Cuid Ⅰ Éifeachtaí Próitéin Chothaithe Agus Leibhéil Snáithín ar Fheidhmíocht Fáis, Tarlú Gout, Pobail Miocróbacha Stéig, agus Imdhíonrialú in Ais Gutkidney Goslings

Teibí

Rinne an staidéar reatha measúnú ar éifeachtaí próitéin chothaithe agus leibhéil snáithíní ar fheidhmíocht fáis, tarlú gout, pobail mhiocróbacha intestinal, agus imdhíonrialú san ais gut-duáin de goslings. Glacadh dearadh fachtóir randamach iomlán 2 £ 3 le 2 leibhéal CP (180 [18CP] agus 220 [22CP] g/kg) agus 3 leibhéal amhshnáithín (CF) (30 [CF íseal], 50 [lár-CF], agus 70 [CF ard] g/kg). Bhí na haistí bia CP ard nó CF íseal ann roimh na goslings chun gout. An aistí bia próitéin ard dul chun donais fheidhm duánach; méadaíodh go suntasach an tiúchan serum de UA agus Cr chomh maith le gníomhaíocht XOD i 9-goslings lá d'aois a chothaítear 22 faoin gcéad aistí bia CP. Cé nach raibh tionchar díreach ag leibhéil CF ó 3 go 7 faoin gcéad ar shláinte na nduán, d'fhéadfadh méadú ar leibhéil CF dlús a chur le méadú probiotics i cecum goslings agus baictéir fhireann a choinneáil siar, rud a mhaolódh an dysbiosis gut de bharr aistí bia ardphróitéine. Léirigh anailís ar an microbiota cecal trí sheicheamhú RNA 16Sr go raibh an flúirse Enterococcus sa ghrúpa 22CP níos airde ná sin sa ghrúpa 18CP ach laghdaigh sé le leibhéil CF a mhéadú ar d 9. Tháinig méadú ar an raidhse Lactobacillus le méadú ar leibhéil CF. Ina theannta sin, léirigh LPS serum níos airde agus tiúchan cítocine pro-athlastach agus leibhéil slonn mRNA uasrialaithe sna fíocháin cecal, tonsil, agus duáin go bhféadfadh aistí bia ardphróitéine an cosán TLR4 / MyD88 / NFkB a ghníomhachtú agus athlasadh intestinal agus duánach araon a spreagadh i goslings óga. Fuarthas amach gur tháinig laghdú ar thiúchan serum LPS ar d 9 le méadú CF, cé nach raibh tionchar díreach ag athrú ar leibhéil CF aiste bia ar innéacsanna imdhíonachta serum goslings. Mar fhocal scoir, chuir an aiste bia CP ard tionchar diúltach ar tharlú gout, pobail mhiocróbacha, agus imdhíonrialú san ais gut-duáin de goslings, agus chabhraigh leibhéil snáithín cothaithe méadaithe go cuí cothromaíocht intestinal a choinneáil agus tiúchan LPS serum laghdaithe. Molaimid aiste bia de 18 faoin gcéad CP péireáilte le 5 faoin gcéad CF mar an meascán is fearr le haghaidh bia gosling.

Eochairfhocail

amhshnáithín, próitéin, gout gosling, pobail mhiocróbacha intestinal, ais gut-duáin,Buntáistí Cistanche.

Cliceáil anseo chun eolas a fháilcad iad na héifeachtaí Cistanche ar Duán

Réamhrá

Braitheann géanna, atá luibheach, ar snáithín cothaithe chun gnáthghníomhaíochtaí a dhéanamh. Is eol go gcuireann leibhéil mheasartha amhshnáithín (CF) in aistí bia le frithsheasmhacht in aghaidh galair agus cuireann siad fás in éanlaith chlóis chun cinn trí chothromaíocht mhicr-éiceolaíoch intestinal a mhodhnú agus feidhmeanna imdhíonachta a fheabhsú (Jha agus Mishra, 2021) Wils-Plotz et al. (2013). thuairiscigh gur cuimsíodh slonn IL- 12 upregulated peictin chothaithe sa mhúcóis ileal agus méadú ar tháirgeadh interferon-g i tonsilí cecal. Tá sé tugtha le fios ag roinnt staidéir go laghdaíonn aiste bia CF íseal éagsúlacht mhiocróbach chomh maith le flúirse choibhneasta na micribiota tairbheach i géanna ceca ar d 70, rud a chuireann isteach go diúltach ar fheidhmíocht fáis, úsáid cothaitheach, agus díolúine mucosal intestinal na géanna seo (Li et al., 2017; Li et al., 2018a). D'fhéadfadh CF aiste bia cabhrú le feidhm bhacainn intestinal a choinneáil trí struchtúr agus feidhm mucosal a neartú, chomh maith le méadú ar dhaonra agus éagsúlacht na mbaictéar comhbhreithe sa chonair gastrointestinal. Níos tábhachtaí fós, tuairiscítear go bhfuil éin óga níos íogaire d’athruithe ar chothaithigh aiste bia agus pobail mhiocróbacha intestinal ná daoine fásta (Gao et al., 2017). Mar sin féin, tá staidéir ar éifeacht leibhéil CF aiste bia ar mhicribhiota gut agus ar fhriotaíocht galair i goslings gann.

Níl feidhmíocht fáis na n-éan chomh íogair d’athruithe ar leibhéil phróitéin ná d’athruithe ar fhuinneamh chothaithe i mbeatha chun a nádúr luaineach bunaidh a shásamh (Shi et al., 2006). Tuairiscíodh nár breathnaíodh aon difríocht shuntasach maidir le méadú meáchain i ngéanna le leibhéil phróitéin chothaithe ag dul ó 16 go 22 faoin gcéad , a bhfuil an chuma air go bhfuil sé róghinearálta ó thaobh scóipe (Summers et al., 1986). Os a choinne sin, bíonn tionchar láidir ag tiúchain próitéin chothaithe ar chothromaíocht flóra intestinal agus ar fhriotaíocht galair in éanlaith chlóis (Lee et al., 2020). Is galar meitibileach é gout visceral, a tharlaíonn go príomha in éin, mar gheall ar fheidhm duáin lagaithe, agus carnadh criostail urate ina dhiaidh sin in orgáin éagsúla (Zhang et al., 2018). Léirigh staidéar a rinneadh roimhe seo ar ár staidéar go raibh baint ag aistí bia ardphróitéine le gortú duánach agus le dysbiosis micribiota putóige a bhaineann le gout i goslings (Xi et al., 2020a). Léirigh torthaí an staidéir seo, i gcomparáid le goslings a chothaítear 16 agus 18 faoin gcéad aistí bia amhphróitéine (CP), gur fhulaing goslings a chothaíodh 22 faoin gcéad d’aistí bia CP gortú cille epithelial intestinal agus dysbiosis miocróib cecal, rud a d’fhág gortú duáin, nó fiú gout gosling. Is cosúil go bhfuil ról lárnach ag microbiota an chonair gastrointestinal agus a mheitibilítí maidir le díolúine an ais gut-duáin in éanlaith chlóis a neartú (De Cesare et al., 2019; Xi et al., 2020b). Mar sin, d'fhéadfadh sé go gcabhródh sainaithint clár cothaithe cuí, a dhíríonn ar éifeachtaí leibhéil chothaithe CF agus CP, le minicíocht gout a íoslaghdú agus díolúine a fheabhsú trí chothromaíocht mhicréiceolaíoch intestinal a choinneáil agus trí rialáil imdhíonachta coibhneasta a fheabhsú i goslings.

Cuireann an micribhithóim intestinal tionchar as cuimse ar rialáil imdhíonachta gut, a chuireann isteach ar dhíolúine sistéamach agus a chuireann le cothromaíocht imdhíonachta. Bíonn tionchar ag athruithe ar chomhdhéanamh aiste bia, lena n-áirítear leibhéil CP agus CF, ar chomhdhéanamh agus ar ghníomhaíochtaí meitibileach na micribiota a oiriúnú don timpeallacht intestinal (Liu et al., 2014). In éanlaith chlóis, d’fhéadfadh aon chur isteach ar an micribhithóim éagothroime a chothú san imdhíonacht shistéamach, rud a chuirfeadh le laghdú ar fhriotaíocht galair. I staidéar roimhe seo ar ár gceann, fuaireamar amach gur mhéadaigh dysbiosis miocróib gut an baol gout visceral i goslings trí athlasadh a mhéadú chomh maith le traslonnú lipopolysaccharide gut-díorthaithe (LPS) san ais gut-duáin. Sa easghluaiseachta casta seo, gníomhaíonn ligation LPS an fachtóir núicléach, kappa-light-slabhra-feabhsaithe an chonair B cille gníomhachtaithe (NF-kB) agus táirgeadh cítocíní pro-athlastacha, mar shampla interleukin 1b (IL1b) agus fachtóir neacróis meall. a (TNFa), ag cur chun cinn ar an gcaoi sin forbairt lamháltas imdhíoneolaíoch sa phuirt agus i duáin na ngiolcach (Xi et al., 2019). Dhírigh an staidéar reatha ar imscrúdú a dhéanamh ar na pobail mhiocróbacha a raibh cónaí orthu sa cecum de goslings a chothaigh leibhéil éagsúla CP agus CF aiste bia, agus rinne sé athruithe ar tharla gout a thomhas trí anailís a dhéanamh ar na freagairtí imdhíonrialaithe agus athlastacha a tharlódh san ais gut-duáin.

Cistanche Caighdeánaithe

abhair agus modhanna

1. Faomhadh Eiticiúil

D'fhormheas Coiste Taighde Acadamh Eolaíochtaí Talmhaíochta Jiangsu an staidéar agus rinneadh é de réir na Rialachán um Riarachán Gnóthaí a Bhaineann le hAinmhithe Turgnamhach (Ordú Uimh. 63 ó Acadamh Eolaíochta Talmhaíochta Jiangsu an 8 Iúil, 2014). Rinneadh na turgnaimh go léir le treoirlínte ARRIVE (Taighde Ainmhithe: Tuairisciú ar Thurgnaimh In Vivo).

2. Dearadh Turgnamhach

Rinneadh an staidéar seo ó 2 Samhain go 17, 2020, ag Ionad Ainmhithe Turgnamhach Acadamh Eolaíochtaí Talmhaíochta Jiangsu (Nanjing, an tSín). San iomlán 1,620 géanna Taizhou aon lae d'aois (Anser domestica, 100 faoin gcéad ,), arna soláthar ag Cuideachta Teoranta Géanna Pórúcháin Tianzhijiao (Chuzhou, an tSín), go randamach. 6 ghrúpa turgnamhacha. Bhí 6 mhacasamhail i ngach cóireáil, agus bhí 45 éan i ngach macasamhail. Úsáideadh dearadh fachtóir randamach iomlán 2 £ 3 don turgnamh. Ullmhaíodh sé aiste bia le 2 leibhéal CP agus trí leibhéal CF (Tábla 1). Ba iad na leibhéil 2 CP ná 180 (18CP) agus 220 (22CP) g/kg agus ba iad na trí leibhéal CF ná 30 (CF íseal), 50 (lár CF), agus 70 (ard). CF) g/kg. Ardaíodh na goslings go léir i dteach teirmeastatach le cages cruach dhosmálta den mhéid comhionann (1.20 £ 1.00 £ 0.50 m3, 9 gosling in aghaidh an chliabháin, dlús stocála: 7.5 éan / m2 ), a cuireadh 0.50 m os cionn na talún. Cothaíodh na goslings faoi choinníollacha caighdeánacha bainistíochta le beatha millíní agus uisce ad libitum. Ba leor líon na n-ábhar beathaithe crochta agus óltóirí clúidín i ngach cage le linn an staidéir. Coinníodh an teocht chomhthimpeallach ag 30 céim ó d 0 go 3, 29 céim ó d 4 go 6, 28 céim ó d 7 go 9, agus 26 céim ó d 10 go dtí deireadh an turgnaimh. Bhí an taiseachas coibhneasta thart ar 60 faoin gcéad i rith na tréimhse turgnamhaí. Cothromaíodh na foinsí solais (solas bán, 400 −760 nm) le soilsiú 15 § 0.3 lux ag leibhéal an chinn éin, le sceideal solais 22 h solais ó d 0 go 3, 18 h solais ó d 4 go 14, agus 16 h solais ó d 15 go 21 ar thimthriall 24-h.

The basal diet was formulated to meet or exceed National Research Council (NRC, 1994) nutrient requirements for growing geese. The composition of experimental diets is presented (Table 1). Dietary samples (>Measctha le haghaidh anailíse 1 faoin gcéad den bhia úr) a fuarthas go randamach ó 5 shuíomh. Tomhaiseadh CP agus CF de réir GB/T6432 (Caighdeán Náisiúnta na Síne: Cinneadh amhphróitéine i mbeatha) agus GB/T6434 (Caighdeán Náisiúnta na Síne: Cinneadh amhshnáithín i mbeatha).

Taifeadadh an ADFI agus an BW (beomheáchan) goslings ag baint úsáide as scála leictreonach (YP60001, Hengji, Shanghai, an tSín) roimh bheathú le linn na tástála agus ríomhadh ADG agus cóimheas comhshó beatha (FCR) ag deireadh an turgnaimh. Ina theannta sin, rinneadh achoimre ar ghalracht charnach gout gach macasamhail (bhí 45 éan i ngach macasamhail) i measc cóireálacha éagsúla tar éis na tréimhse turgnamhaí. Sainmhíníodh an caighdeán roghnúcháin le haghaidh gout mar gosling a thaispeánann loit duáin chomhlána agus tiúchan d’aigéad serum uric (UA) os cionn luach imeallach forsháithithe uráit (fireann, 416 mmol/L agus baineann, 357 mmol/L). Is iad na loit chomhlána tipiciúla is mó a bhíonn ag na duáin pale, breactha, agus ata, agus tá na tubules duánach agus na húiréatar éagsúil le hurates iomarcacha (Xi et al., 2020a).

Herba Cistanche

3. Tomhas Meitibilít Séiream

Roghnaíodh 36 gosling (n=6 goslings/cóireáil) go randamach le haghaidh bailiú fola láithreach (5 mL/ gosling), tar éis díchaipitlithe, trí fheadáin bailithe fola gan antaithéachtach ar d 9 agus 18, faoi seach. Goradh na samplaí fola go léir ag 37 céim ar feadh 2 uair tar éis an bhailiúcháin agus lártheifneoiríodh iad ag 1,5{{10}}0 £ g ar feadh 15 nóiméad. Stóráladh séireamaí a fuarthas i bhfeadáin Eppendorf 0.6 ml ag 80 céim go dtí go ndéanfar anailís bhreise. Cinneadh leibhéil serum UA trí úsáid a bhaint as dathmhéadracht aigéad fosfatungstic. Cinneadh tiúchan creatinine (Cr) agus nítrigin úiré (NA), chomh maith le gníomhaíocht xanthine oxidase (XOD) trí dhathiméadracht einsímeach ag baint úsáide as speictreafótaiméadar micreaphláta (Promega Corporation, Madison, WI). Ba í Institiúid Bithinnealtóireacht Jiancheng (Nanjing, an tSín) a sholáthair na feisteáin seo; ba iad na cóid C012 (UA), C011-2 (Cr), C013-2 (UN), agus A002 (XOD). Rinneadh tiúchan serum IgM, IgA, agus IgG sna géanna turgnamhacha a thomhas ag baint úsáide as feisteáin ELISA imdhíon-ghlóbailin gé a ceannaíodh ó Shanghai J&I Biotechnology Co., Ltd (Shanghai, an tSín). Cinneadh coimpléisc imdhíonachta a scaiptear serum (CIC), IL{-1b, agus tiúchan TNF-a ag baint úsáide as trealamh gé tráchtála ELISA (Institiúid Bithinnealtóireacht Jiancheng, Nanjing, an tSín). Rinneadh gníomhaíocht diamine oxidase (DAO) a thomhas trí dhathiméadracht einsímeach ag baint úsáide as anailísí bithcheimiceach uathoibríoch (Hitachi, Tóiceo, an tSeapáin). Rinneadh Serum LPS a thomhas ag baint úsáide as an measúnú traidisiúnta Limulus (Limulus Assay Biotechnology Company Ltd., Xiamen, an tSín). Bhí raonta braite LPS sa mheasúnacht Limulus sa raon ó 0.015 go 0.6 EU/mL. Bhí na hábhair go léir a úsáideadh chun fuil a bhailiú agus chun endotoxins a thomhas saor ó phirogen. Rinneadh gach measúnacht de réir threoracha an mhonaróra. Rinneadh tástáil trí chóip ar shamplaí séirim. Ba iad na comhéifeachtaí éagsúlachta laistigh agus idir-thrassay do na measúnachtaí<10% and <15%, respectively.

4. Breathnú Histeamoirfeolaíoch

Bailíodh an ceca (fad {{36}} cm) de 36 goslings (n=6 goslings/cóireáil) tar éis bailiú samplaí fola ar d 9 agus 18 le haghaidh anailís histeolaíoch. Socraíodh samplaí a bailíodh ó goslings i 4 faoin gcéad paraformaildéad, leabaithe i pairifín, agus sectioned (tiús slice: 3 mm; 4 slisní in aghaidh an gosling). Scrúdaíodh athruithe paiteolaíocha sa cecum (thart ar 7 cm distal chuig an sphincter pyloric) faoi mhicreascóp solais (OLYMPUS, Tóiceo, an tSeapáin) tar éis staining hematoxylin agus eosin (HE). Tomhaiseadh airde villus agus doimhneacht crypt an cecum ag baint úsáide as bogearraí ImageJ (leagan 1.8.0; Institiúidí Náisiúnta Sláinte, Bethesda, MD). Taifeadadh ocht dtomhas de villi slán difriúil in aghaidh an tslis (8 dtomhas i 3 réimse radhairc as a chéile). Rinneadh anailís staitistiúil ar thomhais histeolaíochta bunaithe ar 32 tomhas ar an meán in aghaidh an ghosling (4 shlisne in aghaidh an ghosling agus 8 dtomhas in aghaidh an tslis). Ríomhadh dlús cille goblet mar chomhaireamh na gceall goblet roinnte ar an fad villus comhfhreagrach, a meánaíodh ansin agus a cuireadh in iúl mar uimhir na gcealla goblet in aghaidh an 100 mm d'fhad villus.

Cistanche tubulosa

5. 16S rRNA Seicheamh na nÁbhar Cecum

Bailíodh an t-ábhar cecum de goslings (6 goslings / cóireáil £ 6 ghrúpa £ samplála faoi dhó=72 goslings) ar d 9 agus d 18 i 2 ml vials crióigineacha steiriúla, snáithithe go hinmheánach agus a stóráil láithreach i nítrigin leachtach le haghaidh anailís 16S rDNA . Baineadh DNA ó shamplaí ábhar cecum ag baint úsáide as Kit DNA Genomic MicroElute (D3096-01, Omega Biotek Inc., Norcross, GA) de réir threoracha an déantóra. Próiseáladh bearnaí samplacha ina raibh táithíní neamhúsáidte trí eastóscadh DNA, agus seiceáladh iad gan amplicon 16S a tháirgeadh. Bhí an DNA iomlán eluted i 50 ml maolán elution ag baint úsáide as nós imeachta modhnaithe cur síos ag an monaróir (QIAGEN, Dusseldorf, an Ghearmáin) agus a stóráil ag 80 céim .

Ag baint úsáide as an DNA iomlán de shamplaí mar theimpléad agus 16S rDNA primers (343F - 50 - TACGGRAGGCAGCAG -30; 798R - 50 - AGGGTATCTAATCCT-30 ), mhéadaigh muid an réigiún V3−V4 de bhaictéir 16S rRNA. Rinneadh na frithghníomhartha go léir i meascán 25 mL (toirt iomlán) ina raibh 25 ng de sliocht DNA genomic, 12.5 ml de PCR Premix, 2.5 ml de gach primer, agus uisce de ghrád PCR chun an toirt a choigeartú. Rinneadh táirgí PCR a normalú ag baint úsáide as Normalizer AxyPrep Mag PCR (Axygen Biosciences, Union City, CA), rud a chuir ar chumas an chéim chainníochtúcháin a scipeáil, beag beann ar an méid PCR a cuireadh isteach le haghaidh seicheamhú. Ullmhaíodh linnte Amplicon le haghaidh seicheamhú ag baint úsáide as coirníní AMPure XT (Beckman Coulter Genomics, Danvers, MA; léirithe ag OebioTech Co., Ltd, Shanghai, An tSín). Rinneadh measúnú ar mhéid agus ar chainníocht na leabharlainne amplicon ag baint úsáide as LabChip GX (Perkin Elmer, Waltham, MA) agus Kit Cainníochtaithe Leabharlann Kapa do Illumina (Kapa Biosciences, Woburn, MA), faoi seach. Comhcheangail an leabharlann PhiX Control (v3) (Illumina) leis an leabharlann amplicon (ag súil le 30 faoin gcéad ). Bhí an leabharlann cnuasaithe ag dlús de thart ar 570 K/mm2. Rinneadh na leabharlanna a sheicheamhú ar shraitheanna 300PE MiSeq, áit a ndearnadh seicheamh ar leabharlann amháin leis an dá phrótacal ag baint úsáide as primers seicheamhaithe caighdeánacha Illumina, rud a chuir deireadh leis an ngá atá le tríú (nó ceathrú) léamh innéacs. Scagadh na léamha ag baint úsáide as léargais chainníochtúla ar scagairí cáilíochta éiceolaíocht mhiocróbach (QIIME;). Baineadh úsáid as píblíne CDHIT chun aonaid thacsanomacha oibriúcháin (OTUanna) a roghnú trí thábla OTU a ullmhú. Sannadh seichimh le cosúlacht 97 faoin gcéad do OTUanna. Roghnaíodh seichimh ionadaíocha do gach OTU, agus sannadh sonraí tacsanomacha ansin do gach seicheamh ionadaíoch ag baint úsáide as an aicmitheoir Tionscadal Bunachar Sonraí Ribosomal (RDP). Is é uimhir aontachais GenBank na seichimh núicléitíde OTU seo ná SAMN21014082. Chun éagsúlacht alfa a mheas, rinneadh an tábla OTU a theorannú, agus ríomhadh na 4 mhéadracht seo a leanas: méadrach Chao1 chun saibhreas a mheas; an speiceas méadrach breathnaithe mar chomhaireamh de OTUanna uathúla a fuarthas sa sampla; innéacs na Sionainne; agus innéacs Simpson.

6. PCR Fíor-Ama

Bailíodh ings (n {{0}} goslings/cóireáil) ar d 9 agus 18 le haghaidh anailís fíor-ama PCR (RT-PCR). Baineadh RNA iomlán as na fíocháin, ag baint úsáide as imoibrí TRIzol (Life Technologies, Grand Island, NY), agus trascríobh droim ar ais ag baint úsáide as trealamh Leibhéil Trascríobh Droim ar ais (TaKaRa, Dalian, an tSín), de réir phrótacal an mhonaróra. Baineadh úsáid as b-actin mar rialú athraitheach. Dearadh primers ag baint úsáide as bogearraí Primer Premier 5.0 agus liostaítear a seichimh (Tábla 2). Rinneadh RT-PCR ag baint úsáide as SYBR Premix Ex Taq (Roche, Basel, an Eilvéis). Rinneadh trí chóip de na RT-PCRanna go léir. Cinneadh leibhéil choibhneasta slonn na spriocghéin ag baint úsáide as an 2 mhodh DDCt.

7. Anailís Sonraí

Rinneadh anailís ar shonraí turgnamhacha a fuarthas ó 6 mhacasamhlú in aghaidh na cóireála trí úsáid a bhaint as clár IBM SPSS Statistics 16 (IBM Corporation, Somers, NY). Breathnaíodh ar gach macasamhail mar aonad turgnamhach agus ba é an nós imeachta staidrimh a úsáideadh ná anailís ilathraitheach ar athraithis ag baint úsáide as an nós imeachta um shamhail líneach ginearálta (GLM). Nuair a cinneadh difríochtaí suntasacha, rinneadh modhanna cóireála a dheighilt agus a chur i gcomparáid trí úsáid a bhaint as tástáil ilraoin Duncan. Measadh go raibh tábhacht staitistiúil ag baint le triail dhá eireaball ag leibhéal dóchúlachta níos lú ná 5 faoin gcéad (P < 0.05).

Yumeng Xi *, Yuanpi Huang, y Yue Li *, Yunmao Huang #, Junshu Yan *, agus Zhendan Shi *.

* Príomh-Saotharlann um Fheirmeoireacht Chomhtháite Barraí agus Ainmhithe na hAireachta Talmhaíochta agus Gnóthaí Tuaithe, an Institiúid um Riar Ainmhithe, Acadamh Eolaíochtaí Talmhaíochta Jiangsu, Nanjing 210014, an tSín;

# Coláiste na hEolaíochta Ainmhithe, Ollscoil Talmhaíochta agus Innealtóireachta Zhongkai, Guangzhou 510000, an tSín.