Antimelanogenesis Feabhsaithe agus Éifeachtaí Frithocsaídeacha Polaisiúicríde Ó Shíolta Cuscuta Chinensis Lam Tar éis Hidrealú Einsímeach
Mar 30, 2023
Teibí
Baineadh polaisiúicríd Cuscuta chinensis (CPS) trí úsáid a bhaint as uisce te agus tháirgtear polaisiúicríd C. chinensis (ECPS) a hidrealaíodh go heinsímeach ag próiseas hidrealú einsímeach mannaase. Ba é cuspóir an taighde seo imscrúdú a dhéanamh ar ghníomhaíocht frith-melanóigineach ECPS agus CPS i gcealla meileanóma B16F10. Rinneadh measúnú ar ghníomhaíocht frithocsaídeach in vitro ag a gcumhacht laghdaithe iarainn ferric agus gníomhaíochtaí scavening radacach saor in aisce DPPH. Cinneadh dáileadh mais mhóilíneach polaisiúicrídí trí úsáid a bhaint as SEC-MALLS-RI. Rinneadh CPS a dhíghrádú go heinsímeach go rathúil trí úsáid a bhaint as mannós agus ba iad na meánmheáchan ualaithe móilíneacha CPS agus ECPS ná 434.6 kDa agus 211.7 kDa. Thug torthaí na dtástálacha ar ghníomhaíocht bhitheolaíoch le fios go raibh gníomhaíocht frith-melanóigineach agus éifeacht frithocsaídeach níos fearr ag polaisiúicríd hidrealaithe einsímeach ná an polaisiúicríd bhunaidh. Thaispeáin ECPS gníomhaíocht frith-melanóigineach trí íos-rialáil a dhéanamh ar léiriú tyrosinase, MITF, agus TRP-1 gan éifeachtaí citotocsaineacha i gcealla meileanóma B16F10. Mar fhocal scoir, tá an cumas ag ECPS a bheith ina tháirge bánaithe craicinn. De réir staidéir ábhartha,cistéiris luibh choiteann é ar a dtugtar “an luibh mhíorúilteach a shíneann an bheatha”. Is é a phríomh-chomhpháirt cistanoside, a bhfuil éifeachtaí éagsúla cosúil le frithocsaídeach, frith-athlastach, agus cur chun cinn feidhm imdhíonachta. An mheicníocht idircistéiraguswhitening craiceannluíonn an éifeacht frithocsaídeach de gliocóisídí cistanche.Meileanni craiceann daonna a tháirgtear trí ocsaídiú tyrosine catalyzed agtyrosinase, agus éilíonn imoibriú ocsaídiúcháin rannpháirtíocht ocsaigine, agus mar sin déantar na fréamhacha saor ó ocsaigine sa chorp a bheith ina fhachtóir tábhachtach a dhéanann difear do tháirgeadh melanin. Tá cistanche ag cistanoside, ar frithocsaídeoir é agus is féidir leis giniúint fréamhacha saor in aisce sa chorp a laghdú, mar sincosc a chur ar tháirgeadh melanin.
Réamhrá
rialtóir géinte biosintéise melanin. Glacann MITF páirt freisin i rialáil pigmentation melanocyte, iomadú, agus idirdhealú (5). tarlaíonn comharthaíocht gabhdóra a-MSH-melanocortin 1 in einsímí sonracha melanóigineacha, lena n-áirítear TRP-1; rialaítear tyrosinase freisin ag an MITF (5). Feidhmíonn go leor gníomhairí whitening craiceann éifeachtaí frith-melanogenic trí léiriú tyrosinase nó éifeachtaí coisctheacha ar ghníomhaíocht tyrosinase a rialáil. Thairis sin, bíonn tionchar ag an leibhéal frithocsaídeach intracellular agus táirgeadh radacach saor in aisce freisin ar ábhar melanin (6). Dá bhrí sin, is minic a roghnaítear coscairí tyrosinase agus comhdhúile frithocsaídeacha mar ghníomhairí bánaithe craiceann. Is leigheas traidisiúnta Síneach é Cuscuta chinensis Lam., ar a dtugtar TuSiZi i Sínis, a úsáidtear go ginearálta mar bhia feidhmiúil agus ar a dtugtar chun cumas an chórais atáirgthe a fheabhsú (7). Le blianta beaga anuas, léirigh roinnt tuarascálacha a úsáid chun freckles agus vitiligo a chóireáil (8). Tá sé léirithe ag tuarascálacha eile go bhfuil tionchar dearfach aige ar chosaint an chraiceann (9), agus go n-eascraíonn sé cosc ar ghníomhaíocht tyrosinase (10).

Cliceáil Ar Rou Cong Rong Benefits For Whitening
Iarr tuilleadh:
david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501
Is iad polaisiúicrídí na príomh-chomhábhair as sliocht uisce C. chinensis Lam. síol, a mheastar go bhfuil gníomhaíochtaí frith-apoptosis (11) agus imdhíoneolaíocha (12). Léirigh torthaí anailíse roimhe seo go bhfuil C. chinensis Lam. tá polaisiúicríd comhdhéanta de fruchtós, mannose, xylose, agus arabinose; is é mannós an príomh-chomhpháirt siúcra (13). Tá sé léirithe ag go leor taighdeoirí go bhfuil tionchar mór ag slaodacht (14), dáileadh meáchan móilíneach (Mw) (15), agus cion monaisiúicríde (16) de pholaisiúicrídí ar a mbithghníomhaíocht. Thairis sin, léirigh taighde le déanaí go léiríonn polaisiúicrídí díghrádaithe le Mw íseal gníomhaíochtaí níos airde frithocsaídeacha agus tyrosinase ná an polaisiúicríd bunaidh (17). Mar sin, táirgeadh polaisiúicríd íseal Mw ó C. chinensis Lam. tá gá le síolta chun a bhithghníomhaíocht a fheabhsú. I measc na bpróiseas díghrádaithe éagsúla, is iad na buntáistí móra a bhaineann le díghrádú einsímeach ná sainiúlacht an tsubstráit, ard-roghnaíocht, agus coinníollacha éadroma, a tháirgeann hidrealáití le struchtúir dea-shainithe (18).
Bunaithe ar na staidéir chógaseolaíochta seo, rinneamar tuairimíocht go bhféadfadh polaisiúicríd C. chinensis (CPS) agus polaisiúicríd C. chinensis (ECPS) a hidrealaíodh go heinsímeach a bheith ina ndrugaí luibheolaíocha éifeachtacha chun hipearpigmentation a fheabhsú. Baineadh úsáid as Mannáis chun Mw ECPS íseal a fháil ón síol. Ina theannta sin, rinneadh meastachán ar ghníomhaíochtaí frith-melanogenesis agus frithocsaídeacha polaisiúicrídí le Mw éagsúla, agus rinneadh imscrúdú ar an gcaidreamh idir bithghníomhaíochtaí agus Mw polaisiúicrídí.
Ábhar agus modhanna
Imoibrithe
Ceannaíodh ceimiceáin le haghaidh gníomhaíochtaí einsímí agus frithocsaídeacha ó Sigma Co. (SAM). Ceannaíodh gach imoibrí agus ceimiceán eile ó Aladdin (tSín).
CPS agus ECPS a ullmhú
Soláthraíodh ábhair íocshláinte síolta Cuscuta chinensis Lam ag Guang Dong Feng Chun Pharmaceutical CO., LTD (tSín). Púdaraíodh thart ar 500 g d'ábhair thirim, agus iad sáithithe le 1200 ml 80 faoin gcéad eatánól ar feadh 24 h faoi theocht an tseomra chun lipidí, olagaishiúicrídí agus ábhair dhaite a bhaint. Infiltrated na samplaí réamhchóireáilte le éadach, agus ansin baineadh an t-iarmhar triomaithe le 3000 ml uisce ag 90 céim trí huaire. Scaradh na sleachta uiscí ón iarmhar trí lártheifneoiriú (4000 g ar feadh 5 nóiméad ag 22 céim ) agus ansin díríodh orthu ag 70 céim faoi fholús; deascadh an comhdhlúthán le 60 faoin gcéad eatánól ag 3 céim ar feadh 24 u. Ar deireadh, díphróitíodh an deascán ag modh Sevag, dialyzed le membrane 3500 Da, lyophilized, agus ansin lipéadaithe C. chinensis polaisiúicríd (CPS).
Fuarthas an polaisiúicríd C. chinensis (ECPS) hidrealaithe go heinsímeach (ECPS) trí hidrealú le mannós (0.1 faoin gcéad i maolán aicéatáit sóidiam) i gcóimheas mannós le foshraith de 5:1 (v/w) ag 60 céim , pH 4.5 ar feadh 6 h. Ina dhiaidh sin, cuireadh deireadh leis an imoibriú catalysis in uisce fiuchphointe ar feadh 10 nóiméad. Rinneadh an tuaslagán imoibrithe a lártheifneoiriú ag 10,000 g ar feadh 15 nóiméad (4 céim), agus bailíodh an forshnáthán le haghaidh scagdhealaithe ag 3 céim ar feadh 3 lá le membrane 3500 Da chun na substaintí móilíneacha beaga a bhaint agus bhí lyophilized.

SEC-MALLS-RI tomhas
Measúnacht ar chosc tyrosinase muisiriún
Cultúr cille agus measúnú inmharthanachta
Ceannaíodh cealla meileanóma Murine B16F10 ó Bhithcheimic agus Bitheolaíocht Ceall (tSín). Coinníodh cealla i Meán Iolair Athraithe Dulbecco (DMEM) arna fhorlíonadh le 10 faoin gcéad de shéiream bó féatais (FBS), streiptimícin 100 mg/ml, agus peinicillin 100 IU/mL ag 37 céim i gcúinsí tais ina raibh 5 faoin gcéad CO2. Síolaíodh cealla ar phlátaí saothraithe agus forlíonta iad le tiúchain éagsúla samplaí agus hormón spreagtha a-melanocyte (a-MSH) ar feadh 72 h chun an ghníomhaíocht tyrosinase intracellular a thomhas agus an t-ábhar melanin a chainníochtú.
Rinneadh an mheasúnacht 3-(4,5-démheitilthiazol-2-il)-2,5-bróimíde défheiniltetrasóiliam (MTT) chun inmharthanacht cille a thástáil (20). Go hachomair, 96-cuireadh síolú ar phlátaí toibreacha le cealla meileanóma murine B16F10. Aistríodh toirt 50 mL de 2 mg/ml MTT isteach i ngach tobar tar éis cóireála le 100 mL de thiúchan samplaí éagsúla ar feadh 24 h. Tar éis 4-h goir, cuireadh deireadh leis an imoibriú agus cuireadh an sulfocsaíd démheitiol leis chun an comhthoradh dothuaslagtha a thuaslagadh. Tomhaiseadh ionsú ag 590 nm leis an léitheoir microplate.
Ábhar melanin a thomhas
Rinneadh ábhar melanin a bhrath le modh beagán modhnaithe (21). Tar éis iad a ní le PBS iced, cuireadh cealla melanoma (2 × 104 cill in aghaidh an tobair) i bpláta tobair agus goraíodh iad ag 37 céim ar feadh 48 h. Ansin, cuireadh 100 mL NaOH (1N) le gach tobar chun cealla melanoma a dhíscaoileadh ag 80 céim ar feadh 30 min. Rinneadh an lysate a lártheifneoiriú ag 15,000 g ar feadh 15 nóiméad (4 céim ). Ansin, tomhaiseadh ionsúiteacht leis an léitheoir microplate ag 405 nm. Rinneadh gach turgnamh faoi thrí.
Measúnacht gníomhaíochta tyrosinase intracellular
Laghdaíonn iarann ferric cumhacht
Rinneadh an measúnú cumhachta iarainn-laghdaithe ferric de réir modh a foilsíodh roimhe seo le mionathruithe (23). Meascaíodh na tiúchain éagsúla samplaí (2 mL) nó Vc (rialú dearfach) le 2 mL ferricyanide potaisiam (1 faoin gcéad , W/V) agus maolán fosfáite 2 mL (0.2 M, pH 6.8). Tar éis goir ag 50 céim ar feadh 32 nóim, aistríodh 2 ml d'aigéad trichloroaicéiteach (10 faoin gcéad , W/V) isteach sa mheascán imoibriúcháin agus lártheifneoiríodh é ag 4000 g ar feadh 15 nóiméad (22 céim ). Meascadh an súthach (2 mL) leis an meascán ina raibh 2 ml d’uisce driogtha agus 0.4 ml FeCl3 (0.1 faoin gcéad , W / V). Tar éis gor 10 nóiméad ag 37 céim, tomhaiseadh an t-ionsúchtadh leis an léitheoir microplate ag 700 nm.
Measúnú ar ghníomhaíocht radacach-scavenging DPPH
Anailís ar léiriú próitéine ag blot an iarthair

Tar éis cóireála le tiúchain éagsúla ECPS ar feadh 72 h, nite na cealla le PBS agus lísíodh iad i maolán RIPA (150 mM NaCl i 50 mM pH 8.0 Tris-HCl , 0.5 faoin gcéad deoxycholate sóidiam, 1.0 faoin gcéad nondiet P{10}}, agus 0.1 faoin gcéad deodecyl sulfáit sóidiam). Tar éis lártheifneoraithe ag 10,000 g ar feadh 25 nóiméad (4 céim ), bailíodh an comhshnaidhm de lysáití. Cuireadh na próitéiní faoi réir 12 faoin gcéad SDS-PAGE agus ansin aistríodh iad chuig membrane défhluairíd pholaivinilideine. Rinneadh blocáil i saline maolánach Tris le Tween-20 agus 2 faoin gcéad de phúdar bainne bearrtha (TBST), agus ansin goraíodh é ar feadh 12 h ag 4 chéim . Ba iad seo a leanas na príomhantasubstaintí a úsáideadh: frith-actin (1:5000), frith-TRP-1 (1:500), frith-tyrosinase (1:500), agus frith-MITF (1:1000). Baineadh na hantasubstaintí príomhúla, agus glanadh na seicní faoi dhó le TBST. Ina dhiaidh sin, goradh seicní le antashubstaint tánaisteach comhchuingeach horseradish peroxidase (Santa Cruz, SAM) ar feadh 60 nóiméad ag teocht an tseomra. Níochán na bannaí próitéine le TBST arís agus léiríodh iad le trealamh ECL (Amersham Pharmacia Biotech, SAM) ag baint úsáide as an gcóras íomháithe UVP (UVP, SAM).
Anailís staitistiúil
Tuairiscítear na torthaí go léir mar acmhainn ±SD agus rinneadh na turgnaimh a mhacasamhlú trí huaire. Measadh comparáidí idir grúpaí ag baint úsáide as ANOVA agus tástáil Dunnett ina dhiaidh sin. Rinneadh comparáid aonair idir dhá ghrúpa i dtástáil an Mhic Léinn. Baineadh úsáid as bogearraí SPSS (leagan 16.0) le gach anailís staitistiúil. Measadh go raibh Po0.05 suntasach go staitistiúil.
Torthaí
Mw agus polaisiúicrídí iomlána ECPS agus CPS
Ba é 89.17 agus 90.26 faoin gcéad, faoi seach, an t-ábhar polaisiúicríde iomlán in ECPS agus CPS arna thomhas ag measúnacht aigéad feanól-sulfair. Idir an dá linn, tomhaiseadh Mw ECPS agus CPS ag SEC-MALLS-RI. Ba é an Mw de ECPS ná 211.7 kDa, a bhí níos ísle ná CPS (434.6 kDa). Léiríonn Fíor 1A an déine choibhneasta (RI) don ECPS agus CPS; tar éis hidrealú einsímeach le mannós, bhí buaic-am coinneála ECPS níos faide ná mar a bhí ag CPS. Mar a léirítear i bhFíor 1B, léiríodh codáin mheáchain dhifreálach na polaisiúicrídí mar fheidhm na maise mólar i gcás samplaí. Tháinig athrú suntasach ar dháileadh mais molar na polaisiúicrídí trí hidrealú einsímeach. Mhéadaigh an codán meáchain difreálach ECPS sa réigiún Mw íseal, rud a thug le tuiscint go ndearnadh an CPS a dhíghrádú go heinsímeach go polaisiúicríd íseal Mw.

Gníomhaíochtaí frithocsaídeacha polaisiúicrídí
Tuairiscítear cumais scavenála saor-radacach DPPH ECPS agus CPS i bhFíor 2A. Léirigh gníomhaíochtaí scavenála saor-radacach samplaí polaisiúicríde agus Vc gníomhaíocht dáileog-spleách. Sa staidéar reatha, bhí cumas scavenging saor-radacach CPS níos ísle ná cumas ECPS. Mar sin féin, léirigh an dá éifeacht scavenging saor-radacach níos ísle ná an sampla dearfach. Ba iad na luachanna IC50 de ECPS agus CPS ná 0.39 agus 0.51 mg/mL, faoi seach. Mar a léirítear i bhFíor 2B, is féidir an ghníomhaíocht frithocsaídeach iomlán a mheasúnú trí chumhacht laghdaithe iarainn ferric a thástáil. Bhí na tiúchain éagsúil ó 0.1 go 1 mg/mL; Chuir samplaí polaisiúicríde agus Vc araon gníomhaíocht frithocsaídeach i láthair ar bhealach dáileog-spleách. Ina theannta sin, bhí luach ionsúcháin ECPS i gcónaí níos airde ná mar a bhí CPS ag an tiúchan céanna.
Éifeacht ECPS agus CPS ar ghníomhaíocht tyrosinase muisiriún agus inmharthanacht cille
Mar a léirítear i bhFíor 2C, léirigh gníomhaíocht coisctheach tyrosinase polaisiúicrídí (0.1B1 mg/mL) caidreamh dáileog-spleách. Ina theannta sin, bhí éifeacht coisctheach ECPS i gcónaí níos airde ná mar a bhí CPS ag an tiúchan céanna. Rinneadh an measúnú MTT chun measúnú a dhéanamh ar éifeachtaí cíteatocsaineacha ECPS agus CPS i gcealla meileanóma B16F1{0. Mar a léirítear i bhFíor 2D, ní raibh aon athruithe suntasacha ar inmharthanacht chealla B16F10 le tiúchain éagsúla (0B320 mg/mL) de ECPS agus CPS. Bunaithe ar na torthaí seo, d'úsáideamar na raonta tiúchana seo i
tuilleadh taighde.

Éifeacht ECPS agus CPS ar ghníomhaíocht tyrosinase intracellular agus ábhar melanin

Éifeacht ECPS ar leibhéil próitéin tyrosinase, MITF, agus TRP-1 i gcealla B16F10
Plé
Tá aird tugtha ar na polaisiúicrídí nádúrtha ó C. chinensis mar gheall ar a n-éifeachtaí maithe ar chosc tyrosinase, scavening radacach saor in aisce, agus cosaint an chraiceann (25-27). Mar sin féin, is beag taighde atá dírithe ar ghníomhaíocht antimelanogenesis de mhodhnú einsímeach polaisiúicrídí. Tá sé léirithe ag taighde roimhe seo gur léirigh polaisiúicrídí díghrádaithe trí phróiseas hidrealú einsímeach éifeacht scavening radacach níos fearr (28). Thairis sin, tá dlúthbhaint ag gníomhaíochtaí bitheolaíocha polaisiúicrídí lena dáiltí Mw. Go teoiriciúil, tá polaisiúicrídí Mw íseal níos gníomhaí ná polaisiúicrídí Mw ard mar gheall ar a n-airíonna treá ard ar na seicní cille (29,30). Mar sin féin, ní raibh staidéar déanta fós ar éifeacht antimelanogenesis ECPS ar chealla B16F10. Ullmhaíodh an polaisiúicríd íseal Mw trí hidrealú einsímeach le mannós.
Is féidir le strus ocsaídiúcháin fréamhacha saor in aisce iomarcacha a tháirgeadh agus gortú ocsaídiúcháin a bheith mar thoradh air. Tá staidéir roimhe seo cruthaithe go bhfuil dlúthbhaint ag galar craicinn le carnadh fréamhacha saor in aisce (31). Thairis sin, tá ról ríthábhachtach ag fréamhacha saor in aisce iomarcacha maidir le melanogenesis cealla melanoma agus fás melanocytes a shochtadh (32). Is einsím ilfheidhmeach ocsaídeach é Tyrosinase ina bhfuil cré-umha agus tá sé ríthábhachtach chun biosintéis melanin a chur chun cinn (33). Mar sin féin, tá dlúthbhaint ag pigmentation craiceann agus galair craicinn éagsúla le carnadh melanin agus is cúis le fadhb thromchúiseach aeistéitiúil (34).
Is féidir le comhábhair ghníomhacha le cumas frithocsaídeach agus frith-tyrosinase cosaint an chraiceann a fheidhmiú agus bac a chur ar melanogenesis (35). Tá sé léirithe ag ár dtorthaí gur léirigh an Mw níos ísle de pholaisiúicrídí modhnaithe einsímeacha gníomhaíochtaí frithocsaídeacha agus frith-tírosinase níos fearr ná na polaisiúicrídí bunaidh in vitro. Tá an feabhas curtha i leith an achar dromchla níos mó agus tuaslagthacht uisce níos fearr, a bhí comhsheasmhach le staidéar roimhe seo (17) a léirigh go bhfuil gníomhaíocht frith-tyrosinase níos fearr agus gníomhaíocht frithocsaídeach níos fearr ag polaisiúicríd díghrádaithe ó Sargassum fusiforme ná an polaisiúicríd bunaidh.

Buíochas
Tagairtí
23. Berker KI, Güc ¸lü K, Tor I˙, Apak R. Meastóireacht chomparáideach ar Fe(III) ag laghdú measúnachtaí acmhainne frithocsaídeacha bunaithe ar chumhacht i láthair feineanthroline, bat-ho-phenanthroline, tripyridyltriazine (FRAP), agus ferricyanide imoibrithe. Talanta 2007; 72: 1157-1165, doi: 10.1016/j.talanta.2007.01.019.
24. Parejo I, Codina C, Petrakis C, Kefalas P. Meastóireacht ar an ngníomhaíocht scabhála arna measúnú ag ceimiceán luminol spreagtha Co(II)/EDTA agus DPPH ● (2,2-défheinile-1 picrilín hiodrocsaile ) measúnacht radacach saor in aisce. J Modhanna Tocsaineacha Pharmacol 2000; 44: 507–512, doi: 10.1016/S1056-8719(01)00110-1.
35. Perluigi M, De Marco F, Foppoli C, Coccia R, Blarzino C, Luisa Marcante M, et al. Cosnaíonn Tyrosinase melanocytes daonna ó chomhdhúile a ghineann ROS. Biochem Biophys Res Commun 2003; 305: 250–256, doi: 10.1016/S0006- 291X(03)00751-4.






