Ergosta-7,9(11),22-triail-3 -oliseanna AD a Tharrtháil Trí Ghníomhachtú Microglia a Mhodhnú Ach Ní Strus Ocsaídeach é

Teibí: Bhí Ergosta-7,9(11),22-trien-3 -ol (EK100) scoite amach ón bhfungas íocshláinte atá sainiúil don Téaváin Antrodia camphorate, a bhfuil cáil air as cur chun cinn sláinte agus frith- éifeachtaí ag dul in aois i leigheas tíre. Is galar mór a bhaineann le dul in aois é galar Alzheimer (AD). Rinneamar imscrúdú ar éifeachtúlacht agus meicníocht fhéideartha ergosta-7,9(11),22-trien-3 -ol le haghaidh comharthaí AD. Baineadh úsáid as Drosophila mar an tsamhail AD le ró-léiriú uile-néarónach ar amyloid daonna-(A ). Rinneamar comparáid idir saolré, feidhm mhótair, foghlaim, cuimhne, strus ocsaídiúcháin, agus bithmharcóirí gníomhachtú microglia agus athlasadh an ergosta22-trien-3 -ol- grúpa cóireáilte go dtí an grúpa rialaithe gan chóireáil. Ergosta-7,9(11), d'fheabhsaigh an chóireáil 22-trien-3 -ol saolré, feidhm mhótair, foghlaim agus cuimhne na samhla AD go héifeachtach i gcomparáid leis an rialú neamhchóireáilte. Laghdaíodh bithmharcóirí gníomhachtaithe agus athlasadh microglia, agus níor tháinig aon athrú ar an sárocsaídiú lipid uileláithreach, ar ghníomhaíocht catalase, agus ar ghníomhaíocht superoxide dismutase. Mar fhocal scoir, tarrthálann ergosta-7,9(11),22-trien-3 -ol easnaimh AD trí ghníomhachtú microglia a mhodhnú ach ní chuireann sé strus ocsaídiúcháin ar fáil.

Is féidir le glycoside cistanche méadú freisin ar ghníomhaíocht SOD i bhfíocháin chroí agus ae, agus laghdaítear go mór an t-ábhar lipofuscin agus MDA i ngach fíocháin, ag scavening go héifeachtach fréamhacha ocsaigine imoibríocha éagsúla (OH-, H₂O₂, etc.) agus a chosaint i gcoinne damáiste DNA a dhéantar. ag OH-radacach. Tá cumas láidir scavenging fréamhacha saor in aisce ag gliocóisídí cistanche feinileatánóideach, cumas laghdaithe níos airde ná vitimín C, feabhas a chur ar ghníomhaíocht SOD i bhfionraí sperm, laghdaigh ábhar MDA, agus tá éifeacht chosanta áirithe acu ar fheidhm membrane sperm. Is féidir le polaisiúicrídí cistanche feabhas a chur ar ghníomhaíocht SOD agus GSH-Px in erythrocytes agus fíocháin scamhóg lucha senescent turgnamhacha de bharr D-galactós, chomh maith le hábhar MDA agus collagen sa scamhóg agus plasma a laghdú, agus ábhar elastin a mhéadú. éifeacht scavenging maith ar DPPH, fadú am hypoxia i lucha senescent, feabhas a chur ar ghníomhaíocht SOD i serum, agus moill a chur ar dhíghiniúint fiseolaíoch na scamhóg i lucha senescent turgnamhach Le díghiniúint moirfeolaíoch cheallacha, tá sé léirithe ag turgnaimh go bhfuil an cumas frithocsaídeach maith ag Cistanche. agus tá an cumas aige a bheith ina dhruga chun galair aosaithe craicinn a chosc agus a chóireáil. Ag an am céanna, tá cumas suntasach ag echinacoside i Cistanche fréamhacha saor in aisce DPPH a scavening agus tá an cumas aige speicis ocsaigine imoibríocha a scaveneáil agus cosc ​​a chur ar dhíghrádú collagen saor ó radacach saor in aisce, agus tá éifeacht mhaith deisiúcháin aige freisin ar damáiste anion radacach saor ó thymine.

Cliceáil Ar Sochair Táibléad Cistanche

【Le haghaidh tuilleadh eolais:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

Eochairfhocail: galar Alzheimer; Drosophila; EK100; ergosta-7,9(11),22-triail-3 -ol

1. Réamhrá

Is fungas míochaine atá uathúil don Téaváin é Antrodia camphorata agus ba bharr eacnamaíoch tábhachtach é do thrádáil eachtrach na Téaváine sa 19ú haois [1]. Sa chéad leabhar staire Taiwan, Tâi-uân Thong-sú (go litriúil Stair Ghinearálta na Téaváine), taifeadadh úsáidí dúchasacha leighis Antrodia camphorate, lena n-áirítear deireadh a chur le pataiginí, "sláinte a fheabhsú", "spreagadh na fola", "díthocsainithe alcóil", " ag cosaint an ae", agus "frith-aosú" [2-4]. Ós rud é go bhfuil dúshlán sláinte daonra domhanda romhainn mar gheall ar aosú [5], tá an staidéar eolaíoch ar leigheas dúchasach chun leas a bhaint as eolas frith-aosaithe ríthábhachtach.

I measc na ngalar mór a bhaineann le dul in aois, amhail díghiniúint macúlach, Atherosclerosis, ailse, agus stróc, is cnó deacair é galar Alzheimer (AD) a scoilteadh mar gheall ar a mheicníocht phaiteolaíoch dothuigthe. Níl cóireáil éifeachtach modhnaithe galair le haghaidh AD ar fáil fós [6]. Áirítear le hipitéisí paiteolaíocha reatha AD, ach níl siad teoranta dóibh, laghduithe ar acetyltransferase choilín, excitotoxicity glutamáit, comhiomlánú béite amyloid (A), fosfarylation tau, friotaíocht inslin inchinn [7], agus athruithe micribhithóim gut [8]. Mar sin féin, is cuma cén cineál cúiseanna tionscanta AD atá i gceist, is iad strus ocsaídiúcháin agus gníomhachtú athlastach microglia na comharthaí coitianta a ghabhann le neurodegeneration AD [9,10]. Rud suimiúil, is imeachtaí idirghaolmhara iad néar-athlasadh agus strus ocsaídiúcháin a bhreathnaítear in AD agus hipitéisithe i bpaiteolaíocht AD. Ar thaobh amháin, cuireann plaiceanna seanaoise de thaisceadh A tús le frithghníomhartha athlastacha, gníomhachtú microglia, scaoileadh cítocine, agus astrocytosis, as a dtagann iarmhairtí neamh-inmhianaithe ar nós gortú néaránach forásach agus, ar deireadh, mífheidhmithe cognaíocha. Féadfaidh gníomhachtú freagairtí imdhíonachta dul i ngleic le pataiginí ionracha le A ar dtús nó deireadh a chur le taiscí iomarcacha A; Mar sin féin, táirgeann an próiseas speiceas ocsaigin imoibríoch (ROS) dosheachanta, rud a d'fhéadfadh damáiste néaróin a dhéanamh sa microenvironment. Ar an láimh eile, d'fhéadfadh A bheith ina chúis le ROS ar bhealach neamhspleách athlasadh. Mar shampla, fuarthas A i seicní mitochondrial iarbháis AD agus d'fhéadfadh sé dul isteach sna mitochondria, rud a chuir isteach ar an slabhra iompair leictreon (ETC) agus mar thoradh air sin giniúint ROS. Féadfaidh ROS ardaithe, ar a seal, scaoileadh cítocín a spreagadh agus athlasadh a thionscnamh [7,9,10]. Mar sin, d’fhéadfadh móilíní frith-ocsaídiúcháin agus frith-athlastacha a bheith ina teiripeoirí féideartha le haghaidh AD.

Léirigh Antrodia camphorate, go háirithe ceann dá chomhdhúile uile-aonraithe brat báite ergosta-7,9(11),22-trien-3 -ol (ar a dtugtar EK100 freisin), frithocsaídeach agus frith - gníomhaíochtaí athlastacha [11-13]. Ina theannta sin, tá Chang et al. [14] Tá sé léirithe go bhfeabhsaíonn antroquinonol, cumaisc eile atá scoite amach ón pór coipthe de Antrodia camphorate, foghlaim agus cuimhne i múnla luch AD le astrogliosis íslithe agus strus ocsaídiúcháin. Mar sin féin, níorbh fhéidir na caidrimh chúiseacha idir an astrogliosis laghdaithe agus an strus ocsaídiúcháin ar chóireáil antroquinonol a dhearbhú, agus tá ísliú strus ocsaídiúcháin curtha i bpost mar fhachtóir idirghabhála [14]. Tástáladh sábháilteacht EK100 roimhe seo de réir Threoirlíne 407 na hEagraíochta um Chomhar agus Fhorbairt Eacnamaíochta (OECD) i múnla lucha 10 agus 20 mg/kg-lá [15]. Mar sin, ghlacamar le comhchruinnithe coibhéiseacha de bheathú saor in aisce do chuileoga torthaí sa staidéar seo.

Is múnla ainmhithe AD dea-bhunaithe é an tsamhail eitilt torthaí (Drosophila melanogaster) de overexpression A 42 [16], le hairíonna tréithrithe AD lena n-áirítear saolré laghdaithe, easnaimh foghlama agus mótair [17], strus ocsaídiúcháin [18], agus gníomhachtú microglial. [19]. I measc na ndúshlán atá ag AD a shamhaltú i Drosophila melanogaster níl aon ghníomhaíocht BACE i Drosophila agus difríochtaí inscne, a léiríonn comharthaí níos déine i gcomhaid fireannaigh. Ní bhreathnaítear iad seo i AD daonna [20]. Mar sin, ghlacamar le peptide daonna A 42 ag cur cuileoga in iúl go múnla AD, nuair nach dteastaíonn aon ghníomhaíocht BACE i dtáirgeadh A 42. Sa staidéar seo, rinneamar tástáil ar cibé an bhfeabhsaíonn EK100 comharthaí AD, agus níos tábhachtaí fós, cibé an bhfuil an dá mhodhnuithe ar strus ocsaídiúcháin agus astrogliosis riachtanach chun AD a mhaolú.

2. Torthaí

2.1. Marthanais Tarrthála agus Dreapadóireachta AD Drosophila

Tá baint ag diagnóis AD le laghdú ar shaolré airmheánach [21], agus tá beagnach leath na n-othar AD ag fulaingt ó shuaitheadh ​​gníomhaíochta [22]. Dá bhrí sin, rinneamar tástáil ar cé acu an gcuireann sliocht Antrodia camphorata ergosta-7,9(11),22-trien-3 -ol (EK1{00) feabhas ar chumas marthanais agus dreapadóireachta Múnla AD Drosophila. Fuaireamar amach gur chuir cóireáil le 125 nó 250 µg/mL de ergosta-7,9(11),22-trien-3 -ol feabhas suntasach ar mharthanacht AD Drosophila (p < 0.01) (Fíor 1A agus Tábla Forlíontach S1), ach nár fheabhsaigh ach dáileog ard (250 µg/mL) dreapadóireacht AD Drosophila (Fíor 1B). Ós rud é gur comharthaí cliniciúla AD iad easnaimh marthanais agus soghluaisteachta, baineadh úsáid as an tiúchan 250 µg/mL, a d'fheabhsaigh an dá shiomptóm, sna himscrúduithe seo a leanas.

2.2. Ergosta-7,9(11),22-triail-3 -ol Foghlama Tarrthála agus Cuimhne Aonuaire ar AD Drosophila

Ansin, rinneamar tástáil ar cibé an bhfeabhsaíonn cóireáil ergosta{{{{0},9(11),22-trien-3 -ol lochtanna foghlama agus cuimhne, sainchomhartha de AD. Cóireáladh cuileoga AD le ergosta- 7,9(11),22-trien-3 -ol ag 250 ug/mL ar feadh 14 lá agus rinneadh tástálacha foghlama agus cuimhne orthu le T- gcathair ghríobháin. Mar a léirítear i bhFíor 2A, i gcomparáid leis an rialú cineál fiáin (AD(-)/EK(-)), tháinig laghdú suntasach ar chumas foghlama an rialaithe AD (AD( móide )/EK(−)) (p < 0.01), agus d’fheabhsaigh cóireáil ergosta cumas foghlama AD (p < 0.05). Ina theannta sin, d'fheabhsaigh ergosta-7,9(11), an chóireáil 22-trien-3 -ol an chuimhne laghdaithe uair an chloig ar AD (Fíor 2B).

2.3. Rinne Ergosta-7,9(11),22-triail-3 -ol Gníomhachtaithe Microglial Modhnaithe in AD Drosophila

Ansin, rinneamar tástáil ar cé acu an laghdaíonn cóireáil ergosta-7,9(11),22-trien-3 -ol gníomhachtú micriglial in AD. I AD, tá phagocytosis agus neurodegeneration ag gabháil le microglia gníomhachtaithe [23]. I Drosophila, is é an marcóir imghabhála cille microglia, agus mar sin an marcóir gníomhachtaithe microglial, an abairt draper (Drpr) agus an CED le sruth [24]. Tar éis cóireáil ergosta-7,9(11),22-trien-3 -ol, maraíodh cuileoga AD, agus baineadh RNA as ceann na gcuileog le haghaidh RT-qPCR. Mar a léirítear i bhFíor 3A, bhí an dá Drpr thíos-rialaithe go suntasach in ergosta-7,9(11),22-trien-3 -ol-chóireáil AD Drosophila i gcomparáid leis an AD gan chóireáil. Tugann sé seo le tuiscint gur laghdaigh ergosta22-trien-3 -ol gníomhachtú micriglial in AD Drosophila. Ina theannta sin, laghdaigh ergosta-7,9(11), an chóireáil 22-trien-3 -ol athlasadh an CNS freisin, mar a léiríodh i íosrialáil na ngéinte a bhaineann le hathlasadh (Fíor 3B) .

2.4. Rinne Ergosta-7,9(11),22-triail-3 -ol Níor mhodhnaigh Strus Ocsaídeach Uileláithreach in AD Drosophila

Ansin, rinneamar tástáil ar cibé an bhfuil gá le strus ocsaídiúcháin uileláithreach - ie, strus ocsaídiúcháin coirp iomláin a mhodhnú chun ergosta-7,9(11),22-trien-3 -ol chun AD a tharrtháil. Níor athraigh cóireáil Ergosta-7,9(11),22-triail- 3 -ol an sárocsaídiú lipid (Fíor 4A), gníomhaíocht catalase (Fíor 4B), gníomhaíocht superoxide dismutase (Fíor 4C) , nó léiriú géinte ocsaídiúcháin a bhaineann le strus (Fíor

3. Plé

Tuairiscíonn an staidéar seo an éifeachtúlacht agus an mheicníocht bhunúsach fhéideartha a bhaineann le ergosta-7,9(11),22- iarracht-3 -ol, sliocht as Antrodia camphorate, le haghaidh modhnú siomptóim AD ag baint úsáide as an Drosophila samhail le overexpression daonna-A. D’fheabhsaigh Ergosta-7,9(11),22-triail-3 -go héifeachtach an fhoghlaim agus an chuimhne agus chuir sé le saolré othar le AD. Ina theannta sin, laghdaíodh bithmharcóirí gníomhachtaithe agus athlasadh microglia, agus níor athraíodh strus ocsaídiúcháin uileláithreach.

Tá go leor foinsí strus ocsaídiúcháin in AD, lena n-áirítear ach gan a bheith teoranta do ghníomhachtú díolúine dúchasach - mar shampla, is foinsí freisin iad carnadh A, cur isteach ar mitochondria ag A , hyperphosphorylated tau, agus malmetabolism miotail [25]. Cé go bhféadfadh athlasadh agus strus ocsaídiúcháin a chéile a chothú go cómhalartach, is féidir linn glacadh leis nach dtarlaíonn a n-athruithe sioncrónacha ach amháin i gcúinsí ina bhfanann foinsí eile strus ocsaídiúcháin seasmhach. Mar sin féin, ní hé seo an cás sa staidéar seo. Laghdaíonn díolúine dúchasach, go háirithe gníomhachtú microglia, ag an am céanna a rannchuidiú le himréiteach A , rud a d'fhéadfadh carnadh A a bheith mar thoradh air. Rud suimiúil, cuireann carnadh A féin faoi deara strus ocsaídiúcháin a tháirgeadh ar bhealaí éagsúla. Mar sin, féadfaidh gníomhachtú microglial laghdaithe EK1000 agus freagairtí athlastacha go páirteach néaróin a chosaint ó ionsaithe imdhíonachta seach-sprioc ach íocfaidh sé an praghas ar mhaolú imréitigh A. Mar sin, d’fhéadfadh go léireodh toradh an staidéir seo teorannú na straitéise spriocdhírithe ar mhicriglia, ar a laghad sa tsamhail AD Drosophila.

Déantar cur síos ar an gcóras imdhíonachta dúchasach microglia-idirghabhála mar chlaíomh dúbailte-imeall i galair neurodegenerative, go háirithe AD [26,27]. Déanann microglia gníomhachtaithe iarracht pataiginí tocsaineacha cosúil le A a bhaint, ach déanann siad damáiste néarónach sa mhicrithimpeallacht dosheachanta. D’fhéadfadh sé go dtabharfaí le tuiscint má sháraítear 250 µg/mL EK100 laistigh de 35 lá go bhfuil an straitéis chun gníomhachtú microglia a ísliú teoranta ó thaobh céime ó thaobh na paiteolaíochta de, ar a laghad i gcás na samhla AD cuileog torthaí. Ina theannta sin, theip ar ísliú suntasach bithmharcóirí do ghníomhachtú microglial agus freagra athlastach a aistriú go feabhas suntasach céanna ar mharthanas, agus d'fhéadfadh feidhm CNS a mhíniú go páirteach ag gné claíomh dúbailte-imeall na microglia. Tugann sé seo le tuiscint nach é gníomhachtú microglia an t-aon fhachtóir ná an ceann is tábhachtaí maidir le dul chun cinn AD. Tugann gníomhachtú microglial íslithe le tuiscint freisin go ndearnadh díghrádú an ró-bhrú A a mhúchadh go páirteach sa mhúnla cuileog torthaí, rud a d'fhéadfadh an básmhaireacht níos airde a mhíniú don tiúchan EK100 níos airde idir aois 35 agus 52 lá.

Tuairiscíodh Antroquinonol, sliocht eile ó Antrodia camphorate, as a éifeachtúlacht i gcóireáil lucha AD, a bhfuil ísliú strus ocsaídiúcháin curtha i bpost mar fhachtóir idirghabhála [14]. Mar sin, d’fhéadfadh sé seo a thabhairt le tuiscint go bhfeabhsóidh antroquinonol agus ergosta comharthaí AD trí bhealaí neamhspleácha, trí idirghabháil a dhéanamh ar strus ocsaídiúcháin nó nach ea, faoi seach. Mar sin, bheadh ​​sé suimiúil a thástáil cibé an mbeadh éifeacht sineirgíoch ag comhchóireáil le antroquinonol agus ergosta{-7,9(11),22-trien-3 -ol ar fheabhsú AD.

Le haghaidh céim luath AD, is é príomhfhócas dearadh na ndrugaí ná deireadh a chur le taisceadh A, (mar shampla san aducanumab antashubstaint mhonaclónach a ceadaíodh le déanaí [28], in ainneoin a chonspóide faoi bhuntáistí cliniciúla íosta agus neamhéifeachtúlachta i gceann den dá thrialacha cliniciúla chéim III. [29]), nó iarrachtaí chun glacadh micriglial de A [30–32] a mhéadú. Mar sin féin, le haghaidh céimeanna measartha nó dul chun cinn AD, cuireann ró-ghníomhachtú microglia go contrártha le neurodegeneration [33], agus mar sin tá gá le straitéisí teiripeacha eile.

4. Ábhair agus Modhanna

4.1. Cothabháil Stoc Eitilte agus Tomhas Reatha Saoil

Fuarthas an brú A transgenic Drosophila H29.3/CyO ó [16] agus bhí sé outcrossed le w(CS10) ar feadh sé ghlúin. Trasnaíodh an líne tiománaí pan-néarach elav-GAL4c155 le w(CS10) ar feadh sé ghlúin. Baineadh úsáid as an líne w1118 súl bán (Bloomington Drosophila Stock Centre #3605) a thrasnáil amach le líne Canton S (Bloomington Drosophila Stock Centre # 64349) 10 n-uaire (w (CS10)) mar stoc caighdeánach. Fuarthas an líne tiománaí pan-néarach elav-GAL4c155 ó Lárionad Stoc Bloomington Drosophila (#458). Ba é géinitíopa na gcuileoga turgnamhacha - .i. an tsamhail AD - ná [elav; H29.3/ móide ], a roghnaíodh ón sliocht F1 gan an marcóir CyO. Coinníodh na cuileoga i meán caighdeánach cornmeal ag 25 ◦C faoi thimthriall 12 h éadrom-dorcha. Maidir le T-maze, an teacht chun cinn [elav; H29.3/ móide ] bailíodh cuileoga (an dá inscne measctha agus nach maighdean) agus saothraíodh iad le nó gan cóireáil EK100 go dtí d14 tar éis teacht chun cinn. Chun maireachtáil, dreapadóireacht, agus RT-qPCR, níor úsáideadh ach na cuileoga fireann. Bailíodh samplaí RNA ag d30 tar éis teacht chun cinn nuair a léirigh an saolré agus na cuair dreapadóireachta araon deighilt shuntasach i gcomparáid leis an tsamhail AD gan chóireáil.

In anailís ar shaolré, ardaíodh fiche nó tríocha cuileog i vial bia le CS nó gan CS; ullmhaíodh ceithre vials ar a laghad le haghaidh gach cóireála. Cuireadh vials bia in ionad gach 2 go 3 lá, agus rinneadh cuileoga marbh a chomhaireamh ag an am sin. Rinneadh ar a laghad trí mhacasamhlú in aghaidh na trialach. Sainmhínítear an céatadán marthanais mar líon na gcuileoga beo roinnte ar líon iomlán na gcuileoga ag tús na tástála.

4.2. Ergosta-7,9(11),22-triail-3 -ol (Ek100)

Baineadh Ergosta-7,9(11),22-trien-3 -ol as an bronntanas cineálta ó Antrodia camphorata, mar a cuireadh síos air roimhe seo [34]. Cruthaíonn Ergosta-7,9(11),22-trien-3 -ol púdar ar dhath buí éadrom ag teocht an tseomra. Ullmhaíodh an tuaslagán stoic ag tiúchan 6.25 mg/ml in EtOH díreach roimh é a úsáid. Maidir le measúnuithe ar shaolré agus frith-gheotais, ba iad na tiúchain deiridh ná 125 agus 250 µg/mL. Maidir le measúnachtaí cuimhne foghlama agus slonn géine, ba é an tiúchan deiridh ná 250 µg/mL. Is é an meáchan móilíneach EK100 ná 396.65. Mar sin is iad na tiúchana molar comhfhreagracha ná 315 nó 630 µM, faoi seach. Cóireáladh cuileoga le dhá dháileog de EK100 agus na tiúchain deiridh de 125 agus 250 µg/mL measctha sa bhia trí bheathú ad libitum. Bhí an méid céanna tuaslagóra EtOH sa bhia rialaithe agus a bhí sna grúpaí turgnaimh leis an tiúchan EtOH deiridh de 3 faoin gcéad v/v. Thosaigh an chóireáil ón teacht chun cinn go dtí an pointe ama bailithe sonraí do gach measúnacht. Le haghaidh marthanais agus measúnacht dreapadóireachta, tugadh an chóireáil ar feadh an tsaoil. Rinneadh cur síos ar líon na gcuileog do gach macasamhlú i roinn an mhodha de gach measúnacht. Chomh maith leis sin rinneamar tástálacha ar shaolré le cuileoga de chineál fiáin cóireáilte/neamhchóireáilte chun sábháilteacht an ergosta a chinntiú-7,9(11),22-trien-3 -ol i múnlaí cuileoga (Fíor Forlíontach S1 ).

4.3. Measúnachtaí Antigeotaxis

Tá an prótacal reatha bunaithe ar mhodh a foilsíodh roimhe seo [35], le roinnt modhnuithe. Go hachomair, baineadh úsáid as vial plaisteach trédhearcach sorcóireach le trastomhas de 2.5 cm agus airde 9.5 cm (beidh níos faide fíneáil, ach beidh sé níos deacra a láimhseáil) mar an gaireas geotaxis. Bhí bun an vial brataithe le sraith amháin de bhia eitilt mar mhaolú. Bhí marc 5 cm os cionn an mhaolú ceangailte le dromchla seachtrach an vial. Bhí an taobh eile den vial oscailte, agus luchtaíodh cuileoga as sin. Ós rud é go ndearnadh an mheasúnacht i gcomhthráth leis an measúnú marthanais, bhí líon na gcuileog luchtaithe comhionann leis na cinn a tháinig slán ag an nóiméad sin. Bhí na cuileoga luchtaithe isteach sa vial; bhí an barr séalaithe le caipín agus bun an vial arís agus arís eile (ar feadh dhá soicind) cnag i gcoinne an dromchla crua ar a raibh sé ina sheasamh (binse saotharlainne sa chás seo). Bhí an cnagadh láidir go leor chun na cuileoga a scanrú agus iad a dhéanamh dreapadh ar feadh na mballaí vial, ach ní raibh sé chomh láidir sin go ndéanfaí dochar fisiceach dóibh. Rinneadh an próiseas iomlán a fhístaifeadadh ar feadh 18 soicind, agus bhí líon na gcuileog ag dreapadh os cionn an marc 5 cm faoi deara agus curtha in iúl mar faoin gcéad do gach grúpa. Rinneadh líon na gcuileoga a dhreapadh thar an marc 5 cm a chomhaireamh. Rinneadh ceithre mhacasamhlú do gach grúpa. Sainmhínítear céatadán an chumais dreapadóireachta mar líon na gcuileoga dreapadóireachta roinnte ar líon iomlán na gcuileoga ag tús na tástála. Rinneadh tástáil ar chumas dreapadóireachta freisin i gcuileoga de chineál fiáin cóireáilte/neamhchóireáilte chun sábháilteacht ergosta a chinntiú-7, 9 (11), 22-trien-3 -ol i múnlaí cuileoga (Fíor Forlíontach S2) .

4.4. Ardán Foghlama agus Cuimhne Drosophila (T-Maze)

Chun foghlaim agus cuimhne Drosophila a bhreathnú, cuireadh thart ar 100 cuileog ar dtús sa seomra cupáin uachtarach, ar féidir voltas leictreach a sholáthar agus turraing leictreach a sheachadadh do na cuileoga. Seachadadh cuileoga ar dtús i mboladh 1 (MCH) chomh maith le tonnta turrainge leictreacha. Ansin seachadadh cuileoga boladh 2 (OCT) gan tonnta turrainge leictreacha. Tar éis na hoiliúna, aistríodh na cuileoga chuig an spás thíos, inar soláthraíodh dhá thaobh oscailte le boladh 1 nó boladh 2, faoi seach. Trí threo gluaiseachta na gcuileoga a bhreathnú, is féidir an claonadh boladh 2 thar bholadh 1 a mheas leis an Innéacs Feidhmíochta (PI), a shainmhínítear mar an difríocht i líon na gcuileoga idir dhá bholadh roinnte ar líon iomlán na gcuileoga. Léiríonn an Innéacs Feidhmíochta cumas foghlama agus cuimhne Drosophila [36]. Cuireadh riocht ar ghrúpa eile cuileoga leis na péireálacha bolaithe droim ar ais sa chaoi is go raibh gach boladh mar thurraing leictreach móide am amháin agus uair amháin mar thurraing leictreach −. Rinneadh meán na PI den dá thástáil seo mar an PI deiridh de mhacasamhlú amháin. Tástáladh "1 h-chuimhne" tar éis 1 h spásála leis an oiliúint, agus rinneadh tástáil ar "foghlaim", i gcodarsnacht leis sin, tar éis spásáil 1.5 nóiméad leis an oiliúint. Rinneamar tástáil freisin ar sheachaint MCH agus OCT na cuileoga AD le nó gan cóireáil EK100 chun a chinntiú go bhfuil an chóireáil ina chúis le claonadh i gcoinne na bolaithe aversive (Figiúr Forlíontach S3).

4.5. PCR cainníochtúil

Scaradh cinn agus coirp roimh eastóscadh RNA. I gcás macasamhail amháin, rinneadh ainéistéiseach ar na cuileoga le CO2; a bailíodh, 100 ag an am, i feadáin Eppendorf; agus ansin tumtha i nítrigin leachtach ar feadh 1 nóiméad chun na coirp a dhéanamh brittle. Lódáltar na cladaigh reoite a d'eascair as sin ar stoic de chroiteoirí criathar (Bunsekifurui, Uimh. 40 agus Uimh. 25) agus corraíodh iad. Bhris na coirp óna chéile agus sórtáladh iad de réir mhéid na mogaill criathar ina dhá chodán ar leith: "cinn" agus "coirpí". Baineadh an RNA iomlán le trealamh RNeasy Mini (Qiagen, Düsseldorf, an Ghearmáin), agus ansin úsáideadh é chun cDNA a shintéisiú le Kit Sintéise VersoTM cDNA (Thermo Scientific, Waltham, MA, SAM). Rinneadh leibhéil léirithe RNA de na géinte imscrúdaithe a chainníochtú trí PCR fíor-ama (Bithchórais Fheidhmeach 7700, Thermo Scientific, Waltham, MA, SAM) leis an Máistir-Mheascán qPCR Green Maxima SYBR Green (Thermo Scientific, Waltham, MA, SAM). Normalaíodh na torthaí go dtí an méid coibhneasta Gapdh nó Rpl32. Tá na primers a úsáidtear liostaithe thíos. Gapdh: 50 -GAAAAAGCGGCAGTCGTAAT-30 agus 50 -AATTCCGATCTTCGACATGG-30 ; Drpr: 50 -TGTGATCATGGTTACGGAGGAC-30 agus 50 -CAGCCGGGTGGGCAA{15}} ; CED: 50 - CGTTTACAAGGAGCGACT-30 agus 50 -TTTCCCAGATTGAAGAGCAGG{19}} ; Cat: 50 -TGACT ACAAAAACTCCCAAACG-30 agus 50 -TTGATTCCAATGGGTGCTC-30 ; PHGPx: 50 -TGACA TCGGCGAGGTGT-30 agus 50 -CGGTCTGCTTGGCCTTTA{27}} ; Cnc: 50 -GCCAACTATGGTGG TGGAGT-30 agus 50 -ACGCTGCGATTCAGACG-30 ; SOD1: 50 -GTCGACGAGAATCGTCAC CT-30 agus 50 -GGAGTCGGTGATGTTGACCT{36}} ; SOD2: 50 -AAATTTCGCAAACTGCAAGG- 3 0 agus {{40}GGTCGCCATTTGTTGCTATT-30 ; SOD3: 50 -TCAGCATGGGTGCTCACTAT-30 agus 50 -TAATGCCCGTGGTTGG-30 ; mkk3: 50 -CCGCTACCCATACGACAAT-30 agus {{50}GAATTCCGGCGAAAATGT-30 ; mekk1: 50 -TTTAACGGCAGTGGAACTGT-30 agus 50 - TGCATCTGCAACTGCTCAC-30 ; imd: 50 -AGATCGACCaireATAATC-30 agus 50 -AATCC ACTGGAGCAACAGC-30 ; rac1: 50 -CCGTGTTCGACAACTCG-30 agus 50 -AGTCGGTCG TAGTCCTCCTG-30 ; relish: 50 -GCCATACTCCCTTGGAATTG-30 agus 50 -TCTCCCTTCTCCG GATACAC-30 ; Rpl32: 50 -CGGATCGATATGCTAAGCTGT-30 agus 50 -CGACGCACTCTGTTG TCG-3.

4.6. Measúnachtaí Strus Ocsaídeacha

Rinneadh trí mhacasamhlú den sárocsaídiú lipid, gníomhaíocht catalase, agus gníomhaíocht superoxide dismutase a thomhas ag BIOXYTECH LPO-586 (OxisResearch, OXIS International, Beverly Hills, CA, USA), an Catalase Assay Kit (Cayman Chemical, Ann Arbor, MI). , USA), agus an Superoxide Dismutase Assay Kit (Cayman), faoi seach, ag leanúint treoracha an mhonaróra. Go hachomair, rinneadh measúnú ar ghníomhaíocht SOD trí dhíscaoileadh radacach sárocsaíd a ghintear le xanthine oxidase arna sholáthar ag trealamh a thomhas agus braitheadh ​​é trí shalann tetrazolium a thiontú go dath formazan, arna chainníochtú ansin trí ionsúiteacht ag 440-460 nm. Rinneadh gníomhaíocht CAT a mheasúnú trí fhoirmiú formaildéad ó meatánól a thomhas i láthair H2O2 arna chatalú ag CAT, arna bhrath ag 4-aimín-3- hiodrazino-5-mercapto-1 chróigineach arna sholáthar ag trealamh ,2,4-triazole, arna chainníochtú ansin ag an ionsúchán ag 540 nm. Rinneadh measúnú ar ghníomhaíocht sárocsaídiúcháin lipid trí dhianscaoileadh sárocsaídí aigéid shailligh il-neamhsháithithe isteach i malonaldehyde (MDA) agus 4-hiodrocsailcéineacha a thomhas, arna bhrath ag an N-meitil crómaigineach arna sholáthar ag trealamh, arna chainníochtú trí ionsúiteacht ag 586. nm. Maidir leis na measúnachtaí SOD, Cat, agus LPO, ba é líon na gcuileoga iomlána aonchineálaithe i ngach macasamhail ná 50, 50, agus 100, faoi seach.

4.7. Anailís Staidrimh

Rinneadh measúnú ar thábhacht na difríochta idir na cuair mharthanais agus cuair dreapadóireachta na ngrúpaí cóireáilte agus rialaithe de réir log-ranga (Mantel– Cox) agus tástálacha Gehan–Breslow–Wilcoxon. Rinne t-thástáil an Mhic Léinn measúnú ar thábhacht na difríochta idir an t-innéacs feidhmíochta de chuimhne foghlama ergosta-7,9(11),22-trien-3 -ol cóireáilte, agus grúpaí rialaithe.

5. Conclúidí

D'fhíoraíomar go bhfeabhsaíonn ergosta-7,9(11),22-trien-3 -ol (EK100) ó Antrodia camphorate marthanacht, foghlaim agus cuimhne i múnla Drosophila AD, le bithmharcóirí laghdaithe gníomhachtú microglia agus athlasadh. Ina theannta sin, níor tharla an modhnú siomptóim trí laghdú ar strus ocsaídiúcháin uileláithreach, rud a chiallaíonn go bhfeabhsaíonn ergosta-7,9(11), agus 22-trien-3 -ol comharthaí AD trí bhealaí éagsúla go dtí ceann eile. Sliocht Antrodia camphorate, antroquinonol. Laghdaigh EK100 gníomhachtú agus athlasadh microglial go héifeachtach, rud a d'fhéadfadh cabhrú le heasnaimh chognaíocha tipiciúil a bhaineann le AD a aisiompú, mar easnaimh foghlama agus cuimhne.

Ábhair Forlíontacha:Tá siad seo a leanas ar fáil ar líne. Figiúr S1: Marthanais cuileoga de chineál fiáin cóireáilte le EK100; Fíor S2: Cuileoga den chineál fiáin a dhreapadh cóireáilte le EK100; Figiúr S3: Seachnadh boladh corrach ar chuileoga AD cóireáilte le EK100; Tábla S1: Staitisticí na gcuar marthanais.

Ranníocaíochtaí Údair:Dhear H.-PL, Y.-HK, agus W.-YL na turgnaimh. Chuir Y.-HK le hullmhú EK100. Rinne JC, L.-ZC, M.-SC, L.-WS, agus T.-NC na turgnaimh. Ghlac na húdair go léir páirt in ullmhú na lámhscríbhinne. Tá an leagan foilsithe den lámhscríbhinn léite agus aontaithe ag gach údar.

Maoiniú: Fuair ​​an obair seo tacaíocht ó dheontais ón Aireacht Eolaíochta agus Teicneolaíochta sa Téaváin (MOST 108-2320-B-039-031-MY3, MOST 109-2314-B-039-030, MOST 110-2314- B-039-009), Ollscoil & Ospidéal Leighis na Síne (CMU109-MF-85, CMU108-MF-68, CMU108-MF{{12) }}, CMU109- AWARD-02, agus DMR-109-150), agus ón gClár Lárionad Taighde um Réimsí Réadmhaoine faoi chuimsiú an Tionscadail Ardoideachais Sprout ag an Aireacht Oideachais (MOE) sa Téaváin (CMRC-CHM-2-1).

Ráiteas an Bhoird Athbhreithnithe Institiúideach:Neamhbhainteach.

Ráiteas Toilithe Feasach:Neamhbhainteach.

Ráiteas Infhaighteachta Sonraí:Tá na sonraí a úsáideadh chun tacú le torthaí an staidéir seo san áireamh san alt.

Coinbhleachtaí Leasa:Tá Y.-HK ar cheann de na aireagóirí ach ní sannaí na paitinne US-9757393-B2 é dar teideal "Díorthaigh ergostatrien-3- -ol ó aniridia camphorate agus frith-glycemic, frith-hiperlipidemic agus laghdú ar úsáid saille hepatic de". Dearbhaíonn údair eile nach bhfuil aon leasanna iomaíocha acu. Ní raibh ról ar bith ag na maoinitheoirí i ndearadh an staidéir; maidir le bailiú, anailísiú nó léirmhíniú sonraí; i scríobh na lámhscríbhinne, nó sa chinneadh na torthaí a fhoilsiú.

Infhaighteacht Samplach:Tá samplaí de na comhdhúile ar fáil ó na húdair.

Tagairtí

1. Davidson, JW Oileán Formosa, san am a chuaigh thart agus san am i láthair: Stair, Daoine, Acmhainní, agus Ionchais Tráchtála. Tae, Camfar, Siúcra, Ór, Gual, Sulfar, Plandaí Eacnamúla, agus Táirgthe Eile; Macmillan & Company: Nua Eabhrac, Nua Eabhrac, SAM, 1903.

2. Tsai, Z. ; Liaw, S. Úsáid agus Éifeacht Ganoderma; Foilsitheoirí Sheng-Yun, Inc.: Taichung, Taiwan, 1985; lgh 116–117.

3. Chen, C.-J. Staidéar ar shaothrú soladach agus bithghníomhaíocht Antrodia camphorata. Fungas. Sci. 2001, 16, 65–72.

4. Geetangili, M. ; Tzeng, Y.-M. Athbhreithniú ar Éifeachtaí cógaseolaíochta de Antrodia camphorate agus a chomhdhúile bithghníomhacha. Comhlánú Evid.-Bunaithe. Malartach. Med. 2011, 2011, 212641. [CrossRef] [PubMed]

5. Ogura, S.; Jakovljevic, MM Daonra domhanda ag dul in aois - cúram sláinte, iarmhairtí sóisialta agus eacnamaíocha. Tosaigh. Sláinte Poiblí 2018, 6, 335. [CrossRef] [PubMed]

6. Cummings, J.; Laoi, G. ; Ritter, A. ; Zhong, K. Píblíne forbartha drugaí galar Alzheimer: 2018. Alzheimer's Dement. Aistrigh. Res. Clin. agallaimh. 2018, 4, 195–214. [CrossRef] [PubMed]

7. Sharma, P.; Srivastava, P.; Seth, A.; Tripathi, PN; Banerjee, AG; Shrivastava, SK Athbhreithniú cuimsitheach ar mheicníochtaí pataigineas a bhaineann le galar Alzheimer agus straitéisí teiripeacha féideartha. Clár. Neurobiol. 2019, 174, 53–89. [CrossRef] [PubMed]

8. Sochocka, M. ; Donskow-Łysoniewska, K.; Diniz, BS; Kurpas, D.; Brzozowska, E.; Leszek, J. Athruithe ar mhicribhithóim an phutóige agus paitigineas de ghalar Alzheimer de bharr athlasadh – athbhreithniú criticiúil. Mol. Neurobiol. 2019, 56, 1841–1851. [CrossRef]

9. Agostinho, P.; A Cunha, R.; Oliveira, C. Neuroinflammation, strus ocsaídiúcháin agus an pathogenesis de ghalar Alzheimer. Curr. Pharm. Des. 2010, 16, 2766–2778. [CrossRef]

10. Galasko, D. ; Montine, TJ Bithmharcóirí damáiste ocsaídiúcháin agus athlasadh i ngalar Alzheimer. Bithmharc. Med. 2010, 4, 27–36. [CrossRef]

11. Kuo, Y.-H. ; Lín, T.-Y.; Tú, Y.-J.; Wen, K.-C.; Canadh, P.-J.; Chiang, H.-M. Éifeachtaí frith-athlastacha agus frithfhótadhormacha ergostatrien-3 -ol, scoite ó Antrodia camphorata, ar chraiceann luiche gan ghruaig. Móilíní 2016, 21, 1213. [CrossRef]

12. Chao, T.-Y.; Hsieh, C.-C.; Hsu, S.-M.; WAN, C.-H.; Lian, G.-T. ; Tseng, Y.-H.; Kuo, Y.-H.; Hsieh, S.-C. Laghdaíonn Ergostatrien-3 -ol (EK100) ó Antrodia camphorata Strus Ocsaídeach, Athlasadh, agus Díobháil ae In Vitro agus In Vivo. Roimhe seo Nutr. Bia Sci. 2021, 26, 58. [CrossRef]

13. Tsai, T.-C. ; Tung, Y.-T. ; Kuo, Y.-H.; Liao, J.-W.; Tsai, H.-C.; Chong, K.-Y.; Chen, H.-L.; Chen, C.-M. Éifeachtaí Frith-Alasacha Antrodia camphorata agus a Chomhdhúil Ghníomhach, Ergostatrien-3 -ol, i Múnla Ischemia Craiceann Luiche. FASEB J. 2015, 29, LB444.

14. Chang, W.-H.; Chen, MC; Laghdaíonn Cheng, IH Antroquinonol leibhéil amyloid inchinn agus feabhsaíonn sé foghlaim spásúlachta agus cuimhne i múnla luch trasgenach de ghalar Alzheimer. Sci. Ionadaí 2015, 5, 1–12. [CrossRef] [PubMed]

15. Chen, Y.-M.; Canadh, H.-C.; Kuo, Y.-H.; Hsu, Y.-J.; Huang, C.-C. ; Liang, H.-L. Éifeachtaí Ergosta-7, 9 (11), 22-trien-3 -ol ó Antrodia camphorate ar Phróifíl Bhithcheimiceach agus Feidhmíocht Aclaíochta Lucha. Móilíní 2019, 24, 1225. [CrossRef]

16. Finelli, A. ; Kelkar, A. ; Amhrán, H.-J.; Yang, H.; Konsolaki, M. Múnla chun staidéar a dhéanamh ar thocsaineacht spreagtha Alzheimer A 42- i Drosophila melanogaster. Mol. cill. Neurosci. 2004, 26, 365–375. [CrossRef] [PubMed]

17. Ping, Y. ; Hahm, E.-T.; Waro, G. ; Amhrán, Q.; Vo-Ba, D.-A.; Licursi, A. ; Bao, H.; Ganoe, L. ; Finch, K. ; Tsunoda, S. Hipirexcitability spreagtha 42-a nascadh le néar-mheathlú, easnaimh foghlama agus mótair, agus saolré níos giorra i múnla Alzheimer. PLoS Géinte. 2015, 11, e1005025. [CrossRef] [PubMed]

18. Rival, T. ; Leathanach, RM; Chandraratna, DS; Sendall, TJ; Ryder, E.; Liu, B. ; Lewis, H. ; Rosahl, T. ; Hider, R. ; Déanann ceimic agus strus ocsaídiúcháin Camargo, L. Fenton idirghabháil ar thocsaineacht an pheptíde -amyloid i múnla Drosophila de ghalar Alzheimer. Eur. J. Neurosci. 2009, 29, 1335–1347. [CrossRef]

19. Ray, A. ; Speese, SD; Logan, MA Tarrthálann draper glial A tocsaineacht i múnla Drosophila de ghalar Alzheimer. J. Neurosci. 2017, 37, 11881–11893. [CrossRef]

20. Jeibmann, A. ; Paulus, W. Drosophila melanogaster mar orgánach eiseamláireach de ghalair inchinne. Int. J. Mol. Sci. 2009, 10, 407–440. [CrossRef] [PubMed]

21. Brookmeyer, R.; Corrada, MM; Curriero, FC; Kawas, C. Marthanais tar éis diagnóis de ghalar Alzheimer. Áirse. Néaról. 2002, 59, 1764–1767. [CrossRef]

22. Lam, LC; Tang, W. ; Leung, V. ; Chiu, HF Próifíl iompraíochta an ghalair Alzheimer i ndaoine scothaosta na Síne – staidéar bailíochtaithe ar an leagan Síneach de scála rátála paiteolaíochta iompraíochta galar Alzheimer. Int. J. Mac Gearailt. Síc. 2001, 16, 368–373. [CrossRef] [PubMed]

23. Schwab, C. ; McGeer, PL Gnéithe athlastacha de ghalar Alzheimer agus neamhoird neurodegenerative eile. J. Alzheimer's Dis. 2008, 13, 359–369. [CrossRef] [PubMed]

24. Mac Dhomhnaill, JM; Trá, MG; Porpiglia, E.; Sheehan, AE; Watts, RJ; Freeman, MR Is é an Draper gabhdóir imtharraingthe coire cille Drosophila a idirghabháil imréiteach glial na n-aisíní scoite. Néaróin 2006, 50, 869–881. [CrossRef]

25. Chen, Z. ; Zhong, C. Strus ocsaídiúcháin i ngalar Alzheimer. Neurosci. Tarbh. 2014, 30, 271–281. [CrossRef]

26. Stankovic, ND; Teodorczyk, M.; Plón, R. ; Zipp, F.; Schmidt, MH Microglia-idirghníomhaíochtaí soithigh fola: Claíomh dhá-imeall i bpaiteolaíochtaí inchinne. Gníomhartha Neuropathol. 2016, 131, 347–363. [CrossRef]

27. Konishi, H. ; Kiyama, H. Microglial TREM2/DAP12 comharthaíocht: Claíomh dhá-imeall i ngalar néaracha. Tosaigh. cill. Neurosci. 2018, 12, 206. [CrossRef] [PubMed]

28. Sevigny, J. ; Chiao, P.; Bussière, T. ; Weinreb, PH; Williams, L.; Maier, M.; Dunstan, R. ; Salloway, S.; Chen, T.; Ling, Y. Laghdaíonn an aducanumab antashubstainte plaiceanna A i ngalar Alzheimer. Dúlra 2016, 537, 50–56. [CrossRef]

29. Lalli, G. ; Schott, JM; Hardy, J.; De Strooper, B. Aducanumab: Céim nua i bhforbairt theiripeach do ghalar Alzheimer? EMBO Mol. Med. 2021, 13, e14781.

30. Takata, K. ; Kitamura, Y. ; Saeki, M.; Terada, M. ; Kagitani, S.; Kitamura, R.; Fujikawa, Y .; Maelice, A. ; Tomimoto, H.; Taniguchi, T. Galantamine-spreagtha amyloid- imréiteach idirghabhála trí spreagadh gabhdóirí aicetylcholine nicotinic microglial. J. Biol. Ceimic. 2010, 285, 40180–40191. [CrossRef] [PubMed]

31. Mandrekar-Colucci, S.; Karlo, JC; Landreth, GE Meicníochtaí atá mar bhunús leis an ngabhdóir mear-iomadaithe sárocsaíde- -idirghabhála imréiteach amalóideach agus aisiompú easnaimh chognaíocha i múnla murine de ghalar Alzheimer. J. Neurosci. 2012, 32, 10117–10128. [CrossRef]

32. McGeer, PL; McGeer, EG Díriú ar mhicreaglia chun galar Alzheimer a chóireáil. Tuairim Saineolaithe. Ther. Spriocanna 2015, 19, 497–506. [CrossRef] [PubMed]

33. Amhrán, WM; Colonna, M. Féiniúlacht agus feidhm na microglia i néar-mhíothlú. Nat. Imdhíonól. 2018, 19, 1048–1058. [CrossRef] [PubMed]

34. Kuo, Y.-H.; Lín, C.-H. ; Shih, C.-C. Coscann ergostatrien-3 -ol ó Antrodia camphorata diaibéiteas agus hipearlipidemia i lucha cóireáilte ar ard-aiste bia trí ghéinte a bhaineann le hepatic a rialáil, iompróir glúcóis 4, agus fosfarú kinase próitéine gníomhachtaithe AMP. J. Agric. Ceimic Bhia. 2015, 63, 2479–2489. [CrossRef] [PubMed]

35. Le Bourg, E.; Línte, FA Hypergravity agus aosú i Drosophila melanogaster. 4. Gníomhaíocht dreapadóireachta. Seaneolaíocht 1992, 38, 59–64. [CrossRef]

36. Waddell, S.; Quinn, WG Cuileoga, géinte, agus foghlaim. Ann. An tUrr Neurosci. 2001, 24, 1283–1309. [CrossRef] [PubMed]

【Le haghaidh tuilleadh eolais:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】