Ag Iniúchadh ar Ról Úrscéal Idirléicín-17 Homalóg Ó Dhiúilicíní Mara Inveirteabracha Mytilus Coruscus i bhFreagra Imdhíonachta Dhéanach: An é Rialachán Diúltach le Mc-Novel_miR_145 an Eochair?

Teibí: Léiríonn Interleukin-17 (IL-17) aicme cítocíní pro-athlastacha a bhfuil baint acu le neamhoird athlastacha ainsealacha agus meathlúcháin. Roimh an staidéar seo, bhí sé tuartha go bhféadfadh Mc-novel_miR{5}} homalog IL-17 a dhíriú chun páirt a ghlacadh i bhfreagairt imdhíonachta Mytilus coruscus. Bhain an staidéar seo úsáid as modhanna taighde bitheolaíochta móilíneacha agus cille éagsúla chun iniúchadh a dhéanamh ar an gceangal idir homalog Mc-úrscéal agus IL-17 agus a n-éifeachtaí imdhíon-mhodúla. Dheimhnigh an réamh-mheastachán bithfhaisnéisíochta go raibh an homalóg IL-17 ceangailte leis an teaghlach diúilicíní IL{-17, agus ina dhiaidh sin tá measúnachtaí cainníochtúla fíor-ama PCR (qPCR) chun a léiriú go raibh McIL-17-3 léirithe go hard i fíocháin a bhaineann le himdhíonacht agus d'fhreagair siad do dhúshláin bhaictéaracha. Dheimhnigh torthaí ó thástálacha tuairisceoirí luciferase an cumas atá ag McIL-17-3 chun NF-κb iartheachtacha a ghníomhachtú agus a spriocdhíriú ag Mc-novel_miR_145 i gcealla HEK293. Tháirg an staidéar freisin McIL-17-3 antiserum agus fuarthas amach go rialaíonn Mc-novel_miR{_145 McIL-17-3 trí thástálacha blotting an iarthair agus qPCR. Ina theannta sin, léirigh anailís cíteaiméadrachta sreafa go ndearna Mc-úrscéal rialú diúltach ar McIL-17-3 chun apoptosis de bharr LPS a mhaolú. I dteannta a chéile, léirigh na torthaí reatha go raibh ról tábhachtach ag McIL{-17-3 i gcosaint imdhíonachta moilisc in aghaidh ionsaí baictéarach. Ina theannta sin, rinneadh rialú diúltach ar McIL- 17-3 ag Mc-novel_miR_145 chun páirt a ghlacadh in apoptosis spreagtha ag LPS. Soláthraíonn ár dtorthaí léargais nua ar rialáil RNA neamhchódaithe i samhlacha inveirteabracha.

sochair cistanche do na fir-neartú chóras imdhíonachta

Eochairfhocail: Cúscús Mytilus; idirleukin-17; microRNA; apoptóis; díolúine dúchasach

1. Réamhrá

Tá ról ríthábhachtach ag an gcóras imdhíonachta i gcosaint an orgánaigh i gcoinne ionradh pataiginí exogenous. Go traidisiúnta, roinntear an córas cosanta ina dhíolúine dúchasach agus ina dhíolúine faighte. Léiríonn díolúine dúchasach an chéad líne cosanta de chuid an chomhlachta i gcoinne pataiginí, ar féidir leo ionradh pataigin a bhrath agus iad a dhíchur go páirteach [1]. Déantar díolúine dúchasach a idirghabháil trí éagsúlacht mhór cealla, lena n-áirítear cealla marfacha nádúrtha, monocytes, neodrófail, eosinophils, basophils, agus cealla dendritic a scaiptear, ar a dtugtar le chéile cealla imdhíonachta dúchasacha. Scaoileann na cealla seo líon mór cítocíní a bhfuil baint acu le cumarsáid cheallacha agus mar sin cuidíonn siad le freagairtí imdhíonachta a chomhordú [2]. I gcás ionfhabhtú agus athlasadh, feidhmíonn cytokines mar mhodhnóirí: déanann roinnt cytokines an galar níos measa (proinflammatory), agus cuireann cinn eile sláinte (frith-athlastach) chun cinn [3]. Tá cítocíní faoi réir leibhéil arda brú éabhlóideach agus mar sin taispeánann siad éagsúlú seicheamh [4], ach léiríonn an teaghlach cítocine IL-17 ardchaomhnú, a léirítear le huaire cistéineach san ailtireacht fheidhmiúil a foirmíodh trí idirghníomhaíochtaí idir ceithre cinn. iarmhair cistéin a chaomhnú [5]. Tá sé léirithe ag staidéir le déanaí gur aicme de cítocíní pro-athlastacha é IL-17 a bhfuil baint acu le neamhoird athlastacha ainsealacha agus meathlúcháin [6]. Feidhmíonn an IL-17trí cheangal go sonrach le gabhdóirí chun forbairt athlasadh, diúltú imdhíonachta, agus hematopoiesis a chur chun cinn. Tá seisear ball (IL-17A go IL-17F) sa teaghlach IL-17 cítocíní i ndaoine, a tháirgtear trí limficítí T gníomhachtaithe agus daonraí cealla dúchasacha eile mar fhreagra ar IL -1 agus IL-23 [7,8]. Mar sin féin, tugann corpas fianaise atá ag dul i méid le tuiscint gur tháinig méadú suntasach ar an teaghlach IL{-17 ar na moileasc mara agus ar speicis eisideirm. I ngéanóm na bhfuán corcra Strongylocentrotus purpuratus, aimsíodh thart ar 30 géinte IL-17 [9]. Mar an gcéanna, fuarthas 31 ochtapas IL-17-géinte cosúil le i ceifileapóid Coleoid, ina bhfuil 27 géinte léiriú cumhachtach sna suckers agus craiceann [10]. Saco, et al. [11] aisghabháil 379 seicheamh uathúla IL-17 ó 15 ghéanóim diúilicíní athsheicheamhaithe agus an géanóm tagartha M. galloprovincialis [12] agus roinneadh iad i 23 isoform trí anailís fíolaigineach. Ina theannta sin, fuair siad amach go ndearnadh isfhoirmeacha IL-17 ó speicis Mytilidae a chaomhnú i measc daoine aonair agus a roinnt idir speicis a bhfuil dlúthbhaint acu leo. Chomh maith le speicis Mytilidae, fuarthas na teaghlaigh mhóra IL-17 i speicis moileasc eile freisin, lena n-áirítear Crassostrea gigas, Mizuhopecten yessoensis, agus Pinctada fucata martensii [13]. Tá uisce na farraige ag plódú le pataiginí, agus bíonn moileasc mara i dteagmháil leo go seasta, agus mar sin tá gá le Arsenal cumhachtach de mhóilíní imdhíonachta, agus mar sin de bharr leathnú an teaghlaigh IL-17 tugtar freagraí imdhíonachta níos éifeachtaí do na hainmhithe seo.

Tá go leor staidéar déanta a thaispeánann an ról suntasach atá ag IL-17i dhíolúine dúchasach ainmhithe moileascacha. Mar shampla, fuarthas amach ó thaighde go ndearnadh an leibhéal mRNA de IL-17D a mhéadú go mór ar ionfhabhtú Vibrio harveyi i Tegillarca granulosa [14], agus i C. gigas, léirigh CgIL17-5 a imoibriú ar leith ar Vibrio splendidus [15]. Ina theannta sin, tá sé léirithe go bhfreagraíonn IL-17s moileascach do go leor patrúin móilíneacha a bhaineann le pataiginí (PAMPanna), mar lipopolysaccharide (LPS), polyinosinic: aigéad polaicítíleach (polyI: C), agus peptoglycan (PGN). Is comhpháirt mhór é LPS de bhalla seachtrach ballaí cealla baictéaracha Gram-diúltacha agus is ionann é agus ceann de na spreagthaigh imdhíonachta is coitianta a úsáidtear. Ar an láimh eile, is analóg RNA dhá shnáithe é polyI:C a úsáidtear go minic mar insamhlóir víreas i dtaighde eolaíoch. Tar éis an spreagadh ag LPS, spreag an léiriú trascríobhach de ghéinte teaghlaigh IL-17 go tapa in oisrí an Aigéin Chiúin C. gigas agus oisrí péarla P. fucata [16,17]. In oisrí péarla freisin, fuarthas go raibh baint ag PfIL-17 leis an bhfreagra imdhíonachta ar spreagadh polyI: C [17].

cistanche tubulosa-feabhas a chur ar chóras imdhíonachta

Ina theannta sin, léirigh measúnacht dé-luciferase go raibh PfIL-17 in ann géinte sprice veirteabracha a ghníomhachtú ina raibh suíomhanna ceangailteach NF-kB agus páirt a ghlacadh i gcosán comharthaíochta NF-kB i gcealla HEK293 [17]. Tá PGN i láthair sa bhalla cille de bhaictéir Gram-dearfach agus is minic a úsáidtear é mar aithris do bhaictéir Gram-dearfach. Cruthaíodh go raibh cleamhnas láidir ag an athchuingreach C. gigas IL17-5 le PGN, nár tuairiscíodh riamh in interleukins veirteabracha [18]. Thug na staidéir seo réamhrá chun an fheidhm imdhíonmhodúil IL-17 i moileasc a nochtadh. Mar aicme cítocíní pro-athlastacha, féadann léiriú iomarcach IL-17 damáiste tromchúiseach a chothú do chealla. Tá meicníochtaí éagsúla forbartha ag na horgánaigh chun ró-imoibriú IL-17 a rialú, agus is ionann microRNAs (miRNAs) díobh agus an aicme RNA neamhchódaithe is cumhachtaí agus is cumhachtaí a ndéantar staidéar uirthi. Is teaghlach de RNAanna gearra iad MiRNAs thart ar 22 nt ar fad ar féidir leo léiriú na ngéinte sprice a rialáil trí chois aistritheach nó díghrádú mRNA [19]. Díríonn an taighde reatha ar rialáil IL-17s ag miRNAs go príomha ar a n-éifeachtaí sineirgeacha i galair uath-imdhíonachta daonna mar scléaróis iolrach, airtríteas réamatóideach, psoriasis, agus eile [20]. Mar gheall ar fhorbairt teicníochta seicheamhaithe ard-tréchuir agus ríomh bhitheolaíoch is féidir miRNAs moileascacha a scanadh ag an leibhéal géanómach, agus tá líon mór miRNAs caomhnaithe agus núíosacha aitheanta ó speicis mhoilisc amhail oisrí comhréidh Ostrea edulis, oisrí an Aigéin Chiúin C. gigas , Lymnaea stagnalis, diúilicíní M. galloprovincialis, etc. [21–29]. Soláthraíonn na staidéir seo sonraí bunúsacha agus tacaíocht iontach do léirmhíniú feidhmiúil miRNAs i moileasc. Maidir le ról imdhíonrialaithe miRNAs áirithe i mollusks, Tian, ​​et al. Fuair ​​[30] amach go bhféadfadh Pm-miR-29a IL-17 a rialáil go dearfach in Pinctada martensii; tar éis ró-abairt Pm-miR-29a, rinneadh an slonn IL{-17 i maintlín agus geolbhaigh an speicis a uasrialáil. I C. gigas, mhéadaigh cgi-miR-2d phagocytosis hemocyte oisrí trí CgIκB2 [31] a rialáil go diúltach agus rialáil dhiúltach ar léiriú géine cosúil le hiompróir choilín i gcéim luath an ionfhabhtaithe, a raibh baint aige le himdhíon-mhodúchán sofaisticiúla. [32].

cistanche córas imdhíonachta a mhéadú plandaí

Cliceáil anseo chun táirgí Cistanche Feabhsú Díolúine a fheiceáil

【Iarr tuilleadh】 Ríomhphost:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Le linn díothaithe, fuarthas amach go raibh cgi-miR-365 ionduchtaithe ag norepinephrine agus go raibh slonn CgHSP90AA1 á chur chun cinn go díreach [33]. Léirigh staidéir le déanaí go díríonn scafall miRNA659_26519 ar calmodulin chun léiriú IL-17 a rialáil sa chéim luath d'fhreagairt imdhíonachta C. gigas [34]. Ina theannta sin, tá cur síos déanta ar fheidhmeanna sonracha miRNAs áirithe in inveirteabraigh eile, mar chúcamar farraige Apostichopus japonicus [35–39] agus cloicheán Litopenaeus vannamei [40]. D'oscail na staidéir seo an scáthlán do na meicníochtaí bunúsacha de miRNAs in inveirteabraigh agus chuir siad tagairtí teicniúla agus modheolaíochta ar fáil dár dtaighde reatha. Inár staidéar roimhe seo, rinneadh 26 miRNAs agus 667 géin M. coruscus a ríomh go bitheolaíoch le haghaidh slonn difreálach tar éis dúshlán Vibrio alginolyticus, agus is féidir le Mcnovel_miR_145 díriú ar homalóg IL{-17 agus a bheith páirteach sa fhreagra imdhíonachta ar ionfhabhtú baictéarach [41]. Is é cuspóir an staidéir seo ná an ghéin IL-17 a aithint agus imscrúdú a dhéanamh ar an ról a d’fhéadfadh a bheith aici maidir le himdhíonacht dhúchasach agus a rialáil ag miRNA Mcnovel_miR_145 in M. coruscus. Tríd an staidéar seo, tá sé mar aidhm againn tuiscint níos fearr a fháil ar mheicníochtaí imdhíonachta na mollusks agus solas a chaitheamh ar bhonn móilíneach a gcosaint imdhíonachta i gcoinne pataiginí. Is féidir leis an taighde seo léargais a sholáthar freisin ar rialáil RNA neamhchódaithe i samhlacha inveirteabracha.

2. Torthaí

2.1. Tréithriú McIL-17-3

Clónáladh an seicheamh McIL-17-3 cDNA ina raibh an ORF iomlán, 30 -UTR, agus páirteach 50 - UTR i silico ón tras-scríbhinn fad iomlán M. coruscus (uimhir aontachais: PRJNA798880, F{ {5}}tras-scríbhinn_12404). Tá réigiún ORF 585 bp ag McIL-17-3 a ionchódaíonn 194 aimínaigéid. Is é 21.77 kDa an meáchan móilíneach tuartha, agus is é 5.21 an pointe isoelectric. Nocht anailís SMART fearann ​​tipiciúil IL-17 sa phróitéin seo (Fíor 1A). Tógadh crann fíolaigineach trí bhaill IL{-17 de speicis veirteabracha agus Mytilidae a earcú, agus úsáideadh IL2anna mar an grúpa forais. Mar a léirítear i bhFíor 1B, bailítear na IL-17sí seo i mbrainse ar leith chun iad a idirdhealú ó IL{-2s. Laistigh den bhraisle IL-17, taispeánadh dhá chlúd dealraitheach, ceann amháin comhdhéanta d’IL{{{50 -}s veirteabrach agus an ceann eile comhdhéanta d’IL{{50 -}s diúilicíní). Sa ghrúpa diúilicíní IL-17, rinne McIL-17-3 cnuasach den chéad uair leis an móilín comhfhreagrach ó speiceas eile Mytilus, M. galloprovincialis (Fíor 1B).

2.2. Ailíniú Iolrach agus Struchtúr Treasach a Thuar

Tá croí an McIL-17-3 comhdhéanta de dhá phéire de shnáithe frith-chomhthreomhara; folaíonn péire amháin snáitheanna 1 (iarmhar 52–58) agus 2 (iarmhair 66–72 agus 77–79), agus folaíonn an péire eile snáitheanna 3 (iarmhair 89–103) agus 4 (iarmhair 110–125) (Fíor 2B, C) . Nascann dhá dhroichead déshulfíde (Cys97/Cys134 agus Cys125/Cys169) snáitheanna 1 agus 3, 2 agus 4, faoi seach (Fíor 2A, C). Go comhsheasmhach, tá an dá dhroichead déshhuilfíde seo idir snáitheanna 1 agus 3, 2 agus 4 (Fíor 2A, C). Go háirithe, cé go bhfuil dhá dhroichead déshulfíde ag ILanna veirteabracha freisin, tá siad ann idir 2 agus 4 (Fíor 2A, C).

2.3. Slonn Trascríobh McIL-17-3

Rinne qPCR measúnú ar phróifíl dáileacháin fíocháin na n-athscríbhinní McIL{{{{{{-17-3}}. Léiríodh tras-scríbhinní McIL-17-3 i ngach fíochán a tástáladh, agus bhí leibhéil slonn i haemaicítí agus gills i bhfad níos airde ná iad siúd i matán adductor (Fíor 3A). Rinneadh measúnú freisin ar léiriú sealadach ar thras-scríbhinní hemocyte McIL-17-3 mar fhreagra ar dhúshlán V. alginolyticus. Rinneadh an leibhéal mRNA de McIL-17-3 a uasghrádú go suntasach ag 3 agus 12 HPC (3.{9}} nó 4.{-17-3méadú huaire i gcomparáid le 0 HPC, faoi seach), ach ní raibh aon rialtacht shoiléir ama i gcoitinne (Fíor 3B).

Fíor 1. Tréithriú móilíneach McIL-17-3. (A) Anailís ailtireachta ar fhearann ​​caomhnaithe in McIL-17-3 ag baint úsáide as SMART. Taispeánadh fearann ​​IL-17 caomhnaithe. (B) Anailís phylogenetic ar McIL-17-3. Tógadh an crann fíogéiniteach trí úsáid a bhaint as bogearraí MEGAX le 2000 macasamhlú de bhróg-strapáil ag baint úsáide as an modh ceangal comharsan. Lipéadaíodh McIL-17-3 le triantán glas. Aisghabhadh na speicis a chuimsítear sa chrann fíogéiniteach ó bhunachar sonraí Genebank, agus liostaíodh na huimhreacha aontachais sa chrann freisin. Triantán glas ar son McIL-17-3. (Chun léiriú a dhéanamh ar na tagairtí do dhath san fhíorscéal seo, tagraítear don léitheoir don leagan Gréasáin den alt seo.)

2.4. Gníomhachtú Iartheachtach ag McIL-17-3

Mar a léirítear i bhFíor 4, mhéadaigh athchuingreach McIL-17-3 gníomhaíocht luciferase pGLNF-κB-luc ar bhealach dáileog-spleách. Ag 0.5 agus 1.0 µg/well, mhéadaigh gníomhaíocht luciferase de pGLNF-κB-luc 2.07- agus 11.07-huaire, faoi seach.

2.5. Deimhniú McIL-17-3 mar Spriocghin den úrscéal Mc_miR{5}}

Tríd an mbithfhaisnéisíocht a thuar, tá seicheamh sprice caighdeánach do Mc-úrscéal_miR_145 sa ghéin McIL{{{0}} ag a 30 UTR (Fíor 5A). Comh-aistríodh mac-úrscéal_miR_145 miR agus coscaire leis an tuairisceoir de chineál fiáin McIL-17-3-30 UTR i gcealla HEK293 chun a gcomhghaol a dhearbhú. Mar a léirítear i bhFíor 5B, is féidir le aithris Mc-novel_miR_145 bac a chur ar ghníomhaíocht luciferase de McIL-17-3-30 UTR-WT (0.{{2{{58}) }}}laghdú huaire i gcomparáid leis an rialú), agus maolaíonn an t-inhibitor Mc-novel_145miR{_145 éifeachtaí go mór (1.64-méadú huaire i gcomparáid le Mc-novel_ miR_145 mar ghrúpa nach bhfuil ach cur leis). Chun measúnú a dhéanamh ar cibé an ndíríonn Mc-novel{{3{0}miR_145 go díreach ar ghéin McIL-17-3 tríd an spriocshuíomh sa 30 UTR, thógamar an leagan mutant de luciferase tuairisceoir plasmids a chuir sóchán ar an Mc-úrscéal_miR_145 seichimh spriocdhírithe san UTR McIL-17-3 30. Mar a léirítear i bhFíor 5C, laghdaigh aithris Mc-úrscéal go suntasach gníomhaíocht luciferase na gceall a aistríodh leis an McIL-17-3-30 UTR-WT (0.{{{{{{{{{{{{{{{{{{{4)}}huaire) laghdú), cé nár breathnaíodh aon athrú ar ghníomhaíocht luciferase i gcealla a aistríodh leis an McIL-17-3-30 UTR-MUT. Ina theannta sin, d'fhéadfadh éifeachtaí dáileog-spleách an Mc-úrscéal_145 aithris a dhéanamh ar chosc ar ghníomhaíocht luciferase McIL-17-3-30 UTR-WT luciferase ag 24 h tar éis an aistrithe (0 .71-, 0.43-, agus 0.20-laghdú huaire i gcomparáid le rialú, faoi seach, Fíor 5D).

Fíor 2. Ailínithe iolracha de McIL-17-3 le baill teaghlaigh IL-17 eile. (A) Rinneadh seicheamh aimínaigéad McIL-17-3 a ailíniú leis an seicheamh aimínaigéad de IL{-17 eile a fuarthas ó dhiúilicíní agus veirteabraigh, lena n-áirítear lucha agus séabra. Marcáladh na cistéiní seo, atá ina snaidhm chanónach, le glas, agus marcáilte le dearg iarmhair aimínaigéad athsholáthair. Léirítear an snaidhm cistéin le línte datha, gorm a chiallaíonn a láithreacht i moileasc agus dearg a chiallaíonn a láithreacht i veirteabraigh. Nóta: Ní choinnítear ach an dara leath den ailíniú seicheamh le haghaidh léirshamhlú. (B) Rinneadh struchtúr treasach na próitéine McIL-17-3 a thuar trí úsáid a bhaint as samhail na hEilvéise agus bogearraí pyMol. Marcáladh na cistéiní seo, atá mar snaidhm chanónach. (C) Léiriú cartún den fhilleadh canónach cistéineach-snaidhm. Léiríodh iarmhair chistéin le ciorcail líonta; bhí buí orthu siúd a bhí i láthair i bpróitéiní IL-17, ach bhí an dá rud liath. (Chun léiriú a dhéanamh ar na tagairtí do dhath san fhíorscéal seo, tagraítear don léitheoir don leagan Gréasáin den alt seo.)

Fíor 3. Anailís phróifíl léirithe ar thrascríbhinní McIL-17-3. (A) Dáileadh tras-scríbhinní McIL-17-3 i bhfíocháin choitianta diúilicíní. (B) Athruithe ama cainte ar thrascríbhinní McIL-17-3 mar fhreagra ar dhúshlán V. alginolyticus. Cuireadh na torthaí in iúl mar mheán ± SD (n=3, * p < 0.05, ** p < 0.01). (Chun léiriú a dhéanamh ar na tagairtí do dhath san fhíorscéal seo, tagraítear don léitheoir don leagan Gréasáin den alt seo.)

Fíor 4. Gníomhachtú tuairisceora NF-κB ag McIL-17-3. Comh-thraschuireadh an veicteoir athchuingreach pEGFP-McIL- 17-3 i dtrí thiúchan (0.1, 0.5, agus 1.{{10}} µg/well) isteach i gcealla HEK293 ag baint úsáide as Lipo6000TM ar feadh 24 h. Ríomhadh na gníomhaíochtaí luciferase coibhneasta trí normalú go luach pRLTK. Cuireadh na torthaí turgnamhacha in iúl mar athruithe fillte trí ghníomhaíochtaí luciferase na gceall athchuingreach veicteoir-spreagtha a chur i gcomparáid leo siúd de chealla folamh veicteoir-spreagtha ag an tiúchan céanna. Taispeánadh gach luach mar mheán ± SD (n=3), agus bhí difríocht shuntasach idir barraí le siombail réiltín (* p < 0.05, ** p < 0.01).

Fíor 5. Mc-úrscéal_miR_145 dírithe ar McIL-17-3. (A) Cuireadh seicheamh UTR McIL-17-3 30 isteach sa veicteoir pmiR-RB-Report™, plasmid fhiáine agus tsóiteáin a tógadh faoi seach. Lipéadaíodh seicheamh Mcnovel{{1{0}} seicheamh sprice UTR agus McIL-17-3-30 UTR agus seicheamh suímh mutant le marcóirí dearga. (B) Comh-aistrigh McIL-17-3-30 UTR-WT plasmid le Mc-novel_miR_145 mimic nó Mc-novel_miR{{2{{37} }}} coscaire isteach i gcealla HEK293. (C) Aistríodh cealla HEK293 le McIL-17-3-30 UTR-WT nó an cineál mutant McIL-17-3-30 UTR-MUT, mar aon le Mc-novel_miR_145 nó NC , ar feadh 24 h. Rinneadh an ghníomhaíocht luciferase a thomhas ag baint úsáide as an gcóras measúnaithe tuairisceora dé-luciferase. (D) Rinneadh na turgnaimh grádán tiúchana le haghaidh aistriú Mc-úrscéal{_miR_145. Cuirtear na sonraí go léir i láthair mar mhodh ± SD ó thrí thurgnaimh neamhspleácha faoi thrí ar a laghad. **, p < 0.01, *, p < 0.05 i gcoinne na rialuithe. (Chun léiriú a dhéanamh ar na tagairtí do dhath san fhíorscéal seo, tagraítear don léitheoir don leagan Gréasáin den alt seo.)

2.6. Rialaíonn Mc-úrscéal_miR_145 Slonn McIL-17-3 go diúltach

Aistríodh na haemocytes M. coruscus le Mc-novel_miR_145 mimic, Mcnovel_miR_145 coscaire, agus a rialuithe faoi seach, agus na hathruithe i McIL{{ Rinneadh measúnú ar 5}} slonn ar na leibhéil trascríobh agus próitéin. Mar a léirítear i bhFíor 6A, rinneadh slonn Mc-úrscéal_miR_145 a uasrialáil go suntasach (8.83-méadú huaire) ag a mhacasamhail agus a íosrialú (0 }}.41-laghdú huaire) ag a athbhrúiteoir i haemocytes, rud a thugann le tuiscint go bhfuil éifeachtaí éifeachtacha ag na substaintí cumaisc shintéiseacha seo. I bhFíor 6B, cuireadh bac suntasach ar shloinneadh McIL inghin-17-3 (0.51-laghdú huaire) ag Mc-novel_miR_145 aithrise ag an leibhéal tras-scríofa agus spreagtha go suntasach (2.42-méadú faoi fhilleadh) ag coscaire Mcnovel. Chun imscrúdú a dhéanamh ar éifeachtaí Mc-novel_miR_145 ar shloinneadh McIL{-17-3 ag leibhéal na próitéine, táirgeadh antashubstaint polachlónúil i gcoinne McIL-17-3. Mar a léirítear i lánaí 2 agus 3 i bhFíor 6C, cuireadh an próitéin athchuingreach McIL-17-3 in iúl go rathúil in E. coli. Scrúdaíodh sainiúlacht antashubstainte leis an bpróitéin diúilicíní ó haeicítí le blot an Iarthair. Breathnaíodh banda singil timpeall 22 kDa, a fhreagraíonn do mhais mhóilíneach McIL-17-3 (lána 4 i bhFíor 6C). Léirigh torthaí blot an Iarthair i bhFíor 6D rialáil dhiúltach McIL-17-3 ag an leibhéal próitéine ag Mc-novel{{_miR_145).

Figiúir 6. Chuir Mc-úrscéal_miR_145 bac ar shloinneadh McIL-17-3 i haemicítí M. coruscus. (A) Rinne qPCR measúnú ar shloinneadh Mc-úrscéal_miR_145 i haemaicítí a aistríodh le 145 mimic, 145 cosc, agus a rialú faoi seach. (B) Tar éis aistrithe ar feadh 24 h, shocraigh qPCR na leibhéil trascríobh McIL-17-3. (C) Slonn athchuingreach, íonú, agus an t-ullmhúchán antiserum do McIL-17-3. Lána M, marcóir meáchan móilíneach caighdeánach próitéin. Lána 1, rialú diúltach (gan ionduchtú). Lána 2, próitéin athchuingreach spreagtha McIL-17-3. Lána 3, McIL íonaithe- 17-3. Lána 4, blot an Iarthair le antasubstaint frith-McIL{{2{{{{{0}}} i haeicítí M. coruscus. (D) Tar éis aistrithe ar feadh 24 h, shocraigh blot an Iarthair leibhéil phróitéin McIL-17-3. ** p < 0.01 i gcoinne na rialuithe

2.7. Apoptosis Hemocytes

An ráta haemaicíte apoptotic de cheithre ghrúpa, .i., NC+LPS, McIL-17-3+LPS, Mcnovel_miR_145+McIL-17-3+LPS, agus Mc-novel{{6} }miR{7}}i+McIL-17-3+Déanadh anailís ar LPS de réir cítoiméadracht sreafa agus úsáid á baint as smálú dúbailte. Tar éis McIL-17-3 a bheith ró-léirithe, rinneadh an ráta apoptosis de haemaicítí a ndearnadh dúshlán LPS a mhéadú go suntasach i gcomparáid leis an ngrúpa rialaithe (Fíor 7A(a,b), B). Nuair a comhthraschuir McIL-17-3 le Mc-novel_miR_145, tháinig laghdú suntasach ar an ráta apoptosis haemicíte arna spreagadh ag LPS i gcomparáid le ráta McIL a aistríodh leis féin (Fíor 7A( b,c), B). I gcodarsnacht leis sin, léirigh an ráta hemocyte apoptotic méadú suntasach ar an ngrúpa Mc-novel_miR_145-i+ McIL-17-3+Grúpa LPS i gcomparáid leis an ngrúpa McIL-17-3+LPS (Fíor 7A). (b, d), B).

Fíor 7. Rinneadh measúnú ar an ráta apoptotic hemocyte ag cítoiméadracht sreafa ag baint úsáide as iaidíd propidium (PI) agus stain FITC-Iarscríbhinnin-V

3. Plé

Aithnítear IL-17 mar cheann de na teaghlaigh cítocín pro-athlastach tábhachtacha, ar féidir leo páirt a ghlacadh go héifeachtach i bpataigineas galair éagsúla [42]. In ár staidéar roimhe seo, léirigh homolog M. coruscus IL-17 léiriú difreálach roimh agus tar éis ionfhabhtú V. alginolyticus trí seicheamhú transcriptome [41], ag moladh a ról féideartha sa fhreagra imdhíonachta dúchasach ar dhúshlán baictéarach. Anseo, rinneamar an homalóg IL-17 seo agus thugamar McIL-17-3 air. Nocht an réamh-mheastachán ar an bhfearann ​​​​feidhmeach gnáthfhearann ​​IL-17, rud a thug an cleamhnas géine atá aitheanta faoi láthair don teaghlach cítocín IL-17. Sa chrann fíolaigineach, léirigh an ghéin úr IL-17 seo gaol an-dlúth le IL-17- 3 ó speiceas Mytilus eile, M. galloprovincialis. Ina theannta sin, bhí féiniúlacht aimínaigéad an-ard 95% acu, agus dá bhrí sin d'ainmnigh muid an ghéin úr IL{- reatha mar McIL-17-3 chun an coinbhinsiún ainmniúcháin a úsáidtear i speicis Mytilus a leanúint. Tá an teaghlach IL-17 comhdhéanta de sheisear ball agus cúig ghabhdóir i ndaoine [43], ach tá méadú géiniteach ollmhór tagtha air in inveirteabraigh mhara, go háirithe i ndiúilicíní [11]. Bunaithe air seo, thug ár sonraí le fios nach raibh baint dhíreach ag McIL{-17-3 le géinte áirithe sa teaghlach IL{-17 daonna. Is í an fhilleadh snaidhm cistéin atá suite ag -sheets an tréith tipiciúil den teaghlach IL-17 [5]. Bhíothas ag súil leis, léirigh réamh-mheastachán an struchtúir threasaigh fillte snaidhm cistéin i bpróitéin McIL, rud a mhéadaigh sannadh McIL don teaghlach cítocín IL. Chun idirdhealú a dhéanamh ar sheichimh aimínaigéad IL{-17 i measc speicis éagsúla, tá roinnt tipiciúil diúilicíní IL{-17s agus Musculus IL-17-A go IL-17-F agus Danio rerio Roghnaíodh IL-17-1 go IL-17-3 chun an anailís iolraithe ailínithe a dhéanamh. Léirigh na torthaí toradh suimiúil go raibh suíomh nascála déshuilfíde IL{-17s i ndiúilicíní agus veirteabraigh neamh-chomhsheasmhach: bhí an dá nasc déshilfíde seo idir snáitheanna 1 agus 3, 2 agus 4, faoi seach, i ndiúilicíní, ach amháin idir snáitheanna 1 agus 3, 2 agus 4. - snáitheanna 2 agus 4 i veirteabraigh. Ag an gcéad agus ag an gceathrú suíomh cistéin, cuirtear serine in ionad IL na veirteabraigh le cistéin; i gcodarsnacht leis sin, ag an dara suíomh cistéin, cuireann diúilicíní IL{{{{{{{{{{{}}}}}sí{{{{{{{{{{{{}}}}}}sí{{{{{{{{{{{{{}}}}}}sí{{{{{{{{{{{{{{})}}}}sí{{{{{{{{{{{{{{{{{})}}}}sí{{{{{{{{{{{{{{{{})}}}}s}anna{{{{{{{{{{{{-17}}}}s{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{))}}}}}s}sí}}sí air) trí threoininnint ag nasc déshuilfíde i ndiúilicíní agus veirteabraigh, agus níl a mheicníocht bhunúsach soiléir agus ní mór tuilleadh staidéir a dhéanamh air. Ag cur san áireamh ilmorphism IL{{{-17ss) i ndiúilicíní, d’fhéadfadh nach mbeadh an nasc déshuilfíde idir snáitheanna 1 agus 3 chomh láidir leis an nasc idir 2 agus 4, rud a thugann plaistigh níos mó dóibh i ndiúilicíní. Ar aon nós, tugann anailís ar fhearainn feidhmiúla agus ar struchtúr treasach le tuiscint go bhfuil an McIL-17-3 atá aitheanta faoi láthair tipiciúil den chitocín diúilicíní IL{-17 agus go bhféadfadh ról feidhmiúil cosúil leis a bheith aige lena mhacasamhail i moileasc. Tá éagsúlacht mhór ag baint le léiriú géinte IL-17 i bhfíocháin dhaonna, le cuid acu á gcur in iúl i gcúpla ceall agus cinn eile i líon mór fíocháin [44,45]. Thaispeáin formhór na staidéar ar mhoilisc go raibh próifíl shloinne chomhdhéanaimh ag IL{-17anna [13,15,17,46,47]. Mar sin féin, léirigh Li, Zhang, Zhang, Xiang, Tong, Qu, agus Yu [47] toradh neamh-chomhsheasmhach in C. gigas IL-17s: CgIL-17-2, -3, {{{{}). 65}}, agus -6 curtha in iúl go mór i gills C. gigas, faireoga díleácha, agus maintlín, ach is ar éigean a chuirtear in iúl iad i bhfíocháin eile. Anseo, fuarthas tras-scríbhinní McIL sna fíocháin go léir a scrúdaíodh, rud a thugann le tuiscint go raibh a róil ilfheidhmeacha aige i ngníomhaíochtaí fiseolaíocha éagsúla. Mar sin féin, tugann na leibhéil arda slonn McIL-17-3 i roinnt fíocháin moileascacha a bhaineann le himdhíonacht, ar nós haicéití, geolbhaigh, agus faireoga díleácha, le tuiscint go bhfuil baint níos dlúithe aige le freagairt imdhíonachta. Ina dhiaidh sin, déantar an pointe seo a dhoimhniú mar gheall ar a fhreagrúlacht thapa ar ionsaí V. alginolyticus. Chuir instealladh V. alginolyticus go mór le rialáil slonn McIL{{-17-3}, agus tá torthaí comhchosúla tugtha faoi deara freisin i IL-17sanna moileascacha eile. Mar gheall ar instealladh V. anguillarum isteach i C. gigas tháinig méadú gasta ar raidhse tras-scríbhinní CgIL i hemocytes, rud a thugann le tuiscint gur ghéin imdhíonachta luath-chéime a bhí ann [46]. Nuair a d'fhulaing C. gigas ionsaí ag pataigin eile, V. splendidus, bhí leibhéal mRNA CgIL-17-5 i hemocytes ardaithe go suntasach freisin [15]. Mhéadaigh spreagadh LPS, príomh-chomhpháirt pataigineach na baictéir, go mór léiriú PfIL-17 i faireoga díleácha an oisrí péarla P. fucata [17]. Ina theannta sin, d'fhéadfadh LPS slonn CgIL-17-3 a aslú i C. gigas [47] agus PmIL-17-2 in P. fucata martensii [13]. Léirigh na torthaí seo le chéile go raibh ról tábhachtach ag IL-17 i gcosaint imdhíonachta moilisc in aghaidh ionsaí baictéarach. Sa staidéar seo, léirigh McIL-17-3 cumas gníomhachtaithe an chosáin NF-κB iartheachtacha. Chonacthas torthaí cosúla freisin i roinnt speiceas moileasc. Sa phéarla oisrí P. fucata, léirigh PfIL-17 gníomhachtú an chosáin NF-κB i gcealla HEK293 ag measúnachtaí tuairisceora luciferase [17]. I C. gigas, chuir CgIL-17-5 chun cinn gníomhachtú CgMAPKs agus traslonnú núicléach CgRel agus CgAP-1 chun léiriú mRNA de chitocíní agus peiptídí antibacterial a chur chun cinn [15]. Tá sé léirithe go bhfuil modh gníomhaíochta IL-17 bunaithe ar a aontas isteach i dimers (homodimers nó heitreaiméirí), a bhfuil a ghníomhaíocht ag brath go mór ar a gceangal leis na gabhdóirí (IL{{-17Rs) siad). sprioc. Tá fearann ​​cíteaplasma caomhnaithe (SEFIR) ag na gabhdóirí seo a idirghníomhaíonn le próitéiní oiriúnaitheacha chun cosáin aistrithe comhartha iartheachtacha a thionscnamh chun fachtóirí trascríobh a ghníomhachtú mar NF-κB agus léiriú spriocghéinte imdhíonachta agus pro-athlastacha a chur chun cinn, mar shampla cytokines agus peptídí frithmhiocróbacha [ 11,48,49].

cistanche tubulosa-feabhas a chur ar chóras imdhíonachta

Tugann na torthaí seo le fios go bhféadfadh an modh gníomhaíochta céanna a bheith ag IL{0}}s moileascáin agus a bhíonn ag a gcomhghleacaithe i veirteabraigh. Ní mór é seo a dhearbhú i staidéir amach anseo. Fuarthas na comhghaolta idir miRNAs agus IL-17s i roinnt samhlacha galair daonna. Niimoto, et al. [50] dheimhnigh [50] an comhghaol dearfach idir miR-146a agus IL{-17sloinneadh i gcealla mononuclearacha fola imeallacha agus synovium ó othair airtríteas réamatóideach agus rinne sé achoimre ar fheidhm ríthábhachtach miR-146a sa difreáil IL{-17-chealla táirgthe. In othair psoriasis, feidhmíonn miR-146a mar choscóir láidir ar athlasadh craiceann faoi thiomáint IL, agus d’fhéadfadh a leibhéil ísle cur le tosú an ghalair i ndaoine aonair atá so-ghabhálach go géiniteach [51]. D’fhéadfadh MiR-146a periodontitis a fheabhsú trí shloinneadh IL-17 a íosrialáil agus cosc ​​a chur ar iomadú gascheall ligament peiridhéadach daonna [52]. Rialaíonn MiR-155 slonn IL-17 go diúltach chun páirt a ghlacadh i bhfreagairt imdhíonachta an óstaigh ar niúmóine baictéarach iar-víreasach i lucha scamhóg; miR-155 léiríonn lucha coiscthe léiriú níos láidre ar IL{-17 sa scamhóg, agus imréiteach baictéarach feabhsaithe ag gabháil leo [53]. Tugann na staidéir seo le fios go bhfuil IL-17 á rialú ag miRNAanna iolracha agus athraíonn sé de réir galair agus cineál cille [20]. I staidéar roimhe seo, rinneamar anailís chomhtháite ar an miRNAome agus transcriptome chun iniúchadh a dhéanamh ar rialáil idirghníomhach miRNA-mRNA ag M. coruscus mar fhreagra ar ionfhabhtú V. alginolyticus. Thuar na torthaí go bhféadfadh Mc-novel_miR_145 díriú ar McIL-17-3 chun páirt a ghlacadh sa fhreagra imdhíonachta dúchasach ar ionfhabhtú baictéarach [41]. Ar mhaithe le hiniúchadh a dhéanamh ar mheicníocht bhunúsach rialáil McIL-17-3 miR-17-3, rinneadh sraith turgnamh saotharlainne sna staidéir reatha. Thuar an ríomh go bhféadfadh Mc-novel_miR_145 díriú ar an 30 UTR de McIL-17-3. Na measúnachtaí tuairisceora luciferase seo a leanas a rinneadh i gcealla HEK293 arna gcomhaistriú ag Mc-novel_miR_145 mimic, mimic NC, inhibitor, inhibitor NC le McIL-17-3-30 UTR-WT, -MUT tuairisceoir dhearbhaigh plasmaidí an pointe seo a thuilleadh. Ina theannta sin, aistríodh Mc-novel_miR_145 mimic, mimic NC, inhibitor, agus inhibitor NC isteach i M. coruscus hemocytes chun a n-éifeachtaí ar slonn McIL a mheas ag leibhéil tras-scríbhinne agus próitéine. . Rinneadh laghdú suntasach ar shloinneadh McIL-17-3 sa ghrúpa aistrithe aithrise Mc-novel_miR{_145, agus uasrialaíodh go mór é sa Mc-novel_miR _145 grúpa aistrithe coscairí, ag moladh rialachán diúltach McIL-17-3 le Mc-novel_miR_145. Bhí na torthaí reatha contrártha le staidéar roimhe seo. I Pinctada martensii, fuair Tian, ​​Zheng, Huang, Jiao, agus Du [30], cé go bhféadfadh Pm-miR-29a díriú ar IL-17, go raibh an rialachán dearfach, mar léiriú ar IL{{ 65}} i maintlín agus geolbhaigh Pinctada martensii do uas-rialáil tar éis ró-abairt Pm-miR-29a. Ós rud é go mbaineann P. martensii agus M. coruscus araon le débhlaoscaigh agus go bhfuil gaol sách dlúth acu, tugann na torthaí neamh-chomhsheasmhacha seo le tuiscint go bhféadfadh rialúchán IL{{-17sí i moilisc a bheith éagsúil le miRNAs. Seachas sin, níor thuairiscigh litríocht ar bith an comhghaol idir miRNAs agus IL{-17s i moilisc, agus mar sin níl aon staidéir chomhthreomhara ann chun na torthaí reatha a chur i gcomparáid. Mar sin féin, thuairiscigh cúpla staidéar go ndírítear ar chaidrimh idir miRNAanna sonracha agus géinte sonracha a bhaineann le himdhíon i moilisc.

Mar shampla, cuireann cgi-miR-2d le fagaicíotóis hemocyte oisrí trí CgIκB2 a rialáil go diúltach i Crassostrea gigas [31]. Ina theannta sin, rialaíonn cgi-miR-2d freisin léiriú géine amháin atá cosúil le hiompróir coilín chun páirt a ghlacadh in inmunomodulation sofaisticiúla haeicítí oisrí le linn chéim luath an ionfhabhtaithe [32]. Tugann na staidéir seo le fios ar a laghad go bhfuil ról féideartha ag miRNAs i gcomharthú imdhíonachta dúchasach trí dhíriú ar ghéinte sonracha i moilisc, díreach mar a dhéanann siad i veirteabraigh. Ansin, rinneamar iarracht iniúchadh a dhéanamh ar fheidhm fhéideartha na hidirghníomhaíochta idir Mcnovel_miR_145 agus McIL{{1{0}} in imdhíonacht dhúchasach M. coruscus, agus a ról i Dírímid ár n-aird ar apoptosis de bharr LPS. Is móilín an-proinflammatory é LPS atá ina chomhpháirt de chlúdach seachtrach na baictéir Gram-diúltacha go léir. Tá sé léirithe go n-eascraíonn LPS apoptosis i gcealla agus fíocháin éagsúla, mar shampla macrophages [54], cealla endothelial [55], agus scamhóg luch [56]. Tá sé léirithe ag réamh-thurgnamh gur tharla nochtadh LPS ag tiúchan ainmniúil de 0.1 mg/mL le haghaidh 24 h apoptosis haemaicítí ó M. coruscus. Tar éis ró-abairt McIL-17-3, méadaíodh an leibhéal apoptosis de M. coruscus hemocytes go suntasach i gcomparáid leis an ngrúpa rialaithe, rud a thugann le tuiscint go bhféadfadh McIL-17-3 apoptosis hemocytes de bharr LPS i M. coruscus a neartú. Bhí na torthaí reatha comhsheasmhach le roinnt staidéar roimhe seo. I neodrófail dhaonna, d’fhéadfadh IL-17A na héifeachtaí frith-apoptotic arna n-idirghabháil ag fachtóir spreagtha macrophage-coilíneachta granulocyte [57] a laghdú. Spreagann IL-17 apoptosis de chealla endothelial soithíoch, atá ina mheicníocht fhéideartha de shiondróm corónach géarmhíochaine [58]. Laghdaíonn scriosadh géiniteach IL-17A apoptosis cille ailbheolach cineál II agus mar sin maolaíonn sé galar ainsealach bacúil scamhógach [59]. Mar sin féin, tá roinnt argóintí contrártha fós. Nuair a bhíonn víreas einceifilíteas murine Theiler ionfhabhtaithe ag lucha, cuireann IL-6 agus IL-17 marthanacht víreasach chun cinn go sineirgistíoch trí chosc a chur ar apoptosis ceallach [60]. Tugann na coinbhleachtaí seo le tuiscint go bhfuil bun-mheicníocht apoptosis IL{-17-idirghabhálaithe casta, agus d'fhéadfadh go mbeadh feidhmeanna contrártha ag IL{-17anna ag brath ar an gcineál ionfhabhtaithe.

Nuair a comh-aistríodh McIL-17-3 le Mc-novel_miR_145, rinneadh an leibhéal apoptosis a tharlódh de bharr LPS a ísliú go suntasach i gcomparáid leis an t-aon McIL-17-3 a aistríodh. grúpa, dá réir sin, rinneadh an leibhéal apoptosis a ardú go suntasach tar éis McIL-17-3 a chomhaistriú le coscaire Mc-novel_miR{_145. Tá sé léirithe go ndéanann Mc-úrscéal rialú diúltach ar McIL-17-3, agus mar sin tháinig muid ar an gconclúid gur ghéaraigh McIL-17-3 an apoptosis haemocyte a tharlódh ag LPS, agus Mc-úrscéal Mhaolaigh _miR_145 na héifeachtaí. Aithníodh roinnt miRNAs a léiríodh go raibh baint acu le apoptosis cille daonna agus lucha i moilisc le blianta beaga anuas. Mar shampla, fuarthas miR-125b agus miR- 335 in oisrí comhréidh Ostrea edulis [21], fuarthas miR-184 i haemicítí oisrí Crassostrea gigas [23], agus miR{{ Fuarthas 26}}, -29, -96, -182, agus -193 i lárchóras athbheochana néaróg an L. stagnalis [25]. Deimhníonn na miRNAs seo a bhaineann le apoptóis a aithníodh trí sheicheamhú ard-thréchuir agus ríomhanna bitheolaíochta go bhfuil apoptosis trí mheán miRNA ann i moilisc. Chen et al. thuairiscigh siad méadú ar miR-2d tar éis dúshlán Vibrio splendidus i hemocytes Crassostrea gigas. Rinneadh ró-fhuaimniú miR-2d a chomhghaolú le léiriú leagain de IκB2, agus méadú suntasach ar ráta fagaicíotóis hemocyte, nasctha le cosc ​​​​apoptosis [31]. Bhí na torthaí comhsheasmhach lenár staidéar reatha, i dteannta a chéile, le tuiscint go dtugann miRNAs feidhm choisctheach ar apoptosis cille i moilisc. Go deimhin, léirigh an chuid is mó de na miRNAs a bhaineann le apoptosis i ndaoine éifeachtaí coisctheacha ar apoptosis. Cosnaíonn MiR-146 cealla A549 agus H1975 ó apoptosis arna spreagadh ag LPS agus ó ghortú athlasadh trí Sirt1 a rialáil agus mar sin bac a chur ar bhealaí NF-κB agus Notch [61]. Ina theannta sin, maolaíonn miR{50}} apoptóis heipitocyte ionradaíochta agus LPS-spreagtha trí chosc ar chonair TLR4 [62]. Cuireann MiR-93 bac ar apoptosis chondrocíte in osteoarthritis trí dhíriú ar chonair chomharthaíochta TLR4/NF-κB [63]. Maolaíonn MiR-129-5p gortú chorda an dromlaigh i lucha trí apoptosis a shochtadh tríd an gcosán HMGB1/TLR4/NF-κB [64]. Mar sin féin, tá roinnt miRNAs sonracha ann fós a léiríonn gníomhartha athneartaithe ar apoptosis. Mar shampla, fuarthas amach go luathaigh miR-203 apoptosis spreagtha ag LPS trí dhíriú ar PIK3CA i gcealla epithelial alveolar [65]. Tugann na torthaí seo le fios castacht an mheicníocht bhunúsach d'apoptosis trí mheán miRNA.

4. Ábhair agus Modhanna

4.1. Dearadh Turgnamhach

Ar an gcéad dul síos, sainaithníodh McIL-17-3 ó M. coruscus trí anailís bhithfhaisnéiseach. Ina dhiaidh sin, rinneadh measúnú ar dháileadh fíocháin tras-scríbhinní McIL-17-3 chomh maith lena fhreagairt ar dhúshlán baictéarach trí thástálacha cainníochtúla fíor-ama PCR (qPCR). Ina dhiaidh sin, rinneadh an nasc idir McIL-17-3 agus Mc-novel_miR_145 a chinneadh trí anailís tuairisceora luciferase a rinneadh i gcealla HEK293 agus M. coruscus hemocytes. Ina theannta sin, rinneadh measúnú ar a ról feidhmiúil in apoptosis spreagtha ag LPS trí chitoiméadracht sreafa.

4.2. Uisce Mara Saorga

Tar éis trí lá d'aerú uisce sconna cathrach, cuireadh criostail farraige an toirt (Haiding LTD, Ji'an, an tSín) leis, corraigh go críochnúil, agus leáigh sé chun salannacht 30‰ a bhaint amach. Is gá an t-uisce farraige saorga cumraithe a aeráil ar feadh 2 h sula n-úsáidfear é.

4.3. Ainmhithe

Ceannaíodh an diúilicín tiubh-scileog M. coruscus (fad bhlaosc, 9.82 ± 0.53 cm; leithead bhlaosc, 4.68 ± 0.45 cm; meáchan fliuch, 71.2 ± 2.7 g) ó mhargadh Donghe i Zhoushan, Cúige Zhejiang, an tSín. Coinníodh na diúilicíní go léir in umair a líonadh le ASW de thart ar 25 ◦C agus salandacht 30 ‰ ar feadh níos mó ná seachtain roimh thurgnaimh ina dhiaidh sin.

4.4. Aitheantas cDNA McIL-17-3

Bhí homalóg IL-17 (McIL-17-3) i silico clónáilte ón tras-scríbhinn fad iomlán de M. coruscus (uimhir aontachais: PRJNA798880, F01_trasscríbhinn_12404). Rinneadh an nós imeachta Blast chun seicheamh aimínaigéad toimhdiúil McIL-17-3 a thuar, agus rinneadh anailís ar an bhfearann ​​​​feidhmiúil ina dhiaidh sin le SMART agus measúnú ar an ngaolmhaireacht phylogenetic le MEGA-X. Rinneadh an t-il-ailíniú trí úsáid a bhaint as nós imeachta ClustalW. Úsáideadh samhail agus linn na hEilvéise chun struchtúr treasach na próitéine McIL-17-3 a thuar. Bhí an nós imeachta mionsonraithe de réir ár staidéar roimhe seo [66].

4.5. Measúnachtaí PCR Cainníochtúla Fíor-Ama

Uirlis chumhachtach is ea measúnachtaí cainníochtúla fíor-ama PCR (qPCR) chun leibhéil slonn géine a bhrath agus a thomhas. Anseo, rinneadh measúnú ar dháileadh fíocháin McIL-17-3 ag baint úsáide as an modh qPCR. Ina theannta sin, bhraith qPCR athruithe ar shloinneadh McIL-17-3 mRNA mar fhreagra ar ionfhabhtú baictéarach. Cinneadh próifíl dáileacháin fíocháin McIL-17-3 i gills, maintlín, faireoga díleácha, gonad, matán adductor, agus haemocytes ag baint úsáide as qPCR ríomhchláraithe ag 95 ◦C ar feadh 1{-17-3 nóim, agus 40 timthriall ina dhiaidh sin de 95 ◦C ar feadh 10 s, 60 ◦C ar feadh 45 s. Scaradh na fíocháin seo ó naonúr diúilicíní aonair agus comhthiomsaíodh iad le chéile chun difreáil aonair a mhaolú. Sa turgnamh dúshlán baictéarach, baineadh úsáid as V. alginolyticus beo mar spreagthaigh imdhíonachta. Instealladh toirt 100 µL baictéir tuaslagtha in uisce farraige (1 × 108 CFU ml -1 ) isteach an adductor na diúilicíní. Níor úsáideadh aon diúilicíní insteallta mar rialú. Rinneadh sampláil randamach ar naoi ndiúilicíní ó gach grúpa ag 0, 3, 6, 12, 24, agus 36 h i ndiaidh an dúshláin (hpc). Comhthiomsaíodh na haemaicítí ó thrí dhiúilicíní le chéile chun iad a mheas mar shampla amháin, agus bhí trí shampla ann do gach pointe ama. Baineadh microRNAs ag baint úsáide as an MiRNA Extraction Kit (HaiGENE, Cat. Uimh.: B1802), agus rinneadh an cDNA a shintéisiú ag baint úsáide as an MiRcute Plus miRNA First-Strand cDNA Kit (Tiangen, Cat. Uimh.: 4992786) agus rinneadh qPCR ag baint úsáide as an miRcute Plus miRNA qPCR Kit (Tiangen, Cat. Uimh.: 4992887). Baineadh úsáid as géinte U6 agus -actin mar na tagairtí inmheánacha do qPCR agus miRNAs qPCR, faoi seach. Tá na péirí primer sonracha a úsáidtear sa turgnamh seo liostaithe i dTábla 1. Tomhaiseadh na leibhéil choibhneasta slonn ag baint úsáide as an modh 2−∆∆Ct [67].

Tábla 1. Baineadh úsáid as péirí primer PCR sa staidéar reatha.

4.6. Cultúr na Cille

Fostaíodh na cealla mamach HEK293 (RiboBio Ltd., Guangzhou, an tSín) chun na measúnachtaí tuairisceora luciferase a dhéanamh chun gníomhachtú iartheachtach McIL- 17-3 a chinneadh chomh maith leis an gcomhcheangal idir Mc-novel_miR{{{- 17-3). 4}} agus McIL-17-3. Saothraíodh cealla HEK293 i meán OPTI-MEM (GIBCO) ag 37 ◦C, 5% CO2. Chun iniúchadh breise a dhéanamh ar rialú McIL-17-3 le Mc-novel_miR_145 agus a ról feidhmiúil in apoptosis spreagtha ag LPS, fuarthas haemaicítí de M. coruscus ó mhatán adductor gach ceann díobh. diúilicíní le snáthaid indiúscartha 0.5 mm ar thrastomhas (25 G) ina bhfuil 0.5 mL den fhrith-théachtán. Bailíodh haemocytes trí lártheifneoiriú ar feadh 5 nóiméad ag 3{000 rpm, 4 ◦C, agus cuireadh 0.25% trypsin (Solarbio). Cuireadh haemaicítí ar fionraí i meán L{-15 ina raibh 15% de shéiream bó féatais (Solarbio) agus saothraíodh iad ag 26 ◦C le 5% CO2.

4.7. Sintéis Mimic Mimic agus Cosc miRNA

Ba iad GenePharma (Shanghai) a chum na núicléatídí aithrise Mc-úrscéal, an t-inhibitor, agus an rialaithe. Seo a leanas a seicheamh: Mc-úrscéal_miR_145 mimic, 52032- UCCAGAAAAGCGCUUCGGGACG-30; Mc-úrscéal_miR_145 inhibitor, 50 -CGUCCGAAGCG CUUUUCUGGA-30 (modhnaithe go ceimiceach faoi 20 ome); aithris rialaithe diúltach, 50 -UUGUA CUACACAAAAGUACUG-30; agus coscaire rialaithe diúltach, 50 -CAGUACUUUUGUGU AGUACAA-30 (athraithe go ceimiceach faoi 20 ome).

4.8. Anailís Tuairisceoir Luciferase

Úsáidtear measúnuithe tuairisceoirí Luciferase go forleathan chun staidéar a dhéanamh ar léiriú géine agus ar ghníomhaíocht rialála. Tá an méid solais a ghintear comhréireach leis an méid einsím luciferase a tháirgtear, rud a léiríonn gníomhaíocht an eilimint rialála ar a seal. Déantar an ghníomhaíocht luciferase a thomhas ansin ag baint úsáide as luminometer, agus déantar na torthaí a anailísiú agus a léirmhíniú chun gníomhaíocht rialála na heiliminte staidéar a chinneadh. Baineadh úsáid as measúnachtaí tuairisceora Luciferase chun anailís a dhéanamh ar ghníomhachtú iartheachtach McIL{{{0}}. Sa turgnamh seo, cuirtear an pEGFP-McIL-17-3 plasmid (0.1, 0.5, agus 1.0 µg/well) in éineacht leis an pGLNF-κb- comh-aistrithe plasmid tuairisceoir luc (0.25 µg/well) isteach i gcealla HEK293 ag baint úsáide as Lipo6000TM ar feadh 24 h. Baineadh úsáid as plasmid pEGFP-N1 bán mar an rialú. Rinneadh gníomhaíocht Luciferase a thomhas ag baint úsáide as an gCóras Measúnachta Tuairisceora Dual-Luciferase® (Promega, Madison, WI, SAM) de réir na sonraíochta, agus úsáideadh Renilla luciferase mar an idirrialú. Dheimhnigh measúnachtaí tuairisceoirí luciferase freisin Mc-úrscéal _miR_145 dírithe ar McIL-17-3. Thuar an ríomh bithfhaisnéiseach gur féidir le Mc-novel_miR_145 díriú ar 30 -UTR McIL-17-3, agus ina dhiaidh sin clónáil sé 30 -UTR McIL{{ 29}} isteach sa veicteoir tuairisceora pmiR-RB-ReportTM luciferase chun an tuairisceoir fiáin McIL-17-3-30 tuairisceoir UTR-WT plasmid a thógáil. Tógadh an veicteoir tuairisceora de chineál mutant McIL-17-3-30 UTR-MUT tríd an núicléitíd a shóchán ag 1023–1040 suíomh: TCCGAAGCGCTTTTCTGG go AGGCTTCGCGAAGACC. Aistríodh RNA oligo (Mc-úrscéal_miR_196 NC, mimic, NCi, inhibitor) in éineacht le McIL-17-3- 3 0 UTR-WT nó McIL-17-3-30 UTR-MUT go HEK293 cealla ag baint úsáide as Lipo6000TM.

4.9. Slonn Athchuingreach, Íonú agus an Ullmhúchán Antiserum

Chun éifeacht Mc-novel_miR_145 ar shloinneadh na próitéine McIL-17-3 a mheas, ullmhaíodh antiserum McIL-17-3. Méadaíodh an blúire cDNA a chlúdaíonn an fráma léitheoireachta oscailte (ORF) de McIL-17-3 le péire primer ar leith (Tábla 1) agus cuireadh isteach i veicteoir pET é. Aistríodh an pET plasmid athchuingreach-32a-McIL{{1{0}} go Escherichia coli (DE3) (Takara) agus goraíodh é i meán LB (ina bhfuil 50 mg L−1 kanamycin) ag 37 ◦C le croitheadh ​​ag 130 rpm ar feadh 4 h. Tar éis don dlús optúil ionsúiteacht 0.6 a bhaint amach ag 600 nm, cuireadh an t-iseapróipil-beta-D-thiogalactopy taobh istigh (IPTG) le tiúchan deiridh de 1 mM leis an tuaslagán baictéarach chun slonn athchuingreach McIL{ a spreagadh. {24}} próitéin (rMcIL-17-3). Tar éis goir ag 37 ◦C ar feadh 6 h, lártheifneoiríodh an meán ag 8000 rpm ar feadh 30 nóiméad chun na baictéir a bhailiú, agus fionraíodh i maolán TBS (20 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl, pH 8.0). Rinneadh an rMcIL-17-3 a íonú le crómatagrafaíocht chleamhnaithe aigéid Ni-nitrilotriacetic (NI-NTA), agus dialyzaíodh an phróitéin íonaithe as imidazole ar feadh 24 h. Rinneadh an phróitéin iarmhartach a leithlisiú trí leictreafóiréis glóthach SDS-polyacrylamide 12% (SDS-PAGE) a laghdú. Athfhillteadh an próitéin íonaithe i maolán gliocról grádán úiré-TBS (50 mM Tris-HCl, 50 mM NaCl, glutathione laghdaithe 2 mM, gliocról 10%, glutathione ocsaíd 0.2 mM, tiúchan úiré grádán de 6, 4, 3, 2 , 1, agus 0 M úiré i ngach grádán, pH 7.4, gach grádán ag 4 ◦C ar feadh 12 h). Ansin, úsáideadh an phróitéin iarmhartach chun 6-lucha seachtaine d'aois a imdhíonadh chun antasubstaintí polachlónacha a fháil.

4.10. Blotting an Iarthair

Baineadh samplaí próitéine as haemaicítí le maolán lysis RIPA (Beyotime), agus ansin aimsíodh an tiúchan le trealamh BCA. Tar éis aonrú le SDS-PAGE, aistríodh an phróitéin go seicní PVDF le séalaithe de 5% púdar bainne bearrtha i TBST (20 Mm Tris-HCl, 150 mM NaCl, 1% Tween-20, pH 8.0), agus an antashubstaint i gcoinne goir McIL ina dhiaidh sin thar oíche. Ina dhiaidh sin, goraíodh na seicní le tuaslagán caolaithe d’antasubstaint IgG frith-luch gabhar agus comhchuingeach phosphatase alcaileach (Thermo Fisher Scientific, Cat. Uimh.: 31324) sa mhaolán caolúcháin antasubstainte tánaisteach (Beyotime, P0258) ar feadh 3 h. Ar deireadh, aimsíodh na próitéiní imdhíonghníomhacha ag an gcóras braite ECL.

4.11. Apoptóis

Rinneadh measúnú ar apoptosis hemocyte ag baint úsáide as cítoiméadracht sreafa de réir lámhleabhar an Kit Braite Apoptosis FITC-Iarscríbhinnin-V (Beyotime). Go hachomair, cuireadh cóireáil ar na haemaicítí a bailíodh ar feadh 24 h le LPS (0.1 mg/mL), 20 nM de pEGFP-McIL-17-3 plasmid, Mc novel_miR{{9} } aithris, agus coscaire Mc-novel_miR_145. Tar éis níocháin le PBS, cuireadh na cealla ar fionraí arís sa mheán L15 ag tiúchan deiridh de chealla 1 × 106 mL -1 agus dathaíodh iad le FITC-Iarscríbhinn-V agus PI trí iad a ghoradh ag teocht an tseomra ar feadh 25 nóiméad sa dorchadas. . Mar fhocal scoir, fostaíodh an ionstraim citoiméadrachta sreabhadh (Beckman CytoFLEX FCM) chun apoptosis cille a bhrath, agus rinneadh anailís ar shonraí ag baint úsáide as bogearraí FlowJoTM 10. 4.12. Anailís Staitistiúil Cuireadh torthaí turgnamhacha i láthair mar an meán ± diall caighdeánach (SD). Próiseáladh na torthaí trí úsáid a bhaint as anailís ANOVA dhá bhealach ar an éagsúlacht le tástáil chomparáidí iolracha Tukey, agus úsáideadh bogearraí Origin2021 chun anailís a dhéanamh ar na sonraí agus chun figiúirí a dhéanamh.

cistanche córas imdhíonachta a mhéadú plandaí

5. Conclúidí

Sa staidéar seo, aithníodh homalóg úr IL-17, McIL-17-3, ó M. coruscus agus fuarthas go raibh ról ríthábhachtach aige i gcosaint imdhíonachta moileascach in aghaidh ionsaí baictéarach. Ina theannta sin, fuarthas amach go bhfuil McIL á rialú go diúltach ag Mc-novel_miR_145, rud a chuireann lena rannpháirtíocht in apoptosis de bharr LPS. Soláthraíonn torthaí an staidéir seo léargais luachmhara ar ról rialála IL-17 i bhfreagairt imdhíonachta na ndiúilicíní agus leagann siad béim ar an acmhainneacht a bhaineann le neamhchódú RNA i meicníochtaí cosanta imdhíonachta inveirteabracha a rialáil. Mar sin féin, tá sé tábhachtach a thabhairt faoi deara go bhfuil roinnt teorainneacha sa staidéar seo. Go sonrach, ní dhearnadh staidéar ar an meicníocht atá mar bhunús leis an modh gníomhaíochta McIL-17-3 agus tá gá le himscrúdú breise. Ina theannta sin, níor dhírigh an staidéar seo ach ar an idirghníomhú idir Mc-novel_miR_145 agus McIL-17-3 agus ní dhearna sé iniúchadh ar an mbaint a d’fhéadfadh a bheith ag miRNAs eile sa fhreagairt imdhíonachta. Ar an iomlán, cuireann an staidéar seo béim ar an ról tábhachtach atá ag neamhchódú RNA i meicníochtaí cosanta imdhíonachta agus molann sé go bhféadfadh a modhnú feidhmiú mar straitéis fhéideartha le haghaidh teiripí spriocdhírithe do ghalair éagsúla.

Tagairtí

1. Medzhitov, R .; Janeway, C., Jr. Díolúine dúchasach. N. Béarla. J. Med. 2000, 343, 338–344. [CrossRef] [PubMed]

2. Lacy, P.; Stow, JL Scaoileadh Cytokine ó chealla imdhíonachta dúchasacha: Comhlachas le conairí éagsúla gáinneála membrane. Fuil J. Am. Soc. Haemaitól. 2011, 118, 9–18. [CrossRef] [PubMed]

3. Dinarello, CA cytokines proinflammatory. Cófra 2000, 118, 503–508. [CrossRef] [PubMed]

4. Rauta, PR; Nayak, B. ; Das, S. Córas imdhíonachta agus freagairtí imdhíonachta in éisc agus a ról i staidéar comparáideach díolúine: Samhail d'orgánaigh níos airde. Imdhíonól. Lett. 2012, 148, 23–33. [CrossRef]

5. Hymowitz, SG; Filvaroff, EH; Ceann, J. ; Laoi, J. ; Cai, L. ; Risser, P.; Maruoka, M.; Mao, W.; Foster, J.; Glacann Kelley, RF IL-17s fillte snaidhm cistine: Struchtúr agus gníomhaíocht cíteicín núíosaigh, IL-17F, agus impleachtaí do cheangal gabhdóirí. EMBO J. 2001, 20, 5332–5341. [CrossRef]

6. Buckley, KM; Ho, ECH; Hibino, T. ; Schrankel, CS; Schuh, NW; Wang, GZ; Tá fachtóirí Rast, JP IL17 ina rialtóirí luatha sa epithelium gut le linn na freagra athlastacha ar Vibrio i larbha an urchin farraige. eLife 2017, 6, e23481. [CrossRef]

7. Cua, DJ; Tato, CM Innate IL-17-cealla a tháirgeann: Feighlithe an chórais imdhíonachta. Nát. Ath. Immunol. 2010, 10, 479–489. [CrossRef]

8. Muilte, KH IL-17 agus IL-17-a tháirgeann cealla mar chosaint i gcoinne na paiteolaíochta. Nát. Ath. Immunol. 2022, 10, 479–489. [CrossRef]

9. Hibino, T.; Loza-Coll, M.; Messier, C. ; Majeske, AJ; Cohen, AH; Terwilliger, DP; Buckley, KM; Brockton, V. ; Náir, SV; Berney, K. Tá an stór géine imdhíonachta ionchódaithe i ngéanóm an chuáin mhara corcra. Dev. Biol. 2006, 300, 349–365. [CrossRef]

10. Albertin, CB; Simakov, O.; Mitros, T. ; Wang, ZY; Pungor, JR; Edsinger-Gonzales, E.; Brenner, S.; Ragsdale, CW; Rokhsar, DS Géanóm an ochtapas agus éabhlóid na n-úrscéalta néaracha agus moirfeolaíocha ceifileapóid. Dúlra 2015, 524, 220–224. [CrossRef]

11. Saco, A. ; Rey-Campos, M.; Rosani, U.; Novaa, B. ; Figueras, A. Léiríonn éabhlóid agus éagsúlacht na n-idirléicin méadú ar inveirteabraigh mhara agus a ról caomhnaithe san imdhíonacht mhúcóis. Tosaigh. Imdhíonól. 2021, 12, 692997. [CrossRef] [PubMed]

12. Gerdol, M. ; Moreira, R.; Cruz, F.; Gómez-Garrido, J.; Vlasova, A.; Rosani, U.; Venier, P. ; Naranjo-Ortiz, MA; Murgarella, M.; Greco, S. Cruthaíonn éagsúlacht ollmhór géine láithreacht-neamhláithreachta pan-genome oscailte sa diúilicín Meánmhara. Géanóim Biol. 2020, 21, 1–21. [CrossRef]

13. Cao, Y. ; Yang, S.; Feng, C. ; Zhan, W.; Zheng, Z.; Wang, Q.; Deng, Y. ; Jiao, Y. ; Du, X. Éabhlóid agus anailís ar fheidhm na géine interleukin-17 ó Pinctada fucata martensii. Imdhíonacht Sliogéisc Éisc. 2019, 88, 102–110. [CrossRef] [PubMed]

14. Wang, Q. ; Xiao, G. ; Hu, G.; Chen, R.; Li, M. ; Déanann Teng, S. Interleukin-17D idirghabháil Vibrio harveyi athruithe a bhaineann le hionfhabhtú i Tegillarca granulosa trí ghníomhachtú próitéin gníomhachtaithe 1 in vivo. Dobharshaothrú 2023, 566, 739178. [CrossRef]

15. Lv, X. ; Sun, J. ; Li, Y. ; Yang, W.; Wang, L.; Leng, J. ; Yan, X.; Guo, Z.; Yang, Q.; Rialaíonn Wang, L. CgIL17-5 slonn mRNA na n-éifeachtóirí imdhíonachta trí fhosfarylation CgMAPKanna a aslú agus traslonnú núicléach CgRel agus CgAP-1 in oisrí an Aigéin Chiúin Crassostrea gigas. Dev. Comp. Imdhíonól. 2022, 127, 104263. [CrossRef] [PubMed]

16. Wang, L. ; Sun, J. ; Wu, Z.; Lian, X. ; Han, S.; Huang, S.; Yang, C.; Wang, L.; Rialaíonn Song, L. AP-1 slonn IL17-4 agus IL17-5 san oisrí Aigéin Chiúin Crassostrea gigas. Imdhíonacht Sliogéisc Éisc. 2020, 97, 554–563. [CrossRef]

17. Wu, S.-Z.; Huang, X.-D.; Li, Q. ; Sé, M.—X. Interleukin-17 in oisrí péarla (Pinctada fucata): Clónáil mhóilíneach agus tréithriú feidhmiúil. Imdhíonacht Sliogéisc Éisc. 2013, 34, 1050–1056. [CrossRef]

18. Xin, L. ; Zhang, H.; Zhang, R.; Li, H. ; Wang, W.; Wang, L.; Wang, H.; Qiu, L.; Song, L. CgIL17-5, cítocín athlastach ársa i Crassostrea gigas a thaispeánann feidhmeanna ilchineálachta i gcomparáid le móilíní veirteabracha interleukin17. Dev. Comp. Imdhíonól. 2015, 53, 339–348. [CrossRef]

19. Denli, AM; Barraí, BB; Plástar, RH; Císte, RF; Hannon, GJ Próiseáil microRNAs bunscoile ag an gcoimpléasc Microprocessor. Dúlra 2004, 432, 231–235. [CrossRef]

20. Khan, D.; Ansar Ahmed, S. Rialachán IL-17 i ngalar uath-imdhíonachta ag fachtóirí trascríobh agus microRNAnna. Tosaigh. Géinte. 2015, 6, 236. [CrossRef]

21. Máirtín-Gómez, L.; Villalba, A . ; Kerkhoven, RH; Apollo, E. Ról na microRNAs i bpróiseas díolúine an oisrí cothrom Ostrea edulis i gcoinne bona miosis. Infect. Géinte. Éabhlóid. 2014, 27, 40–50. [CrossRef] [PubMed]

22. Xu, F. ; Wang, X. ; Feng, Y. ; Huang, W.; Wang, W.; Li, L. ; Fang, X. ; Cé, H.; Zhang, G. MicroRNAs caomhnaithe agus núíosacha a shainaithint in oisrí an Aigéin Chiúin Crassostrea gigas trí sheicheamhú domhain. PLoS ONE 2014, 9, e104371. [CrossRef]

23. Zhou, Z. ; Wang, L.; Amhrán, L.; Liu, R.; Zhang, H.; Huang, M.; Chen, H. Aithint agus tréithe microRNAs a bhaineann le himdhíonacht i hemocytes oisrí Crassostrea gigas. PLoS ONE 2014, 9, e88397. [CrossRef] [PubMed]

24. Burgos-Aceves, MA; Cohen, A.; Smith, Y.; Faggio, C. Rialú microRNA féideartha ar ghéinte a bhaineann le himdhíonacht i hemocytes inveirteabracha. Sci. Timpeallacht Iomlán. 2018, 621, 302–307. [CrossRef]

25. Walker, SE; Spencer, GE; Necakov, A.; Carlone, RL Aithint agus tréithriú microRNAnna le linn athghiniúna de bharr aigéad retinoic ar lárchóras na néaróg moileascach. Int. J. Mol. Sci. 2018, 19, 2741. [CrossRef] [PubMed]

26. Abo-Al-Ela, HG; Faggio, C. Freagra struis trí mheán microRNA i speicis dhébhlaoscacha. Éiceatocsaineach. Timpeallacht. Saf. 2021, 208, 111442. [CrossRef] [PubMed]

27. Huang, S.; Yoshitake, K.; Asaduzzaman, M.; Kinoshita, S.; Watanabe, S.; Asakawa, S. Fionnachtain agus tuiscint fheidhmiúil ar miRNAs i moileasc: Cur chuige próifílithe ar fud an ghéanóim. RNA Biol. 2021, 18, 1702–1715. [CrossRef]

28. Rosani, U.; Bortoletto, E.; Bai, C.-M. ; Novaa, B. ; Figueras, A. ; Venier, P. ; Fromm, B. Ag tochailt isteach miRNAomes débhlaoscacha: Idir caomhnú agus nuálaíocht. Fealsúnacht. tras. R. Soc. B 2021, 376, 20200165. [CrossRef]

29. Grian, X. ; Zhang, T. ; Li, L. ; Tu, K.; Yu, T.; Wu, B. ; Zhou, L.; Tian, ​​J. ; Liu, Z. Síniú slonn MicroRNA i matáin adductor striated agus go réidh Yesso muiríní Patinopecten yessoensis. Géanómaíocht 2022, 114, 110409. [CrossRef]

30. Tian, ​​R. ; Zheng, Z.; Huang, R.; Jiao, Y. ; Ghlac Du, X. miR-29a páirt i bhfoirmiú nacre agus freagairt imdhíonachta trí dhíriú ar Y2R i Pinctada martensii. Int. J. Mol. Sci. 2015, 16, 29436–29445. [CrossRef]

31. Chen, H. ; Zhou, Z.; Wang, H.; Wang, L.; Wang, W.; Liu, R.; Qiu, L.; Song, L. Cuireann microRNA inveirteabrach-shonrach agus imdhíon-fhreagrach le fagaicíotóis hemocyte oisrí trí dhíriú ar CgIκB2. Sci. Ionadaí 2016, 6, 1–10. [CrossRef] [PubMed]

32. Chen, H. ; Zhou, Z.; Wang, L.; Wang, H.; Liu, R.; Zhang, H.; Song, L. Dhírigh miRNA a bhain go sonrach le hinveirteabrach ar chóras neuroendocrine ársa cholinergic na n-oisrí. Oscail Biol. 2016, 6, 160059. [CrossRef]

33. Chen, H. ; Xin, L. ; Amhrán, X.; Wang, L.; Wang, W.; Liu, Z.; Zhang, H.; Wang, L.; Zhou, Z.; Qiu, L. Cuireann miRNA norepinephrine-sofhreagrach chun cinn go díreach léiriú CgHSP90AA1 i hemocytes oisrí le linn triomú. Imdhíonacht Sliogéisc Éisc. 2017, 64, 297–307. [CrossRef] [PubMed]

34. Han, Z. ; Li, J. ; Wang, W.; Li, J. ; Zhao, Q.; Li, M. ; Wang, L.; Song, L. Rialaíonn calmodulin atá dírithe ag scafall miRNA659_26519 léiriú IL-17 i bhfreagairt imdhíonachta luath oisrí Crassostrea gigas. Dev. Comp. Imdhíonól. 2021, 124, 104180. [CrossRef] [PubMed]

35. Lv, Z. ; Li, C. ; Zhang, P.; Wang, Z.; Zhang, W.; Jin, C.-H. modhnaíonn miR-200 gníomhaíochtaí antibacterial coelomocytes agus priming LPS trí dhíriú ar Tollip in Apostichopus japonicus. Imdhíonacht Sliogéisc Éisc. 2015, 45, 431–436. [CrossRef]

36. Li, C. ; Zhao, M.; Zhang, C.; Zhang, W.; Zhao, X.; Duán, X. ; Modhnaíonn Xu, W. miR210 pléasctha riospráide in Apostichopus japonicus coelomocytes trí dhíriú ar ghabhdóirí cosúil le Dola. Dev. Comp. Imdhíonól. 2016, 65, 377–381. [CrossRef]

37. Lv, M. ; Chen, H.; Shao, Y. ; Li, C. ; Zhang, W.; Zhao, X.; Jin, C. ; Xiong, J. miR-92a rialaíonn apoptosis coelomocytes i gcúcamar farraige Apostichopus japonicus trí dhíriú ar Aj14-3-3ζ in vivo. Imdhíonacht Sliogéisc Éisc. 2017, 69, 211–217. [CrossRef]

38. Shao, Y. ; Li, C. ; Xu, W. ; Zhang, P.; Zhang, W.; Nascann Zhao, X. miR-31 meitibileacht lipid agus apoptosis cille in Apostichopus japonicus atá dúshlánach ag baictéir trí dhíriú ar CTRP9. Tosaigh. Imdhíonól. 2017, 8, 263. [CrossRef]

39. Guo, M. ; Wang, Y.; Fu, X.; Tao, W.; Sochtann Li, C. circRNA1149 ó Apostichopus japonicus apoptosis coelomocyte mar miR-92spúinse chun slonn Bax a rialáil mar fhreagra ar ionfhabhtú Vibrio splendidus. Dobharshaothrú 2023, 562, 738812. [CrossRef]

40. Zuo, H. ; Weng, K.; Luo, M.; Yang, L.; Weng, S.; sé, J.; Xu, X. A MicroRNA-1 – Cosc Idirmheánach ar an gCosán NF-κB ag Conair JAK-STAT sa vannamei Inveirteabrach Litopenaeus. J. Imdhíon. 2020, 204, 2918–2930. [CrossRef]

41. Yang, H. ; Xu, Z.; Guo, B. ; Zhang, X. ; Liao, Z. ; Qi, P.; Yan, X. Nochtann anailís chomhtháite ar miRNAome agus transcriptome rialachán líonra miRNA-mRNA i Vibrio alginolyticus diúilicín tiubh bhlaosc ionfhabhtaithe Mytilus coruscus. Mol. Imdhíonól. 2021, 132, 217–226. [CrossRef] [PubMed]

42. de Morales, JMGR; Puig, L. ; Daudén, E. ; Cañete, JD; Pablos, JL; Máirtín, AO; Juanatey, CG; Adán, A. ; Montalban, X. ; Borruel, N. Ról ríthábhachtach interleukin (IL)-17 i neamhoird athlastacha agus imdhíonachta: Athbhreithniú nuashonraithe ar an bhfianaise a dhíríonn ar chonspóidí. Autoimmun. Ath. 2020, 19, 102429. [CrossRef] [PubMed]

43. Kawaguchi, M. ; Adachi, M.; Óda, N.; Cocúba, F.; Huang, S.-K. IL-17 teaghlach cítocín. J. Ailléirge Clin. Imdhíonól. 2004, 114, 1265–1273. [CrossRef] [PubMed]

44. Starnes, T. ; Broxmeyer, HE; Robertson, MJ; Hromas, R. Ceannródaíoch: IL-17D, ball úrnua den teaghlach IL-17, spreagann sé táirgeadh cítocín agus cuireann sé bac ar hemopoiesis. J. Imdhíon. 2002, 169, 642–646. [CrossRef] [PubMed]

45. Gaffen, SL; Kramer, JM; Jeffrey, JY; Shen, F. An teaghlach cítocín IL-17. Vitimín. Horm. 2006, 74, 255–282. [PubMed]

46. ​​Roberts, S.; Gueguen, Y. ; de Lorgeril, J.; Goetz, F. Carnadh tapa ar athscríbhinn homalógach interleukin 17 i hemocytes Crassostrea gigas tar éis nochtadh baictéarach. Dev. Comp. Imdhíonól. 2008, 32, 1099–1104. [CrossRef] [PubMed]

47. Li, J. ; Zhang, Y.; Zhang, Y.; Xiang, Z.; Tong, Y. ; Qu, F.; Yu, Z. Tréithriú géanómaíochta agus anailís slonn ar chúig ghéinte IL{-17 núíosacha in oisrí an Aigéin Chiúin, Crassostrea gigas. Imdhíonacht Sliogéisc Éisc. 2014, 40, 455–465. [CrossRef]

48. Gaffen, SL Struchtúr agus comharthaíocht sa teaghlach gabhdóirí IL-17. Nát. Ath. Immunol. 2009, 9, 556–567. [CrossRef]

49. Hata, K. ; Andoh, A.; Shimada, M. ; Fujino, S.; Bamba, S.; Araki, Y.; Okuno, T. ; Fujiyama, Y .; Spreagann Bamba, T. IL-17 freagairtí athlastacha trí bhealaí kinase NF-κB agus MAP i miofibroblasts coilíneacha daonna. Táim. J. Fisiol. -Gastrointest. Fisiol ae. 2002, 282, G1035–G1044. [CrossRef]

50. Niimoto, T. ; Nakasa, T. ; Ishikawa, M.; Okuhara, A.; Izumi, B. ; Deie, M.; Suzuki, O.; Adachi, N.; Ochi, M. MicroRNA-146a slonn in interleukin-17 a tháirgeann cealla T in othair airtríteas réamatóideach. Matánchnámharlaigh BMC. Neamhord. 2010, 11, 1–11. [CrossRef]

51. Srivastava, A. ; Nikamo, P.; Lohcharoenkal, W.; Li, D.; Meisgen, F. ; Landén, NX; Ståhle, M.; Pivarcsi, A. ; Sonkoly, E. MicroRNA- 146a choisceann IL-17-athlasadh craicinn trí mheán agus tá baint ghéiniteach aige le psoriasis. J. Ailléirge Clin. Imdhíonól. 2017, 139, 550–561. [CrossRef] [PubMed]

52. Zhao, S.; Cheng, Y.; Déanann Kim, JG microRNA{{1}a íosrialáil IL-17 agus IL{-35 agus cuireann sé cosc ​​ar iomadú gaschealla ligament peidontal daonna. J. Cill. Bithcheimic. 2019, 120, 13861–13866. [CrossRef] [PubMed]

53. Podsiad, A. ; Standiford, TJ; Ballinger, MN; Eacain, R. ; Páirc, P. ; Kunkel, SL; Moore, BB; Bhan, U. MicroRNA-155 rialaíonn freagairt imdhíonachta óstaigh ar niúmóine baictéarach iar-víreasach trí chonair IL-23/IL-17. Táim. J. Fisiol. -Cill scamhóg. Mol. Fisiol. 2016, 310, L465–L475. [CrossRef]

54. Xaus, J. ; Comalada, M. ; Valledor, AF; Lloberas, J. ; López-Soriano, F.; Argilés, JM; Bogdan, C. ; Cothaíonn Celada, A. LPS apoptosis i macrophages go príomha trí tháirgeadh uathchríneach TNF- . Fuil J. Am. Soc. Haemaitól. 2000, 95, 3823–3831.

55. Meirge, LL; Goldblum, SE Meicníochtaí apoptóis endothelial baictéarach de bharr lipopolysaccharide. Táim. J. Physiol.—Cill na Scamhóg. Mol. Fisiol. 2003, 284, L899–L914. [CrossRef]

56. Prás, DM; Hollingsworth, JW; Cincíse, M.; Li, Z.; Potts, E. ; Toloza, E.; Foster, WM; Schwartz, DA Déanann ionanálú LPS Ainsealach athruithe cosúil le emphysema i scamhóg luiche a bhaineann le apoptosis. Táim. J. Riospráide. Cill Mol. Biol. 2008, 39, 584–590. [CrossRef]

57. Dragon, S. ; Safar, AS; Shan, L. ; Laghdaíonn Gounni, AS IL-17 éifeachtaí frith-apoptotic GM-CSF i neodrófail dhaonna. Mol. Imdhíonól. 2008, 45, 160–168. [CrossRef] [PubMed]

58. Zhu, F. ; Wang, Q.; Guo, C. ; Wang, X. ; Cao, X.; Shi, Y. ; Gao, F.; Ma, C. ; Cothaíonn Zhang, L. IL-17 apoptosis de chealla endothelial soithíoch - Meicníocht fhéideartha le haghaidh géarshiondróm corónach daonna. Clin. Imdhíonól. 2011, 141, 152–160. [CrossRef]

59. Chang, Y. ; Al-Alwan, L.; Audusseau, S.; Chouiali, F. ; Carlevaro-Fita, J.; Iwakura, Y.; Bagole, CJ; Eidelman, DH; Hamid, Q. Laghdaíonn scriosadh géiniteach IL-17A athlasadh de bharr deataigh toitíní agus apoptosis cille ailbheolach cineál II. Táim. J. Fisiol. -Cill scamhóg. Mol. Fisiol. 2014, 306, L132–L143. [CrossRef]

60. Hou, W. ; Jin, Y.-H. ; Kang, HS; Cuireann Kim, BS Interleukin-6 (IL-6) agus IL-17 marthanacht víreasach chun cinn go sineirgíoch trí chosc a chur ar apoptóis cheallacha agus ar fheidhm na gceall T cíteatocsaineach. J. Víreas. 2014, 88, 8479–8489. [CrossRef]

61. Wang, Q. ; Li, D.; Han, Y.; Ding, X. ; Xu, T. ; Tang, B. Cosnaíonn MicroRNA-146 cealla A549 agus H1975 ó apoptosis arna spreagadh ag LPS agus ó ghortú athlasadh. J. Bitheolaíocht. 2017, 42, 637–645. [CrossRef] [PubMed]

62. Chen, Y. ; Wu, Z.; Yuan, B. ; Dong, Y. ; Zhang, L.; Laghdaíonn Zeng, Z. MicroRNA gníomhachtú ceall stellate hepatic ionradaíochta agus LPS-spreagtha agus apoptóis heipiticíte trí chosc ar chonair TLR4. Cealla Bás Dis. 2018, 9, 1–16. [CrossRef] [PubMed]

63. Ding, Y. ; Wang, L.; Zhao, Q.; Wu, Z.; Coscann Kong, L. MicroRNA-93 apoptosis chondroicíte agus athlasadh in osteoarthritis trí dhíriú ar chonair chomharthaíochta TLR4/NF-κB. Int. J. Mol. Med. 2019, 43, 779–790. [CrossRef]

64. WAN, G. ; An, Y.; Tao, J.; Wang, Y.; Zhou, Q.; Yang, R.; Laghdaíonn Liang, Q. MicroRNA-129-5p gortú chorda an dromlaigh i lucha tríd an apoptosis agus freagairt athlastach a shochtadh trí chonair HMGB1/TLR4/NF-κB. Bitheolaíocht. Ionadaí 2020, 40, BSR20193315. [CrossRef] [PubMed]

65. Ke, X.-F. ; Fang, J. ; Wu, X.-N.; Ach, C.-H. Luathaíonn MicroRNA-203 apoptosis i gcealla epithelial alveolar-spreagtha LPS trí dhíriú ar PIK3CA. Bithcheimic. Bithfhis. Res. Cumann. 2014, 450, 1297–1303. [CrossRef] [PubMed]

66. Qi, P. ; Tang, Z. Spreagann an móilín Nrf2 cosaint fhrithocsaídeach in aghaidh géar-nochtadh beansó(a)piréin sa diúilicín tiubh Mytilus coruscus. Tocsain Uisce 2020, 226, 105554. [CrossRef]

67. Schmittgen, TD; Livak, KJ Anailís a dhéanamh ar shonraí PCR fíor-ama tríd an modh comparáideach CT. Nát. Prótacal. 2008, 3, 1101–1108. [CrossRef]