Meastóireacht ar Nochtadh Nítrigine Amóinia i gCosaint Imdhíonachta atá i Láthair ar Spleen agus ar Dhuáin Bhran Wuchang (Megalobrama Amblycephala)
Nov 13, 2023
Coimriú:Tá amóinia ar cheann de na fachtóirí comhshaoil is tábhachtaí in éiceachórais uisceacha. Mar sin féin, tá staidéir teoranta ar éifeachtaí strus amóinia ainsealach nó fadtéarmach agus a mheicníocht mhóilíneach féideartha in éisc. Bhí sé mar aidhm ag an staidéar seo imscrúdú a dhéanamh ar an bhfreagairt imdhíonachta agus ar mheicníochtaí móilíneacha i spleen agus duán cloigeann éisc tar éis nochtadh amóinia ainsealach.Amblycephala megalobrama(9.98 ± Bhí {{0}}.48 g) faoi lé tiúchain éagsúla nítrigine amóinia iomlán (0–30 mg/L) ar feadh 30 lá. Ba chúis le nochtadh amóinia méaduithe suntasacha i leibhéil cortisol agus laghduithe ar lísímí agus comhlánaíonn sé 3/4 tiúchan sa serum, rud a léiríonn éifeachtaí coisctheacha strus amóinia ar fhreagraí imdhíonachta dúchasacha. D'fhág nochtadh amóinia freisin méaduithe ar thiúchan-spleách ar thiúchan amóinia i bhfíochán, damáiste paiteolaíoch agus innéacsanna an spleen agus an duáin chinn. Ina theannta sin, tá ábhar imdhíonglobulin M (IgM), interleukin 1 (IL-1 ) agus fachtóir neacróis meall (TNF- ) chomh maith le leibhéil mRNA de ghabhdóirí cosúil le dola (TLRanna)/fachtóir difreála Myeloid 88 (MyD88)-mhóilíní comharthaíochta neamhspleácha sa spleen agus ceann-duáin íosrialú go suntasach tar éis nochtadh amóinia. Thug ár dtorthaí le tuiscint gurbh é ba chúis le nochtadh amóinia ainsealach ná freagairtí imdhíonachta dúchasacha agus oiriúnaitheacha a shochtadh trí chomharthaíocht neamhspleách TLR/MyD a íosrialáil. Bhí tionchair dhiúltacha strus amóinia ainsealach níos déine sa spleen ná sa duán cloigeann.
Keywords: amóinia; strus ; gabhdóirí cosúil le dola; spleen ; ceann-duáin; díolúine
Cliceáil ANSEO A FHÁIL CISTANCHE Luibhe DO Duán
1. Réamhrá
Ammonia is one of the most important environmental factors in aquatic ecosystems that affect the growth and health of aquatic animals [1]. Ammonia nitrogen generally comes in one of two ionized forms—NH4 + and the un-ionized form, NH3, in the aquatic environment. NH3 is extremely toxic to fish by reason of its ability to diffuse across cell membranes easily [2–4]. Over the past decades, high levels of ammonia frequently occur in aquatic environments due to disorderly discharges of sewage effluent, agricultural run-off, and high-density aquaculture [5–7]. Although the recommended level of ammonia nitrogen in drinking water is up to 3 mg/L (NH4/L) [8], the real ammonia level can reach much higher (>20 mg/L) uaireanta, mar gheall ar chóireáil séarachais neamhéifeachtach nó nach bhfuil ann nó ar chúiseanna eile [9,10].
Tá sé cruthaithe go gcuireann éifeachtaí imdhíonachta amóinia in éisc le ráigeanna galair [11,12]. I roinnt staidéar ar Takifugu rubripes, Scophthalmus maximus agus Pelteobagrus fulvidraco, d’fhéadfadh nochtadh géar amóinia leibhéil slonn géine fachtóir gníomhachtaithe B-chealla, próitéin turraing teasa 70/90, tnf- , agus interleukin- 1/1 /6/ a uasghrádú. 8/12 [13–15]. Wang et al. thuairiscigh freisin gur tháinig laghdú suntasach ar ghníomhaíochtaí serum lysozyme in Acanthopagrus schlegelii tar éis 24 h de nochtadh amóinia [16]. Mar an gcéanna, breathnaíodh leibhéil laghdaithe mRNA de chomhlánú C3 agus IgM i spleens Pelteobagrus vachellii agus Rhynchocypris lagowski faoi nochtadh géar amóinia [17,18]. Cé gur tugadh an-aird ar éifeachtaí géar-nochta amóinia ar dhíolúine éisc, níl ach staidéir theoranta ar éifeachtaí strus amóinia ainsealach nó fadtéarmach agus ar a meicníocht mhóilíneach féideartha. Ina theannta sin, thuairiscigh roinnt imscrúdaitheoirí éifeachtaí díobhálacha nítrigine amóinia ar léiriú mRNA de TLRanna trí anailís tras-scríbhinne [16,19-22]. Dá bharr sin, déanaimid hipitéis go bhféadfadh tionchar a bheith ag nochtadh leanúnach amóinia ar dhíolúine éisc freisin, ina bhféadfadh ról tábhachtach a bheith ag cosán comharthaíochta TLR.
Is iad an spleen agus an duán ceann na horgáin imdhíonachta móra in iasc teileost, atá freagrach as ábhair cháithníneacha eachtracha a ghabháil agus a ghlanadh agus timpeallacht inmheánach chobhsaí a chothabháil [23,24]. Is iad freisin na príomhshuímh ina dtáirgtear antasubstaintí imdhíonachta [25–27]. Ina theannta sin, in iasc, tá an córas imdhíonachta dúchasach comhdhéanta de chealla seasta agus soghluaiste chomh maith le raon leathan móilíní cosanta (cosúil le lísímí, comhlánú, agus cítocíní) [28,29]. Is iasc cyprinid é an bran Wuchang (Megalobrama amblycephala) ó dhúchas imchuach Yangtze na Síne, a bhí sa 11ú háit ar domhan i dtáirgeadh iomlán bliantúil an éisc seo in 2014 [30]. Mar phríomhspeicis dobharshaothraithe, is speiceas measartha íogair é M. amblycephala do nítrigin amóinia agus is minic a bhíonn sé ag fulaingt ó strus a chothaíonn nítrigin amóinia [31-33]. I bhfianaise an méid thuas, rinneadh turgnamh nochta ainsealach i bran Wuchang chun gnéithe na bhfreagraí imdhíonachta tar éis nochtadh amóinia ainsealach agus an mheicníocht taobh thiar de na héifeachtaí seo a shoiléiriú trí athruithe i bparaiméadar imdhíonachta serum, histeolaíocht, agus móilíní a bhaineann le cosán TLR a bhrath. sa spleen agus ceann-duáin. Cuidíonn ár dtorthaí freisin le monatóireacht a dhéanamh ar stádas sláinte agus leas M. amblycephala i gcórais dhianshaothraithe.
2. Torthaí
2.1. Ábhar Amóinia sa Spleen agus sa Cheann-Duán
Léiríonn Figiúr 1 ábhar amóinia sa spleen agus duán cloigeann M. amblycephala tar éis 30 lá tar éis nochtadh do leibhéil éagsúla amóinia. Chonacthas méadú suntasach ar leibhéal amóinia i spleen na n-iasc a nochtar do 30 mg/L iomlán amóinia nítrigine i gcomparáid leis an ngrúpa rialaithe (p < 0.05). Ní raibh aon difríocht staitistiúil i leibhéil amóinia sa duán ceann idir na grúpaí cóireála amóinia go léir agus an grúpa rialaithe (p> 0.05).
Fíor 1. Éifeachtaí nochtadh amóinia ainsealach ar charnadh amóinia sa spleen agus duáin ceann M. amblycephala. Seasann gach colún don mheán ± SE de shé dhúblach. Léirítear luachanna p < 0.05 mar "*" os cionn an cholúin, rud a léiríonn difríochtaí suntasacha i gcomparáid le rialú, faoi seach.
2.2. Leibhéil Séiream Cortisol, Lysozyme, C3 agus C4
Mar a léirítear i bhFíor 2, tháinig méadú suntasach ar leibhéil cortisol serum i ngach grúpa cóireála amóinia i gcomparáid leis an ngrúpa rialaithe (p < 0.05). Ar an taobh eile de, tháinig laghdú suntasach ar ghníomhaíochtaí serum lísímíse sna héisc a nochtar do thiúchan níos airde amóinia (20 agus 30 mg/L iomlán nítrigine amóinia) (p < 0.05). Laghdaíodh leibhéil chomhlánaithe C3 agus C4 sa serum go suntasach sna grúpaí ar cuireadh cóireáil orthu le 10 go 30 mg/L iomlán amóinia nítrigine (p <0.01).
Fíor 2. Éifeachtaí nochta amóinia ainsealach ar leibhéil serum cortisol, lísisím, C3 agus C4(AD) in M. amblycephala. Seasann gach colún don mheán + SE de shé dhúblach. Léirítear luachanna p < 0.05 agus 0.0l" mar " "agus os cionn an cholúin, rud a léiríonn difríochtaí suntasacha i gcomparáid le rialú, faoi seach.
2.3. Innéacsanna Orgán Díolúine
Mhéadaigh na hinnéacsanna spleen agus cloigeann araon leis an méadú ar thiúchan iomlána nítrigine amóinia tar éis nochta (Fíor 3). I gcomparáid leis an ngrúpa rialaithe, bhí an t-innéacs spleen ardaithe go suntasach sna héisc a ndearnadh cóireáil orthu le nítrigin amóinia iomlán níos airde (20 agus 30 mg/L) (p < 0.05). Níor aimsíodh aon difríocht shuntasach san innéacs ceann-duáin idir na grúpaí cóireála amóinia go léir agus an grúpa rialaithe (p> 0.05).
Fíor 3. Éifeachtaí nochta amóinia ainsealach ar innéacsanna spleen (A) agus duán ceann (B) i Mamblycephala. Cuirtear luachanna in iúl mar Íosta go Uasmhéid (n=18). Léirítear na luachanna ofp < 0.05 agus 0.01 mar"" agus "u" os cionn an cholúin, rud a léiríonn difríochtaí suntasacha i gcomparáid le rialú, faoi seach.
2.4. Meastóireacht Paiteolaíoch
Léirigh spleen bran Wuchang sa ghrúpa rialaithe cuma gnáth le erythrocytes agus leukocytes flúirseach (Fíor 4A). Tar éis nochtadh amóinia ar feadh 30 lá, tugadh faoi deara méaduithe beaga ar líon na n-erythrocytes chomh maith le hionaid meileana-macrophage i spleen na n-iasc atá faoi lé 5 mg/L nítrigine amóinia iomlán (Fíor 4B, Tábla 1). Chonacthas athruithe comhchosúla ach níos tromchúisí in éisc a ndearnadh cóireáil orthu le 10 go 30 mg/L iomlán nítrigine amóinia, mar mhéadú ar líon agus ar mhéid na n-ionad melanoma-macrophage chomh maith le méadú suntasach ar líon na n-erythrocítí (Fíor 4C, D). Ina theannta sin, braitheadh vacuolization cíteaplasma freisin i spleen na n-iasc faoi lé 30 mg/L iomlán nítrigine amóinia (Fíor 4E, Tábla 1).
Maidir leis an duán cloigeann, taispeánann Fíor 5A gnáthstruchtúr fíocháin chinn-duáin in iasc rialaithe tar éis nochta. Níor tugadh aon chomhartha paiteolaíochta faoi deara i nduán ceann na n-iasc a bhí faoi lé nítrigine amóinia iomlán níos ísle (5 mg/L) (Fíor 5B, Tábla 1). Breathnaíodh méaduithe beaga ar líon na n-ionad meileanoma-macrophage in éisc a nochtar do nítrigin amóinia iomlán 10 agus 20 mg/L (Fíor 5C, D, Tábla 1). Feabhsaíodh méid agus líon na n-ionad meileanoma-macrophage sa ghrúpa nítrigine amóinia iomlán 30 mg/L (Fíor 5E, Tábla 1).
2.5. Anailís Paraiméadar Imdhíonachta Fíocháin
Laghdaigh leibhéil na bparaiméadar imdhíonachta dúchasach (TNF- , IL-1 ) agus paraiméadair imdhíonachta faighte (IgM) sa spleen agus ceann duán mar aon leis an méadú ar leibhéil nochta amóinia (Fíor 6, Tábla Forlíontach S1). Sa spleen, tháinig laghdú suntasach ar inneachar agus ar leibhéil mRNA TNF- agus IgM i ngach grúpa cóireála amóinia i gcomparáid leis na rialuithe (p < 0.{{1{0}}5). Idir an dá linn, rinneadh laghdú suntasach ar leibhéil ábhar splenic IL-1 agus slonn mRNA sna héisc a nochtar do níos mó ná 20 mg/L iomlán nítrigine amóinia (p < 0.05). I gcodarsnacht leis sin, níor laghdaíodh ach ábhar agus leibhéal mRNA IL-1 chomh maith leis an leibhéal slonn tnf- sa cheann-duáin go suntasach i ngrúpaí cóireála amóinia i gcoibhneas le rialuithe (p < 0.05). Ní raibh aon difríochtaí suntasacha i leibhéil próitéine IgM agus léiriú géine chomh maith le tiúchan TNF i duáin cloigeann idir na grúpaí cóireáilte amóinia agus an grúpa rialaithe (p> 0.05).
Fíor 6. Leibhéil choibhneasta mRNA de ghéinte cosán comharthaíochta TLR chomh maith le hábhar TNF- , IL- 1 agus IgM sa spleen agus duán cloigeann M. amblycephala. Luachanna arna shloinneadh mar acmhainn ± SE de shé dhúblach. igm: immunoglobulin M, il-1 : interleukin 1 , tnf- : fachtóir neacróis meall , jnk1: c-Meitheamh N críochfort kinase1, erk1: próitéin rialáilte extracellular kinase 1, p38 : próitéin gníomhachtaithe mitogen kinase p38 , nf-κb1 /2: fachtóir núicléach-κ-géine ceangailteach 1/2, pi3 k: fosfatidylinositol 3-kinase, akt: próitéin kinase B, myd88: fachtóir difreála myeloid 88, traf6: fachtóir neacróis meall receptor-gaolmhar fachtóir 6, tlr1 /2/3/4/5: gabhdóir cosúil le dola 1/2/3/4/5. Léirítear luachanna p < 0.05 agus 0.01 mar "*" agus "**" os cionn an cholúin, rud a léiríonn difríochtaí suntasacha i gcomparáid le rialú, faoi seach
Chun meicníocht mhóilíneach na tocsaineachta amóinia ainsealach ar an gcóras imdhíonachta a shoiléiriú, socraíodh athruithe trascríobhacha ar phríomhghéin a bhaineann leis an gcosán comharthaíochta TLR mar aon leis na leibhéil TNF- , IL-1 agus IgM. Sa spleen, bhí leibhéil mRNA de ghéinte gabhdóra cosúil le dola (tlr2, tlr4), MyD88-cosán neamhspleách géine gaolmhar traf6, cosán comharthaíochta NF-κB géine gaolmhar nf-κb2 agus cosán comharthaíochta MAPK géine gaolmhar erk1 síos go suntasach. -rialaithe sna grúpaí cóireála amóinia i gcomparáid leis an rialú (p < 0.05), cé nach raibh aon athruithe suntasacha i slonn tlr1, tlr3, tlr5, pi3 k, akt, myd88 , nf-κb1, jnk1 agus p38 a (p > 0.05). Ar an dul céanna, bhí leibhéil trascríobh tlr1, tlr2, tlr5, akt, traf6, nf-κb1, erk1 agus jnk1 dearg go suntasach gan aon difríochtaí suntasacha i léiriú tlr3, tlr4, myd88, pi3 k, nf-κb2 agus p38 sa duán ceann idir grúpaí cóireála amóinia agus an grúpa rialaithe (p> 0.05).
2.6. Anailís Comhghaoil
Mar a léirítear i bhFíor 7 agus i dTábla Forlíontach S2, bhí comhghaol diúltach suntasach idir tiúchan nochta amóinia agus ábhar TNF- , IL-1 agus IgM chomh maith le leibhéil tras-scríobhacha tnf- , il-1 , igm, tlr2, traf6, nf-кb2 agus jnk1 sa spleen. Idir an dá linn, léirigh ábhar agus leibhéil trascríobh splenic TNF- , IL-1 agus IgM comhghaolta dearfacha suntasacha lena chéile (p < 0.05). Léirigh tiúchan splenic IgM comhghaol suntasach dearfach le tlr2 agus nf-кb2, agus léirigh TNF- chomh maith le IL-1 comhghaolta dearfacha suntasacha le tlr2, traf6 agus nf-кb2 (p < 0.{{ 53}}5). Mar sin féin, sa duán cloigeann, ní raibh ach comhghaol suntasach diúltach idir leibhéil nochta amóinia agus ábhar IL-1 agus léiriú na ngéinte tnf- , il-1 , tlr1/2/4/5, traf6, akt, nf-кb1, jnk1 agus erk1 (p < 0.05). Comhghaolaíodh IL Ceann-duáin go dearfach le IgM, igm, il-1 , tlr4, myd88, traf6, akt, nf-кb1, erk1 agus jnk1, agus léirigh IgM agus TNF- comhghaol dearfach le p38 a agus tlr2, faoi seach (p < 0.05).
Fíor 7. Comhéifeachtaí comhghaolaithe Spearman ® i measc tiúchan nochta amóinia agus paraiméadair imdhíonachta a bhaineann le cosán comharthaíochta TLR sa spleen agus duán ceann M. amblycephala tar éis nochtadh amóinia ainsealach. Léirítear luachanna p < 0.05 agus 0.01 mar "*" agus "**" os cionn an cholúin, rud a léiríonn difríochtaí suntasacha i gcomparáid le rialú, respec
2.7. Innéacsanna IBR
Ríomhadh luachanna IBR ó shonraí caighdeánaithe 22 bithmharcóir sa spleen agus sa cheann-duáin i bran Wuchang faoi leibhéil éagsúla amóinia comhthimpeallach tar éis 30-nochtadh lae (Tábla 2, Fíor 8). De réir mar a mhéadaigh na tiúchain nochta amóinia, bhí claonadh ag luachanna an IBR méadú ar an duán agus ar an gcloigeann araon. Bhí luachanna IBR níos airde sa spleen
Seirbhís Tacaíochta Wecistanche-An t-onnmhaireoir cistanche is mó sa tSín:
Ríomhphost:wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/Teil:+86 15292862950
Siopa Le haghaidh Sonraí Breise:
https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop
