Frithghníomhaíonn Naringin Agus Hesperidin Heipitotocsaineacht arna Spreagadh ag Diclofenac i bhFrancaigh Fhir Wistar Trína Gníomhaíochtaí Frithocsaídeacha, Frith-Alasacha agus Frith-Aisíochais Cuid 1

Déan teagmháil le do thoiloscar.xiao@wecistanche.comle haghaidh tuilleadh eolais

1. Réamhrá

Tá fo-iarmhairtí éagsúla ag drugaí frith-athlastach neamhsteroidal (NSAIDs) [1]. Tá Diclofenac, mar cheann den chatagóir seo de dhrugaí, ina dhíorthach d’aigéad feanlaicileach a úsáideadh le fada mar dhruga analgánach agus frith-athlastach chun coinníollacha áirithe a chóireáil [2]. Ina mheicníocht gníomhaíochta, cuireann diclofenac bac ar cyclooxygenase-(COX-). )2 einsím a bhfuil níos mó cumhachta acu ná mar a ghníomhaíonn sí ar COX-1 [3]. Cé go bhfuil éifeachtaí teiripeacha láidre ag diclofenac, tá baint ag a úsáid leanúnach le héifeachtaí díobhálacha tromchúiseacha a bhraitheann ar dháileog [3]. Méadú arocsaídiúcháinthuairiscigh foilseacháin éagsúla a raibh baint acu le hionduchtú tocsaineachta agus fo-iarsmaí an druga [4,5] ar strus agus ar shochtadh na gcóras cosanta frithocsaídeoirí. D'fhéadfadh úsáid frithocsaídeoirí cosúil le flavonoids citris i gcomhar le diclofenac cur i gcoinne an strus ocsaídiúcháin a chothaítear diclofenac agus mar sin féadfaidh sé fo-iarmhairtí agus tocsaineacht drugaí a chosc.

Cliceáil anseo le do thoil chun tuilleadh eolais a fháil

Tá airíonna leathan-speictream cógaseolaíochta agus teiripeacha ag Naringin atá freagrach as blas géar agus blas searbh torthaí speiceas citris mar ísliú lipid, frith-athlastach, scavenging radacach saor in aisce, frithocsaídeach, frithhyperlipidemic,

airíonna antiapoptotic, agus antiatherogenic [6,7. Is flavonoid eile é Hesperidin atá scoite ó speicis citris a raibh roinnt airíonna bitheolaíocha aige, go háirithe frithocsaídeach agus frith-athlastach [8]. Tuairiscíodh gur fheabhsaigh hesperidin an díobháil fíocháin ae de bharr cytochrome a breathnaíodhhisteapaiteolaíochtascrúdú [9]. Tugadh le fios freisin go raibh hesperidin éifeachtach chun é a shochtadhathlasadhagus comharthaí ailléirgeacha agus i gcóireáil riníteas ailléirgeach[10]. Mar sin, rinneadh an staidéar seo chun measúnú a dhéanamh ar na héifeachtaí coisctheacha a d'fhéadfadh a bheith ag naringin agus hesperidin ar thocsaineacht ae de bharr diclofenac agus chun iniúchadh a dhéanamh ar na róil a bhaineann le hathlasadh, strus ocsaídiúcháin agus apoptosis a mhodhnú sa ghníomh coisctheach.

2. Ábhair agus Modhanna

2.1. Ceimiceáin agus Trealamh. Fuarthas sóidiam Diclofenac ó El-Nasr Pharmaceutical Chemical Company, an Éigipt.

Sigma-Aldrich Company (St. Louis, MO, SAM) a rinne Naringin agus hesperidin. Tá na ceimiceáin eile go léir a úsáidtear de ghrád anailíseach agus fuarthas ó chuideachtaí ceimiceacha áitiúla. Fuarthas trealamh alanine transaminase(ALT) agus aspartate trans-aminase(AST) ó Spinreact, Ctra Sta Coloma, 7.17176 St., Esteve de Bas, Girona, an Spáinn. Fuarthas lactate dehydrogenase (LDH) agus y-glutamyltransferase(GGT) ó Spectrum, Cuideachta Biteicneolaíochta na hÉigipte, Limistéar Tionscail Obour City, Cairo, an Éigipt. Fuarthas trealamh fosfatase (ALP) alcaileach ó Biodiagnostic, 29 Tahrir St., Dokki, Giza, an Éigipt. Fuarthas feisteáin albaimin agus bilirubin ó Diamond, 24 El Mon-matzah St., Heliopolis, Cairo, an Éigipt.

Is féidir le Cistanche díolúine a fheabhsú

2.2.Ainmhithe Turgnamhach. Baineadh úsáid as francaigh fireanna aosacha le brú Wistar a mheá 100-130g (9-1l seachtaine) mar ainmhithe turgnamhacha san obair seo.

Fuarthas iad ó Institiúid Taighde Theach Oftailmeolaíochta Ani-mal, Giza, an Éigipt. Cuireadh na hainmhithe i gcliabháin aeraithe go maith ag 12 uair sa lá de thimthriallta dorchadais agus teocht idir 20 agus 25 céim . Forlíontar na francaigh go laethúil le gnáth-aiste bia millíní agus uisce ad libitum. Coinníodh na hainmhithe ar feadh dhá sheachtain faoi bhreathnóireacht sular cuireadh tús leis an turgnamh le haghaidh oiriúnú agus chun aon ionfhabhtú idirshruthach a eisiamh. Tá na modheolaíochtaí ainmhithe go léir de réir threoirlínte agus threoracha Choiste Eitice Ainmhithe Turgnamhach na Dáimhe Eolaíochta um Chúram agus Úsáid Ainmhithe, Ollscoil Beni Suef, an Éigipt. Is í an uimhir fhormheasa eiticiúil ná BSU/FS/2015/15. Rinneadh gach iarracht chun fulaingt agus anacair ainmhithe a laghdú.

2.3.Grúpáil Ainmhithe. Baineadh úsáid as tríocha francach Wistar fireann sa turgnamh seo agus leithdháileadh iad i gcúig ghrúpa (Fíor 1).

Fuair ​​francaigh ghrúpa 1(gnáth) an toirt choibhéiseach de shalainn (an fheithicil inar tuaslagadh diclofenac) trí instealladh intraipeineach agus tugadh an toirt choibhéiseach 1 faoin gcéad dóibh freisincarboxymethylceallalóis(CMC; an fheithicil inar tuaslagadh naringin agus hesperidin) trí chuasán béil gach lá ar feadh 4 seachtaine. Instealladh Grúpa 2 (grúpa diclofenac-instealladh) le diclofenac (tuaslagtha i saline) trí riarachán intraperitoneal ag dáileog de 3 mg / cileagram meáchan coirp (kgb. wt) / lá [11] agus tugadh an méid coibhéiseach de 1 faoin gcéad freisin. CMCby gavage ó bhéal go laethúil ar feadh 4 seachtaine. Tugadh diclofenac do Group3 (grúpa instealladh diclofenac le naringin) mar atá i ngrúpa 2 agus caitheadh ​​​​ó bhéal é le naringin (tuaslagtha i 1 faoin gcéad CMC) ag leibhéal dáileog de 20mg/kgb. wt/lá le gavage béil[12] ar feadh 4 seachtaine. Tugadh diclofenac do ghrúpa 4 (grúpa diclofenac-instealladh cóireáilte le hesperidin) mar atá i ngrúpa 2 agus cóireáilte ó bhéal le hesperidin (tuaslagtha i 1 faoin gcéad CMC) ag dáileog de 20mg/kg b.wt/day [13] ar feadh 4 seachtaine. Forlíontar grúpa 5 (grúpa instealladh diclofenac le naringin agus hesperidin) le diclofenac mar atá i ngrúpa 2 agus cuireadh cóireáil air ó bhéal le naringin agushesperidin(tuaslagtha in 1 faoin gcéad CMC) ag dáileog 20mg/kg b. wt/lá ar feadh 4 seachtaine.

2.4.Sampláil fola agus ae.

Ag deireadh an turgnaimh, baineadh bia de na francaigh, agus bailíodh samplaí fola ó na féitheacha jugular. Fágadh na samplaí fola chun téachta ag teocht an tseomra agus ansin lártheifneoiríodh iad ag 3000rpm ar feadh 15 nóiméad. Rinneadh serum gach sampla fola a chodánú i dtrí vial a coinníodh ag -30 céim go dtí go n-úsáidfí iad le haghaidh anailíse bithcheimiceach.

Tar éis samplaí fola a thógáil ón vein jugular, rinneadh na francaigh a eotanú agus a scaradh. Bhí an t-ae ó gach francach excised go tapa agus nite i saline steiriúla ({{{0}}.9 faoin gcéad NaCl. Socraíodh píosaí den ae i 10 faoin gcéad neodrach maolánach formalin le haghaidh imscrúdú histological. Coinníodh codanna eile i a). reoiteoir domhain ag -30 céim ar feitheamh homogenization i saline isotónach steiriúil (0.9 faoin gcéad NaCl) chun strus ocsaídiúcháin agus marcóirí cosanta frithocsaídeach a chinneadh Coinníodh an tríú cuid den ae ag -30 céim i feadáin steiriúla Eppendorf do anailís frithghníomhaithe slabhra tras-polaiméiráis droim ar ais (RT-PCR).

2.5. Brath Paraiméadair Feidhme Ae i Séiream.

Measadh gníomhaíochtaí ALT agus AST ag baint úsáide as an modh ocsaídiúcháin hidrigine dinucleotide nicotinamide adenine (NADH) de réir modhanna Murray [14] agus Murray [15], faoi seach, ag baint úsáide as feisteáin imoibrí a ceannaíodh ó Spinreact, an Spáinn. Go hachomair, catalaíonn ALT tiontú alanine go Pyruvate, a laghdaítear go lachtáit ag LDH, agus déantar NADH a ocsaídiú go dinucleotide adenine nicotinamide (NAD). Tá an ráta laghdaithe i dtiúchan NADH, arna thomhas go fótaiméadrach ag 340nm, i gcomhréir leis an tiúchan catalaíoch ALT atá sa sampla serum. Ar an láimh eile, catalaíonn AST tiontú aspartate go oxaloacetate, a laghdaítear go malate ag malate dehydrogenase(MDH), agus déantar NADH a ocsaídiú go NAD. Tá an ráta laghdaithe i dtiúchan NADH, arna thomhas go fótaiméadrach ag 340nm, i gcomhréir leis an tiúchan catalaíoch AST atá sa sampla serum. Braitheadh ​​gníomhaíocht Serum LDH de réir modh Van der Heiden et al. [16]. Ar an modh seo, catalaíonn LDH an t-imoibriú idir pyruvate agus NADH chun NAD* agus L-lachtáit a tháirgeadh. Tá an ráta laghdaithe i dtiúchan NADH, arna thomhas go fótaiméadrach ag 340 nm, i gcomhréir leis an tiúchan catalaíoch LDH atá sa sampla. Cinneadh gníomhaíocht Séiream ALP de réir mhodh Belfield agus Goldberg [17] ag baint úsáide as feisteáin a fuarthas ó Biodiagnostic, an Éigipt. Trí shampla serum a chur le fosfáit feinile (5 mmol/L) ag pH 10,

Cruthaítear feanól agus fosfáit mar thoradh ar ALP. Déantar an feanól saortha a thomhas go dathmhéadrach ag 510nm i láthair 4-aimínaigéanóin agus ferricyaníd photaisiam. Cinneadh gníomhaíocht GGT de réir mhodh Szasz agus Persijn [18] ag baint úsáide as feisteáin a fuarthas ó Spectrum Diagnostic, Cuideachta Éigipteach um Biteicneolaíocht na hÉigipte. Aistríonn GGT an siad-glutamylgroup ón tsubstráit L- -glutamyl-p-nitroanilide, rud a shaorann an crómaigin p-nítreanilide (PNA) a thomhas ag 418nm agus a fhoirmiú comhréireach leis an ngníomhaíocht GGT. Socraíodh leibhéal serum albaimin de réir mhodh Doumas et al. [19] ag baint úsáide as feisteáin imoibrí a ceannaíodh ó Diamond, an Éigipt. Go hachomair, rinneadh an modh trí 10μL séiream a chur le 2mL bro-níos mó sol glas (0.12mmol/L) i maolán chiotráite pH 3.8. an t-albam/brómaicréasólcoimpléasc glas, déanta ag an imoibriú, a thomhas ag 630nm. Measúnaíodh leibhéal séirim bilirubin de réir mhodhanna Malloy agus Evelyn [20] ag baint úsáide as feisteáin imoibrí a ceannaíodh ó Diamond, an Éigipt. Tá an modh seo le haghaidh meastachán bilirubin bunaithe ar imoibriú van den Bergh. San imoibriú seo, imoibríonn bilirubin le haigéad sulfanilic diazotized chun azobilirubin a tháirgeadh a bhfuil dath corcra air agus a thomhas go fótaiméadrach ag 578nm. Tá déine an dath comhréireach go díreach leis an méid bilirubin sa serum.

2.6. Meastóireacht ar Strus Ocsaídeach Ae agus Paraiméadair Chórais Chosanta Frithocsaídeach.

Cinneadh sárocsaídiú lipid ae (LPO) de réir mhodh Preuss et al. [21]. Go hachomair, deascadh an phróitéin trí 0.15mL 76 faoin gcéad d’aigéad trichloroaicéiteach (TCA) a chur le 1 mL aonchineálach ae. Ansin, cuireadh0.35mL d'aigéad thiobarbitúrach (TBA) leis an bhfostán scartha, mar oibreán a fhorbraíonn dathanna. Tomhaiseadh an dath bándearg lag forbartha ag 532nm tar éis gor i ndabhach uisce ag 80 céim ar feadh 30 nóiméad. Úsáideadh MDA(móindialdéad nó 1,1,3,3-tetra meatocsa própán) mar chaighdeán. Cinneadh ábhar laghdaithe glutathione(GSH) san ae trí 0.5 mL5,5'-dithiobis(2-aigéad nítrigine-zóch), imoibrí Ellman (mar oibreán a fhorbraíonn dath) agus tuaslagán maolánach fosfáite (pH 7) a chur leis. ) chun sár-natant a aonchineálú i ndiaidh deascadh próitéine bunaithe ar nós imeachta Beutler et al. [22]. Tomhaiseadh na dathanna buí forbartha i samplaí agus caighdeáin GSH ag 412nm in aghaidh bán. Rinneadh gníomhaíocht GPx ae a thomhas de réir nós imeachta Matkovics et al.[23] le roinnt modhnuithe. Tá an modh seo bunaithe ar bhrath an GSH a thiontaítear go glutathione ocsaídithe (GSSG) ag an einsím tríd an GSH iarmharach a bhrath agus é a dhealú ón iomlán. Go hachomair, cuireadh comhshnáthán aonchineálach 50 μL le feadán Wasserman ina raibh maolán 350μL Tris (pH 7.6), réiteach 50μL GSH (2mM), agus 50μL H, O, (3.38mM). Ansin, tar éis 10 nóiméad goir, rinneadh an t-ábhar GSH iarmharach a thomhas de réir an mhodha a thuairiscítear roimhe seo chun GSH a chinneadh ag 430nm. Ullmhaíodh an tástáil chaighdeánach trí uisce driogtha 50μL a chur in ionad sampla 50μL agus ullmhaíodh an tástáil bán trí uisce driogtha 100μL a chur in ionad sampla 50μL agus réiteach 50μL GSH. Tar éis an t-ábhar GSH iarmharach a bhrath sa sampla, déantar an GSH a thiontú go foirm ocsaídithe (GSSG) agus is féidir an ghníomhaíocht einsíme a ríomh. Braitheadh ​​gníomhaíocht superoxide dismutase(SOD) ae de réir mhodh Marklund agus Marklund [24]. Tá an t-imoibriú bunaithe ar chosc ar uathocsaídiú pyrogallol ag SOD. Tá an próiseas ag brath ar láithreacht na n-ian superoxide. Athraíonn méid na heinsíme a chuireann cosc ​​​​50 faoin gcéad ar an díothú i 1 nóiméad i gcomparáid leis an rialú mar aonad amháin den einsím.

2.7.Leibhéil Séiream TNF- , IL-17, agus IL-4 a chinneadh.

Measadh leibhéil serum TNF- , I-17, agus I{-4 de réir feisteáin ar leith measúnachtaí imdhíon-asorbaigh einsím-nasctha (ELISA) de réir threoracha an déantóra. Fuarthas trealamh ELISA Rat TNF-alfa (Catalóg: MBS355371), IL-17 trealamh ELISA (Catalóg Uimh.MBS5203506), agus IL-4 trealamh ELISA (Catalóg: MBS494192) ó MyBioSource, Inc. , San Diego, CA, Stáit Aontaithe Mheiriceá. Úsáideann na feisteáin ELISA seo ceapaire ELISA. Go hachomair, tá na plátaí micrea-ELISA a chuirtear ar fáil sna feisteáin seo réamhbhrataithe le hantasubstaint a bhaineann go sonrach leis an gcítocín atá i gceist. Cuirtear caighdeáin nó samplaí leis na toibreacha pláta micrea ELISA cuí agus cuirtear iad in éineacht leis na hantasubstaintí sonracha. Ansin, cuirtear antashubstaint braite biotinylated a bhaineann go sonrach leis an gcítocín lena mbaineann agus comhchuingeach sárocsaídáis aidín-capallais (HRP) le gach micriphláta go maith i ndiaidh a chéile agus gortar é. Déantar comhpháirteanna saor in aisce a ní. Cuirtear an tuaslagán tsubstráit le gach tobar. Ní bheidh dath gorm le feiceáil ach ar na toibreacha sin ina bhfuil cítocín, antasubstaintí braite biotinylated, agus comhchuingeach avidin-HRP. Cuirtear deireadh leis an imoibriú einsím-substráit trí thuaslagán d'aigéad sulfarach a chur leis agus casann an dath buí. Déantar an dlús optúil (OD) a thomhas go speictrophotiméadrach ag tonnfhad 450 nm. Tá an luach OD comhréireach le tiúchan an chitocín a tástáladh agus is féidir a thiúchan sna samplaí a chinneadh trí OD na samplaí a chur i gcomparáid leis an gcuar caighdeánach.

2.8.MRNA a bhrath Slonn ar p53

2.8.1.RNA Leithlisiú.

Rinneadh RNA iomlán a leithlisiú ón bhfíochán ae de réir mhodh Chomzynski agus Sacchi [25] agus Boom et al. [26] ag baint úsáide as trealamh íonúcháin RNA Thermo Scientific GeneJET a fuarthas ó Thermo Fisher Scientific Inc., Rochester, Nua-Eabhrac, SAM. Go hachomair, déantar samplaí ae a lysed agus a homogenized i maolán lysis, ina bhfuil guanidine thiocyanate mar salann chaotrópach agus -mercaptoethanol atá in ann RNA a chosaint ó RNases ingenous. Déantar an lysate a mheascadh ansin le eatánól agus é a luchtú ar cholún íonúcháin. Is é an salann chaotrópach agus an t-eatánól is cúis le RNA a cheangal leis an scannán shilice agus an lysate á sníomh tríd an gcolún. Ina dhiaidh sin, baintear neamhíonachtaí go héifeachtach as an membrane trí an colún a níochán le maoláin nigh. Cuirtear RNA íon ar ceal ansin faoi choinníollacha neart ianach íseal le huisce saor ó núicléas. Rinneadh na leibhéil RNA scoite a chinneadh agus a chainníochtú trí úsáid a bhaint as speictreafótaiméadar ultraivialait (UV) agus ag glacadh an ionsúcháin ag dlúis optúla (OD) ag 260nm agus 280 nm. Rinneadh RNA a chainníochtú agus a cháiliú bunaithe ar fhoirmle [27] Sambrook agus Russell (RNA （ug/μL) =ODat 260nm × caolú × 40ug/mL/1000）. I gcás gach sampla RNA a bhaintear, cinntíonn an cóimheas idir OD ag 260 nm agus OD ag 280nm agus an cóimheas idir 1.7 agus 2.0 ardíonacht an RNA eastósctha.

2.8.2. Cuireadh measúnacht RT-PCR Assay.RT-PCR i bhfeidhm ag baint úsáide as Thermo Scientific Verso 1-Step RT-PCR Reddy Mix Kit (Thermo Fisher Scientific Inc.,

Rochester, Nua Eabhrac, SAM) chun léiriú mRNA an ae p53 a bhrath. Go hachomair, in imoibriú aon-chéim, rinneadh RNA a thras-scríobh ar ais go cDNA agus mhéadaigh Techne 32 Ther-mocycler an cDNA a tháirgtear. Is éard atá sa mheascán imoibriúcháin ná Veso Enzyme Mix （1μL）,2X One-Step PCR ReadyMix (25μL), feabhsaitheoir RT (25μL), primer ar aghaidh (10μM; 1μL）, primer droim ar ais (10μM; 1μ), teimpléad RNA (1 ng; 1.5μL), agus uisce saor ó núicléas chun toirt iomlán a chomhlánú go 50μL. Áirítear leis an gclár rothaíochta teirmeach sintéis cDNA (temp.50 céim, 15 nóiméad, 1 timthriall), díghníomhú Verso (teocht.95 céim ,2 nóiméad, 1 timthriall), dínádúrú (teocht.95 céim ,20 soicind), annealing (teocht. 55 céim C, 30 soicind), síneadh (temp.72 céim ,1 nóiméad), agus síneadh deiridh (teocht. 72 céim , 5 nóiméad, 1 timthriall). Is é 35 timthriall líon na dtimthriallta dínádúraithe agus anáil agus síneadh ina dhiaidh sin. Tar éis tras-scríobh agus aimpliú droim ar ais, rinneadh anailís ar 10μL de tháirgí PCR ar fhoirmiú agarose 1.5 faoin gcéad a dhaite le bróimíd ethidium i maolán 1 × Tris Borate EDTA (TBE) pH 8.3-8.5. Rinneadh an pictiúr leictreafóiriteach a léirshamhlú agus a anailísiú trí chóras doiciméadaithe glóthacha (GelDocu Advanced), agus normalaíodh luachanna go dtí an chainníocht -actin. Ba iad na seichimh péire primer p53 ná 5'd CAGCGTGATGATGGTAAGGA 3'(ar aghaidh) agus 5'd GCGTTGCTCTGATGGTGA 3'(droim ar ais) de réir Asiri [28].

2.9. Imscrúduithe Histeapaiteolaíocha. Tar éis íobairt agus dissection, bhí an t-ae ó gach francach excised go tapa agus perfused ansin i dtuaslagán salanda.

Tógadh píosaí as ae gach francach (3 mm²) agus socraíodh iad i 10 faoin gcéad de formalin maolánach neodrach ar feadh ceithre huaire is fiche. Cuireadh na haenacha seasta chuig an Roinn Paiteolaíochta, Dámh an Leighis Tréidliachta, Ollscoil Beni Suef, le haghaidh próiseála breise, blocáil céir, gearradh agus staining le hematocsailín agus eosin (S&E)[29]. Scrúdaíodh na codanna daite den ae chun na scóir histeapaiteolaíochta a aimsiú. I dtrí réimse roghnaithe go randamach de gach rannóg(×100), grádaíodh loit nó gortuithe mar neamhláithreacht (0), éadrom (I), measartha (), agus dian (II) le haghaidh athruithe,0 faoin gcéad , níos lú ná 30 faoin gcéad ,30-50 faoin gcéad ,agus níos mó ná 50 faoin gcéad , faoi seach [30]. I measc na loit grádaithe bhí díghiniúint hidropic agus folúis, insíothlú cille athlastach, neacróis, apoptosis, iomadú cille Kupffer, athruithe sailleacha agus steatosis, soithigh fola plódaithe agus sinusoids, agus hipearpláis ar líneáil epithelial an ducht bile.

2. 10. Imdhíon-aisticeimiceach a Bhrath Caspase-3.

Aistríodh na samplaí ae leabaithe pairifín go dtí an Roinn Paiteolaíochta, an Institiúid Náisiúnta Ailse, lena n-alt i gcodanna tiubh 5um a bhí suite ar shleamhnáin luchtaithe dearfacha (Fisher Scientific, Pittsburgh, PA). Próiseáladh imoibríocht Caspase-3 de réir mhodhanna Galaly et al.[31] agus Ahmed agus Ahmed [32]. Go hachomair, tar éis aisghabháil antaiginí, goradh codanna ae ar feadh 1 uair an chloig d'antashubstaint caolaithe príomhúil do caspase (Biteicneolaíocht Santa Cruz, Santa Cruz, CA, SAM). Cuireadh antasubstaint thánaisteach biotinylated caolaithe (DakoCytomation Kit) leis, agus rinneadh gor ar feadh 15 nóiméad ag 37 céim . Ina dhiaidh sin, cuireadh sárradish sárocsaíd-chomhchuingeach le streptavidin (DakoCytomation Kit) i bhfeidhm ar feadh 15 nóiméad eile goir. Rinneadh coimpléasc antashubstainte faoi cheangal a léirshamhlú trí imoibriú an tsubstráit 3,3'-diaminobenzidine (DAB) agus frith-dhaingniú le hematocsailín. Goradh na hailt ae go léir faoi na coinníollacha céanna leis na caoluithe céanna antasubstaintí agus ag an tréimhse chéanna, agus mar sin bhí an imdhíonchothaithe inchomparáide i measc na ngrúpaí staidéir éagsúla. I gcás gach ullmhúcháin, rinneadh rialú diúltach (sleamhnán gan antashubstaint phríomhúil). Rinneadh na hailt a léirshamhlú faoi mhicreascóp solais, agus rinneadh measúnú ar mhéid an imdhíonachta cille. Gabhadh íomhánna de chodanna den ae le ceamara digiteach (Leica, DM2500M Leica, Wetzlar, an Ghearmáin). Rinneadh scrúdú agus anailís ar lipéadú trí úsáid a bhaint as leagan bogearraí saor in aisce ImageJ(1.51d)[33]. Baineadh úsáid as bogearraí ImageJ chun déine comhtháite (i bpicteilíní) imoibriú dearfach caspase-3 a thomhas.

2. 11. Anailís staitistiúil.

Results were represented in tables and graphs as the mean±standarderror(SE). The data were analyzed by LSD analysis to discern the main effects and to compare various groups with each other using PC-STAT, University of Georgia(USA)[34]. Values of p>Measadh go raibh 0.05 difriúil go staitistiúil, cé go raibh luachanna lch<0.05 were="" significantly="" and="" highly="" significantly="">

3. Torthaí

3.1. Éifeacht ar Pharaiméadair Séiream a Bhaineann le Feidhm Ae.

Spreag an t-instealladh laethúil inperitoneal de diclofenac ar feadh 4 seachtaine ardú suntasach (lch<0.05)in serum="" alt,="" ast,="" ldh,="" alp,="" and="" ggt="" activities="" as="" well="" as="" serum="" total="" bilirubin="" level.="" the="" cotreatment="" of="" diclofenac-injected="" ani-mals="" with="" naringin="" and/or="" hesperidin="" induced="" a="" decrease="" in="" these="" elevated="" levels.="" while="" the="" cotreatment="" of="" diclofenac-injected="" rats="" with="" naringin="" induced="" a="" significant="" decrease=""><0.05)in the="" elevated="" serum="" ast,="" ldh,="" alp,="" ggt,="" and="" total="" bilirubin="" levels,="" it="" produced="" a="" nonsignificant="" effect="" (p="">0.05) ar an ngníomhaíocht ALT. D'eascair éifeacht shuntasach as cóireáil ainmhithe diclofenac-insteallta le hesperidin(p<0.05)on the="" elevated="" alt,="" ast,="" ldh,="" ggt,="" and="" total="" bilirubin="" levels="" while="" it="" failed="" to="" produce="" a="" significant="" effect="" in="" serum="" alp=""><0.05). the="" cotreatment="" with="" naringin="" and="" hesperidin="" in="" combination="" successfully="" caused="" a="" significant="" decrease=""><0.05)in all="" elevated="" parameters="" related="" to="" liver="" function="" including="" alt,="" ast,="" ldh,="" alp,="" ggt,="" and="" total="" bilirubin="" levels.="" moreover,="" the="" treatment="" with="" the="" combination="" of="" naringin="" and="" hesperidin="" appeared="" to="" be="" the="" most="" effective="" in="" improving="" the="" elevated="" ast,="" alp,="" and="" ggt="" activities(table="" 1).="" serum="" albumin="" level,="" on="" the="" other="" hand,="" exhibited="" a="" nonsignificant="" change="" (p="">0.05) i ngach grúpa.

3.2.Éifeacht ar Strus Ocsaídeach ae agus Córas Cosanta Frithocsaídeach.

Spreag an t-instealladh laethúil inperitoneal de diclofenac ar feadh 4 seachtaine ardú suntasach (lch<0.05)in liver="" lpo="" and="" a="" significant=""><0.05) in="" liver="" gsh="" con-tent="" and="" gpx="" and="" sod="" activities.="" the="" treatment="" of="" diclofenac-injected="" animals="" with="" naringin="" and/or="" hesperidin="" induced="" a="" significant=""><0.05)in liver="" lpo.="" narin-gin="" and="" its="" combination="" with="" hesperidin="" were="" more="" potent="" than="" hesperidin="" alone="" in="" decreasing="" the="" elevated="" liver="" lpo="" product.="" while="" the="" treatment="" with="" naringin="" and/or="" hesperidin="" produced="" a="" significant="" increase=""><0.05) in="" liver="" gpx="" and="" sod="" activities,="" only="" naringin,="" and="" hesperidin="" in="" combination="" induced="" a="" significant="" increase=""><0.05) in="" liver="" gsh="" content="" (table="">

3.3. Éifeacht ar Slonn mRNA p53 an ae.

Mar a léiríodh i bhFíor 2, tháinig méadú suntasach ar an abairt proapoptotic próitéin p53 mRNA (lch<0.05)in the="" liver="" of="" diclofenac-injected="" rats.="" on="" the="" other="" hand,="" the="" treatment="" with="" naringin,="" hesperidin,="" and="" their="" combination="" produced="" a="" significant=""><0.05)decrease in="" p53="" mrna="" expression="" in="" comparison="" with="" diclofenac-injected="" control.="" there="" is="" no="" significant="" difference="" between="" the="" three="" treatments="" when="" compared="" with="" each="">

3.4.Éifeacht ar Séiream TNF- , IL-17, agus-4Leibhéil.I dTábla 3, chothaigh an t-instealladh laethúil ion-peritoneal de diclofenac ar feadh 4 seachtaine méadú suntasach(lch.<0.05)in serum="" tnf-αand="" il-17="" levels="" and="" a="" significant="" decrease="" in="" serum="" il-4="">

Tháinig feabhas suntasach ar fhrancaigh a raibh instealladh diclofenac acu le naringin agus/nó hesperidin (lch.<0.05)of altered="" serum="" tnf-a,="" il-17,="" and="" i-4="" levels.="" the="" treatment="" with="" the="" combination="" of="" both="" flavonoids="" was="" the="" most="" potent="" in="" increasing="" the="" lowered="" il-4level;="" the="" effect="" of="" the="" combination="" was="" more="" significantly="" potent=""><0.05)as compared="" with="" the="" effect="" of="" either="" naringin="" or="">

3.5. Torthaí Histeapaiteolaíocha an Ae.

Léiríonn Fíor 3 éifeacht naringin agus/nó hesperidin ar athruithe histeolaíocha ae ar fhrancaigh a ndéantar instealladh diclofenac orthu. I bhFíor 3(a) taispeántar an t-ae le gnáthstruchtúr histeolaíoch an lobule hepatic. Ar an láimh eile, léirigh ae na bhfrancaigh le hinstealladh diclofenac athruithe stairiúla díobhálach marcáilte cosúil le díghiniúint hidreacóbach heipiticítí, cealla apoptotic, agus insíothlú tairseach le cealla mononuclear (Fíor 3(b)) chomh maith le folúntas cíteaplasmach heipitocytes agus neacróis hepatic fócasach. a bhaineann le insíothlú fócasach cealla athlastacha (Fíor 3(c)). Leasaíodh na hathruithe seo go pointe áirithe sna francaigh instealladh diclofenac cóireáilte le naringin a léiríonn an t-aon athrú sailleacha heipitocytes treallach (Fíor 3(d)). Tháinig feabhas ar athruithe histeolaíochta ae mar thoradh ar chóireáil francaigh instealladh diclofenac le hesperidin i gcomparáid leis an rialú a instealladh diclofenac ach fós le hathrú sailleacha heipitocytes treallach, gníomhachtú beag cealla Kupffer, agus láithreacht roinnt cealla apoptotic (Fíor). 3(e)). Ar an gcaoi chéanna, d'fheabhsaigh cóireáil francaigh instealladh diclofenac le meascán de naringin agus hesperidin na hathruithe histeolaíochta ae i gcomparáid le rialú instealladh diclofenac. Mar sin féin, léirigh ae na bhfrancach arna n-instealladh diclofenac le meascán den dá flavonoids iomadú beag cille Kupffer agus folúntas cíteaplasmach beag (Fíor 3(f)). Dhealraigh sé go raibh éifeacht chomhcheangailte naringin agus hesperidin an chuid is mó cumhachtach chun feabhas a chur ar ailtireacht histological ae.

Déantar scóir athraithe histeapaiteolaíochta na ngrúpaí go léir a thaifeadadh i dTábla 4. Léirigh an chuid ae den ghnáthrialú scóir nialasach do gach loit histeolaíochta. Thaispeáin na francaigh arna n-instealladh diclofenac ae gráid éagsúla de scóir lot histological ó ghrád III go grád 0. Mar thoradh ar riaradh hesperidin agus naringin do francaigh instealladh diclofenac tháinig feabhsuithe suntasacha ar loit histolaíochta lena n-áirítear díghiniúint hidropic agus vacuolar, insíothlú cealla athlastacha, neacróis, apoptosis, iomadú cille Kupffer, athruithe sailleacha, steatosis, plódaithe.

FcuRE 2: Éifeacht naringin, hesperidin, agus a gcomhcheangal ar léiriú mRNA p53 san ae de fhrancaigh arna riaradh ag diclofenac. Tá modhanna, a roinneann siombailí éagsúla, an-difriúil ag lch<0.05. blood="" vessels="" and="" sinusoids,="" and="" hyperplasia="" of="" the="" epithelial="" lining="" of="" the="" bile="" duct;="" thereby,="" the="" liver="" exhibited="" lower="" grades="" of="" histopathological="" change="" scores="" in="" the="" diclofenac-injected="" groups="" treated="" with="" naringin="" and/or="" hesperidin="" in="" comparison="" with="" diclofenac-injected="" control="" rats.="" the="" combinatory="" effect="" of="" naringin="" and="" hesperidin="" was="" the="" most="" potent="" in="" decreasing="" the="" histopathological="" lesion="">

3.6. Measúnacht imdhíon-hiostacheimiceach.

Léirítear na hailt ae atá dhaite le himdhíonhistochemically i bhFíor 4 agus léirítear torthaí anailíse íomhá i bhFíor 5.

Léirigh na fótamicrographs i bhFíor 4 agus na sonraí i bhFíor 5 gur tháinig méadú suntasach ar slonn caspase-3 i bhfrancaigh a raibh instealladh diclofenac orthu. Mar thoradh ar chóireáil francaigh instealladh diclofenac le naringin, hesperidin agus a gcomhcheangal tháinig laghdú suntasach ar an slonn ardaithe caspase-3 san ae. Ba í an éifeacht chomhcheangailte naringin agus hesperidin an ceann is láidre chun an t-ábhar ardaithe caspase-3 a laghdú. Rinne an chóireáil leis an meascán normalú slonn caspase ae-3.

Baintear an t-alt seo as Leigheas Ocsaídeach agus Fad saoil Cheallach Imleabhar 2021, Airteagal ID 9990091, 14 leathanach https://doi.org/10.1155/2021/9990091