Laghdaíonn MiR-214 Géarghortú Duán de bharr Sepsis Trí Uathphagy rialaithe PTEN/AKT/mTOR
Feb 28, 2022
Teibí. Tá staidéir roimhe seo tar éis a mholadh go mbíonn géarmhíochaine mar thoradh ar strus ocsaídiúcháin agus ar uathphagaíochtgortú duáin (AKI) le linn sepsis agus feidhmíonn microRNA (miR)-214 ról ríthábhachtach i gcosaintduáinfaoi réir strus ocsaídiúcháin. Bhí sé mar aidhm ag an staidéar seo a thástáil an bhfuil baint ag athchosaint miR-214 le huathphagy i sepsis. Imscrúdaíodh ról na n-uathphagy i múnla luiche de ligation agus puncture céil (CLP). Baineadh úsáid as imoibriú slabhra polaiméaráise tras-chainníochtúil droim ar ais (RT-qPCR) chun an slonn miR-214 a anailísiú. Struchtúr agus feidhm naduáina bhaintear as na lucha a mheas.Duánbraitheadh leibhéil uathphagaíochta le himdhíon-histochemical, imdhíonfluaraiseacha agus blotting thiar. Fuarthas amach go bhféadfadh miR-214 AKI a mhaolú i lucha seipteacha trí leibhéal naduánuathphaigí. Ina theannta sin, chuir miR-214 bac ar uathphagy trí léiriú PTEN a chur ina thost saduánfíocháin lucha seipteach. Thug na torthaí seo le fios gur mhaolaigh miR-214 AKI de bharr CLP-spreagtha trí strus ocsaídiúcháin a laghdú agus cosc a chur ar uathphagaíocht trí rialáil a dhéanamh ar chonair PTEN/AKT/mTOR.
Eochairfhocail:microRNA-214, sepsis, gortú duáin ghéarmhíochaine, autophagy, duánach
Réamhrá Géarmhíochainegortú duáin(AKI) ar cheann de na deacrachtaí is coitianta a bhaineann le sepsis agus tarlaíonn sé i 40-50 faoin gcéad d’othair seipteacha, le ráta mortlaíochta chomh hard le 60 faoin gcéad (1). Mar sin féin, tá pataigineas AKI de bharr sepsis fós doiléir. Tuairiscíodh go bhfuil ról lárnach ag autophagy in AKI a chothaítear le sepsis agus mar thoradh ar chosc ar uathphagaíocht go bhforbraítear AKI le linn sepsis (2,3). Tá sé deimhnithe ag staidéir roimhe seo (4,5) go spreagann sepsis autophagy in orgáin iolracha, lena n-áirítear anduán(6) agus tá baint ag próisis autophagic le fáil réidh le mitochondria damáiste agus strus ocsaídiúcháin (7). Mar sin féin, is féidir le autophagy iomarcach bás cille gan iarraidh agus díobhálach (8). Mar sin, is é leibhéal measartha uathphagaíochta an eochair chun AKI a chothaítear le sepsis a laghdú. Thuairiscigh staidéir roimhe seo go maolaíonn miR-214 ischemia-reperfusion-spreagtha AKI trí chosc a chur ar apoptosis (9) agus cuireann miR-214 strus ocsaídiúcháin i nephropathy diaibéitis trí chosán comharthaíochta speiceas ocsaigin imoibríoch (ROS) / AKT / mTOR (10). Fuair an staidéar reatha gur féidir le miR-214 mífheidhmiú miócairdiach de bharr sepsis a mhaolú i lucha trí chosc a chur ar autophagy (11). Mar sin féin, tá sé fós le soiléiriú an féidir le miR-214 AKI de bharr sepsis a fheabhsú. Sa staidéar reatha, rinneadh hipitéisiú go maolaíonn miR-214 AKI de bharr CLP-spreagtha trí strus ocsaídiúcháin a laghdú agus cosc a chur ar uathphagaíocht trí rialáil a dhéanamh ar an gcosán PTEN/AKT/mTOR.
Feabhsaíonn an CISTANCHE GALAR Duán/Duánach
abhair agus modhanna
Ainmhithe.Baineadh úsáid as 100 lucha fireann Kunming (meáchan, 20.40 ± 2.92 g; aois, 6-8 seachtaine) a sholáthair Ionad Ainmhithe Saotharlainne Leighis Ollscoil Hebei Leighis (Shijiazhuang, an tSín) sa staidéar seo. Bhí na lucha go léir i dtaithí ar thimthriall éadrom / dorcha 12-h ag 24˚C le taise 50 faoin gcéad agus tugadh rochtain saor in aisce dóibh ar bhia agus uisce ag Níos mó ná nó cothrom le seachtain 1 roimh na turgnaimh. Rinneadh na nósanna imeachta turgnamhacha go léir i gcomhréir dhlúth le treoirlínte na hInstitiúide Náisiúnta Sláinte (Foilseachán NIH Uimh. 85-23, athbhreithnithe 1996) agus formheas na gCoistí Institiúideacha um Chúram agus Úsáid Ainmhithe de chuid Ospidéal Lárnach Cangzhou (faomhadh uimh. 2017-020-). 01). Rinneadh gach lialanna faoi ainéistéise agus rinneadh gach iarracht an fhulaingt a íoslaghdú.
Ligation agus puncture céil (CLP).Rinneadh CLP ar lucha chun samhail sepsis murine a chruthú, mar a thuairiscítear roimhe seo (12). Tar éis ainéistéiseach a dhéanamh trí ionanálú isoflurane (tharlaithe ag 3 faoin gcéad agus á chothabháil ag 0.5 faoin gcéad ), gearradh incision meánlíne 1 cm. Ceanglaíodh an cecum nochta (achar 1 cm ón deireadh) le dhá tholl ag baint úsáide as snáthaid 23-tomh. D'easbhrúigh an cecum méid beag feces go réidh agus cuireadh ar ais ina shuíomh anatamaíoch é. Bhí balla an bhoilg sutured i sraitheanna le braid síoda 3-0. Tar éis an nós imeachta, rinneadh 1 ml de 0.9 faoin gcéad saline a instealladh go subcutaneously. Cuireadh rochtain saor in aisce ar fáil do na lucha ar uisce amháin. Oibríodh lucha samhail sham ar an mbealach céanna leis an múnla CLP gan CLP.
Dearadh turgnamhach. Sannadh lucha (n{0}} do mháinliacht sham agus CLP) go randamach do sheacht ngrúpa: grúpa Sham, grúpa CLP, adenovirus (Ad) - próitéin fluaraiseachta glas (GFP) móide grúpa CLP, grúpa Ad-miR-214 móide CLP , grúpa frith-miR-214 móide CLP, inhibitor PTEN móide grúpa CLP agus grúpa Ad-miR-214 móide inhibitor PTEN móide CLP. Nochtadh na lucha grúpa Sham don nós imeachta céanna ach gan ligation agus puncture an cecum. Fuair lucha sna grúpaí eile ligation cecal agus perforation. Rinneadh ainéistéisiú tapa ar gach lucha trí ionanálú isoflurane chun fuil, fual agusduánsamplaí 24 h tar éis an chóireáil dheireanach.
Ad-miR-214, frith-miR-214, nó Ad-GFP arna idirghabháil ag Adenovirusaistriú géine in vivo agus instealladh coscaire PTEN. Seachadadh Ad-miR-214, anti-miR-214, nó Ad-GFP (Shanghai GenePharma Co., Ltd.) isteach i gcuas bhoilg na lucha 4 lá roimh CLP. Go hachomair, rinneadh ainéistéiseach ar lucha trí ionanálú isoflurane. Tugadh catheter ina raibh 200 µl de adenovirus (2x1011 pfu, ag léiriú miR-214, frith-miR-214, nó Ad-GFP) do ghnáth-lucha trí instealladh ion-peritoneal. Tugadh an t-instealladh PTEN (VO-OHpic, intraperitoneal, Sigma-Aldrich; Merck KGaA) do lucha CLP a fuair frith-miR-214 trí instealladh intraperitoneal ag dáileog amháin de 10 µg / kg 30 min roimh riaradh adenovirus .
Measúnú ar fheidhm na duáin. Baineadh samplaí fola ó chroí na lucha, agus ina dhiaidh sin rinneadh lártheifneoiriú (ag teocht an tseomra ar feadh 15 nóiméad ag 3,000 xg) chun séiream a bhailiú. Socraíodh na leibhéil serum nítrigine úiré fola (BUN) agus creatiníne serum (Cr) ag baint úsáide as anailísí uathoibríoch Hitachi 7600 (Hitachi, Ltd.). Baineadh úsáid as ELISA chun anailís a dhéanamh ar leibhéilgortú duáinmóilín-1 (KIM-1; cat. uimh. RKM100; T&D Systems, Inc.) agus lipocalin a bhaineann le geilitín nódrófail (NGAL; cat. uimh. DY3508; R&D Systems, Inc.) i samplaí fuail.
Measúnú le haghaidh cytokine athlasadh serum.Scrúdaíodh Serum TNF- (cat. uimh. H052) agus IL-6 (cat. uimh. H007) ag baint úsáide as feisteáin tráchtála ELISA (Institiúid Bithinnealtóireacht Nanjing Jiancheng) de réir threoracha an déantóra.Marcóirí struis ocsaídiúcháin a thomhas. Baineadh úsáid as an trealamh measúnaithe comhfhreagrach (Institiúid Bithinnealtóireacht Nanjing Jiancheng, Nanjing, an tSín) chun leibhéil malondialdehyde (MDA) a thomhas agus tástáil a dhéanamh ar ghníomhaíocht superoxide dismutase (SOD) de réir threoracha an mhonaróra.
Histeolaíocht agus scór gortú feadánacha. Cuireadh gach lucha faoi réirduánperfusion faoi ainéistéise 24 h tar éis CLP. Tá anduánsocraíodh eiseamail i 4 faoin gcéad paraformaildéad ar feadh 72 h ag 4˚C. Ansin díhiodráitíodh na samplaí fíocháin i sraith grádaithe tuaslagáin eatánóil, leabaithe i gcodanna pairifín agus gearrtha isteach 4-µm. Gearradh codanna (4 µm) ag baint úsáide as microtome agus dathaíodh na hailt fíocháin le hematocsailín (5 min) agus eosin (1 min) ag teocht an tseomra le haghaidh scrúdú histolaíochta. Rinneadh na sleamhnáin a mheas agus a ghrádú ag baint úsáide as micreascóp (BX51, Olympus Corporation).Duánachtissues with the following histopathological changes were judged injured: Loss of brush border, vacuolization, cast formation, tubular dilation and disruption, cell lysis and cellular necrosis. Tissue damage was checked in a blinded manner and scored by the percentage of damaged tubules: 0, no damage; 1, 0‑25; 2, 25‑50; 3, 50‑75; 4, >75 faoin gcéad (13).
Micreascópacht leictreon tarchurtha (TEM).Úrduáinnite i seile maolánach fosfáit, agus gearrtha i gciúbanna 1 mm agus socraithe go seicheamhach i glutaraldehyde 2.5 faoin gcéad ar feadh 24 u ag 4˚C. Bhí na hailt tumtha i 1 faoin gcéad osmium tetroxide ar feadh 2 h ag 4˚C, díhiodráitithe in eatánól grádaithe agus leabaithe in epocsaresin. Ar deireadh, rinneadh na hailt ultrathin (60 nm) a dhaite faoi dhó le aicéatáit úráinile agus citrate luaidhe ag 20˚C ar feadh 60 min. Rinneadh an bhreathnóireacht ar mhicreascóp leictreoin tarchurtha (Tecnai; Hitachi, Ltd.) ag 80 kV ag baint úsáide as Leictreon Micreascóip Scannán 4489 (bonn tiubh ESTAR; Kodak).
Immunohistochemistry (IHC).Úrduánsocraíodh fíocháin i 4 faoin gcéad paraformaildéad (ar feadh 72 h ag 4˚C) agus leabaithe i pairifín. Gearradh eiseamail i gcodanna 4 µm-tiubh agus díphairifíníodh iad i xiléin. Tar éis na hailt fíocháin a ní le PBS, fiuchadh iad i maolán citrate 10 mM (pH 6.0) ar feadh 4 nóiméad le haghaidh aisghabháil antaigin agus ansin cuireadh bac orthu le séiream gabhar 10 faoin gcéad i PBS ag teocht an tseomra. ar feadh 1 h. Cuireadh an príomh-antasubstaint (frith-LC3B; 1:400; cat. uimh. 4412; Cell Signaling Technology, Inc.) leis de réir na dtreoracha agus gor é ag 4˚C ar feadh 12 h. Cuireadh an antashubstaint thánaisteach (HRP antaibheathaigh gabhar; 1:2,000; cat. uimh. BS13278; Bioworld Technology, Inc.) leis agus gor é ag teocht an tseomra ar feadh 10 nóiméad. Cuireadh DAB (100 µl) leis agus rinneadh é a dhaiteáil ar feadh 5 nóiméad leis an staining a breathnaíodh faoi mhicreascóp solais (Samhail CX31-P; Olympus Corporation). Socraíodh déine an staining dhearfach, a raibh cuma dhonn air, ag baint úsáide as bogearraí anailíse íomhá Image-Pro Plus 6.0 (Media Cybernetics, Inc.). Ríomhadh an dlús optúil lárnach (IOD) chun an déine a léiriú. Mhéadaigh luachanna IOD de réir mar a mhéadaigh léiriú próitéine.
Trascríobh droim ar ais-cainníochtúil(RT‑q) PCR. Baineadh RNA iomlán asfíochán duáintar éis ionduchtú an mhúnla ag baint úsáide as imoibrí TRIzol (Thermo Fisher Scientific, Inc.). De réir threoracha an trealaimh tras-scríofa droim ar ais TaqMan (cat. uimh. N8080234; Invitrogen; Thermo Fisher Scientific, Inc.), rinneadh RNA a thras-scríobh ar ais go cDNA. Baineadh úsáid as na coinníollacha teirmeachaíocha seo a leanas (miR-214): Dínádúrú tosaigh ag 95˚C ar feadh 5 nóiméad; ina dhiaidh sin 40 timthriall dínádúraithe ag 95˚C ar feadh 30 soicind, anáil ag 60˚C ar feadh 30 sec agus fadú ag 72˚C ar feadh 30 soicind. Rinneadh RT-qPCR ag baint úsáide as Córas Braite Seicheamh ABI Prism 7500 (PerkinElmer, Inc.) agus trealamh caighdeánach SYBR Green PCR (Toyobo Life Science). Baineadh úsáid as U6 mar an rialú inmheánach do miR-214. Seo a leanas na seichimh primer: miR‑214, ar aghaidh, 5'‑AGCATATACAGCAGGCACAGAC‑3' agus cúl, 5'‑AAAGGTTGTTCTCCACTCTCTCAC‑3'; U6, ar aghaidh, 5'‑ATTGGAACGATACAGAGAAGATT‑3' agus cúl, 5'‑GGAACGCTTCACGAATTTG‑3'. Rinneadh na turgnaimh seo a mhacasamhlú sé huaire. Rinneadh anailís ar thorthaí ag baint úsáide as an modh 2-ΔΔCq (14). Rinneadh na leibhéil slonn mRNA de LC3, p62, PTEN, AKT agus mTOR a mheas trí RT-qPCR. Le -actin mar thagairt inmheánach do na géinte seo, baineadh úsáid as an 2-ΔΔCq chun slonn coibhneasta na spriocghéin a thomhas. Sintéisíodh na seichimh primer a thaispeántar i dTábla I ag Sangon Biotech Co., Ltd.
Blotting an Iarthair. DuánMeascadh an fíochán le RIPA lysate (Institiúid Biteicneolaíochta Beyotime) chun an homogenate a dhéanamh agus cuireadh stop le lysis nuair nach bhfuarthas aon fhíochán infheicthe. Rinneadh na samplaí a lártheifneoiriú ag 13,000 xg ar feadh 10 nóiméad ag ‑4˚C agus fuarthas an comhshnámhán ar ais le haghaidh anailíse blotála an iarthair. Go hachomair, socraíodh comhchruinnithe próitéine trí úsáid a bhaint as trealamh measúnaithe próitéin micrea BCA (Thermo Fisher Scientific, Inc.). Rinneadh samplaí próitéine (80 µg in aghaidh an tsampla) a scaradh trí leictreafóiréis dodeicile sulfáit-polyacrylamidegel sóidiam 12 faoin gcéad a laghdú agus ansin aistríodh iad chuig seicní défhluairíde polaiviniledéine ag 4˚C thar oíche. Aistríodh próitéiní scartha chuig seicní PVDF. Tar éis blocáil i mbainne bearrtha 5 faoin gcéad ag teocht an tseomra ar feadh 2 h, goradh na seicní thar oíche (ag 4˚C) le príomhantasubstaintí. Úsáideadh na príomhantasubstaintí seo a leanas (gach Cell Signaling Technology, Inc.): Slabhra solais 3B (1:1,000; cat. uimh. 4412), p62 (1:1,000; cat . uimh. 4412), Frith-PTEN (1:1,000; cat. uimh. 9188), frith-fosfaralaithe (p)-AKT (Ser473) (1:1,000; cat . uimh. 4060), frith-AKT (1:1,000; cat. uimh. 9272), frith-p‑mTOR (Ser 2448) (1:1,000; cat. uimh. . 5536), frith-mTOR (1:1,000; cat. uimh. 2972) agus -actin (1:2,000; cat. uimh. 4970). Tar éis níocháin, goradh na seicní (ag teocht an tseomra ar feadh 2 h) leis na hantasubstaintí tánaisteacha frith-coinín comhchuingeacha HRP (1:3,000; cat. uimh. A0208; Institiúid Biteicneolaíochta Beyotime). Braitheadh bandaí próitéine le Immobilon Western (MilliporeSigma) agus rinneadh anailís orthu trí úsáid a bhaint as bogearraí Total-Lab TL120 (Nonlinear Dynamics, 2.01). Rinneadh an slonn próitéine a normalú go -actin.
Anailís staitistiúil. Rinneadh anailís staitistiúil trí úsáid a bhaint as GraphPad Prism 9.0 (GraphPad Software, Inc.). Cuireadh na sonraí go léir i láthair mar mhodh ± diall caighdeánach nó airmheán (raonta idircheathairíle) d’athróga leanúnacha, ag brath ar a ndáiltí. Rinneadh comparáid idir tréithe agus torthaí bunlíne agus úsáid á baint as ANOVA aontreo agus ina dhiaidh sin triail iarbhoc Tukey, nó tástáil Kruskal-Wallis agus tástáil Dunn ina dhiaidh sin mar ba chuí. p<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistically="" significant="">
Torthaí
Amphointe 24 h tar éis CLP. Thuairiscigh staidéir roimhe seo (6,15,16) go léiríonn anailís bithcheimiceach (ie, LC3 agus p62) go bhfuil flosc uathphagy faoi chois le dul chun cinn sepsis tar éis 6-8 h de CLP. Sa staidéar seo, tá líon na n-autolysosomes saduánmhéadaigh lucha CLP-chóireáilte laistigh de 24 h tar éis máinliachta. Ina theannta sin, an anailís ar marcóirí degortú duáinléirigh sinfeidhm duánachrinneadh an damáiste is tromchúisí 24 h tar éis CLP. Mar sin, roghnaíodh an pointe ama 24 h tar éis CLP do na turgnaimh seo a leanas.
Éifeacht rialála ar miR-214 i bhfíocháin duáin. Baineadh úsáid as anailís RT-qPCR chun slonn miR-214 a bhrath i lucha cóireáilte CLP. Fuarthas amach go raibh slonn miR-214 beagán uasrialaithe saduánfíocháin tar éis máinliacht CLP 24 h, i gcomparáid leis an ngrúpa sham (1.47-huaire, P<0.01, fig.="" 1a).="" the="" present="" study="" examined="" the="" reactive="" increase="" in="" mir‑214="" expression="" during="" sepsis="" as="" a="" compensatory="" protective="" mechanism.="" therefore,="" it="" evaluated="" the="" role="" of="" mir‑214="" in="" aki="" during="" sepsis="" by="" regulating="" its="" expression.="" as="" shown="" in="" fig.="" 1b,="" ad‑mir‑214="" increased="" mir‑214="" expression="" by="" 4.13‑fold="" 4="" days="" after="" intraperitoneally="" injecting="" 2x1011="" pfu/mice="" adenovirus,="" whereas="" anti‑mir‑214="" decreased="" mir‑214="" expression="" by="" 81.16%="" in="" the="">duánfíocháin, i gcomparáid leis an ngrúpa sham (an dá P<0.01). by="" contrast,="" ad‑gfp="" as="" a="" control="" group="" did="" not="" affect="" mir‑214‑3p="" expression,="" compared="" with="" the="" sham="" group="" (both="" p="">0.05).
Feabhsaíonn CISTANCHE TEIP Duán/Duánach
Éifeacht miR-214 ar mhífheidhm duánach i lucha seipteacha.Rinneadh gach lucha a íobairt chun fuil, fual agusduánsamplaí 24 h tar éis obráid CLP. Is táscairí tábhachtacha iad BUN agus Cr ar dhéine naduánachlagú (17). Ina theannta sin, sainaithníodh NGAL agus KIM-1 mar bhithmharcóirí sonracha degortú duáinagus baineann a léiriú méadaithe le luathduánachgortú tubular in AKI (17). Mar a léirítear i bhFíor 2A-D, méadaíodh leibhéil BUN, Cr, KIM-1 agus NGAL go suntasach tar éis máinliacht CLP i gcomparáid leis an ngrúpa sham. Mar sin féin, laghdaigh Ad-miR-214 leibhéil BUN, Cr, KIM-1 agus NGAL go suntasach i gcomparáid leis an ngrúpa CLP (gach P.<0.01), whereas="" anti‑mir‑214="" exhibited="" opposite="" effects="" in="" these="">feidhm duáinparaiméadair. Mar sin féin, tar éis réamhchóireáil le coscaire PTEN, feabhsaíodh éifeachtaí cosanta Ad-miR-214. Léiríonn na torthaí go maolaíonn miR-214 mífheidhm duáin i lucha seipteacha.
Éifeacht miR-214 ar athlasadh duánach agus strus ocsaídiúcháin.Mar a léirítear i bhFíor 3A agus B, d'ardaigh CLP leibhéil TNF- agus IL-6 go suntasach, ach laghdaigh Ad-miR-214 leibhéil na marcóirí seo go suntasach. I gcomparáid leis an
Éifeacht miR-214 ar uathphagaíocht duánach i lucha seipteacha.Scrúdaigh an staidéar reatha na hathruithe ar LC3 iduánfíocháin trí staining IHC. Mar a léirítear i bhFíor 6, tháinig méadú suntasach ar dhéine LC3 staining dhearfach sa ghrúpa CLP i gcomparáid leis an ngrúpa sham (P<0.01) due="" to="" the="" activated="" autophagy.="" the="" expression="" level="" of="" lc3="" was="" lower="" in="" the="" ad‑mir‑214="" group="" and="" higher="" in="" the="" anti‑mir‑214="" group="" in="" comparison="" with="" the="" clp="" group=""><0.01). however,="" the="" administration="" of="" pten="" inhibitor="" enhanced="" the="" inhibition="" of="" autophagy="" effect="" of="">
Gníomhaíonn miR-214 an chonair AKT/mTOR chun cosc a chur airautophagy trí PTEN a chur i bhfíocháin na nduán.Éifeacht CLP ar autophagy iduánrinneadh imscrúdú ar fhíocháin trí leibhéil LC3-II/I agus p62 a mheasúnú. Feidhmíonn an cosán comharthaíochta PTEN/AKT/mTOR ról tábhachtach i autophagy (18). Chun imscrúdú a dhéanamh ar éifeacht miR-214 ar chonair PTEN-AKT/mTOR, rinneadh anailís ar na leibhéil próitéine LC3-II/I, p62, AKT, p-AKT, mTOR, p-mTOR agus PTEN trí bhlotáil an iarthair agus RT- anailís qPCR. Mar a léirítear i bhFíor 7A-C, tarlaíonn modhnú ar na próitéiní seo go tapa, le méadú ar an ráta LC3-II/LC3-I, agus laghdú ar leibhéil p62 (an dá P.<0.01) in="" the="" clp‑induced="" sepsis="" group.="" compared="" with="" the="" clp="" group,="" the="" rate="" of="" lc3‑ii/lc3‑i="" was="" significantly="" decreased,="" while="" the="" level="" of="" p62="" (both=""><0.01) was="" significantly="" increased="" in="" the="" ad‑mir‑214="" group.="" however,="" the="" inhibition="" of="" mir‑214="" displayed="" an="" opposite="" tendency="" to="" the="" above="" indicators="" (both=""><0.01). by="" contrast,="" the="" negative="" control="" had="" no="" effect="" on="" the="" changes="" in="" the="" rate="" of="" lc3‑ii/lc3‑i="" and="" the="" levels="" of="" p62="" in="">duán tissues (both P>0.05). The two indicators of LC3‑II/LC3‑I and p62 had no significant difference among the Ad‑miR‑214 group, the PTEN inhibitor group and the Ad‑miR‑214 + PTEN inhibitor group (all P>0.05). Thaispeáin na torthaí seo go raibh CLP tar éis an t-uathphagy a spreagadh, agus go bhféadfadh an ró-léiriú miR-214 é a chosc go páirteach.
Mar a thaispeántar in Fíor 7A agus D-F, tá leibhéal slonn PTEN (P<0.01) was="" increased,="" and="" the="" expression="" levels="" of="" p‑akt="" (ser473)="" and="" p‑mtor="" (ser2448)=""><0.01) were="" decreased="" by="" clp.="" compared="" with="" the="" clp="" group,="" the="" expression="" level="" of="" pten="" was="" reduced,="" while="" those="" of="" p‑akt="" and="" p‑mtor="" (all=""><0.01) were="" subsequently="" increased="" in="" the="" ad‑mir‑214="" group.="" by="" contrast,="" the="" negative="" control="" had="" no="" effect="" on="" the="" changes="" in="" the="" expression="" levels="" of="" pten,="" p‑akt="" and="" p‑mtor="">duán tissues (all P>0.05). There was no signifi‑ cant difference in the above indicators among the Ad‑miR‑214 group, the PTEN inhibitor group and the Ad‑miR‑214 + PTEN inhibitor group (all P>0.05). Tugann na torthaí seo le fios go spreagann CLPduánuathphagaíocht fíocháin trí chosc a chur ar an gcosán AKT/mTOR. Chuir Ad-miR-214 an conair AKT/mTOR i ngníomh trí PTEN a chur ina thostduánfíocháin. Mar sin féin, i gcomparáid leis an ngrúpa CLP, níor chuir frith-miR-214 bac suntasach ar léiriú mTOR. Mar sin, baineadh úsáid bhreise as RT-qPCR chun léiriú mRNA géinte a bhaineann le cosán comharthaíochta PTEN/AKT/mTOR a chinneadh. De réir thorthaí RT-qPCR (Fíor 8), i gcomparáid leis an ngrúpa Sham, méadaíodh leibhéil slonn mRNA de p62, LC3 agus PTEN go suntasach, agus laghdaíodh léiriú mRNA AKT agus mTOR sa ghrúpa CLP. I gcomparáid leis an ngrúpa CLP, an Ad-miR-214, PTEN
coscairí agus grúpaí coscairí Ad-miR-214 móide léirithe PTEN laghdaigh léiriú mRNA de LC3 agus PTEN, ach mhéadaigh slonn mRNA de p62, AKT agus mTOR (gach P<0.05); in="" the="" anti‑mir‑214="" group,="" an="" opposite="" changing="" tendency="" was="" observed="" (all=""><0.05). there="" was="" no="" significant="" difference="" in="" the="" above="" indicators="" among="" the="" ad‑mir‑214="" group,="" the="" pten="" inhibitor="" group="" and="" the="" ad‑mir‑214="" +="" pten="" inhibitor="" group="" (all="" p="">0.05). Mar sin, d’fhéadfadh éifeacht p62 ar uathphagaíocht tarlú ag an leibhéal tras-trascríobhach seachas ag an leibhéal iar-thscríbhinne. Léirigh na torthaí reatha gur laghdaigh miR-214 slonn PTEN agus gur ghníomhaigh sé conair comharthaíochta AKT/mTOR.
Plé
Fuair an staidéar reatha go raibh an iomarca autophagy díobhálachfeidhm duánachi lucha seipteacha. Léirigh staidéir roimhe seo go bhfuil baint ag miR-214 le iomadú méadaithe, metastasis, ionradh agus feidhmeanna mar oncogene do chealla agus fíocháin (19-22). Tuairiscíonn staidéir go bhfuil ról cosanta ag miR-214 i gcoinne AKI trí apoptosis a mhaolú, strus ocsaídiúcháin agus fachtóirí athlastacha a dhírialú (21,23). Scrúdaigh an staidéar reatha na meicníochtaí is bun le héifeacht chosanta miR-214 ar AKI a chothaítear le sepsis trí dhíriú ar rannpháirtíocht ionchasach miR-214 i modhnú na n-uathphagy. Léirigh na torthaí gur tharla strus ocsaídiúcháin saduántar éis máinliacht CLP a riar. Idir an dá linn, tarlaíonn gníomhachtú autophagy saduán.LC3 II/I ardaithe agus laghdú p62 saduánbreathnaíodh tar éis cóireála le máinliacht CLP. De réir mar a bhíothas ag súil leis, tháinig laghdú suntasach ar ró-eisiúint miR-214duángortuithe paiteolaíocha agusduánmífheidhm de bharr sepsis. Mar sin féin, léirigh an cosc ar miR-214 claonadh contrártha don athchosaint. Ina theannta sin, feabhsaíodh éifeacht chosanta Ad-miR-214 le coscaire PTEN.
I seipteachduán, tá méadú ollmhór ar tháirgeadh ROS ag gabháil le hathlasadh iomarcach agus spreagann líon mór ROS athruithe ar struchtúr mitochondrial agus lagaíonn feidhm mitochondrial, rud a fhágann go dtéann an corp isteach i dtimthriall fí a théann níos measa.duándamáiste (24,25). Mar sin, d’fhéadfadh strus ocsaídiúcháin a bheith ar cheann de na príomh-mheicníochtaí paiteolaíocha de AKI a chothaítear le sepsis. Chuir an staidéar reatha fianaise bhreise ar fáil a léirigh strus iomarcach ocsaídiúcháin, rud a léiríodh le táirgeadh MDA méadaithe agus gníomhaíocht SOD laghdaithe saduánfíocháin tar éis obráid CLP. Ina theannta sin, fuarthas amach go bhféadfadh ró-rá miR-214 cosaint a thabhairt donduánin aghaidh gortú ocsaídiúcháin de bharr CLP, a bhfuil baint aige le cosc uathphagic. Tá sé seo comhsheasmhach leis na staidéir roimhe seo a chosnaíonn miR-214 cealla agus fíocháin éagsúla i gcoinne strus ocsaídiúcháin (26,27).
Feidhmíonn autophagy mar 'chlaíomh dúbailte-imeall' i bhforbairt sepsis: Is féidir le hútarphagy basal éifeachtaí cosanta a imirt trí phróitéiní ocsaídeacha tocsaineacha a bhaint, ach d'fhéadfadh bás ceallacha uathphagacha a bheith mar thoradh ar ró-uathphagic faoi strus mór, mar shampla brúchtadh ROS (28,29) . Tá sé léirithe go gcuirtear autophagy i ngníomh ar dtús i sepsis, agus céim mhífheidhm ina dhiaidh sin mar gheall ar bhás cille uathphagic (30), rud a chuireann le díobháil ocsaídiúcháin de bharr sepsis. Sa staidéar reatha, léirigh coscaire PTEN nó ró-eisiúint miR-214 athchosaint frithocsaídeach i lucha cóireáilte CLP. Mar sin féin, léirigh an cosc ar miR-214 claonadh contrártha i gcoinne athchosaint frithocsaídeach. Mar sin is féidir le autophagy iomarcach nó neamhleor a bheith ina chúisdamáiste duáin; tá an dá cheann maladaptive agus sa deireadh spreagtar bás cille. Mar sin, is é an rud is tábhachtaí ná go gcoimeádtar leibhéil mheasartha autophagy chun gortú ocsaídiúcháin i riocht seipteach a mhaolú.
Feabhsaíonn CISTANCHE Péine Duán/Duánach
Léirigh fianaise carntha go gcuireann miR-214 bac ar uathphagy i gcealla agus fíocháin éagsúla (31-33). Sa staidéar seo, fuarthas amach go gcuireann ró-léiriú miR-214 bac ar uathphagy de bharr CLP ifíocháin duáin,mar atá léirithe ag na hathruithe ar mharcóirí próitéine, amhail LC3-II/I agus p62. Ina theannta sin, léirigh na torthaí gur mhaolaigh ró-léiriú miR-214 gortú ocsaídiúcháin de bharr CLP-spreagtha trí ró-uathphagy a chosc. Rinne an staidéar seo imscrúdú freisin ar na meicníochtaí móilíneacha trína modhnaítear miR-214duánuathphagaíocht in AKI de bharr sepsis. Is cosán comharthaíochta tábhachtach é PTEN/AKT/mTOR a rialaíonnduánautophagy (34,35) agus a fhreastalaíonn ar eochair-ról i sepsis-spreagtha AKI, agus PTEN is inhibitor diúltach ar an cosán comharthaíochta PI3K/AKT/mTOR. Thuairiscigh staidéir roimhe seo gur féidir le miR-214 autophagy a rialáil tríd an gcosán comharthaíochta PI3K/AKT/mTOR i múnlaí éagsúla (36-38). Fuair Ma et al (39) amach gur féidir le miR-214 útphagy i nduáin dhiaibéiteacha a íosrialáil. Dá bhrí sin, rinneadh hipitéisiú go bhféadfadh baint a bheith ag éifeachtaí miR-214 ar AKI arna spreagadh le CLP le rialáil an chonair PTEN/AKT/mTOR. Go háirithe, léirigh torthaí an staidéir reatha gur ardaigh máinliacht CLP leibhéil PTEN go suntasach ach gur laghdaigh sé na leibhéil p-AKT agus p-mTOR, rud a léiríonn gur dhíghníomhaigh máinliacht CLP an cosán AKT/mTOR. Ina theannta sin, chuir ró-léiriú miR-214 an conair AKT/mTOR i ngníomh trí PTEN a chur ina thost in uathphagaíocht CLP-spreagtha iduánfíocháin. Mar sin féin, níor chuir frith-miR-214 bac suntasach ar léiriú mTOR in anailísí blot an iarthair. Mar sin, baineadh úsáid bhreise as RT-qPCR chun léiriú mRNA géinte a bhaineann le cosán comharthaíochta PTEN/AKT/mTOR a chinneadh. Aithníodh sa staidéar reatha gur laghdaigh miR-214 léiriú PTEN agus gur ghníomhaigh sé an cosán comharthaíochta AKT/mTOR chun cosc a chur ar uathphagaíocht. Ba cheart, áfach, staidéir uileghabhálacha breise a dhéanamh chun sonraí breise a fháil a bhaineann le meicníocht anduánautophagy i riocht seipteach.
Mar fhocal scoir, mhol torthaí an staidéir seo go raibh ról cosanta ag miR-214 i gcoinne seipsis-spreagtha.gortú duáintrí strus ocsaídiúcháin a laghdú agus trí uathphagaíocht a chosc trí chonair PTEN/AKT/mTOR a rialáil. Moladh sna torthaí atá ann faoi láthair go bhféadfadh miR-214 a bheith ina sprioc theiripeach ionchasach do AKI a tharlódh le sepsis. Mar sin féin, d'úsáid an staidéar reatha lucha 6-8 seachtaine d'aois, agus mar sin tá gá le tuilleadh taighde ar mheicníocht miR-214 i lucha aosach.
