Cuimhne Feabhsaithe Aithint Rudaí ag Úsáid Spreagadh Maighnéadach Trascranial Iar-ionchódú Cuid 1

teibí

Cúlra: Is eol go gcuireann spreagadh inchinn isteach ar bhealaí canónacha agus ar phróitéiní a bhfuil baint acu leis an gcuimhne. Mar sin féin, tá torthaí contrártha ann maidir le cumas spreagadh inchinne chun cuimhne a fheabhsú, rud a d’fhéadfadh a bheith mar gheall ar éagsúlachtaí in uainiú an spreagtha.

Tá dlúthbhaint idir spreagadh inchinne agus cuimhne. Is féidir le spreagadh inchinn gníomhaíocht néaróin inchinn a chur chun cinn, rud a chuireann feabhas ar chumas cuimhne agus cognaíocha.

Ar dtús, is féidir le spreagadh inchinn an nasc idir néaróin a chur chun cinn. Trí spreagadh a thabhairt don inchinn, tiocfaidh an chumarsáid agus an nasc idir néaróin níos minice agus níos éifeachtaí. Éireoidh na naisc seo níos cobhsaí agus níos réadúla, rud a fhágann go mbeidh an inchinn níos solúbtha, cruthaitheach agus tuisceanach. Tabharfaidh na buntáistí seo buntáiste duit san fhoghlaim agus sa saol.

Sa dara háit, is féidir le spreagadh inchinn cuimhne níos láidre a thabhairt. Is féidir le spreagadh inchinne go minic beogacht agus sláinte na hinchinne a fheabhsú, rud a chuireann le cuimhne. Tá gaol ríthábhachtach idir sláinte na hinchinne agus cuimhne agus gníomhaíochtaí cognaíocha. Cabhróidh spreagadh na hinchinne leis an inchinn a ghnóthú, a fhás agus a dheisiú. Ar an mbealach seo, beidh sé níos éasca dúinn eolas a fhoghlaim nó faisnéis bhríoch a fháil ón saol, agus beidh muid in ann iad a choinneáil níos fearr agus a mheabhrú san inchinn.

Ina theannta sin, is féidir le spreagadh inchinne foghlaim agus cur i bhfeidhm faisnéise nua a chur chun cinn. Sa saol, bíonn fadhbanna éagsúla againn i gcónaí nach bhfuil a fhios againn conas déileáil leo. Tríd an inchinn a spreagadh go minic, is féidir linn an fhaisnéis chasta seo a thuiscint níos tapúla agus níos cruinne, a oiriúnú de réir a chéile, bealaí a aimsiú chun é a phróiseáil, agus dul i ngleic leis níos fearr, rud a fhágann go mbeidh muid níos láimhseála agus muid ag déileáil le rudaí.

I mbeagán focal, trí spreagadh inchinne, is féidir linn a bheith níos solúbtha, cruthaitheach, agus tuisceanach. Tabharfaimid aghaidh freisin ar na fadhbanna agus na dúshláin sa saol le níos mó muiníne. Is bealach maith é spreagadh inchinn chun ár gcumas cognaíocha a fheabhsú, foghlaim a neartú, agus cuimhne a fheabhsú. Cloímis lenár bplean cleachtaidh inchinne, coinnímid dearcadh dearfach, bígí dearfach, saothróimid forbairt phearsanta níos fearr, agus bainfimid ár n-idéalacha amach. Is féidir a fheiceáil go gcaithfimid cuimhne a fheabhsú, agus is féidir le Cistanche cuimhne a fheabhsú go suntasach mar is féidir le Cistanche cothromaíocht neurotransmitters a rialáil freisin, mar shampla leibhéil acetylcholine agus fachtóirí fáis a mhéadú, atá an-tábhachtach don chuimhne agus don fhoghlaim. Ina theannta sin, is féidir le Cistanche sreabhadh fola a fheabhsú freisin agus seachadadh ocsaigine a chur chun cinn, rud a d'fhéadfadh a chinntiú go bhfaigheann an inchinn cothú agus fuinneamh leordhóthanach, rud a fheabhsóidh beogacht agus seasmhacht na hinchinne.

Cliceáil Know chun cuimhne oibre a fheabhsú

Hipitéis: Rinneamar hipitéis go bhféadfadh spreagadh maighnéadach trascranial athchleachtach (rTMS) a thugtar tar éis tasc foghlama agus laistigh den tréimhse roimh aisghabháil cabhrú le feabhas a chur ar chuimhne. go bhféadfaí spreagadh comhsheasmhach a thabhairt do lucha chuig an limistéar tosaigh agus iad ag gluaiseacht faoi shaoirse.

Chuaigh lucha faoi chéim samplála na tástála aitheantais réad ansin agus tugadh cóireáil dóibh þ3, þ24, þ48 h tar éis na tástála. Is éard a bhí sa chóireáil ná spreagadh rTMS 10 min 10 Hz (TMS, n ¼ 10), cóireáil sham (SHAM, n ¼ 11), nó grúpa rialaithe nach ndearna an tástáil iompair nó nach bhfuair rTMS (RIALÚ n ¼ 11).

Ag þ72 rinneadh tástáil ar hmice chun an t-úrscéal a thaiscéaladh i gcomparáid le réad aithnidiúil. Torthaí: Ag 72-h, ní raibh ach na lucha a fuair rTMS tar éis níos mó taiscéalaíochta a dhéanamh ar an réad núíosach ná an réad eolach.

Léirímid freisin go bhfuil sé tábhachtach don éifeacht seo GluR2 synaptic a chur chun cinn agus naisc synaptic a chothabháil sa cortex perirhinal agus hippocampal CA1.

Ina theannta sin, fuaireamar fianaise go raibh na hathruithe seo nasctha le conairí CAMKII agus CREB i néaróin hippocampal.

Conclúid: Trí éifeachtaí bitheolaíocha aitheanta rTMS a nascadh le conairí cuimhne cuirimid fianaise ar fáil go bhfuil rTMS éifeachtach chun cuimhne a fheabhsú nuair a thugtar é le linn na gcéimeanna comhdhlúthaithe agus cothabhála.

1. Réamhrá

Is eol go gcuireann spreagadh inchinn neamh-ionrach isteach ar chonairí canónacha agus ar phróitéiní a bhfuil baint acu leis an gcuimhne. Mar sin féin, bhí torthaí contrártha ag staidéir reatha a scrúdaigh éifeachtaí spreagadh inchinne, go háirithe spreagadh maighnéadach trascranial athchleachtach (rTMS), onmemory [1].

D’fhéadfadh cúis leis seo a bheith as díriú ar an spreagadh ag amanna éagsúla le linn cuimhneacháin agus aisghabhála [1]. Tugann an fhianaise le tuiscint go bhféadfaí tairbhe a bhaint as díriú ar rTMS ag na céimeanna iar-ionchódaithe nó comhdhlúthaithe chun cuimhní cinn fadtéarmacha cobhsaí a fhorbairt [2]e4].

Is é comhdhlúthú an chéim a aistríonn cuimhne ghearrthéarmach go cuimhne fhadtéarmach (LTM). Tá an próiseas ag brath ar shintéis próitéin am-shonrach, a athraíonn an fhaisnéis nua go modhnuithe synaptic cobhsaí le dlús méadaithe gabhdóirí postsynaptic [5,6].

Léiríodh tábhacht na sintéise próitéine seo a bhaineann go sonrach le ham agus réigiún i staidéir a chuireann bac ar shintéis próitéin denovo. Mar shampla, rinne staidéar amháin a chuir bac ar shintéis próitéine sa hippocampus 3-h, ach ní 6-h teagmhas iarfhoghlama, LTM lagaithe ach ní cuimhne gearrthéarmach i bhfrancaigh[7]).

As na próitéiní seo, sainaithníodh roinnt conairí comharthaíochta tábhachtacha atá uasrialaithe agus tábhachtach sa phróiseas seo.

Tá cosáin chomharthaíochta iolracha ann ag an sionapse a thugann comhartha don innervation gabhdóra agus do chobhsaíocht an spine a theastaíonn le haghaidh LTM. Cuirtear iad seo i ngníomh trí imeacht spreagtha fadtéarmach (LTP) agus is minic a chuirtear feabhas orthu le fachtóirí neurotrófacha cosúil le fachtóir neurotrófaigh inchinn-díorthaithe (BDNF) [8].

Tá tábhacht ar leith ag BDNF maidir le cuimhní fadtéarmacha a chruthú, toisc go gcuireann bac ar shintéis BDNF ag pointí ama sonracha na bloic foghlama seo a leanas a chomhdhlúthú [5].

Ceanglaíonn BDNF le gabhdóirí tyrosine kinase (TrkB) agus féadann sé ilbhealaí comharthaíochta a thionscnamh mar kinase próitéine mitogen-gníomhachtaithe / kinase (ERK) arna rialáil le comhartha eischeallach nó cosáin Cg fospholipáis. Tagann na cosáin chomharthaíochta seo le chéile ar ghníomhachtú an fhachtóir rialaithe tras-scríobh próitéine ceangailteach eilimint freagrúil CyclicAMP (CREB).

Tá ról ag próitéiní cailciam-ghníomhachtaithe cosúil le próitéin cailciam / calmodulin-chleithiúnach kinase II (CAMKII) freisin i rialachán géine gníomhachtaithe CREB[9e11] agus is féidir leo freisin idirghabháil synaptic a chur in iúl go díreach ar na gabhdóirí AMPA glutamatergic agus scafall synaptic a chobhsú [12e15]. .

Le chéile, bíonn léiriú agus traslonnú gabhdóra shiftin mar thoradh ar na cosáin chomharthaíochta seo a dhéanann idirghabháil ar ghníomhachtú méadaithe ag an synapse, rud a fhreastalaíonn ar na synapses a chobhsú agus a chuireann le cothabháil LTP fada [16]. Go tábhachtach, léirigh staidéir roimhe seo gur féidir comhdhlúthú cuimhne a fheabhsú. trí athghníomhachtú tréimhsiúil ar na cosáin chomhdhlúthaithe seo i suíomhanna turgnamhacha [17].

Léirigh staidéir roimhe seo cumas rTMS tionchar díreach a imirt ar na cosáin shonracha seo san inchinn. Léirigh staidéir in vivo go n-ardaíonn rTMS leibhéil BDNF san inchinn [18e20]. Ar bhealach níos dírí, tá méadú ar Ca2þ i néaróin mar thoradh ar rTMS in vitro, príomh-mhóilín comharthaíochta sa chonair CAMKII [18].

Bíonn tionchar díreach ag rTMS freisin ar léiriú synapticreceptor, ag méadú dlús gabhdóra AMPA [22e24], agus ag rialú fo-aonaid receptor AMPA Glacadóir Glutamate 1 (GluR1) agus Glacadóir Glutamate 2 (GluR2) [25,26].

Dá bhrí sin, gníomhaíonn asrTMS na cosáin seo bheadh ​​sé an-éifeachtach chun cuimhne a fheabhsú le linn na céime comhdhlúthaithe. Scrúdaigh an staidéar seo úsáid rTMS chun cuimhne a fheabhsú trí spriocdhíriú a dhéanamh ar spreagadh na gcéimeanna comhdhlúthaithe agus cothabhála.

Rinneamar hipitéis go bhféadfadh rTMS a riaradh tar éis tasc foghlama, agus laistigh den tréimhse aisghabhála roimhe sin, feidhmíocht chuimhne a fheabhsú. Bheadh ​​sé seo mar thoradh ar athghníomhú tréimhsiúil ar bhealaí lena mbaineann cuimhne, a mbíonn tionchar ag rTMS orthu freisin.

Ag baint úsáide as samhail ainmhí de LTM eipeasóideach ar leith, léirigh muid gur fheabhsaigh rTMS cuimhne oibiachta nuair a tugadh laistigh den 72-h idir ionchódú agus aisghabháil, ach níor choinnigh na lucha a tugadh an chóireáil SHAM an chuimhne.

Tacaíodh leis an éifeacht seo ag athruithe naisc tsionaptic sa cortex perirhinal agus CA1, gníomhachtú ardaithe CREB agus CAMKII, agus athrú dinimiciúil i bhfo-aonaid gabhdóirí AMPA ag an synapse.

2. Ábhar agus modhanna

2.1. Ainmhithe

D’úsáideamar n ¼ 33 lucha fireanna B6129SF2/J d’aois 2e4 mhí don staidéar seo. Mhair na lucha go léir faoi 12-h éadrom/{12-h timthriall dorcha le rochtain saor in aisce ar bheatha thirim agus uisce. Chloígh gach cúram agus nós imeachta ainmhithe leis an Acht um Leas Ainmhithe agus bhí siad de réir threoirlínte institiúideacha agus faomhadh Coiste Taighde Ainmhithe VA Palo Alto.

2.2. Coil máinliacht tacaíochta

Chuaigh gach lucha faoi obráid chun taca corna a cheangal a cheadaigh spreagadh comhsheasmhach rTMS ar na hainmhithe múscailte. Tá sonraí faoin nós imeachta máinliachta le fáil in Poh et al., 2018[27].

Go hachomair, rinneadh ainéistéisiú ar ainmhithe le 3% isafflurane agus coinníodh iad ag 2e3% le cón srón. Tar éis bearrtha agus glanadh an tsuímh le haghaidh steiriúlacht, rinneadh incision sagittal de thart ar 10 mm ar fad le lann scalpel.

Cuireadh an periosteum ar shiúl go réidh, agus ceanglaíodh taca corna réamhdhéanta ag an bregma le cianaicrioláit agus treisíodh é le stroighin fiaclóireachta. Bhí an fhoirceannadh sutured ansin timpeall an taca corna.

2.3. Nósanna imeachta iompair agus spreagtha

Chun forbhreathnú a fháil ar na nósanna imeachta iompair agus spreagtha féachFig. 1a. Tar éis cúig lá téarnaimh ón obráid tacaíochta corna, cuireadh an téama i gcliabhán spreagtha ar leith agus nósanna imeachta corna ar feadh trí lá.

Ar an lá deiridh de ghnáthú corna rinneadh lucha faoin Tástáil Réimse Oscailte (OFT) ar feadh 10-nóiméad, rud a bhí mar ghnáthchónaí don Tástáil Aithint Réada (ORT). An lá dár gcionn nochtaíodh na lucha don chéim Samplála ORT le dhá cheann de na réada céanna ar feadh 10 nóiméad. Bhí na rudaí den mhéid céanna ach le dathanna agus cruthanna éagsúla. Cuireadh na réada seo in aghaidh na gcoirnéal in aghaidh an limistéir tástála cearnacha.

Trí huaire an chloig ina dhiaidh sin roinneadh an téama go randamach ina dhá ghrúpa cóireála, TMS a fuair spreagadh gníomhach de 10-min de 10 Hz rTMS, agusSHAM, ar déileáladh leo mar an gcéanna ach amháin nuair a mhúchadh an corna le linn an spreagadh.

Cóireáladh lucha TMS agus SHAM araon24- agus 48-h iar-chleachtadh. Ar an lá deiridh (72-h tar éis taithí a fháil) nochtaíodh na lucha i gcéim Tástála ORT ar feadh 10-nóiméad le réad aithnidiúil amháin agus réad nua amháin.

Chun a fháil amach an raibh taiscéalaíocht an réad núíosaigh níos mó ná an réad eolach ríomhamar an t-innéacs idirdhealaithe ((( taiscéalaíocht réad núíosaigh) - ( taiscéalaíocht oibiachta núíosaigh ) ) / ( ( taiscéalaíocht oibiachta núíosaigh ) þ ( taiscéalaíocht réad eolach ))). Roghnaigh muid 72-h, mar a léirigh staidéir roimhe seo [28] agus sonraí píolótach (nár léirítear) nach gcoimeádann lucha an chuimhne ORT faoi ghnáthchoinníollacha ag an bpointe seo.

Bhí na cineálacha réad agus suíomh an ábhair núíosaigh araon cothromaithe i measc na ngrúpaí. Don seisiún habituation, samplála, agus taiscéalaithe, tugadh na lucha i gcónaí 30 nóiméad chun aclimate go dtí an seomra turgnamh roimh trialacha, agus, glanadh réada agus thearena le eatánól 70% tar éis gach luiche.

Chun imscrúdú a dhéanamh ar éifeachtaí an taisc iompraíochta amháin, chuireamar grúpa san áireamh freisin ar caitheadh ​​mar an gcéanna leis na lucha SHAM ach amháin nach ndearna siad an ORT.

Ina áit sin, nochtaíodh iad do sheisiún samplála agus fiosraithe ach gan aon réada. Níor shroich luch amháin sa ghrúpa TMS an tairseach riachtanach d'iniúchadh 20- iomlán ar an dá rud sa seisiún samplála agus dá bhrí sin fágadh as an áireamh í ón staidéar. Fágadh an luch seo as an áireamh ó anailís bhithcheimiceach ina dhiaidh sin.

Bhain na lucha eile go léir na critéir amach sa seisiún samplála agus iniúchta araon. Gan luch amháin a áireamh, ba iad na huimhreacha deiridh sna grúpaí turgnamhacha ná TMS n ¼ 10, SHAM n ¼ 11, agus CONTROLn ¼ 11.

2.4. Bloc an Iarthair

Trí huaire an chloig tar éis an tseisiúin taiscéalaithe rinneadh ródháileog cetimín a íobairt ar na lucha, agus rinneadh na fíocháin hippocampus agus frontalcortex a dháileadh go tapa ar oighear tirim agus iad a stóráil ag 80 C.

Rinneadh na samplaí seo a aonchineálú le 300 ml oighir-fhuar Syn-Per Imoibrí Eastóscadh Próitéine Synaptach (Thermo Eolaíoch) le 1x Cocktail Coscairí Protease (Roche) agus 1x Táibléad Cocktail Coscairí Phosphatase (Roche) (in aghaidh 10 ml), ar feadh 5 s.

Rinneadh homogenates a lártheifneoiriú ag 1200 g ar feadh 10 nóiméad chun smionagar cille a bhaint. Tógadh an t-supernatant, agus cionroinnt an comhlíonta le haghaidh anailíse ar an Homogenate Iomlán. Díláraíodh an chuid eile ag 15,000 g ar feadh 20-nóiméad ag 4 C.

Rinneadh na millíní, ina raibh synaptosomes, a athfhionraí go réidh i Syn-Per ag 1.5 ml/g den fhíochán, chun an Homogenate Synaptach a chruthú. Baineadh úsáid as nanaodrop chun tiúchan próitéine sa sampla a chainníochtú.

Stóráladh an Homogenate Iomlán agus Homogenate Synaptic ag 80 C go dtí go ndearnadh anailís orthu. Caolaíodh aonchineáláití Iomlána agus Synaptach araon go PBS fuar-oighear 4 mg/ml agus meascadh iad le Maolán Lódála Próitéin 1:4 (LiCor) agus 1:4000 mercaptoethanol. Rinneadh iad a théamh ansin ag 95 C le haghaidh 5-meabhair a luchtú isteach i nGlóthach Mini PROTEAN TGX (Bith-Rad).

Tar éis scaradh ag baint úsáide as leictreafóiréis ag 100 V, aistríodh na próitéiní chuig membrane súchán nítrigeallalóis (GE Healthcare Lifesciences). Níodh na seicní i Réiteach Réamhchóireála Antigen SuperSignal WesternBlot Enhancer (Thermo Scientific) agus ansin blocáladh iad le Maolán Blocáil (Rockland) agus 1% goatserum ar feadh 1-h.

Tar éis an bhlocála, goraíodh an scannán le hantasubstaintí príomhúla caolaithe i Caolaitheoir Antashubstainte Príomhúil SuperSignal Western BlotEnhancer (Thermo Scientific) thar oíche ag teocht an tseomra.

I measc na n-antasubstaintí príomhúla a úsáideadh bhí mousemonoclonal ERK 1/2 (1:1000, Biteicneolaíocht Santa Cruz), fosfa-p44/42 coinín-monoclonal (pERK 1:1000, Teicneolaíochtaí Comharthaíochta Cille), CREB monachlónacha luch (1:500, Teicneolaíochtaí Comharthaíochta Cille), monachlónúil coinín phospho-CREB (S133) (pCREB1: 500, Teicneolaíochtaí Comharthaíochta Cille), coinín monaclónach CAMKIIalpha (1: 1000, Teicneolaíochtaí Comharthaíochta Cille), luch monoclonalphospho-CAMKII (Thr286) (pCAMKII 1:1000, Invitrogen), luch monaclónach GluR1 (1: 750, Biteicneolaíocht Santa Cruz), fosfa-GluA1 coinín-monoclonal (S845) (pGluR1(845) 1:750, CellSignaling Technologies), coinín monaclónach phospho-GluA1 (S831)(pGluR1(831) 1:750, Teicneolaíochtaí Comharthaíochta Cille), luch GluR2 monaclónach (1:750, Invitrogen), fosfa-GluR2 (S880) coinín polyclonal (pGluR2 1:500, Invitrogen), luch monaclónach TrkB (1:500, Saotharlanna Tarchuir BD) nó coinín phospho-TrkB polaclónacha ( Tyr816) (pTrkB 1:500, EMD Millipore).

Baineadh úsáid as Cofilin polyclonal coinín (1:2000, Sigma) le haghaidh rialú caighdeánach luchtaithe. Tar éis dó in TBS-Tween, goradh an scannán ar feadh 1 h ag teocht an tseomra i bhfrith-choine gabhar 800 agus frith-luch gabhar 680 (1:3000, LiCor).

Rinneadh an imdhíonadh a íomháú ag baint úsáide as córas íomháithe Infridhearg Odyssey Clx (LiCor) agus rinneadh anailís sonraí ar dhéine banna ag baint úsáide as Image Studio (LiCor).

2.5. Imdhíon-cheimic

Trí huaire an chloig tar éis an tseisiúin taiscéalaithe, rinneadh bréifnithe go trascairdiach do lucha a íobraíodh ródháileog cetaimín le 50 mlof fuar 1 M PBS.
Rinneadh na hinchinn a iarshocrú láithreach i dtuaslagán paraformaildéad 4% ag 4 C agus aistríodh go 30% de shiúcrós i PBS ar feadh 48-h ar a laghad sula gcriosghearradh isteach i gcodanna 30 mm. Cuireadh bac ar chodanna saorshnámh agus tréscaoilteadh iad le séiream asal gabhair 10% i 0.1% Triton in 1 M PBS ansin gortha le haghaidh 48-h leis an coinín polaclónach PSD95 (1:300, Thermo Scientific) agus luch monaclónach SV2A (1:300, Biteicneolaíocht Santa Cruz).

Goradh na gníomhartha seo ansin ar feadh 1-h leis na hantasubstaintí tánaisteachaAlexa Fluor gabhar frith-choine 568 (1:500, Invitrogen) agus frith-luch Alexa Fluorgoat 488 (1:500, Invitrogen. Ansin nite na slisní le dath núicléach DAPI (1:1000, Sigma), gléasta ar shleamhnáin, agus clúdaithe le Fluoromount (Thermo Scientific).

Rinneadh staining a chainníochtú sa cortex tosaigh (FC), hippocampus droma CA1, cortex entorhinal (EC), agus cortex perirhinal (PC).

Tógadh íomhánna le Zstacked le Micreascóp Fluaraiseachta BZ-X700 (Eochair) ag formhéadú 40x chun poncaíocht synaptic a aithint ar fud an tslis iomláin. Áiríodh puncta iomlán PDS95, SV2A puncta, agus comhlárnacha (sainmhínithe mar dhá phointe in aice lena chéile nó forluiteach) ó cheithre íomhá ar a laghad do gach réimse, agus meán na dtorthaí a tógadh do gach luch. Críochnaíodh cainníochtú %colocalized trí chomhaireamh (forluí SV2A agus PSD95)/(iomlán SV2A agus PSD95) puncta.

2.6. Staitisticí

Chomhlíon na sonraí go léir boinn tuisceana normáltachta arna measúnú trí scrúdú a dhéanamh ar sceabhacht, kurtosis, agus luach Shapiro Wilk na n-iarmharach ríofa agus ní raibh aon sárú ar aonchineálacht athraithis arna measúnú ag baint úsáide as staitistic Levene.

Le haghaidh na dtástálacha iompraíochta, baineadh úsáid as t-tástálacha na mac léinn chun SHAM a chur i gcomparáid le TMS, chun réada núíosacha agus aithnidiúla a iniúchadh laistigh de ghrúpaí baineadh úsáid as ANOVA Dhá Bhealaí Athdhéanta.

Tástáladh sonraí imdhíon-cheimice agus blot an Iarthair le haghaidh tábhachta ag baint úsáide as ANOVA Aontreo. I gcás gach comparáide iar-hoc péirewise, baineadh úsáid as coigeartú Tukey le suntas ag p < 0.05.

Má sháraíodh an aonchineálacht athraithis, socraíodh tábhacht leis an WelchTest agus ceartaíodh iar-hoc ina dhiaidh sin le Games-Howell, tugtar na cásanna seo faoi deara sna torthaí. Rinneadh na staitisticí go léir ag baint úsáide as SPSS (leagan 22, IBM), agus táirgeadh graif ag baint úsáide as GraphPad (leagan 7, Prism).

For more information:1950477648nn@gmail.com