Maolaíonn Cisteacha Cuid 1 Mífheidhmiú Cognaíocha de bharr Sevoflurane Trí Fhrithocsaídeach agus Frith-athlastach cleithiúnach i bhFrancaigh a Rialáil PPAR- -

Tuilleadh eolais déan teagmháil le do thoil le:Joanna.jia@wecistanche.com

Tá go leor éifeachtaí ag Cistanche deserticola, cliceáil anseo chun tuilleadh eolais a fháil

Teibí

Bhí sé mar aidhm ag an staidéar seo imscrúdú a dhéanamh ar na héifeachtaí cosanta agus na meicníochtaí bunúsacha decistéirar an tsamhail francach um mhífheidhm chognaíoch aois spreagtha ag sevoflurane. Sannadh francaigh SD fireann d’aois (24 mí) go randamach do cheithre ghrúpa: grúpa rialaithe, grúpa sevoflurane, rialú móide cistanche, agus sevoflurane pluscistéirgrúpa. Ina dhiaidh sin, rinneadh leibhéil cítocine athlastacha a thomhas ag ELISA, agus rinneadh meastóireacht ar mhífheidhm chognaíoch na bhfrancach trí thástáil lúbra uisce, tástáil páirce oscailte, agus an tástáil um riochtú eagla. Trí lá tar éis ainéistéise, maraíodh na francaigh agus baineadh an hippocampus chun anailís a dhéanamh ar bhithmhóilíní coibhneasta. Léiríodh an leibhéal strus ocsaídiúcháin mar thiúchan nítrít agus MDA, mar aon le gníomhaíocht SOD agus CAT. Ar deireadh, baineadh úsáid as antagonist PPAR- chun iniúchadh a dhéanamh ar mheicníocht nacistéirin vivo. Léirigh na torthaí, tar éis an sevoflurane a ionanálú, 24- ach ní 3-d'fhorbair francaigh SD fireanna mí d'aois laguithe soiléire cognaíocha sa tástáil iompair 3 lá tar éis ainéistéise. Instealladh intraperitoneal decistéirag an dáileog de 50 mg/kg ar feadh 3 lá as a chéile sular mhaolaigh ainéistéise an t-ingearchló de bharr sevoflurane-spreagtha ar leibhéil néar-athlasadh agus mhaolaigh sé go suntasach na laguithe cuimhne a chleithiúnaí hippocampus i 24-mhí francaigh d'aois.Cistanchelaghdaigh strus ocsaídiúcháin freisin trí nítrít agus MDA a laghdú agus gníomhaíocht SOD agus CAT a mhéadú. Ina theannta sin, chuir cóireáil den sórt sin bac ar ghníomhachtú microglia. Ina theannta sin, léirigh muid gur mhaolaigh cosc ​​PPAR go contrártha ar ancistéir-éifeacht chosanta spreagtha. Le chéile, léirigh muid gur féidir le cistanche éifeachtaí frithocsaídeacha, frith-athlastacha, frith-apoptóis agus frithghníomhaithe microglia a fheidhmiú ar fhorbairt mhífheidhm chognaíoch de bharr sevoflurane trí chomharthaíocht PPAR a ghníomhachtú.

EOCHAIRFHOCAL

cistéir, mífheidhmiú cognaíocha iar-obráide (POCD), PPAR- , sevoflurane

Cistancheforlíontaí aiste bia a threisiú díolúine

1|RÉAMHRÁ

Is casta millteach é mífheidhmiú cognaíocha iar-obráide (POCD) le hiarmhairtí fadtéarmacha agus sainmhínítear é mar lagú cuimhne, aire, tiúchan, agus láimhseáil faisnéise a tharlaíonn tar éis máinliachta agus ainéistéise. Tá sé léirithe ag taighde go bhfaighidh thart ar 10 faoin gcéad d'othair mháinliachta agus beagnach 40 faoin gcéad d'othair scothaosta ag aois 65 agus fiú níos sine taithí ar POCD.1 Léiríonn othar le POCD básmhaireacht shuntasach níos airde, cáilíocht beatha laghdaithe, agus spleáchas ardaithe ar shlándáil shóisialta i gcomparáid le iad siúd nach bhfuil POCD acu.2,3 Cé go ndearnadh go leor iarrachtaí taighde le blianta beaga anuas, níl anaithnid fós ar phataigineas POCD.

Aithnítear go maith go bhfuil ról ríthábhachtach ag neuroinflammation agus strus ocsaídiúcháin san inchinn i dtionscnamh agus dul chun cinn POCD.4,5 Cé gur féidir athlasadh de bharr máinliachta nó strus ocsaídiúcháin a bheith ina chúis le neuroinflammation agus damáiste san inchinn agus ar deireadh thiar cur leis an neamhord cognaíocha. , tugann tuarascálacha le déanaí le fios go bhfuil gníomhairí ainéistéiseacha a úsáidtear le linn na máinliachta in ann lagú cognaíocha a spreagadh freisin.3,6,7

Úsáidtear Sevoflurane go coitianta in ainéistéise cliniciúil d'othair de gach aois mar gheall ar a chomhéifeacht íseal deighilte gáis fola agus miondealú meitibileach íseal.8 Mar sin féin, léirigh roinnt línte fianaise go bhféadfadh néar-athlasadh a bheith mar thoradh ar sevoflurane agus lagú a dhéanamh ar fheidhm chognaíoch. Mar shampla, thuairiscigh Makaryus go bhfuil éifeachtaí néarthocsaineacha ag sevoflurane ar fhorbairt na hinchinne.9 Léiríodh go bhfuil nascacht laghdaithe idir néaróin excitatory sa cortex prefrontal comhghaolaithe le laguithe cognaíocha de bharr sevoflurane.10 Homoplastically, éascaíonn sevoflurane meath cognaíoch trí mhéadú ar an microglia -néar-athlasadh rialaithe i múnla francach trí ghníomhaíocht PPAR a íosrialáil sa hippocampus.1 Nuair a chinntear an modh máinliachta, ní féidir an méid tráma agus freagairt athlastach a athrú. Dá bhrí sin, d'fhéadfadh laghdú lagú cognaíocha ó thaobh ainéistéise a bheith ina chur chuige indéanta. Tá ancistéirTá speiceas ('Rou Cong Rong' i Sínis) in úsáid mar tonic sa tSín le blianta fada. Tá sé léirithe ag staidéir chógaseolaíochta nua-aimseartha go bhfuil feidhmeanna leighis leathana ag cisteastáin, go háirithe ar an néarchóras lárnach (CNS), lena n-áirítear frith-apoptosis, frith-ocsaídiúcháin, frith-aosú, frith-tuirse, frith-athlastach inmunomodulatory, agus neuroprotection.{{5 }} Fuair ​​Deng et al amach gur léirigh an echinacoside, ceann de phríomh-chomhdhúile gníomhacha cistanche, éifeachtaí cosanta ar apoptosis cille SH-SY5Y de bharr TNF- -spreagtha. hiodrocsaile feanólach, féadann sé feidhmiú mar dheontóir hidrigine do radacacha laghdaitheacha agus dá bhrí sin iad a scamhadh. Tá dhá phríomhshreabhadh ann trína ndéantar ancistéirscavenge na fréamhacha saor in aisce, is é sin go díreach a bhaineann le deireadh a chur le fréamhacha saor in aisce nó bac a chur ar a dtáirgeadh agus a rialaíonn na n-einsímí frith-oxidant a bhaineann leis an meitibileacht radacach saor in aisce in vivo, mar SOD, CAT, agus GPX.15 Cuidíonn riarachán cistánach le dul in aois moilliú. feinitíopaí agus chun maolú cognaíoch ar chuileoga a mhaolú trí strus ocsaídiúcháin a laghdú.16 Mar shampla, rinne Zhang et al imscrúdú ar cheann de na heastóscadh cistéise agus dheimhnigh sé an fheidhm atá aige le saolré a shíneadh.17 Go dtí seo, áfach, níor scrúdaigh aon staidéar éifeachtaí cistánach ar chognaíoch. mífheidhmiú i múnlaí ainmhithe nó i ndaoine faoi choinníollacha sevoflurane.

Bunaithe ar na torthaí thuas, mholamar é sincistéird'fhéadfadh lagú cognaíocha de bharr sevoflurane a mhaolú. Chun an hipitéis seo a fhíorú, d'úsáideamar 24- francaigh SD mhí d'aois chun samhail lagaithe cognaíocha a fháil trí ionanálú sevoflurane. Ina dhiaidh sin, rinneamar iniúchadh ar fheidhm cógaseolaíochta decistéirsliocht ar frith-athlastach, frith-ocsaídiúcháin, agus neuroprotection. Agus rinneadh imscrúdú freisin ar mheicníocht na gcistinches ar lagú cognaíocha arna spreagadh ag sevoflurane.

2|ABHAIR AGUS MODHANNA

2.1|Ullmhú agus caighdeánú Cistanches Herba sliocht

An eastóscadh decistéirdo réir na n-oibreacha roimhe seo.18,19 Go hachomair,cistéirBaineadh sliocht Herba le 95 faoin gcéad eatánól in uisce agus lyophilized chuig an púdar. Cuireadh an sliocht ag 10 mg/ml i bhfeidhm ar anailís chainníochtúil cheimiceach ar echinacoside trí chromatagrafaíocht leacht ardfheidhmíochta cúlchéimnithe (HPLC). Fuarthas an cumaisc chaighdeánach, echinacoside, ó Haoxuanbio (Xi'an, Shaanxi, an tSín).

2.2|Múnla francach de mhífheidhm chognaíoch spreagtha ag sevoflurane agus cóireáil le cistanche

Ceannaíodh francaigh fireann Sprague Dawley (SD) 3 agus 24 mí d'aois ó Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd. Ardaíodh francaigh i gcliabháin aicrileach ghlan le rochtain saor in aisce ar uisce agus bia faoi 12-uair an chloig solais /timthriall dorcha ag teocht thairiseach 21 céim ± 1 chéim agus taise (45 faoin gcéad -65 faoin gcéad ) ar feadh seachtaine amháin roimh an turgnamh ar chóiríocht. D'údaraigh Coiste Cúraim Ainmhithe an Seachtú Ospidéal Daoine in Ollscoil Shanghai TCM na nósanna imeachta turgnamhacha ainmhithe. Rinneadh gach tástáil iompraíochta i seomra rialaithe teochta (21 céim ± 1 )- agus taise (45 faoin gcéad -65 faoin gcéad).

Sa chéad sraith de thurgnaimh in vivo, úsáideadh na francaigh SD fireann 3- agus 24-mí d'aois. Sannadh francaigh sé mhí dhéag 3-a mheá 200- 250 g agus francaigh sé mhí dhéag d'aois a mheá 240-300 g go randamach do indraft sevoflurane (Jiangsu Hengrui Medicine Co., Ltd. , Lianyungang, an tSín) nó gás iompróra (n=8 do gach grúpa). Cuireadh ainmhithe sna grúpaí ainéistéise (SEVO) faoi réir 2.6 faoin gcéad an tiúchan de sevoflurane seachadta ag gás iompróra O2 taisithe 30 faoin gcéad ar feadh 4 h ag ráta sreafa de 2 L/nóim ag baint úsáide as gaireas ainéistéiseach le monatóir ilgháis (Prisma). SP Alpa, Oxon, RA). Cuireadh francaigh sa ghrúpa rialaithe faoi réir an gháis iompróra gan sevoflurane ar feadh an ama céanna.

ar feadh 4 huaire (n=8 do gach grúpa). Rinneadh na tástálacha iompraíochta ar lá 1 agus lá 3 tar éis ainéistéise. Ansin maraíodh ainmhithe díreach tar éis measúnú iompraíochta ar an lá 3, agus baineadh úsáid as hippocampus sna brains le haghaidh anailísí móilíneacha. Sa tríú sraith de thurgnaimh, rinneadh gach francach ainéistéiseach a roinnt go randamach i gceithre ghrúpa (n=8 do gach grúpa): (a) grúpa SEVO; (b) grúpa SEVO móide GW9662 (antagonist de PPAR- , 30 ng gach uair);

(c) SEVO móidecistéirgrpa ; agus (d) SEVO pluscistéirmóide grúpa GW9662. Bhí na turgnaimh ina dhiaidh sin cosúil leis an gcur síos sa dara sraith de thurgnaimh.

2.3|Tástáil iompraíochta

Rinneadh Tástáil Maze Uisce Morris mar a thuairiscítear roimhe seo le mionathrú chun cuimhne spásúil agus cumas foghlama na bhfrancach a mheas sa staidéar reatha.8,20 Líonadh umar go doimhneacht 40 cm le huisce agus rinneadh teimhneach air. trí phéinte tempera bán neamhthocsaineach a chur leis. Coinníodh teocht an uisce ag 22 ± 1 céim chun an luch a chosc ó snámh. Cuireadh ardán éalaithe ciorclach (ga 11 cm) 0.5-1 cm faoi dhromchla an uisce i gceann amháin de cheithre cheathrú. Ag trí phointe ama, rinneadh tástáil ar fhrancaigh le haghaidh cuimhne tagartha tar éis oiliúna ar feadh 5 lá agus bhí ceithre thriail le heatramh de 15 nóiméad i ngach rannóg trialach oiliúna. Ag an dara agus an tríú pointe ama, baineadh an t-ardán as an linn, ansin rinneadh tomhas cuimhne spáis agus oibre. Taifeadadh an t-am a chaith gach francach ag cuardach an ardáin mar fhoirceann éalaithe. Tar éis trialacha, cuireadh francaigh i gcliabháin téite sular fhill siad ar a gcliabhán.

Rinneadh an tástáil páirce oscailte ar lá 1 agus lá 3 iar-ainéistéise mar a thuairiscigh Fricano et al21 Go hachomair, rinneadh tástáil ar fhrancaigh i réimse cearnach 27.5 cm × 27.5 cm. Bhí an lár, 66 faoin gcéad den réimse, i dteideal an 'ionad'. Taifeadadh an t-am a chaitear san ionad mar pharaiméadar chun an t-iompar imníoch a mheas.

Rinneadh an tástáil um riochtú eagla mar a thuairiscítear roimhe seo le mionathrú chun cuimhne spásúil agus cumas foghlama na bhfrancach a iniúchadh sa staidéar reatha.22,23 Rinneadh an oiliúint lá amháin tar éis ainéistéise. Ceadaíodh do gach francach oiriúnú don seomra ar feadh 120 s, agus ina dhiaidh sin nochtadh do spreagadh fuaime (20 s, 80 dB) agus ansin turraing leictreach coise (2 s, 0.75 mA) 25 s tar éis na fuaime spreagadh dar críoch. Rinneadh na risíochtaí arís faoi dhó, agus bhí eatraimh 60- idir an dara agus an tríú risíocht. Rinneadh an tástáil comhthéacs ar an dara agus an tríú lá tar éis máinliachta. Cuireadh gach luch sa seomra céanna a úsáidtear le haghaidh oiliúna, agus ina dhiaidh sin ní raibh aon spreagadh agus gan turraing coise don eatramh céanna a úsáidtear chun an t-ainmhí a thraenáil. Taifeadadh na torthaí, agus bailíodh an céatadán ama reo (gan bogadh).

2.4|Bailiúchán fíocháin

Tar éis anailís iompraíochta ag lá 3 iar-ainéistéise, maraíodh na francaigh turgnamhacha; ansin, baineadh na fíocháin inchinne láithreach agus díroinneadh an hippocampus go cúramach. Le haghaidh anailíse ar phróitéiní, ar RNAanna, agus ar chitocíní, rinneadh an hippocampus a reoite i nítrigin leachtach láithreach agus a stóráil ag −80 céim. Le haghaidh anailíse imdhíon-histochemical, socraíodh fíocháin le 4 faoin gcéad paraformaildéad ar feadh 72 uair an chloig agus ansin aistríodh iad go 20 faoin gcéad de shiúcrós ar feadh 72 uair an chloig eile.

2.5|Measúnacht Imdhíon-Iomdhíonta Nasctha le heinsím

Maraíodh na francaigh go léir tar éis na tástála iompraíochta ar an lá 3. Rinneadh fíocháin hippocampal a scaradh ar oighear láithreach agus homogenized i saline ag ultrasonaic. Ansin, rinneadh lártheifneoiriú ag 10 000 × g ag 4 chéim ar feadh 15 nóiméad. Socraíodh leibhéil IL-1 , TNF- , agus IL-6 le feisteáin mheasúnachta imdhíon-ionsorbaigh einsím-nasctha (ELISA) (eBioscience, San Diego, CA, USA) de réir threoracha an déantóra. Ba iad na teorainneacha braite ná 8.0 pg/mL do IL{{10}} , 8.0 pg/mL do TNF- agus 4.0 pg/mL do IL{{16} }. Rinneadh tiúchan plasma IL-1 , TNF- , agus IL-6 ag lá 1 agus lá 3 a thomhas freisin ag baint úsáide as ELISA.

2.6|Cinneadh ar nítrít/níotráit agus damáiste ocsaídiúcháin do lipidí agus próitéiní

Tomhaiseadh an tiúchan nítrít/níotráite (NO2−) san olltán a bailíodh ag imoibriú Griess (Sigma, St. Louis, MO, SAM), a léirigh mar tháscaire ar tháirgeadh ocsaíd nítreach (NO). Go hachomair, cuireadh 100 μL d'imoibrí Griess le 100 μL den fhorshuíomh. Tomhaiseadh cion próitéine iomlán an t-suíochán le trealamh imoibrí measúnaithe próitéin BCA (KeyGEN, an tSín) tar éis gortha ag teocht an tseomra ar feadh uair an chloig, agus tomhaiseadh an t-ionsúcht ag baint úsáide as speictreafótaiméadar ag 550 nm. Is iad na torthaí ná nmol NÍL − in aghaidh an mg próitéine.

Chinn an trealamh measúnaithe MDA (Institiúid Bithinnealtóireacht Jiancheng, Nanjing, an tSín) an leibhéal malondialdehyde (MDA) sa hippocampus tar éis é a bhailiú trí aonchineálacht agus lártheifneoiriú. Chinn an measúnú ar shubstaintí imoibríocha aigéad thiobarbituric (TBARS) an damáiste ocsaídiúcháin do lipidí. Go hachomair, deascadh na samplaí comhshnáithe le 10 faoin gcéad d'aigéad tríchlóraaicéiteach. Ansin cuireadh aigéad thiobarbituric (0.67 faoin gcéad) leis, agus tástáladh an t-ionsúcht ag 535 nm. Cuireadh na própán tetra methoxy 1,1,3,3- mar chaighdeán seachtrach agus sonraí in iúl mar nmol de choibhéisí malondialdehyde in aghaidh an mg de phróitéin.

2.7|Brath gníomhaíocht einsímeach frithocsaídeach

Chun gníomhaíocht superoxide dismutase (SOD) a thomhas, cuireadh 1{{10}} 1{10}} μL de shárnáithíní a fhaightear trí homogenizing fíocháin agus lártheifneoiriú (10 000 × g, 15 nóiméad) ag 4 céim le 2 0 Tuaslagán imoibrithe 0 μL (50 μL tetrazolium móide 19.95 mL maolán measúnachta, lena n-áirítear 50 mM Tris-HCl, 0.1 mmol/L hypoxantines agus 0.1 mmol/L aigéad peracetic triamine dieitiléin, pH 8.0). Ansin, cuireadh 20 μL d'ocsaíd xanthine leis na meascáin chun an t-imoibriú a thionscnamh. Tar éis croitheadh ​​​​agus gor ar feadh 20 nóiméad, taifeadadh athruithe ionsúcháin ag 450 nm ag baint úsáide as speictreafótaiméadar. Ríomhadh na gníomhaíochtaí SOD ag baint úsáide as an bhfoirmle a soláthraíodh leis an trealamh braite (Cayman Chemical Company, Ann Arbor, MI, USA).

Rinneadh an ghníomhaíocht CAT in forshnaidhm fíocháin hippocampal a chinneadh go speictrophotometric trí ráta dianscaoilte sárocsaíd hidrigine (H2O2) a ríomh ag 240 nm. Go hachomair, cuireadh slánchuid de 100 μL den sháile (20 μL) leis an meascán tsubstráit (1000 μL) ina raibh 0.3 ml de H2O2 i 50 mL de 0.05 mol/L PBS (pH 7.0). Taifeadadh ionsúiteanna ag 1 nóiméad tar éis thionscnamh an imoibrithe. Ríomhadh na torthaí trí úsáid a bhaint as caighdeáin sheachtracha agus cuireadh in iúl iad mar U in aghaidh an mg de phróitéin.

2.8|Aonrú RNA agus PCR cainníochtúil

Rinneadh na fíocháin hippocampal a aonchineálú chun RNAanna iomlána a fháil ag baint úsáide as TRIzol (Invitrogen), agus ansin, cuireadh aimpliú tras-scríbhinn i bhfeidhm ag baint úsáide as iScript cDNA Sintéise Kit (Bith-Rad). Méadaíodh an cDNA mar thoradh air ag qPCR ag baint úsáide as iTaq Universal SYBR Green Supermix (Bith-Rad) le primers primer géine-shonracha, agus ríomhadh léiriú coibhneasta gach géine ag baint úsáide as an modh 2−ΔΔCt agus normalaithe go rialú GAPDH. Cuirtear na seichimh primer i láthair i dTábla S1.

2.9|blot an iarthair

Rinneadh na fíocháin hippocampal a aonchineálú i maolán lysis cille (50 mmol/L Tris, pH 7.5, 1 mmol/L EDTA, 150 mmol/L NaCl, 0.5 faoin gcéad Triton X-100 , 0.5 faoin gcéad NP-40, fluairíd feinilmethylsulphonyl 1 mmol/L, vanadáit sóidiam 5 mmol/L, fluairíd sóidiam 1 mmol/L, 1 ug/mL aprotinin, pepstatin agus leupeptin). Scaradh próitéiní le glóthacha SDS-PAGE, agus ansin, aistríodh próitéiní sna glóthacha go seicní PVDF (Millipore). Cuireadh bac ar na seicní le 5 faoin gcéad bainne agus ansin goraíodh iad le príomhantasubstaintí sonracha, lena n-áirítear frith- -APP (ab76763, caolú 1:1000), frith-BDNF (ab108319, caolú 1:1000), frith-GFAP (ab68428). , caolú 1:1000), frith-Iba-1 (ab178847, 1:1000 caolú), frith-PPAR- (ab209350, 1:1000 caolú), frith-NF-κB (ab32360, 1:1000 caolú) agus frith-GAPDH (ab181602, caolú 1:1000). Ina dhiaidh sin, baineadh úsáid as TBST chun na seicní a ní agus ansin é a ghoradh le hantasubstaintí tánaisteacha comhchuingeacha HRP (Santa Cruz, CA, SAM). Ar deireadh, breathnaíodh an próitéin ábhartha ag an gcóras ECL (PerkinElmer) i bhfianaise léiriú an mhonaróra. Agus cuireadh ImageJ i bhfeidhm le haghaidh anailís chainníochtúil ar léiriú próitéine coibhneasta.

2. 10|Anailís ar shórtáil cille fluaraiseachta-ghníomhaithe (FACS).

Le haghaidh anailíse FACS, bailíodh na cealla hippocampal tar éis aonrú láithreach. Ansin, nite na cealla ag baint úsáide as oighear-fuar fosfáit-maolánaithe saline (PBS) agus ath-ar fionraí i PBS ina bhfuil 2 faoin gcéad FBS. I gcás gach measúnachta, rinneadh 1 × 105 cill i 100 µL PBS-FBS a dhathú le CD11b comhchuingeach fluaraiseacha (BD PharMingen, catalóg #554982, 1:250) agus CD45 (BD PharMingen, catalóg #554878, 1:250) le haghaidh antasubstaintí 2 uair an chloig ag 4 céim sa dorchadas. Tar éis níocháin le PBS fuar, athchuireadh cealla i 300 µL PBS-FBS. Agus rinneadh anailís chithiméadrach sreafa ar chitoiméadar sreafa FACSAria I (BD Biosciences). Rinneadh anailís ar na torthaí trí úsáid a bhaint as FlowJo (leagan 7.6.1).

2. 11|Nissl staining

Leabaíodh an hippocampus bailithe i gcomhdhúil OCT agus ansin gearradh ina chodanna corónacha {{{0} μm ag baint úsáide as micreatóim reo (Leica). Tar éis leá-gléasta ar shleamhnáin luchtaithe, nite na hailt le 0.01 mol/L PBS trí huaire ar feadh 15 nóiméad san iomlán agus ansin gortha i dtuaslagán cresile violet (0.5 faoin gcéad , ina raibh cúpla braon de aicéiteach oighreach aigéad) ar feadh 10-15 nóiméad ag teocht an tseomra. Tar éis níocháin le huisce driogtha faoi dhó , díhiodráitíodh na hailt in eatánól de réir a chéile ( 70 faoin gcéad , 85 faoin gcéad , 95 faoin gcéad , agus 100 faoin gcéad ). Tar éis díhiodráitithe, cuireadh i xiléin iad agus clúdaíodh iad le meán gléasta. Ar deireadh, breathnaíodh an staining Nissl faoin micreascóp (Leica).

2.12|Anailís sonraí

Rinneadh anailís ar na sonraí trí úsáid a bhaint as bogearraí GraphPad Prism 6.0. Rinneadh anailís ar shonraí sna staidéir iompraíochta ag pointí ama éagsúla (lá 1 nó lá 3) tar éis ainéistéise sevoflurane ag baint úsáide as anailís dhá bhealach ar athraitheacht (ANOVA) le bearta arís agus arís eile. Rinneadh anailís ar shonraí eile ag baint úsáide as ANOVA aontreo roimh thástáil Bonferroni. Rinneadh na turgnaimh go léir i dtrí chóip, agus cuireadh na torthaí in iúl mar a measadh go raibh an meán ± SEM P <.05 difriúil="" go="">

3|TORTHAÍ

3.1|Chuir Cistanche cosc ​​ar néar-athlasadh neamhghnácha i bhfrancaigh aosta

Chun an difríocht i bhfeidhm chognaíoch idir francaigh aosach agus aosach a fhiosrú, baineadh úsáid as sevoflurane chun ainéistéise a spreagadh ar na 3- agus 24-ríoga mí d’aois. Ansin, rinneadh meastóireacht ar an iompar atá ag brath ar hippocampus ar lá 1 agus lá 3 (Fíor S1A). Mar a léirítear i bhFíor S1B, ní raibh aon difríocht i latency éalaithe do cheithre ghrúpa turgnamhacha ar lá 1. Ina theannta sin, bhí an t-am a chaitear san ionad agus an céatadán de reo cosúil le francaigh a fuair feithiclí agus sevoflurane ar lá 1 (Fíor S1C, D). Mar sin féin, bhí difríochtaí suntasacha idir an 3- agus an 24- francaigh mí d'aois maidir le foighne éalaithe, an t-am a chaitear san ionad agus an céatadán de

reo tar éis an ionduchtaithe sevoflurane ar an 3ú lá, rud a thugann le tuiscint gur athraigh sevoflurane feidhm chognaíoch ainmhithe aosta go suntasach (Fíor S1B-D). Mar sin, baineadh úsáid as na francaigh aosta do na turgnaimh ina dhiaidh sin.

Chun imscrúdú a dhéanamh ar na héifeachtaí a bhíonn ag cistanche ar néar-athlasadh i bhfrancaigh aosta atá faoi nochtadh sevoflurane, rinneamar measúnú ar leibhéil an chitocín réamh-athlastach. Chonacthas an fhianaise le haghaidh neuroinflammation ag 24 uair an chloig tar éis ainéistéise sevoflurane, mar a léirítear le tiúchan ard de cítocíní pro-inflammatory IL-1 , IL-6, agus TNF- sa plasmid ar lá 1 agus 3. (Fíor 1A, 1), agus léirigh na mRNAanna ardaithe de chitocíní pro-athlastacha sa hippocampus suas le 3 lá (Fíor 1C-E) an neuroinflammation. I gcás gach ceann de na fachtóirí pro-athlastacha, chuir cóireáil cistanche deireadh leis na difríochtaí sna hathruithe sevoflurane-spreagtha sna hidirghabhálaithe proinflammatory. Laghdaigh Cistanche go suntasach na cítocíní pro-athlastacha ardaithe sa sevoflurane

3.2|Laghdaigh cóireáil eastóscáin Cistanches Herba strus ocsaídiúcháin de bharr sevoflurane i hippocampus na bhfrancaigh aosta

Ansin, rinneamar imscrúdú ar éifeachtaí cistanche ar an strus ocsaídiúcháin a chothaíonn sevoflurane. Mar a léirítear i bhFíor 2A, fuaireamar amach gur chuir an chóireáil cistéise cosc ​​ar strus ocsaídiúcháin de bharr sevoflurane, mar a mholtar le tiúchan nítrít/níotráite laghdaithe go suntasach sa hippocampus. Thugamar faoi deara freisin gur léirigh an grúpa SEVO plus cistanche leibhéil níos ísle de choibhéisí MDA, innéacs den damáiste ocsaídiúcháin do lipidí, sa hippocampus trí lá tar éis an ionanálú sevoflurane, i gcomparáid leis an SEVO.

grúpa (Fíor 2B). Ina theannta sin, léirigh francaigh a bhí faoi ainéistéise sevoflurane (grúpa SEVO) laghdú suntasach ar ghníomhaíocht SOD agus CAT ar an 3ú lá tar éis ainéistéise sa hippocampus. Mar sin féin, tháinig méadú suntasach ar ghníomhaíocht hippocampal na n-einsímí sin i ngrúpa SEVO móide cistanche, i gcomparáid leis an ngrúpa SEVO (Fíor 2C, D).

CistancheFhaoiseann Forlíonadh Aiste Bia Strus Frithocsaídeach

3.3| Cistanches Cóireáil sliocht Herba maolaithe gníomhachtú microglial

Déantar cealla microglial a ghníomhachtú le linn an tsaotharlainne nó athlasadh de bharr ainéistéise sa hippocampus, rud a chuireann leis an dul chun cinn paiteolaíoch ansin. Chun imscrúdú a dhéanamh an bhféadfadh cistanche bac a chur ar ghníomhachtú microglia, thomhaiseamar daonra na gcealla microglia gníomhachtaithe agus a marcóirí coibhneasta. Chuir microglia scíthe CD11b in iúl agus slonn íseal CD45, agus léirigh microglia gníomhachtaithe CD11b agus ardleibhéal CD45. Mar a chuirtear i láthair i bhFíor 3A, dheimhnigh torthaí ó anailís cíteaiméadrachta sreafa go raibh céatadán CD45 i bhfad níos ísle i bhfrancaigh a ndearnadh cóireáil orthu le cistíneach ná i bhfrancaigh spreagtha SEVO (0.495 ± {0.{{15}). } 51 faoin gcéad tar éis cóireáil cistanche vs 1.127 ± 0.032 faoin gcéad sa ghrúpa SEVO). Ina dhiaidh sin, thomhaiseamar na marcóirí glial ag qRT-PCR. Tar éis ainéistéise le sevoflurane, an mRNA

3.4|Laghdaigh cóireáil eastóscáin Cistanches Herba apoptosis néarónach de bharr sevoflurane

Tá apoptosis neuronal tiomáinte go páirteach ag microglia gníomhachtaithe agus strus ocsaídiúcháin, agus bhí deimhnithe againn go bhféadfadh cistanche cosc ​​a chur ar ghníomhachtú microglia agus strus ocsaídiúcháin in vivo. Chun imscrúdú breise a dhéanamh ar éifeachtaí cógaseolaíochta cistanche, rinneamar tástáil le haghaidh apoptosis néarónach le staining TUNEL agus scoilte-caspase 3 agus imdhíonbhloit Bax/Bcl-2. Mar a chuirtear i láthair i bhFíor 4A, mhéadaigh sevoflurane apoptosis cille sna réigiúin hippocampal. Laghdaigh riarachán cistanche TUNEL móide cealla tar éis ainéistéise sevoflurane. Léirigh muid freisin na leibhéil arda iontacha de caspase 3 agus Bax, agus leibhéil ísle Bcl-2 i hippocampus na bhfrancach ainéistéiseach aosta. Léirigh francaigh a fuair riarachán cistanche roimh ainéistéise laghdú suntasach ar ghníomhaíocht caspase 3 (Fíor 4B), caspase scoilte 3, agus próitéin Bax (Fíor 4C, D), a bhí ag teacht le apoptosis neuronal laghdaithe a breathnaíodh i staining TUNEL.

3.5|Laghdaigh cóireáil eastóscadh Cistanches Herba mífheidhm chognaíoch agus lagú fíocháin hippocampal tar éis ainéistéise arna spreagadh ag sevoflurane

Chun imscrúdú breise a dhéanamh ar an ról atá ag cistanche ar fheidhm chognaíoch, cuireadh francaigh faoi 50 mg/kg de chistín ó bhéal ar feadh trí lá as a chéile roimh ainéistéise. Sa ghrúpa cistanche-chóireáilte (grúpa SEVO móide cistanche), laghdaíodh an latency éalaithe go suntasach, bhí an t-am a chaitear san ionad níos faide, agus méadaíodh an céatadán reo ag lá 3 tar éis ainéistéise i gcomparáid le grúpa SEVO (Fíor 5A- C). Léirigh na torthaí seo go bhféadfadh cistanche, ar a laghad, lagú cognaíocha a tharrtháil go páirteach. Rinneamar measúnú breise ar mhéid an bháis néarónach i hippocampus na bhfrancach i gceithre ghrúpa trí staining Nissl. Léiríodh sna híomhánna nach raibh mínormáltacht fhollasach ag na cealla maidir le rialú grúpa agus rialú grúpa móide cistanche. Mar sin féin, laghdaíodh líon na néaróin marthanais i réigiúin CA1 go suntasach i bhfrancaigh SEVO-spreagtha i gcomparáid leis sin sa ghrúpa rialaithe ar lá 3. D'aisiompaigh cóireáil le cistanche an éifeacht seo de SEVO agus cuireann sé maireachtáil néarónach chun cinn go suntasach i gcomparáid le SEVO-spreagtha ina n-aonar. (Fíor 5D).

3.6|Laghdaigh cóireáil eastóscán Cistanches Herba táirgeadh cítocine pro-athlastach spreagtha le sevoflurane ar bhealach íogair PPAR

An chéad uair eile rinneamar imscrúdú ar cé acu an raibh éifeacht na cistéise ar tháirgeadh cítocín íogair ó thaobh PPAR- -. Mhéadaigh cóireáil le GW9662 (grúpa SEVO móide GW9662) na leibhéil IL-1 , IL-6, agus TNF- i gcomparáid leis an ngrúpa SEVO. Mar sin féin, laghdaigh cóireáil le cistanche táirgeadh cítocín pro-athlastach spreagtha SEVO. Díol suntais,

3.7| Chuir cóireáil eastóscadh Cistanches Herba bac ar strus ocsaídiúcháin de bharr sevoflurane trí PPAR-

Tuairiscíodh go ndéanann sevoflurane áibhéil mhífheidhm chognaíoch i múnla francach eatramhach ainsealach a chothaítear le hipocsa trí chosc ar léiriú PPAR sa hippocampus.1 N'fheadar arís an raibh éifeachtcistéirtharla ar bhealach PPAR- -spleách. Chun na críche sin, úsáideadh GW9662, antagonist roghnaíoch agus dochúlaithe PPAR- , le haghaidh tuilleadh staidéir. Chuir cóireáil le GW9662 ag 30 ng strus ocsaídiúcháin chun cinn, mar atá léirithe ag leibhéil mhéadaithe nítrít/níotráite agus MDA. Mar sin féin, méadaíodh na marcóirí frith-ocsaídiúcháin SOD agus CAT sa hippocampus ar lá 3 i gcomparáid le francaigh a oibrítear le SEVO. Cóireáil lecistéirlaghdaigh sé ró-tháirgeadh marcóirí struis ocsaídiúcháin de bharr SEVO agus d'éascaigh sé an ghníomhaíocht SOD agus CAT (Fíor 7A-D). Ina theannta sin, na héifeachtaí a tháirgtear trícistéirar ais ag GW9662, mar a breathnaíodh ag méadú ar tháirgeadh nítrít/níotráite (Fíor 7A) agus MDA (Fíor 7B). Ina theannta sin, tá an

d'aisiompaigh GW9662 (Fíor 7C, D) éifeachtaí cistanche ar ghníomhaíocht SOD agus CAT freisin, rud a léiríonn rannpháirtíocht PPAR- .

3.8|Chuir cóireáil eastóscáin Cistanches Herba bac ar ghníomhachtú microglial agus apoptosis néaricíte agus chuir sé feabhas ar an meath cognaíoch ar bhealach íogair PPAR- -

Ba é an chéad chéim eile a fhiosrú an bhfuil éifeachtaícistéirar ghníomhachtú microglia agus bhí apoptosis néaricíte íogair PPAR- -. Mhéadaigh cóireáil le GW9662 na leibhéil mRNA de CD68 (Fíor 8A), GFAP (Fíor 8B), agus Iba-1 (Fíor 8C). Go háirithe, tugadh ar ais go héifeachtach na héifeachtaí seo a tháirgtear ag GW9662cistéir, mar a breathnaíodh ag laghdú ar na marcóirí céanna (Fíor 8A-C). Ina theannta sin, tháinig cistanche ar ais freisin ar léiriú próitéin GFAP agus Iba-1 arna dtáirgeadh ag GW9662, rud a léiríonn go gcuireann cistanche bac ar ghníomhachtú microglia, agus go mbraitheann sé go páirteach ar a laghad ar PPAR- . Ina theannta sin, chuir GW9662 (Fíor 8D, E) bac ar éifeacht cistanche ar -APP agus léiriú próitéin BDNF. Chun imscrúdú a dhéanamh an bhféadfadh cistanche bac a chur ar apoptosis néaricíte ar bhealach íogair PPAR, braitheadh ​​próitéiní a bhaineann le apoptóis. Mar a léirítear i bhFíor 8F, G, laghdaigh cistanche ag 50 mg/kg an léiriú ar phróitéin pro-apoptosis (scoite-caspase 3 agus Bax). Mar sin féin, tarrtháladh na héifeachtaí seo den chuid is mó ag GW9662.

Cistancheis féidir le sliocht apoptosis cille a mhaolú

Ós rud é go raibh dlúthbhaint ag na leibhéil strus ocsaídiúcháin agus athlasadh le feidhm chognaíoch i bhfrancaigh iar-ainéistéise, chinneamar a thuilleadh an raibh éifeachtcistéirar mhífheidhm chognaíoch bhí PPAR- -ag brath. Mar a léirítear i bhFíor 8H-J, i gcomparáid le francaigh