Rinne HDAC1-idirghabháil ar Rialáil Chomharthaíochta GABA Laistigh den Mheán Fómhair chliathánach Éascaíonn sé Múchadh Eagla Sóisialta Fadtéarmach i Lucha Fireann

Eispéiris shóisialta trámacha is cúis le neamhord imní sóisialta (SAD). Is sainairíonna é dianeagla agus seachaint comhthéacsanna sóisialta, ar féidir aithris láidir a dhéanamh orthu ag paraidím um riochtú eagla sóisialta (SFC). Tá céim éagtha paraidím an SFC cosúil le teiripe nochta do SAD agus éilíonn sé foghlaim conas an tráma a dhícheangal ón gcomhthéacs sóisialta. Tá géarghá le haicéitiliú histones de bharr foghlama le haghaidh foirmiú cuimhne éagtha agus a seasmhachta. Cé go rialaíonn deacetylases histone rang I (HDACanna) an próiseas foghlama thuasluaite, tá easpa soiléire ann maidir le isfhoirmeacha agus sainiúlacht spásúlachta i bhfeidhm HDAC san fhoghlaim shóisialta. Ag baint úsáide as paraidím SFC, rinneamar saintréith fheidhmiúil ar ról HDAC1, go sonrach sa septum cliathánach (LS), maidir le foirmiú cuimhne mhúchta eagla sóisialta fadtéarmach a rialú.

Tá ionduchtú an-tábhachtach san fhoghlaim. Is féidir le hionduchtú cuí a chur ar mhic léinn glacadh le heolas ar bhealach níos comhfhiosaí, agus ábhar foghlama a thuiscint agus a mheabhrú níos doimhne. Tá sé seo toisc go bhfuil cuimhne daoine ar chineál an ghníomhaíocht mheabhrach agus léiriú na hintleachta. Is gníomhaíocht chognaíoch dearfach agus chruthaitheach é an ionduchtú, ar féidir léi smaointeoireacht agus samhlaíocht daoine a spreagadh agus a threorú le linn an phróisis chognaíoch, rud a chuireann feabhas ar an gcuimhne.

Is féidir ionduchtú a bhaint amach ar bhealaí éagsúla. Mar shampla, is féidir le múinteoirí fadhbanna a shocrú le linn léachtaí agus ligean do mhic léinn smaoineamh ar réitigh leo féin, a chuideoidh le mic léinn a gcumas chun anailís chuimsitheach a dhéanamh ar fhadhbanna agus ar chuimhne a fheabhsú. Ina theannta sin, is féidir le múinteoirí acmhainní teagaisc saibhir a úsáid freisin, mar shampla pictiúir, fuaime, físeáin, agus bealaí eile chun ionsú agus cuimhne eolais na mac léinn a chur chun cinn.

Mar gheall air seo, tá gaol dlúth idir ionduchtú agus cuimhne. Trí ionduchtú cuí, is féidir le foghlaimeoirí eolas a thuiscint níos doimhne agus máistreacht níos fearr a dhéanamh ar ábhar foghlama. Cabhróidh an tuiscint dhomhain seo le foghlaimeoirí eolas a choinneáil ar feadh tréimhse níos faide agus éascóidh sé cur i bhfeidhm solúbtha a bhfuil foghlamtha acu san fhoghlaim agus sa chleachtas níos déanaí.

I mbeagán focal, tá ionduchtú agus cuimhne doscartha. Ní mór dúinn modh foghlama oiriúnach agus modh ionduchtaithe a aimsiú trí thaiscéalaíocht agus cleachtadh leanúnach, agus ár gcuimhne agus ár leibhéal foghlama a fheabhsú go leanúnach. Is ar an mbealach seo amháin is féidir linn spraoi iomlán a thabhairt dár gcuid buanna sa saol amach anseo. Is féidir a fheiceáil go gcaithfimid ár gcuimhne a fheabhsú. Is féidir le Cistanche cuimhne a fheabhsú toisc gur ábhar íocshláinte traidisiúnta Síneach é Cistanche le go leor éifeachtaí uathúla, agus is é ceann acu cuimhne a fheabhsú. Tagann éifeachtúlacht na feola mionaithe ó éagsúlacht de chomhábhair ghníomhacha atá ann, lena n-áirítear aigéad carbocsaileach, polaisiúicrídí, flavonoids, etc. Is féidir leis na comhábhair seo sláinte na hinchinne a chur chun cinn trí bhealaí éagsúla.

Cliceáil fios forlíontaí chun cuimhne a threisiú

Thomhaiseamar méadú áitiúil i bhfosfarylation HDAC1 a spreagann gníomhaíocht ag iarmhair sáirne de lucha eagla sóisialta agus d (SFC+) mar fhreagra ar an eagla sóisialta a bheith imithe in éag. Fuaireamar amach freisin go bhfuil comhghaol diúltach idir feidhm LS-HDAC1 agus foghlaim géarchúiseach um eagla sóisialta ag baint úsáide as cur chuige cógaseolaíochta agus víreasach. Ina theannta sin, chuir cosc ​​ar LS-HDAC1 feabhas ar chur in iúl an fho-aonaid receptor GABA-A 1 (Gabrb1) i lucha SFC+, agus d'éascaigh gníomhachtú gabhdóirí GABA-A géarfhoghlaim díothaithe. Mar fhocal scoir, mar gheall ar éascú na foghlama díothaithe trí chosc HDAC1 nó gníomhachtú gabhdóra GABA-A laistigh den LS, cruthaíodh cuimhne éagtha fadtréimhseach, a d'fhan fiú 30 lá tar éis díothaithe. Léiríonn ár dtorthaí go bhfuil rialú idirghabhála HDAC ar GABA ,comharthaí sa LS ríthábhachtach chun cuimhne éagtha eagla shóisialta a chur le chéile.

RÉAMHRÁ

Is sainairíonna é neamhord imní sóisialta (SAD) de bharr taithí shóisialta naimhdeach ná eagla dhian agus cásanna sóisialta a sheachaint [1, 2]. Is éard atá i gcóireáil SAD ná teiripe chognaíoch-iompraíochta atá bunaithe ar nochtadh (CBT), rud a chruthaíonn cuimhne "sábháilteachta" a chomhthíonn leis an gcuimhne aversive bunaidh [3, 4]. Ós rud é gur féidir leis an gcliú céanna cuimhní géarchúiseacha agus sábháilteachta araon a ghníomhachtú, bíonn siad in iomaíocht nuair a mheabhraítear iad le spreagthaí ábhartha, agus cinneann rian na cuimhne ceannasach an toradh iompraíochta. Is eol go laghdaítear an chuimhne sábháilteachta a chruthaíonn CBT atá bunaithe ar nochtadh le himeacht ama, rud a fhágann go dtiocfaidh athiompú ar fhreagraí eagla a múchtar roimhe seo in othair SAD [5-7]. Mar sin, tá sé ríthábhachtach tuiscint a fháil ar na meicníochtaí is bun le cuimhne éagtha marthanach chun straitéisí teiripeacha a fhorbairt as a dtiocfaidh loghadh níos iomláine agus níos daingne ó SAD.

Chuige sin, bhunaíomar an paraidím um riochtú eagla sóisialta oibreoirí (SFC), a ghineann eagla láidir agus seachnaítear sainghnéithe i lucha [8]. Sa paraidím seo, déantar díothú eagla sóisialta agus foirmiú cuimhne díothaithe mar gheall ar chur i láthair i ndiaidh a chéile ar spreagthaigh shóisialta éagsúla (sonraí anaithnide), rud a fhágann go gcailltear eagla de réir a chéile agus méadú ar imscrúdú sóisialta [9]. Léirigh staidéir roimhe seo ónár saotharlann rannpháirtíocht an septum cliathánach (LS) i ndíothú eagla sóisialta spreagtha SFC i lucha [10, 11]. Is eol don LS freisin iompraíochtaí sóisialta éagsúla a rialáil [12], a bhfuil meicníochtaí casta epigenetic mar bhonn leo [13]. Mar sin féin, níl anaithnid fós ar na meicníochtaí epigenetic laistigh den LS a rialaíonn múchadh eagla sóisialta agus foirmiú cuimhne díothaithe fadtéarmach.

Tugann fianaise chomhtháite le fios an tábhacht a bhaineann le acetylation posttranslational de N-eireabaill críochfoirt iarmhair histone i gcomhdhlúthú agus cothabháil eagla eagla [14]. Tá histone deacetylases Aicme I (HDACs), a chatalaíonn deireadh a chur le grúpaí aicéitil ó na heireabaill N-críochfort histones seo, ina rialtóirí riachtanacha ar léiriú géine atá mar bhunús le foghlaim agus cuimhne [15]. Léiríonn na HDACanna Aicme I seo, lena n-áirítear HDAC1, HDAC2, HDAC3, agus HDAC8, spleáchas iontach spásúil agus comhthéacsúil ina bhfeidhm.

Mar shampla, fuarthas go bhfeabhsaíonn hippocampal HDAC1 cuimhne chomhthiomsaitheach i bparaidím aeroiriúnaithe comhthéacsúla [16], agus tá hippocampal HDAC2 nasctha go feidhmiúil le lagú i bhfoirmiú cuimhne réada agus spásúlachta fadtéarmach [17, 18]. Ar an gcaoi chéanna, rinneadh gníomhaíocht HDAC1 a rialáil, agus rinneadh gníomhaíocht HDAC2 a íosrialáil laistigh den amygdala agus den cortex prefrontal, faoi seach, tar éis riochtú eagla cued [19]. Tá baint ag staidéir freisin le ranníocaíocht dhifreálach HDAC3 i bhfoirmiú cuimhní eagla comhthéacsúla agus cueded láidir sa hippocampus agus basal amygdala, faoi seach [20].

Ag cur san áireamh feidhmeanna éagsúla agus casta HDACanna Aicme I maidir le rialáil na foghlama agus na cuimhne, is minic a úsáidtear coscairí HDAC mar fheabhsaitheoirí cognaíocha i roinnt staidéir réamhchliniciúla [21]. Mar sin féin, tá an méid a chuireann HDACanna sonracha le rialú a dhéanamh ar bhuanseasmhacht cuimhne éagtha eagla sóisialta do-ghlactha.

Mar sin, sa staidéar seo, rinneamar scrúdú ar rialáil HDACanna aicme I i gcomhthéacs paraidím SFC. Bunaithe ar an méadú iar-éagtha ar HDAC1 folasaithe serine a chothaíonn gníomhaíocht, rinneamar ionramháil ar fheidhm LS-HDAC1 ag baint úsáide as cosc ​​cógaseolaíoch agus ró-eisiúint víreasach. Ina theannta sin, tar éis an mhéadaithe ar léiriú an chódú géine don 1 fho-aonad den receptor aigéad gamma-aimínabúitreach (GABA) A (Gabrb1) mar fhreagra ar an meascán d'imshuíomh HDAC1 agus oiliúint díothaithe, chuireamar i ngníomh receptor GABA-A. comharthaíocht laistigh den LS. Ar deireadh, rinneamar tástáil le haghaidh éifeacht chosc LS-HDAC1 agus gníomhachtú receptor LSGABA-A ar fhoirmiú cuimhne díothaithe fadtéarmach. Tugann ár dtorthaí le fios go rialaíonn LS-HDAC1 foghlaim díothaithe eagla sóisialta agus foghlaim éagtha eagla sóisialta fadtéarmach trí chomharthaíocht GABA-A go diúltach.

ABHAIR AGUS MODHANNA

Ainmhithe

Coinníodh lucha fireann CD1 (Charles River Germany, 8–11 seachtain d’aois ag tús an turgnaimh) i ngrúpa faoi choinníollacha caighdeánacha saotharlainne (timthriall éadrom/dorcha 12/12 h, soilse ar siúl ag 06:00, 22 céim, taise 60%, bia, agus uisce ad libitum) i cages polycarbonate (16 × 22 × 14 cm) go dtí máinliacht nó 3 lá roimh gach turgnamh iompraíochta. Baineadh úsáid as lucha CD1 fireann a mheaitseáil le haois agus meáchan mar spreagthaigh shóisialta i bparaidím SFC. Rinneadh na nósanna imeachta turgnamhacha go léir idir 08:00 agus 12:00 h de réir Threoir um Chúram agus Úsáid Ainmhithe Saotharlainne de chuid an Rialtais Neamhfhraincis, treoirlínte ARRIVE [22], agus treoirlínte an NIH.

Paradigm SFC

Rinneadh SFC mar a thuairiscítear roimhe seo [8] le mionathruithe chun anailís a dhéanamh ar dhíothacht fhadtéarmach:

Fáil eagla sóisialta (lá 1). Cuireadh lucha sa seomra oiriúnaithe eagla agus ligeadh dóibh gnáthchónaí a dhéanamh ar feadh 30 s sula raibh siad faoi lé cage mogalra sreinge folamh ar feadh 3 nóiméad nuair a d’fhéadfaidís an réad a fhiosrú go saor. Ansin cuireadh cage comhionann in ionad an cage folamh ina raibh aois agus meáchan-mheaitseáil sainiúil (spreagadh coinníollach: CS). Fuair ​​lucha coinníollaithe (SFC+) turraing éadrom coise (spreagadh gan choinníoll: SAM; 0.7 mA, 1 s) gach uair a rinne siad imscrúdú ar an saincheist. Ceadaíodh do lucha neamhchoinníollacha (SFC-) idirghníomhú go saor leis an sainchomhartha ar feadh 3 nóiméad. De ghnáth, sheachain lucha SFC+ druidim nó idirghníomhú leis na sainghnéithe tar éis 1-3 péireáil CS-US, agus ag an bpointe sin measadh go raibh eagla sóisialta faighte acu agus gur fhill siad ar a gcliabhán baile.

Múchadh eagla sóisialta (lá 2). Rinneadh díothú eagla sóisialta go comhionann i gcaighean baile lucha SFC+ agus SFC−. Nochtadh gach luch aonchóire faoi thrí do chliabhán mogalra sreinge folamh, ansin do shé shainshonraí difriúla d’aois agus de réir meáchain ar feadh 3 nóiméad an ceann, le eatramh idirspreagtha 3-nóiméad. Tomhaiseadh an t-am a caitheadh ​​ag fiosrú an spreagadh sóisialta mar tháscaire ar eagla shóisialta.

Athghairm eagla sóisialta (lá 3, lá 32). Maidir le haisghairm eagla sóisialta gearrthéarmach, bhí lucha faoi lé sé spreagadh sóisialta éagsúla ina gcaighean baile ar feadh 3 nóiméad le eatramh idirspreagtha 3-nóiméad. Le haghaidh aisghairm eagla sóisialta fadtéarmach mhúchadh, rinneadh tástáil ar lucha ina gcliabhán baile 30 lá tar éis éag eagla sóisialta.

Ionchlannuithe steiréatacsacha

Cannulbygth treorach; Injecta GmbH) le haghaidh insileadh déthaobhach drugaí isteach sa LS a ionchlannú go steiréitíteach leis an rinn ag fostú 2 mm os cionn sprioc-réigiún an LS (ó bregma: roimhe seo go dtí an posterior: −0.3 mm, meánthaobhach: ±0 .5 mm, dorsoventral: −1.6 mm [23]), faoi ainéistéise isoflurane (Forene, Abbott GmbH) [10, 24]. Fuair ​​gach lucha instealladh subcutaneous antaibheathaigh (10 mg/kg Baytril, Bayer GmbH) agus anailgéisigh (0.05 mg/kg Buprenorphine, Bayer) chun ionfhabhtuithe iar-mháinliachta agus pian a sheachaint. Chun strus iar-mháinliachta a laghdú, láimhseáladh gach lucha uair amháin sa lá ar feadh 5 lá ar a laghad roimh thurgnaimh inar díghalraíodh cannaí caola a dhún na cannaí treorach.

Insiltí drugaí intraseipteach

Fuair ​​lucha insiltí déthaobhacha de cheachtar MS275 (coisctheoir móilín beag sainithe orta-aimíneach a bhfuil ard-chleamhnas aige do HDAC1; 375 ng/{4}}.2 µl/ leathsféar) [16, 25], muscimol (Muc; GABA-A roghnach agónaí gabhdóra; 0.2 µg/0.2 µl/leathsféar) [26, 27] nó Feithicil (Feithicil; 0.2 µl/leathsféar; 0. 5% DMSO i Ringer steiriúil) isteach sa LS trí chanáil insileadh 27 G a cuireadh isteach sna cannaí treorach atá nasctha le 10-µl steallaire Hamilton. Rinneadh insileadh MS275 agus Muc 120 nóim nó 10 nóiméad roimh oiliúint díothaithe SFC, faoi seach. Níor cuireadh san áireamh sna hanailísí staitistiúla ach ainmhithe a raibh suíomhanna insileadh cearta acu, arna bhfíorú go hinsteolaíoch.

Insiltí víreasacha intraseipteach

An víreas Adeno-ghaolmhar (AAV; Vector Biolabs) le haghaidh ró-abairt HDAC1, ie, AAV-hSyn-HDAC1-GFP-WPRE (HDAC1-OE; 2.5 × 1013 GC /ml;), nó an veicteoir rialaithe, .i., AAV-hSyn-GFP-WPRE (GFP; 2.5 × 1013 GC/ml), insileadh go déthaobhach isteach sa LS (aniar-posterior ó bregma +0.3 mm , cliathánach ±0.5 mm; dorsoventral −3.8 mm, −3.4 mm, −3.1 mm, −2.8 mm) le ceithre insileadh/leathsféar 70-nl. Rinneadh insiltí 3 seachtaine a bhí faoi lé tús turgnaimh iompraíochta mar a thuairiscítear roimhe seo [11].

Anailís léiriú géine

Chuaigh eagla sóisialta as do lucha agus fágadh gan cur isteach orthu ina cages baile ar feadh 90 nóiméad tar éis oiliúint iompraíochta. Rinneadh lucha a íobairt ansin faoi ainéistéise CO2, baineadh a n-inchinn go tapa, agus díroinneadh roimhe seo go dtí −0.10 mm ó bregma 0.1 mm.

Aonrú RNA agus eagar PCR

Eastóscadh próitéin agus anailís

Baineadh próitéiní núicléacha ag baint úsáide as Kit Eastóscadh Núicléach EpiQuick (Epigentek) de réir phrótacal an mhonaróra. Baineadh úsáid as anailís bhloic an iarthair chun leibhéil tuisceana léirithe HDAC1 a bhrath. Réitíodh 15 ug de phróitéin ar 12% Glóthach Stain-Free TGX (Bith-Rad) agus aistríodh go seicní nitrocellulose. Cuireadh bac ar scannáin le 5% bainne, 1% Tween-20 i saline maolánach Tris agus ina dhiaidh sin gor thar oíche leis an antibanilide-basedt-anti-HDAC1 seo a leanas (Thermo Fisher; PA1-860; 1:2000) , fosfarú HDAC1 ar iarmhar serine 421 (coinín-frith-pHDAC1(S421); Thermo Fisher; PA5-36810; 1:2000), chomh maith le fosfarylation ar serine 421 agus 423 (coinín-frith-pHDAC1(S421, S423), Thermo Fisher; PA5-36911; 1:2000). Braitheadh ​​bannaí imdhíon-lipéadaithe ag baint úsáide as an antashubstaint gabhar-fhrith-choinín comhchuingeach HRP (Cell Signaling; #7074; 1:1000) tar éis córas feabhsaithe cemilbeforence (SuperSignal West Dura, Thermo Fisher). Baineadh úsáid as próitéin iomlán mar rialú inmheánach luchtaithe.

Scóráil iompair agus anailís staitistiúil

Rinne breathnóir a bhí dall ar chóireáil amanna imscrúdaithe sóisialta mar tháscaire ar eagla shóisialta a scóráil de láimh ag baint úsáide as JWatcher (1.0, Ollscoil Macquarie agus UCLA). Úsáideadh GraphPad Prism leagan 9.0 do Windows (Bogearraí GraphPad) le haghaidh anailís staitistiúil. Tá tuairisc mhionsonraithe ar anailísí roimhe seo ar fáil i dTábla Forlíontach S2. Táirgeadh na figiúirí go léir ag baint úsáide as dearadh Affinity.

TORTHAÍ

Déanann díothú eagla sóisialta uasghrádú ar ghníomhaíocht-ionducin roimhfosfaraluithe i septum lucha SFC+ Ar dtús, rinneamar anailís ar leibhéil próitéin HDAC1 i d’ábhair fíocháin seipteacha a fuarthas ó SFC+ agus SFC− lucha 90 nóim tar éis nochtadh do cheachtar spreagadh sóisialta amháin, .i. díothú giorraithe (SFC+/1ss agus SFC−/1ss), nó sé spreagadh sóisialta, ie, le díothú iomlán (posterior-posterior6ss) (Fíor 1A). Bhí líon na bpéirí CS-SAM le linn éadáil eagla shóisialta ar an lá 1 (Fíor 1 B) cosúil leis an dá ghrúpa de lucha SFC+. De réir mar a bhíothas ag súil leis, chaith lucha SFC+ i bhfad níos lú ama ag fiosrú na chéad spreagthaigh shóisialta (nó a lean) i gcomparáid le lucha SFC-(P < 0.05; Fíor 1C), rud a léirigh leibhéil níos airde eagla sóisialta. Mar sin féin, faoi dheireadh an phrótacail díothaithe iomláin, bhí an t-am imscrúdaithe ar an 6ú spreagadh sóisialta ag lucha SFC +/6ss cosúil leis an am a bhí ag a gcomhghleacaithe SFC−/6ss (Fíor 1C), rud a thabharfadh le tuiscint go raibh eagla sóisialta imithe in éag.

Níor léirigh anailís blot an Iarthair difríochtaí i leibhéil seipteach HDAC1 idir na ceithre ghrúpa a tástáladh, ie, idir SFC+/1ss, SFC+/6ss, SFC−/1ss, agus SFC−/6ss, le linn éagtha eagla sóisialta (Fíor 1 D). Is eol go n-ardóidh fosfarylation iar-aistrithe de HDAC1 ar ser421 (pHDAC1) agus fosfarú dúbailte ag ser421 agus ser423 (ppHDAC1) gníomhaíocht deacetylase HDAC1 [28]. Mar sin, rinneamar leibhéil pHDAC1 agus ppHDAC1 a chainníochtú laistigh den septum chun gníomhachtú HDAC1 a mheasúnú le linn éagtha eagla sóisialta. Méadaíodh leibhéil pHDAC1 agus ppHDAC1 araon i SFC+/6ss i gcomparáid le lucha SFC+/1ss (Fíor 1E; P < 0.05 do pHDAC1 agus Fíor 1F; P < 0.05 do ppHDAC1), ag moladh méadú ar ghníomhaíocht HDAC1 le linn dul in éag eagla sóisialta.

Rialaíonn modhnú déthreorach LS-HDAC1 foghlaim faoi eagla sóisialta

Ansin, bhí sé mar aidhm againn caidreamh cúiseach a bhunú idir feidhm LSHDAC1 agus múchadh eagla sóisialta trí mhodhnú déthreoch ar fheidhm LS-HDAC1 ag baint úsáide as imshuí cógaseolaíochta (caillteanas feidhme) nó ró-léiriú AAV-idirghabhála (gnóthachan feidhme) in dhá chohórt ar leith de lucha. .

Le haghaidh imshuí cógaseolaíochta micreaphunches S275 nó Veh go déthaobhach insileadh isteach sa LS roimh oiliúint díothaithe as a lean na grúpaí seo a leanas: SFC+/Veh, SFC+/MS275, SFC−/Veh, agus SFC−/MS275 (Fíor 2A). Ní raibh difríocht idir líon na bpéirí CS-SAM i measc grúpaí SFC+ le linn éadáil eagla shóisialta (Fíor 2 B). Le linn an eagla shóisialta a bheith imithe in éag ar an dara lá, léirigh lucha uile SFC+ ardleibhéil eagla sóisialta le linn an chéad spreagadh sóisialta a chur i láthair, neamhspleách ar a gcóireáil, mar atá léirithe ag amanna ísle imscrúdaithe sóisialta. Mar sin féin, luathaigh cosc ​​HDAC1 díothú, mar a léirigh an grúpa SFC+/MS275 imscrúdú sóisialta ardaithe cheana féin le linn nochtadh don 2ú agus don 3ú spreagadh sóisialta (P < 0.05 vs. SFC+/Veh; Fíor 2C). Níor chuir cóireáil le MS275 isteach ar amanna imscrúdaithe sóisialta i lucha SFC- (Fíor 2C, D). Léirigh gach grúpa leibhéil chomhchosúla arda d'imscrúdú sóisialta le linn athghairme gearrthéarmacha (Fíor 2D), rud a léiríonn go bhfuil eagla sóisialta imithe in éag.

Ar an dara dul síos, rinneamar turgnamh gnóthachan feidhme ag baint úsáide as ró-abairt AAV-idirghabhála de HDAC1 (AAV-hSyn-HDAC1-GFPWPRE; HDAC1-OE) nó víreas rialaithe (AAV-hSyn-GFP- WPRE; GFP) laistigh de sheptum SFC+ agus SFC− lucha as a dtiocfaidh na grúpaí seo a leanas: SFC+/GFP, SFC+/HDAC-OE, SFC−/GFP, agus SFC−/HDAC-OE (Fíor 2E). Fuair ​​gach grúpa de lucha SFC+ an líon céanna péireálacha CSUS le linn éadála trí seachtaine tar éis aistriú víreasach (Fíor 2F), rud a thugann le tuiscint nár athraigh ró-léiriú LS-HDAC1 foghlaim eagla sóisialta. Léirigh gach lucha SFC+ a bhí neamhspleách ar chóireáil leibhéil arda eagla sóisialta le linn an chéad spreagadh sóisialta a chur i láthair, mar a léiríodh le himscrúdú sóisialta laghdaithe i gcomparáid leis na grúpaí SFC− faoi seach (Fíor 2G). Mar sin féin, chuir ró-léiriú LS-HDAC1 isteach go mór ar eagla sóisialta a bheith imithe in éag, toisc gur léirigh grúpa SFC+/HDAC1-OE imscrúdú sóisialta níos ísle le linn nochtadh an 2ú go dtí an 6ú spreagthaí sóisialta i gcomparáid leis na lucha SFC+/GFP a bhí ar taispeáint ionchasach. díothú (P < 0.05 vs. SFC+/GFP; Fíor 2G).roimh lucha, níor chuir ró-eisiúint LS-HDAC1 isteach ar amanna imscrúdaithe sóisialta (Fíor 2G, H). Le linn cuimhne gearrthéarmach, léirigh gach grúpa lucha leibhéil den chineál céanna d'imscrúdú sóisialta (Fíor 2H). Deimhníodh overexpression de HDAC1 ag anailís blot an iarthair (Fíor Forlíontach S1).

Tagann athruithe dinimiciúla ar léiriú géine mar thoradh ar chosc ar LS-HDAC1 roimh éag

Chun na spriocanna iartheachtacha féideartha LS-HDAC1 a aithint, insíothlaíodh lucha SFC+ go déthaobhach le Veh nó le MS275 120 nóim roimh éag an eagla shóisialta agus rinneadh iad a íobairt 90 nóim tar éis nochtadh do cheachtar den 1ú (Veh) /1ss agus MS275/1ss) nó an 6ú (Veh/6ss agus MS275/6ss) spreagadh sóisialta (Fíor 3A). Fuarthas agus próiseáladh micropunches fíocháin seipteach ag baint úsáide as eagar PCR le haghaidh comharthaíochta GABA agus glutamáit (féach "Ábhair agus modhanna"). Fuair ​​gach grúpa SFC+ an líon céanna péirí CS-SAM le linn éadáil eagla shóisialta (Fíor 3B). Le linn díothaithe, léirigh gach grúpa lucha SFC+ íseal imscrúdaithe sóisialta le linn nochtadh don 1ú spreagadh sóisialta. Mar sin féin, le linn díothaithe, rinne lucha SFC+ íobairt tar éis don 6ú spreagadh sóisialta teagmháil shóisialta incriminteach a léiriú le gach nochtadh a thug le tuiscint go raibh eagla sóisialta ceart imithe in éag (Fíor 3C). Agus torthaí á ndeimhniú i bhFíor 2C, luathaíodh an díothú eagla sóisialta i MS275/6ss i gcomparáid le lucha Veh/6ss mar is léir ó amanna imscrúdaithe sóisialta níos airde le linn na léirithe don 2ú agus 3ú spreagadh sóisialta (P < 0. 05 vs. Veh/ 6ss; Fíor 3C). Anailís PCR eagar do GABA agus géinte comharthaíochta glutamáit a bhaineann le fios athruithe dinimiciúla i genes go leor, mar a thaispeántar sa heatmap ( Fíor. 3 D ). Soláthraítear ginearálóir PCR Eagar iomlán mar aon le hathrú fillte faoi seach agus luachanna P i dTábla Forlíontach S3. Mar sin féin, géin amháin a bhí uasrialaithe go sainráite i MS275-chóireáladh lucha tar éis traenála díothaithe iomlán ná Gabrb1 (P < 0.05 vs. gach grúpa eile; Fíor 3E), agus níor tháinig aon athrú ar a ghéin Gabrb3 gaolmhar (Fíor 3F). ).

Éascaíonn gníomhachtú cógaseolaíochta gabhdóirí LS-GABA-A foghlaim díothaithe

Bunaithe ar thorthaí HDAC{{{{0}}ardaithe iar-mhúchta de bharr coiscthe HDAC i slonn Gabrb1, rinneamar hipitéis go bhféadfadh comharthaíocht GABAergic a bheith mar bhunús leis an éifeacht luathaithe éagtha a bhaineann le cosc ​​LSHDAC. Chun an smaoineamh seo a thástáil, rinneamar comharthaíocht LSGABA-A a ghníomhachtú go háitiúil trí Muc, agónaí GABA-A ar leith [25], nó Veh a insileadh, as a dtiocfaidh na grúpaí seo a leanas: SFC+/Veh agus SFC+/Muc, SFC−/Veh, agus SFC−/Muc (Fíor 4A). Bhí an líon céanna péirí CS-SAM ag teastáil ó lucha SFC+ a bhí insileadh le Muc nó Veh chun eagla sóisialta a fháil (Fíor 4B). Le linn an eagla a bheith imithe in éag, chaith lucha SFC+ go léir punches meicreafólach ag fiosrú an spreagadh sóisialta le linn dóibh a bheith faoi lé an 1ú spreagadh sóisialta ná a gcomhghleacaithe SFC− (P < 0.05 vs. SFC−/Veh agus SFC−/Muc; Fíor. 4C), a dhírigh ar éadáil rathúil eagla sóisialta. Mar sin féin, léirigh lucha SFC+/Muc dul as feidhm níos gasta. Go sonrach, thaispeáin siad leibhéil imscrúdaithe sóisialta cosúil le leibhéil na lucha SFC-, a bhí i bhfad níos airde ná sin na lucha SFC+/Veh cheana féin agus iad faoi lé an 2ú spreagadh sóisialta (P <0.05 vs. SFC+/Veh: Fíor. 4C) . Le linn cuimhne gearrthéarmach, léirigh gach grúpa lucha imscrúdú sóisialta den chineál céanna (Fíor 4D), rud a thugann le tuiscint go ndearnadh díothú rathúil.

Mar thoradh ar chosc cógaseolaíoch ar LS-HDAC1 nó ar ghníomhachtú comharthaíochta LS-GABA, téann eagla sóisialta buan as feidhm

Bunaithe ar an bhfoghlaim éagtha feabhsaithe a thugamar faoi deara tar éis coiscthe LS-HDAC1 agus gníomhachtú comharthaíochta LS-GABA, rinneamar staidéar ar nádúr marthanach na n-athbhreithnithe cógaseolaíochta seo (Fíor 5 A).

Sa chéad turgnamh, rinneamar tástáil ar éifeacht imshuí HDAC1 ar fhoirmiú cuimhne éagtha marthanach i lucha SFC+/Veh agus SFC+/ MS275. Fuair ​​lucha SFC+ insileadh Veh agus MS araon an líon céanna péireálacha CS-US le linn éadáil eagla shóisialta (Fíor 5B). Ag deimhniú ár dtuairimí roimhe seo (Fíoracha 2C agus 3C), léirigh lucha SFC+ a insileadh le MS275 imscrúduithe sóisialta méadaithe le linn nochtadh don 2ú agus don 3ú spreagthaí sóisialta le linn na hoiliúna éagtha eagla sóisialta (P < 0.05 vs. SFC+/Veh; Fíor 5C). Mar thoradh air sin, léirigh an dá ghrúpa leibhéil chomhchosúla d’amanna imscrúdaithe sóisialta le linn nochtadh don 6ú spreagadh sóisialta, rud a thugann le fios go raibh siad imithe in éag. In ainneoin díothaithe rathúil, le linn aisghairme fadtéarmach a rinneadh 30 lá tar éis oiliúna díothaithe, léirigh lucha SFC+/MS275 leibhéil i bhfad níos airde d’imscrúdú sóisialta (P < 0.05 vs. SFC+/ Veh; Fíor. 5D), rud a léirigh cuimhne imithe in éag fadtréimhseach níos fearr. Cosc HDAC1.

Rinneadh an turgnamh céanna i sraith ar leith de lucha SFC+ a insileadh go háitiúil le Muc nó Veh (grúpaí SFC+/Veh agus SFC+/Muc). Fuair ​​​​an dá ghrúpa péireálacha CS-US den chineál céanna a léirigh éadáil chomhionann (Fíor 5E) agus léirigh siad imscrúdú sóisialta íseal den chineál céanna le linn nochtadh don 1ú spreagadh sóisialta le linn oiliúna díothaithe (Fig. 5 F). Mar a tharla sa turgnamh roimhe seo (Fíor 4C), áfach, bhí díothú faitíos sóisialta luathaithe ag an ngrúpa SFC+/Muc (P < 0.05 vs. SFC+/Veh; Fíor 5F). Is díol suntais é, le linn athghairm fhadtéarmach ar lá 32, léirigh lucha SFC+/Muc imscrúdú sóisialta méadaithe i gcomparáid leis an ngrúpa SFC+/Veh (P <0.05 vs. SFC+/Veh; Fíor. 5G), ag tabhairt le tuiscint gur cheart gníomhachtú LS-GABA-A freisin mar thoradh ar chuimhne imithe in éag fada buan.

PLÉ

Ní thuigtear go maith na próisis a rialaíonn an t-aistriú ó chuimhne ghearrthéarmach go cuimhne fhadtéarmach i gcomhthéacs iompraíochtaí a bhaineann le eagla, go háirithe i gcás SAD. Sa staidéar seo, ag baint úsáide as paraidím SFC in éineacht le cur chuige cógaseolaíochta agus víreasach, déanaimid cur síos ar mheicníocht epigenetic úrscéal arna idirghabháil ag HDAC1 laistigh den LS a rialaíonn an chuimhne mhúchadh eagla sóisialta fadtéarmach i lucha fireann. Go sonrach, thugamar faoi deara (i) fosfarlú méadaithe HDAC1 a spreagann gníomhaíocht laistigh den septum de lucha SFC+ le linn éirí as eagla sóisialta, (ii) rialáil dhiúltach ar léiriú eagla sóisialta ag HDAC1 laistigh den LS, (iii) léiriú feabhsaithe de Gabrb1 sa septum mar fhreagra ar an teaglaim de chosc agus díothú HDAC1, (iv) díothú eagla a éascú trí ghníomhachtú gabhdóra GABA-A, agus (iv) comhdhlúthú fadtéarmach cuimhne díothaithe tar éis cosc ​​​​cógaseolaíoch ar HDAC1 nó gníomhachtú gabhdóirí GABA-A laistigh den LS. .

Bhí baint ag HDACanna Aicme I roimhe seo le heasnaimh iompair shóisialta [29-31] agus foghlaim chomhthiomsaitheach [16, 17, 20, 32]. Ag cur san áireamh an mbonn seo, rinneamar tástáil le haghaidh dinimic próitéin HDAC1 septal le linn éag eagla sóisialta agus fuair sé amach gur fheabhsaigh éag eagla sóisialta i lucha SFC+ pHDAC1 agus ppHDAC1 (Fíor 1E, F), cé gur fhan leibhéil próitéin HDAC1 gan athrú (Fíor 1 D). Tá sé ar eolas go méadóidh Casein kinase 2-fosphorylations iar-aistriúcháin idirghabhála de HDAC1 ag ser421 agus ser423 a ghníomhaíocht catalaíoch (ie, deacetylase) agus a chomhlachas le coimpléisc mhóra athbhrúiteora, amhail coimpléisc Sin3A agus CoREST [33]. Tháinig méadú ar fhosfarylation ag na suíomhanna seo as an eagla sóisialta a bheith imithe in éag, rud a thugann le tuiscint go méadaíonn oiliúint éagtha gníomhaíocht HDAC1 i lucha SFC+ amháin. Ní raibh an feabhsú seo le feiceáil i lucha SFC - ná i lucha SFC+ a chuaigh trí dhíbirt ghiorraithe, rud a thugann le tuiscint go bhfuil oiliúint éagtha iomlán i lucha a bhfuil eagla sóisialta orthu riachtanach chun fosfarylation HDAC1 a mhéadú.

Nochtamar freisin nasc cúiseach idir an ghníomhaíocht ardaithe HDAC1 laistigh den LS agus eagla sóisialta. (i) Imshuí cógaseolaíochta de LS-HDAC1 120 nóiméid roimh éag an eagla d'éascaigh sé dul in éag eagla sóisialta (Fíor 2C). (ii) Os a choinne sin, lagaigh ró-léiriú HDAC1 laistigh den LS an eagla shóisialta (Fíor 2G). Mar a luadh níos luaithe, tá cur síos déanta ar HDAC1 agus HDACanna rang I eile mar rialtóirí ríthábhachtacha cuimhne eagla [16]. Mar shampla, bhí áitíocht laghdaithe HDAC3 ag an tionscnóir cFos sa hippocampus droma agus amygdala basolateral comhghaolú le foirmiú cuimhne eagla comhthéacsúla gan tionchar a imirt ar eagla cued [20]. I staidéar eile, RGFP963 - inhibitor móilín beag de HDACs aicme I - comhdhlúthú feabhsaithe eagla cued [34]. Ag cur san áireamh go bhfuil an LS ríthábhachtach chun leideanna sóisialta a phróiseáil le linn cuimhní comhthiomsaitheach a fhoirmiú [12], molann ár dtorthaí feidhm úrscéal do LS-HDAC1 mar rialtóir diúltach ar fhoghlaim éagtha eagla sóisialta.

Chun spriocanna iartheachtacha a nochtadh do HDAC1, a d’fhéadfadh idirghabháil a dhéanamh ar a éifeacht ar fhoghlaim éagtha, rinneamar eagar PCR le haghaidh GABA agus géinte a bhaineann le comharthaíocht glutamáit i lucha SFC+ le nó gan chosc HDAC1. Fuair ​​​​muid amach go bhfuil méadú tagtha ar léiriú Gabrb1 i bhfíochán septal na lucha a fhaigheann [37], cuireann gníomhachtú muc-idirghabhála comharthaí GABA-A le réigiún hippocampal CA1 le díothú eagla comhthéacsúil [38], agus ionramháil den chineál céanna laistigh den cortex prefrontal infralimbic nó feabhsaíonn an amygdala basolateral éagadh eagla cued [39]. Tá sé léirithe ag staidéir go bhfuil laghdú ar fheidhm receptor GABA-A mar thoradh ar an abairt downregulationsuggestinga1 mar gheall ar acetylation tionscnóra H3 laghdaithe ag HDAC2 agus HDAC3 faoi choinníollacha a bhaineann le nochtadh eatánóil ainsealach [40]. D’fhéadfadh meicníocht chomhchosúil a bheith mar bhonn lenár dtoradh. Mar sin, d’fhéadfadh go n-eascródh cosc ​​HDAC1 ar aicéitiliú feabhsaithe H3 agus H4 agus, dá bharr sin i slonn Gabrb1 feabhsaithe agus comharthaíocht GABA laistigh den LS, as a dtiocfaidh foghlaim éagtha feabhsaithe i gcomhthéacs sóisialta. Agus an hipitéis seo á dheimhniú, d'éascaigh gníomhachtú roimh LS-GABA-A receptor ag baint úsáide as Muc foghlaim díothaithe cosúil leis an éifeacht a breathnaíodh ar chosc ar LS-HDAC1 (Fíor 4 C). Tá GABAergic go príomha ag an LS agus is eol dó iompraíochtaí spreagtha a rialáil [12]. Ina theannta sin, faigheann an LS ionchur glutamatergic ó na réigiúin hippocampal CA2, a dhéanann cód le haghaidh cuimhne sóisialta [41, 42]. Mar sin féin, tá eagraíocht spásúil sainithe ag na hionchuir glutamatergic seo agus gníomhaíonn siad ensemble sonrach de néaróin laistigh den LS [12, 43], rud a fhágann go mbeidh éifeachtaí iompraíochta sonracha iartheachtacha. I gcomhthéacs an eagla shóisialta a bheith imithe in éag, d’fhéadfadh ionchur den sórt sin a bheith in iúl do bhailíocht dhiúltach an spreagtha shóisialta i lucha SFC+, rud a chruthódh seachaint shóisialta agus eagla sóisialta. Mar sin féin, is dócha go gcuirfidh cosc ​​iomlán ar an LS de bharr comharthaíocht áitiúil GABAergic feabhsaithe bac ar an gcur chuige sóisialta i leith na foghlamaTocial.

Mar a luadh cheana, tá athiompú agus atarlú SAD in othair a fuair loghadh iomlán an-ard [44-46]. Mar sin, rinneamar tástáil le haghaidh cuimhne mhúchadh eagla fadtéarmach tar éis cosc ​​​​LS-HDAC1 nó gníomhachtú LS-GABA-A. Go háirithe, mhéadaigh coisc HDAC1 agus gníomhachtú gabhdóra GABA-A laistigh den LS go leordhóthanach seasmhacht an éagtha eagla sóisialta agus chuir sé cosc ​​​​ar atarlú na gcuimhní sóisialta géarchúiseacha mar a fuarthas i rialuithe feithicle-chóireáilte 30 lá tar éis éag eagla sóisialta (Fíor 5D, G). . Léiríonn na sonraí seo gur tháinig comhdhlúthú cuimhne díothaithe níos substaintiúla de bharr an chlaonta luathaithe a breathnaíodh go géar ag cosc ​​HDAC1 agus gníomhachtú gabhdóra GABA-A, rud a fhágann go bhfuil sé thar a bheith marthanach. Comhthacaíonn sé seo leis an smaoineamh gur feabhsaitheoirí cognaíocha éifeachtacha iad coscairí HDAC [21, 47]. Is eol go bhfuil leitheadúlacht níos airde ag SAD i mná [48] agus tá paradigm SFC bunaithe againn i lucha baineann freisin [11]. Thairis sin, bhí éifeachtaí codarsnacha de chosc HDAC ar cognition i lucha baineann ag brath ar an bhfochineál HDAC agus an comhthéacs sonrach atá á scrúdú [49, 50]. Mar sin, d'fhéadfaí smaoineamh ar staidéar a dhéanamh ar an meicníocht thuasluaite i lucha baineanna. Mar sin féin, tá an scrúdú seo lasmuigh den scóip agus ba chóir gur staidéar leantach suimiúil a bheadh ​​ann.

Go hachomair, cuireann ár staidéar léargais chriticiúla ar fáil ar na meicníochtaí móilíneacha a bhaineann le díothú eagla sóisialta a rialáil agus tugann sé le tuiscint go bhfuil cosc ​​​​idirghabhála HDAC ar chomharthaíocht GABAergic laistigh den LS ina rialtóir diúltach ar eagla shóisialta ghéarmhíochaine agus fhadtéarmach araon i léig. lucha. Chomh fada agus is eol dúinn, is é seo an chéad staidéar chun HDAC1 a nascadh go cúiseach le rialáil na gcuimhní sóisialta seachránacha. Cuireann an staidéar seo leis an méid fianaise atá ag dul i méid ag cur HDACs mar rialtóirí féideartha ar chuimhne chomhthiomsaitheach agus go sonrach cuireann sé HDAC1 chun cinn mar sprioc teiripeach féideartha do SAD.

TAGAIRTÍ

dsDemyttenaere K, Bruffaerts R, Posada-Villa J, Gasquet I, Kovess V, Lepine JP, et al. Leitheadúlacht, déine, agus riachtanas neamhchomhlíonta le cóireáil ar neamhoird mheabhrach i Suirbhéanna Domhanda Meabhairshláinte na hEagraíochta Domhanda Sláinte. J Am Med Cumann. 2004; 291: 2581-90.

2. Blanco C, Bragdon LB, Schneier FR, Liebowitz MR. Cógasteiripe fianaise-bhunaithe ar neamhord imní sóisialta. Int J Neuropsychopharmacol. 2013; 16:235–49.

3. Scholten WD, Batelaan NM, van Balkom AJ, Wjh Penninx B, Smit JH, van Oppen P. Atarlú neamhoird imní agus a thuar. J Difear Neamhord. 2013; 147:180-5.

4. Bouton ME. Comhthéacs, am, agus aisghabháil cuimhne sna paraidím cur isteach ar fhoghlaim Pavlovian. Tarbh Síceolaíochta. 1993; 114:80-99.

5. Bruce SE, Yonkers KA, Otto MW, Eisen JL, Weisberg RB, Pagano M, et al. Tionchar na comh-ghalarachta síciatrach ar théarnamh agus ar atarlú i neamhord imní ginearálaithe, phobia sóisialta, agus neamhord scaoll: 12-staidéar ionchasach bliana. Am J Síciatracht. 2005; 162: 1179-87.

6. Boschen MJ, Neumann DL, Waters AM. Athiompú imní agus eagla ar déileáladh leo go rathúil: saincheisteanna teoiriciúla agus moltaí maidir le cleachtas cliniciúil. Síciatracht Aust NZJ. 2009; 43:89–100.

7. Leung HT, Westbrook RF. Déanann aisghabháil spontáineach ar fhreagraí eagla múchta a n-éag: ról do mheicníochtaí ceartúcháin earráide. J Exp Psychol Anim Próiseas Iompraíochta. 2008; 34:461–74.

8. Toth I, Neumann ID, Slattery DA. Aerchóiriú eagla sóisialta: samhail ainmhí nua agus shonrach chun staidéar a dhéanamh ar neamhord imní sóisialta. Neuropsychopharmacology. 2012; 37: 1433-43.

9. Toth I, Neumann ID, Slattery DA. Aerú eagla sóisialta mar mhúnla ainmhithe de neamhord imní sóisialta. Curr Protoc Neurosci. 2013; 63:9–42.

10. Zoicas I, Slattery DA, Neumann ID. Ocsaítocin inchinn i riochtú eagla sóisialta agus a éag: rannpháirtíocht an septum cliathánach. Neuropsychopharmacology. 2014;39:3027–35.

11. Menon R, Grund T, Zoicas I, Althammer F, Fiedler D, Biermeier V, et al. Coscann comharthaíocht ocsaitocin sa septum cliathánach eagla sóisialta le linn lachtaithe. Curr Biol. 2018; 28:1066–78.e1066.

12. Menon R, Suss T, Oliveira VEM, Neumann ID, Bludau A. Néar-bhitheolaíocht an septum cliathánach: iompar sóisialta a rialáil. Treochtaí Neurosci. 2022; 45:27-40. 13. Bludau A, Royer M, Meister G, Neumann ID, Menon R. Rialú epigenetic na hinchinne sóisialta. Treochtaí Neurosci. 2019; 42:471–84.

14. Levenson JM, Sweatt JD. Meicníochtaí epigenetic i bhfoirmiú cuimhne. Nat Rev Neurosci. 2005; 6:108–18.

15. Mahgoub M, Monteggia LM. Ról do histone deacetylases sna meicníochtaí ceallacha agus iompraíochta is bun leis an bhfoghlaim agus an chuimhne. Foghlaim Mem. 2014; 21:564–8.

For more information:1950477648nn@gmail.com