Sliocht Eatánólach Fenugreek: A Mheicníochtaí Móilíneacha i gCoinne Aosú Craicinn Agus na Feidhmeanna Feabhsaithe Le Nana-iamhchoipeadh 2

Déan teagmháil le do thoiloscar.xiao@wecistanche.comle haghaidh tuilleadh eolais

2.5.Éifeacht LNF agus Sliocht Fenugreek ar Inmharthanacht Cille agus Táirgeadh Collagen i gCealla Fibroblasta Deirmeacha Daonna

Chun cíteatocsaineacht LNF foirmlithe a imscrúdú, déileáladh le cealla le sleachta bána, LNF, agus fenugreek ag {{{0}} ug/mL (caolú faoi dhó) ar feadh 24h. Rinneadh inmharthanacht cille a thomhas ag baint úsáide as measúnacht MTT. Mar a léirítear i bhFíor 6a, tháinig laghdú ar inmharthanacht na gceall i gcealla cóireáilte le heastóscadh, ach níor tugadh aon éifeacht faoi deara i gcealla bána agus LNF-chóireáilte. Léirigh na sonraí gur léirigh LNF tocsaineacht níos ísle ná sliocht. Rinneamar imscrúdú breise ar chumas LNF ar ionduchtú táirgeadh collagen i gcealla fibroblast deirmeach daonna. Cóireáladh cealla le 7 ug/mL de eastóscán agus 1{{20}}0 ug/mL de LNF (7 ug/mL de choibhéis eastóscáin), mar aon le cáithníní bána mar rialú, ar feadh7 agus 14 lá. Mar a thaispeántar i bhFíor 6b, le haghaidh cóireála le LNF, méadaíodh an méid collagen dhaite 30 faoin gcéad agus 50 faoin gcéad ag 7 agus 14 lá, faoi seach, i gcomparáid le cóireáil sliocht. Ina theannta sin, i bhFíor 2a, laghdaíodh gníomhaíocht frith-collagenase feabhsaithe an LNF foirmithe, mar IC5o go suntasach go 0.21 ± 0.03 mg/mL i gcomparáid le sliocht fenugreek (0.57 ± 0.02mg/mL). Léirigh na torthaí seo go bhféadfadh foirmiú LNF ionduchtú táirgeadh collaigine i gcealla fibroblast deirmeach an duine a neartú agus feabhas a chur ar ghníomhaíocht frith-collagenase sliocht fenugreek. Is féidir go bhfuil an nana-foirmliú de fenugreek sliocht feabhas suntasach ar a potency mar chomhábhar gníomhach i frith-aging táirgí.

2.6.Ról an LNF Foirmithe ar MMP1, MMP9, IL-6, agus IL-8 Cosc tar éis Nochtadh UV

Ansin rinneamar imscrúdú ar roinnt meicníochtaí féideartha LNF ar ghníomhaíocht frith-aosaithe. Tá nochtadh UV ar cheann de na príomh-rialtóirí a bhaineann le dul in aois craiceann, toisc go bhfuil sé tuairiscithe go spreagtar léiriú baill áirithe den teaghlach maitrís metalloproteinase (MP), rud is cúis le titim collagen, lena n-áirítear MMP1, MMP3, agus MMP9 [34,35]. . Thugamar faoi deara go raibh nochtadh UV an-tocsaineach do chealla craiceann comhshaothraithe (Fíor 7a) agus chuir sé feabhas ar tháirgeadh cítocíní MMP1 agus MMP9 (Fíor 7b). Chomh maith leis sin, bhí na cóireálacha ar eastóscán fenugreek agus LNF foirmlithe in ann na táil a laghdú go suntasach. de MMP1 agus MP9 i gcomparáid le cealla rialaithe tar éis ionradaíochta UV. Bhí na torthaí seo comhsheasmhach le cóireáil rutin agus resveratrol mar ghníomhaire rialaithe frith-aosaithe. Go háirithe, bhí an laghdú ar nathanna MMP1 agus MMP9 i gcealla cóireáilte LNF i bhfad níos ísle ná mar a bhí sa chóireáil sliocht. Mar sin, d’fhéadfadh LNF táil MPI agus MMP9 a laghdú ar nochtadh UV, agus aosú craiceann fóta-spreagtha ina dhiaidh sin a chosc.

Cliceáil anseo le do thoil chun tuilleadh eolais a fháil

Ina theannta sin, is féidir le nochtadh UVR ar chraiceann an duine idirghabháil a dhéanamh freisin ar ionduchtú athlasadh agus gníomhachtú cítocín pro-athlastach, mar TNF- agus interleukins, lena n-áirítear IL-1,IL-2, IL{{4} }, agus IL-8 [36]. Rinneamar scrúdú ansin ar fheidhm LNF ar chosc ar tháirgeadh cítocín athlastach spreagtha UV, lena n-áirítear IL-6 agus IL-8. I bhFíor 7c, thugamar faoi deara gur chuir ionradaíocht UV go mór le táirgeadh IL{{} cítocíní 11}} agus IL-8 i gcealla craiceann comhshaothraithe. Breathnaíodh laghdú suntasach ar na slonn IL-6 agus IL{{-8 le cóireáil eastóscadh fenugreek i gcomparáid leis an rialú. Is díol spéise é gur léirigh cóireáil an eastóscáin fenugreek toirmisc i bhfad níos airde IL-6 agus IL{{{{{{{{{{{{-}}) i gcomparáid le rutin, áit a raibh na gníomhaíochtaí coisctheacha seo cosúil le grúpaí a ndearnadh cóireáil orthu le resveratrol. Go háirithe, bhí na slonn IL-6 agus IL-8 i gcealla cóireáilte LNF i bhfad níos ísle i gcomparáid leis an ngrúpa eastóscáin fenugreek tar éis nochtadh UV. Le chéile, léirigh na torthaí seo go bhféadfadh LNF bac a chur ar tháirgeadh IL-6 trí mheán UV agus IL{{-8, agus ina dhiaidh sin cosc ​​a chur ar athlasadh craiceann arna spreagadh ag grianghraif agus aosú craicinn.Mar thoradh air sin, tugann na torthaí seo le tuiscint go bhféadfaí an sliocht eatánólach de feanugreek agus a nanafhoirmiúchán a úsáid mar chomhábhair ghníomhacha chun dul in aois a chosc.

3. Plé

Léiríodh go bhfuil gníomhaíochtaí frithocsaídeacha, frith-radacach agus frith-athlastacha ag sliocht Fenugreek i roinnt staidéar [29,37], cé nár baineadh leas as a mhaoin frith-roic fós. Ba é an taighde seo an chéad duine a d’aithin gníomhaíocht frith-aosaithe de shleachta fenugreek agus úsáid á baint as measúnacht choisctheach collagenase in vitro. Mhol staidéir roimhe seo go n-úsáidfí sleachta plandaí le gníomhaíocht frith-collagenase mar chomhábhar gníomhach i dtáirgí cosmeceutical cosúil le sliocht pomace fíonchaor [38], sliocht tae glas [39], agus sliocht muisiriún [40]. Thairis sin, níor tuairiscíodh riamh éifeacht sliocht fenugreek ar tháirgeadh collagen i gcealla fibroblast deirmeach an duine. Tá Tamara et al. (2006) léirigh éifeacht flavonoids ar shintéis collagen i fibroblasts daonna ag baint úsáide as rutin, mar chomhdhúil ghníomhach de sliocht fenugreek, a chabhraíonn le collagen a mhéadú [41]. Léirigh an staidéar seo ar feanugreek a chumas frith-aosaithe tuar dóchais inti agus léirigh sé rutin mar mharcóir bitheolaíoch.

Úsáideadh Rutin (3),4',5.7-tetrahydroxy-flavone-3-rutinoside) sa staidéar seo toisc gur gliocóisíd flavonol é a tuairiscíodh i roinnt plandaí, lena n-áirítear Fagopyrum esculentum Moench, Ruta graveolens L, Sophora japonica L., Eucalyptus spp. [37l, agus fenugreek[17]Tá gníomhaíochtaí frithocsaídeacha, cíteachosanta, frith-charcanaigineach, neuroprotective agus cardio-chosanta ag Rutin, ag moladh a fheidhm maidir le haosú agus galair a bhaineann le dul in aois a chosc. Léirigh ár dtorthaí gur léirigh an sliocht ullmhaithe méid ard ábhar rutin, ar éigean a fuarthas nó a braitheadh ​​​​mar chomhpháirt de sliocht fenugreek i staidéir eile. Thuairiscigh formhór na staidéar eile triantánacht mar phríomh-chomhábhar ceimiceach d'úsc fenugreek [18,37,38,42-47].

Tá gníomhaíocht fhéideartha ag baint le sliocht fenugreek fiú mar ghníomhaire frith-aosaithe. Tá a dath agus a chobhsaíocht fós ina dhúshlán don fheidhmchlár seo. Tuairiscíodh nanoencapsulation mar theicneolaíocht shonrach atá in ann an boladh a chobhsú, a mhúscailt, tuaslagthacht uisce a fheabhsú, scaoileadh comhdhúile bitheolaíocha a rialú [48,49], agus cuma fhisiciúil táirgí nádúrtha a fheabhsú. Cuireadh Liponiosome i bhfeidhm sa staidéar seo mar gheall ar a n-airíonna uathúla, atá comhdhéanta de ghnéithe hidrofilic agus hidreafóbach, ar féidir leo raon leathan substaintí a bhfuil tuaslagthachtaí éagsúla acu a chuimsiú [50]. Le chéile againn sliocht fenugreek liposomes encapsulated (LNF), a bhfuil iompróir hibrideach a chuimsíonn liposomes agus tréithe niosóim. Deimhníodh comhpháirteanna hibrideacha an LNF forbartha ag an teocht leá ag baint úsáide as DSC, rud a léiríonn tréithe teirmeacha liposomes agus niosóim araon.

is féidir cistanche frith-aging

Is ciseal seachtrach craiceann é an stratum corneum a oibríonn mar bhac éifeachtach i gcoinne substaintí díobhálacha trína n-iompar trasna an chraiceann a shrianadh. Mar sin féin, tá sé cruthaithe go bhfeabhsaítear seachadadh nana-iompróirí trí dhul i bhfód drugaí nó substaintí tríd an mbacainn seo[51]. Chun imscrúdú a dhéanamh ar chumhacht an LNF ar sheachadadh trasdermal, baineadh úsáid as treá craiceann muc ex vivo mar go bhfuil a saintréithe anatamaíocha den chuid is mó cosúil le tréithe craiceann an duine, i dtéarmaí tiús craiceann, struchtúr follicular, agus dlús gruaige [52]. Léiríonn ár dtorthaí go raibh tréscaoilteacht LNF níos mó agus níos doimhne ná sliocht fenugreek agus rutin, agus bhí scaoileadh níos moille ag próifíl scaoileadh LNF ná sliocht fenugreek, rud a thugann le tuiscint go raibh an LNF foirmithe go suntasach níos fearr ná iad siúd a bhaineann le sliocht ar threá craiceann. Ina theannta sin, laghdaíodh go suntasach an ghníomhaíocht fhrith-chollagenáis fheabhsaithe LNF foirmithe, mar IC-A go 0.205±0.03mg/mL i gcomparáid le feanugreek sliocht (0.567 ± 0.02 mg/mL). Léirigh na torthaí seo go bhféadfadh foirmiú LNF ionduchtú táirgeadh collaigine i gcealla fibroblast deirmeach an duine a neartú agus feabhas a chur ar ghníomhaíocht frith-collagenase sliocht fenugreek. Nana-foirmliú sliocht fenugreek fhéadfadh cabhrú le feabhas a chur ar a potency ag baint úsáide as é mar chomhábhar gníomhach chun cosc ​​a chur le dul in aois.

Is é an nochtadh do radaíocht UV an príomhfhachtóir a bhaineann le dul in aois craiceann eistreach, ar a dtugtar aosú réamhaibí nó grianghrafadóireacht [53.54]. Is cúis leis an radaíocht ná gníomhachtú gabhdóirí dromchla cille de keratinocytes craiceann agus fibroblasts, rud a fhágann go n-ionduchtar léirithe maitrís extracellular deirmeach, go háirithe an teaghlach metalloproteinases maitrís (BP). Tá sé léirithe go n-eascraíonn nochtadh ainsealach do dáileoga ísle UVA go n-uasrialaítear leibhéil mRNA de cholangáis-1 (MMP1), stromelysin-1 (MMP3), agus geilitínáis A (MMP2)[55]. Mar thoradh air sin, tarlaíonn díghrádú snáithíní leaisteacha collagen craiceann, chomh maith le sintéis nua collagen a mhúchadh. Bíonn tionchar ag an bhfeiniméan seo ar shláine, leaisteachas, agus struchtúir an chraiceann, tar éis dírialú feidhmeanna cosanta an chraiceann, cuntas a thabhairt ar fhoirmiú wrinkle agus comharthaí aosú craiceann [54,56]. Ina theannta sin, meánaíonn nochtadh UVR ar chraiceann an duine léiriú ar TNF-alfa, atá ina rialtóir tábhachtach ar easghluaiseachta athlastach sa chraiceann. Cuireann ionradaíocht UV tús freisin le gníomhachtú athlasadh agus táil cítocín pro-athlastach, mar shampla interleukin-2 (IL-2) agus interleukin-6 (1L-6) [36] . Mar thoradh air sin, tá ról tábhachtach ag an bhfreagra athlastach seo de bharr UVR ar ionduchtú craiceann dóite le comharthaí deargadh, greannú, agus éiritime [35.59].

Mar sin, chun an chúis le dul in aois roimh am a chosc, bheadh ​​sé iontach aimsiú roinnt oibreán gníomhach núíosach leis na feidhmeanna coisctheacha seo. Léirigh ár dtorthaí go bhféadfadh foirmiú LNF ionduchtú táirgeadh collaigine i gcealla fibroblast deirmeach an duine a neartú, go bhféadfadh sé táil MP1, MP9, IL-6, agus IL-8 a laghdú ar nochtadh UV, agus go bhféadfadh sé. feabhas a chur ar ghníomhaíocht frith-collagenase sliocht fenugreek. Dá bhrí sin, d'fhéadfadh úsáid fhéideartha a bhaint as sliocht fenugreek eatánólach agus a nanafhoirmiúchán mar chomhábhar gníomhach úrnua i dtáirgí cosmeceutical agus go bhfuil nana-iamhchochlú in ann feidhm agus gníomhaíocht sliocht fenugreek a fheabhsú mar ghníomhaire frith-aosaithe. 4.Ábhair agus Modhanna

4.1.Ábhair Plandaí agus Imoibrithe Ceimiceacha

Fenugreek seed powder was received from Herbal Acharn'sHome Co.,Ltd. (Bangkok, Thailand). Rutin trihydrate (>íonacht 98 faoin gcéad), maolán tricine, collagenase ó clostridium histolyticum agus FALGPA (N-[3({3}}furyl) acryl)-Leu-Gly-Pro-Ala), dearg díreach 80, aigéad picric, agus sulfocsaíd démheitile bhí ceannaíodh ó Sigma-Aldrich (St.Louis,MO, USA)Aicéatóintríle, aicéatáit eitile, eatánól absalóideach, aigéad formach, fosfáit díhiodráitithe sóidiam, fosfáit hidrigine dé-óidiam, aigéad hidreaclórach, agus hiodrocsaíd sóidiam ó Carlo Erba (Emmendingen, An Ghearmáin). Ceannaíodh eatánól grád tráchtála ó Italmar Co., Ltd (Bancác, An Téalainn). Ceannaíodh colaistéaról ó Cosmeplus Co., Ltd (Bancác, An Téalainn). Ceannaíodh meascán glycol próipiléine agus tuaslagóir ó S.Tong Chemicals Co, Ltd. (Nonthaburi, An Téalainn). Ceannaíodh oleate Sorbitan ó Croda Co., Ltd. (Bancác, An Téalainn). Fospholipid (Phospholipon 90G) a bhí á cheannach ó Cargill Siam Ltd. (Bancác, An Téalainn). Ceannaíodh aicéatáit tócaifearóil ó Namsiang Co, Ltd. (Bancác, An Téalainn). Ceannaíodh an leasaitheach ó Forecus Co., Ltd. (Bancác, An Téalainn). Ceannaíodh paraformaldehyd ó Himadia Laboratories (Mumbai, an India) agus ceannaíodh 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-il)-2,5-bróimíd défheiniltetrasóiliam ó Calbiochem (Burlington, MA, SAM).

4.2.Eastarraingt

Maothú púdar síolta Fenugreek (500 g) le 95 faoin gcéad eatánól (1:5) ar feadh 3 lá. Rinneadh an t-eastóscadh arís agus arís eile (3 × 2500 ml). Scagadh an tuaslagán iomlán eastósctha, agus galú eatánól faoi 100 mbar ag 40 céim ag baint úsáide as galú rothlach (Heidolph, Schwabach, an Ghearmáin). Ba é an t-úsc a fuarthas ná an taos olach buí-donn le toradh 5 faoin gcéad (w/w) agus coinníodh é ag 4 céim go dtí go n-úsáidfí é.

4.3. UHPLC Bailíochtú agus Aithint Rutin i Sliocht Fenugreek

Baineadh úsáid as Rutin trihydrate, mar mharcóir caighdeánach, chun sliocht fenugreek a anailísiú. Rinneadh an modh UHPLC a fhorbairt agus a bhailíochtú i dtéarmaí líneachta, cruinnis, beachtas, agus íogaireacht[31,32] ag córas Shimadzu LC-30 AD UHPLC a chuimsíonn brathadóir eagair dé-óid SPD-M2{0A agus uathshamplóir SIL-30AC.D’úsáid an modh colún SUPLECO Titan C18 (5 cm × 2.1 mm, 1.9 um, SUPLECO, Burlington, VT, SAM) ag 30 céim agus aimsíodh tonnfhad 26{{ 19}} nm. Cuireadh an chéim shoghluaiste in oiriúint ó Kenny et al. [45]. Go hachomair, ullmhaíodh 0.05 faoin gcéad v/v de thuaslagán d'aigéad formach in uisce ultraíonach(A) agus 0.05 faoin gcéad v/v d'aigéad formach in aicéataitrile (B) le sreabhadh 0.25 mL/nóim i mód grádán: ba é an coinníoll tosaigh 10 faoin gcéad B ar feadh 1.0 min, méadaithe go 75 faoin gcéad B ar feadh 3.5 nóiméad, laghdaigh sé go 10 faoin gcéad B ar feadh 0.75 min, agus coinníodh é ar feadh 0.25 min.

4.4. Measúnacht Collagenase

Rinneadh measúnacht collagenase chun gníomhaíocht frith-collagenase a chinneadh [60]. Ullmhaíodh an tuaslagán meascáin, ina bhfuil 25 μL de thuaslagán maolánach tricine 50 mM (pH7.5), 25 μL de 2 aonad/mL collagenase (clostridium histolyticum cineál IA) agus 25 μL den sampla, agus gor ag teocht an tseomra ar feadh 15 nóim. Chun an t-imoibriú a thosú, cuireadh 10 uL den tsubstráit shintéiseach agus 2mM de N-[3-(2-Furyl) acryloyl-Leu-Gly-Pro-Ala(FALGPA) isteach sa tuaslagán meascáin agus gor é ar feadh 20 nóiméad. Tomhaiseadh an t-athrú ar ionsúiteacht gach forshnátháin ag 340 nm (léitheoir micreaphláta Synergy H1) agus ríomhadh na luachanna ICso trí chuar aischéimniúcháin líneach a bhreacadh a thaispeánann comhchruinnithe samplacha ar an x-ais agus cosc ​​céatadánach ar an y-ais. Ríomhadh an céatadán coiscthe ag baint úsáide as an gcothromóid seo a leanas:

4.5.Cultúr na gCeall

Ceannaíodh cealla fibreblasta deirmeach daonna ón mBailiúchán Cultúir de Chineál Meiriceánach: ATCC (PCS-201-010) agus ceannaíodh keratinocytes daonna neamhbhásaithe (HaCaT) ó Cell Lines Service, an Ghearmáin (Cat. Uimh. 300493). Saothraíodh cealla i meáin mhodhnaithe Eagle's (DMEM) (Gibco, RA) ag Dulbecco arna fhorlíonadh le 10 faoin gcéad FBS (Gibco, RA), peinicillin 1 faoin gcéad (100 aonad / ml), agus streptomycin (100 ug / mL) (Gibco, St. Louis) , MO, USA).Goraíodh cealla ag 37 céim faoi thimpeallacht dé-ocsaíd charbóin 5 faoin gcéad.

4.6. Ábhar Collagen agus Picrosirius Dathú Dearg

Síolaíodh cealla fibroblast deirmeach daonna ag 2.5 × 104 ceall/go maith isteach i 48 pláta tobair agus goraíodh iad ar feadh 24 h. Cóireáladh na cealla ansin le tiúchain éagsúla de liponio-cuid gan eastóscáin (léirithe mar bán), sliocht feanugreek cuimsithe liponiosome (LNF), agus sliocht feanugreek ar feadh 7 agus 14 lá, le 005 faoin gcéad DMSO a úsáidtear mar rialú feithicle. Athraíodh na meáin gach 2 lá. Ansin nite na cealla le PBS agus socraíodh iad le 100 ul de 4 faoin gcéad PFA ar feadh 10 nóiméad. Nite cealla le PBS (faoi dhó) agus dhaite le 100 ul de 0.1 faoin gcéad dearg díreach 80 réitigh ar feadh 10 nóiméad. Tar éis é a smálú, cuireadh 0.01NHCl in eatánól 70 faoin gcéad leis an ró-ruaim a ní. Rinneadh collagen dhaite a thuaslagadh le 10 uL de 0.5 N NaOH agus tomhaiseadh an t-ionsúcht ag 540 nm ag baint úsáide as léitheoir microplate (léitheoir microplate Synergy H1). Ríomhadh an céatadán d’ábhar collaigine ag baint úsáide as an gcothromóid seo a leanas:

4.7.Measúnú Inmharthanachta Cille

Síolaíodh cealla fibroblast deirmeach daonna ag cealla 2 × 104 / tobar isteach i 96 pláta tobair agus goraíodh iad ar feadh 24 h. Tar éis goir, cuireadh tiúchain éagsúla (0-100 ug/mL) de na liposomes gan eastóscáin (bán), LNF, agus sliocht fenugreek leis agus saothraíodh iad ar feadh 24 h. Ansin, cuireadh 100 μL de MTT (1 mg/ml) isteach i ngach tobar agus gor é ar feadh 4 h. Cuireadh DMSO leis chun an táirge formazan a thuaslagadh. Rinneadh an t-ionsúcht a thomhas ag 570 nm ag baint úsáide as léitheoir microplate (léitheoir microplate Synergy Hl). Ríomhadh céatadán inmharthanacht na gceall ag baint úsáide as an gcothromóid seo a leanas:

Foirmliú 4.8.Liponiosomes

Úsáideadh réamh-eibleacht tar éis homogenization le haghaidh foirmiú liposome. Baineadh úsáid as meascán fosfailipidí agus eiblithe chun déchiseal sféarúil lipid a fhoirmiú agus baineadh úsáid as colaistéaról chun righin na gcáithníní a fheabhsú [15]. Go hachomair, scaipeadh lecithin pónaire soighe, colaistéaról, agus eiblitheoir i glycol próipiléine agus téite ag 70-80 céim (céim ola), mar a thaispeántar i dTábla 2. Tuaslagadh sliocht Fenugreek i glycol próipiléine / uisce (céim uisce) agus téite i an folctha uisce céanna. Cuireadh tuaslagán uiscí an eastóscáin go leanúnach isteach i gcomhpháirteanna lipid agus rinneadh é a homogenized ag 8000-100 rpm ar feadh 5-10 nóim ag baint úsáide as stirring ardluais (Heidolph Silent Crusher M, Kenilworth, N, USA). go dtí 50 céim agus cuireadh aicéatáit tócaifearóil leis agus rinneadh aonchineálú air ar feadh 10 nóiméid eile chun LNF a fháil. Breathnaíodh ar mhoirfeolaíocht LNF trí mhicreascópacht leictreoin tarchurtha (TEM, JEOL, Peabody, MA, SAM), agus rinneadh imscrúdú ar an méid hidridinimiciúil, innéacs polydispersity Pdl, agus poitéinseal zeta ag baint úsáide as scaipthe solais dinimiciúil (DLS, Nanosizer ZS, Malvern Instruments, Worcestershire, RA). Rinneadh imscrúdú ar iompraíocht leá liposome a dhearbhú trí úsáid a bhaint as calraiméadracht scanadh difreálach (DSC, Mettler Toledo DSC1). Rinneadh slaodacht an tsampla a thomhas le viscometer digiteach Brookfield (samhail HBDV-IIIU CP). Go hachomair, úsáideadh 0.5g de shamplaí agus scrúdaíodh an slaodacht le fearsaid CP-40, agus an luas rialaithe ag 0.5 rpm ar feadh 20 nóiméad ag an teocht chomhthimpeallach.

Chun cobhsaíocht LNF a mheas, coinníodh na cáithníní ag 4 céim , 25 céim , agus 40 céim ar feadh 3 mhí, agus scrúdaíodh na hathruithe ar mhéid na gcáithníní agus ar mhoirfeolaíocht.

Ceapadh sliocht fenugreek imchochlaithe liposome agus noisome (LF agus NF) ag baint úsáide as modh cosúil leis an LNF. Ullmhaíodh LF gan oleate sorbitan a chur leis an gcéim ola, ach ullmhaíodh niosome (NF) gan an chomhpháirt fosfailipidí a chur leis. Tuairiscíodh a saintréithe fisiciceimiceacha sa Tábla forlíontach S1.

4.9.Céatadáin Éifeachtúlachta Iontrála agus Luchtú Bithghníomhach

Ríomhadh éifeachtúlacht imchochlaithe (faoin gcéad EE) agus luchtú bithghníomhach (faoin gcéad BL) den LNF trí mhéid an druga cuimsithe a chinneadh ag baint úsáide as teicníc ultrascagacháin. Baineadh úsáid as an méid rutin mar mharcóir caighdeánach. Tar éis 20 mg/mL de LNF a thuaslagadh in uisce DI, lártheifneoiríodh é ag 80,000 rpm ar feadh 4 h. Bailíodh an súiteán agus ansin rinneadh meastóireacht ar an rutin neamh-capslaithe ag baint úsáide as teicníc crómatagrafaíocht leachta ultra-ardfheidhmíochta (UHPLC)[61]. Ríomhadh an céatadán EE agus an céatadán BL de réir na gcothromóidí seo a leanas:

4.10.Cill Idirleata Franz

Rinneadh staidéar in vitro tréscaoilteach ar 7mg / mL de sliocht fenugreek agus LNF a imscrúdú i gcóras cealla idirleata Franz [62]. Cuireadh an scannán sintéiseach (diosca ultrascagacháin Biomax 500 kDa, Merck,MA, SAM) idir urrann deontóra agus gabhdóra. Tosaíodh saline maolánach fosfáite (PBS) le pH de 5.5 ag 50 rpm (37 céim ) agus úsáideadh é mar mheán gabhdóra. Cuireadh sliocht Fenugreek agus LNF i bhfeidhm ar an scannán i gcaipín cille an deontóra. Scaipeadh samplaí tríd an scannán agus bailíodh iad ón urrann ghabhdóra ag 0,2,4,6,8,12, agus 24h. Rinneadh an rutin tréscaoilteach carnach a mheas agus a ríomh ag teicníc UHPLC.

4.11.Tréscaoilteacht Skin Muc

Léiríodh tréscaoilteacht LNF trí chraiceann muc le maismhicreascóp íomháithe (IMS, SHIMADZU, samhail: iMScopoe TRIO, Kyoto, an tSeapáin). Gearradh an craiceann muc i 1.5 × 1.5 cm2. Cuireadh an rutin, sliocht fenugreek, agus LNF i bhfeidhm ar an gcraiceann muiceola gearrtha agus stóráiltear iad ag 4 céim ar feadh 24 h. Gearradh na samplaí le crióstat, iad a chur ar shleamhnán gloine indiam brataithe le hocsaíd stáin, agus a spraeáil le 9-substaint mhaitrín aimínaicridín (9-AA).Stóráladh na samplaí ag-20 céim roimh anailís. Rinneadh anailís ar fhorleagan d'íomhánna optúla an rutin ag 609.15 m/z.

4.12.Caliméadair Scanadh Difreálacha (DSC) Carachtar

Rinneadh anailís calraiméadrachta scanadh difreálach (DSC) chun leáphointe an LNF a chinneadh ag baint úsáide as calraiméadar scanadh difreálach (DSC, Mettler Toledo DSC1)[63]. Tar éis iad a mheá go cruinn, cuireadh na samplaí i pannaí alúmanaim agus séalaithe le clúdach. Sa phróiseas scanadh, cuireadh ráta téimh 10 céim i bhfeidhm sa raon teochta ó 25 go 350 céim faoi ghás nítrigine glanta ag 40 ml / min. 4.13.Cealla Craicinn Comhshaothraithe Daonna a Thógáil

Cuireadh síolú cealla fibroblast deirmeach daonna ag 8.5 × 104 cealla / go maith isteach i 12 Ionsáigh cultúr tobair (Corning, Corning, NY, SAM) agus saothraithe ar feadh 24 h. Cuireadh an dara agus an tríú sraith de fibroblast deirmeach leis an gcéad sraith arís agus arís eile ar laethanta as a chéile. Tar éis 24 uair an chloig den tríú sraith a chur leis, cuireadh HaCaT le síolú ansin ag cealla céime 8.5 × 10/go maith ar na sraitheanna foirmithe fibroblast agus saothraíodh é ar feadh 24 h eile, roimh an turgnamh.

4.14.Imscrúdú ar Inmharthanacht Cille agus Rún MMPanna tar éis Nochtadh UV i gCealla Craicinn Chomhshaothraithe

Rinneadh réamhchóireáil ar chealla craicinn comhshaothraithe daonna le 7 ug/mL de eastóscán agus 100 ug/mL de LNF (7 ug/mL de choibhéis eastóscáin), mar aon le 100 ug/mL de bhán agus 10 ug/mL d’aisbhealaithe mar rialú dearfach. , ar feadh 24 h. Ansin nite cealla craiceann comhshaothraithe faoi dhó le PBS agus cuireadh faoi réir 5J/cm2 de UVA agus 30mJ/cm2 de ionradaíocht UVB (Solar Simulators, NY, USA). Tar éis ionradaíocht UV, goraíodh cealla craiceann comhshaothraithe tuilleadh le samplaí tástála ar feadh 24 h. Bailíodh an Feitheoir ansin le haghaidh cainníochtú MMP1 agus MP9. Rinneadh leibhéil na táil MMP1 agus MMP9 UV-spreagtha i gcealla craiceann comhshaothraithe daonna a thomhas le feisteáin mheasúnachta imdhíon-ionsorbacha einsím-nasctha (MMP1: ab215083 agus MMP9: ab100610, abcam, Cambridge, UK) de réir prótacail déantúsaíochta.

Rinneadh measúnú ar inmharthanacht na gcealla craiceann comhshaothraithe daonna tar éis nochtadh UV trí úsáid a bhaint as trealamh measúnaithe inmharthanachta cealla luminescent CellTiter-Glo (Promega, Madison, WI, SAM). Tar éis 24h de nochtadh UV, nite cealla craiceann comhshaothraithe faoi dhó le PBS agus cuireadh 100 μL de Glo Lysis Buffer (Promega, Madison, WI, SAM) isteach i ngach tobar. Tar éis goir ar feadh 10 nóiméad, cuireadh 50 uL d'imoibrí CellTiter-Glo leis agus gor é ag teocht an tseomra ar feadh 10 nóiméad. Rinneadh an comhartha luminescent a thomhas ansin trí úsáid a bhaint as luminometer microplate (SpectraMax L, Feistí Móilíneach).

4.15.Anailís Staidrimh

Léiríodh na torthaí mar mheán ± diall caighdeánach (SD). Rinneadh anailís ar dhifríochtaí suntasacha trí thástáil an Mhic Léinn nó anailís aontreo nó dhá threo ar athraitheas (ANOVA) agus tástáil iar hoc Tukey (GraphPad Prism 9) ina dhiaidh sin, le luachanna p<0.05 considered="" statistically="">

5. Conclúidí

Le chéile, thug an taighde seo dhá mholadh mhalartacha. Ar an gcéad dul síos, níor breathnaíodh rutin ní hamháin i dtéarmaí cosanta radaíochta ultraivialait agus substaint frithocsaídeach ach úsáideadh é freisin mar mharcóir caighdeánach méarloirg crómatagram agus príomhthagairt ar ghníomhaíocht frith-aosaithe ó sliocht púdar síolta fenugreek. Ar an dara dul síos, léiríodh meicníochtaí móilíneacha mar bhunús le sliocht eatánólach i gcoinne aosú. Léirigh an sliocht airíonna bitheolaíocha nua, mar shampla gníomhaíocht frith-collagenase, as a d'fhéadfadh táirgeadh collagen, agus cosc ​​a chur ar dhíghrádú collagen, a thagraíonn do ghníomhaire frith-aosaithe nádúrtha eile a d'fhéadfadh a bheith ann do tháirgí frith-aosaithe. Is féidir teicníochtaí imchochaithe a úsáid chun na comhdhúile bithghníomhacha agus próisis díghrádaithe ceimiceacha agus fisiceacha a chosaint, agus chun a ngníomhaíocht bhitheolaíoch a fhadú go dtí go n-úsáidtear iad. Laghdaíonn an teicníc seo tocsaineacht sleachta luibhe freisin. Sa staidéar seo, tá liposomes foirmlithe an-chobhsaí agus tá scaoileadh fada acu. Is féidir le nanafhoirmiúchán feabhas a chur ar chumas sliocht fenugreek ar airíonna frith-aosaithe. Ar bhonn an staidéir seo, molaimid go bhféadfaí LNF a chur i bhfeidhm mar chomhábhar gníomhach geallta chun dul in aois craiceann a chosc.

Baintear an t-alt seo as Pharmaceuticals 2022, 15, 254. https://doi.org/10.3390/ph15020254 https://www.mdpi.com/journal/pharmaceuticals