Maolaíonn Metformin Lagú Néar-chognaíoch le linn Aosaithe Trí Ghníomhachtú OfAMPK/ BDNF/PI3K Conair CUID 1

Ba dhúshlán é lagú néar-chognaíoch a bhaineann le haois a mhoilliú. Rinneamar measúnú ar éifeachtaí teiripeacha metformin ar aosú d-galactós-spreagtha. Ina theannta sin, rinneamar staidéar ar na meicníochtaí móilíneacha féideartha a d'fhéadfadh a bheith freagrach as éifeachtaí frith-aosaithe metformin. Roinneadh tríocha francach fireann go cothrom i ngrúpa rialaithe 1, a fuair réiteach saline, grúpa 2-d-galactose (D-gal), a fuair d-galactós (100 mg / kg / lá) trí lavage gastrach ar feadh ocht seachtaine, agus grúpa cóireáilte 3-d-galactós móide Metformin (D-gal móide Met), a fuair d-galactós móide metformin (200 mg/kg/lá) trí lavage gastrach ar feadh ocht seachtaine. Rinneadh measúnú neurocognitive. Rinneadh tomhas ar strus athlastach, ocsaídiúcháin, agus bithmharcóirí BDNF. Rinneadh measúnú ar léiriú géine AMPK agus PI3K. Rinneadh fíocháin hippocampal a dháileadh le haghaidh staidéir histeapaiteolaíocha agus imdhíon-histochemical. Mar thoradh ar D-gal bhí laigí néar-cognitive, ardú bithmharcóirí athlastacha, athraigh marcóirí struis ocsaídiúcháin, laghdaigh BDNF, agus laghdaigh léiriú synaptophysin agus Bcl2 le léiriú méadaithe Caspase-3, agus síos-rialáil géinte AMPK agus PI3K. Bhí athruithe neurodegenerative i láthair sa hippocampus. D'athchóirigh Metformin athruithe néar-mheathlúcháin de bharr D-gal-spreagtha go suntasach. Thángamar ar an gconclúid go bhféadfadh metformin easnamh néar-chognaíoch aois-spreagtha a mhaolú trí néar-athlasadh a mhaolú, strus ocsaídiúcháin a mhaolú, laghdú ar apoptóis, chomh maith le plaisteacht shionaptach a chur chun cinn. D’fhéadfaí na meicníochtaí seo a idirghabháil trí ghníomhachtú an chosáin AMPK/BDNF/PI3K.

Is féidir le glycosíde cistanche méadú freisin ar ghníomhaíocht SOD i bhfíocháin chroí agus ae, agus laghdaítear go suntasach an t-ábhar lipofuscin agus MDA i ngach fíocháin, ag scavening go héifeachtach fréamhacha ocsaigine imoibríocha éagsúla (OH-, H₂O₂, etc.) agus a chosaint i gcoinne damáiste DNA a dhéantar. ag OH-radacach. Tá cumas láidir scavenging fréamhacha saor in aisce ag gliocóisídí cistanche feinileatánóideach, cumas laghdaithe níos airde ná vitimín C, feabhas a chur ar ghníomhaíocht SOD i bhfionraí sperm, laghdú ar ábhar MDA, agus tá éifeacht chosanta áirithe acu ar fheidhm membrane sperm. Is féidir le polaisiúicrídí cistanche feabhas a chur ar ghníomhaíocht SOD agus GSH-Px in erythrocytes agus fíocháin scamhóg lucha senescent turgnamhacha de bharr D-galactós, chomh maith le hábhar MDA agus collagen sa scamhóg agus plasma a laghdú, agus ábhar elastin a mhéadú. éifeacht scavenging maith ar DPPH, fadú am hypoxia i lucha senescent, feabhas a chur ar ghníomhaíocht SOD i serum, agus moill a chur ar dhíghiniúint fiseolaíoch scamhóg i lucha senescent turgnamhach Le díghiniúint moirfeolaíoch cheallacha, léirigh turgnaimh go bhfuil an cumas frithocsaídeach maith ag Cistanche. agus tá an cumas aige a bheith ina dhruga chun galair aosaithe craicinn a chosc agus a chóireáil. Ag an am céanna, tá cumas suntasach ag echinacoside i Cistanche fréamhacha saor in aisce DPPH a scaveneáil agus féadann sé speicis ocsaigine imoibríocha a scavening, cosc ​​a chur ar dhíghrádú collagen saor ó radacach, agus tá éifeacht mhaith deisiúcháin aige freisin ar damáiste anion radacach saor ó thymine.

Cliceáil ar Cistanche in Urdais faoi FRITH-AINGING

【Le haghaidh tuilleadh eolais: david.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

Giorrúcháin

D-gal d-galachtós

ROS Speiceas ocsaigine imoibríoch

IL-1 Interleukin-1

IL-1 Interleukin-1

IL-6 Interleukin-6

IL-10 Interleukin-10

TNF- Fachtóir neacróis meall

BDNF Fachtóir néartrófach inchinn-díorthaithe

kinase próitéin AMP-gníomhachtaithe AMPK

PI3K/Akt Fosphatidylinositol 3-kinase/próitéin kinase B

Imoibriú slabhra polaiméaráise droim ar ais transcriptase RT-PCR

EPM Ardaithe móide gcathair ghríobháin

TL Aistriú latency

MDA Malondialdehyde

SOD Superoxide dismutase

MPTP pore idirthréimhseach tréscaoilteacht mitochondrial

H&E Haematoxylin agus eosin

iNOS Sintase ocsaíd nítreach induchtaithe

NF-κB Fachtóir núicléach-κB

LTP Potentiation fadtéarmach

Is próiseas ilghnéitheach é an caillteanas seasta ar fheidhm fiseolaíoch, aclaíocht mheabhrach, agus cuimhne a tharlaíonn le dul in aois a d’fhéadfadh bás cille néarónach a spreagadh1. Meastar go sáróidh an t-ionchas saoil i go leor tíortha 85 bliain faoi 20302. Mar gheall ar cháilíocht na beatha do dhaoine scothaosta agus an caiteachas eacnamaíoch agus pearsanta a bhaineann leis, tá laigí cognaíocha bainteach le dul in aois tagtha chun cinn mar shaincheist shóisialta shuntasach. Ina theannta sin, is é aosú inchinn an phríomhchúis le forbairt na ngalar néar-mheathlúcháin a théann chun cinn go dochúlaithe go minic3. Is beag cóireálacha éifeachtacha nó níl aon chóireáil éifeachtach ar bith ar fáil faoi láthair do lagú néar-chognaíoch a bhaineann le dul in aois4.

d-galactós (D-gal), monaisiúicríd atá flúirseach i dtáirgí bainne, a thiontaíonn einsímí go glúcós de ghnáth. Mar sin féin, is féidir le riaradh sistéamach fadtéarmach D-gal guaiseacha sláinte suntasacha a chruthú5. Thug taighde a rinneadh roimhe seo le fios go bhféadfadh seachadadh leanúnach sistéamach D-gal chuig francaigh iad a athrú ina múnlaí aosaithe agus neamhoird néar-mheathlúcháin a bhaineann le haois6. Tá roinnt buntáistí ag múnla aosaithe D-gal thar an tsamhail aosaithe nádúrtha, lena n-áirítear an cumas díriú ar an bpróiseas aosaithe amháin. Sa tsamhail aosaithe nádúrtha, is athróga casta iad comhghalarachtaí lena n-áirítear diaibéiteas agus Hipirtheannas7.

Ceaptar go ngineann D-gal aimhrialtachtaí bithcheimiceacha cosúil leo siúd a fheictear san inchinn dhaonna atá ag dul in aois, mar ghníomhaíocht laghdaithe na n-einsímí frithocsaídeacha agus maolú na néaróin cholinergic. Déantar táirgí deiridh glycation chun cinn, atá nasctha le gnáth-aosú agus le paiteolaíocht go leor galair, trí idirghníomhú D-gal le aimínghrúpaí próitéine. Ainmhithe a sholáthair D-gal ba chúis le néar-athlasadh, damáiste miteachondrial, agus damáiste ocsaídiúcháin ó fhorbairt Speicis Ocsaigin Imoibríocha (ROS) mar aon le fadhbanna maidir le gnáthú núíosach, easnaimh san fhoghlaim spásúlachta, agus feidhmeanna cognaíocha8.

D’fhéadfadh athlasadh a bheith ina phríomhfhachtóir i meath cognaíocha i measc daoine scothaosta. Tá leibhéil arda idirleukin-6, IL-1, fachtóir neacróis siadaí, agus próitéin C-imoibríoch nasctha le riosca méadaithe galrachta agus mortlaíochta i daoine scothaosta9. Cóireáil d-galactóis ainsealach i bhfrancaigh, de bharr bealaí comharthaíochta apoptotic néarónacha gníomhachtaithe agus néar-athlasadh sa choirtéis cheirbreach agus sa hippocampus1.

Is é an toradh a bhíonn ar aosú ná laghdú ar fhachtóir néartrófach atá díorthaithe ó Inchinne (BDNF), ar próitéin ríthábhachtach é atá ag gabháil d’athruithe plaisteacha a bhaineann le foghlaim agus le cuimhne chomh maith le bheith ina idirghabhálaí ríthábhachtach d’iomadú agus sláine néarónach10.

Tá fionnachtain comhdhúile núíosacha a chuireann moill ar aosú agus a thacaíonn le feidhmíocht chognaíoch ar cheann de na dúshláin is mó anois. Téann Metformin isteach go tapa ar an mbacainn fola-inchinn agus méadaíonn sé i réimsí éagsúla den inchinn, lena n-áirítear an fhaireog pituitary agus hippocampus11. Tá sé léirithe go laghdaíonn riarachán fadtéarmach metformin tosú na n-aimhréití paiteolaíocha a bhaineann le haois agus go méadaíonn sé fad saoil i ndaoine12. Ina theannta sin, tá sé léirithe go bhfeabhsaítear metformin le lagú cognaíocha agus neamhoird iompraíochta cosúil le imní i ndaoine aonair diaibéitis agus neamh-diaibéitis13,14 agus othair a bhfuil galair néar-mheathlúcháin orthu15. Mar sin féin, tá meicníochtaí bunúsacha éifeachtaí metformin chun lagú néar-ognaíoch a bhaineann le haois a fheabhsú casta agus fós ní thuigtear go hiomlán iad.

D’fhéadfadh éifeachtaí neuroprotective metformin a bheith mar gheall ar ghníomhachtú chonair chomharthaíochta Próitéin Kinase AMP-Gníomhaithe (AMPK)11. Déanann gníomhachtú AMPK suas-rialú léiriú BDNF, a bhfuil ról ríthábhachtach aige i dtarchur synaptic agus comhdhlúthú cuimhne10. Chomh maith leis an maoin seanbhunaithe seo de ghníomhachtú AMPK, léirigh torthaí roimhe seo gur féidir le metformin cuimhne a fheabhsú trí strus ocsaídiúcháin a athbhunú, laghdú ar néar-athlasadh, agus cosc ​​ar apoptosis, rud a d'fhéadfadh a thásca cliniciúla a leathnú i réimse na neamhoird néar-mheathlúcháin14. Is gníomhaí láidir é Metformin ar an gcosán fosfatidylinositol 3-kinase/protein kinase B (PI3K/Akt) ar cosán tábhachtach comharthaíochta é chun apoptosis a chosc agus chun maireachtáil cille a chur chun cinn16.

Agus buntáistí metformin á gcur san áireamh, lena n-áirítear a shábháilteacht, a inacmhainneacht agus a inúsáidteacht; rinneamar staidéar ar na héifeachtaí neuroprotective a bhaineann le riarachán metformin i gcoinne lagú néar-ognaíoch de bharr aosú d-galactose-spreagtha i bhfrancaigh. Ina theannta sin, rinneadh imscrúdú ar mheicníochtaí móilíneacha bunúsacha na n-éifeachtaí cosanta seo.

abhair agus modhanna

Ainmhithe.Baineadh úsáid as francaigh fireann Tirty Wister albino ar mheá 200-250 gram sa turgnamh tar éis na ceaduithe riachtanacha a fháil ón gCoiste Eitice Taighde i nDámh an Leighis, Ollscoil Menoufa, an Éigipt (clárúchán Uimh. 10/2022 PHYS 9). Lean nósanna imeachta turgnamhacha treoirlínte ARRIVE. Bhí na francaigh lonnaithe i cages mogalra sreinge (80×40×30 cm). Soláthraíodh rochtain iomlán do gach ainmhí ar bhia agus ar uisce le linn na tréimhse staidéir tar éis iad a riochtú ar feadh 2 sheachtain ag coinníollacha timpeallachta seasta agus timthriall 12:12-h éadrom/dorcha.

Dearadh turgnamhach.Roinneadh na hainmhithe go randamach i dtrí ghrúpa (10/grúpa):

1. Grúpa rialaithe: Faightear tuaslagán salanda trí thomhas béil.

2. Grúpa d-galactós (D-gal): Faighte d-galactós (Sigma-Aldrich St. Louis, SAM) tuaslagtha i dtuaslagán salanda i dáileog de 100 mg/kg de mheáchan coirp trí lavage gastrach ar feadh ocht seachtaine as a chéile17

3. Grúpa cóireáilte d-galactose móide Metformin (D-gal móide Met): Faighte d-galactose (de réir an dáileog chéanna sa ghrúpa D-gal) móide metformin (Sigma-Aldrich St. Louis, SAM) tuaslagtha i dtuaslagán salanda i dáileog de 200 mg/kg/ lá trí lavage gastrach ar feadh ocht seachtaine as a chéile16

Tar éis ocht seachtaine a bheith críochnaithe, rinneadh measúnú néar-iompraíochta ar gach francach. Ina dhiaidh sin, rinneadh ainéistéisiú ar francaigh agus rinneadh iad a íobairt trí fhadú agus díláithriú ceirbheacsach. Baineadh an inchinn agus nite le saline maolán fosfáit (pH 7.4). Rinneadh an leathsféar clé a mheá agus a roinnt ina dhá leath; úsáideadh ceann acu le haghaidh anailíse bithcheimiceach agus úsáideadh an leath eile le haghaidh staidéir RT-PCR. Socraíodh an leathsféar ceart i saline formalin 10 faoin gcéad le haghaidh measúnú histeapaiteolaíoch agus imdhíon-histochemical ar na fíocháin hippocampal.

Tástálacha néar-iompraíochta.Aitheantas réad núíosach. Baineadh úsáid as an tástáil aitheantais réad nua chun cumas na bhfrancach chun réad nua a aithint i suíomh aithnidiúil a mheas. Bhí trí lá tástála ag gach francach, lena n-áirítear trí chéim: nós, oiliúint agus tástáil. Cuireadh francaigh isteach i bhfearas páirce oscailte (50 cm × 50 cm × 40 cm) le linn na céime gnáthaimh, agus tugadh deich nóiméad dóibh le haghaidh oiriúnú gan aon mhíreanna. Coinníodh gach francach i seomra le dhá rud chomhionanna ar feadh cúig nóiméad le linn na céime traenála. Tar éis ceithre huaire is fiche, cuireadh gach francach sa seomra ar feadh cúig nóiméad le linn na céime tástála, rud a bhain le ceann nua a chur in ionad ceann de na seanréadaí. Baineadh úsáid as an stopuaireadóir chun fad na taiscéalaíochta réad a amú. Úsáidtear an t-innéacs idirdhealaithe [=(am taiscéalaíochta réad núíosaigh–am taiscéalaíochta réad teaghlaigh)/am iomlán taiscéalaíochta × 100 faoin gcéad ] chun feidhmíocht chognaíoch na bhfrancach a mheas. Baineadh úsáid as alcól chun an pháirc oscailte agus na rudaí idir francaigh a ghlanadh18.

An gcathair ghríobháin uisce Morris. Baineadh úsáid as an gcathair ghríobháin uisce Morris chun scrúdú a dhéanamh ar an tionchar atá ag metformin ar fhoghlaim spásúlachta agus cuimhne. Bhí linn snámha déanta as cruach dhosmálta, bhí trastomhas de 210 cm agus airde 50 cm lena n-áirítear ardán éalaithe báite 1 cm faoi dhromchla an uisce. Coinníodh an t-uisce ag 24±1 céim. Rinneadh an tasc fála a thástáil thar chúig lá tástála le ceithre thriail in aghaidh an lae. Taifeadadh an t-am a theastaíonn chun an t-ardán rúnda a bhaint amach le linn gach trialach mar fhola éalaithe. Tugadh uasmhéid de 60 soicind do na francaigh chun an t-ardán faoi cheilt a aimsiú. Sannadh uasteorainn ama de 60 s, agus treoraíodh an francach de láimh chuig an ardán i bhfolach. Rinneadh triail iniúchta amháin 24 h tar éis na trialach deiridh ar an gcúigiú lá. Baineadh an t-ardán agus cuireadh an francach isteach sa linn ón gceathrú trasna go dtí an ceathrún traenála. Ansin, ligeadh don francach snámh faoi shaoirse ar feadh 60 s. Taifeadadh an t-am a caitheadh ​​sa cheathrú sprice19.

An tástáil ardaithe lúbra móide (EPM). Teicníc seanbhunaithe is ea EPM chun iompar imníoch i bhfrancaigh a mheas. Bhí sé déanta as adhmad agus comhdhéanta de lámha oscailte agus dúnta (50 cm ar fad × 10 cm ar leithead). Bhí an dá arm dúnta faoi iamh ag ballaí 40 cm ar airde. Bhí ardán lárnach cearnach (10 × 10 cm) ceangailte leis na hairm. Bhí an gaireas 50 cm os cionn an urláir. Cuireadh gach francach i lár an ghaireas os comhair lámh dúnta agus ligeadh dó bogadh go saor ar feadh cúig nóiméad. Taifeadadh an t-am a chaitear sna hairm oscailte agus dúnta. Chomh maith leis sin, taifeadadh iontrálacha lámh oscailte i 20. Tomhaisimid freisin an Latency Aistrithe (TL) a úsáidtear chun cuimhne agus foghlaim a mheas. Ar an gcéad lá (an seisiún fála), nochtadh gach francach do EPM ar feadh 90 s. Taifeadadh an t-am a thóg an francach an lámh dúnta a bhaint amach mar an TL. Eisiatar ón staidéar francaigh nár éirigh leo dul isteach in airm iata i 90í. Ar an dara lá (an seisiún coinneála), cuireadh gach francach isteach sa lámh oscailte, agus taifeadadh an TL ar feadh uasmhéid 90 s21.

Anailís bithcheimiceach.Próifíleadh fíochán inchinn le tuaslagán PBS, ansin homogenized i maolán fuar 5 ml in aghaidh gach graim fíocháin. Rinneadh an fíochán inchinn a lártheifneoiriú ag 4000 rpm ar feadh 15 nóiméad, ansin baineadh an súthach agus é a stóráil ag − céim 80 go dtí go tomhaiseadh Malondialdehyde (MDA) agus Superoxide Dismutase (SOD) trí úsáid a bhaint as an dathmhéadrach traidisiúnta (QuantiChrom™, BioAssay Systems,). USA), serum Tumor Necrosis Factor (TNF- ), Interleukin 10 (IL-10), agus Brain-Drived Neurotropic Factor (BDNF) trí úsáid a bhaint as trealamh ELISA (Quantikine, Abcam company, Cambridge, UK) de réir an mhonaróra. treoracha.

Measúnacht chainníochtúil ar léiriú géinte AMPK agus PI3K ag baint úsáide as teicníc imoibriú slabhra polaiméaráise droim ar ais transcriptase (RT-PCR).Ullmhaíodh fíocháin inchinn le haghaidh aonrú RNA iomlán ag baint úsáide as Qiagen RN Easy Plus Universal Kit ó SAM. Ansin, dearbhaíodh cáilíocht agus íonacht RNA. Stóráladh RNA ag − 80 céim go dtí úsáid. Ansin, ba é an chéad chéim ná sintéis cDNA ag baint úsáide as QuantiTect Reverse Transcription Kit, Qiagen ó SAM, ag baint úsáide as timthriallach teirmeach 2720 Biosystems Feidhmeach (Singeapór) ar feadh timthriall amháin. Baineadh úsáid as primers GAPDH in imoibrithe RT-PCR mar rialú luchtaithe RNA. Ba é an dara céim aimpliú cDNA: úsáideadh cDNA i PCR cainníochtúil fíor-ama glas-bhunaithe SYBR le haghaidh Cainníochtú Coibhneasta (RQ) de léiriú géinte AMPK agus PI3K ag SensiFASTTMSYBR Lo-ROX Kit, SAM, ag baint úsáide as na primers deartha seo a leanas (Lár na Tíre, Texas ): Te ar aghaidh primer do AMPK bhí (TGCGTGTACGAAGGAAGAATCC). Agus bhí an primer droim ar ais (TGTGACTTCCAGGTCGGGGTT). Ba é an primer ar aghaidh do PI3K (AGCTGGTCTTCGTTTCCTGA), agus ba é an primer droim ar ais (GAAACTTTTTCCCACCACGA). Ar deireadh, rinneadh anailís ar shonraí leis na bogearraí 7500 Applied Biosystems 2.0.1. Rinneadh an RQ de léiriú géine AMPK agus PI3K ag baint úsáide as modh comparáideach ∆∆ Ct, áit a bhfuil méid na spriocghéinte (AMPK agus PI3K) mRNA normalaithe go géine tagartha ingenous (GAPDH) agus i gcoibhneas le rialú.

Measúnú histeapaiteolaíoch ar fhíochán inchinne.Scrúdú histolaíochta. Socraíodh fíochán inchinn i dtuaslagán formalin 10 faoin gcéad, leabaithe i pairifín, agus fuarthas rannóga corónach sraitheach de thiús 5 μm. Rinneadh codanna de hippocampus na hinchinne a dhathú ansin le Hematoxylin agus Eosin (H&E) lena scrúdú le micreascóp solais.

Staining imdhíon-hiostacheimiceach an hippocampus. Rinneadh staining imdhíon-cheimiceach caspase-3 (uimhir CAT: ab32351, cuideachta Abcam 152 Grove Street Waltham, M02453, SAM) agus synaptophysin (uimhir CAT: ab32127, cuideachta Abcam 152 Grove Street Waltham, M02453, SAM) trí úsáid a bhaint as coinín antasubstaintí monaclónacha. Maidir le Bcl-2 (uimhir CAT: ab59348, cuideachta Abcam 152 Grove Street Waltham, M02453, SAM), tharla sé trí úsáid a bhaint as antasubstaintí polachlónacha coinín. Fuarthas iad i vial amháin ina raibh 1 ml d'antasubstaint. Baineadh úsáid as frith-chaspase-3, frithshinaptophysin, agus frith-Bcl{-2 i gcainníochtaí caolaithe 1:50, 1:400, agus 1:100 faoi seach. Gearradh codanna ag 5 µm agus dhaite iad ag imdhíontóir uathoibrithe LINK 48 (Dako, Agilent Technologies Inc, Santa Clara, SAM). Chun teas a aisghabháil, d'úsáid imdhíontóir maolán citrate. Rinne antashubstaintí caolaithe príomhúla na sleamhnáin a dhathú go huathoibríoch. Rinneadh rialú dearfach ar an imoibriú trí úsáid a bhaint as rannóga ar leith leabaithe pairifín de na gnáth-tonsilí daonna, briseán daonna, agus adenoma follicular le haghaidh caspase-3, synaptophysin, agus Bcl-2, faoi seach. Rinneadh rialuithe diúltacha trí shéiream neamh-imdhíonachta a chur in ionad na n-antasubstaintí príomhúla.

Rinneadh measúnú ar mharcóirí histeapaiteolaíochta agus imdhíon-histochemical (caspase-3, synaptophysin, agus Bcl-2) i réimsí éagsúla den hippocampus lena n-áirítear CA1, CA2, agus CA3.

Anailís staitistiúil.Cuirtear torthaí in iúl mar mheán ±Diall Caighdeánach (SD). Baineadh úsáid as Anailís ar Athraitheas (ANOVA) chun anailís staitistiúil a dhéanamh ar na grúpaí éagsúla, ag baint úsáide as bogearraí Origin® agus an dóchúlacht seans (luachanna p). luachanna P<0.05 were considered significant.

Faomhadh eitice agus toiliú le bheith rannpháirteach.D'fhormheas agus le treoirlínte Choiste Eitice Dhámh an Leighis, Ollscoil Menoufa, an Éigipt an obair seo.

Torthaí

Tástálacha néar-iompraíochta.Maidir leis an tástáil réad núíosach, bhí céatadán an innéacs idirdhealaithe i bhfad níos ísle sa ghrúpa D-gal i gcomparáid leis an ngrúpa rialaithe (-37.16±3.31 faoin gcéad vs. 30.16±2.92 faoin gcéad, faoi seach, P).<0.05). The percentage of discrimination index was significantly higher in the D-gal+Met group  (16.66±4.67%, P<0.05) when compared with the D-gal group. However, this percentage is still significantly lower when compared with the control group (Fig. 1).

Maidir le tástáil an gcathair ghríobháin Morris, bhí meánluach ré an fholaigh éalaithe i bhfad níos airde sa chéad, sa dara, sa tríú, sa cheathrú lá agus sa chúigiú lá sa ghrúpa D-gal i gcomparáid leis an ngrúpa rialaithe (58.16 ±1.94, 4{ {19}}.62±1.33, 32.75±1.10, 24.37±1.58, agus 15.29±0.98 s vs. ±0. 86 s, faoi seach, P<0.05). The means value of the duration of escape latency was significantly lower in the D-gal+Met group in the five training days (50±1.41, 34.08±1.15, 25.16±1.31, 16.04±1.75,   and 10.25±1.01 s, respectively, P<0.05) when compared with the D-gal group. However, the mean values of the durations of escape latency in the five training days in the D-gal+Met group were still significantly higher when compared with the control group. The means value of the duration that the rats spent in the target quadrant were significantly lower in the D-gal group when compared with the control group (12.50±1.87 vs. 23.50±1.87 s,   respectively, P < 0.05). However, the mean value of the duration that the rat spent in the target quadrant was significantly higher in the D-gal+Met group (19.66 ± 2.16 s, P < 0.05) when compared with the D-gal group.  However, its level is still significantly lower when compared with the control group (Fig. 2).

Sa tástáil ardaithe móide lúbra, bhí meánluach na ré a chaith na francaigh sna hairm oscailte i bhfad níos ísle sa ghrúpa D-gal i gcomparáid leis an ngrúpa rialaithe (60±6.54 s vs. 90.83±3.48 s, faoi seach). , p<0.05). On the other hand, the mean value of the duration that the rats spent in the open arms was significantly higher in the D-gal+Met group (73.83±5.41 s, P < 0.05) when compared with the D-gal group. However, its level was still significantly lower when compared with the control group. On the contrary, the mean value of the duration that the rats spent in the closed arms was significantly higher in the D-gal group when compared with the control group (107.33±3.07 s vs. 57.66±5.12 s respectively, P<0.05). The means value of the duration that the rats spent in the closed arms were significantly lower in the D-gal+Met group (74.66±2.58 s, P<0.05)   when compared with the D-gal group. However, its level was still significantly higher when compared with the control group. The mean value of the number of open-arm entries was significantly lower in the D-gal group when compared with the control group (12.50±1.87 vs. 32.33±3.07, respectively, P<0.05). On the contrary, the mean value of the number of open-arm entries was significantly higher in the D-gal+Met group (21.66±2.16,  P<0.05) when compared with the D-gal group. However, its level is still significantly lower when compared with the control group. The mean value of the duration of the transfer latency was significantly higher in the D-gal group when compared with the control group (48.33 ±6.88 s vs. 25 ±1.87 s, respectively, P < 0.05). While the mean value of the duration of the transfer latency was significantly lower in the D-gal+Met group (34.66±3.77 s,  P<0.05) when compared with the D-gal group. However, its level was still significantly higher when compared with the control group (Fig. 3).

Tástálacha bithcheimiceacha.Bhí meánluach leibhéal MDA inchinn i bhfad níos airde, agus bhí meánluach leibhéal SOD na hinchinne i bhfad níos ísle sa ghrúpa D-gal i gcomparáid leis an ngrúpa rialaithe (70 ± 3.23 nmol/mg protein agus 13.05±1.{{7 }} próitéin U/mg vs 33.76 ± 2.13 nmol/mg próitéin agus 29.11±4.34 U/ mg próitéin faoi seach, P<0.05). The mean value of brain MDA level was significantly lower, while the mean value of brain SOD level was significantly higher in the D-gal+Met group (50.02±4.26 nmol/mg protein and  21.90±2.33 U/mg protein, respectively, P<0.05) when compared with the D-gal group. However, the mean value of MDA is still significantly higher, and the mean value of SOD is significantly lower when compared with the control group (Fig. 4a,b).

Bhí meánluach leibhéal TNF na hinchinne i bhfad níos airde, agus bhí meánluach leibhéal na hinchinne IL-10 i bhfad níos ísle sa ghrúpa D-gal i gcomparáid leis an ngrúpa rialaithe (67.50 ± 10.03 pg/mg próitéin agus 72.91 próitéin ±8.45 pg/mg vs. 16.61 ±1.21 pg/mg próitéin agus 157.23 ±12.46 pg/mg próitéin, faoi seach, P<0.05). The mean value of brain TNF-α level was significantly lower, while the mean value of brain IL-10 level was significantly higher in the D-gal+Met group (49.83±1.89 pg/mg protein and 131.67±4.54 pg/mg protein,   respectively, P<0.05) when compared with the D-gal group. But, the mean value of TNF-α was still significantly higher, and the mean value of IL-10 was significantly lower when compared with the control group (Fig. 4c,d).

Bhí meánluach leibhéal BDNF inchinn i bhfad níos ísle sa ghrúpa D-gal i gcomparáid leis an ngrúpa rialaithe (125.72 ± 4.17 pg/mg próitéine vs. 225.20 ± 5.52 pg/mg próitéin, faoi seach, P<0.05). The mean value of brain BDNF level was significantly higher in the D-gal +Met group (215.03±3.65 pg/mg protein, P < 0.05)   when compared with the D-gal group. However, its level is still significantly lower when compared with the control group (Fig. 5).

Cainníochtúil RT-PCR (qRT-PCR). Sloinneadh na ngéinte AMPK agus PI3k (0.52±0.11agus 0.37±0.03, faoi seach, P<0.05) was significantly down-regulated in the D-gal group when compared with the control group (1). However, the expression of AMPK and PI3k genes was significantly up-regulated in the  D-gal+Met group (0.95±0.08 and 0.98±0.04, respectively, P<0.05), when compared with the D-gal group, but it was insignificantly changed (P>0.05) i gcomparáid leis an ngrúpa rialaithe (Fíor 6).

Histeapaiteolaíocht.Léirigh stain H&E fíocháin hippocampal sa ghrúpa rialaithe athruithe paiteolaíocha nach raibh suntasach. Léirigh an grúpa D-gal go leor degeneration neuronal agus comhlachtaí apoptotic le éidéime ollmhór agus gliosis. Mar sin féin, léirigh na hailt ghrúpa D-gal móide Met cúpla meath néarónach agus cúpla comhlacht apoptotic le éidéime éadrom agus gliosis fócasach éadrom (Fíor 7).

Immunohistochemistry. Léirigh na torthaí imdhíon-histochemical go raibh luach scór H de léiriú synaptophysin i bhfíochán hippocampal i bhfad níos ísle (P<0.05) in the D-gal group when compared with the control group (100±5.78 vs. 260±4.03). However, the expression of synaptophysin (180±5.26) in hippocampal tissue in the D-gal+Met group was significantly higher when compared with the D-gal group. However, it was still significantly lower when compared with the control group (Fig. 8).

Bhí scórluach H an slonn caspase-3 i bhfíochán hippocampal i bhfad níos airde (P<0.05) in the  D-gal group when compared with the control group (279±5.35 vs. 89±3.54). On the other hand, the H score value of the caspase-3 expression in hippocampal tissue in the D-gal+Met group (151±4.73) was significantly lower when compared with the D-gal group, but still significantly higher when compared with the control group  (Fig. 9). 

Bhí scórluach H slonn Bcl-2 i bhfíochán hippocampal i bhfad níos ísle (P<0.05) in the D-gal group when compared with the control group (161±4.36 vs. 301±6.11). While the H score value of Bcl-2 expression in hippocampal tissue in the D-gal+Met group (179±7.48) was significantly higher when compared with the D-gal group, it was still significantly lower when compared with the control group (Fig. 10).

Plé

Méadaíonn an méadú ar an meán-ionchas saoil an baol tinnis do dhaoine scothaosta, go háirithe sa réimse cognaíocha a d'fhéadfadh a bheith, go páirteach ar a laghad, mar gheall ar chaillteanas néarónach san inchinn. Glactar leis go maith go gcuireann an t-instealladh fadtéarmach d-galactós le dul chun cinn aosaithe agus le damáiste néarónach beag agus le lochtanna cuimhne. Ós rud é go bhfuil néarmheathghiniúint in éineacht le haosú D-galinduced, d’fhéadfadh sé a bheith ina shamhail idéalach chun staidéar a dhéanamh ar na meicníochtaí móilíneacha a bhaineann le néar-mheathlú a bhaineann le haois agus chun cineálacha cur chuige teiripeacha nua a thástáil22.

Léirigh ár staidéar go riaradh ainsealach iompraíochtaí taiscéalaíoch núíosacha lagaithe D-gal agus cuimhne oibre i bhfrancaigh. Bhí sé seo soiléir i dtorthaí an réad nua, lúbra uisce Morris, agus tástálacha ardaithe móide lúbra. Bhí na torthaí seo ar aon dul le staidéir eile a tuairiscíodh23. Ar an lámh eile; d'fheabhsaigh cóireáil le metformin an chuimhne oibre agus b'fhearr leis an úrnuacht i gcomparáid leis an ngrúpa D-gal. Ag tacú lenár dtorthaí, thuairiscigh staidéar roimhe seo gur fheabhsaigh metformin cuimhne ghearrthéarmach i lucha diaibéiteacha streptozotocin24. Tá sé doiciméadaithe go maith go bhfuil baint ag aosú ní hamháin le laghdú ar fheidhmeanna cognaíocha ach freisin le hathruithe mothúchánacha lena n-áirítear iompar atá cosúil le himní as a dtagann lagú feidhme25. Sa staidéar reatha, léirigh torthaí tástála EPM go raibh méadú ar iompar cosúil le himní sa ghrúpa D-gal i gcomparáid leis an ngrúpa rialaithe. Cé gur mhaolaigh cóireáil le metformin iompar a bhí cosúil le himní.

Léirigh an staidéar reatha go raibh suaitheadh ​​ar mharcóirí struis ocsaídiúcháin inchinne ag gabháil le hathruithe néar-iompraíochta de bharr riarachán béil D-gal. Bhí meánluach leibhéal MDA in aonchineálach fíocháin inchinn i bhfad níos airde, agus bhí gníomhaíocht na heinsíme frithocsaídeacha SOD i bhfad níos ísle sa ghrúpa D-gal i gcomparáid leis an ngrúpa rialaithe. Tuairiscíodh torthaí comhchosúla roimhe seo23,26. Idirghníomhaíonn D-gal le haimíní saora éagsúla san ailtireacht próitéine trí glycation neamh-einsímeach, rud a chruthaíonn ard-tháirgí glycation. Mar thoradh air seo gintear ROS a mhéadaíonn aosú inchinne trí dhamáiste ocsaídiúcháin do DNA, lipidí agus próitéiní. D’fhéadfaí caillteanas cuimhne agus lagú foghlama de dheasca riaradh ainsealach D-gal a chur i leith giniúna na bhfréamhacha saor in aisce, rud a d’fhágfadh lagú néarghinis agus, ar deireadh, néar-mheathlú27. Ina theannta sin, tá néaróin inchinn níos so-ghabhálaí i leith strus ocsaídiúcháin mar gheall ar ard-ábhar lipid agus tomhaltas ocsaigine níos airde26.

Ar a mhalairt, rinne riarachán metformin an t-iarmhéid redox a athchóiriú go suntasach. Léiríodh le fianaise go bhféadfadh metformin bac a chur ar Phiocháin Idirthréimhseach Tréscaoilteachta Mitochondrial (mPTP) agus táirgeadh ROS agus sárocsaídiú lipid a laghdú28. Dá bhrí sin, léiríonn sé seo go bhféadfadh éifeacht frith-aosaithe metformin a bheith mar thoradh ar a chosaint frithocsaídeach.

Seachas strus ocsaídiúcháin, is meicníocht thábhachtach a chothaíonn cóireáil D-gal é athlasadh freisin. Cuireann D-gal giniúint ROS chun cinn a ghníomhaíonn cosáin athlastacha3. Is sainmharcanna den aosú iad néar-athlasadh ainsealach agus secretion cítocíní pro-athlastacha29. Tá comhaontú ann go bhfuil baint ag cytokines athlastacha le strus ocsaídiúcháin. Tá TNF- , IL-6, agus IL-1 ríthábhachtach chun strus ocsaídiúcháin a fhorbairt agus a chur chun cinn. Tá baint ag na cytokines seo le ROS agus gníomhaíonn siad fachtóir Núicléach-κB (NF-κB) chun traslonnú go dtí an núicléas agus rialáil a dhéanamh ar léiriú géinte pro-athlastach cosúil le iNOS agus COX2, a bhfuil baint acu le freagraí athlastacha agus imdhíonachta, agus dá bhrí sin mar thoradh air sin. fiobróis, apoptosis, agus freagairtí géarchéim a dhéanann damáiste orgán30. Bhí na sonraí thuasluaite comhsheasmhach lenár dtorthaí, toisc go raibh an leibhéal TNF-alfa i bhfad níos airde, agus IL-10 i bhfad níos ísle sa ghrúpa D-gal i gcomparáid leis an ngrúpa rialaithe.

Ar an láimh eile, mar thoradh ar chóireáil le metformin tháinig laghdú suntasach ar na marcóirí athlastacha i gcomparáid leis an ngrúpa D-gal. D’fhéadfaí éifeachtaí frith-athlastacha metformin a chur i leith gníomhachtú comharthaíochta AMPK, a shochtann frithghníomhartha athlastacha trí chosc ar NF-κB29. Chomh maith leis sin, laghdaigh sé táirgeadh cítocíní pro-athlastacha agus gníomhachtú microglial san inchinn, rud a laghdaíonn strus ocsaídiúcháin30.

Chun tuiscint bhreise a fháil ar na meicníochtaí móilíneacha is bun le gníomhartha metformin, rinneamar scrúdú ar na léirithe próitéine de AMPK agus PI3k. Léirigh ár staidéar go raibh laghdú suntasach tagtha ar léiriú AMPK sa ghrúpa D-gal i gcomparáid leis an ngrúpa rialaithe, cé go ndearnadh a leibhéal suas-rialaithe go suntasach sa ghrúpa cóireáilte le metformin i gcomparáid leis an ngrúpa D-gal. Thuairiscigh staidéir roimhe seo go laghdaítear gníomhachtú AMPK agus freagrúlacht AMPK le haois, rud a d'fhéadfadh an rialachán meitibileach athraithe a mhíniú, rud a d'fhág go laghdaítear uathphagaíocht agus méadú ar strus ocsaídiúcháin31. Fuarthas amach go ngníomhaíonn Metformin AMPK trí fhosfarylation AMPK a mhéadú ag Tr-17232. Is é AMPK príomhsprioc metformin dá fheidhm chosanta i gcoinne cur isteach cognaíocha. Ghadernezhad et al. thuairiscigh gur tharla gníomhachtú AMPK de bharr metformin mar thoradh ar ghníomhachtú an chosáin BDNF/P70S6K i néaróin hippocampal chun foirmiú cuimhne i dtasc seachanta éighníomhach a fheabhsú i múnla domhanda ischemia cheirbreach/reperfusion francach. Tá ról ríthábhachtach ag gníomhachtú BDNF i rialáil feidhmeanna neurocognitive cosúil le foghlaim, cuimhne, tarchur synaptic, agus plaisteacht 33. Léirigh roinnt staidéir go bhféadfadh AMPK gníomhú mar mhodálaí ar Phoitéinseal Fadtéarmach (LTP), agus tá sé ag teastáil le haghaidh foirmiú cuimhne34 . Mar sin, d’fhéadfaí feabhas a chur ar chuimhne arna spreagadh ag metformin inár staidéar a idirghabháil trí ghníomhachtú comharthaíochta AMPK.

【Le haghaidh tuilleadh eolais: david.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】