Comh-imdhíonadh Liposome-Bhunaithe le Agonist TLR Agus CD47-Imshrianta Seicphointe SIRP Chun Cóireáil Éifeachtach Ailse Drólainne

Coimriú:

Is comhpháirt riachtanach de theiripe ailse í imdhíonacht antitumor agus déantar í a idirghabháil go príomha ag an bhfreagairt imdhíonachta dúchasach, a bhfuil ról ríthábhachtach aige maidir leis an bhfreagairt imdhíonachta oiriúnaitheach a thionscnamh agus a mhúnlú. D'aithin fianaise atá ag teacht chun cinn seicphointí imdhíonachta dúchasacha agus gabhdóirí aitheanta patrún, mar CD47 agus receptor cosúil le Dola 7 (TLR7), mar spriocanna teiripeacha geallta do chóireáil ailse. Bunaithe ar an próitéin comhleá Fc-CV1, a chuimsíonn athraitheach SIRP ard-chleamhnas (CV1), agus an blúire Fc den antashubstaint IgG1 daonna, rinneamar shaothrú ar ullmhúchán a cheangail Fc-CV1 le liposomes luchtaithe imiquimod (TLR7 agonist) ( CILPanna) chun díriú go gníomhach ar CT26. Samhlacha meall drólainne syngeneic WT. Léirigh staidéir in vitro gur léirigh CILPanna airíonna scaoilte marthanacha níos fearr agus éifeachtúlacht glactha cille i gcomparáid le imiquimod in aisce. In vivo, chruthaigh measúnachtaí gur léirigh CILPanna carnadh níos éifeachtaí i siadaí agus éifeacht shochtadh siadaí níos suntasaí ná na grúpaí rialaithe. Bhain na buntáistí a bhaineann le dáileoga íseal agus le tocsaineacht íseal leis an ullmhúchán imdhíonteiripe seo. Léirigh na torthaí seo go bhféadfadh meascán de theiripe imshuímh imshuímh imdhíonachta (ICB) agus agónaithe imdhíonachta dúchasacha, mar an Fc-CV1 agus ullmhúchán liposome-luchtaithe imiquimod a úsáideadh sa staidéar seo, straitéis an-éifeachtach a léiriú do theiripe siadaí.

Buntáistí cistanche tubulosa-Antitumor

Eochairfhocail:

imiquimod ; liposome; Fc-CV1; imdhíonteiripe; ailse drólainne

1. Réamhrá

Leanann minicíocht domhanda na hailse ag ardú go bliantúil, rud a chuireann bagairt thromchúiseach ar shláinte dhaonra an domhain agus a chuireann ualach trom ar chórais cúram sláinte. De réir tuarascála ón Eagraíocht Dhomhanda Sláinte, in 2020, tharla 19.29 milliún cás nua ailse agus 9.96 milliún bás ailse ar fud an domhain [1]. Mar sin féin, le dul chun cinn leanúnach i ndiagnóis chliniciúil, máinliacht, radaiteiripe, agus ceimiteiripe, tá feabhas suntasach tagtha ar mharthanacht agus ar chaighdeán maireachtála foriomlán na n-othar ailse. Go háirithe, tá imdhíonteiripe, a tháinig ón vacsaín Coley sna 1890í [2], roimh radaiteiripe agus ceimiteiripe araon agus tá dul chun cinn suntasach déanta aige le deich mbliana anuas, rud a théann chun sochair d'othair ailse.

Tá imdhíonteiripe meall aitheanta as a bhith-chomhoiriúnacht den scoth agus a shainiúlacht ard agus tá sé in ann freagairtí imdhíonachta a spreagadh chun cealla meall a dhíchur [3-5]. Is iad dhá phríomhstraitéis le haghaidh imdhíonteiripe meall ná feabhsú imdhíonachta agus normalú imdhíonachta [6]. Is éard atá i bpatrúin feabhsaithe imdhíonachta den chuid is mó ná teiripe cítocín, vacsaíní teiripeacha siadaí, agus antasubstaintí monachlónacha. Meastar go bhfuil gabhdóirí cosúil le dola (TLRanna) ina spriocanna féideartha d’imdhíonteiripe ailse mar gheall ar a ról i ngníomhú an chórais imdhíonachta dúchasach. Forbraíodh agonists TLR mar aidiúvach imdhíonachta, agus tá éagsúlacht agonists TLR ag dul faoi thrialacha cliniciúla [7]. Tá agonists monophosphoryl lipid A agus imiquimod, TLR4, agus TLR7, faoi seach, tar éis faomhadh a fháil ón Riarachán Bia agus Drugaí le haghaidh cur i bhfeidhm cliniciúil [7-9]. Gníomhaíonn Imiquimod, agonist TLR7 [9], freagraí imdhíonachta agus feabhsaíonn sé gníomhaíocht frith-meall trí TLR7 a spreagadh [10,11]. Léirítear an straitéis um normalú imdhíonachta ag drugaí imshuí seicphointe imdhíonachta (ICB) a rialaíonn freagairt imdhíonachta lochtach oiriúnaitheach siadaí. Ó faomhadh an chéad choscóir seicphointe, ipilimumab lena chur i bhfeidhm go cliniciúil i SAM in 2011, tá coscairí seicphointe imdhíonachta, mar choscóirí PD1/PDL1, chun cinn in imdhíonteiripe ailse [12–14]. Seachas seicphointí imdhíonachta oiriúnaithe cosúil le PD1/PDL1, tharraing roinnt seicphointí imdhíonachta dúchasacha, mar SIRP -CD47, go leor airde freisin agus tá siad ina réimsí spéise suntasacha i bhforbairt drugaí antasubstainte [15-17].

Aithníodh seicphointe SIRP -CD47 den chéad uair i 1999 [18,19]. Is receptor CD47 é SIRP a chuirtear in iúl i néaróin an lárchórais néaróg [20] agus cealla myeloid, lena n-áirítear monocytes, macrophages, granulocytes, agus cealla dendritic. Is "móilín féin-lipéadaithe" é CD47 a chuirtear in iúl ar bheagnach gach gnáthcheall agus ró-léirithe ar fhormhór na gcealla meall [21]. Ar dhromchla na gcealla meall, ceanglaíonn CD47 le SIRP , ag cosc ​​ar phagocytosis macrophage-idirghabhála, atá ina bhealach tábhachtach chun éalú imdhíonachta siadaí [22]. Tá sé léirithe gur féidir feabhas a chur ar phagocytosis na macrófagáin laistigh den mhicrea-thimpeallacht meall nuair a chuirtear bac ar cheangail CD47 agus SIRP [20-25]. Mar sin, forbraíodh agus cuireadh i bhfeidhm i teiripe ailse [26] coscairí seicphointe imdhíonachta a chuireann bac ar chonair CD47/SIRP.

cistanche tubulosa-feabhas a chur ar chóras imdhíonachta

Cliceáil anseo chun táirgí Cistanche Feabhsú Díolúine a fheiceáil

【Iarr tuilleadh】 Ríomhphost:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Sa staidéar seo, d’úsáideamar meascán de imiquimod agus próitéin comhleá (Fc-CV1) chun ailse drólainne a chóireáil. Is próitéin SIRP athchuingreach daonna modhnaithe é CV1 a bhfuil cleamhnas 50,000-huaire níos airde aige le haghaidh CD47 ná an phróitéin bhunaidh [27]. Tógadh Fc-CV1 ag baint úsáide as teicneolaíocht "Knobs-in-holes", bunaithe ar mhonaiméir CV1 agus blúire Fc de IgG1 daonna. Chun na teorainneacha a bhaineann le droch-éifeachtúlacht theiripeach agus tocsaineacht sistéamach a bhaineann le imiquimod [28,29] a shárú, d'ullmhaigh muid nanoliposomes tríd an modh instealladh eatánóil. Tá tréithe tocsaineachta íseal ag na nanoliposomes i seachadadh drugaí [30,31]. Ina dhiaidh sin, cuimsíodh imiquimod i liposomes a raibh dromchla comhchuingeach Fc-CV1 orthu. Mar fhocal scoir, is féidir leis an nana-ullmhúchán nua seo agónaithe TLR7 a sheachadadh go gníomhach chuig fíocháin siadaí agus tá dhá fheidhmeanna aige mar dhruga ICB agus agónaí TLR. Úsáideadh é chun an CD47+ CT26.WT samhail siadaí drólainne singeneic [32] a chóireáil.

2. Torthaí agus Plé

2.1. Tréithriú LPanna (Lipeasóim Bhán), ILPanna (Lipeasóim Neamh-CD47-Lipeasóim Spriocdhírithe Imiquimod-Encapsulated), CLPanna (Lipeasóim Spriocdhírithe CD47), agus CILPanna (Fc-CV1 mar aon le hionsaí Imiquimod (TLR7)-Lipeasóim Luchtaithe)

Ullmhaíodh CILPanna go rathúil trí instealladh eatánóil agus an modh grádán sulfáit amóiniam. Léiríonn Fíor 1A próiseas sintéise na CILPanna. Léirigh anailís TEM go raibh na CILPanna sféarúil agus aonfhoirmeach i gcruth (Fíor 1B). Ina theannta sin, léirigh toradh DLS gur dáileadh aonmhódach méid na gcáithníní de na ceithre liposomes (Fíor 1C). Fíoraíodh an ráta ceangailteach (BR) ag SDS-PAGE, atá ar taispeáint i bhFíor 1D, E. Taispeánann Fíor 1D meáchan móilíneach Fc-CV1 agus gile banna coibhneasta CILPanna dialyzed agus réamh-scagdhealaithe. Ríomhadh an BR mar 67.13 ± 37.10% trí dhlúsiméadracht scanadh Image J de bhannaí leictreafóiréiseacha (Fíor 1E), ag soláthar féidearthachta go mbeadh CD47-dírithe ar chealla meall.

Fíor 1. (A) Léiriú scéimreach de shintéis na CILPanna. (B) Íomhá TEM de CILPanna

Baineadh úsáid as HPLC chun éifeachtúlacht iata (EE) imiquimod (Fíor Forlíontach S1) a bhrath. Mar a léirítear i bhFíor Forlíontach S1A, léirigh an imiquimod saor in aisce buaic suntasach amháin, agus níor léirigh na CLPanna buaic ar bith faoi na coinníollacha tástála céanna (Figiúr Forlíontach S1B). Mar sin, tá sé indéanta na CILPanna a bhrath go díreach faoi na coinníollacha tástála. Mar a bheifí ag súil leis, measadh luachanna braite CILPanna roimh agus tar éis scagdhealaithe mar ábhar iomlán na ndrugaí agus an cion drugaí i liposomes, faoi seach (Fíor Forlíontach S1C, D). Ríomhadh an EE de imiquimod mar 85.44 ± 4.11%. I gcomparáid leis an gcóras seachadta drugaí um luchtú éighníomhach a tuairiscíodh [33-35], bhain an staidéar seo amach éifeachtacht imchochlaithe níos airde agus próiseas ullmhúcháin níos áisiúla.

Léirigh DLS gurbh é 111.567 ± 0.655 nm trastomhais na LPanna, agus léirigh CLPanna, ILPanna, agus CILPanna méid beagán níos mó de 117.467 ± {0.34{{10} } nm, 120.233 ± 0.776 nm, agus 13{{30}}.033 ± 0.974 nm, faoi seach (Tábla 1). Féadfar na hathruithe ar mhéid na liposomes seo a chur i leith modhnú Fc-CV1 agus imiquimod. Bhí an PDI gar do 0.1 (Tábla 1), rud a thugann le fios go raibh na feithiclí seachadta drugaí seo an-aonchineálach ina ndáileadh. Ina theannta sin, tomhaiseadh luachanna zeta-poitéinseal LPS, CLPS, ILPs, agus CILPanna go −2.231 ± 0.167 mV, −2.492 ± 0.033 mV, −2.383 ± 0.070 mV, agus −2.075 ± 0.070 mV, faoi seach (Tábla 1) faoi seach (Tábla 1) , rud a thugann le tuiscint nach raibh mórán éifeacht ag an Fc-CV1 dromchla-chomhchuingeach agus imiquimod cuimsithe ar lucht liposomes.

Tábla 1. Trastomhais, poitéinseal zeta, PDI, agus EE LPanna, CLPanna, ILPanna, agus CILPanna, faoi seach.

2.2. Éifeachtúlacht Glactha Cill In Vitro

Rinneadh éifeachtúlacht glactha na gceall CILPanna a mheas trí dhéine fluaraiseachta Cy5 a ghlac cealla CT26.WT ag baint úsáide as Córas Íomháithe Ard-Ábhair. Mar a léirítear i bhFíor 2, i gcomparáid le grúpaí Cy5 agus ILP-Cy5 saor in aisce, léirigh grúpaí CILP-Cy5 cumas glactha cille níos láidre tar éis 30 nóiméad goir. Tá sé le tuiscint ag na torthaí seo gur chuir Fc-CV1 feabhas ar chumas seachadta infhéitheach liposomes lódáilte imiquimod mar gheall ar an gcleamhnas sonrach leis an ngabhdóir Fc-CV1, rud a fhágann go raibh éifeacht frith-meall níos cumhachtaí.

Fíor 2. Na híomhánna de chealla CT26.WT tar éis gortha leis na Cy5 saor in aisce, ILPs-Cy5, agus CILPs-Cy5 (dearg) le haghaidh 0.5 h, agus staining le DAPI (gorm). Barra scála: 50 µm. (n {{10}}). * p < 0.05; ****p < 0.0001

2.3. Curves Scaoileadh Liposomes

Tomhaiseadh cuair scaoileadh drugaí an imquimod in aisce, ILPanna, agus CILPanna i dtimpeallacht insamhladh in vivo. Léiríonn Fíor 3 gur scaoileadh an imiquimod saor in aisce go hiomlán tar éis 1 h, cé nach raibh an ráta scaoilte (RR) de imiquimod a bhí cuimsithe le ILPanna agus CILPanna ach 54.75 ± 4.08% agus 39.70 ± 0.05% ag 12 h. , faoi seach. Ina theannta sin, d’fhéadfaí scaoileadh mall imiquimod in ILPanna agus CILPanna a dhúnadh leis an airí scaoileadh drugaí rialaithe atá ag liposóim. Níor léirigh an RR de imiquimod in ILPanna agus CILPanna aon difríocht shuntasach ag 96 h, rud a léiríonn gur beag an tionchar a bhí ag "cur isteach i ndiaidh" ar chobhsaíocht membrane na liposomes.

figiúr 3. Imiquimod scaoileadh cuair an imiquimod saor in aisce, ILPs, agus CILPs i PBS ag 37 ◦C. Cuirtear sonraí i láthair mar mhodh ± diall caighdeánach (n=3). * p < 0.05, ** p < 0.01

2.4. Staidéar Cíteatocsaineachta

Chun staidéar a dhéanamh ar chiteatocsaineacht CILPanna in vitro, rinneadh an measúnú CCK{{0}} ar chealla CT26.WT. Mar a léirítear i bhFíor 4, níor léirigh CILPanna ag tiúchana ísle (0.1–1 µg/mL) cíteatocsaineacht, rud atá comhsheasmhach le sábháilteacht na teiripe imdhíonta. Tháinig laghdú beag ar inmharthanacht na gceall tar éis cóireála 5 µg/mL imiquimod, is dócha mar gheall ar bhás cille imdhíon-ghineach ROS agus reticulum-idirghabhála endoplasmic a tharlódh de bharr imiquimod [36]. Thairis sin, tá laghdú suntasach ar inmharthanacht cille mar thoradh ar CILPanna i gcomparáid le grúpaí rialaithe, a chuirtear i leith éifeacht sineirgisteacha imiquimod agus Fc-CV1.

Fíor 4. Inmharthanacht na gcealla cóireáilte le Fc-CV1, imiquimod, CLPs, ILPs, agus CILPs ar feadh 24 h. Ba iad tiúchan an Fc-CV1 agus imiquimod araon ná 0–10 µg/mL. * p < 0.05, ** p < 0.01, ns=gan aon difríochtaí suntasacha

2.5. Staidéar Bithdháilte

Bíonn tionchar díreach ag dáileadh agus carnadh foirmlithe éagsúla i tumaí agus orgáin mhóra ar an éifeacht theiripeach. Tar éis riarachán infhéitheach, rinneadh monatóireacht ar na comharthaí fluaraiseachta ag baint úsáide as córas vivisection gar-infridhearg chun dáileadh agus carnadh foirmlithe éagsúla i siadaí agus orgáin mhóra a mheas tar éis 24 h. Mar a léirítear i bhFíor 5 bhí an déine fluaraiseachta iomlán ILPs-Cy5 agus CILPs-Cy5 níos airde ná saor-Cy5, rud a thugann le fios go raibh airí fad-chiorclach in vivo ag na liposomes. Ina theannta sin, ba é déine fluaraiseachta an ghrúpa cóireála CILPs-Cy5 an ceann ab airde i bhfíochán meall, a d'fhéadfaí a chur i leith éifeacht spriocdhírithe siadaí de ligands Fc-CV1, rud a chuir feabhas ar an éifeacht frith-meall. Go suntasach, bhí déine fluaraiseachta na n-ae agus na spleens níos cumhachtaí ná orgáin eile, rud is dócha mar gheall ar phagocytosis liposomes ag an gcóras reticuloendothelial (RES) san ae agus na duáin [37].

Fíor 5. Dáileadh fluaraiseacht Cy5-i siadaí agus orgáin mhóra ag 24 h tar éis riarachán infhéitheach. Taispeántar sonraí mar mhodh ± diall caighdeánach (n=3). ****p < 0.0001

2.6. Staidéar ar Chosc Meall In Vivo

Léirítear an sceideal teiripeach (Fíor 6A) agus éifeachtaí ullmhóidí éagsúla i bhFíor 6. I gcomparáid leis na grúpaí PBS agus LP, léirigh grúpaí cóireála eile éifeachtaí áirithe de shochtadh siadaí. Go háirithe, ba bheag an toirt siadaí tar éis cóireála le CILPanna, rud a thugann le tuiscint go raibh éifeacht sármhaithe um shochtadh siadaí ag CILPanna (Fíor 6B).

Fíor 6. (A) Léiriú scéimreach de chóireáil ailse frith-choilíneach ar mhúnla meall CT26.WT. (B) Curves fáis toirte meall le linn na tréimhse cóireála. (C) grianghraif meall coibhneasta agus (D) meáchan an meall a bailíodh ó ghrúpaí cóireála éagsúla ar an lá 17. (E) An cóimheas meáchan coirp coibhneasta de mheáchan coirp i gcomparáid le 0 lá. Cuirtear sonraí i láthair mar mheán ± diall caighdeánach (n=5). *p < 0.05, ** p < 0.01, *** p < 0.001.

Ag deireadh an turgnaimh, rinneadh na lucha a íobairt agus rinneadh a gcuid siadaí a dhíbirt, a ghrianghrafadh agus a mheá chun éifeachtúlacht theiripeach ullmhóidí éagsúla a chinneadh. Mar a léirítear i bhFíor 6C, D, bhí na siadaí is lú agus is éadroime ag an ngrúpa cóireála CILPanna i gcomparáid le grúpaí eile, rud a léiríonn go raibh na héifeachtaí suppressor siadaí is mó ag CILPanna. Léiríonn Tábla 2 gur ríomhadh ráta coiscthe fáis siadaí CILPanna mar 84.35%. Ina theannta sin, bhí an ráta faoi chois siadaí 84.35% i bhfad níos airde ná mar a bhí ag na grúpaí CLPanna agus ILPanna, agus ciallaíonn sé seo go bhfuil éifeacht sineirgisteacha ann maidir le blocáil na haise "ná hith mé" agus gníomhachtú na freagairt imdhíonachta. . I gcomparáid leis an ullmhúchán coibhéiseach in vitro (2.5–5 µg/mL), bhí an ráta coiscthe níos airde gaolmhar go dlúth leis an bhfreagra imdhíonachta foirmlithe-ghníomhachtaithe agus chuir sé bac ar an meicníocht éalaithe imdhíonachta in vivo, nach raibh ar fáil in vitro.

Tábla 2. Sonraí maidir le meáchan siadaí agus cosc ​​ar fhás siadaí (TGI) de ghrúpaí cóireála éagsúla.

2.7. CILPanna Méadú ar Insileadh T-Cill agus Rúnú IFN

Chun iniúchadh a dhéanamh ar mhíle cille imdhíonachta na siadaí, rinneadh anailís imdhíon-histochemical ar an gcill imdhíonachta a tharlódh ó CILPanna ag deireadh an mheasúnaithe frith-meall. Méadaíodh na cealla CD4+ agus CD8+ T i gcodanna siadaí na ngrúpaí CILPanna (Fíor 7). Mar thoradh ar chomhsheachadadh Fc-CV1 agus teiripe imiquimod tháinig insíothlú suntasach cille CD4+ agus CD8+ T. Ina theannta sin, bhí secretion suntasach IFN sna siadaí a bhí faoi chóireáil CILPanna, agus ba é sin toisc gur spreag CILPanna receptor cosúil le Dola 7 agus gur ghníomhaigh siad an freagra imdhíonachta.

Fíor 7. Immunohistochemistry fíocháin meall luiche; cealla dearfacha atá dhaite donn. Barra scála, 50 µm (n=5).

2.8. Measúnú Bithshlándála ar CILPanna

Bhí bithshábháilteacht na teiripe CILP-idirghabhála ina innéacs tábhachtach freisin maidir le rochtain a fháil ar an meastóireacht theiripeach. Le linn an staidéir ar chosc siadaí in vivo, níor spreag CILPanna meáchain caillteanas suntasach sa tréimhse cóireála (Fíor 6D). Bhí paraiméadair bithcheimiceacha an ae agus na duáin ar fad sa ghnáthraon de réir raon tagartha caighdeánach na lucha (Tábla 3), agus níor léirigh histeolaíocht orgáin aon athruithe suntasacha, rud a léiríonn go raibh bithshábháilteacht den scoth ag na CILPanna (Fíor 8). Tá na torthaí seo ríthábhachtach chun féidearthacht CILPanna a mheas mar oibreán imdhíonteiripeach sábháilte agus éifeachtach le haghaidh cóireáil ailse.

Tábla 3. Paraiméadair bithcheimiceacha an ae agus na duáin

Fíor 8. Staining H&E (hematocsailín agus eóisin) na bpríomhorgán. Barra scála, 50 µm (n=3)

3. Ábhair agus Modhanna

3.1. Ábhair

Ceannaíodh Imiquimod ó MedChem Express (Shanghai, an tSín). Chuir an Príomhshaotharlann Stáit um Dhrugaí Antashubstainte agus Teiripe Spriocdhírithe Fc-CV1 ar fáil. Ceannaíodh colaistéaról, lecithin hidriginithe (HSPC), DSPE-PEG2000, DSPE-PEG2000-NHS, agus DSPE-PEGCy5 ó Xi'an Ruixi Biological Technology Co., Ltd. (Xi'an, an tSín). Fuarthas an 40,6-diamidino{-2-phenylindole(DAPI) ó Keygen Biotech (Nanjing, an tSín). Fuarthas sulfáit amóiniam ó Sinopharm (Shanghai, an tSín). Ceannaíodh meatánól (grád crómatagrafach) agus acetonitrile (grád crómatagrafaíochta) ó Aladdin Reagent Company (Shanghai, an tSín). Is de ghrád anailíseach baile iad na himoibrithe eile. Líne chill ailse drólainne luch CT26. Chuir Banc na gCeall d'Acadamh Eolaíochta na Síne WT ar fáil. Fásadh na cealla i gorlann cille sa mheán RPMI 1640 ina raibh 10% FBS (Thermo Fisher Scientific, Nua-Eabhrac, NY, SAM) ag 5% CO2 agus 95% aer. Sholáthair an Pengyue Laboratory Animal Breeding Co., Ltd. (Jinan, an tSín) lucha ban BALB/c de 4-6 seachtaine.

3.2. Ullmhú Liposomes Bán

Ar dtús, rinneadh 13.455 mg HSPC, 4.3595 mg de DSPE-PEG2000, agus 4.7095 mg de colaistéaról a mheá agus a thuaslagadh go beacht i 0.1 mL eatánól (HSPC: DSPE-PEG2000: colaistéaról=55.5: 5.05:39.3 cóimheas molar). Ar an dara dul síos, rinneadh an tuaslagán eatánóil a instealladh go tapa i dtuaslagán sulfáit amóiniam réamhthéite (250 mM, 1 mL, 65 ◦C) trí steallaire agus ansin é a ghoradh ar feadh 30 nóiméad ag 65 ◦C le corraigh maighnéadach. Ina dhiaidh sin, rinneadh an réiteach ullmhaithe a easbhrú trí na seicní polycarbonate (Avanti, Alabaster, AL, USA); ba é an méid ná 200 nm, 100 nm, agus 50 nm, faoi seach. Ar deireadh, ba é an réiteach mar thoradh air sin na liposomes bán (LPs) le tiúchan lipid de 22.5 mg/ml.

3.3. Ullmhú Lipeasóm Cuimsithe Imiquimod Spriocdhírithe CD47

Ar dtús, rinneadh DSPE-PEG2000-NHS a thuaslagadh in ddH2O (60 ◦C) agus ansin meascadh le Fc-CV1 agus goradh é i mbord chroitheadh ​​ag teocht an tseomra ar feadh 5 h (Fc-CV1:DSPEPEG2000- NHS=12:1 cóimheas molar). Mar gheall ar mheicníocht imoibrithe ceimiceach an naisc idir Fc-CV1 agus DSPE-PEG2000-Bhí an t-eistear SNS ag imoibriú leis an aimín príomhúil ar Fc-CV1 agus bhunaigh sé comhchuingeach banna aimín boird. Meascaíodh an réiteach ullmhaithe go comhréireach le LPanna agus goraíodh é ag 60 ◦C ar feadh 1 h chun Fc-CV1 a chur isteach i liposomes, a ainmníodh "cur isteach i ndiaidh" [38]. Ba iad na comhréireanna meascáin ná gur athraíodh 2.25 mg Fc-CV1 in aghaidh an 22.5 mg liposomes. Fuarthas liposomes spriocdhírithe CD47 (CLPanna) ansin.

Ina dhiaidh sin, cuireadh CLPanna i mála scagdhealaithe (300 kDa) agus scagdhealaithe i gcoinne HEPES (10 mM, pH=7.4) ar feadh 1 h chun sulfáit amóiniam agus Fc-CV1 iarmharach a bhaint sa chéim uiscí seachtrach. Goradh na CLPanna dialyzed le tuaslagán imiquimod (5 mg / mL) ag cóimheas de 1 mg go 7 µmol fosfailipidí iomlán ag teocht an tseomra ar feadh 24 h agus ansin scagdhealaithe i gcoinne PBS (300 kDa) trí huaire chun deireadh a chur le imiquimod neamh-capslaithe, a rinne tagairt do an teicníc grádán sulfáit amóiniam [39]. Fuarthas na CILPanna ansin. Ina theannta sin, ullmhaíodh na liposomes imcapsulated imiquimod (ILPanna) neamh-CD. Measadh CLPanna agus ILPanna mar an rialú do CILPanna.

3.4. Tréithriú

Grianghraf de mhoirfeolaíocht na liposomes seo le micreascóp tarchuir leictreon (TEM, Joel, Tóiceo, an tSeapáin). Cinneadh méid, poitéinseal zeta, agus innéacs scaipthe polaiméire (PDI) de na liposomes seo trí scaipthe solais dinimiciúil (DLS) agus scaipthe solais electrophoretic (ELS) ag baint úsáide as an Zeta sizer ZSE Malvern (Malvern, RA). Rinneadh an ráta ceangailteach (BR) de Fc-CV1 a cuireadh isteach i liposomes a thomhas ag leictreafóiréis glóthach lauryl sulfate-polyacrylamide sóidiam 15% (SDS-PAGE) agus bogearraí Image J (Bethesda, MD, SAM). Braitheadh ​​éifeachtúlacht iata (EE) imiquimod le crómatagrafaíocht leachta ardfheidhmíochta (HPLC, Thermo Fisher Scientific, Nua-Eabhrac, NY, SAM).

Buntáistí cistanche tubulosa-Antitumor

3.5. Staidéar ar Ghlacadh Ceall In Vitro

Ba é déine fluaraiseachta carnach Cy5 sa CT26 a chinntigh glacadh cille in vitro na liposomes seo. Cealla WT. Goradh DSPE-PEG-Cy5 le CILPanna agus ILPanna (DSPE-PEG-Cy5: CILPanna nó ILPanna=1:5 cóimheas maise) ag 60 ◦C ar feadh 1 h, faoi seach, agus ansin liposomes fluaraiseacha fuarthas ainmnithe mar CILPs-Cy5 agus ILPs-Cy5. Síolaíodh cealla CT26.WT i 96-phlátaí tobair agus roinneadh iad go randamach i dtrí ghrúpa (1 × 104 cill/tobar, n=3). Tar éis don chomhluadar cille 50-70% a bhaint amach, goradh gach grúpa le Cy5 saor in aisce, ILPs-Cy5, agus CILPs-Cy5, faoi seach, ar feadh 30 nóiméad ag 37 ◦C, ina raibh na tiúchain deiridh de Cy5 1 µg/mL i 0.1 mL RPMI 1640 meán. Ina dhiaidh sin, díluailíodh na cealla le 4% paraformaildéad ar feadh 15 nóiméad tar éis iad a ní faoi dhó le PBS agus ansin iad a dhaite le 10 µL DAPI (1 µg/µL) ar feadh 10 nóiméad tar éis iad a ní faoi dhó le PBS. Ar deireadh, thaifead Córas Íomháithe Ard-Ábhar (Móilíneach Gléasanna, Sunnyvale, CA, SAM) glacadh gach grúpa cealla tar éis níocháin faoi dhó le PBS.

3.6. An Staidéar Scaoileadh Imiquimod

Baineadh úsáid as an modh scagdhealaithe (300 kDa) chun cuair scaoileadh liposomes éagsúla atá luchtaithe ag drugaí, agus cuireadh na torthaí i gcomparáid leis an réiteach imquimod in aisce. Go hachomair, pacáladh 0.6 ml ILPanna, CILPanna, agus an tuaslagán imiquimod isteach sna málaí scagdhealaithe agus ansin cuireadh iad i 500 ml de thuaslagán PBS (pH=7.4, 37 ◦C). Baineadh méideanna comhionann samplaí as na málaí ag eatraimh ama réamhshocraithe (0, 0.5, 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 24, 48, 72, agus 96 h), agus an ráta scaoilte (RR) ríomhadh imiquimod leis an gcothromóid seo a leanas:

áit a léirigh Sund agus Sd buaic-achar HPLC an imiquimod in ullmhóidí réamh-scagdhealaithe agus dialyzed ag amanna éagsúla, faoi seach (n=3).

3.7. Cíteatocsaineacht CILPanna

CT{{0}}.Síolaíodh cealla WT i bpláta tobair (1 × 104/tobar, n=3) agus saothraíodh iad i 100 µL de mheán RPMI 1640 go dtí an comhlí shroich go dlúth 70%. Chun cítotocsaineacht CILPanna a chinneadh, baineadh meán RPMI 1640 ó gach tobar agus cuireadh tuaslagán casta de mheán CILP agus RPMI 1640 ina ionad, le tiúchan Fc-CV1 agus imiquimod idir 0 agus 10 µg/mL. Goradh na cealla le tuaslagán casta ar feadh 24 uair an chloig. Ina theannta sin, measadh go raibh na cealla a ndearnadh cóireáil orthu le Fc-CV1, CLPanna, tuaslagán imiquimod, agus ILPanna i dtiúchan comhchosúil ina ngrúpaí rialaithe. Braitheadh ​​na cealla marthanacha le measúnacht CCK-8 tar éis 24 h, agus measadh inmharthanacht na gceall neamhchóireáilte 100%.

3.8. Staidéar Bithdháilte

Instealladh subcutaneously le CT26 do naonúr lucha BALB/c Mná. Rinneadh cealla WT (5 × 105 ) ar an taobh dheis agus na lucha meall-iompair seo a roinnt go randamach i dtrí ghrúpa (n=3). Rinneadh toirteanna meall a thomhas ag baint úsáide as calipers agus ríomhadh iad leis an bhfoirmle seo a leanas:

Nuair a shroich an toirt siadaí 100 mm3, cuireadh Cy5 saor in aisce, ILP-Cy5, agus CILPs-Cy5 instealladh infhéitheach ag dáileog Cy5 de 0.4 mg/kg. Fiche ceithre huaire an chloig tar éis instealladh infhéitheach, tógadh amach an meall, croí, ae, spleen, scamhóg, agus duán. Braitheadh ​​​​córas íomháithe optúla IVIS (IVIS Lumina LT III, PerkinElmer, Waltham, MA, SAM) comharthaí fluaraiseachta na tumaí agus na bpríomh-orgán.

3.9. Staidéar ar Chosc Meall In Vivo

Roinneadh tríocha cúig lucha baineanna BALB/c go randamach i seacht ngrúpa (n=5), agus 5 × 105 CT26. Instealladh cealla WT subcutaneously isteach an taobh dheis de gach luch. Nuair a bhí méid meall na luiche thart ar 100 mm3, cuireadh tús le cóireáil. Instealladh infhéitheach PBS, LPs, imiquimod, Fc-CV1, ILPs, CLPs, agus CILPanna ar laethanta 0, 4, 8, agus 12. Ba é an dáileog de imiquimod ná 2.5 mg/kg sa chéad agus sa dara hinstealladh agus 5 mg/kg sa tríú agus sa cheathrú instealltaí. I ngach instealladh, ba é an dáileog de Fc-CV1 ná 5 mg/kg. Ag an dáileog seo, ba é tiúchan an druga sa chorp ná 2.5–5 µg/mL, rud a d'fheidhmigh cíteatocsaineacht ar chealla i dturgnamh in vitro. Rinneadh trastomhais meall agus meáchan coirp a thomhas gach lá le linn na cóireála. Ar lá 17, tógadh tumaí na lucha amach agus rinneadh a gcuid meáchain a thomhas. Ríomhadh cosc ​​ar fhás meall (TGI) de réir na foirmle seo a leanas:

3.10. Imdhíon-cheimic

Rinneadh staining immunohistochemistry de CD4, CD8, agus IFN i bhfíocháin siadaí de réir prótacail caighdeánach. Tar éis an chuid paraifín de na hailt fíocháin meall a dhí-phairifíniú agus a athhiodráitiú, cuireadh 3% BSA leis an gciorcal chun an fíochán a chlúdach, agus ansin séalaithe ar feadh 30 nóiméad ag teocht an tseomra. Rinneadh na hailt a dhaite leis an antasubstaintí CD4, CD8, agus IFN (Servicebio, Wuhan, an tSín) thar oíche ag 4 ◦C, agus ansin gortha iad le antasubstaint tánaisteach (lipéad HRP, Servicebio, Wuhan, an tSín) ag teocht an tseomra ar feadh 50 nóiméad. tar éis dhá nite le PBS. Sa deireadh, léiríodh na hailt faoin micreascóp (Nikon, E100, Tóiceo, an tSeapáin) tar éis imoibriú leis an ngníomhaire chromogenic DAB.

cistanche tubulosa-feabhas a chur ar chóras imdhíonachta

3.11. Measúnú Bithshlándála ar CILPanna

Ag deireadh an staidéir um chosc meall, bailíodh na tumaí go léir, agus rinneadh meáchan na tumaí seo a thomhas. Braitheadh ​​​​na paraiméadair bithcheimiceacha, lena n-áirítear alanine transaminase (ALT), aspartate transaminase (AST), creatinine (CREA), agus úiré (UREA), san fhuil lucha. Socraíodh fíocháin meall úra agus orgáin mhóra le 4% paraformaldehyde agus leabaithe i pairifín ag baint úsáide as meaisín leabaithe (Wuhan Junjie Electronics, JB-P5, Wuhan, an tSín). Gearradh slisní fíocháin le tiús 5 µm tríd an micritome (Leica Instrument, RM2016, Shanghai, An tSín), agus ansin daite le hematoxylin agus eosin (H&E) de réir an phrótacail. Ina dhiaidh sin, breathnaíodh na slices staining faoi mhicreascóp (Nikon, E100, Tóiceo, an tSeapáin).

3.12. Anailís staitistiúil

Sloinntear na sonraí go léir mar mheán ± SD. Rinne ANOVA aontreo ar an leibhéal suntasachta idir grúpaí agus úsáid á baint as Graphpad Prism 8.0.2. p < 0.05 mar difríocht shuntasach.

3.13. Eitic Ainmhithe

D’fhormheas Coiste Speisialta um Eitic Taighde Eolaíoch Ollscoil Liaocheng na nósanna imeachta agus na moltaí go léir a bhaineann le hainmhithe de réir na dtreoirlínte náisiúnta maidir le cúram agus úsáid ainmhithe saotharlainne (Cód Formheasa: 2022111010; Dáta Formheasa: 1 Samhain 2022).

cistanche córas imdhíonachta a mhéadú plandaí

4. Conclúidí

Go hachomair, forbraíodh liposomes spriocdhírithe CD imiquimod-encapsulated go rathúil, agus chruthaigh na torthaí in vitro go raibh scaoileadh níos inbhuanaithe agus sainéifeacht spriocdhírithe ag na CILPanna. Léirigh na torthaí in vivo go bhféadfadh cealla siadaí an t-ullmhúchán a ghlacadh go héifeachtach agus go raibh éifeachtúlacht cóireála siadaí den scoth agus bithshábháilteacht léirithe ann mar gheall ar dhá fheidhm na freagartha imdhíonachta agus an imshuí seicphointe imdhíonachta dúchasach. Dá bhrí sin, is cosúil go bhfuil liposomes imiquimod-encapsulated in éineacht le Fc-CV1 nanomedicine úrscéal geallta chun feabhas a chur ar chóireáil siadaí léiriú CD47. D’fhéadfadh imdhíonteiripe bunaithe ar dhíolúine dúchasach feidhmiú mar straitéis ghinearálta i gcoinne fás siadaí do chomhcheangail sineirgisteacha le ICB sa todhchaí.

Tagairtí

1. Sung, H. ; Ferlay, J. ; Siegel, RL; Laversanne, M.; Soerjomataram, I.; Jemal, A.; Bré, F. Staidreamh Domhanda Ailse 2020: Meastacháin Ghlobocan ar Theagmhas agus ar Mharbharthacht ar fud an Domhain do 36 Ailse i 185 Tíortha. CA Ailse J. Clin. 2021, 71, 209–249. [CrossRef] [PubMed]

2. Carlson, RD; Flickinger, JC, Jr.; Tocsainí Snook, AE Talkin: Ó Coleys go Imdhíonteiripe Ailse Nua-Aimseartha. Tocsainí 2020, 12, 241. [CrossRef] [PubMed]

3. Barbari, C.; Fontaine, T. ; Parajuli, P. ; Lamichane, N.; Jakubski, S.; Lamichane, P. ; Deshmukh, Imdhíon-theiripí RR agus Straitéisí Teaglaim le haghaidh Imdhíon-Oinceolaíochta. Int. J. Mol. Sci. 2020, 21, 5009. [CrossRef]

4. Hegde, PS; Chen, DS Na 10 nDúshlán is Fearr in Imdhíonteiripe Ailse. Díolúine 2020, 52, 17–35. [CrossRef]

5. Jain, KK Imdhíon-Oinceolaíochta Pearsanta. Med. prionsa. Cleachtadh. 2021, 30, 1–16. [CrossRef]

6. Sanmamed, MF; Chen, L. Athrú Paradigm in Imdhíonteiripe Ailse: Ó Fheabhsú go Normalú. Cill 2018, 175, 313–326. [CrossRef]

7. Hussein, WM; Liu, Idirbhliain; Skwarczynski, M.; Toth, I. Agonists Glacadóra ar nós Dola: Athbhreithniú Paitinne (2011–2013). Tuairim Saineolaithe. Ther. Pádraig. 2014, 24, 453–470. [CrossRef]

8. Chi, H.; Li, C. ; Zhao, FS; Zhang, L.; Ng, TB; Jin, G. ; Sha, O. Gníomhaíocht Frith-Mheall Gabhdóra Cosúil le Dola 7 Agónaithe. Tosaigh. Cógaslann. 2017, 8, 304. [CrossRef] [PubMed]

9. Wang, Y. ; Zhang, S.; Li, H.; Wang, H.; Zhang, T. ; Hutchinson, MR; Ceann, H. ; Wang, X. Modhnóirí Mion-Mhóilín ar Ghlacadóirí Cosúil le Dola. Acc. Ceimic. Res. 2020, 53, 1046–1055. [CrossRef] [PubMed]

10. Le Mercier, I.; Poujol, D.; Sanlaville, A.; Sisirak, V. ; Gobert, M. ; Durand, I. ; Dubois, B. ; Treilleux, I. ; Marvel, J. ; Vlach, J. ; et al. Tá Cur Chun Cinn Meall ag Cealla Dendritic Plasmacytoid Intratumoral Aisiompaithe ag Cóireáil Ligand Tlr7. Ailse Res. 2013, 73, 4629–4640. [CrossRef]

11. Ma, F. ; Zhang, J.; Zhang, J.; Zhang, C. The Tlr7 Agonists Imiquimod agus Gardiquimod Feabhas a chur ar Imdhíonteiripe DC-Bunaithe le haghaidh Melanoma i Lucha. cill. Mol. Imdhíonól. 2010, 7, 381–388. [CrossRef]

12. Billean, S.; Kaidar-Duine, O.; Gil, Z. Cóireáil tar éis Dul Chun Cinn sa Ré Imdhíonteiripe. Lancet Oncol. 2020, 21, e463–e476. [CrossRef] [PubMed]

13. Darvin, P. ; Toor, SM; Sasidharan Nair, V. ; Elkord, E. Coscairí Seicphointe Imdhíonachta: Dul Chun Cinn le Déanaí agus Bithmharcóirí Féideartha. Cait. Mol. Med. 2018, 50, 1–11. [CrossRef] [PubMed]

14. Li, B. ; Chan, HL; Chen, P. Coscairí seicphointe imdhíonachta: Bunús agus Dúshláin. Curr. Med. Ceimic. 2019, 26, 3009–3025. [CrossRef] [PubMed]

15. Jia, X. ; Yan, B. ; Tian, ​​X. ; Liu, Q.; Jin, J. ; Shi, J. ; Hou, Y. Déanann Cd47/Sirpalpha Pathway Éalú Imdhíonta Ailse agus Imdhíonteiripe. Int. J. Biol. Sci. 2021, 17, 3281–3287. [CrossRef]

16. Swoboda, DM; Sallman, DA Gealltanas Coscairí Seicphointí faoi Threoir Macrophage i gColchistí Mailíochais Mheiloid. Cleachtas agus Taighde is Fearr. Clin. Haemaitól. 2020, 33, 101221.

17. Carghas, RW; Colton, MD; Mitra, SS; Messersmith, WA Coscairí seicphointe imdhíonachta dúchasacha: An Chéad Chinn Eile in Oinceolaíocht Leighis? Mol. Ailse Ther. 2021, 20, 961–974. [CrossRef]

18. Jiang, P. ; Lagenaur, CF; Narayanan, V. Integrin-Associated Próitéin Is Ligand don P84 Móilín Greamaitheachta Néaracha. J. Biol. Ceimic. 1999, 274, 559–562. [CrossRef]

19. Seiffert, M. ; Cant, C. ; Chen, Z.; Rappold, I.; Brugger, W.; Kanz, L.; Donn, EJ; Ullrich, A. ; Buhring, HJ An Comhartha Daonna-Próitéin Rialála a Léirítear ar Ghnáth, ach Ní ar Fho-thacair de Chealla Myeloid Leukemic agus Idirmheánacha Greamaitheacht Ceallach A Bhaineann lena Frithreceptor Cd47. Fuil 1999, 94, 3633–3643. [CrossRef]

20. Matlung, HL; Szilagyi, K.; Barclay, NA; van den Berg, TK An Cd47-Ais Chomharthaíochta Sirpalpha mar Sheicphointe Imdhíonachta Inneach in Ailse. Imdhíonól. Ath. 2017, 276, 145–164. [CrossRef] [PubMed]

21. Oldenborg, PA; Zheleznyak, A .; Fang, YF; Lagenaur, CF; Gresham, HD; Lindberg, FP Ról Cd47 mar Tháirgeoir Féin ar Chealla Dearga Fola. Eolaíocht 2000, 288, 2051–2054. [CrossRef]

22. Li, Z. ; Li, Y. ; Gao, J. ; Fu, Y.; Hua, P.; Jing, Y. ; Cai, M. ; Wang, H.; Tong, T. Ról Seicphointe Imdhíonachta Cd47-Sirpalpha in Imghabháil Imdhíonachta Meall agus in Imdhíonteiripe Inniúil. Sci Saol. 2021, 273, 119150. [CrossRef]

23. Hayat, SMG; Bianconi, V. ; Pirro, M.; Jaafari, MR; Hatamipour, M.; Sahebkar, A. Cd47: Ról sa Chóras Imdhíonta agus Feidhmiú i dTeiripe Ailse. cill. Oncol. 2020, 43, 19–30. [CrossRef]

24. Huang, Y. ; Ma, Y.; Gao, P.; Yao, Z. Ag Díriú ar Cd47: Éachtaí agus Buarthaí an Staidéir Reatha ar Imdhíonteiripe Ailse. J. Thorac. Dis. 2017, 9, E168–E174. [CrossRef]

25. Zhang, W. ; Huang, Q. ; Xiao, W.; Zhao, Y.; Pí, J.; Xu, H.; Zhao, H.; Xu, J. ; Evans, CE; Jin, H. Dul chun cinn i gCóireáil Frith-Mheall atá dírithe ar an Ais Cd47/Sirpalpha. Tosaigh. Imdhíonól. 2020, 11, 18. [CrossRef] [PubMed]

26. Liu, X. ; Pu, Y. ; Cron, K. ; Deng, L. ; Kline, J. ; Frazier, WA; Xu, H.; Peng, H. ; Fu, YX; Xu, MM Cd47 Truicear Imshuí T Scriosadh Cille Idirmheánach Tumor Imdhíonta. Nat. Med. 2015, 21, 1209–1215. [CrossRef] [PubMed]

27. Weiskopf, K. ; Fáinne, AM; Ho, CC; Volkmer, JP; Levin, AM; Volkmer, AK; Ozkan, E.; Fernhoff, NB; van de Rijn, M.; Weissman, IL; et al. Athróga Sirpalpha Innealtóireachta mar Aidiúintí Imdhíonteiripeacha d'Antasubstaintí Frith-ailse. Eolaíocht 2013, 341, 88–91. [CrossRef]

28. Xiong, Z. ; Ohlfest, JR Topical Tá Éifeachtaí Teiripeacha agus Imdhíonmodúlach i gcoinne Tumor Intracranial ag Imiquimod. J. Imdhíonachta. 2011, 34, 264–269. [CrossRef]

29. Kamath, P. ; Darwin, E.; Arora, H. ; Nouri, K. Athbhreithniú ar Teiripe Imiquimod agus Plé ar an mBainistíocht is Fearr ar Carcinomas Basal Cell. Clin. Imscrúdú Drugaí. 2018, 38, 883–899. [CrossRef]

30. Liu, Y. ; Castro Bravo, KM; Liu, J. Seachadadh Drugaí Liposomal Spriocdhírithe: Peirspictíocht Naineolaíochta agus Bithfhisiceach. Nanoscale Horiz. 2021, 6, 78–94. [CrossRef] [PubMed]

31. Farjadian, F. ; Ghasemi, A. ; Gohari, O.; Roointan, A. ; Karimi, M. ; Hamblin, MR Nanopharmaceuticals agus Nanomedicines Ar an Margadh Faoi láthair: Dúshláin agus Deiseanna. Nana-leigheas 2019, 14, 93–126. [CrossRef]

32. Zhou, X. ; Jiao, L. ; Qian, Y.; Dong, Q. ; Sun, Y. ; Zheng, W.; Zhao, W.; Zhai, W.; Qiu, L.; Wu, Y.; et al. Azelnidipine a athshuí mar Dhé-Choiscín ag Díriú ar Bhealaí Cd47/Sirpalpha agus Tigit/Pvr le haghaidh Imdhíon-teiripe Ailse. Bithmhóilíní 2021, 11, 706. [CrossRef]

33. Ni, K. ; Luo, T. ; Culbert, A. ; Kaufmann, M.; Jiang, X. ; Lín, W. Comhsheachadadh Creat Miotal-Orgánach Nanascála Tlr-7 Agonists agus Frith-Cd47 chun Macrophages a mhodhnú agus Imdhíonteiripe Ailse a Mhodhnú. J. Am. Ceimic. Soc. 2020, 142, 12579–12584. [CrossRef]

34. Chen, Q. ; Xu, L. ; Liang, C. ; Wang, C. ; Peng, R. ; Liu, Z. Teiripe Photothermal le Nanacháithníní Imdhíonachta-Aidiúvacha In éineacht le Imshuí Seicphointe le haghaidh Imdhíonteiripe Éifeachtach Ailse. Nat. Cumann. 2016, 7, 13193. [CrossRef] [PubMed]

35. Wei, J. ; Fada, Y. ; Guo, R.; Liu, X. ; Tang, X. ; Rao, J.; Ceann, S.; Zhang, Z.; Li, M. ; He, Q. Ilfheidhmeach Polymeric Micelle-bhunaithe Chemo-Imdhíonteiripe le Imdhíonacht Seicphointe Imdhíonachta do Chóireáil Éifeachtach Ailse Cíche Ortatopic agus Metastatach. Acta Pharm. peaca. B 2019, 9, 819–831. [CrossRef]

36. Huang, SW; Wang, ST; Chang, SH; Chuang, KC; Wang, HY; Cao, JK; Liang, SM; Wu, CY; Kao, SH; Chen, YJ; et al. Feidhmíonn Imiquimod Éifeachtaí Antitumor trí Bhás Cille Imdhíonachta a Spreagadh agus Feabhsaítear é ag an gCoscaire Glycolytic 2-Dé-ocsaglucós. J. Imscrúdú. Deirmól. 2020, 140, 1771–1783.e6. [CrossRef] [PubMed]

37. Wang, B . ; sé, X. ; Zhang, Z.; Zhao, Y.; Feng, W. Metabolism Nana-ábhair in Vivo: Scaipeadh Fola agus Imréiteach Orgán. Acc. Ceimic. Res. 2013, 46, 761–769. [CrossRef]

38. Akhtari, J. ; Rezayat, SM; Teymouri, M.; Alavizadeh, SH; Gheybi, F. ; Badiee, A. ; Jaafari, Díriú MR, Fás Bithdháileach agus Meall a Chosc ar Thréithriú Cúplála Affibody Frith-Her2 le Doxorubicin Liposomal ag Úsáid Tumor Tubo Balb/C Mice Imthacaí. Int. J. Pharm. 2016, 505, 89–95. [CrossRef]

39. Woodle, MC; Papahadjopoulos, D. Ullmhúchán Liposome agus Tréithriú Méid. Modhanna Enzymol. 1989, 171, 193–217. [PubMed]