Cuid 1:Echinacoside Spreagann Bás Cille Apoptotic Ailse Trí Chosc a Chur ar an Linn Núicléitíde Sláintíochta Einsím MTh1

Déan teagmháil le:joanna.jia@wecistanche.com

Coimriú:Déanann cosc ​​ar an einsím sláintíochta linne núicléitíde MTH1 damáistí fairsinge ocsaídiúcháin DNA agus apoptosis i gcealla ailse agus mar sin is féidir é a úsáid mar straitéis frith-ailse. Toisc gur foinse shaibhir ceimiceán míochaine iad táirgí nádúrtha, sa staidéar seo, d’úsáideamar an imoibriú einsímeach catalaíoch MTH mar mheasúnacht scagtha ard-thréchur in vitro chun comhdhúile nádúrtha a lorg a d’fhéadfadh cosc ​​a chur ar MTH1.Echinacoside, cumaisc a dhíorthaítear ó na plandaí íocshláinteCistancheagus Echinacea, go héifeachtach bac ar ghníomhaíocht catalaíoch MTH1 i measúnacht in vitro. Cóireáil línte cille ailse daonna éagsúla leEchinacosidetháinig méadú suntasach ar an leibhéal ceallacha guanín ocsaídithe (8-oxoguanine), agus níor tháinig aon athrú ar leibhéal speicis ocsaigine imoibríocha cheallacha, rud a thugann le fiosEchinacosidefreisin bac ar ghníomhaíocht cheallacha MTH1. Mar thoradh air sin, chothaigh cóireáil Echinacoside méadú láithreach agus suntasach ar mharcóirí damáiste DNA agus uasrialáil an inhibitor G1/S-CDK p21, a lean bás cille apoptotic marcáilte agus gabháil timthriall cille in ailse ach ní i gcealla neamhailse. Le chéile, d'aithin na staidéir seo cumaisc nádúrtha mar choscóir MTH1 agus tugann siad le fios gur féidir le táirgí nádúrtha a bheith ina bhfoinse thábhachtach d'oibreáin frith-ailse.

Eochairfhocail: Echinacoside, MTH1, 8-oxoG, damáiste DNA, apoptosis, gabháil timthriall cille

Cistanchesliocht táfrith-ailsesochair sláinte

Cliceáil anseo chun Cuid 2

Réamhrá

Is sprioc shuntasach é an linn ceallach agus miteachondrial nucleoside trífhosfáit (NTP) agus trífhosfáit déocsanucleoside (dNTP) de speicis éagsúla ocsaigin imoibríoch (ROS). a ionchorprú i DNA nua-shintéisithe chun bearrthaí géiniteacha a chur faoi deara mura bhfuil siad socraithe.6 Mar shampla, is féidir leis an mbonn mór ocsaídithe sa linn núicléitíde, 8-oxoguanine (8-oxoG), péireáil a dhéanamh le cíteaisín agus adenín. Nuair a chuirtear isteach i adenine os coinne le linn macasamhlú DNA, is féidir é a chur faoi deara T: A=G: C trasdul,7 atá ar cheann de na sócháin is coitianta a fhaightear in ailsí daonna.8,9 Cé go bhfuil an chuid is mó de na dNTP saor ocsaídithe. a bhaintear as einsímí sláintíochta linn nucleotide, léirigh staidéir san am atá caite go bhfuil an linn nucleotide fós ina fhoinse thábhachtach de bhunanna ocsaídithe i móilíní DNA agus go gcuireann go suntasach le damáistí ocsaídiúcháin DNA.3,10 an einsím is tábhachtaí maidir le sláintíocht núicléitíd linnte.15 Mar sin féin, fiú faoi fhaireachas na n-einsímí sláintíochta linn núicléitíde, tá cuid shuntasach de dNTPanna ocsaídithe ionchorpraithe i DNA, agus is féidir bunanna i móilíní DNA a ocsaídiú go díreach trí ROS.6 Bíonn cealla ansin ag brath ar straitéisí níos mionsonraithe lena mbaineann éagsúla. Gliocosyláis DNA, amhail OGG1 agus MUTYH, agus próisis deisiúcháin DNA, lena n-áirítear deisiú múchta bonn (BER) agus deisiú mímheaitseála (MMR), chun bunanna fadhbacha i móilíní DNA a shocrú.10,16,17 BER a ú De ghnáth deisíonn MMR go leor bunanna ocsaídithe in DNA in aghaidh an lae agus mar sin bíonn ról tábhachtach acu maidir le sláine agus cobhsaíocht an ghéanóim a chosaint.

I gcealla atá faoi strus ardaithe ocsaídiúcháin, féadfaidh ionchorprú méadaithe núicléatídí ocsaídithe isteach i DNA an cumas deisiúcháin cheallacha a shárú agus freagairt damáiste DNA (DDR) a spreagadh.apoptóis, ag leagan bacainn ar tumorigenesis.19 Mar sin féin, cé go léiríonn cealla ailse teannas ocsaídiúcháin an-mhéadaithe agus go ngineann siad ualach a d’fhéadfadh a bheith marfach de núicléatídí ocsaídithe,20 is féidir leo maireachtáil ón seanchas a bhaineann le DDR nóapoptóis.21 Tá sé léirithe ag líon mór staidéar go bhfuil ról lárnach ag MTH1 i bhforbairt na hailse, trí bhaint go héifeachtach leis an líon contúirteach 8-oxodGTP agus 2-OH-dATP i gcealla siadaí, i bhforbairt ailse.22 Bhí MTH1 ann). fuarthas go raibh siad ró-léirithe i gcineálacha éagsúla ailse, 23-25 ​​agus 8-leibhéil oxoG, agus bhí an méid loit DNA ocsaídiúcháin níos ísle i siadaí ná sna fíocháin gnáth máguaird. líon na sóchán DNA a chonacthas i fibroblasts suthacha luiche a bhí easnamhach ó MMR10 agus a cheadaigh do chealla sárú a dhéanamh ar sheanaoiseog cheallach roimh am agus apoptosis oincogenic de bharr Ras-spreagtha;29 cé gur chuir cosc ​​MTH1 cosc ​​ar fhorbairt ailse i lucha easnamhacha30 agus cuireadh chun cinn DDR spreagtha ag ROS agus seandacht cheallacha i gcealla trasfhoirmithe Ras.3,29,31 Dá bhrí sin, cé go bhfuil ról cosanta ag MTH1 trí shócháin ROS-spreagtha a chosc i gcealla sláintiúla, fuair na staidéir seo go bhfuil MTH1 ag teastáil go háirithe le haghaidh teacht chun cinn agus maireachtáil. de chealla ailse. Tá níos mó fianaise curtha ar fáil ag staidéir le déanaí chun tacú le ról MTH1 i bhforbairt ailse.31–34 Mar gheall ar choscóirí RNAi nó móilíní beaga a chur faoi chois i línte cille ailse éagsúla, tháinig méadú suntasach ar ionchorprú 8-oxo d G isteach sa DNA géanómach. , as a dtiocfaidh damáistí fairsinge DNA, bás cille apoptotic, agus laghdú ar mharthanas cille ailse.32,33 I staidéir xenograft luch, chuir cosc ​​ar MTH1 fás na explants ailse faoi chois go héifeachtach. Is é an rud atá tábhachtach ná nach raibh tionchar ag cur faoi chois MTH1 ar fhás agus ar mharthanas gnáthchealla, is dócha toisc go bhfuil ROS níos ísle ag gnáthchealla agus mar sin go bhfuil siad ag brath níos lú ar MTH1 le haghaidh marthanais.

Is foinse shaibhir de chomhdhúile míochaine iad táirgí nádúrtha.35 Díorthaíodh go leor teiripe nua-aimseartha, lena n-áirítear drugaí frith-ailse, ó ullmhóidí luibhe nó luibheolaíocha.36–39 Mar sin féin, tá sé beartaithe go bhfanfadh líon mór de luibheanna traidisiúnta a bhfuil airíonna teiripeacha éagsúla acu. a shaintréithe, go príomha mar gheall ar dheacrachtaí maidir lena gcuid comhdhéanamh a rialú chun a n-éifeachtúlacht agus a meicníochtaí gníomhaíochta a shainiú gan athbhrí.40 Tá gá le cineálacha cur chuige nua a cheadaíonn comhdhúile gníomhacha a bhrath agus anailís a dhéanamh ar mheicníochtaí móilíneacha. I dtaca leis sin, féadfaidh scagadh in vitro ard-thréchur sprioc-threoraithe a bheith ríthábhachtach chun comhdhúile míochaine atá sainithe go meicniúil a aimsiú ó acmhainní nádúrtha. Sa staidéar seo, d’úsáideamar an t-imoibriú einsímeach catalaíoch MTH mar mheasúnacht in vitro ard-thréchur chun comhdhúile nádúrtha a lorg a d’fhéadfadh MTH1 a chosc. Ionadh, léirigh an scagadh goEchinacoside, táirge nádúrtha atá aitheanta mar gheall ar a ghníomhaíocht fhrithocsaídeach cumhachtach, atá in ann MTH1 a chosc.

Echinacosidei gcistinche canfrith-apoptosis

abhair agus modhanna

Ábhair

Ceannaíodh comhdhúile luibhe nádúrtha ó Yuanye Biological Technology Co., Shanghai, Daon-Phoblacht na Síne. Tá ainm, uimhir chatalóige, uimhir chláraithe Sheirbhís na gCoimrithe Ceimiceacha (CAS), agus íonacht gach comhdhúil liostaithe i dTábla S1. Ullmhaíodh réitigh stoic de na comhdhúile i 100 faoin gcéad dimethyl sulfoxide (DMSO) (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, SAM), agus ullmhaíodh réitigh oibre i maolán measúnachta nó i meán cultúr cille iomlán. Baineadh úsáid as an réiteach céanna gan an cumaisc tástála ach ina raibh an méid céanna DMSO mar rialú feithicle. (S)-crizotinib a ceannaíodh ó Selleck Chemicals, Houston, TX, SAM.

scagadh in vitro

Lean an measúnú einsímeach in vitro a úsáidtear chun comhdhúile luibhe nádúrtha a scagadh de réir na nósanna imeachta a ndearna Gad et al.32 cur síos orthu Go hachomair, ullmhaíodh caoluithe sraitheach de chomhdhúile aonair sa mhaolán measúnachta ar a raibh 100 mM Tris- aicéatáit (pH 8.0), 40 mM NaCl, 10 mM Mg aicéatáit, 0.005 faoin gcéad Tween 20, agus 1 mM DTT. Ansin, cuireadh 0.5 nM athchuingreach humanMTH1 (Abcam, Cambridge, UK), 100 μM dGTP (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, SAM), agus 0.2 U/mL pyrophosphatases neamhorgánacha (Thermo Fisher Scientific), agus goraíodh na plátaí ar Croiteoir pláta ar feadh 1 uair an chloig ag teocht an tseomra. Ba é toirt an imoibrithe deiridh ná 100 μL i 96-phláta tobair. Ag deireadh an imoibrithe, cuireadh glas malachite (J&K Scientific, Beijing, Daon-Phoblacht na Síne),41 leis, agus goradh na plátaí ag teocht an tseomra ar feadh 15 nóiméad eile. Rinneadh ionsú ag 630 nm a thomhas ag léitheoir microplate BioRad 680 (Bio-Rad Laboratories Inc., Hercules, CA, USA). Socraíodh luachanna tiúchana bacainn (IC50) trí anailís aischéimniúcháin neamhlíneach ag baint úsáide as bogearraí GraphPad Prism.

cultúr cille

Tháinig osteosarcoma Daonna MG-63, hepatocarcinoma SK-HEP-1hepatocarcinoma, ailse chíche MCF7, ailse cholaireicteach SW480, duán suthach HEK293, agus luch línte cille fibroblast NIH/3T3 ó Chineál American Culture Collection, agus an gnáthchineál daonna ceannaíodh líne cille ae L-O2 ó KenGen Biotech, Nanjing, Daon-Phoblacht na Síne. Coinníodh na cealla seo ag 37 céim in atmaisféar humidified le 5 faoin gcéad CO2, tar éis treoracha a thug na soláthraithe. Ní raibh aon ráiteas eitice ag teastáil ón mbord athbhreithnithe institiúideach maidir le húsáid na gcilllínte seo.

Tomhais {{0}}oxo Intracellular 8-leibhéil intracellular 8-oxoG a thomhas trí sileadh le Cy3-avidin comhchuingeach.42 Iomlán 1×104 cealla a bhí ann curtha ar dhuillín clúdaigh chruinn i 12-phlátaí tobair. An lá dár gcionn, déileáladh leis na cealla le 0 μM, 15 μM, 30 μM, 60 μM, nó 80 μM Echinacoside ar feadh 5 uair, 12 uair, nó 24 uair an chloig agus ansin socraíodh iad le oighear. -meatánól fuar ar feadh 20 nóiméad, agus ina dhiaidh gor i saline Tris-mhaolánach (TBS) le 0.1 faoin gcéad Triton X-100 (Sigma-Aldrich) ar feadh 15 nóiméad. Cuireadh bac ar na samplaí in TBS le 0.1 faoin gcéad Triton X-100 agus 15 faoin gcéad de shéiream bó féatais ar feadh 1 uair ag teocht an tseomra agus ansin ruaimnithe le héidín comhchuingeach Cy{3-(0.5 ug/mL) (Rockland Immunochemicals, Luimnigh, PA, SAM) i réiteach blocála ar feadh 1 uair ag 37 céim . Tar éis níocháin i saline maolánach fosfáit (PBS) 3 huaire ar feadh 5 nóiméad, séalaithe na clúdaigh clúdaigh ar sleamhnáin ghloine sciath feithidí Gléasta Meán le 4′,6-diimidino-2-phenylindole (Vector Laboratories, Burlingame, CA) , SAM). Tógadh íomhánna agus rinne micreascóp comhfhócasach Zeiss LCM 510 iad a anailísiú.

Tomhas leibhéil ROS intracellular Ros Tomhais de réir cíteiméadracht sreafa ag baint úsáide as trealamh measúnaithe ROS cille-bhunaithe (Biteicneolaíocht Beyotime, Haimen, Daon-Phoblacht na Síne). Cóireáladh cealla a fhástar i bplátaí sé-tobair le 0 μM, 15 μM, 30 μM, 60 μM, nó 80 μM Echinacoside ar feadh 5 uair, 12 uair, nó 24 uair an chloig, nite faoi dhó le PBS, agus gortha le 10 n-uaire. μM dichlorofluorescein diacetate ar feadh 30 nóiméad ag 37 céim. Ansin rinne an cítoiméadar sreafa FACCaliber (BD Biosciences, San Jose, CA, USA) na cealla a thrypsinized agus a anailísiú. Cuireadh leibhéil ROS intracellular in iúl mar mheán-déine fluaraiseachta dichlorodihydrofluorescein na gcealla. Ba mheán de thrí thurgnamh neamhspleácha na huimhreacha a taispeánadh.

Staining imdhíonfluaraiseacha

Cóireáladh cealla a fhástar ar chlúdaigh le {{0}} μM, 15 μM, 30 μM, 60 μM, nó 80 μM Echinacoside ar feadh 5 uair, 12 uair, nó 24 uair an chloig agus ansin nite uair amháin le PBS, seasta le 4 faoin gcéad paraformaildéad i PBS ar feadh 20 nóiméad, agus bac i TBS le 0.1 faoin gcéad Triton X-100 agus 15 faoin gcéad de shéiream bó féatais ar feadh 1 uair ag teocht an tseomra. Rinneadh cealla fosaithe a dhathú ar feadh 2 uair ag teocht an tseomra le príomhantasubstaint in aghaidh 8-oxoG (frithmhonaclónach luch-8-oxoG, Abcam), 53BP1 (frith coinín-53BP1; Bethyl Laboratories, Montgomery , TX, SAM), nó caspase gníomhach-3 (frith-caspase coinín-3, Bioss, Beijing, Daon-Phoblacht na Síne), agus ina dhiaidh sin smálú le Alexa 488-antamóg comhchuingeach asail ( Abcam) nó antasubstaint thánaisteach frith-choine gabhar comhchuingeach Cy(Jackson ImmunoResearch Laboratories, West Grove, PA, SAM) ar feadh 1 uair an chloig ag teocht an tseomra. Tar éis níocháin i PBS 3 huaire ar feadh 5 nóiméad, séalaithe na clúdaigh clúdaigh ar sleamhnáin ghloine i Meán Gléasta VECTASHIELD le DAPI (Saotharlanna Veicteoir). Tógadh na híomhánna le micreascóp comhfhócasach Zeiss LCM 510.

measúnacht foirmiú coilíneachta

An lá roimh an gcóireáil, cuireadh na cealla i bpláta sé tobar ag tiúchan 1 × 104 cealla in aghaidh an tobair. Cuireadh cóireáil orthu ansin le 0 μM, 60 μM, nó 80 μM Echinacoside ar feadh 7 lá. Tar éis níocháin le PBS, socraíodh cealla le meatánól fuar-oighear agus dhaite le tuaslagán violet criostail (Sigma-Aldrich) (0.5 faoin gcéad i meatánól 25 faoin gcéad). Glacadh íomhánna tar éis na plátaí a thriomú thar oíche. Díscaoileadh na criostail violet criostail trí eatánól 70 faoin gcéad a chur leis, agus tomhaiseadh absorbance ag 595 nm ag léitheoir microplate BioRad 680. Rinneadh anailís ar na sonraí trí úsáid a bhaint as bogearraí GraphPad Prism.

Measúnacht MTT

Lá amháin roimh an gcóireáil, síolaíodh cealla i 96-plátaí tobair ag tiúchan de 1 × 104 cill in aghaidh an tobair, agus cóireáil ina dhiaidh sin le caolú sraitheach Echinacoside ar feadh 24 uair nó 48 uair, nó le 60 μM Echinacoside ar feadh 5 uair, 12 uair an chloig. , nó 24 uair an chloig. Baineadh an meán, agus nite na cealla le PBS, agus ansin, 20 μL de 3-(4,5-démheitilthiazol-2-il)-2,{{15} }Cuireadh tuaslagán bróimíd défheinile tetrazolium (MTT) (5 mg/ml i PBS, pH 7.2) (Thermo Fisher Scientific) le gach tobar. Goradh na plátaí ag 37 céim ar feadh 4 huaire eile. Sa deireadh, baineadh an réiteach MTT agus cuireadh 150 μL de DMSO le gach tobar. Goradh na plátaí ar chroiteoir pláta ar feadh 10 nóiméad, agus tomhaiseadh ionsúiteacht ag 570 nm ag léitheoir microplate BioRad 680. Rinneadh gach turgnamh faoi dhó ar a chéile. Rinneadh anailís ar na sonraí trí úsáid a bhaint as bogearraí GraphPad Prism. Cinneadh luachanna IC50 trí úsáid a bhaint as anailís aischéimniúcháin neamhlíneach.

anailís timthriall cille

Cóireáladh cealla i bplátaí sé-tobar le 0 μM, 6{{10}} μM, nó 80 μM Echinacoside ar feadh 24 uair an chloig, bainte le trypsin (Life Technologies, Carlsbad, CA, USA) , nite faoi dhó le PBS, agus ansin seasta le fuar-oighear eatánól (70 faoin gcéad ) ar feadh 2 uair an chloig ag −20 céim . Rinneadh cealla seasta a ní faoi dhó i PBS fuar agus cuireadh ar fionraí iad i 300 μL de PBS úrullmhaithe le 0.1 faoin gcéad Triton X-100, 0.2 mg/mL saor ó DNase RNase A (Sigma-Aldrich), 10 ug/mL iaidíd próipidiam ( PI) (Hoffman-La Roche Ltd., Basel, an Eilvéis). Tar éis gortha ag 37 céim sa dorchadas ar feadh 20 nóiméad, rinneadh na cealla a scagadh trí mhogalra níolón Falcon (BD Biosciences), a luchtú ar chiteaiméadar sreabhadh FAC-SCalibur, agus anailís déanta orthu ag baint úsáide as bogearraí ModFit (BD Biosciences).

Anailís ilroinnt DNA

Cóireáladh cealla a fhástar i bplátaí sé-tobair le 0 μM, 60 μM, nó 80 μM Echinacoside ar feadh 24 uair an chloig agus socraíodh iad i paraformaildéad 4 faoin gcéad faoin gcéad (Sigma-Aldrich) fuar oighear ar feadh 20 nóiméad. Tar éis níocháin le PBS, séalaithe cealla i VECTASHIELD Gléasta Meánach le DAPI (Vector Saotharlanna). Tógadh moirfeolaíocht núicléach le micreascóp fluaraiseacha Olympus. Chun ilroinnt DNA ar glóthacha agarose a bhrath, baineadh DNA trí úsáid a bhaint as trealamh micrea DNA QIAamp (Qiagen NV, Venlo, an Ísiltír), agus rinneadh leictreafóiréis ar 2 faoin gcéad glóthach agairóis ina raibh 0.1 ug/mL bróimíd ethidium.

Anailís ar apoptosis de réir cíteiméadracht sreafa Scrúdaíodh cealla apoptotic ag baint úsáide as trealamh braite Apoptosis V-FITC Annexin (Bestbio, Shanghai, Daon-Phoblacht na Síne), de réir threoracha an mhonaróra. Cóireáladh cealla a fhástar i 96-phlátaí tobair le 0 μM, 15 μM, 30 μM, 60 μM, 80 μM, nó 160 μM Echinacoside ar feadh 2 uair, 5 huaire, 12 uair, nó 24 uair an chloig, nite faoi dhó le PBS, agus ansin athshuiteáil i maolán ceangailteach. Ansin, cuireadh 5 μL de iarscríbhinn V-FITC agus 5 μL ofPI (Roche) go seicheamhach, agus gor na cealla ar feadh 15 nóiméad sa dorchadas ag teocht an tseomra. Lódáladh na cealla ar shreabh-chítiméadar FACSCalibur (BD Biosciences), agus rinneadh anailís ar na sonraí trí úsáid a bhaint as bogearraí Cell Quest (BD Biosciences).

Anailís blot an Iarthair

Cóireáladh cealla a fhástar i bplátaí sé thobar le 0 μM, 6{{10}} μM, nó 80 μM Echinacoside ar feadh 5 huaire, 12 uair, nó 24 uair, nite faoi dhó le PBS agus scríobtha as an pláta ag baint úsáide as 100 μL de maolán radai-imdhíon-réamhshamhlú (150 mM NaCl, 1.0 faoin gcéad IGEPAL CA-630, 0.5 faoin gcéad deocsaicileacháit sóidiam, 0.1 faoin gcéad de shulfáit dódeicile sóidiam , agus 50 mM Tris, pH 8.0) (Sigma-Aldrich) ina bhfuil 1 mM feinilmethane sulfonyl fluairíd. Lártheifníodh samplaí ag 12,000× g ar feadh 20 nóiméad ag 4 chéim . Chinn an t-imoibrí Bradford (Dingguo, Changchun, Daon-Phoblacht na Síne) an tiúchan próitéine sna supernatants. Dínádúraíodh samplaí ag 95 céim ar feadh 10 nóiméad agus scartha iad ar fhoirmiú leictreafóiréis glóthach dodecyl sulfáit-polyacrylamide sóidiam 12 faoin gcéad. Tar éis leictreafóiréis, aistríodh próitéiní go seicní fluairíde polyvinylidene (Millipore), agus ina dhiaidh sin blocáil i saline maolánach Tris le Tween 20 (10 mM Tris, pH 7.5; 100 mM NaCl; 0.1 faoin gcéad Tween 20) ina bhfuil 5 faoin gcéad (w / v) bainne nonfat ar feadh 1 uair an chloig ag teocht an tseomra. Scrúdaíodh blotaí le antasubstaintí príomhúla i gcoinne p21 (Abcam), polai (ADP-ribose) polymerase (Bioss), nó caspase gníomhachtaithe-3 (Bioss), agus antasubstaintí tánaisteacha comhchuingeacha horseradish peroxidase-chomhchuingeach ina dhiaidh sin (Jackson ImmunoResearch Laboratories). Forbraíodh comharthaí trí úsáid a bhaint as trealamh braite slóite ceimiceach feabhsaithe an Iarthair (Transgen Biotech, Changchun, Daon-Phoblacht na Síne). Rinneadh na turgnaimh arís trí huaire.

Echinacosidei gcistinche canfrith-apoptosisagusfrith-ocsaídiúcháin

Tomhas mitochondrial

poitéinseal membrane

Rinneadh poitéinseal membrane miteachondrial a thomhas agus úsáid á baint as an ruaim JC{{{{{0}} (Biteicneolaíocht), de réir threoracha an déantóra. Cóireáladh cealla a fhástar i bplátaí sé thobar le 0 μM, 60 μM, nó 80 μM Echinacoside ar feadh 5 huaire, 12 uair, nó 24 uair an chloig, nite faoi dhó i PBS agus ansin iad a ghoradh le JC-1 ar feadh 20 nóiméad. Tógadh íomhánna ag baint úsáide as micreascóp fluaraiseacha Olympus.

Anailís staitistiúil

Rinneadh anailís staitistiúil ag baint úsáide as Bogearraí GraphPad Prism. Ríomhadh an tábhacht trí úsáid a bhaint as anailís aontreo ar athraitheacht, agus measadh go raibh P0.05 suntasach go staitistiúil. Cuireadh na torthaí in iúl mar mheán ± diall caighdeánach.

Echinacosidei gcistinche canfrith-apoptosisagus díolúine a fheabhsú