachtú Comhlánaithe comhlánaítear sil-leagan comhpháirteanna ar membrane dromchla an CE damáiste agus mífheidhmiúil, le giniúint comhuaineach anaphylatoxins agus aimpliú an phróisis athlastach [31]. Le linn athlasadh, méadaíonn PTX3 go tapa agus d’fhéadfadh ról lárnach a bheith aige i modhnú freagra endothelial. Go deimhin, tá PTX3 curtha in iúl mar bhithmharcóir féideartha de mhífheidhm endothelial soithíoch i roinnt galair, lena n-áirítear ainsealach.duángalair, preeclampsia, agus roinnt galair soithíoch [7, 16, 17, 32]. Léirigh muid freisin go bhfuil baint ag PTX3 le deacrachtaí soithíoch eile cosúil le teip fistula arteriovenous in othair haema-scagdhealaithe [33]. Tugann na tuairimí seo le fios go bhféadfadh PTX3 a bheith ina dhroichead idir freagra athlastach agus dysfunction endothelial [34]. Ag teacht leis na staidéir seo, thugamar faoi deara taiscí PTX3 ag leibhéal endothelial cheana féin tar éis 15 nóiméad tar éis reperfusion (Fíor 2A, 2B). Léirigh ár dtorthaí freisin, sa chéim luath de ghortú I/R, go raibh PTX3 comháitithe le marcóir myofibroblast, FSP-1 (Fíor 2I, 2J) ach ní le alfa-SMA, marcóir arna léiriú ag myofibroblast gníomhachtaithe (Fíor 2C, 2D). I dteannta a chéile, d’fhéadfadh na sonraí seo a thabhairt le tuiscint gur tharla mífheidhm endothelial agus an próiseas EndMT [35], a breathnaíodh in ainmhithe I/R [26], ar dtús san CE ag léiriú PTX3.

Aithnítear go forleathan an nasc idir PTX3 agus cealla athlastacha. Sa pháipéar seo, dhírigh muid go sonrach ar éifeachtaí dúchasacha PTX3 in insíothlú interstitial de leucocytes atá mar phríomhfhoinse PTX3 [36]. Go háirithe, fuair muid macrophages agus cealla dendritic, tar éis 15 min tar éis reperfusion, ag cur in iúl leibhéil níos airde de PTX3 (Fíor 2E trí 2H). Aontaíonn na sonraí seo leis an gcorp fianaise atá ag méadú a thugann le tuiscint go bhfuil ról ábhartha ag díolúine dúchasach in idirghabháil a dhéanamh ar dhamáiste luath i ngortú I/R [23]. Mar thoradh ar ghníomhachtú luath Comhlánú i bhfíochán duánach tar éis gortú I/R gintear roinnt idirghabhálaithe athlastacha a mhéadaíonn earcú cealla imdhíonachta [21, 23, 37, 38]. D'aithin staidéir le déanaí PTX3 mar cheann de phríomhchodanna an líonra a threoraíonn an freagra athlastach a spreag gortú I/R [39]. I múnlaí turgnamhacha éagsúla de ghortú I/R, is féidir le PTX3 róil débhreathnaitheacha a fheidhmiú ar fhíocháin shonracha [40, 41]. Tá baint ag táirgeadh luath PTX3 le damáiste duánach ós rud é go spreagann sé léiriú luath ar mhóilíní greamaitheachta endothelial agus chemokines a luathaíonn an freagra athlastach áitiúil maladaptive.

Ar a mhalairt, cuireann táirgeadh áitiúil fada PTX3 cosc ​​​​ar athlasadh agus mífheidhmiú orgán iomarcach [41].

Is modúlóir cascáide Comhlánaithe é PTX3 [9, 42]; tá sé seo i gcomhaontú le hairíonna pleiotrópacha PTX3 a léiríonn ról déach PTX3 mar mhodúltóir nó aimplitheoir ar an bhfreagra imdhíonachta dúchasach [39]. Ar dtús, gníomhaíonn PTX3 Comhlánú trí cheangal C1q agus MBL [43]; áfach, ní mór athlasadh luath-mhéadaithe a theorannú don sprioclimistéar. Mar sin, d'fhéadfadh PTX3, trí fhachtóir H a earcú nó bac a chur ar angiogenesis, an freagra athlastach a laghdú agus gníomhachtú a chomhlánú chun parenchyma duánach a chaomhnú ó dhamáiste athlastach [43]. Cé go bhfuil gníomhachtú Comhlánaithe in I/R i creimirí go háitiúil go príomha ag an leibhéal feadánach [44], le linn na céime athfhriotail, is é an endothelium príomhsprioc gníomhairí pro-athlastacha éagsúla, lena n-áirítear idirghabhálaithe comhlántacha [2]. Léirigh muid roimhe seo, i múnla na muc de ghortú I / R chomh maith le hothair DGF, go dtarlaíonn gníomhachtú an chórais Chomhlánaithe sa chéim luath, ar ribeadáin peritubular, laistigh den interstitium, agus ar an endothelium glomerular [23]. Thaispeáin ár sonraí comhlonnú soiléir de thaiscí C5b-9 ar PTX3 móide EC tar éis 15 nóiméad tar éis reperfusion (Fíor 3A, 3B). Mar sin, is cosúil gurb é an endothelium duánach an suíomh coitianta de ghníomhachtú Comhlánaithe trí mheán PTX i gcéim luath díobhála I/R i suíomhanna réamhchliniciúla agus cliniciúla araon.

Déantar cur síos maith ar idirghníomhaíocht pentraxins le C1q agus a ról i ngníomh an chosáin Chomhlánúcháin chlasaicigh [45-47]. I gcomhthéacs na bhfreagraí imdhíonachta dúchasacha, is féidir le PTX3 comhpháirteanna Comhlánaithe éagsúla a cheangal agus gníomhachtú Comhlánú a mhodhnú [43, 48]. Gníomhaíonn PTX3 Comhlánú ag C1q ceangailteach [49]. Léirigh ár dtorthaí sa mhúnla ainmhithe go soiléir go bhféadfadh PTX3 idirghabháil a dhéanamh ar ghníomhachtú cosán clasaiceach trí idirghníomhú le C1q (Fíor 3E, 3F). Ina theannta sin, modhnaíonn PTX3 conair lectin an Chomhlánaithe freisin, mar a léirítear i bhFíor 3C, 3D. Ceanglaíonn MBL PTX3 trína bhfearann ​​cosúil le collaigine [45] agus earcaíonn coimpléisc MBL/PTX3 C1q agus faigheann siad sil-leagan C3 agus C4 ar dhromchlaí cille sprice.

San iomlán, tugann na torthaí seo le fios go bhfuil ról lárnach ag PTX3 san idirghabháilduándamáiste i ngortú I/R, a bhféadfadh impleachtaí tábhachtacha a bheith aige do theiripí Comhlántach-dhírithe i ngortú duánach I/R.

Inár staidéar roimhe seo [26], rinneamar imscrúdú ar rannpháirtíocht comhlánú in idirghabháil a dhéanamh ar ghníomhachtú an CE trí úsáid a bhaint as foirm athchuingreach de C1-INH, coscóir cumhachtach proteases de na bealaí comhlántacha clasaiceacha agus lectin (C1r, C1 s, agus MASP2). Sa tsamhail chéanna ainmhithe, thaispeáin muid (Fíor 4A) gur laghdaigh cosc ​​teiripeach ar an dá chonair ag rhC1INH taiscí PTX3 ag ribeadáin imeallacha agus leibhéal interstitial tar éis 15 nóiméad tar éis athfhriotú. De bharr na sonraí seo a deimhníodh le torthaí in vitro ar EC (Fíor 4B), rinneamar hipitéis a thabhairt go bhféadfadh an rhC1INH EC damáiste a chosaint ar bhlocáil ceangailteach PTX3. Sa litríocht, tá fianaise ann faoi cheangal C1-INH le móilíní greamaitheachta endothelial, arna shloinneadh ar endothelium gníomhachtaithe, ar a dtugtar selectins, go háirithe P agus E-selectins [50, 51]. Féadfaidh an ceangailteach seo ar CE cur isteach ar idirghníomhaíocht endothelial-leukocyte le linn athlasadh agus léiríonn sé meicníocht thábhachtach frith-athlastach eile [50, 51]. Mar sin, rinneamar hipitéis gur féidir le rh-C1INH CE gníomhachtaithe a cheangal agus idirghabháil a dhéanamh ar rialáil áitiúil ar ghníomhachtú comhlántach agus ar phróiseas athlastach. Inár staidéir roimhe seo, tá sé léirithe againn go bhfuil baint ag an gcomhlánú le gortú I/R agus i ngalar duánach eile trí mheán imdhíonachta [38, 52-54]. D’fhéadfadh impleachtaí tábhachtacha a bheith ag meicníochtaí gníomhachtaithe Comhlánaithe sa tsamhail ainmhí seo maidir le léirmhíniú na sonraí a bhfuiltear ag súil leo sa suíomh daonna. Chun idirghabhálacha teiripeacha a fhorbairt go rathúil atá dírithe ar Chomhlánú-ghníomhú [36, 54], tá sé riachtanach bailíocht na sonraí muice a bhunú i gcoibhneas lena dtarlaíonn i gcúinsí cliniciúla. Ós rud é go bhfuil an taighde seo teoranta do staidéir bhreathnaithe, tá gá le tuilleadh turgnaimh chun na meicníochtaí idirnasctha idir PTX3 agus Comhlánú a leagan amach a d'fhéadfadh béim a chur ar straitéisí teiripeacha nua. Ó na torthaí thuas, tacaíonn ár gcuid sonraí leis an hipitéis go bhféadfadh PTX3 gnéithe iolracha de ghortú I/R trí Chomhlánú a rialáil, rud a léiríonn sprioc teiripeach féideartha.

ABHAIR AGUS MODHANNA

Múnla muice gortaithe I/R duánach

Forbraíodh an tsamhail ainmhí de ghortú duánach I/R mar a thuairiscítear roimhe seo [23]. Tar éis faomhadh ó choiste eiticiúil na hAireachta Sláinte, 4-mí d'aois baineann muca Bána Móra (n=8, n=4 don ghrúpa, 20 kg) faoi nós imeachta máinliachta oscailte turgnamhach faoi ainéistéise ginearálta. Rinne na hainmhithe troscadh ar feadh 24 uair an chloig roimh ionduchtú ainéistéise. Rinneadh monatóireacht leanúnach ar an electrocardiogram, ráta croí, saturation ocsaigine haemaglóibin, comhdhéanamh gáis riospráide, ráta riospráide, toirt taoide, brú aerbhealaigh, brú fola artaireach systolic, agus brú venous lárnach go huathoibríoch (Ohmeda Modulus CD; DatexOhmeda, Heilsincí, an Fhionlainn) . Bhí an t-artaire duánach clé agus an vein scoite amach agus bhí lúb soithigh suite timpeall an artaire duánach le clamp dronuilleach. Rinneadh bithóipse duánach roimh ischemia (T0). Ansin, ionduchtaíodh an chéim ischemic (30 min) trí lúb an tsoithigh a tharraingt. Déanadh bithóipsí iolracha ansin ag 15, 30, agus 60 nóiméad tar éis reperfusion; Rinneadh ainmhithe a íobairt 24 uair tar éis an nós imeachta máinliachta. Rinneadh cuid de gach eiseamal bithóipse a Léim-reoite láithreach i meán na teochta gearrtha optamach (Tissuetek, Pittsburgh, PA) agus stóráiltear é i nítrigin leachtach. Socraíodh cuid eile i formalin maolánach (4 faoin gcéad) ar feadh 12 uair an chloig agus leabaithe i pairifín ag baint úsáide as nósanna imeachta caighdeánacha.

Staidéar micreascópachta

Baineadh úsáid as eiseamail duánach leabaithe pairifín ó bhithóipsí duánach le haghaidh staining histeolaíoch traidisiúnta (H&E, aigéad-Schiff tréimhsiúil). Fuair ​​gléas Aperi ScanScope CS2 íomhánna (Aperio Technologies, Vista, CA, USA). Rinneadh measúnú ar loit tubule-interstitial agus glomerular ag baint úsáide as anailís cháilíochtúil ag beirt bhreathnóirí (CD, MR) nach raibh ar an eolas faoin mbunús.

Antasubstaintí

D'aithin na hantasubstaintí príomhúla a úsáideadh sa staidéar seo na hantaiginí seo a leanas: PTX3 (MNB4: díreach i gcoinne PTX3 N-terminal domain, Exira Life Sciences In., Larsen, an Eilvéis); CD163 (monocytes/macrophages, SAM Bitheolaíochta, Swampscott, MA); SWC3a (cealla dendritic, [55] 74-22-15A, BD Bitheolaíochtaí); FSP1 (próitéin fibroblast ar leith 1, Abcam, Cambridge, an RA); actin muscle alfa-réidh (Santa Cruz Biotechnology Inc.; Santa Cruz, CA, SAM); C1q (R9/2, AbDSerotec; Kidlington, An Ríocht Aontaithe); MBL (3E7: díreach i gcoinne fearann ​​aitheantais carbaihiodráit MBL, biteicneolaíocht Hycult, Uden, an Ísiltír) agus neoantigen C9 (aE11, biteicneolaíocht Hycult). Rinneadh an tras-imoibríocht a bhailíochtú trí na hantasubstaintí sonracha a réamh-ghorthú, roimh a n-úsáid, le peptídí daonna a úsáidtear chun iad a ardú. Chuir an réamh-ghoir deireadh le staining shonrach ar fhíochán muc.

Imdhíonfluaraiseacht fíocháin agus micreascópacht scanadh léasair comhfhócasach

Rinneadh imscrúdú ar thréithriú agus ar logánú comhartha PTX3 ar fhíocháin reoite a chuimsítear i meán OCT (Fíocháin-Tek). Goradh na sleamhnáin le serum coinín 5 faoin gcéad ar feadh 1 uair an chloig ag 37 céim C. Ansin goradh na sleamhnáin ar feadh 1 uair ag teocht an tseomra le antasubstaintí sonracha. Tar éis trí níochán i PBS, goraíodh na sleamhnáin ansin leis na hantasubstaintí tánaisteacha cuí (Alexa Plúr 488 agus 555, Tóraigh Mhóilíneach, Eugene, OR). Rinneadh gach cuid a dhaite le TO-PRO-3 (Tóraigh Mhóilíneach). Ullmhaíodh rialuithe diúltacha le antasubstaintí nach mbaineann le hábhar. Rinneadh anailís ar na hailt agus úsáid á baint as micreascóp scanadh léasair comhfhócasach Leica TCS SP2 (Leica, Wetzlar, an Ghearmáin). Rinneadh líon na gceall insíothlaithe a thomhas i 10 réimse/roinn ardchumhachta (x630) ar a laghad ag beirt bhreathnóirí neamhspleácha a bhí dall ar bhunús na sleamhnáin. Ba iad na comhairimh deiridh meán an dá bheart. I gcás ar bith , bhí an éagsúlacht idirbhreathnaitheach níos airde ná 20 faoin gcéad .

Anailís ar chultúr cille agus citoiméadracht sreafa

Ceannaíodh cealla endothelial vein umbilical daonna (HUVEC, EC) ó Chineál American Culture Collection (Caighdeáin ATCC-LGC, Sesto San Giovanni, an Iodáil). Fásadh EC ina meáin mholta, EndoGro (Merck Millipore, Darmstadt, an Ghearmáin). Plátáladh EC ag dlús 1{{1{0}},000chill/cm2 agus spreagadh é le cóireáil H2O2 (3 faoin gcéad , 1 uair). Ansin nitear EC basal agus spreagtha faoi dhó le PBS agus baineadh iad le PBS-EDTA 2mM agus trypsin 0.001 ×. Ansin athchuireadh cealla in PBS agus goraíodh iad faoi seach le PTX3 (PTX3 daonna athchuingreach, Sigma-Aldrich, Merck, an Ghearmáin) (1ug/ml) nó/agus le rhC1-INH (Ruconest®, Pharming) (2.5ug). /ml) ar feadh 60 nóiméad. Tar éis níocháin trí huaire le PBS 1X, athchuireadh cealla i maolán cítiméadrachta sreafa (FACS) (salainn mhaolánach fosfáit, pH 7.2, 0.2 faoin gcéad albaimin serum bó, agus 0.02 faoin gcéad azide sóidiam) agus gortha le himoibrí blocála FCR (Miltenyi Biotec) le haghaidh 10 min ag teocht an tseomra. Tar éis an bhlocála, goraíodh EECanna le C1-INH coinín frith-dhaonna (arna sholáthar ag an Ollamh M. Daha, Ollscoil Leiden, caolú 1//100) nó/agus le frith-PTX3 francach (MNB4, Exira Life Sciences In., caolú 1/20) ag teocht an tseomra ar feadh 30 nóiméad agus nite leis an maolán FACS. Ansin, goraíodh cealla le IgG PE frith-choine gabhar (Tóraigh Mhóilíneach, caolú 1/100) nó/le IgG FITC frith-rata (Tóraigh Mhóilíneach, caolú 1/100) ag teocht an tseomra ar feadh 30 nóiméad agus nite trí huaire. Rinneadh anailís ar chealla le bogearraí FC500 (Beckman Coulter, Brea, CA, SAM) agus Kaluza. Socraíodh réimse na dearfachta trí úsáid a bhaint as mAb a mheaitseáil le isitíopa, agus, san iomlán, fuarthas 104 imeacht do gach sampla. Rinneadh trí thurgnaimh neamhspleácha.

Anailís staitistiúil

Cuirtear sonraí i láthair mar mheán ± diall caighdeánach (SD) agus déantar iad a chur i gcomparáid le hanailís ar athraithis nó tástáil péireáilte T an dalta, de réir mar is cuí. Measadh go raibh difríochtaí suntasacha staitistiúla nuair a bhí luachanna p níos lú ná 0.05. Rinneadh anailís ar na sonraí trí úsáid a bhaint as pacáiste bogearraí Statview (leagan 5.0)(SAS Inc. Co., Cary, NC, SAM). Taispeánadh graif ag baint úsáide as Bogearraí GraphPad Prism 5.

Giorrúcháin

I/T: ischemia/athfhriotú; CE: cealla endothelial; PTX3: pentraxin 3; FSP-1: próitéin fibroblast-sonrach 1; N-cadherin: cadherin neuronal; alfa-SMA: actin muscle alfa-réidh.

RANNÍOCAÍOCHTAÍ AN ÚDAR

Chomhordaigh CD an staidéar, ghlac sé páirt i lipéadú imdhíonachta agus micreascópacht chomhfhócasach ar na hailt duánach, agus dhréachtaigh sé an lámhscríbhinn. Ghlac AS agus RF páirt i ndearadh an staidéir, chuir siad le hanailís sonraí, rinne siad turgnaimh in vitro, agus rinne siad athbhreithniú criticiúil ar an lámhscríbhinn. Rinne MR agus GSN anailís íomhá histeapaiteolaíoch. Rinne LL, FS, AMC an tsamhail ainmhí de ghortú Ischemia-Reperfusion agus chabhraigh sé leis an lámhscríbhinn a athbhreithniú. Rinne GL, PD, agus MB gach gnáthamh máinliachta ar mhúnla na muice agus chabhraigh siad leis an lámhscríbhinn a athbhreithniú. Rinne MRD, P.vdP., C.vK., agus FS athbhreithniú ar an lámhscríbhinn.

Rinne PP, ER, GG, GS, agus LG athbhreithniú criticiúil ar an lámhscríbhinn. Chuir GC uirlisí anailíse nua ar fáil, dhear agus rinne maoirsiú ar an taighde. Chuir CD, AS, agus RF go cothrom leis an staidéar seo. Chuir na húdair go léir leis an alt agus cheadaigh siad an leagan a cuireadh isteach.

BUÍOCHAS

Gabhaimid buíochas le Claudia Curci ón Aonad Duánach, Scagdhealaithe agus Trasphlandúcháin, An Roinn Éigeandála agus Trasphlandú Orgán, an

Ollscoil Bari as an gcúnamh teicniúil den scoth.

COIMHLINTÍ LEASA

Dearbhaíonn na húdair nach bhfuil aon choinbhleachtaí leasa acu.

MAOINIÚ

Thacaigh Ollscoil Bari "Aldo Moro" leis an staidéar seo, Aireacht Sláinte na hIodáile (GR 2016- 02362239 "Cur chuige tras-scríbhneoireacht-bhunaithe chun fachtóirí réamh-mheastacháin agus spriocanna teiripeacha a aithint maidir le moill ar fheidhm ghreamaithe i.duánfaighteoirí trasphlandúcháin”, Bando di Ricerca Finalizzata 2016, fuair CD scoláireacht ar an tionscadal seo) agus Fondo Sociale Europeo, Azione I.2 “Attrazione e Mobilità Internazionale dei Ricercatori”- AIM-1810057-gníomhaíocht 2 arna dheonú do AS

TAGAIRTÍ

1. Bonventre JV, Yang L. Pathophysiology cheallacha de ghéarmhíochaine ischemicduángortú. J Clin Infheistiú. 2011; 121:4210–21.

2. Jang HR, Rabb H. An freagra imdhíonachta dúchasach i géarmhíochaine ischemicduángortú. Clin Immunol. 2009; 130:41-50.

3. Ricklin D, Hajishengallis G, Yang K, Lambris JD. Comhlánú: príomhchóras faireachais imdhíonachta agus hoiméastáis. Nat Immunol. 2010; 11:785-97.

4. Thurman JM, Holers VM. Ról lárnach an chonair chomhlánaithe mhalartach i ngalar daonna. J Imdhíon. 2006; 176: 1305-10. PMID: 16424154

5. Franzin R, Stasi A, Fiorentino M, Stallone G, Cantaluppi V, Gesualdo L, Castellano G. Córas Athlasta agus Comhlánaithe: Nasc Idir GéarmhíochaineDuánGortú agus Damáiste Greamaithe Ainsealach. Imdhíonacht Tosaigh.

2020; 11:734.PMID:32457738

6. Deban L, Jaillon S, Garlanda C, Bottazzi B, Mantovani A. Pentraxins i díolúine dúchasach: ceachtanna ó PTX3. Res Fíochán Cille. 2011; 343:237–49.PMID:20683616

7. Cieślik P, Hrycek A. Pentraxin fada 3 (PTX3) i bhfianaise a struchtúr, meicníocht gníomhaíochta agus impleachtaí cliniciúla. Autoimmunity. 2012; 45:119–28.PMID:21988562

8. Kunes P, Holubcova Z, Kolackova M, Krejsek J. Pentraxin 3(PTX 3): modhnóir ingenous den fhreagra athlastach. Idirghabhálaithe Inflamm. 2012; 2012:920517.PMID:22577258

9. Garlanda C, Bottazzi B, Bastone A, Mantovani A. Pentraxins ag an gcrosbhóthar idir díolúine dúchasach, athlasadh, sil-leagan maitrís, agus torthúlacht baineann. Annu Rev Immunol. 2005; 23:337-66.115756PMID: 15771574

10. Bottazzi B, Garlanda C, Cotena A, Moalli F, Jaillon S, Deban L, Mantovani A. An pentraxin fada PTX3 mar receptor aitheantais patrún humoral fréamhshamhail: idirghníomhú le díolúine dúchasach ceallach. Immunol Ath. 2009; 227:9–18.PMID:19120471

11. Ma YJ, Doni A, Hummelshøj T, Honoré C, Bastone A, Mantovani A, Thielens NM, Garred P. Cothaíonn sineirgíocht idir ficolin-2 agus pentraxin 3 aitheantas imdhíonachta dúchasach agus cuireann sé leis an sil-leagan. J Biol Ceimic. 2009; 284:28263–75.PMID:19632990

12. Déanann Netti GS, Lucarelli G, Spadaccino F, Castellano G, Gigante M, Divella C, Rocchetti MT, Rascio F, Mancini V, Stallone G, Carrieri G, Gesualdo L, Battaglia M, Ranieri E. PTX3 an immunoflogosis i meall a mhodhnú microenvironment agus is fachtóir prognóiseacha é d’othair a bhfuil carcinoma cille duánach soiléir acu. Ag dul in aois (Albany NY). 2020; 12:7585–602.PMID:32345771

13. Souza DG, Amaral FA, Fagundes CT, Coelho FM, Arantes RM, Sousa LP, Matzuk MM, Garlanda C, Mantovani A, Dias AA, Teixeira MM. Tá an pentraxin fada PTX3 ríthábhachtach le haghaidh athlasadh fíocháin tar éis

ischemia intestinal agus reperfusion i lucha. Am J Pathol. 2009; 174:1309–18.PMID:19286566

14. Jaillon S, Peri G, Delneste Y, Frémaux I, Doni A, Moalli F, Garlanda C, Romani L, Gascan H, Bellocchio S, Bozza S, Cassatella MA, Jeannin P, Mantovani A. An receptor aitheantais patrún humoral PTX3 a stóráiltear i gráinníní neodrófail agus logánta i gaistí eischeallach. J Cait Med. 2007; 204:793–804.PMID:17389238

15. Tong M, Carrero JJ, Qureshi AR, Anderstam B, Heimbürger O, Bárány P, Axelsson J, Alvestrand A, Stenvinkel P, Lindholm B, Suliman ME. Plasma pentraxin 3 in othair a bhfuil ainsealachduángalair: baint le feidhm duánach, fuinneamh próitéine, cur amú, galar cardashoithíoch, agus básmhaireacht. Clin J Am Soc Nephrol. 2007; 2:889–97.PMID:17702732

16. Witasp A, Rydén M, Carrero JJ, Qureshi AR, Nordfors L, Näslund E, Hammarqvist F, Arefin S, Kublickiene K, Stenvinkel P. Leibhéil imshruthaithe ardaithe agus léiriú fíocháin pentraxin 3 in uremia: léiriú ar mhífheidhm endothelial. PLoS a hAon. 2013; 8: e63493.PMID:23658833

17. Presta M, Camozzi M, Salvatori G, Rusnati M. Ról an receptor aitheantais patrún intuaslagtha PTX3 i mbitheolaíocht soithíoch. J Cill Mol Med. 2007; 11:723-38.PMID:17760835

18. Bottazzi B, Inforzato A, Messa M, Barbagallo M, Magrini E, Garlanda C, Mantovani A. Na pentraxins PTX3 agus SAP i díolúine dúchasach, rialáil athlasadh agus athmhúnlú fíocháin. J Hepatol. 2016; 64: 1416-27.

19. Coscann Xiao Y, Yang N, Zhang Q, Wang Y, Yang S, Liu Z. Pentraxin 3 fiobróis idir-rannach a chothaíonn géar-ghortú duánach trí chonair IL-6/Stat3 a shochtadh. Athlasadh. 2014; 37:1895–901.PMID:24854162

20. Inforzato A, Reading PC, Barbati E, Bottazzi B, Garlanda C, Mantovani A. An taobh "milis" de pentraxin fada: conas a théann glycosylation i bhfeidhm ar fheidhmeanna PTX3 i díolúine dúchasach agus athlasadh. Imdhíonacht Tosaigh. 2013; 3:407. PMID: 23316195