Meitibileacht In Vitro Agus in Vivo As Sliocht Cistanche Tubulosa i bhFrancaigh Dhúlagracha de chuid Strus Dothuartha Gnáth agus Ainsealach

Teagmháil: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Ríomhphost:audrey.hu@wecistanche.com

Yang Li, et al

Teibí

Deimhníodh le déanaí go bhfuil éifeacht frithdhúlagráin ag Cistanche tubulosa, speiceas amháin de Cistanches Herba, le francaigh inbhraite strus dothuartha (CUS) trí homeostasis an mhicribhiota intestinal a athchóiriú. Sa pháipéar seo, tá sé mar aidhm againn iniúchadh a dhéanamh ar phróifíl meitibileach C. tubulosa i bhfrancaigh depressive gnáth agus CUS-spreagtha in vitro agus in vivo.Sliocht Cistanche tubulosa(CTE) i bhfrancaigh gnáth agus CUS araon. Ag an am céanna, meitibileacht in vivo de CTE(Sliocht Cistanche tubulosa)i bhfrancaigh normálta agus depressed rinneadh imscrúdú freisin i bhfual francach agus feces. Bhí tréithe iomlána 20 agus 26 meitibilít ó in vitro agus in vivometabolism i bhfrancaigh gnáth agus CUS, faoi seach. CTE(Sliocht Cistanche tubulosa)a mheitibileadh chuig aglycóin agus táirgí díghrádaithe de gliocóisídí feanileatánóideach (PhGs) agus gliocóisídí iridoid cibé acu trí ghnáthmhicribiota stéigeach francach nó depressed in vitro. Ba iad meitibilítí Chéim II na n-aglycóin agus táirgí díghrádaithe PhGanna agus gliocóisídí iridoid na príomh-mheitibilítí i bhfual francach agus feces. Ina theannta sin, bhí an cumas meitibileach chun gliocóisídí tánaisteacha agus aglycóin a ghiniúint i micribiota stéigeach francach dúlagair i bhfad níos laige ná mar a bhí i ngnáth-mhicriobiota stéigeach francach, a cuireadh i leith na hidrealasaí glycosíde neamhord a tháirgtear trí mhiocróibít intestinal i bhfrancaigh le dúlagar CUS. Leag torthaí an staidéir seo an bunús le tuiscint a fháil ar phróiseas meitibileach agus ar mheicníocht theiripeach airí frithdhúlagráin CTE.

Eochairfhocail: Cistanche tubulosa, DúlagarMeitibileacht, In vitro, In vivo, Micribhiota stéigeach

1. Réamhrá

Taifeadtar go hoifigiúil Cistanches Herba mar an gas súiteach triomaithe de Cistanche deserticola (YC Ma) agus C. tubulosa (Schrenk), a úsáidtear chun easnamh duáin, impotence, infertility baineann, morbidleucorrhea, metrorrhagia profuse, agus constipation senile [1] a chóireáil. Tá sé léirithe ag staidéir chógaseolaíochta nua-aimseartha go bhfuil gníomhaíochtaí bitheolaíocha éagsúla ag Cistanches Herba, mar shampla frith-néar-ghlúin, imdhíon-rialú, agus frith-athlasadh [2,3]. Tá sé sin fíoraithe ag ár n-imscrúduithe roimhe seoSliocht Cistanche tubulosa(CTE), atá comhdhéanta de 48.6 faoin gcéad de gliocóisídí feanileatánóideach (PhGs), 6.9 faoin gcéad gliocóisídí iridoid, agus20.0 faoin gcéad iomlán sacairídí, d’fhéadfadh maolú suntasach a dhéanamh ar na hairíonna dúlagair de strus dothuartha ainsealach (CUS) - francaigh dúlagair de bharr homeostasis de mhicribhiota gut a athchóiriú [4]. Léiríonn staidéir le déanaí go raibh baint ag athruithe ar chomhdhéanamh miocróib intestinal le forbairt agus dul chun cinn an dúlagar [5,6]. Bhí suaitheadh ​​suntasach ar líon coibhneasta na ngéineas miocróbach i bhfrancaigh múnla CUSdepressive i gcomparáid le gnáthrialuithe [7]. In othair dúlagar, rinneadh athrú suntasach freisin ar éagsúlacht agus ar shaibhreas na miocróib intestinal [8]. Ina theannta sin, measadh go raibh comhdhúile éagsúla lena n-áirítear gliocóisídí feinileatánóideach (PhGs) agus gliocóisídí iridoid mar phríomh-chomhábhair Cistanches Herba [2,3], a meitibilíodh go héasca ina gliocóisídí tánaisteacha agus ina n-aglycóin lena n-áirítear hidroxytyrosol (HT), 3,4-déhidroxyphenethyl gliocóisíd, aigéad géiniposideach díghliccosilated, etc. ag micribhiota intestinal an duine.Is fusa na meitibilítí seo a ionsú tríd an stéig agus déanann siad gníomhaíocht bhitheolaíoch i gcomhréir leis an gcomhpháirt fhréamhshamhail[9–11]. Mar sin, creidimid go mbeidh tionchar dosheachanta ag suaitheadh ​​struchtúr microflora intestinal ar mheitibileacht na gcógas traidisiúnta Síneach ó bhéal (TCManna) sa chonair gastrointestinal, le linn an dúlagar a tharlaíonn agus a fhorbairt, chomh maith le cur isteach ar staid fiseolaíoch an óstaigh. Tagann an chuid is mó de shonraí meitibileach Cistanches Herba ó staidéir mheitibileach ar ainmhithe sláintiúla[12–15]. Dá bhrí sin, bheadh ​​​​sé níos suntasaí cliniciúla imscrúdú a dhéanamh ar phróifíl meitibileach CTE(Sliocht Cistanche tubulosa)sa staid phaiteolaíoch maidir lena chomhpháirteanna bithghníomhacha a shoiléiriú agus an mheicníocht gníomhaíochta dá éifeachtúlacht frithdhúlagráin a thuiscint.

Sa staidéar reatha, tá sé mar aidhm againn próifílí meitibileach CTE a shainiú(Sliocht Cistanche tubulosa)i bhfrancaigh múnla dúlagair sláintiúil agus CUS-spreagtha ag crómatagrafaíocht leacht ultra-fheidhmíochta mais-speictriméadracht am-eitilte (UPLC-Q-TOF-MS). Baineadh úsáid as sú gastric, sreabhán intestinal, agus micreabiota de ghnáth-fhrancaigh phaiteolaíocha agus dúlagair chun próiseas meitibileach CTE a insamhail.(Sliocht Cistanche tubulosa)sa chonair gastrointestinal in vitro, go neamhspleách agus go seicheamhach. Déantar meitibilítí in vivo a shoiléiriú freisin tar éis CTE a thabhairt ó bhéal(Sliocht Cistanche tubulosa)i bhfrancaigh gnáth agus CUS. Soláthraíonn an staidéar seo léargais nua ar mheitibileacht agus ar mheitibilítí gníomhacha CTE(Sliocht Cistanche tubulosa)le haghaidh dúlagar.

2. Ábhar agus modhanna

2.1. Ábhar

Bailíodh gais triomaithe C. tubulosa ó Chontae Hetian (Xinjiang, an tSín). Dheimhnigh an tOllamh Xiaobo Li na samplaí dearbháin agus cuireadh i dtaisce iad ag luibhiam Scoil na Cógaisíochta, Ollscoil Shanghai Jiao Tong (Shanghai, an tSín). Baineadh úsáid as an modh eastósctha mar a shonraítear inár bhfoilseachán roimhe seo [4]. Tá anSliocht Cistanche tubulosa(CTE) Stóráladh samplaí ag 4 chéim agus aththuaslagadh iad le huisce steiriúil roimh úsáid. Réitigh uisce steiriúla an CTE(Sliocht Cistanche tubulosa)Rinneadh an sampla a scagadh ansin trí membrane 0.22 μm, agus bailíodh na scagáití i bhfeadáin steiriúla.

Chuir saotharlann an Dr Pengfei Tu, PekingUniversity (Beijing, an tSín) Echinacoside ar fáil. Ceannaíodh Acteoside, isoacteoside, 2′-acetylacteoside, agus cistanoside A ó Sichuan Weikeqi BiologicalTechnology Co., Ltd. (Chengdu, an tSín). Ceannaíodh hidroxytyrosol, aigéad caiféin, 3,4-aigéad déhidroxybenzenepropionic, 3-aigéad hidroxyphenylpropionic,agus 3-aigéad feinilpropionic ó Aladdin IndustrialInc. (Shanghai, an tSín). Socraíodh íonacht gach comhpháirte a bheith > 95 faoin gcéad ag HPLC-UV. Ceannaíodh aicéataitrile de ghrád HPLC óMerck (Darmstadt, an Ghearmáin). Ullmhaíodh uisce dí-ianaithe as uisce driogtha ag baint úsáide as córas íonú uisce Milli-Q (Millipore, Bedford, MA, SAM). Ba ghrád anailíse iad na himoibrithe agus na ceimiceáin eile go léir a úsáideadh.

2.2. Turgnaimh ainmhithe

Fuarthas francaigh fireann Sprague-Dawley (200 ± 20 g) ó Beijing Vital River Laboratory Technology Technology Company (Beijing, an tSín), agus iad lonnaithe i Lárionad Ainmhithe Saotharlainne Ollscoil Shanghai JiaoTong (Shanghai, an tSín). Ba iad na hainmhithe grúpa tí faoi theocht an tseomra rialaithe (25 ± 2 céim , 55 ± 10 faoin gcéad taiseachas coibhneasta) le timthriall éadrom-dorcha 12:12 h. Ceadaíodh rochtain saor in aisce do na francaigh ar chow agus uisce na bhfrancach saotharlainne rialta ar feadh seachtaine amháin. D'fhaomh Coiste Eitice Ainmhithe Ollscoil Shanghai Jiao Tong (Shanghai, an tSín) na háiseanna agus na prótacail ainmhithe.

Tar éis acclimation seachtain amháin, roinneadh dhá cheann déag de francaigh naive go randamach ina dhá ghrúpa (n=6), an grúpa rialaithe agus an grúpa strus dothuartha ainsealach (CUS). Forbraíodh francaigh CUS mar a bhí sa tuarascáil roimhe seo [4], a cuireadh faoi éagsúlacht strusóirí: whitenoise (100 dB) ar feadh 1 h, soilsiú stroboscópach íseal-déine thar oíche (120 flashes / nóim), díothacht uisce ar feadh 24 h, folamh buidéil uisce ar feadh 1 h (tar éis díothacht uisce), díothacht bia ar feadh 24 h, srianadh fisiceach (1−2 h), snámha éigean (5 min), cage salach ar feadh 24 h (200 ml uisce i 100 g leaba min sáibh), pinch eireaball ( 1 min), turraing ar feadh 30 nóiméad, tilt cage 45 céim ar feadh 24 h, agus soilsiú thar oíche (12 h). Cuireadh strusóirí i bhfeidhm go leanúnach agus go randamach ar feadh 4 seachtaine, déantar cur síos ar an socrú mionsonraithe i dTábla S1. Tar éis 4 seachtaine de strus, rinneadh an tástáil sucrosepreference, an tástáil réimse oscailte, agus an tástáil bheathú faoi chois núíosach mar a thuairiscítear roimhe seo [4]. Tá imlíne an CUS agus an tástáil iompraíochta léirithe i bhFíor S1. Tar éis tástálacha iompraíochta, fuarthas ar a laghad 4 fecalpellets ó gach francach agus cuireadh iad i bhfeadáin chónúla steiriúla le haghaidh anailís in vitro ar CTE(Sliocht Cistanche tubulosa)meitibileacht.

2.3. Meitibileacht gastrointestinal de CTE(Sliocht Cistanche tubulosa)de réir gnáth agus CUS francach in vitro

2.3.1. Metabolism an CTE(Sliocht Cistanche tubulosa)i súnna gastric agus intestinal insamhladh

Caoga milleagram CTE(Sliocht Cistanche tubulosa)Cuireadh le 10 ml de sú gastric insamhladh agus sú intestinal, faoi seach. Ansin CTE(Sliocht Cistanche tubulosa)goradh ag 37 céim ar feadh 4 u i sú gastric agus 6 h i sú intestinal. Múchadh an meascán saothraithe (1 mL) le 3 ml de n-butanol uisce-sáithithe láithreach ag 0 agus 4 h i sú gastrach, agus ag 0 agus 6 h i sú intestinal. Bhí modh próiseála an tsampla a úsáideadh mar a thuairiscítear roimhe seo [9].

2.3.2. Metabolism an CTE(Sliocht Cistanche tubulosa)ag gnáth agus CUS miocróib stéigeach francach

Meascaíodh samplaí fecal úra gnáth agus CUS francach ar dtús agus rinneadh iad a mheascadh le 25 uair an méid brat GAM. Baineadh dríodar trí scagachán trí phíosa uige. Goradh an fionraí ansin ag 37 céim i gorlann anaeróbach inar cuireadh meascán gáis (H2 5 faoin gcéad , CO2 10 faoin gcéad , N2 85 faoin gcéad ), in ionad an aeir. Cuireadh caoga milleagram CTE le 5 mL gnáth agus fionraí fecal francach CUS ar leithligh, agus goraíodh an fionraí ag 37 céim ar feadh 48 h. Baineadh an meascán saothraithe agus eastósctar le huisce-sáithithe n butanol ag 0, 12, 24, agus 48 h. Rinneadh cur síos aspreviously ar an modh próiseála samplach [9].

2.3.3. Meitibileacht sheicheamhach de CTE(Sliocht Cistanche tubulosa)ag an sú gastric, sú stéigeach, gnáth agus CUS micribiota stéigeach francach

Ar dtús, 100 mg de CTE(Sliocht Cistanche tubulosa)cuireadh le 1{{10}} mL sú gastrach insamhladh agus gor é ag 37 céim ar feadh 4 uair. Múchadh an t-imoibriú iomlán faoi 3 huaire toirt an uiscesháithithe n-butanol, agus lártheifneoirithe ag3000 rpm ar feadh 15 nóiméad, agus galú an tsruthán faoi sruth nítrigine ina dhiaidh sin. gáis ag 37 céim . Ar an dara dul síos, rinneadh an t-iarmhar a ath-thuaslagadh i 0.4 mL d'uisce steiriúla, curtha le 8 ml de sú insamhladh intestinal, agus gor ag 37 céim ar feadh 6 h. Ullmhaíodh an sampla le sú gastric ar an mbealach céanna. Ar deireadh, rinneadh an t-iarmhar a ath-thuaslagadh in 0.3 ml d'uisce steiriúil, curtha le 6 ml gnáthfhionraí francacha CUS agus fecal faoi seach, agus é a ghoradh ag 37 céim ar feadh 48 h i gorlann anaeróbach. Múchadh millilítear amháin den imoibriú le 3 ml de n-butanol uisce-sáithithe láithreach ag 0 agus 4 h i sú gastrach, ag 0 agus 6 h i sú intestinal, agus ag 0, 12, 24, agus 48 h i micribiota intestinal francach. . Próiseáladh an sampla mar an gcéanna CTE(Sliocht Cistanche tubulosa)i sú gastric insamhladh.

2.4. Metabolism an CTE(Sliocht Cistanche tubulosa)de réir gnáth agus CUS francach in vivo

Cuireadh gach francach sa dá ghrúpa i gcliabhán meitibileach aonair ansin. Tar éis troscadh thar oíche nár cheadaigh ach rochtain saor in aisce ar uisce, tugadh 2 ml uisce ó bhéal do gach francach trí fheadán agastrach. Bailíodh samplaí fuail agus fecal bán ó gach francach ó 0 h go 12 h. Thairis sin, CTE(Sliocht Cistanche tubulosa)(400 mg/kg) á riaradh ag gavage. Bailíodh samplaí fuail agus fecal ó 0 h go 24 h. Stóráladh gach sampla fuail agus fecal ag −80 céim láithreach.

Rinneadh réamhchóireáil ar shamplaí fual agus fecal ó ghnáth-fhrancach agus CUS a réamhchóireáil [12]. RinneUPLC-Q-TOF-MS anailís ar na samplaí go léir a tháinig as.

2.5. Modh anailíse

Rinneadh UPLC ar chóras Waters ACQUITY UPLC (WatersCorp., Milford, MA, USA) le colún ACQUITY UPLC BEH C18(100 mm × 2.1 mm id, 1.7 μm, Waters Corp. , SAM) trí éalú grádán a úsáideann {{10}}.1 faoin gcéad d'aigéad formach aicéataitrile (A) agus 0.1 faoin gcéad d'aigéad formach in uisce(B) ag ráta sreafa 0.4 mL/nóiméad . Ba é an phróifíl grádán ná: 0–5 nóim (A:5–20 faoin gcéad ), 5–7.5 nóim (A: 20–30 faoin gcéad ), 7.5–10 nóim (A: 30–70 faoin gcéad ), 10–11 nóim(A : 70-100 faoin gcéad ), agus bhí ar siúl ar feadh 1.5 nóiméad. Athchúrsáladh an grádán go 5 faoin gcéad i 0.5 nóiméad agus coinníodh é ar feadh 2.5 nóiméad don chéad rith eile. Ba é 3 μL an toirt insteallta. Socraíodh teocht an oigheann colún go 35 céim.

Baineadh úsáid as mais-speictriméadracht Waters Vion IMS (Waters Corp., Baile na nGallóglach, MA, SAM). Rinneadh ianúchán sa mhodh electrospray diúltach (ESI -). Ba iad seo a leanas na paraiméadair MS: voltas ribeach, −2.0 kV; voltas cón, 20 V; teocht foinse, 120 céim ; teocht díothaithe, 500 céim ; sreafaí gáis de thuaslagadh cónóide, 50 agus 1000 L/h, faoi seach. Le haghaidh olltomhais chruinn, baineadh úsáid as leucine-enkephalin mar mhais ghlais chun ian [M–H] – a ghiniúint (m/z 554.2615). Rinneadh turgnamh MSE (Mais-SpeictriméadrachtArdaithe Fuinnimh) in dhá fheidhm scanadh mar seo a leanas: feidhm 1 (ísealfhuinneamh): m/z 50–1000, 0.25 s am scanadh, moill idirscan 0.02 s, fuinneamh imbhuailte 6 eV; feidhm 2 (ardfhuinneamh): m/z50–1000, 0.25 s am scanadh, moill idirscanta 0.02 s, rampa fuinnimh imbhuailte 20–45 eV.

2.6. Próiseáil sonraí

Próiseáladh na sonraí trí úsáid a bhaint as bogearraí UNIFI 1.8.1 (Waters Corp.,Milford, MA, USA) chun meitibilítí a shainaithint laistigh de na sonraí amha lánscála cruinn a bailíodh trí MSE. Aithníodh comhdhúile bunaithe ar mhais chruinn, blúirí i mais-speictriméadracht ardfhuinnimh. Socraíodh an tairseach déine mar 100.0 comhaireamh. Socraíodh sainaithint an sprioc, lamháltas meaitseála blúirí, agus paraiméadair eile go huathoibríoch.

3. Torthaí

3.1. Athruithe iompraíochta sa francach dúlagar spreagtha CUS

Rinneadh measúnú ar na francaigh a raibh comharthaí dúlagair CUS-spreagtha orthu trí thástálacha iompraíochta lena n-áirítear tástáil tosaíochta siúcrós, tástáil allamuigh oscailte, agus tástáil chothaithe faoi chois na nua-aimseartha. Léirigh t-tástáil an mhic léinn go raibh an rogha shiúcrós i dtástáil tosaíochta shiúcrós (p < .001),="" fad="" iomlán="" na="" tástála="" páirce="" oscailte="" (p="">< .001),="" agus="" an="" fhola="" chun="" ithe="" i="" dtástáil="" cothaithe="" úrnuachta="" faoi="" chois="" (p="">< .01)="" suntasach.="" difriúil="" i="" gcomparáid="" leis="" an="" ngrúpa="" rialaithe="" tar="" éis="" 4-seachtaine="" cóireála="" cus="" (fíor="" 1).="" thug="" na="" torthaí="" seo="" le="" fios="" gur="" forbraíodh="" an="" tsamhail="" struis="" ainsealach="" dothuartha="" go="">

3.2. Tréithriú comhábhair cheimiceacha CTE(Sliocht Cistanche tubulosa)

Anailís chuimsitheach ar chomhábhair fhréamhshamhail CTE(Sliocht Cistanche tubulosa)a rinne UPLC-Q-TOF-MS. San iomlán, 27 toghthóirí ó CTE(Sliocht Cistanche tubulosa)braitheadh ​​​​agus tréithe trialacha, lena n-áirítear 20 PhG, 5 iridoids agus gliocóisídí iridoid, agus 2 olagaishiúicrídí. Tá faisnéis mhionsonraithe lena n-áirítear am coinneála, MS cruinn, agus iain bhlúire MS/MS liostaithe in Faisnéis Tacaíochta (Tábla S2) chun léargas a thabhairt ar struchtúr na gcomhábhar ceimiceach seo. Taispeánadh iancrómatán iomlán UPLC-Q-TOF-MS (TIC) de CTE i bhFíor S2.

3.3. Meitibileacht gastrointestinal de CTE(Sliocht Cistanche tubulosa)de réir gnáth agus CUS francach in vitro

Sa staidéar seo, na meitibilítí féideartha CTE(Sliocht Cistanche tubulosa)de réir gnáth agus braitheadh ​​CUSrats in vitro ó na TICanna agus sainaithníodh iad le meascán de chomhdhéanaimh eiliminteacha agus mais-speictream blúirí MS/MS tar éis iad a chur i gcomparáid leis na samplaí rialaithe. Gach ceann de na meitibilítí ó CTE(Sliocht Cistanche tubulosa)i súnna gastracha agus stéigeacha insamhlaithe, tá gnáthmhicreabiota stéigeach francach agus CUS liostaithe i dTábla 1.

3.3.1. Metabolism an CTE(Sliocht Cistanche tubulosa)i súnna gastric agus intestinal insamhladh

Seacht meitibilít CTE(Sliocht Cistanche tubulosa)i sú gastrach insamhladh a aithníodh go triaileach trí mhais chruinn agus faisnéis blúirí MSE: M1 (m/z315.1074, C14H20O8, 1.66 nóim), M4 (m/z 459.1501, C20H28O12,2.36 nóim), M5 (m/z 459.1501, C20H28O12,2.36 nóim), M5 (m/z 45,07,025. 2.60 nóim), M7 (m/z179.0338, C9H8O4, 2.85 nóim), M12 (m/z 785.2481, C35H46O20,4.77 nóim), M16 (m/z 827.2580, C37H48O231, agus M12 (m/z 785.2481, C35H46O20,4.77 nóim), M16 (m/z 827.2580, C37H48O231, agus M16) .1968, C29H36O15, 5.81 nóim). Measadh go raibh deglycosylation, dehydroxylation, dehydrogenation, agus isomerization mar na príomhbhealaí meitibileach le haghaidh CTE i sú gastrach. Fuarthas go raibh meáchan móilíneach 2 Da agus 16 Da níos ísle ag M4 agus M5 ná a gcomhábhar fréamhshamhlacha, decaffeoylacteoside, agus mar sin aithníodh iad mar a tháirgí díhidriginithe agus díhiodrocsaile, faoi seach. Aithníodh M12 mar isiméir echinacoside, a tháirgeann na hiain chéanna le echinacoside ag m/z 623.2178, 477.1601, 315.1055, 161.0237.

Braitheadh ​​na meitibilítí céanna tar éis CTE(Sliocht Cistanche tubulosa)goir i sú intestinal. Is fiú a thabhairt faoi deara go raibh an grúpa caffeoyl ag suíomh C-6′ sna PhGanna meitibilithe go héasca ag einsímí díleácha i sú stéigeach chun a mheitibilítí decaffeile agus aigéad caiféin a tháirgeadh.

3.3.2. Metabolism an CTE(Sliocht Cistanche tubulosa)ag gnáth agus CUS miocróib stéigeach francach

Bithchlaochlú ar 20 meitibilít san iomlán ó CTE(Sliocht Cistanche tubulosa)aimsíodh agus aithníodh micribiota ráithíneacha gnáth (Fíor 2). Dá bharr sin, tugadh faoi deara gur díghrádaíodh PhGanna go aglycone hydroxytyrosol (HT) M2 (m/z 153.0550, C8H10O3, 1.78 nóim), agus aigéad caiféin (CA) M7 (m/z 179.0338, C9H8O4, 2.85 nóim), ansin iad a mheitibilíodh tuilleadh go M3 (m/z 163.0390, C9H8O3, 2.02 nóim), M6 (m/z181.0501, C9H10O4, 2.76 nóim), M10 (m/z 195.0655, C10H12O4,4.15m), agus M6 (m/z181.0501, C9H10O4, 2.76 nóim), M10 (m/z 195.0655, C10H12O4,4.15m), agus M6 , C9H10O3, 4.36 min) trí dhíhiodrocsailiú, laghdú, agus meitiliú. Ina theannta sin, is iad na cosáin mheitibileacha lárnacha a tháirg meitibilítí díreacha de chomhdhúile fréamhshamhlacha PhG ó CTE i ngnáthmhicribiotán stéigeach francach ná laghdú, meatocsailiú, díghlicóisiú, decaffeoyl, díhidriginiú, agus isiméiriú.

Tar éis gortha i micribiota stéigeach francach dúlagar de bharr CUS, CTE(Sliocht Cistanche tubulosa)a thiontú go 20 meitibilít trí na bealaí meitibileach céanna le gnáthfhrancaigh.

3.3.3. Meitibileacht sheicheamhach CTE ag an sú gastric, an sú intestinal, an gnáth-mhiocróbó intestinal agus an francach CUS

Tar éis gor seicheamhach i sú gastric, sú stéigeach, gnáth, agus miocróib stéigeach francach CUS, CTE(Sliocht Cistanche tubulosa)a mheitibiliú go 14 meitibilít (lena n-áirítear 8 le sú gastric, 7 le sú intestinal, 11 le gnáth, agus 10 le microbiota stéigeach francach CUS). Ina measc seo, ba iad M2(HT) agus M11 (3-aigéad hidroxyphenylpropionic, 3-HPP) na meitibilítí deiridh de PhGanna tar éis gor seicheamhach CTE(Sliocht Cistanche tubulosa)i sú gastric, sú stéigeach, agus micribiota intestinal. Ní raibh aon difríocht shuntasach i meitibilítí idir gnáth-rannóg agus CUS.

Níor aimsíodh M8, M9, M14, M17, M19, agus M20 ach amháin i meitibileacht neamhspleách CTE ag miocróib stéigeach francach CUS agus gnáth. Idirmheánacha meitibileach a bhí sna meitibilítí seo den chuid is mó a mheitibilíodh go hiomlán go meitibilítí deiridh i staidéar a dhéanamh ar mheitibileacht sheicheamhach CTE agus dá bhrí sin is deacair iad a bhrath.

3.3.4. Difríochtaí idir ráta meitibileach CTE de réir gnáth agus miocróib ratáintestinal CUS

Chun na difríochtaí idir ráta meitibileach CTE a shoiléiriú(Sliocht Cistanche tubulosa)microbiota stéigeach francach gnáth agus CUS, cinneadh ar leithligh agus go seicheamhach ar inneachar coibhneasta na gcomhdhúile 27 fréamhshamhail agus 20 meitibilít tar éis gor le sú gastric, sú intestinal, gnáth-mhicrobiota intestinal agus francach CUS (Táblaí S3 agus S4). Thug na torthaí le fios cé nach raibh aon difríochtaí suntasacha idir CTE(Sliocht Cistanche tubulosa)meitibilítí na francaigh gnáth agus depressive, breathnaíodh difríocht shuntasach ina rátaí meitibileach. Mar shampla, aithníodh C2 agus C5 mar 8-aigéad epiloganic nó a isiméir. Meitibilíodh iad go hiomlán i ngnáthshamplaí laistigh de 12 h goir. I micribiota intestinal francach dúlagar paiteolaíoch, áfach, rinneadh iad a mheitibiliú go críochnúil tar éis gor 48 h. Ba léir go raibh an ráta meitibileach sa ghnáthfhrancach níos tapúla ná mar a bhí sa francach CUS. Fuarthas torthaí cosúla ó C18 (isoacteoside). Ina theannta sin, is fiú a thabhairt faoi deara go raibh buaic-achar M12 (isiméiriú echinacoside) agusM16 (isiméiriú tubuloside A) i samplaí gnáth i bhfad níos mó ná mar a bhí i samplaí CUS, rud a léiríonn go raibh imoibriú isiméirithe CTE(Sliocht Cistanche tubulosa)Bhí sé níos forleithne i ngnáthmhicribiotatán stéigeach francach i micribiota stéigeach francach dúlagar.

3.4. Metabolism CTE de réir gnáth agus CUS francach in vivo

Trí shamplaí bitheolaíocha den ghrúpa cóireáilte CTE a chur i gcomparáid le samplaí bána bitheolaíocha, 26 meitibilít (comhdhúil 1–26) de CTE san iomlán.(Sliocht Cistanche tubulosa)aimsíodh francaigh neamhghnácha agus CUS (Tábla 2). Cuirtear crómatagram tipiciúla UPLC de ghnáthshamplaí fuail francaigh agus CUS i láthair i bhFíor 3.

3.4.1. Tréithriú meitibilítí CTE i raturine gnáth agus CUS

Iomlán de 18 meitibilít in vivo de CTE(Sliocht Cistanche tubulosa)i ngnáthshamplaí fuail francaigh, aithníodh go sealadach iad. Ba iad meitibilítí díghrádaithe PhGanna lena n-áirítearHT agus CA, agus a thuilleadh sulfation (comhdhúile 1, 2, 3, 5, 8, agus 16), meitibilítí (6, 21, 22, agus 24), agus meitiocsailiú (13 agus 14) na meitibilítí. príomh-mheitibilítí i bhfual francach gnáth. Rinneadh gliocóisídí iridoid a mheitibiliú go héasca chuig aglycóin (23, 25, agus 26) trí dhéglycosylation. Is fiú a thabhairt faoi deara nár aimsíodh aon chomhpháirt fhréamhshamhail sa ghnáthshampla fuail francach.

Sa sampla fuail francach dúlagair, 22 meitibilít de CTE(Sliocht Cistanche tubulosa)braitheadh ​​​​agus tréithe. Braitheadh ​​comhdhúil fhréamhshamhail amháin, 8-aigéad epiloganic, i bhfual francach paiteolaíoch. Bhí meitibilítí eile i gcomhréir leo siúd a fuarthas i bhfual francach gnáth, lena n-áirítear meitibilítí sulfáitithe (1, 2, 3, 8, 10, agus 16), meitibilítí meitileáitithe (6, 11, 19, agus 22), meitibilítí meitiocsailithe (13 agus 14). de HT agus CA, agus theaglycóin de gliocóisídí iridoid (25 agus 26).

3.4.2. Tréithriú meitibilítí CTE(Sliocht Cistanche tubulosa)i ranna gnáth agus CUS

Sa staidéar seo, ní raibh ach meitibilít amháin (comhdhúil 20, 3-HPP) de CTE(Sliocht Cistanche tubulosa)aithníodh i ngnáth-fheces francach. Díghrádaíodh an chuid is mó de na PhGanna go CA ar dtús agus dá bharr sin chuaigh siad faoi mheitibileacht bhreise chuig a mhór-mheitibilít mhiocróbach, 3-HPP. Sa sampla fecal ón francach CUS, bhí 3 mheitibilít tréithrithe go cúramach, lena n-áirítear sulfáit 3-HPP (comhdhúil 16), agus HT sulfáit (comhdhúile 2 agus 3).

3.4.3. Difríochtaí idir meitibilítí in vivo de CTE sa ghnáthchúrsa agus CUSrats

Tar éis riarachán ó bhéal CTE(Sliocht Cistanche tubulosa), léirigh na meitibilítí in vivo difríochtaí soiléire i bhfrancaigh múnla sláintiúla agus dúlagair. Braitheadh ​​21 meitibilít (comhdhúil 1–3, 5, 6, 8–14, 16, 17, agus 19–26) i samplaí francacha sláintiúla agus CUS araon. Níor sainaithníodh cumaisc 23 (aigéad déglycosylatedgeniposidic) ach amháin i samplaí sláintiúla francacha, agus comhdhúile 4 (HT), 7 (8-aigéad epiloganic), 15 (3, 4-aigéad déhidroxybenzenepropionic), agus 18 ({{). 19}}Níor aimsíodh comhchuingeach glucuronide HPP) ach amháin i samplaí CUS francach. Go hachomair, níor braitheadh ​​comhábhair fréamhshamhail ach amháin i bhfrancaigh CUS, ach fuarthas meitibilítí níos mó chéim II i bhfrancaigh gnáth.

4. Plé

Sa staidéar seo, úsáideadh trí mhúnla goir in vitro, lena n-áirítear sú gastrach, sú stéigeach, gnáthmhicribiotán stéigeach francach agus CUS go neamhspleách agus go seicheamhach chun próifíl mheitibileach ghastraistéigeach CTE a imscrúdú.(Sliocht Cistanche tubulosa)in vitro. Fuarthas amach go bhfuil glycosídí iridoid PhGsand i CTE(Sliocht Cistanche tubulosa)meitibilíodh iad go héasca chuig a gcuid gliocóisídí tánaisteacha agus aglycóin ag micribhiota stéigeach francach dúlagair de chuid CUS. Tar éis sin, meitibileacht in vivo de CTE(Sliocht Cistanche tubulosa)i bhfrancaigh gnáth agusCUS fíoraíodh freisin. Na conairí meitibileach atá beartaithe le haghaidh CTE(Sliocht Cistanche tubulosa)i bhfrancaigh dhúlagaracha sláintiúla agus CUS-spreagtha i bhFíor 4. Meitibíodh PhGanna, mar echinacoside agus acteoside, go HT agus CA, agus chuaigh CA faoi mheitibileacht bhreise chuig a mhór-mheitibilít mhiocróbach, 3-HPP. Ansin rinneadh HT, CA, agus 3-HPP a mheitibiliú chuig a gcuid meitibilítí sulfáitithe, meitiolaithe agus meitiocsaile. Meitibilíodh gliocóisídí iridoid lena n-áirítear aigéad geniposidic, kankanoside A, agus kankanoside N chuig a n-aglycóin trí dhíghlicóisiú. Léirigh siad seo freisin go raibh PhGanna agus gliocóisídí iridoid in CTE(Sliocht Cistanche tubulosa)meitibilíodh iad go héasca le gliocóisídí tánaisteacha agus aglycóin i bhfrancaigh CUS. De ghnáth léiríonn na meitibilítí seo ionsú intestinal níos fearr agus bith-infhaighteacht chun iad a shú isteach san fhuil níos faide chun gníomhaíocht bhitheolaíoch a dhéanamh [16-18]. Is fiú a thabhairt faoi deara go raibh isiméiriú coitianta do PhGanna sa chonair gastrointestinal, aithníodh meitibilítí ábhartha tar éis iad a chur i gcomparáid leis an am coinneála UPLC dá gcomhdhúile fréamhshamhlacha bunaithe ar phróifíl grádáin idéalach UPLC anoptamaithe.

Ba é aigéad caiféin príomhtháirge díghrádaithe CTE(Sliocht Cistanche tubulosa)ag miocróib intestinal francach paiteolaíoch depressive. Thuairiscigh foilseacháin roimhe seo go dtáirgeann aigéad caiféin éifeachtaí frithdhúlagráin i dtástáil snámha éigeantais i lucha. Tháinig laghdú suntasach ar leibhéal mRNA fachtóir neurotrófach inchinn-díorthaithe (BDNF) sa cortex tosaigh agus leibhéal mRNA TrkB sa theamygdala tar éis na tástála snámha éigean, agus bhí an iar-laghdú bac suntasach ag aigéad caiféin [19]. Ba é hidroxytyrosol an aglycone de PhGanna, a chosnaíonn neurogenesis agus feidhm chognaíoch trí chosc a chur ar íosrialáil próitéine néara de bharr strus BDNF [20]. Mar sin, is gá aird níos mó a thabhairt ar roinnt meitibilítí bithghníomhacha (ie, HT agus CA) arna gclaochlú ag miocróib intestinal tar éis riarachán béil.

Ina theannta sin, cuireann na torthaí láithreacha fianaise ar fáil go raibh an cumas meitibileach chun gliocóisídí tánaisteacha agus aglycóin a ghiniúint i bhfad níos laige ná an micribiota stéigeach neamhghnáth francach. Is dócha go gcuirfear an chúis i leith athruithe struchtúracha de bharr dúlagar-spreagtha ar an miocróib intestinal, rud a fhágann go laghdaítear gníomhaíocht na n-einsímí meitibileach a tháirgeann miocróib intestinal [21]. Suimiúil go leor, léirigh staidéar roimhe seo gur ionchódaighphylum Bacteroidetes na géinte lyase polaisiúicríd gliocóisíd is flúirseach le haghaidh hidrealú glycosíde agus scaradh carbaihiodráití casta le meicníocht díothaithe [22].Go sonrach, tá Bacteroides spp. lena n-áirítear B. caccae, B. dorei, B. finegoldii,B. fragilis, B. intestinalis, B. ubhagán, B. thetaiotaomicron, B. éideis, agusB. léirigh xylanisolvens líon iomlán ceannasach ionchódú GHs agus PLanna. Tá na tréithe céanna ag Parabacteroides distasonis freisin [22]. Dheimhnigh ár staidéir roimhe seo gur laghdaigh spreagadh struis ainsealacha dothuartha 28-laethanta flúirse de ghinera Bacteroides, Parabacteroides, Butyricimonas, agus Weissella, cé gur mhéadaigh Ruminococcus agus Deinococcus i bhfrancaigh [4]. Is fiú a thabhairt faoi deara gurbh iad Bacteroides agus Parabacteroides an dá tacsa miocróbach is flúirsí arbh ionann iad agus thart ar 20 faoin gcéad de fhairsinge coibhneasta i bhfrancaigh gnáth. Tar éis cóireáil CUS, laghdaíodh flúirse coibhneasta Bacteroides agus Parabacteroides go mór go dtí thart ar 5 faoin gcéad i bhfrancaigh mhúnla dúlagair. Dá bhrí sin, is cinnte go laghdófar líon iomlán na n-einsímí GH agus PL i bhfrancaigh CUS mar thoradh air seo, agus cuireann sé isteach ar an imoibriú díghliccosilated ag CUS miocróib ó bhroinn tar éis riarachán béil CTE.(Sliocht Cistanche tubulosa)i francaigh samhail.

5. Conclúid

Sa staidéar seo, bunaíodh an teicníc UPLC-Q-TOF-MS agus cuireadh i bhfeidhm é chun meitibilítí a scagadh agus a aithintCistanche tubulosaextracti bhfrancaigh depressive gnáth agus CUS in vitro agus in vivo. Léirigh na torthaí go CTE(Sliocht Cistanche tubulosa)a mheitibileadh chuig aglycóin agus táirgí díghrádaithe de PhGs agus gliocóisídí iridoid ag an dá sláintiúil agus depressedrat microbiota intestinal. Tar éis riarachán ó bhéal CTE(Sliocht Cistanche tubulosa), fuarthas meitibilítí céim II d'aglycóin agus táirgí díghrádaithe PhGanna agus iridoidglycosides den chuid is mó i bhfual francach. Bhí an cumas meitibileach chun gliocóisídí tánaisteacha agus aglycóin a ghiniúint i micribiota ráithíneacha dúlagair i bhfad níos laige ná mar a bhí i ngnáthmhicribiotán stéigeach an fhrancaigh, a cuireadh i leith na glycosídíhidróil neamhord a tháirgtear trí mhiocróbóta stéigeach i bhfrancaigh depressed CUS. CTE a fhorbairt(Sliocht Cistanche tubulosa)mar antidepressant féideartha.

Buíochas

Thacaigh an obair seo le deontais ó Phríomhchlár Taighde agus Forbartha Náisiúnta na Síne (2017YFC1702400).

Aguisín A. Sonraí forlíontacha

Is féidir sonraí forlíontacha leis an alt seo a fháil ar líne ag HTTPS://doi.org/10.1016/j.jchromb.2019.121728

Ó: ' Meitibileacht in vitro agus in vivo deSliocht Cistanche tubulosai bhfrancaigh depressive strus-spreagtha dothuartha gnáth agus ainsealach' leYang Li, et al

--Irisleabhar na Crómatagrafaíochta B 1125 (2019) 121728

Tagairtí

[1] Coimisiún Pharmacopoeia na Síne, The Pharmacopeia of the Daon-Phoblacht na Síne, 2015 ed., China Medical Science Press, Beijing, China, 2015, lch. 135 Cuid I .
[2] Y. Jiang, P.-F. Tu, Anailís ar chomhábhair cheimiceacha i speicis Cistanche, J. Chromatogr. 1216 (2009) 1970–1979.
[3] Z. Fu, X. Fan, X. Wang, X. Gao, Cistanches Herba: forbhreathnú ar a cheimic, cógaseolaíocht, agus cógaschinéitice maoine, J. Ethnopharmacol. (2017), https://doi.org/10.1016/j.jep.2017.10.015.
[4] Y. Li, Y. Peng, P. Ma, H. Yang, H. Xiong, M. Wang, C. Peng, P. Tu, X. Li, éifeachtaí antidepressant-mhaith deSliocht Cistanche tubulosaar francaigh strus thuartha ainsealach trí homeostasis gut microbiota a athchóiriú, Tosaigh. Cógaslann. (2018), https://doi.org/10.3389/fphar.2018.00967.
[5] JA Foster, MV Neufeld, Ais gut-inchinn: an chaoi a mbíonn tionchar ag an micribhithóim imní agus dúlagar, Treochtaí Neurosci. 36 (2013) 305–312.
[6] E. Sherwin, TG Dinan, JF Cryan, Forbairtí le déanaí maidir le tuiscint a fháil ar ról an mhicribhiota gut i sláinte inchinne agus galair, Ann. NY Acad. Sci. 12 (2017) e0177977.
[7] Y. Meng, H. Jia, Z. Chao, Y. Yong, Z. Yang, M. Yang, Z. Zou, Éagsúlachtaí i micribiota gut agus feinitíopa meitibileach fecal a bhaineann le dúlagar ag seicheamhú géine 16S rRNA agus LC/ Meitibileacht MS-bhunaithe, J. Pharm. Biomed. Anal. 138 (2017) 231–239.

[8] JR Kelly, Y. Borre, BC O', E. Patterson, AS El, J. Deane, PJ Kennedy, S. Beers, K. Scott, G. Moloney, Ag aistriú na gormacha: induces microbiota gut a bhaineann le dúlagar athruithe neurobehavioural sa francach, J. Síciatraí. Ais. 82 (2016) 109–118.
[9] L. Yang, P. Ying, M. Wang, P. Tu, X. Li, meitibileacht gastrointestinal daonna ar an sliocht uisce Cistanches Herba in vitro: soiléiriú ar an bpróifíl meitibileach bunaithe ar aithint meitibilít cuimsitheach i sú gastric, intestinal sú, baictéir intestinal daonna, agus micreasóim intestinal, J. Agric. Ceimic Bhia. 65 (2017) 7447–7456.
[10] Y. Li, G. Zhou, S. Xing, P. Tu, X. Li, Aithint meitibilítí echinacoside arna dtáirgeadh ag baictéir intestinal daonna ag baint úsáide as crómatagrafaíocht leacht ultra-fheidhmíocht / mais-speictriméadracht ama eitilte, J. Agraic. Ceimic Bhia. 63 (2015) 6764–6771.
[11] Y. Li, G. Zhou, Y. Peng, P. Tu, X. Li, Scagadh agus sainaithint trí mheitibilít tipiciúil gliocóisídí feinileatánóideach ó Cistanches Herba ag baictéir intestinal daonna ag baint úsáide as UPLC/Q-TOF-MS, J. Pharm. Biomed. Anal. 118 (2016) 167–176.
[12] L. Yang, P. Ying, M. Wang, G. Zhou, Y. Zhang, X. Li, Scagadh tapa agus aithint na ndifríochtaí idir meitibilítí de Cistanche deserticola agus C. tubulosa sliocht uisce i bhfrancaigh ag UPLC- Anailís aitheantais patrún comhcheangailte Q-TOF-MS, J. Pharm. Biomed. Anal. 131 (2016) 364–372.
[13] C. Q, P. Y, B. X, Z. W, C. L, L. X, tréithríonn córasach na meitibilítí de echinacoside agus acteoside ó Cistanche tubulosa i plasma francach, bile, fual, agus feces bunaithe ar UPLC-ESI-Q-TOF-MS, Biomed. Crómatóg. 30 (2016) 1406–1415.
[14] Y. Wang, H. Hao, G. Wang, P. Tu, Y. Jiang, Y. Liang, L. Dai, H. Yang, L. Lai, C. Zheng, Cur chuige chun meitibilítí seicheamhach a aithint gnáth-gliocóisíd feinileatánóideach, echinacoside, bunaithe ar leacht crómatagrafaíocht-ian gaiste de
anailís mais-speictriméadrachta eitilte, Talanta 80 (2009) 572–580.
[15] C. Jia, H. Shi, W. Jin, K. Zhang, Y. Jiang, M. Zhao, P. Tu, Metabolism de echinacoside, ar antioxidant maith, i francaigh: leithlisiú agus aithint a meitibilítí biliary, Metab Drugaí. diúscairtí. 37 (2009) 431–438.
[16] J. Xu, HB Chen, SL Li, Tuiscint a fháil ar mheicníochtaí móilíneacha an idirghníomhartha idir leigheasanna luibhe agus microbiota gut, Med. Res. Ath. 37 (2017) 1140–1185.
[17] H. Liu, J. Yang, F. Du, X. Gao, X. Ma, Y. Huang, F. Xu, W. Niu, F. Wang, Y. Mao, Ionsú agus diúscairt ginsenosides tar éis béil riar sliocht Panax notoginseng do francaigh, Metab Drugaí. diúscairtí. 37 (2009) 2290–2298.
[18] JM Laparra, Y. Sanz, S. S. Schaffer, F. Visioli, Idirghníomhaíochtaí gut microbiota le comhpháirteanna bia feidhmiúla agus nutraceuticals, Pharmacol. Res. 61 (2010) 219–225.
[19] H. Takeda, M. Tsuji, T. Yamada, J. Masuya, K. Matsushita, M. Tahara, M. Iimori, T. Matsumiya, Laghdaíonn aigéad Caiféach an laghdú ar abairt mRNA cortical BDNF de bharr nochtadh do éigean. strus ag snámh i lucha, Eur. J. Cógaslann. 534 (2006) 115–121.
[20] A. Zheng, L. Hao, C. Ke, X. Jie, Z. Xuan, L. Yuan, C. Cong, J. Liu, Z. Feng, Feabhsaíonn riarachán hiodrocsatyrosol mháthar neurogenesis agus feidhm chognaíoch i prenatally strus sliocht, J. Nutr. Bithcheimic. 26 (2015) 190–199.
[21] H. Li, J. He, W. Jia, Tionchar na miocróib gut ar mheitibileacht agus tocsaineacht drugaí, Tuairim Saineolaithe. Metab Drugaí. Tocsain. 12 (2016) 31 .
[22] KA El, F. Armougom, JI Gordon, D. Raoult, B. Henrissat, Flúirse agus éagsúlacht na n-einsímí Carbaihiodráit-ghníomhacha i miocróib gut daonna, Nat. An tUrr. Micribhith. 11 (2013) 497–504.