Éifeachtaí Hypoglycemic Agus Hypolipidéimeacha d'Anthocyanins Blueberry De réir Gníomhachtaithe AMPK: Staidéir In Vitro Agus in Vivo Cuid 1

Déan teagmháil le do thoiloscar.xiao@wecistanche.comle haghaidh tuilleadh eolais

Coimriú:Tá blueberries saibhir i anthocyanins bithghníomhacha, le leibhéal ard malvidin, a bhaineann le sochair frithocsaídeacha a chuireann le laghdú ar an mbaol diaibéiteas. Ba é cuspóir an staidéir seo imscrúdú a dhéanamh ar éifeachtaí hypoglycemic agus hypolipidemic sliocht anthocyanin fraochán (BAE),mhailís(Mv), malvidin-3-glúcósíd (Mv-3-GLC), agus malvidin-3-galactosíd (Mv-3-gal) i gcealllíne heipitocarcinoma daonna HepG2 agus i gcilllíne ard- aiste bia saill le chéile lucha diaibéiteach streptozotocin-spreagtha. Mhéadaigh cóireáil ard glúcóis go mór an strus ocsaídiúcháin hepatic suas go dtí 6-huaire agus laghdaigh sé inmharthanacht cille HepG2. Rinne réamhchóireáil le BAE, Mv, Mv-3-glc, agus Mlv-3-gal na damáistí seo a mhaolú go suntasach tríd an speiceas ocsaigine imoibríoch (ROS) a ísliú 87,80,76, agus 91 faoin gcéad, agus ag méadú inmharthanacht na gceall ag 88,79,73, agus 98 faoin gcéad, faoi seach. Chuir na réamhchóireáil seo bac go héifeachtach freisin ar hyperglycemia agus hyperlipidemia, faoi seach trí leibhéil slonn na n-einsímí atá rannpháirteach i gluconeogenesis agus lipogenesis a laghdú agus iad siúd a bhfuil baint acu le glycogenolysis agus lipolysis a fheabhsú, tríd an gcosán comharthaíochta kinase próitéine adenosine monophosphate-activated (AMPK) i gcealla HepG2. Chun a chinneadh, an ról atá ag AMPK in imoibriú BAE-spreagtha de glúcóis agus meitibileacht lipid in vivo, dáileoga de 100 mg / kg (sleachta anthocyanin gorm-tiúchan íseal, BAE-L) agus 400 mg / kg (sleachta anthocyanin blueberry - tiúchan ard. , BAE-H) in aghaidh an lae do lucha diaibéitis ar feadh 5 seachtaine. Bhí tionchar suntasach ag cóireálacha BAE (P<0.05) effect="" on="" body="" weight="" and="" increased="" the="" ampk="" activity,="" achieving="" the="" decrease="" of="" blood="" and="" urine-glucose,="" as="" well="" as="" triglyceride="" and="" total="" cholesterol.="" this="" research="" suggested="" that="">antocyaninschuidigh leis an sliocht fraochán-spreagthahipoglycemiaagus d'fhéadfadh éifeachtaí hypolipidemic i diaibéiteas agus BAE a bheith ina bhia feidhmiúil nó ina leigheas feidhmiúil le haghaidh cóireáil diaibéiteas.

Cliceáil anseo le do thoil chun tuilleadh eolais a fháil

1. Réamhrá

Is galar aitheanta é Diaibéiteas mellitus (DM) go hiondúil arb é is sainairíonna é nach bhfuil sé in ann gnáthleibhéil glúcóis fola a choinneáil. Déanann an neamhord meitibileach ainsealach seo dochar tromchúiseach do shláinte an duine agus cuireann sé ualach trom airgeadais ar chórais cúram sláinte ar fud an domhain [1]. Déantar an galar seo a rangú i dhá phríomhchineál bunaithe ar an gcúis le dírialú glúcóis fola. Is éard is cúis le Cineál 1 DM ná scrios uath-imdhíonachta ar bhéitechealla as a dtagann neamhábaltacht chun inslin a tháirgeadh ach is sainairíonna é diaibéiteas Chineál 2 ná gabhdóirí inslin infhriotaíochta, tar éis feidhm laghdaithe a bheith acu, ná ligeann do chealla freagairt go leordhóthanach don ardú glúcóis fola.

Is féidir le Cistanche díolúine a fheabhsú

Chomh maith le hyperglycemia, tá claonadh ag diabeticshipearlipidemiais féidir damáiste a dhéanamh d'orgáin agus fíocháin mar thoradh ar an dá choinníoll de bharr strus méadaithe glycocsaídeach [2]. Tá táirgeadh insulin agus damáiste receptor insulin i measc na bhfachtóirí is cúis le hyperglycemia i diabetics. San ae, déanann ró-léiriú gluconeogenesis agus glycogenolysis glúcóis a athléasú isteach sa sruth fola [3] ach, sa stéig bheag, is cúis le méadú ar iompar glúcóis 2 (GLUT2) le ró-léiriú iompróir glúcóis 2 (GLUT2). Is féidir le hipearlipidemia de bharr ró-léiriú lipogenesis i bhfíochán adipose [5] a bheith ina chúis le iontógáil glúcóis lagaithe inslin-spreagtha agus sintéis glycogen as a dtiocfaidh friotaíocht inslin agus mar sin rannchuidíonn sé le dul chun cinn diaibéiteas 6]. Bíonn tionchar ag deacrachtaí fadtéarmacha a bhaineann le diaibéiteas ar orgáin éagsúla agus folaíonn siad Hipirtheannas, Atherosclerosis, retinopathy, nephropathy, ulcers coise, agus neuropathy forimeallach [7].

Níl aon leigheas ann do diaibéiteas faoi láthair, áfach, is féidir a éifeachtaí a mhaolú [8]. I gcás daoine a diagnóisíodh le diaibéiteas cineál 1, is é an chóireáil choitianta é meascán de rialáil aiste bia, agus iontógáil cuí inslin de réir carbaihiodráití a chaitear. I measc na ndúshlán atá ann faoi láthair maidir le cineál 1 diabetics tá neamhábaltacht nó deacrachtaí maidir le meastachán a dhéanamh ar charbaihiodráití iomlána agus dáileog cuí inslin; áfach, gar-idéalachglycemicis féidir leibhéil a chur i bhfianaise dul chun cinn teicneolaíochta lena n-áirítear caidéil insline [9]. D'fhéadfadh cóireáil a bheith níos casta d'othair atá ag fulaingt ó diaibéiteas cineál 2, lena n-áirítear teaglaim de rialáil aiste bia, aclaíocht, inslin, agus drugaí eile le héagsúlacht meicníochtaí gníomhaíochta a oibríonn chun glúcóis fola a ísliú[10].Is é an moladh cothaithe coitianta a leanúint aiste bia de carbaihiodráití íseal [11,12].

Tá Blueberry ar cheann de na torthaí is féidir le hothair diaibéitis a ithe agus d'fhéadfadh laghdú a dhéanamh ar an mbaol diaibéiteas mellitus cineál 2 (T2DM)[13,14]. Tá blueberries saibhir i raon leathan comhdhúile atá tairbheach do shláinte an duine lena n-áirítear mianraí, aigéid orgánacha snáithíní, aigéid feanólacha, agus flavonoids lena n-áirítear flavonols agus anthocyanins [15,16]. Mar sin féin, cuimsíonn próifílí tipiciúil anthocyanin galactosides, glucosides, agus arabinoside de delphinidin, malvidin, cyanidin, petunidin, agus peonidin [17] le malvidin agus delphinidins mar phríomh-ranníocóir le hábhar iomlán anthocyanin [18,19]. In ár staidéar roimhe seo [20], ba é malvidin an anthocyanidin is flúirseach a fuarthas i sliocht torthaí fraocháin rabbiteye in éineacht le delphinidin, cyanidin, petunidin, agus peonidin atá ag comhaontú le húdair eile a fuair malvidin freisin a bheith ina ranníocóir tábhachtach le hábhar anthocyanin iomlán. i gcineálacha éagsúla blueberries [17,21].

Féadfaidh anthocyanins Blueberry íogaireacht inslin a fheabhsú trí chumas frithocsaídeach agus trí idirghníomhaíochtaí rialála eile ós rud é nach féidir a n-éifeachtaí a mhíniú go hiomlán ag an gcéad cheann [13,22]. D'aimsigh staidéir freisin na buntáistí a bhaineann le anthocyanins fraochán le haghaidh imní eile a bhaineann le diaibéiteas. I staidéar in vitro, rinne Huang et al. [23] fuarthas amach go raibh éifeachtaí frith-athlastacha agus frithocsaídeacha ag anthocyanins blueberry ar chealla reitineacha daonna i gcoinníollacha ard glúcóis. Bhí inmharthanacht 64 faoin gcéad ag cealla a bhí faoi lé glúcós ard ach nuair a bhí siad faoi lé eastóscán anthocyanin fraochán, malvidin, malvidin-glucoside, nó malvidin-galactosid, bhí a n-inmharthanacht 7-9 faoin gcéad ,83 faoin gcéad , 91- faoin gcéad , nó { {11}} faoin gcéad , faoi seach. Ar an láimh eile, Song et al. [24] fuarthas amach go laghdaigh anthocyanins blueberry strus ocsaídiúcháin agus athlasadh i reitine francach diaibéitis. Tugadh 20, 40, agus 80 mg/kg de anthocyanins fraocháin do francaigh diaibéitis ó bhéal ar feadh 12 sheachtain. Bhí glúcóis fola níos ísle, cumas frithocsaídeach níos airde agus athlasadh níos ísle sa reitine ag francaigh le dáileoga arda anthocyanins gormacha, agus speicis ocsaigine imoibríocha níos ísle i gcomparáid leo siúd gan anthocyanins gormacha.

Cé go seachadann anthocyanins fraochán buntáistí sláinte don ae agus d’orgáin eile le haghaidh diabetics, ní léir gníomhartha hipoglycemic agus hypolipidemic de eastóscán anthocyanin fraochán (BAE) i gcealla hepatic daonna. Sa staidéar reatha, rinneadh tuairimíocht go bhfuil gníomhaíochtaí hipoglycemic agus hipilipidéime ag BAE, chomh maith le Mv, Mv-3-glc, agus Mv-3-gal, i gcealla hepatocarcinoma daonna (HepG2) agus i lucha agus go bhfuil siad d’fhéadfadh homeostasis glucolipid a choinneáil ar bun, rud a mhaolódh forbairt diaibéiteas.

2. Ábhair agus modhanna

2.1. Ceimiceach agus imoibrithe

Caora gorma Brightwell rabbiteye (Baineadh Vaccinium ashei ó Fujiabian Orchard Picking (Nanjing, an tSín) agus ansin fuarthas agus stóráladh a gcuid sliocht anthocyanin sa dorchadas ag{{{0}} céim . An t-athghníomhaire 3- (4,5 démheitilthiazol-2-il)-2,5 défheinile-2H-tetrazolium bróimíd (MTT) agus na caighdeáin malvidin (Mv), malvidin-3-glúcóis (Mv{ Fuarthas {11}}glc), agus malvidin-3-galactose(Mv-3-gal) ó Sigma Aldrich (Shanghai, an tSín). Fuarthas imoibrithe braite blotála an iarthair cheimiluminescence (ECL) ó CW Biotechnology (Beijing, an tSín), séiream bó féatais (FBS), meán Eagle modhnaithe Dulbecco (DMEM), agus peinicillin-streiptimícin ó Gibco (Auckland, an Nua-Shéalainn). ceannaíodh streptozotocin (STZ) ó Saiguo Biotech (Guangzhou, an tSín) Ceannaíodh trealamh braite dé-aicéatáit dé-hidrea-fluaraiséin (DCFH-DA) ó Institiúid Teicneolaíochta Beyo-time (Shan). ghai, an tSín). Fuarthas albaimin serum bó (BSA) ó Shyuanye (Shanghai, an tSín). An beatha ard-saill agus ard-siúcra (saill 35.5 faoin gcéad, próitéin 20 faoin gcéad, carbaihiodráit 36.4 faoin gcéad , 0.1 faoin gcéad ceallalóis) agus an gnáth-beatha (saill 4.5 faoin gcéad, próitéin 23 faoin gcéad, carbaihiodráit 31.9 faoin gcéad, 3.7 faoin gcéad fruchtós, agus 5.3 faoin gcéad ceallalóis) do lucha a fuarthas ó Xietong Bioengineering Co., Ltd (Nanjing, an tSín). Ceannaíodh na feisteáin mheasúnachta inslin, tríghlicríde (TG), colaistéaról iomlán (TCHD, glutathione peroxidase (GSH-Px), agus superoxide dismutase (SOD) ó Institiúid Taighde Bithinnealtóireacht Jiancheng (Nanjing, an tSín). AndyGene human Forkhead Box O1(FOXO1) , glúcós-6-fosfatase(G6Pase), glycogen synthase-fosphorylation (p-GS), glycogen synthase kinase-3 beta-fosphorylation (p-GSK3 ), iompróir glúcóis 2(GLUT2), comh-einsím aicéitile A carboxylase (ACC), lipáis triglyceride hormone-íogair (HSL), 3-hidrocsa-3-methylglutaryl-coenzyme reductase (HMGCR) agus trealamh measúnaithe imdhíon-ionsorbent inslin-nasctha einsím-nasctha (ELISA) ar fad ó Bluegene Biotech. (Shanghai, an tSín) Ba iad na ceimiceáin agus na himoibrithe a úsáideadh sa staidéar seo na gráid anailíseacha íona go léir.

2.2. Antasubstaintí

Fuarthas antasubstaintí príomhúla i gcoinne GS, p-GS (Ser641), próitéin stéaróil atá ceangailteach d’eilimint rialála-1c(SREBP-1c), agus fosphoenolpyruvate carboxykinase (PEPCK) ó Abcam (Cambridge, An Ríocht Aontaithe). . Antasubstaintí príomhúla i gcoinne próitéine adenosine monophosphate-gníomhachtaithe kinase alfa (AMPKa), p-AMPK a (Thr172), peroxisome-proliferator-gníomhachtaithe receptor-y-coactivator-1 (PGC-1), ACC, p- Ceannaíodh antasubstaintí tánaisteacha comhchuingeacha ACC (Ser79), agus horseradish peroxidase (HRP) ó Cell Signaling Technology (Beverly, MA, SAM). Ceannaíodh antashubstaint i gcoinne gliocróldehyde 3-fosfáit dehydrogenase(GAPDH) ó Nanjing Beidi Biomed Technology (Nanjing, an tSín) agus ceannaíodh antashubstaint i gcoinne -actin ó Sigma Aldrich (St. Louis, MO, SAM). Baineadh úsáid as antasubstaintí príomhúla ag caoluithe 1:1000 agus baineadh úsáid as caoluithe 1:4000 le haghaidh antasubstaintí tánaisteacha.

2.3. Ullmhú sliocht anthocyanin fraochán (BAE)

Baineadh úsáid as an modh a bhí againn roimhe seo de Huang et al. [25]. Coinníodh na gormóga súl coinín reoite ag teocht an tseomra go dtí go raibh siad díreoite. Ansin, buaileadh iad ag 10 000 rpm ar feadh 30 s ag baint úsáide as homogenizer bunúsach ULTRA-TURRAX T18 (IKA Works Guangzhou, an tSín). Bhí méid 250 g de blueberries sáithithe ansin i dtuaslagán de 1000 ml meatánóil ina raibh 1 faoin gcéad HCl ar feadh 24 u. Bailíodh an sliocht ansin tar éis lártheifneoraithe ag 5000 × g ar feadh 15 nóiméad. Tar éis galú an tuaslagóra ag 40 céim i bhfolús, baineadh an t-iarmhar le 1:1 (v/v) aicéatáit eitile trí huaire. Bailíodh agus comhchruinníodh an chéim uisce ina bhfuil anthocyanins ag baint úsáide as galú folúis chun sliocht amh anthocyanin a fháil. Rinneadh an sliocht a íonú tuilleadh le roisín macraporous AB{-8 (Sigma Aldrich, Shanghai, An tSín). Chun fruchtós agus próitéin a bhaint, cuireadh an t-úsc faoi réir crómatagrafaíocht colúin ar roisín macraporous 1000 g AB{{{10 000 le haghaidh ionsú 24 h agus ansin é a chur faoi uisce driogtha dúbailte. Fuaraíodh an codán anthocyanin le 80 faoin gcéad eatánól ina raibh tuaslagán HCl 1 faoin gcéad, comhchruinnithe i bhfolús, agus ansin triomaíodh é ag baint úsáide as triomadóir reoite Eyela FDU-1200 (Tóiceo Rikakikai, an tSeapáin) chun sliocht anthocyanin blueberry (BAE) a fháil. púdar.

2.4. Cultúir agus cóireálacha cille

Tá cion ard de phróitéiní a bhaineann go sonrach leis an ae ag línte cille HepG2, a dhíorthaítear ó charcanóma hepatocellular daonna sainaitheanta. Ar an gcúis seo, úsáidtear iad go coitianta mar mhúnlaí saotharlainne le haghaidh staidéir ar chealla ae daonna [26]. Fásadh cealla HepG2 i DMEM ina raibh gnáth-D-glúcóis (5.5 mM) arna fhorlíonadh le 10 faoin gcéad FBS agus 1 faoin gcéad peinicillin-streiptimícin agus coinnithe ag 37 céim C agus gorlann atmaisféar 5 faoin gcéad CO2 (Thermo Scientific, Waltham, MA, SAM). Tar éis 70-80 faoin gcéad cumar a bhaint amach, rinneadh na cealla HepG2 a fhoshaothrú. Ceithre huaire an chloig roimh an turgnamh, bhí cealla HepG2 quiesced i mheán serum laghdaithe. Tar éis réamhchóireáil le 5 ug/mLof Mv, Mv-3-glc, Mv-3-gal, nó BAE ar feadh 24 h, nochtaíodh na cealla do ghnáth-chomhchruinnithe glúcóis (5.5 mM) nó ard (30 mM) do aithris a dhéanamh ar ghnáthchoinníollacha agus diaibéitis. Ullmhaíodh na cealla le haghaidh anailíse Western Blot agus bailíodh na comhlíonta le haghaidh anailíse ELISA.

2.5. Ainmhithe agus dearadh turgnamhach

Coinníodh lucha fireanna sláintiúla C57BL/6J (20 ± 2 g) ó GemPharmatech (Nanjing, Jiangsu, an tSín) i gcoinníollacha caighdeánacha saotharlainne, lena n-áirítear teocht leanúnach 25 céim agus 12-h lá, agus malairt oíche. Bhí gach nós imeachta turgnamhach ainmhithe ceadaithe ag Fochoiste um Chúram agus Úsáid Ainmhithe Taighde Acadamh Eolaíochtaí Talmhaíochta Jiangsu roimhe seo. Baineadh úsáid as aiste bia ard-saille agus streptozotocin (STZ) chun T2DM a aslú sna samhlacha ainmhithe de réir an mhodha a d'úsáid Islam and Loots [27]. Tugadh bia do gach lucha le haiste bia ard-saill agus ard-siúcra ach amháin don ghrúpa rialaithe a d'ith gnáth-aiste bia. Tar éis 4 seachtaine, troscadh na lucha ar feadh 12 h agus instealladh inperitoneally iad le 100 mg/kg STZ tuaslagtha i dtuaslagán maolánach citrate sóidiam (pH 4.2-4.5). Seachtain amháin tar éis ionduchtú STZ, tógadh samplaí fola ó vein eireaball na lucha a rinne troscadh thar oíche. Aithníodh lucha a léirigh comharthaí diaibéitis lena n-áirítear polyuria, polydipsia, agus hyperglycemia (leibhéal glúcóis fola troscadh > 11.1 mmol/L) mar T2DM agus úsáideadh iad le haghaidh staidéir amach anseo. Chun cobhsaíocht T2DM an tsamhail a sheiceáil, chothaíodh gach lucha le gnáth-aiste bia ar feadh seachtaine amháin. Baineadh úsáid as na gnáth-lucha mar an grúpa rialaithe. Roinneadh na lucha diaibéitis ansin go randamach i dtrí ghrúpa: múnla, dáileog íseal BAE (100 mg/kg), agus ard-dáileog BAE (400 mg/kg). Ar feadh 6 lá as a chéile, tugadh an méid céanna tuaslagóra (100 μL), 100 mg/kg nó 400 mg/kg de BAE don ghrúpa rialaithe, don ghrúpa samhail, don dáileog íseal BAE agus BAE dáileog ard ar feadh 6 lá as a chéile. faoi ​​seach. Ar an seachtú lá, tomhaiseadh meáchan coirp agus glúcóis fola troscadh. Lean an riarachán intragastrach céanna ar feadh 5 seachtaine. Troscadh lucha ansin thar oíche, agus bailíodh samplaí fola le haghaidh ullmhú séiream ón vena cava inferior agus stóráil ag -20 céim . Tar éis sampláil fola, rinneadh ainéistéisiú ar na lucha go léir agus rinneadh iad a íobairt. Baineadh ae na lucha, an spleen, na duáin agus fíocháin an thymus, rinneadh iad a mheá agus a stóráil ag céim {-80 le haghaidh turgnamh breise.

2.6. Brath inmharthanacht cille

Socraíodh an inmharthanacht cille ag an modh MTT. Úsáideadh cúig ug/mL de Mv, Mv{{{0}}glc, Mv-3-gal nó BAE chun cealla a réamhchóireáil ar feadh 24 h. Cóireáladh na cealla ansin le glúcóis 5 mMor 30 mM ar feadh 24 h agus cuireadh 10 μL 0.5 faoin gcéad (5 mg / ml) de MTT leis na cealla a saothraíodh ansin arís. Tar éis 4 h, baineadh an tuaslagán MTT, agus cuireadh 100 μL sulfoxide dimethyl (DMSO) leis sular chroith an meascán go mall ar feadh 10 nóiméad chun an criostail cille a thuaslagadh. Rinneadh an t-ionsúiteadh ag 490 nm a thomhas ar léitheoir micreaphláta StatFax-2100 (Awareness Tech-nology Inc., Plam, FL, USA) chun na luachanna dlúis optúla (OD) a fháil. Baineadh úsáid as cealla saothraithe le gnáthleibhéil glúcóis (5.5 mmol/L) mar ghrúpa rialaithe, ach baineadh úsáid as toibreacha gan cealla mar an bán. Úsáideadh an fhoirmle seo a leanas chun inmharthanacht cille a chinneadh: Inmharthanacht cille( faoin gcéad )=(grúpa samplach OD luach bán grúpa OD)/(grúpa rialaithe OD luach bán grúpa OD) x 100 faoin gcéad .

2.7. Amharcléiriú fluaraiseachta ROS

Rinneadh measúnú ar an speiceas ocsaigin imoibríoch (ROS) i gcealla HepG2 ag baint úsáide as trealamh braite DCFH-DA. Tar éis cóireála tosaigh le 5 ug/mL de Mv, Mv-3-glc, Mv-3-gal, nó BAE ar feadh 24 h agus ina dhiaidh sin cóireáil 5 mM nó 30 mMglúcóis ar feadh 24 h, nite na cealla le PBS, agus ansin cuireadh 10 μM DCFH-DA le gach tobar agus cead a imoibriú ar feadh 20 nóiméad ag 37 céim . Rinneadh na cealla a nite go críochnúil arís le PBS agus ansin breathnaíodh grúpa de na cealla seo láithreach faoi mhicreascóp fluaraiseachta inbhéartaithe IX53 (Olympus, Tóiceo, an tSeapáin) ag astaíocht 530 nm agus scagairí excitation 485 nm. Cuirtear na híomhánna i láthair faoi 200 × formhéadú. Tar éis an díthiomsaithe, bailíodh grúpa eile cealla agus thaifead léitheoir microplate ilmhód Synergy H4 (BioTek Instruments Inc., Winooski, VT, SAM) a bhfluaraiseacht. Tugadh faoi deara déine fluaraiseachta iomlán na gceall i ngach tobar, agus rinneadh giniúint ROS a thomhas mar fhilleadh den Rialú.

2.8. ELISA

Baineadh úsáid as feisteáin ELISA chun próitéiní a bhfuil baint acu le gluconeogenesis (FOXO1, G6Pase, p-GS), glycogenolysis (p-GSK3 ), iompróir glúcóis (GLUT2), lipogenesis (ACC agus HMGCR), agus lipolysis (HSL) i bhfosaitheoirí HepG2 a chainníochtú. cealla. Cinneadh freisin an chainníocht GLUT2 in aenna lucha. Baineadh úsáid as an trealamh measúnaithe próitéin BCA chun próitéin cille iomlán an t-suímhnáithigh a chainníochtú. Rinneadh an t-ionsúiteadh ag 450 nm a thomhas ag 37 céim ar léitheoir micreaphláta StatFax-2100 (Awareness Technology Inc., Plam, FL, USA) chun leibhéil próitéine a chinneadh.

2.9. Anailís blotála an Iarthair

Rinneadh blotáil an iarthair ar lysates HepG2 chun leibhéal próitéin AMPK, p-AMPK, gluconeogenesis (PGCl, PEPCK, glycogenolysis (GS, p-GS), agus lipolysis (ACC, p-ACC, SREBP) a thomhas{{4} }c)sna cealla. Rinneadh blotáil an iarthair freisin chun na cainníochtaí AMPK,p-AMPK ar ae lucha de bharr diaibéiteas a fháil amach. Úsáideadh GAPDH nó -Actin mar rialú luchtaithe. LAS-3000 íomháú Baineadh úsáid as córas (Fuji, Tóiceo, an tSeapáin) chun na bannaí próitéine a bhreathnú, agus rinneadh a ndlús a chainníochtú trí úsáid a bhaint as bogearraí Bio Profile 1D plus (Vilbert Lour-mat, Marne La Vallee, An Fhrainc). an rialú.

2. 10. Fasting glúcóis fola agus measúnacht caoinfhulaingt glúcóis

Tomhaiseadh glúcóis fola troscadh uair sa tseachtain ar feadh tréimhse 5 seachtaine tar éis 12-h tréimhse troscadh. Maidir le measúnacht lamháltais glúcóis, troscadh lucha ar feadh 16 h agus beathaíodh iad le 2 g/kg de 20 faoin gcéad glúcóis (200 μL) laistigh den gastra(ig) chun an glúcóis fola a chinneadh ag 0 ,0.5,1,1.5, agus 2h. Bailíodh an fhuil ón vein eireaball agus tomhaiseadh na leibhéil glúcóis ag baint úsáide as glucometer (Sinocare, Changsha, an tSín). Rinneadh an leibhéal glúcóis i bhfual lucha a fuair ig a thomhas freisin ar feadh tréimhse cúig seachtaine.

2.11.Meastachán ar innéacsanna bithcheimiceacha serum agus ar ghníomhaíocht einsíme in ae lucha

Tomhaiseadh an chainníocht inslin, tríghlicríde agus colaistéaról iomlán sa serum, agus measadh gníomhaíocht einsíme SOD agus GSH-PX ag baint úsáide as na feisteáin tráchtála de réir phrótacal an mhonaróra. Rinneadh ionsú ag 500 nm do thríghlicrídí (TG) agus colaistéaról iomlán (TCH), agus 450 nm do na cinn eile (insulin, SOD, agus GSH-PX) a thomhas ag 37 céim ar léitheoir micreaphláta StatFax-2100 (Teicneolaíocht Feasachta Inc., Plam, FL, USA).

2.12. Anailís staitistiúil

Cuirtear na sonraí go léir i láthair mar mheánluach ± ​​diall caighdeánach (SD) de thrí thurgnamh neamhspleácha ar a laghad. Fuarthas na figiúirí ag baint úsáide as GraphPad Prism Leagan 8 (GraphPad Software, Inc., CA, USA). Rinneadh anailís aontreo ar athraitheas (ANOVA), t-tástálacha, nó tástáil chomparáidí iolracha Sidak chun difríochtaí staidrimh i measc grúpaí éagsúla a chinneadh. Measadh go raibh difríochtaí suntasacha ag P<>

Baintear an t-alt seo as https://doi.org/10.1016/j.redox.2021.102100 Arna fháil 21 Iúil 2021; Arna fháil i bhfoirm athbhreithnithe 9 Lúnasa 2021; Glacadh leis an 11 Lúnasa 2021