Déanann Idirghníomhaíochtaí Idir Frithocsaídeoirí Polaiphenolacha Quercetin Agus Naringenin an Sain-Iompar Ceimiceach agus Bitheolaíoch a Bhaineann le Redox dá Meascáin a Dhéanamh Cuid 3

Déan teagmháil le do thoiloscar.xiao@wecistanche.comle haghaidh tuilleadh eolais

Gníomhaíocht frithocsaídeach trí thástáil DPPH.

Rinneadh cinneadh ar ghníomhaíocht frithocsaídeach frithocsaídeoirí imscrúdaithe agus a gcuid meascáin lespeictreafótaiméadrachmeasúnacht ag baint úsáide as DPPH radacach mar a thuairiscítear cheana l3,55. Ar an gcéad dul síos, caolaíodh an tuaslagán stoic de radacach DPPH le meatánól go dtí gurbh ionann an ionsúchán agus 0.9±0.05 ag 515 nm. Ar an dara dul síos, caolaíodh frithocsaídeoirí agus a gcuid meascáin go cuí le 70 faoin gcéad eatánól chun tiúchain a bhaint amach a thagann faoi raon líneach an assayi355. Ansin, rinneadh an tuaslagán DPPH (1 mL) a mheascadh leis na samplaí caolaithe （30 μL） agus tomhaiseadh an t-ionsúcht ag 515 nm tar éis 10 nóiméad ag 37 céim C. Rinneadh na frithghníomhartha go léir i 48-phlátaí tobair. Rinneadh na tomhais ionsúcháin le cabhair ó speictreafótaiméadar TECAN Infinite M200 (Tecan Group Ltd., An Eilvéis). Rinneadh gníomhaíocht frithocsaídeach an tsampla a athríomh go comhéifeacht stoichiometry NG mar a thuairiscítear roimhe seo, le modhnuithe5. Go hachomair, ríomhadh líon na radacach a scavened ag na samplaí tástála bunaithe ar dhlí Beer-Lambert agus ar chomhéifeacht díothaithe molar DPPH tar éis na dtomhas a rinneadh tar éis 10 nóim d’imoibriú idir an tuaslagán frithocsaídeach(í) agus radacach55. Ríomhtar luach n mar thadhlaí den ghaolmhaireacht líneach idir líon na mól DPPH arna sciúradh faoi 1 mL defrithocsaídeach(í)tuaslagáin laistigh de raon tiúchana, ina bhfuil an tiúchan "100 faoin gcéad" sa tuaslagán "stoc" agus gur codán de 100 faoin gcéad iad na tiúchain eile mar atá sainmhínithe ag na fachtóirí caolaithe.

Cliceáil anseo le do thoil chun tuilleadh eolais a fháil

Gníomhaíocht frithocsaídeach trí thoirtmheascadh potentiometric agus voltaiméadracht chuisle difreálach.

Rinneadh poitéinseal laghdaithe caighdeánach(E) do Q agus R a thomhas trí thoirtmheascadh potentiometric (PT) mar a thuairiscítear in áit eile5. I mbeagán focal, díscaoileadh comhdhúile staidéartha agus an toirtmheascadh (K,[Fe(CN)]) i PBS. Ba é an tiúchan de chomhdhúile íonaithe ná 0.3 mg/mL, bhí 0.3 mg/mL de gach comhdhúil i meascáin. Rinneadh na tomhais ag baint úsáide as JENCO 6230 N ORP-146C Trealamh Micri-ocsaídiúcháin-Laghdú (SAM) le cabhair ó leictreoid tagartha AglAgCl (RE) agus leictreoid tomhais platanam. Rinneadh PTanna ag céim 37±0.01 a bhí á chothabháil go príomha ag Ultra Thermostat (PolvScience, SAM). Cuireadh an méid céanna toirtmheasctha leis an anailít agus léadh poitéinseal seasta. Mar thoradh air sin, rinneadh anailís ar chuair toirtmheasctha, E=f(V..), le cabhair ó bhogearraí SigmaPlot Leagan 13.0 (Systat Software Inc., RA) trí na paraiméadair sigmoidal,5-matamatacha a fheistiú. samhail go sonraí turgnamhacha35. Léadh poitéinseal ag pointe coibhéise (PE vs. RE) go díreach ón múnla seo bunaithe ar an bparaiméadar a. Tá sé comhionann le toirt an toirtmheasctha a chuirtear leis ag an bpointe infhillte. Ar deireadh, ríomhadh luachanna PE in aghaidh SHE (acmhainneacht laghdaithe caighdeánach, EO). Bunaíodh an téarma ceartúcháin ar phoitéinseal RE(c) trí thoirtmheascadh ar lánúineacha redox, FeCl.6H, O, agus Na,S, O3.5H,O, arb iad is sainairíonna iad na féidearthachtaí laghdaithe caighdeánacha atá ar eolas.

Ina dhiaidh sin, rinneadh an chumhacht frithocsaídeach (AOP) de chomhdhúile a ndearnadh staidéar orthu agus a gcuid meascáin a thomhas le voltaiméadracht chuisle difreálach (DPV) mar a léiríodh cheana le modhnuithe. Go hachomair, rinneadh tomhais trí úsáid a bhaint as potentiostat Gamry Reference 60{{10}} (Gamry Instruments, USA) ina bhfuil córas trí leictreoid. Cuireadh leictreoid charbóin ghloine (GC, 1.6 mm ar trastomhas), sreang platanam, agus leictreoid AgAgCl (Hydromet SC, an Pholainn) i bhfeidhm mar an obair (WE), an leictreoid chúnta (AE), agus an leictreoid tagartha (RE), faoi seach13. Roimh thurgnaimh, snastaíodh dromchla an WE ag baint úsáide as fionraí alúmana （0.05 μm cáithníní, Buehler, USA） ar pillíní éadach micrea (MF-1040, BASi, USA) agus glanadh ansin le huisce driogtha agus meatánól. Caolaíodh na comhdhúile a ndearnadh staidéar orthu i DMSO agus maolán fosfáit sóidiam (pH=7.4±0.1), mar sin ba é an tiúchan deiridh de mhaolán fosfáite ná {{30}}.1 M sa sampla. Bhí an maolán mar an leictrilít tacaíochta. Ba é tiúchan na gcomhdhúile íonaithe ná 3 mM. Bhí 3 mM de gach comhdhúil i meascáin. D'fhonn deireadh a chur leis an ocsaigin imoibríoch leictriceimiceach, díocsaídíodh na réitigh a ndearnadh staidéar orthu trí shíothlú argóin roimh na tomhais. Taifeadadh voltamagraim DPV do N-.N móide , agus meascáin: ON- agus RN plus sa raon-0.2 go móide 1.3 V, agus do Q agus R sa raon-0.2 go móide 0.6 V vs.RE. Socraíodh an ráta scanadh féideartha de 0.1 V.s ', airde cuisle 0.05 V, agus am cuisle 0.1 s ag 25 ± 0.01 céim.

Rinne bogearraí SigmaPlot Leagan 13.0 voltamagram DPV (Systat Software Inc., RA). Ríomhadh na luachanna AOP in dhá chéim. Mheas na ríomhanna ní hamháin buaicphoitéinseal anodach agus sruth(E,; I,), ach freisin an poitéinseal socraithe agus an sruth tomhaiste ag gach pointe den chuar voltaiméadrach. Cheadaigh sé luachanna níos cruinne a fháil ná na cinn a tuairiscíodh inár gcuid oibre roimhe seo3. Ar an gcéad dul síos, ríomhadh paraiméadar an fhuinnimh fhrithocsaídigh (AOE) de réir Eq. 1:

áit arb é AwE achar dromchla an WE (comhionann le {{0}}.162±0.004 cm' inár staidéar), is poitéinseal socraithe é E in aghaidh RE [V], is a fachtóir ceartúcháin ag cur san áireamh láithreacht an acomhal leachta idir an WE agus RE (anseo 0.103 V), is é I an sruth tomhaiste i gcoinne an sruth cúlra [A], is é - an t-am samplála féideartha [dt=0 .5 s].

Ar an dara dul síos, ríomhadh AOP arna shloinneadh in aonad W cm² bunaithe ar Eq.2∶

áit a bhfuil tt;—an difríocht idir am thús buaic(t) an ocsaídiúcháin agus a foirceann (t).

Chun Awp a chinneadh, rinneadh voltamiméadracht thimthriallach do thuaslagán 1.{{1}MK,[Fe(CN).] in 0.1 M KCl. Ríomhadh an luach seo bunaithe ar chothromóid Randles-Sevcik82 ó fhána an bhuaicsrutha anóidigh mar fheidhm d’fhréamh chearnach an ráta scanadh, I, =f(pi/2). Tomhaiseadh thú ar an mbealach céanna agus a rinneadh i dtoirtmheascadh potentiometric. Ina theannta sin, san obair seo, ba é paraiméadar teirmidinimice an phróisis ocsaídiúcháin buaic-acmhainneacht anodach arna cheartú ag an acomhal leachtach idir WE agus RE (E.,=E.. plus e), agus ghlac paraiméadair cinéiteach an muirear aistrithe ( Q) agus sruth anodic (I,).

Is féidir le Cistanche díolúine a fheabhsú

Cultúr cille. Sa staidéar a cuireadh i láthair, tá líne chill HT29 (colon daonnaadenocarcinoma) ón ATCC a úsáideadh mar mhúnla den stéig dhaonna, Coinníodh na cealla i meán McCoy arna fhorlíonadh leantaibheathaigh(streiptimícíní 100 U/mL agus 100 g/L peinicillin) agus séiream bó féatais (100 mL/L)13. Coinníodh an líne chill HT29 ag 37Cunder 5 faoin gcéad CO, an t-atmaisféar i gorlann cille (Heal Force)3. Fostaíodh an líne chill idir pasáistí 6 agus l1. Rinneadh tástáil ar chealla saothraithe le haghaidh éillithe mycoplasma ag baint úsáide as Trealamh Braite Mycoplasma Uilíoch ó ATCC (SAM).

Measúnú citotocsaineachta. Chun a chinneadh an tionchar íonaithefrithocsaídeoirí(Q, N móide , R, N-) agus a gcuid meascáin (QN-, RN móide ) ar fhás cealla HT29, cuireadh MTTtest i bhfeidhm mar a thuairiscítear níos luaithe3,5. Go hachomair, cuireadh na cealla a bhí ag fás easpónantúil i 96-plátaí saothraithe fíocháin toibreacha (5×10 cealla in aghaidh an tobair i 0.18 mL de mheán) agus fágadh iad a réiteach ar feadh 24 h. ag 37 céim faoi 5 faoin gcéad CO, Ansin, déileáladh leis na cealla ar feadh 6,24 nó 72 h le 0.02 ml de thiúchan éagsúla de na frithocsaídeoirí íona nó dá meascáin3,5. Tuaslagadh na frithocsaídeoirí agus a gcuid meascáin in eatánól (naringenin, naringin agus meascáin—30 faoin gcéad (v/v), quercetin-40 faoin gcéad (v/v), rutin-20 faoin gcéad (v/v). )). Bhí an tiúchan deiridh de chomhdhúile íonaithe sa raon ó 10 nM go 100 uM. Bhí comhchruinnithe coibhéiseacha de gach comhdhúil (10 nM-100 μM) sna meascáin. Ba é an tiúchan deiridh eatánóil sna meáin chultúir ná 2 faoin gcéad (v/v) i gcás rutin, 3 faoin gcéad (v/v) naringenin, naringin, agus meascán chomh maith le 4 faoin gcéad (v/v) quercetin. Tar éis nochtadh 6 agus 24 h, asúiteadh an meán ó na toibreacha agus cuireadh 0.2 mL de mheán úr ina ionad. Goradh na cealla ag 37 céim go dtí 72 h den am goir iomlán13,55. Tar éis 72 h goir, cuireadh 0.05 ml de thuaslagán MTT (4 g/L) leis na tobair go léir agus coinníodh na cealla ar feadh 4 uair eile ag 37 céim C13,5. Ansin, asúiteadh an meán ó toibreacha agus tuaslagadh criostail formazan i 0.05 mL de DMSO. Tomhaiseadh ionsú na dtuaslagán a fuarthas ag 540 nm le cabhair ó léitheoir pláta Infinite M200 TECAN (Tecan Group Ltd, an Eilvéis)15. Rinneadh na cóireálacha mar cheithre mhacasamhlú theicniúla. Rinneadh trí athrá neamhspleácha ar gach cóireáil. Léiríodh tionchar samplaí imscrúdaithe ar fhás cealla HT29 mar faoin gcéad de chosc ar fhás na gcealla atá faoi lé frithocsaídeoirí aonair agus a meascáin i gcomparáid le cealla rialaithe a chóireáiltear leis an tuaslagóir amháin, a measadh a bhfás mar 100 faoin gcéad 13,55.

CAA (gníomhaíocht cheallacha frithocsaídeacha) measúnacht. Baineadh úsáid as measúnacht CAA (The OxiSelect Cell Biolabs, Inc. USA) chun gníomhaíocht frithocsaídeach cheallacha na gcomhdhúile ina n-aonar (O, N móide , R, N-) agus meascáin (ON-, RN plus) a mheas i gcealla HT29 mar a thuairiscítear níos luaithe35. Síolaíodh na cealla a bhí ag fás go heaspónantúil i 96-phlátaí dubha saothraithe fíocháin tobair le íochtair trédhearcacha le haghaidh tomhais fhluaraiseachta (3×104 cill in aghaidh an tobair i 0.2 ml de mheán) agus rinneadh iad fágtha chun socrú ar feadh 24 h ag 37 céim faoi 5 faoin gcéad CO,i3.55. Rinneadh na frithocsaídeoirí go léir a thuaslagadh in eatánól 1{0 faoin gcéad. Cóireáladh na cealla ansin le tuaslagán caolaithe de 2',7'-dichlorofluorescein diacetate (0.05 mL)a sholáthar leis an trealamh, agus an méid céanna de thiúchan difriúla samplaí frithocsaídeacha ar feadh 1, 3, nó 6 h. Bhí na tiúchana deiridh de chomhdhúile íonaithe sa raon ó 1 go 1{00 uM. Bhí comhchruinnithe coibhéiseacha de gach comhdhúil(1-100uM) sna meascáin. Cóireáladh na cealla rialaithe le 10 faoin gcéad eatánól amháin (v/v). Ba é an tiúchan deiridh eatánóil i meáin chultúir ná 5 faoin gcéad (v/v). Rinneadh na cóireálacha go léir i dtrí mhacasamhlú theicniúla agus rinneadh trí thurgnamh neamhspleácha. Rinneadh céimeanna ina dhiaidh sin de réir mholtaí an mhonaróra (https://www.cellbiolabs.com). Rinneadh ríomhanna mar a thuairiscítear níos luaithe, Éifeachtaí géineatocsaineacha. Chun na héifeachtaí géineatocsaineacha a léiríonn frithocsaídeoirí aonair (O, N móide , RN-) agus a meascáin (ON-, RN móide) i gcealla HT29 a chinneadh, cuireadh nós imeachta measúnaithe cóiméid i bhfeidhm mar a thuairiscítear roimhe seo. Síolaíodh na cealla HT29 a bhí ag fás go heaspónantúil i 24-plátaí saothraithe fíocháin tobair (10 cealla céime in aghaidh an tobair i 1.8 mL de mheán) agus ceadaíodh dóibh socrú ar feadh 24 h ag 37 céim faoi 5 faoin gcéad CO, 55, Ansin, déileáladh leis na cealla ar feadh 24h le 0.2 mL de thiúchan éagsúla de na frithocsaídeoirí ina n-aonar nó i meascáin. Bhí an tiúchan deiridh de chomhdhúile íonaithe sa raon ó 1 go 100 uM. Bhí tiúchain choibhéiseacha de gach comhdhúil (1-100 uM) sna meascáin. Ba é an tiúchan eatánóil deiridh sa mheán cultúir ná 3 faoin gcéad (v/v). Cuireadh cóireáil ar na cealla a úsáideadh mar rialuithe diúltacha le tuaslagóir amháin. Tar éis am cóireála, asúiteadh an meán ó na toibreacha agus nite na cealla le 0.5 mL PBS. Ansin scoiteadh na cealla le 0.2 mL de thuaslagán trypsin (0.5 g/L)55 Cuireadh stop le gníomhaíocht trypsin trí 1.8 ml de mheán fáis iomlán a chur le gach tobar. Rinneadh na cealla a ath-fhionraí, a chomhaireamh, agus a chomhdháileadh i bhfeadáin 1.5 ml (30 × 103³ cealla in aghaidh an fheadáin). Lártheifníodh an fionraí cille (100 × g, 5 min, 4 céim ). Niteadh na millíní cille le l mL de PBS agus lártheifneoiriú arís (100 × g, 5 min, 4 céim ） 5. Ansin, cuireadh PBS i leataobh agus cuireadh na cealla ar fionraí arís i 150 μL de 0.5 faoin gcéad LMP agarose in uisce réamh- téite go 42 céim C agus cuireadh 40 μL den mheascán seo mar dhá spota ar sleamhnán micreascóp réamh-brataithe le 1 faoin gcéad agarose leáphointe gnáth (NMP agarose).Clúdaíodh na sleamhnáin le clúdaigh clúdaigh.Ceadaíodh an agarose a shocrú le na sleamhnáin micreascóp a chur ar thráidire reoite ar feadh 5 nóiméad ar a laghad 5. Ullmhaíodh trí shleamhnán le dhá athrá ar gach ceann acu le haghaidh gach tiúchan de na substaintí a tástáladh Tar éis lysis thar oíche i maolán alcaileach ard salainn (2.5 M NaCl,0.1 M EDTA ,0.01 M Tris, 1 faoin gcéad Triton X100,pH10), áiríodh na sleamhnáin isteach in ardán leictreafóiréis GT Fo-Rad Bith-Rad (RA), clúdaithe le maolán fuar leictreafóiréis (0.3 M NaOH, 1 mM EDTA, pH 13) agus ceadaíodh crómatin a scaoileadh ar feadh 25 nóiméad roimh an leictreafóiréis Rinneadh leictreafóiréis ag 26 V agus 300 mA(0.75 V/cm) ar feadh 30 nóiméad sa dorchadas ag 4-8 céim . Tar éis an chéim seo, nitear na sleamhnáin ar dtús ag baint úsáide as PBS agus ansin uisce. Ina dhiaidh sin, dathaíodh an DNA le SybrGreen i maolán TE (0.1 M Trizma-Base, EDTA 1 mM, pH 7.5) ar feadh 20 nóiméad~. Tar éis staining, nitear na sleamhnáin le huisce driogtha ar feadh 5 min. Rinneadh “cóiméid” DNA a anailísiú faoi mhicreascóp fluaraiseachta (Zeiss ImagerZ2, SAM) mar aon le córas ríomhairithe um scanadh sleamhnáin (Metafer4, an Ghearmáin). Is éard a bhí i gceist le hanailís cóiméid ná 200 núicléas as a chéile a chomhaireamh in aghaidh an tsampla5. Léiríodh géineatocsaineacht samplaí anailísithe mar an céatadán DNA in eireaball an chóiméid. Rinneadh trí mhacasamhlú neamhspleácha de gach cóireáil.

Is féidir le Cistanche díolúine a fheabhsú

Meitilation DNA domhanda.

For the determination of global methylation of DNA, a modified comet assay procedure was developed. Methylation sensitive comet assay was performed according to Wentzel's procedure with significant modifications. The cells were seeded in 6-well tissue culture plates(4×105 cells per well in 3.6 mL of medium) and were allowed to settle for 24 h at 37°C under 5%CO,Then, the cells were treated with 0.4 mL, of different concentrations of the tested antioxidants or their mixtures for 24 h at 37C. The final concentrations of individual compounds and solvents were the same as used for genotoxic effect assessment. After incubation time, the medium was aspirated from the wells and the cells were washed with 2 mL of PBS. The cells were detached using 0.4 mL of trypsin solution (0.5 g/L). Then,3.6 mL of medium was added to each well. The cells were re-suspended, counted, and aliquoted into 1.5 mL tubes(30×10 cells per tube). The cell suspension was centrifuged (100×g,5 min, 4°C). The cell pellets were washed with 1 mL of PBS and centrifuged again(100×g 5 min,4℃C）.PBS was discarded and the cell pellet was re-suspended in 100μL of 1%LMP agarose in water pre-warmed to 45 °C. Then,40 μL of this mixture was placed as two spots on a microscope slide pre-coated with 1%normal melting point agarose(NMP agarose)5. The slides were then covered with coverslips and left to set on an ice-cold tray for at least 5 min to solidify agarose5. Each treatment embraced a set of 3 microscope slides. After overnight lysis in a high salt alkaline buffer(2.5 M NaCl, 0.1 M EDTA, 0.01 M Tris,1% Triton X100, pH 10), the slides were washed twice with water>5. Díríodh crómatin pacáilte go docht trí na núicléis a chóireáil le tuaslagán 1.5 mM de phróitéineas K (0.2 mL in aghaidh an tsleamhnáin)3. Clúdaíodh na sleamhnáin le parafilm, cuireadh iad i gcoimeádán plaisteach líneáilte le fíochán tais, fágtar iad ar feadh 10 min ag 37 céim, ansin nite le huisce3. Ar an mbealach seo, ullmhaíodh núicléidí le haghaidh díleá le endonucleases srianta (Halla agus MspI). Aithníonn an dá einsím an seicheamh srianta céanna (5'-CCGG-3') ach léiríonn siad íogaireacht dhifriúil i leith cíteaisín meitiolaithe. Toimhdítear nach ndíolann HpalI ach seichimh neamh-mheitilaithe. Is féidir le MspI seichimh neamh-mheitilaithe a scoilt chomh maith le seichimh lánmheitilaithe. Mar sin, léirítear na leibhéil choibhneasta meitilation DNA den seicheamh CpG mar an difríocht idir an méid domhanda DNA laistigh den eireaball cóiméid a breathnaíodh le díleá MspI agus núicléidí díleáite HpalI. Chun coinníollacha cuí a chruthú le haghaidh díleá einsímeach.{{2{0}}.2 ml de mhaolán Tango caolaithe le huisce de ghrád mhóilíneach i gcóimheas 1:9(v/v) cuireadh i bhfeidhm ar gach sleamhnán sa tacar. Clúdaíodh na sleamhnáin le parascannán, cuireadh iad isteach i gcoimeádán plaisteach a bhí líneáilte le fíochán tais, agus fágadh iad ar feadh 10 nóiméad ag 37 céim Ce. Ansin, baineadh barrachas an mhaoláin. Caitheadh ​​go difriúil le gach ceann de na trí shleamhnán sa tsraith. Ar an gcéad sleamhnán (rialú), níor cuireadh ach 0.15 ml de mhaolán caolaithe Tango i bhfeidhm. Cóireáladh na núicléis leabaithe agarose ar an dara sleamhnán le 0.15 ml d'einsím Hall (0.37 μunits), agus cuireadh an méid céanna MspI (0.26 μunits) leis an tríú sleamhnán. Ullmhaíodh na réitigh einsíme ag baint úsáide as maolán Tango caolaithe. Clúdaíodh na sleamhnáin le parafilm agus cuireadh isteach i gcoimeádán plaisteach tais iad. Rinneadh an díleá einsímeach ar feadh 45 nóiméad ag 37 céim. Tar éis díleá, nitear na sleamhnáin faoi dhó le huisce. Rinneadh céimeanna breise den mheasúnacht comet, mar leictreafóiréis agus staining DNA, mar a thuairiscítear san alt "Meitilation DNA Domhanda". Rinneadh anailís ar "chóiméid" DNA faoi mhicreascóp fluaraiseachta (Zeiss ImagerZ2, SAM) mar aon le córas ríomhairithe um scanadh sleamhnáin (Metafer4, an Ghearmáin). Rinneadh anailís ar chóiméid le cabhair ó bhogearraí scórála Cóiméad (SAM) agus b’éigean 100 núicléas in aghaidh an tsampla a chomhaireamh. Ba thomhas ar ilroinnt DNA an meánchéatadán DNA san eireaball cóiméid. Chun an DNA domhanda a ríomhmeitilation(meitilation CpG faoin gcéad), baineadh úsáid as an gcothromóid seo a leanas: faoin gcéad meitiliú CpG=100—Hpal/MspI×100, áit arb é Hpal/MspI an cóimheas idir an céatadán DNA in eireaball cóiméid an núiclóid díleáite le HpalII agus an DNA céatadán in eireaball cóiméid de núicléidí díleáite le Mspl85. Tugadh cuntas ar dhéantáin damáiste DNA tríd an gcéatadán DNA in eireaball an tsampla rialaithe a dhealú ó na luachanna a fuarthas do na samplaí a díleáíodh le heinsímí srianta. Rinneadh trí athrá neamhspleácha de gach turgnamh.

Anailís microarray.

Tá anailís ghéanómach déanta mar a léiríodh roimhe seo i355, síolaíodh cealla HT29 i 24-plátaí saothraithe fíocháin tobair (105 cealla in aghaidh an tobair i 1.8 mL de mheán) agus ceadaíodh iad a shocrú ar feadh 24 h ag 37 céim faoi 5 faoin gcéad CO, Ansin, déileáladh leis na cealla ar feadh 24 h le 0.2 ml de thiúchan éagsúla de na frithocsaídeoirí ina n-aonar (Q, N-) nó sa mheascán (QN-). Bhí na tiúchain deiridh de chomhdhúile imscrúdaithe sa raon ó 1 go 10 uM. Bhí tiúchan coibhéiseach de gach comhdhúil sa mheascán. Cuireadh cóireáil ar na cealla a úsáideadh mar rialuithe diúltacha leis an tuaslagóir amháin. Ba é an tiúchan deiridh eatánóil i meáin chultúir ná 3 faoin gcéad (v / y). Leithlisiú RNA. Rinneadh tras-scríobh droim ar ais agus PCR fíor-ama d'eagar comhdhéanta de 84 géinte a raibh baint acu le freagairt frithocsaídeach chomh maith le hanailís sonraí mar a thuairiscítear níos luaithe. Rinneadh trí athrá neamhspleácha ar gach cóireáil ar chealla.

Anailís staitistiúil.

Sloinntear na luachanna go léir mar mheán±SD de thrí thurgnamh neamhspleách mura luaitear a mhalairt. Scrúdaíodh an tábhacht staitistiúil a bhaineann le cinntí ar ghníomhaíocht frithocsaídeach i gcóras saor ó chealla ag baint úsáide as measúnú DPV agus DPPH chomh maith le samhlacha ceallacha a fuarthas trí thástáil CAA le tástáil neamhphéireáilte Tukey (p Níos lú ná nó cothrom le 0.{{ 6}}5). Scrúdaíodh torthaí géineatocsaineachta agus meitile DNA domhanda arna anailísiú ag measúnachtaí cóiméid ag ANOVA aontreo le tástáil iar-hoc Dunnett. Rinneadh na hanailísí staitistiúla seo trí úsáid a bhaint as pacáiste bogearraí Prism 4.0 (GraphPad Software, Inc., USA). Rinneadh measúnú freisin ar thábhacht staitistiúil na n-athruithe ar léiriú géine idir samplaí agus rialuithe trí thástáil t Mic Léinn gan péireáil do gach géine spéise ag baint úsáide as GenGlobe Data Analysis Center (Qiagen, SAM). Socraíodh an leibhéal tábhachta staidrimh agp Níos lú ná nó cothrom le 0.05.

Baintear an t-alt seo aswww.nature.com/scientificreports