Airíonna Tairbheacha Sláinte Sliocht Síl Fíon fíonchaor agus A Tionchar ar Mharcóirí Roghnaithe Bithcheimiceacha san Ae, san ae agus i nduáin Rattus Norvegicus
Mar 10, 2022
Coimriú:Is miotal trom é caidmiam (Cd) a fhaightear i ngach réimse den chomhshaol, an biashlabhra san áireamh. Sa chorp, is cúis le strus ocsaídiúcháin trí fhréamhacha saor in aisce a tháirgeadh a dhéanann dochar do na cealla. Tá raon leathan comhpháirteanna gníomhacha ó thaobh na bitheolaíochta de ag baint le sliocht síolta fíonchaor (GSE) a chabhraíonn le héifeachtaí díobhálacha fréamhacha saor in aisce a neodrú. Sa staidéar seo, rinneadh monatóireacht ar éifeachtaí GSE a ullmhaíodh ó shaothrachán fíonchaor leath-resistant Séasúr, atá saibhir i bhfeanólacht, ar mharcóirí bithcheimiceacha na bhfrancaigh donn atá faoi lé éifeachtaí caidmiam. Mhéadaigh GSE an ghníomhaíocht frithocsaídeach plasma agus, saduáinagus laghdaíodh an t-ae, ábhar CD go suntasach ag comh-riarachán GSE. Dá réir sin, mhoilligh comhriarachán GSE an méadú ar ábhar creatinine agus gníomhaíocht alanine aminotransferase agus an laghdú ar ghníomhaíochtaí catalase agus superoxide dismutase de bharr caidmiam. Léiríonn torthaí na hoibre seo go dtugann sliocht síolta fíonchaor éifeacht chosanta in aghaidh iontógáil miotal trom isteach san orgánach.
1. Réamhrá
Is miotal trom é caidmiam (Cd) a tharlaíonn i ngach réimse den chomhshaol; is cuid de screamh an Domhain é, tá sé in uisce, carnann sé i bplandaí, agus tá sé i láthair in orgánaigh. Chomh maith leis an mbiashlabhra (i dtéarmaí plandaí, is foinsí iad an chuid is mó de ghránaigh, barra fréimhe agus glasraí, agus i measc orgáin ainmhithe, go príomha an t-ae agusduáinIs foinse thábhachtach caidmiam do dhaoine ná deataigh toitíní, easanálaithe ó chineálacha éagsúla dócháin, tionscail mhiotaleolaíochta, agus roinnt suiteálacha leictreacha [1,2]. Sa chorp, ceanglaíonn caidmiam go príomha le metallothionein, albaimin, agus próitéiní plasma eile san fhuil. Miotal contúirteach tocsaineach é caidmiam a chuireann strus ocsaídiúcháin ar fáil trí fhréamhacha saor in aisce a tháirgeadh a dhéanann dochar do na cealla. Is féidir le fréamhacha saor in aisce damáiste a dhéanamh do phróitéiní, lipidí, einsímí, agus DNA, agus dá bhrí sin ní mór iad a neodrú le frithocsaídeoirí sula dtéann siad isteach sna cealla [3].
Mura bhfuil sé neodraithe, is cúis le Cd díscaoileadh na gcealla fola dearga [4], carnann sé san orgánach -, go háirithe san ae agusduáin—agus, mar gheall ar a chosúlacht le since, atá ina eilimint riachtanach, téann sé isteach go héasca ar imoibrithe einsímeacha agus glacann sé páirt i bpróisis bithcheimiceacha [5]. Ní eisfheartar é ach go han-mhall agus le deacracht ón orgánach [6]. Tá a fhios go maith gur féidir le frithocsaídeoirí éifeacht cosanta a bheith acu i gcoinne strus ocsaídiúcháin agus damáiste miotail throm, agus bhí an obair thurgnamhach seo bunaithe ar an bhfíric seo. Tá raon leathan comhpháirteanna atá gníomhach go bitheolaíoch ina mhaitrís [7] ag sliocht síolta fíonchaor (GSE) a chabhraíonn le héifeachtaí díobhálacha fréamhacha saor in aisce a neodrú. Cosnaíonn GSE cealla ó dhamáiste trí damáiste ocsaídiúcháin cheallacha a rialáil, damáiste orgán a laghdú, an t-iarmhéid idir ocsaídeoirí agus frithocsaídeoirí a fheabhsú, agus scaoileadh idirghabhálaithe athlastacha a laghdú. Tá éifeachtaí frith-athlastacha, antiapoptotic, agus pro-proliferative aige freisin [8]. Tá an t-ábhar ard i bhflaván comhdhlúite-3-ol nó procyanidins, atá faoi imscrúdú mar mhodh eile cóireála do ghalair thromchúiseacha, thar a bheith suntasach [9,10]. Mar sin féin, is féidir tionchar a imirt ar ábhar agus ar chomhdhéanamh feanólachtaí síl fíonchaor, chomh maith le gníomhaíocht frithocsaídeach an tsleachta síolta, ag cultivar fíonchaor, bunstoc, coinníollacha aeráide, nó teicnící fáis [11-13] agus, dá bhrí sin, airíonna frithocsaídeacha, mar atá. chomh maith le héifeachtaí cosanta sliocht coincréite, ní féidir a thuar go héasca. Ba í aidhm na hoibre seo ná staidéar a dhéanamh ar éifeacht chosanta GSE a ullmhaíodh ó shaothrán fíonchaor leath-resistant Cerason ar mharcóirí bithcheimiceacha san fhuil, plasma, ae, agusduáinde francaigh donn a bhí faoi lé éifeachtaí caidmiam.
Eochairfhocail:sliocht síolta fíonchaor; frithocsaídeoirí; caidmiam; rattus norvegicus; marcóirí bithcheimiceacha; éifeacht chosanta; duáin, Duánach
Feabhsaíonn CISTANCHE FEIDHM Duán/Duánach
2. Torthaí agus Plé
2.1. Gníomhaíocht Frithocsaídeach agus Comhdhéanamh Fíteiceimiceach Sliocht Síl Fíonchaor
Rinneadh tástáil ar an sliocht síolta fíonchaor a ullmhaíodh ón éagsúlacht leath-resistant Cerason le haghaidh gníomhaíocht frithocsaídeach, ábhar iomlán polyphenolic, agus frithocsaídeoirí aonair roghnaithe. Rinneadh gníomhaíocht frithocsaídeach a chinneadh go speictrophotometric ag baint úsáide as ceithre mhodh atá bunaithe ar phrionsabail éagsúla (DPPH• , ABTS• móide , FRAP, FR) agus socraíodh iomlán na gcomhdhúile polaphenolacha leis an modh Folin-Ciocalteu. Ag brath ar an modh a úsáideadh, bhí an ghníomhaíocht frithocsaídeach sa raon ó 7 go 31 mg/g coibhéis aigéid ghail (GAE) agus ba é an cion ilfheinólach iomlán ná 9.3 mg/g GAE (Tábla 1). Léirigh torthaí na coda seo den turgnamh an cumas ard frithocsaídeach i síolta fíonchaor.
2.2. In Vivo Éifeacht Sliocht Síl Úrfhíon fíonchaor sna Francaigh a Chinneadh
2.2.1. Cinneadh an Ábhair Caidmiam san Fhuil, Ae, agus DuánIs é caidmiam an miotal tocsaineach is forleithne i bhfothaí. Tar éis riarachán béil, déantar é a ionsú ón intestine, a iompar chuig an ae, agus é a chomhchuingeach le grúpaí thiol de metallothionein (MT). Seachas sin, is féidir CD a cheangal le halbaimin, nó le próitéiní eile san fhuil [14]. Ina dhiaidh sin, carnann CD sa chorp, ní eisfheartar é ach go mall ón gcorp tríd an bhfual agus na feces agus tá leathré bitheolaíoch de thart ar 20 bliain aige. Faightear an méid is mó (thart ar an tríú cuid) de chaidmiam saduáncortex. San fhuil, tá an chuid is mó caidmiam (thart ar 90 faoin gcéad) i láthair sna cealla fola dearga. Tá sé tocsaineach do raon leathan orgán agus is iad na príomhspriocanna ná anduáin, cnámha, agus na scamhóga [15–17]. Tuairiscíodh go laghdaigh GSE tiúchan caidmiam sna cealla fola dearga agus snaduáin,ach tuairiscíodh go bhfuil méadú tagtha ar a ábhar san ae [14]. Léirítear na torthaí don ábhar caidmiam fola sa staidéar seo i bhFíor 1A. Ag tús an turgnaimh, fuarthas 3.2 µg/kg de chaidmiam i fuil na n-ainmhithe. Le linn an turgnaimh, tar éis 14 lá, bhí an meánluach caidmiam sa ghrúpa agus GSE agus caidmiam curtha leis i bhfad níos airde ná mar a bhí i ngrúpaí eile (10.8 µg/kg, p=0.023). Tar éis 28 lá, bhí éagsúlacht na sonraí ró-ard chun suntas staitistiúil a thabhairt faoi deara.
Ag tús an turgnaimh, níor aimsíodh aon caidmiam in aenna (Fíor 1B) na n-ainmhithe turgnamhacha. Dá réir sin, níor aimsíodh aon caidmiam in ae na n-ainmhithe ó na grúpaí rialaithe agus GSE le linn an turgnaimh. Ar an láimh eile, tar éis 14 lá den turgnamh, ba é 5.8 mg/kg an meánluach caidmiam sa ghrúpa agus caidmiam curtha leis agus sa ghrúpa nuair a cuireadh caidmiam agus GSE leis, ba é an meánluach ná 5.2 mg/kg. Bhí difríocht shuntasach idir an dá luach seo agus an grúpa rialaithe (p=0.002 agus p=0.018 don ghrúpa caidmiam-amháin agus an grúpa le caidmiam agus GSE, faoi seach). Tar éis 28 lá, mhéadaigh an meánluach sa ghrúpa nuair a cuireadh caidmiam leis go 6.7 mg/kg, a bhí difriúil go mór ón leibhéal caidmiam sa ghrúpa nuair a cuireadh caidmiam agus GSE leis, a laghdaigh beagán go 4.8 mg/kg. (p=0.008).
Ag tús an turgnaimh, níor aimsíodh aon caidmiam saduáin(Fíor 1C) de na hainmhithe turgnamhacha. Dá réir sin, níor aimsíodh aon caidmiam saduáinna n-ainmhithe ó na grúpaí rialaithe agus GSE le linn an turgnaimh. Ar an láimh eile, tar éis 14 lá, ba é an meánluach caidmiam sa ghrúpa agus caidmiam curtha leis ná 9.5 mg/kg agus sa ghrúpa nuair a cuireadh caidmiam agus GSE leis, ba é an meánluach ná 6.5 mg/kg. Bhí difríocht shuntasach idir an dá luach seo agus an grúpa rialaithe (p < 0.001="" don="" dá="" ghrúpa).="" tar="" éis="" 28="" lá,="" mhéadaigh="" an="" meánluach="" sa="" ghrúpa="" nuair="" a="" cuireadh="" caidmiam="" leis="" go="" 16.6="" mg/kg,="" a="" bhí="" difriúil="" go="" mór="" ón="" leibhéal="" caidmiam="" sa="" ghrúpa="" nuair="" a="" cuireadh="" caidmiam="" agus="" gse="" leis,="" nár="" mhéadaigh="" ach="" beagán="" go="" 10.4="" mg/="" kg="" (p="0.009)." dá="" bhrí="" sin,="">duáinagus san ae, laghdaigh riarachán GSE ábhar CD go suntasach. Tá comhdhúile feanólacha ag GSE ar féidir leo Cd a chealú, rud a laghdaíonn carnadh Cd. Is dócha gur tháinig laghdú ar chumas na bpróitéiní chun Cd a cheangal mar thoradh ar na chelates seo a fhoirmiú, rud a d'fhéadfaí a dhíchur níos éifeachtaí ón gcorp [18].
2.2.2. Cinneadh na nÁbhar Creatinine agus Úiré
Maidir leis an carnadh caidmiam saduáin, anduánar cheann de na spriocorgáin is tábhachtaí maidir le tocsaineacht CD-spreagtha. Dá bhrí sin, tá anduánSocraíodh creatinine marcóirí agus úiré sa plasma. Is táscaire maith ar scagachán glomerular é a chinneadh creatinine agus úsáidtear é go príomha chun monatóireacht a dhéanamh ar an gcúrsagalar duáin. Tá an gaol idir tiúchan creatinine agus scagachán glomerular hipearbóileach; de réir mar a laghdaíonn scagachán glomerular, laghdaítear an secretion creatinine freisin [19]. Mar thoradh ar iontógáil méadaithe an caidmiam miotal tromdamáiste duáin, agus dá bhrí sin laghdaigh éifeachtacht secretion creatinine. Mar thoradh air sin, léiríonn leibhéal creatiníne fola ardaithe aduánachneamhord [20].
In ár staidéar, méadaíodh leibhéil creatinine ag Cd, i gcomhréir le torthaí a foilsíodh roimhe seo [21]. Ba é meánluach an ábhair creatinine (Fíor 2A) sna hainmhithe turgnamhacha ag tús an turgnaimh ná 3.0 mg/L. Sa ghrúpa a fhaigheann caidmiam, bhí méadú suntasach ar na luachanna monatóireachta go 5.1 mg/L (tar éis 14 lá, p=0.015) agus go 6.2 mg/L (tar éis 28 lá, p < 0.001).="" sa="" ghrúpa="" a="" raibh="" gse="" comh-riaracháin="" le="" caidmiam="" ina="" leith,="" bhí="" an="" méadú="" ar="" an="" marcóir="" seo="" níos="" ísle="" (4.2="" mg/l="" tar="" éis="" 14="" lá="" agus="" 5.5="" mg/l="" tar="" éis="" 28="" lá)="" agus="" suntasach="" go="" staitistiúil="" ach="" amháin="" tar="" éis="" 28="" lá,="" i="" gcomparáid="" le="" rialú.="" p="">< 0.001).="" mar="" sin,="" mhoilligh="" comhriarachán="" gse="" an="" méadú="" ar="" thiúchan="" creatinine,="" rud="" a="" thugann="" le="" tuiscint="" go="" laghdaíodh="" an="" éifeacht="" thocsaineach="" de="" bharr="" caidmiam.="" sa="" ghrúpa="" a="" fhaigheann="" gse="" amháin,="" bhí="" gnáthluachanna="">
Is é úiré go cainníochtúil an táirge díghrádaithe is tábhachtaí d’aimínaigéid agus próitéiní. Déantar é a fhoirmiú san ae ó amóinia a scaoiltear trí imoibrithe deamination le linn meitibileacht aimínaigéad. Tá sé eisfhearadh ón orgánach go príomha ag anduáintrí scagachán glomerular agus resorption feadánacha [22]. I gcásgalair duánach, tá an ráta táirgthe úiré níos mó ná an ráta a imréiteach, rud a fhágann go dtiocfaidh méadú ar leibhéal úiré fola. Ina theannta sin, cuireann caidmiam bac ar ionchorprú aimínaigéid i bpróitéiní, is cúis le uremia [21]. Ar an láimh eile, nuair a theipeann ar fheidhm ae, laghdaítear sintéis úiré agus dá bhrí sin freisin a tiúchan i plasma [20]. Mar sin, braitheann tiúchan úiré san fhuil ar ábhar próitéine aiste bia,duánacheisfhearadh, agus feidhm meitibileach an ae.
In ár staidéar, méadaíodh leibhéil úiré ag Cd, i gcomhréir le torthaí a foilsíodh roimhe seo [21]. Ba é meánluach an ábhair úiré (Fíor 2B) sna hainmhithe turgnamhacha ag tús an turgnaimh ná 207 mg/L. Sa ghrúpa a fhaigheann caidmiam, bhí méadú suntasach ar na luachanna monatóireachta go 329 mg/L (tar éis 14 lá) agus 425 mg/L (tar éis 28 lá). Sa ghrúpa ar comhriaradh GSE le caidmiam ina leith, ní raibh an méadú ar an marcóir seo ach beagán níos ísle—325 mg/L tar éis 14 lá agus 381 mg/L tar éis 28 lá. Bhí difríocht shuntasach idir na grúpaí a fhaigheann ach caidmiam agus caidmiam mar aon le GSE agus an grúpa rialaithe tar éis 14 (p=0.001 agus p=0.002, faoi seach) agus 28 lá den turgnamh (p < 0.001="" don="" dá).="" sa="" ghrúpa="" a="" fhaigheann="" gse="" amháin,="" fuarthas="">
2.2.3. Cinneadh ar Ghníomhaíocht Frithocsaídeach Plasma
Spreagann caidmiam raon éifeachtaí a bhaineann go príomha le strus ocsaídiúcháin. Toisc nach bhfuil Cd redox-ghníomhach, ní ghineann sé speiceas ocsaigin imoibríoch go díreach. Mar sin féin, tá a dtáirgeadh tar éis nochtadh CD a thuairisciú i go leor staidéar agus athbhreithniú ag Cuypers et al. [23]. I measc na meicníochtaí as a dtagann suaitheadh ocsaí le linn nochtadh Cd tá ídiú glutathione laghdaithe de bharr cleamhnas Cd le grúpaí thiol, athsholáthar Fe le Cd i bpróitéiní as a dtagann tiúchan méadaithe Fe saor ó órdhox-ghníomhach, mífheidhm mitochondrial, agus ionduchtú Ocsaídeachtaí NADPH, a chatalaíonn foirmiú fréamhacha superoxide [23]. Le linn strus ocsaídiúcháin, is féidir le comhdhúile frithocsaídeacha cosúil le feanólaic táirgeadh speiceas imoibríoch nua a fhoirceannadh trína thiontú go foirmeacha radacacha cobhsaí. Mar sin, is féidir le sleachta plandaí atá saibhir i feanólacht éifeachtaí cosanta a sholáthar i gcoinne comhdhúile ina bhfuil CD nó Cd [24].
Sa staidéar seo, ba é an meánluach gníomhaíochta frithocsaídeach plasma (Fíor 3) sna hainmhithe turgnamhacha ag tús an turgnaimh ná 0.71 mg/L. Breathnaíodh méadú beag i ngach grúpa turgnamhach i gcomparáid leis an ngrúpa rialaithe. Mar sin féin, ba é an t-aon difríocht shuntasach a bhí ann ná an grúpa a chóireáiltear le GSE agus an grúpa rialaithe tar éis 28 lá (p=0.012), rud a dhearbhaíonn éifeacht dhearfach GSE ar ghníomhaíocht frithocsaídeach plasma. Tá na torthaí a tuairiscíodh roimhe seo débhríoch; uaireanta, fuarthas méadú ar acmhainneacht frithocsaídeach plasma de bharr GSE [25] agus uaireanta ní [14].
2.2.4. Gníomhaíochtaí ALT agus AST a chinneadh
Baineann strus ocsaídiúcháin le caillteanas sláine feidhme na hailtireachta membrane de bharr sárocsaídiú lipid méadaithe. Ina dhiaidh sin, mar thoradh ar thréscaoilteacht mhéadaithe an membrane cíteaplasmach go sceitheadh einsímí marcála hepatic (ALT agus AST) isteach san fhuil [14]. Go deimhin, tá ALT agus AST suntasach go diagnóiseach fiú i damáiste teoranta ae de bharr meisce agus tá a n-ardú i serum de bharr caidmiam tuairiscithe níos luaithe [14] agus deimhníodh leis an staidéar seo. Ba é an meánluach gníomhaíochta ALT (Fíor 4A) sna hainmhithe turgnamhacha ag tús an turgnaimh ná 0.84 µkat/L. Sa ghrúpa a fhaigheann caidmiam, taifeadadh méadú suntasach ar na luachanna monatóireachta go meán 1.52 µkat/L tar éis 14 lá (p < 0.001),="" agus="" 1.87="" µkat/l="" tar="" éis="" 28="" lá="" (p="" {{).="" 13}}.004).="" sa="" ghrúpa="" a="" raibh="" gse="" á="" chomhriar="" le="" caidmiam="" dó,="" bhí="" méadú="" an="" mharcóra="" seo="" i="" bhfad="" níos="" moille="" ná="" sa="" ghrúpa="" nach="" bhfuair="" ach="" caidmiam="" (1.23="" µkat/l="" tar="" éis="" 14="" lá="" agus="" 1.92="" µkat/l="" tar="" éis="" 28="" lá).="" tar="" éis="" 14="" lá="" den="" turgnamh,="" bhí="" an="" grúpa="" seo="" difriúil="" ón="" ngrúpa="" rialaithe="" (p="0.009)" agus="" an="" grúpa="" caidmiam="" (p="0.026)," ach,="" tar="" éis="" 28="" lá,="" bhí="" difríocht="" shuntasach="" aige="" ón="" ngrúpa="" rialaithe="" amháin="" (p="0.003)." sa="" ghrúpa="" a="" fhaigheann="" gse="" amháin,="" mhéadaigh="" na="" luachanna="" freisin="" go="" 1.17="" µkat/l="" tar="" éis="" 14="" lá.="" bhí="" difríocht="" shuntasach="" idir="" an="" luach="" seo="" agus="" an="" grúpa="" rialaithe="" (p="0.024)" agus="" bhí="" sé="" inchomparáide="" le="" luach="" an="" ghrúpa="" a="" fuair="" gse="" agus="" caidmiam="" araon.="" tar="" éis="" 28="" lá,="" bhí="" luachanna="" an="" ghrúpa="" gse="" amháin="" cosúil="" leis="" an="" ngrúpa="">
Ba é an meánluach ábhair AST (Fíor 4B) sna hainmhithe turgnamhacha ag tús an turgnaimh ná 2.07 µkat/L. Sa ghrúpa a fhaigheann caidmiam, níor taifeadadh méadú suntasach go staitistiúil ar na luachanna breathnaithe ach amháin tar éis 28 lá den turgnamh (3.52 µkat/L, p=0.001). Is ionadh é, sa ghrúpa a raibh GSE á chomhriar le caidmiam dó, bhí méadú an mharcóra seo níos gasta agus difriúil go mór ón ngrúpa rialaithe tar éis 14 lá agus 28 lá (2.67 agus 2.84 µkat/L, faoi seach, p {{15 }}.043 don dá cheann), cé go raibh an luach beagán níos ísle ná luach an ghrúpa caidmiam-amháin tar éis 28 lá. Bhí gnáthluachanna ag an leagan GSE amháin.
Inár dturgnamh, bhí riarachán GSE in ann an méadú ar ghníomhaíocht ALT a mhoilliú. Freagraíonn an éifeacht seo leis na torthaí a tuairiscíodh roimhe seo [14] agus b'fhéidir gurb é ba chúis leis ná sárocsaídí lipid a scavening trí aistriú hidrigine ó chomhdhúil feanólach go dtí an sárocsaíd lipid saor in aisce ina bhfuil radacach. Ar an láimh eile, san fhadtéarma, bhí an éifeacht seo íseal. Chuir riarachán GSE dlús leis an méadú ar ghníomhaíocht AST de bharr caidmiam. Mar sin féin, san fhadtéarma, bhí laghdú beag ar ghníomhaíocht AST. Mar sin, is féidir le GSE cúiteamh a dhéanamh go páirteach as éifeacht thocsaineach Cd ar chillscannáin.
2.2.5. Gníomhaíochtaí SOD agus CAT san ae a chinneadh
Chomh maith le rannpháirtíocht dhíreach in imoibrithe ocsaídiúcháin, cuireann caidmiam bac ar ghníomhaíocht einsímí frithocsaídeacha mar SOD agus CAT, einsímí atá in ann fréamhacha superoxide agus sárocsaíd hidrigine a dhíthocsainiú, faoi seach [14]. Is einsím é SOD a mhúchann go héifeachtach an radacach superoxide agus a thiontaíonn sé isteach sa sárocsaíd hidrigine nach bhfuil chomh tocsaineach, ar féidir é a dhianscaoileadh tuilleadh le catalase nó peroxidase [26]. Einsím is ea CAT atá le fáil i mbeagnach gach orgánach beo a nochtar d’ocsaigin. Feidhmíonn sé mar chatalaíoch chun sárocsaíd hidrigine a dhianscaoileadh in uisce agus ocsaigin [27]. Tá ceann de na huimhreacha comhshó is airde aige i measc einsímí [28] agus, mar einsím frithocsaídeach, tá sé ar cheann de na meicníochtaí cosanta atá mar thoradh ar chothabháil cothromaíocht sa chorp daonna [29]. Is dócha go bhfuil an mheicníocht laghdaithe Cd-spreagtha i ngníomhaíochtaí einsíme ina cheangal díreach ar Cd le suíomhanna gníomhacha na n-einsímí [30].
Chonacthas na laghduithe ar ghníomhaíochtaí SOD agus CAT sa staidéar seo freisin. Ag tús an turgnaimh, ba é meánghníomhaíocht na heinsíme SOD san ae (Fíor 5A) na n-ainmhithe turgnamhacha ná 18.4 U/mg den phróitéin. Tar éis 14 lá den turgnamh, bhí gníomhaíocht SOD i bhfad níos airde sa ghrúpa a fuair GSE (21.1 U/mg) ná sa dá ghrúpa glactha caidmiam (p < 0.001="" agus="" p="" {{="" 9}}.009="" do="" na="" grúpaí="" caidmiam-amháin="" agus="" caidmiam="" le="" gse,="" faoi="" seach),="" ach="" sa="" ghrúpa="" a="" fuair="" caidmiam="" amháin="" a="" raibh="" gníomhaíocht="" sod="" i="" bhfad="" níos="" ísle="" (16.7="" u/mg)="" ná="" sa="" ghrúpa="" rialaithe="" (p="0" .005).="" tar="" éis="" 28="" lá="" den="" turgnamh,="" bhí="" difríocht="" shuntasach="" idir="" na="" grúpaí="" glactha="" caidmiam="" agus="" an="" grúpa="" rialaithe="" (16.4="" u/mg,="" p="0.002" agus="" 17.6="" u/mg,="" p="0.023" i="" gcás="" caidmiam="" amháin="" agus="" caidmiam="" le="" gse,="" faoi="" seach)="" agus="" an="" grúpa="" cóireáilte="" le="" gse="" amháin="" (p="">< 0.001="" agus="" p="0.005" i="" gcás="" caidmiam="" amháin="" agus="" caidmiam="" le="" gse,="" faoi="">
Ag tús an turgnaimh, b'ionann meánghníomhaíocht na heinsíme CAT san ae (Fíor 5B) agus 32.7 U/mg den phróitéin. Tar éis 14 lá den turgnamh, bhí gníomhaíocht CAT i bhfad níos airde sa ghrúpa a fuair GSE (33.5 U/mg) ná sa dá ghrúpa glactha caidmiam (p=0.002 agus p=0.031 don caidmiam-amháin agus caidmiam le grúpaí GSE, faoi seach), ach amháin sa ghrúpa a fuair caidmiam amháin a bhí gníomhaíocht CAT i bhfad níos ísle (23.8 U/mg) ná sa ghrúpa rialaithe (p=0.005). Tar éis 28 lá, áfach, tháinig laghdú breise ar ghníomhaíocht CAT sa ghrúpa a fuair GSE mar aon le caidmiam go 27.1 U/mg, shroich siad luachanna an ghrúpa caidmiam-amháin (25.8 U/mg), agus bhí difríocht shuntasach idir iad agus an grúpa rialaithe (p { {21}}.033). Ní raibh difríocht shuntasach idir an grúpa a ndearnadh cóireáil air le GSE agus na grúpaí caidmiam araon (p=0.026 agus p=0.012 i gcás caidmiam amháin agus caidmiam le GSE, faoi seach). Díol spéise é gur mhoilligh comh-riarachán GSE na laghduithe de bharr caidmiam. Maidir le CAT, breathnaíodh na héifeachtaí seo de GSE roimhe seo [14]. Is dócha go laghdóidh éifeacht chelating na gcomhdhúile feanólacha atá i GSE cumas caidmiam ceangal a dhéanamh le suíomh gníomhach na heinsíme.
2.2.6. Cinneadh ar Ábhar MT
Níl caidmiam faoi réir aon tiontuithe meitibileach díreacha, ach i ngach fíocháin, tá sé ceangailte go príomha le metallothionein (MT). Baineann MT le grúpa próitéiní infhéitheacha, ísealmheáchan móilíneacha, saibhir i gcistéin a bhfuil meáchan móilíneach 6–10 kDa acu. Áirítear ar phríomhról MT san orgánach homeostasis since a chothabháil, díthocsainiú a dhéanamh ar mhiotail throma, agus cosaint i gcoinne strus ocsaídiúcháin. Tá go leor fachtóirí exogenous agus endogenous mar léiriú MT cosúil le radaíocht UV, miotail throma, hormóin strus, fréamhacha ocsaigine saor in aisce, idirghabhálaithe athlasadh, ionfhabhtú, tráma, agus oncogenesis [31,32]. Déantar MT a shintéisiú den chuid is mó san ae agusduánagus scaoileadh isteach san fhuil. Cé go bhfuil MT freagrach as carnadh caidmiam i bhfíocháin trína eisfhearadh a ísliú, cosnaíonn MT ar ghéarthocsaineacht chomh maith le tocsaineacht ainsealach CD-spreagtha [33]. In ár staidéar, rinneadh monatóireacht ar an ábhar MT san fhuil, ae, agusduán.
Ba é meánluach an ábhair MT san fhuil (Fíor 6A) na n-ainmhithe turgnamhacha ag tús an turgnaimh ná 23.9 nmol/g. Tar éis 14 lá, bhí na hathruithe íosta agus, tar éis 28 lá, breathnaíodh éagsúlacht mhór idir na macasamhla, rud a chruthaigh neamhchinntitheacht staidrimh (p=0.948). An meánluach ábhair MT donduáinBa é (Fíor 6B) na n-ainmhithe turgnamhacha ag tús an turgnaimh ná 21.46 nmol/g. Níor tháinig athrú suntasach ar na luachanna in aon ghrúpa turgnamhach le linn an turgnaimh (p=0.938). Ba é meánluach ábhair MT san ae (Fíor 6C) na n-ainmhithe turgnamhacha ag tús an turgnaimh ná 17.15 nmol/g. Tar éis 14 lá, mhéadaigh an t-ábhar MT beagán i ngach grúpa turgnamhach agus bhí na difríochtaí ón ngrúpa rialaithe suntasach don ghrúpa Cd-amháin agus don ghrúpa GSE-amháin (p=0.008 agus p=0 .046, faoi seach). Tar éis 28 lá, d'fhill an t-ábhar MT sa ghrúpa GSE go luach an ghrúpa rialaithe, ach d'fhan an t-ábhar MT sa ghrúpa Cd méadaithe agus difriúil ón ngrúpa rialaithe agus an ghrúpa GSE (p=0.046 agus p=0.035, faoi seach). Sa ghrúpa a fuair GSE mar aon le caidmiam, ní raibh difríocht mhór idir an t-ábhar MT agus an rialú—a bhí ag teacht leis an gcion caidmiam níos ísle a fuarthas in ae an ghrúpa seo—i gcomparáid leis an ngrúpa Cd-amháin (bhí an difríocht suntasach ina dhiaidh sin). 28 lá den turgnamh).
San iomlán, níor breathnaíodh ach athruithe suntasacha staitistiúla san ábhar MT de bharr CD san ae. Roimhe seo, tuairiscíodh méadú MT ar fhuil ainmhithe turgnamhacha a fhaigheann caidmiam [34]. Sa chás seo, tugann na torthaí le fios go bhféadfadh sé go dtarlódh díthocsainiú CD trí MT san ae.
3. Ábhair agus Modhanna
3.1. Dearadh TurgnaimhRoinneadh francaigh dhonn den ghéineas Wistar (ocht seachtaine d'aois, 235 ± 3 g) i gceithre ghrúpa de sheisear daoine aonair: A) grúpa rialaithe francaigh tar éis gnáth-aiste bia (n=6); B) grúpa francaigh ar cuireadh GSE lena n-aiste bia (200 mg GSE/day) (n=6); C) grúpa a dtugtar caidmiam (2 mg Cd/lá - go nithiúil, CdCl2 tuaslagtha in uisce) (n=6); agus D) grúpa ar tugadh aiste bia dó ina bhfuil caidmiam (2 mg Cd/lá) ar cuireadh GSE leis (200 mg GSE/lá) (n=6). Tógadh an sliocht ó shíolta an éagsúlacht fíonchaor Cerason; tá cur síos ar a hullmhú agus ar a thréithriú i Roinn 3.2. (Sliocht Síl Grapevine). Rinneadh an sliocht a mheá go laethúil ag dáileog 200 mg, sular tugadh é do na francaigh dhonn turgnamhacha (200 mg GSE do gach francach; 0.85 g/L kg de mhais coirp). Riaradh an GSE le huisce. Tugadh meascáin beatha tais do na francaigh agus uisce neamhdhíobhálach (naíonán) ad libitum. Uair sa tseachtain, athraíodh cóir leapa na n-ainmhithe. Tar éis 14 agus 28 lá turgnamhacha, rinneadh eotánú ar thrí ainmhí ó gach grúpa agus bailíodh a gcuid fola trí thóin croí. Roimh an mbailiúchán, sannadh cógais intraperitoneal le Fraxiparin (0.01 mL/kg) agus, ina dhiaidh sin, tugadh éitear dieitile do na hainmhithe faoi ainéistéise ionanálaithe. Bailíodh sampla fola ansin isteach i micrifheadáin tástála atá brataithe le heparin (nó feadáin le EDTA - le haghaidh anailísí ar MT agus caidmiam; gan lártheifneoiriú ina dhiaidh sin), agus ina dhiaidh sin bhí lártheifneoiriú réidh (800 g/10 nóim) agus bailiú fola. plasma le haghaidh tuilleadh anailíse. An t-ae agus ar dheisduána bhaintear le haghaidh tuilleadh anailíse. Rinneadh an staidéar i gcomhréir le Dearbhú Heilsincí, agus d'fhormheas an Coimisiún Saineolaithe um Leas Ainmhithe Turgnamhach Ollscoil Mendel i Brno (do thionscadal IGA-ZF/2016-AP011) an prótacal.
3.2. Sliocht Síl Grapevine
Rinneadh síolta fíonchaor (cineál Cerason - Merlot × Seibel 13 666) a shórtáil, a ghlanadh, a thriomú agus a mheilt. Rinneadh an sórtáil trí na marcanna ar mheaisín deighilte, áit ar scar na síolta ó na craiceann. Rinneadh na síolta a scaradh ar an mbealach seo a rinsiú ina dhiaidh sin, baineadh na síolta folamh, agus glanadh na síolta atá fágtha. Triomaíodh na síolta glanta agus nite i triomadóir ag 50 ◦C ar feadh 12 h. Ina dhiaidh sin meilt na síolta ag baint úsáide as grinder saotharlainne Bunúsach IKA MF 10 (IKA Werke, Staufen im Breisgau, an Ghearmáin). Baineadh na síolta talún in eatánól 75 faoin gcéad ar feadh 120 h (22 ◦C, croitheadh ag 50 RPM; IKA KS 260 Basic, monaróir: IKA Werke, Staufen im Breisgau, an Ghearmáin) i gcóimheas de chuid amháin de shíolta talún go deich gcuid d'eatánól (m/m). Tar éis seo, cuireadh an sliocht isteach i bhfeadáin tástála 25 ml (Eppendorf, Hamburg, an Ghearmáin) agus lártheifneoirithe (Hettich MIKRO 220 Centrifuge; Hettich, Westphalia, An Ghearmáin) ag 4 ◦C agus RCF 25,000 × g. Tógadh sampla lártheifneoirithe ón bpromhadán agus aistríodh é chuig fleascán driogtha evaporator bhfolús (IKA RV 10 digiteach VC; IKA Werke, Staufen im Breisgau, an Ghearmáin), áit ar galú an eatánól. Tharla an galú i bhfolús ag 90 ◦C, agus aistríodh an sliocht chuig miasa Petri agus lyophilized i bhfolús ag 53 ◦C (Heto PowerDry PL 3000 lyophilizer; Trigon-plus, Cestlice, Poblacht na Seice). Tar éis a bheith ullmhaithe, tugadh an sliocht do na hainmhithe turgnamhacha.
Feabhsaíonn an CISTANCHE Ionfhabhtú Duán/Duánach
3.3. Cinneadh Gníomhaíocht Frithocsaídeach agus Ábhar Iomlán Polyphenolics
D'fhonn oibiachtúlacht na dtorthaí a áirithiú, baineadh úsáid as ceithre mhodh bunúsach éagsúla chun an ghníomhaíocht frithocsaídeach a chinneadh. Rinneadh anailís ar shamplaí ar speictreafótaiméadar uathoibríoch BS-400 (Mindray, Shenzen, an tSín). Rinneadh anailís faoi thrí ar na samplaí go léir, agus bhí an luach iarmhartach ag freagairt do mheán na dtomhas seo. Rinneadh na hanailísí seo tar éis Sochor et al. [35].
3.3.1. Gníomhaíocht Frithocsaídeach a Chinneadh Ag Úsáid Modh ABTS
Ullmhaíodh réiteach chun gníomhaíocht frithocsaídeach a chinneadh trí mheasúnacht ABTS trí dhá thuaslagán a mheascadh - tuaslagán 1: 7 mM de ABTS arna ullmhú trí m=9.60 mg in aghaidh 5 mL uisce driogtha a mheá; agus réiteach 2: tuaslagán 4.95 mM de sársulfáit photaisiam ullmhaithe trí mheá m=1.67 mg in aghaidh 5 mL uisce driogtha. Caolaíodh an réiteach mar thoradh air 1:10 le huisce driogtha agus fágtar sa dorchadas agus fuar ar feadh 12 h. Ansin, rinneadh 150 µL d’imoibrí R1 (7 mM ABTS agus 4.95 mM sársulfáit photaisiam) a phíobáil isteach i gcuvettes plaisteacha, agus ina dhiaidh sin cuireadh 3 µL den sampla leis, agus tomhaiseadh é i speictreafótaiméadar (λ=660 nm) ar feadh 12 nóim. De réir an chuar calabrúcháin, aistríodh an t-ionsúite isteach san ábhar coibhéiseach d'aigéad gallach; ríomhadh an ghníomhaíocht fhrithocsaídeach ón gcuar calabrúcháin ag baint úsáide as aigéad galic mar chaighdeán (10–200 mg·L1), agus cuireadh na torthaí in iúl mar choibhéisí aigéid gháiligh.
3.3.2. Gníomhaíocht Frithocsaídeach a Chinneadh Ag Úsáid Modh DPPH
Ar dtús, rinneadh m {{0}}.35 mg de DPPH radacach a mheá. Aistríodh an méid seo go fleascán toirtmhéadrach 250 ml agus rinneadh é le meatánól. Ansin, cuireadh 150 µL d’imoibrí R1 (0.095 mM DPPH) isteach i gcuvettes plaisteacha, agus cuireadh 15 µL den sampla a bhí le tomhas leis ina dhiaidh sin. Tá an tástáil DPPH bunaithe ar chumas an chobhsaí saor-radacach 2,2-défheinile{-1-picrylhydrazil chun imoibriú le deontóirí hidrigine. Léiríonn DPPH ionsú láidir sa speictream speictreascópachta ultraivialait-infheicthe (UV-VIS). Tomhaiseadh ionsú ar feadh 12 nóiméad ag λ=505 nm. De réir an chuar calabrúcháin, aistríodh an t-ionsúite go dtí ábhar coibhéiseach aigéid gallach.
3.3.3. Gníomhaíocht Frithocsaídeach a Chinneadh Ag Úsáid Modh Cumhachta Frithocsaídeach Laghdaithe Ferric
Baineadh úsáid as trí réitigh chun an ghníomhaíocht frithocsaídeach a chinneadh trí úsáid a bhaint as an modh cumhachta frithocsaídeach laghdaithe ferric (FRAP)—(1) tuaslagán TPTZ: 10 mM TPTZ (m=78.02 mg) tuaslagtha i 25 mL de HCl 40 mM; (2) réiteach FeCl3: 20 mM FeCl3 (m=135.13 mg) tuaslagtha i 25 mL uisce driogtha; agus (3) réiteach maolán aicéatáit: 0.02 M maolán aicéatáit pH 3.6 (m=775 aicéatáit sóidiam mg tuaslagtha i 250 mL uisce driogtha, pH coigeartaithe le haigéad aicéiteach). Meascadh na trí réitigh sa chóimheas 1:1:10 (TPTZ: FeCl3: maolán aicéatáit). Ansin, cuireadh 150 µL imoibrí isteach i gcuvettes plaisteacha agus cuireadh 3 µL den sampla leis. Tomhaiseadh ionsú ar feadh 12 nóiméad ag λ=605 nm. Ríomhadh an ghníomhaíocht frithocsaídeach ón gcuar calabraithe ag baint úsáide as aigéad galach mar chaighdeán (10–200 mg·L1). Cuireadh na torthaí in iúl mar choibhéis aigéid gháiligh.
3.3.4. Gníomhaíocht Frithocsaídeach a Chinneadh Ag Úsáid Modh Radacach Saor-Chlóraifillin
Rinneadh 200 µL san iomlán d’imoibrí R1 (0.1 M HCl, eastóscán clóraifill, maolán imoibrithe, catalaíoch) a phíobáil isteach i gcuvettes plaisteacha agus ansin cuireadh 8 µL den sampla leis. Úsáideann an modh seo cumas clóraifillín (salann copar-sóidiam clóraifill) chun leictreoin a ghlacadh agus a bhronnadh agus an t-uasmhéid ionsú a athrú go cobhsaí. Tá an próiseas seo coinníollaithe ag an timpeallacht alcaileach agus ag cur catalaíoch leis. Tomhaiseadh ionsú ar feadh 12 nóiméad ag λ=450 nm. Baineadh úsáid as na luachanna tomhais deiridh don ríomh. Cuireadh na torthaí in iúl mar choibhéis aigéid gháiligh.
3.3.5. Tiúchan Polyphenol Iomlán a Chinneadh
Baineadh úsáid as an modh Folin-Ciocalteu chun comhdhúile ilfheinólacha iomlána a chinneadh. Rinneadh anailís faoi thrí ar na samplaí go léir, agus fuarthas an luach a bhí mar thoradh air mar mheán na dtomhas seo. Pípéadaíodh sampla 40 µL isteach i cuvette (3 mL) agus caolaíodh é le 1960 µL d’uisce driogtha. Ina dhiaidh sin, cuireadh 50 µL d’imoibrí Folin–Ciocalteu leis an cuvette. Croitheadh an meascán go críochnúil agus, tar éis 3 nóiméad, cuireadh 300 µL de thuaslagán dícahydrate Na2CO3 20 faoin gcéad leis. Croitheadh an meascán imoibriúcháin agus gor é ag 22 ◦C ar feadh 120 nóiméad. Tar éis an ama seo, tomhaiseadh an absorbance (SPECORD 210; Carl-Zeiss, Jena, an Ghearmáin) ag λ=750 nm i gcoinne bán. Cuireadh na torthaí in iúl mar choibhéis aigéid gháiligh.
3.4. Cinneadh Frithocsaídeoirí ag HPLC
Comhpháirteanna Aonair Frithocsaídeacha a Chinneadh ag Úsáid Crómatagrafaíocht Leachtach Ardfheidhmíochta le Mais-speictriméadar. Rinneadh anailís ar shamplaí a úsáideadh chun flavonoids agus proanthocyanins a mheas i gcóras crómatagrafach Agilent Technologies 12{{10}0 (Jet Stream Technologies, Santa Clara, CA, USA) ar a bhfuil an gléasanna seo a leanas: taiscumair phas soghluaiste, degasser, caidéal dénártha, taiscumar samplach le uathsampler, agus brathadóir maise le Agilent 6460 Triarach Quadrupole LC/MS (Jet Stream Technologies, Santa Clara, CA, USA). Rinneadh deighilt samplaí i gcolúin chromatagrafaíochta Zorbax SB C18 le toisí 50 × 2.1 mm agus méid na gcáithníní 2.7 µm. Ba é an tréimhse anailíse i gcónaí 6 min. Ba é comhráta an gháis iompróra ná 0.6 mL·nóim1. Ba é grád grádán meatánóil (tuaslagóir B) comhpháirt orgánach na céime soghluaiste agus bhí 0.05 M d'formáid amóiniam (tuaslagóir A) sa chomhábhar uiscí. Ba é seo a leanas grádán na céime gluaiseachta: am 0 min: 50 faoin gcéad de thuaslagóir A agus 50 faoin gcéad de thuaslagóir B; am 2.5 min: 100 faoin gcéad de thuaslagóir A agus 0 faoin gcéad de thuaslagóir B; am 5 min: 50 faoin gcéad de thuaslagóir A agus 50 faoin gcéad de thuaslagóir B. Coigeartaíodh teocht an teirmeastat colún go 45 ◦C.
Feabhsaíonn CISTANCHE Péine Duán/Duánach
3.5. Marcóirí Bithcheimiceacha Roghnaithe a Chinneadh
Marcóirí bithcheimiceacha san fhuil, plasma, ae, agusduánRinneadh monatóireacht ar na hainmhithe chun éifeacht chosanta GSE in aghaidh éifeachtaí diúltacha caidmiam a chinneadh. Rinneadh na hanailísí seo a leanas: (1) Anailís plasma: gníomhaíocht frithocsaídeach plasma iomlán, creatinín, úiré, ALT, AST. (2) Anailísí fola: MT. (3) Anailís ae: SOD, CAT, MT. (4)Duánanailísí: MT.
3.5.1. Gníomhaíocht Iomlán Frithocsaídeach Plasma a chinneadh,Úsáideadh Creatinine, Úiré, ALT, agus AST A BS{{0}} anailísí bithcheimiceach uathoibrithe (Mindray, Shenzen, an tSín) chun anailís a dhéanamh ar ghníomhaíocht frithocsaídeach iomlán an plasma, creatinín, úiré, ALT, agus AST. Cinneadh ar Ghníomhaíocht Frithocsaídeach Iomlán Plasma Baineadh úsáid as an modh radacach saor in aisce chun gníomhaíocht frithocsaídeach an plasma a chinneadh [35]. Úsáideann an modh seo cumas clóraifillin (salann copar-sóidiam clóraifill) chun leictreoin a ghlacadh agus a bhronnadh agus an t-uasmhéid ionsú a athrú go cobhsaí. Tá an próiseas seo coinníollaithe ag an timpeallacht alcaileach agus ag cur catalaíoch leis. Rinneadh 200 µL d'imoibrí R1 (0.1 M HCl, sliocht clóraifillin, maolán imoibrithe, agus catalaíoch) a phíobáil isteach i gcuvettes plaisteacha, agus ina dhiaidh sin cuireadh 8 µL den sampla leis. Tomhaiseadh an absorbance ar feadh 12 nóiméad ag λ=450 nm, agus baineadh úsáid as an luach tomhais deiridh don ríomh. Ríomhadh gníomhaíocht frithocsaídeach ón gcuar calabraithe ag baint úsáide as aigéad galic mar chaighdeán agus cuireadh na torthaí in iúl mar choibhéis aigéid ghail.
Cinneadh ar Ábhar CreatinineIs é prionsabal an mhodha ná cinneadh fótaiméadrach ar choimpléasc dath creatinine le picrate alcaileach, a bhfuil an ráta foirmithe comhréireach leis an tiúchan creatinine sa sampla. Baineadh úsáid as trealamh diagnóiseach ó Greiner (Greiner GmbH, Pleidelsheim, an Ghearmáin) chun an creatinín a chinneadh. Rinneadh 180 µL san iomlán d’imoibrí R1 (hiodrocsaíd sóidiam 0.16 mM) a phíobáil isteach sa chuvette, agus ina dhiaidh sin cuireadh 10 µL den sampla agus 30 µL den imoibrí R2 (aigéad picreach 4 mM). Tomhaiseadh an ionsúchán ar feadh sé nóiméad ag λ=505 nm. Baineadh úsáid as luach ionsúcháin an imoibrí R1 leis an sampla amháin agus an luach ionsúcháin tar éis gor 6 nóiméad le himoibrí R2 don ríomh.
Cinneadh Aminotransferase alanineBaineadh úsáid as trealamh diagnóiseach ó Greiner (Greiner GmbH, Pleidelsheim, an Ghearmáin) chun ALT a chinneadh. Ar dtús, rinneadh 150 µL d’imoibrí R1 (maolán Tris 100 mM pH 7.5; 500 mM L-alanín, 1200 U/L lactate dehydrogenase) agus 15 µL de shampla plasma a phíobáil isteach sna cuvettes go huathoibríoch. Ina dhiaidh sin, rinneadh 30 µL d’imoibrí R2 (15 mM 2-oxoglutarate, 0.18 mM NADH) a phíobáil go huathoibríoch agus gor an meascán ar feadh 5 nóiméad. Tomhaiseadh ionsú ag λ=340 nm. Úsáideadh luachanna ionsúcháin imoibrí R1 leis an sampla amháin agus na luachanna ionsúcháin tar éis gor 5 nóiméad leis an sampla don ríomh. Tiontaíodh an toradh de réir an chuair chalabrúcháin go dtí an ghníomhaíocht einsíme in µkat/L.
Cinneadh Aspartate AminotransferaseBaineadh úsáid as trealamh diagnóiseach ó Greiner (Greiner GmbH, Pleidelsheim, an Ghearmáin) chun AST a chinneadh. Ar dtús, cuireadh 150 µL d’imoibrí R1 (80 mM Tris maolán pH 7.8, 240 mM L-aspartate, 1200 U/L dehydrogenase malate) agus 15 µL de shampla plasma ainmhithe turgnamhacha isteach go huathoibríoch sna cuvettes. Ina dhiaidh sin, rinneadh meascadh agus gor ag 37 ◦C ar feadh 270 s. Ansin, rinneadh 30 µL d’imoibrí R2 (15 mM 2-oxoglutarate, 0.18 mM NADH) a phíobáil go huathoibríoch agus gor an meascán ar feadh 5 nóiméad. Tomhaiseadh ionsú ag λ=340 nm. Úsáideadh luachanna ionsúcháin imoibrí R1 leis an sampla amháin agus na luachanna ionsúcháin tar éis gor 5 nóiméad leis an sampla don ríomh. Tiontaíodh an toradh de réir an chuair chalabrúcháin go dtí an ghníomhaíocht einsíme in µkat/L.
Úiré a chinneadhBaineadh úsáid as an nós imeachta seo a leanas chun an úiré a chinneadh: rinneadh 200 µL d’imoibrí R1 (Tris maolán pH 7.8, ADP, urease, agus GLDH) agus 200 µL d’imoibrí R2 (2-oxoglutarate, NADH) a phíobáil go huathoibríoch isteach i gcuvettes, agus sampla de thoirt 4 µL ina dhiaidh sin, agus ina dhiaidh sin rinneadh an meascán a mheascadh agus a ghoradh ag 37 ◦C ar feadh 30 s. Ina dhiaidh sin, rinneadh an t-ionsúchtadh ag λ=340 nm a thomhas agus tar éis 60 s eile, rinneadh an t-ionsúcht a thomhas arís. Úsáideadh na luachanna ionsúcháin tar éis 30 s agus tar éis 60 s eile don ríomh. Baineadh na luachanna óna chéile agus tiontaíodh an toradh de réir an chuair chalabrúcháin go dtí an cion úiré.
Cinneadh na Próitéiní Iomlán Ag Úsáid an Modh BiuretDéantar cur síos mionsonraithe ar chinneadh na próitéiní iomlána ag an modh Biuret i bhfoilseachán eile [9]. Rinneadh 180 µL d'imoibrí Biuret san iomlán (thartrate potaisiam sóidiam 15 mM, 100 mM NaI, 5 mM KI, agus 5 mM CuSO4) a phíobáil isteach sa chuvette, agus 45 µL den sampla ina dhiaidh sin. Tar éis deich nóiméad goir ag 37 ◦C, tomhaiseadh an t-ionsúchtadh ag tonnfhad λ=546 nm. Is é an prionsabal anseo imoibriú an bhanna peptide le Cu (II) i dtimpeallacht alcaileach, le foirmiú dath gorm-violet. Baineadh úsáid as luach ionsúcháin an imoibrí amháin agus an luach ionsúcháin tar éis deich nóiméad goir leis an sampla don ríomh.
3.5.2. Cinneadh Superoxide Dismutase (SOD) agus Catalase (CAT) Gníomhaíocht SOD a Chinneadh, Baineadh úsáid as trealamh tráchtála (19160 SOD, Merck KGaA, Darmstadt, an Ghearmáin) chun gníomhaíocht SOD a chinneadh (SOD, EC 1.15.1.1). Rinneadh an tomhas i gcuvette plaisteach ar anailíseoir uathoibríoch BS 400 (Mindray, Shenzen, an tSín). Ar dtús, cuireadh 200 µL d’imoibrí R1 (tuaslagán caolaithe WST maolánach 20 ×) isteach sa chuvette agus gor an t-imoibrí ag 37 ◦C ar feadh 108 s (1 min, 48 s). Ansin, píopaíodh 20 µL den sampla agus, ag 378 s (6 min, 18 s), cuireadh tús leis an imoibriú trí 20 µL d’imoibrí R2 (tuaslagán caolaithe einsíme maolánach 167 ×) a chur leis. Goradh an meascán ar feadh 72 s (1 min, 12 s) agus ansin tomhaiseadh ionsúiteacht ag λ=450 nm. Tomhaiseadh cinéiteach an imoibrithe ar feadh 180 s (3 nóiméad) agus léadh an t-ionsúcht gach naoi soicind. Ríomh an ionstraim an meánmhéadú ar ionsúchán in aghaidh an nóiméid (∆A) agus gníomhaíocht SOD na samplaí tomhaiste, de réir na cothromóide calabrúcháin. Cuireadh na torthaí in iúl in U/mL agus ina dhiaidh sin tiontaíodh iad go mg próitéine.
3.5.3. Cinneadh ar Ábhar MetallothioneinCinneadh an tiúchan metallothionein san fhuil, ae, agusduáinde na francaigh donn ag baint úsáide as an teicníc stripping aistrithe asaithe (AdTS) le voltaiméadracht chuisle difreálach (DPV). Le haghaidh na hanailíse, tógadh 200 µL den shárshaothar anailísithe agus meascadh é le 1 800 µL d’imoibrí Brdiˇcka i soitheach tomhais, agus ina dhiaidh sin rinneadh an cinneadh leictriceimiceach féin. Rinneadh an mheasúnacht i gcomhréir le prótacal a thuairiscítear roimhe seo [37]. Baineadh úsáid as nasc clasaiceach trí-leictreoid. Leictreoid braite mearcair crochta (HMDE) a bhí san leictreoid oibre le hachar titim de 0.4 mm2 , agus ba é Ag/AgCl/3 M KCl an leictreoid tagartha agus ba leictreoid platanam an leictreoid chúnta. Athraíodh an bunleictrilít (1 mmol·L1 [CO(NH3)6] Cl3 agus 1 mol·L1 de mhaolán amóiniam; NH3(d) móide NH4Cl, pH 9.6) do gach sampla tomhaiste. Ba iad seo a leanas na paraiméadair DPV: poitéinseal tosaigh 0.7 V, poitéinseal deiridh 1.75 V, bubbling 5 s, am sil-leagan 240 s, am modhnú 0.0 5 s, am eatramh 0.25 s, céim ionchasach 0.00105 V, ráta scanadh 0.0042 V/s, agus aimplitiúid modhnú 0.02505 V. Rinneadh an cinneadh MT ar fheiste tomhais ar a bhfuil 695 Autosampler ceangailte le haonad tomhais agus rialaithe VA Stand 693. ag aonad rialaithe TraceAnalyser 693 VA (gach Metrohm, Herisau, an Eilvéis). Fuaraíodh an córas tomhais ar fad go 4 ◦C ag baint úsáide as Julabo F25 (Julabo, Seelbach, an Ghearmáin). Onnmhairíodh na voltamogramanna a fuarthas chuig an gclár Bunachar Sonraí VA 2.2 (Metrohm, Herisau, an Eilvéis), agus rinneadh na samplaí anailísithe a dhí-ocsaiginiú ag bubbling gníomhach argón le íonacht 99.999 faoin gcéad.
3.5.4. Atá Caidmiam a Chinneadh i bhFola, Ae, agus Duán Dhianscaoileadh Samplaí Baineadh úsáid as extractor micreathonn Ethos One (Milestone, Sorisole, an Iodáil) chun an t-ae a dhianscaoileadh agusduánsamplaí, agus baineadh úsáid as Extractor MICREATHONNACH Ilthoinne 3{000 (Anton Paar Graz, an Ostair) chun na samplaí fola a dhianscaoileadh. Tharla mianadóireacht ar bhealach fliuch, ag baint úsáide as 65 faoin gcéad aigéad nítreach (HNO3 supra íon) (Merck KGaA, Darmstadt, an Ghearmáin) agus 30 faoin gcéad sárocsaíd hidrigine (H2O2 supra íon) (Merck KGaA, Darmstadt, an Ghearmáin) Iomlán de 0.4 g de ae nóduánRinneadh an sampla a mheá i sraith coimeádán Teflflon, agus cuireadh 5 ml de 65 faoin gcéad HNO3, 3 ml de 30 faoin gcéad H2O2, agus 2 ml de Milli Q H2O leis an sampla. Dúnadh na coimeádáin agus thosaigh an ionstraim de réir threoracha an mhonaróra. Mhair an dianscaoileadh micreathonn ar feadh 40 nóiméad ag 210 ◦C. Ina dhiaidh sin, fuaraíodh na samplaí ar feadh 45 nóiméad agus stóráiltear iad ag 4 ◦C i gcoimeádáin Corpoideachais. Rinneadh iomlán de 0.01 g de shampla fola a mheá isteach i sraith coimeádán gloine, agus cuireadh 300 µL de 65 faoin gcéad HNO3 agus 200 µL de 30 faoin gcéad H2O2 leis an sampla. Dúnadh na coimeádáin agus thosaigh an ionstraim de réir threoracha an mhonaróra. Mhair an dianscaoileadh micreathonn ar feadh 40 nóiméad ag teocht 140 ◦C. Ina dhiaidh sin, fuaraíodh na samplaí ar feadh 45 nóiméad agus stóráiltear iad ag 4 ◦C go dtí go gcinnfeadh AAS iad.
Cinneadh Caidmiam trí Speictriméadracht Ionsaithe AdamhachSocraíodh an caidmiam ar fheiste Agilent 280/240 Series AA Systems (Agilent Technologies). An t-ae agusduánrinneadh anailís ar shamplaí i lasair aicéitiléine-aeir (Fa AAS), agus ar na samplaí fola trí adamh leictritheirmeach (ETA AAS) ag tonnfhad 228.8 nm. Ullmhaíodh sraith chalabrúcháin le tiúchain de 0–20 µg·Lfor anailísí ar ETA AAS agus 0–10 mg·L1 do Fa AAS ó thuaslagán caighdeánach caidmiam (Analytika Praha, Prag, Poblacht na Seice), ag a bhfuil tiúchan 1.000 ± 0.002 g·L1. Ina dhiaidh sin rinneadh tomhas ar réitigh an tsraith chalabrúcháin agus tógáil na gcuar calabrúcháin, agus ina dhiaidh sin mianraíiú na fola, an ae, agusduántomhaiseadh samplaí.
3.6. Anailís staitistiúilRinneadh gach tomhas faoi thrí. Aithníodh luachanna asluiteacha le tástáil Grubbs agus fágadh as an áireamh iad (san iomlán, fuarthas dhá asluiteach). Roimh anailís staitistiúil, rinneadh na sonraí a chlaochlú trí chlaochlú logartamach agus rinneadh anailís orthu ag ANOVA aontreo (gach pointe ama ar leithligh) le tástáil iar-hoc Tukey HSD. Socraíodh an tairseach le haghaidh suntas staidrimh mar p <>
4. Conclúidí
Tá treocht cógaisíochta agus eacnamaíoch ann le déanaí chun drugaí nua a chuardach i measc meitibilítí tánaisteacha plandaí, ar substaintí iad a d'fhéadfadh cabhrú le cosaint a thabhairt i gcoinne raon galar. A bhuíochas leis na comhpháirteanna tábhachtacha atá gníomhach ó thaobh na bitheolaíochta de a bhfuil síolta fíniúna ina maitrís, is féidir iad a úsáid (agus cheana féin) chun críocha leighis. Is eol go ndéanann sleachta síolta fíonchaor fíocháin a chosaint ar dhamáiste ocsaídiúcháin a bhaineann le strus de bharr caidmiam miotail throm tocsaineach. Is dócha go mbíonn tionchar ag an gcosaint seo ar chomhdhéanamh feanólach na síolta fíonchaor a úsáidtear. Sa staidéar seo, rinneadh tástáil ar sliocht síolta fíonchaor a ullmhaíodh ón gcineál leath-resistant Cerason le cion feanólach sách ard le haghaidh éifeachtaí cosanta i gcoinne athruithe caidmiam-spreagtha. Bhí an GSE staidéar in ann gníomhaíocht plasma antioxidant a mhéadú nuair a riaradh ina n-aonar agus ábhar caidmiam níos ísle san ae agusduáinde na francaigh nuair a comh-riartar. Dá réir sin, méaduithe einsím marcóir hepatic ALT agusduánmarcóir mhaolaigh GSE creatinín de bharr caidmiam. Ina theannta sin, mhoilligh comhriarachán GSE na laghduithe ar ghníomhaíochtaí na n-einsímí frithocsaídeacha SOD agus CAT de bharr caidmiam. Léiríonn na torthaí seo gur oibreán cumhachtach cosanta é GSE in aghaidh éifeachtaí miotal trom.
