Cothaíonn Epigallocatechin{{0}Gallate Aibiú In Vitro agus Forbairt Suthanna Tar éis IVF Oicítí Muiceola Cuid 2

Déan teagmháil le do thoiloscar.xiao@wecistanche.comle haghaidh tuilleadh eolais

Torthaí

Éifeachtaí EGCG ar an Innéacs Leathnaithe Cumulus

Taispeántar moirfeolaíocht na n-úicítí agus na n-úicítí aibí leis an gcéad easbhrúite comhlacht polar i bhFíoracha Forlíontacha S1A agus S1B, faoi seach. Ar an gcéad dul síos, scrúdaigh muid an t-innéacs leathnaithe cumulus sna úicítí tar éis cóireáil a dhéanamh le tiúchain éagsúla EGCG, agus mar a léirítear i dTábla 1, mhéadaigh EGCG ag 5 agus 10 uM an t-innéacs leathnaithe cumulus go suntasach i gcomparáid leis an ngrúpa rialaithe. (grúpa 5uM in aghaidh 0grúpa uM: 2.989 ±0.068 in aghaidh 2.438±0.081;10 grúpa μM i gcoinne {{30}} grúpa uM: 3.079±0.110 versus 2.438±0.081). Mar sin féin, ní raibh aon éifeacht ag EGCG ag 20 uM ar an innéacs leathnaithe cumulus i gcomparáid leis an ngrúpa rialaithe (grúpa 20 uM i gcoinne grúpa 0μM ∶ 2.879±0.076 i gcoinne 2.438±0.081）.

Cliceáil anseo le do thoil chun tuilleadh eolais a fháil

Éifeachtaí EGCG ar Ráta IVM na n-úicítí

Rinneadh éifeachtaí EGCG ar ráta aibithe in vitro na n-úicítí a chinneadh tuilleadh. Mar a léirítear i dTábla 2, bhí an ráta aibithe úicítí níos airde sna grúpaí 5 agus 20μM i gcomparáid leis an ngrúpa rialaithe EGCG 0 μM; cé nach raibh an difríocht suntasach go staitistiúil (Tábla 2). Ar an láimh eile, mhéadaigh cóireáil 10 μM EGCG go suntasach an ráta aibithe oocyte i gcomparáid leis an ngrúpa rialaithe 0 μM EGCG (10 μM grúpa i gcomparáid le grúpaí 0 μM - 58.63 ± 2.79 faoin gcéad i gcoinne 46.27 ±3.25 faoin gcéad;<>

Éifeachtaí EGCG ar Strus Ocsaídeach na n-úicítí

Chinn an measúnú táirgeachta ROS táirgeadh ROS na n-úicítí a chóireáiltear le EGCG. Léiríodh i bhFíor 1A na híomhánna ionadaíocha de na comharthaí fluaraiseacha ROS in úicítí tar éis cóireála le tiúchain éagsúla EGCG. Léirigh cainníochtú an staining imdhíonfhluaraiseacha gur theip ar EGCG ag 5μM tionchar a imirt ar tháirgeadh ROS sna úicítí i gcomparáid leis an ngrúpa rialaithe 0 μM （Fíor 1B）.EGCG ag 10 agus 20 μM laghdaigh leibhéil ROS na n-úicítí go suntasach i gcomparáid leis an ngrúpa rialaithe 0μM EGCG (Fíor 1B).

Is féidir le Cistanche díolúine a fheabhsú

Toisc go bhféadfadh EGCG ag 10 μM an t-innéacs leathnú cumulus agus an ráta aibithe oocyte a mhéadú, agus freisin leibhéal ROS sna úicítí a laghdú, roghnaíodh EGCG ag 10 μM do na staidéir ina dhiaidh sin. Mar a léirítear i bhFíor 1C, mhéadaigh an EGCG ag 10 uM go suntasach anfrithocsaídeachacmhainn anúicítíi gcomparáid leis an ngrúpa rialaithe 0 uM (Fíor 1C). Ina theannta sin, méadaíodh an leibhéal glutathione agus laghdaíodh an leibhéal MDA sna úicítí cóireáilte le 10 μM EGCG （Fíor 1D agus E）. Ina theannta sin, rinneadh an qRT-PCR chun leibhéil slonn mRNA anocsaídiúcháingéinte a bhaineann le strus lena n-áirítear catalase(CAT), glutathionesárocsaíd（GPx）, agus superoxide dismutase （SOD）. Rinne EGCG ag 10 μM méadú suntasach ar leibhéil slonn mRNA CAT, GPx, agus SOD i gcomparáid leis an ngrúpa rialaithe 0 uM (Fíor 2A-C).

Éifeachtaí EGCG ar na Leibhéil Slonn mRNA deApoptóis-Géinte Gaolmhara sna húicítí

Rinneadh an qRT-PCR chun leibhéil slonn mRNA de ghéinte a bhaineann le apoptosis a chinneadh lena n-áirítear

Bax,Bcl{{{0}} agus caspase-3. Laghdaigh EGCG ag 10 uM go suntasach leibhéil slonn mRNA Bax agus caspase-3 agus mhéadaigh sé an leibhéal slonn mRNA de Bcl-2 i gcomparáid leis an ngrúpa rialaithe 0 μM (Fíor 3A-C）.

Éifeachtaí an EGCG a Úsáidtear le linn IVM agus IVF ar Acmhainneacht Forbartha na n-úicítí

Taispeánadh na híomhánna ionadaíocha do na suthanna agus na blastocysts i bhFíor Forlíontach SIC-S1E.

Mhéadaigh cóireáil le linn IVF go suntasach an ráta scoilteachta agus an ráta blastocyst i gcomparáid leis an ngrúpa rialaithe (Tábla 3). Mhéadaigh cóireáil EGCG le linn IVM an ráta blastocyst go suntasach, ach ní raibh an ráta scoilteachta i gcomparáid leis an ngrúpa rialaithe (Tábla 3). Ina theannta sin, mhéadaigh cóireáil EGCG le linn IVM agus IVC go suntasach an ráta scoilteachta agus an ráta blastocyst i gcomparáid leis na trí ghrúpa eile (Tábla 3). Léirigh na torthaí seo go bhféadfadh EGCG le linn IVM agus IVF acmhainneacht forbartha na n-úicítí a chur chun cinn.

Éifeachtaí an EGCG a Úsáidtear le linn IVM agus VC ar Acmhainneacht Forbartha na n-úicítí

Laghdaigh cóireáil EGCG le linn IVC go suntasach an ráta scoilte agus ráta blastocyst na n-úicítí i gcomparáid leis an ngrúpa gan chóireáil EGCG (Tábla 4). Ar an láimh eile, mhéadaigh cóireáil EGCG le linn IVM go suntasach an ráta scoilteachta agus ráta blastocyst na n-úicítí i gcomparáid leis an ngrúpa gan cóireáil EGCG (Tábla 4). Laghdaigh cóireáil EGCG le linn IVM agus IVC go suntasach an ráta scoilteachta agus ráta blastocyst na n-úicítí. i gcomparáid leis an ngrúpa gan chóireáil EGCG agus an grúpa le cóireáil EGCG le linn IVM (Tábla 4). I dteannta a chéile, léirigh na torthaí seo gur mhéadaigh cóireáil EGCG le linn IVM an poitéinseal forbartha úicítí agus rinne cóireáil EGCG le linn IVC acmhainneacht forbartha na n-úicítí a mhaolú.

Plé

The IVM technique for the COC has been developed and applied to produce offspring in mammals including pigs, however, the rate of blastocytes formation following IVF is still low using IVM oocytes compared with that of in vivo-matured oocytes such as pigs. In pigs, the COCs are usually collected from medium size antral follicles(>Trastomhas 3 mm) i gcás ina bhfuil an cumas ag an úicít aibiú úicítí a chothú, ach ní fhaigheann cealla sómacha follicular an cumas freagairt do spreagthaigh ovulation. Ina theannta sin, de ghnáth méadaíonn timpeallachtaí in vitro táirgeadh cille ROS, rud a bhí gafa mar phríomhchúis le damáiste cille.16 Dá bhrí sin, tá sé riachtanach na coinníollacha cultúir a bharrfheabhsú chun aithris a dhéanamh ar na timpeallachtaí in vivo le haghaidh gnáthfhás agus aibithe úicítí. Sa staidéar reatha, cuireadh tiúchain éagsúla EGCG le meán cultúir IVM, IVF, agus IVC chun cáilíocht aibithe na n-úicítí a urramú. Feabhsaíonn EGCG ag 10 uM go suntasach IVM na n-úicítí muc. Sa staidéar seo, táirgeann forlíonadh EGCG le linn IVF agus IVC dhá éifeacht dhifriúla. Is féidir le forlíonadh 10 uM EGCG le linn IVF ráta scoilteachta na n-úicítí a chur chun cinn, a bhí comhsheasmhach le torthaí ó Spinaci et al, rud a thaispeánann gur mhéadaigh forlíonadh 10 μM EGCG le linn IVF ach nár mhéadaigh IVM an ráta toirchithe go suntasach.17 Éifeacht an Chomh maith leis an EGCG le linn IVF d'fhéadfadh a bheith mar gheall ar a ghníomhaíocht ar an speirm ní ar an OOcyte.

I bpróiseas an chultúir in vitro, tá oicítí agus suthanna faoi lé dosheachanta do sholas agus tiúchan ocsaigine níos airde ná in vivo, rud a d'fhéadfadh táirgeadh feabhsaithe ROS (anion superoxide, sárocsaíd hidrigine, agus hiodrocsaile an-imoibríoch) a bheith mar thoradh air. Tá líon mór staidéir tar éis a thaispeáint gur féidir le forlíonadh frithocsaídeoirí sa mheán IVM feabhas a chur ar chumas forbartha an suth. Is mar fhrithocsaídeoir a fheidhmíonn EGCG go maolaíonn sé na héifeachtaí díobhálacha a bhíonn ag hipiteirme máthartha ar úicítí faoi iamh follicle i lucha.' Léirigh Barberino et al gur mhaolaigh EGCG apoptosis de follicles preantral tríd an gcosán comharthaíochta phosphatidylinositol kinase / próitéin kinase B tar éis cultúr in vitro fíocháin ovarian caorach. agus d'fhéadfadh ról cosanta EGCG a chomhghaolú lena mhaoin frithocsaídeach.Céim I gcomhcheangal le staidéir roimhe seo, léirigh ár dtorthaí go bhféadfadh baint a bheith ag éifeachtaí EGCG ar IVM d'úicítí muc leis an éifeacht frithocsaídeach agus frith-apoptosis, a bhí níos faide. iniúchadh sa staidéar seo.

Is féidir le strus ocsaídiúcháin a bheith mar thoradh ar charnadh iomarcach ROS, agus léirigh ár dtorthaí gur féidir le EGCG an cumas iomlán frithocsaídeach a mhéadú agus leibhéal ROS agus MDA a laghdú sna úicítí muc. D’fhéadfadh sé seo a bheith mar gheall ar gur féidir le EGCG deireadh a chur go díreach le ROS agus/nó gur féidir le EGCG gníomhú go sineirgíoch leis an gcóras frithocsaídeach. Braitheann córais neamh-einsímeacha ar mhóilíní chun ROS a scor go díreach, agus tá córais einsímeacha comhdhéanta d'einsímí sonracha a dhíthocsainíonn ROS. Sa dara ceann, tá an teaghlach SOD tábhachtach maidir le strus ocsaídiúcháin a rialáil. Is é SOD an t-aon einsím ar a dtugtar a scavens go díreach fréamhacha saor in aisce trí chatalú a dhéanamh ar dhí-áitiú anion superoxide go sárocsaíd hidrigine. Rialaíonn einsím SOD na leibhéil sárocsaíde agus sárocsaíd hidrigine a tháirgtear trí chealla, agus ansin rialaíonn sé trasdul comhartha cille. -úsáid le ceithre fho-aonaid chomhionanna eagraithe i tetrahedrons agus is einsím thábhachtach é a chosnaíonn cealla ó dhamáiste ocsaídiúcháin ROS. Comhcheanglaíonn Glutathione peroxidase (GPXanna) ocsaídiú GSH le H, O, díthocsainithe.2"Léirigh staidéir go bhféadfadh strus teasa strus ocsaídiúcháin a tháirgeadh in úicítí búibíneacha, rud a chuireann tús le díothú ROS ag an gcóras cosanta einsímí frithocsaídeach. 2 Léirigh ár gcuid staidéir go comhsheasmhach gur laghdaigh EGCG leibhéal ROS agus ábhar MDA na n-úicítí agus méadú ar an intr. ábhar GSH acellular agus cumas iomlán frithocsaídeach.

Is féidir leis an bpróiseas apoptosis tionchar a imirt ar cháilíocht agus ar ráta marthanais na n-úicítí agus mar sin tionchar a imirt ar fhorbairt suthach.Bcl-2 Tá ról lárnach ag próitéiní teaghlaigh i rialú bás cille tríd an idirghníomhú cothromaithe idir baill próitéine pro-apoptotic agus frith-apoptotic. 24 Is é Bax an phróitéin pro-apoptotic croí apoptóis mamaigh atá ag brath ar mhiotaschondrial. Imríonn Caspase-3 ról nach féidir a athsholáthar freisin in apoptosis cille. Is é Caspase-3 an einsím splicing teirminéil is tábhachtaí i bpróiseas apoptosis cille, agus is é caspase gníomhachtaithe-3 an príomhsheiceadóir ar apoptosis cille. Léiríonn ár dtorthaí gur ardaigh EGCG leibhéal slonn mRNA Bcl-2, ach gur laghdaigh sé leibhéil slonn mRNA Bax agus caspase-3. I dteannta a chéile, thug na torthaí seo le tuiscint go bhfuil baint den chuid is mó ag éifeachtaí frithocsaídeacha agus frith-apoptotic EGCG in úicítí muc le rialáil SOD1, CAT, agus GPX chomh maith leis na géinte a bhaineann le apoptosis.

Go hachomair, tugann ár dtorthaí le fios go gcuireann EGCG chun cinn aibithe in vitro agus forbairt suth tar éis IVF úicítí muiceola. Féadfaidh éifeachtaí cosanta EGCG ar na úicítí a bheith bainteach lena n-airíonna frithocsaídeacha agus frith-apoptosis.

Maoiniú

Thacaigh an staidéar seo le deontais ón Natural ScienceFoundationof Guangdong Province (2020Al515010976), an Tionscadal Foirne Nuálaíoch agus Taighde Áitiúil de Chlár Talent Guangdong Pearl River (2019BTO2N630), Tionscadal Straitéise Nuálaíochta Eolaíochta agus Teicneolaíochta Cúige Guangdong (2018B020203002).

Baintear an t-alt seo as Foilsíodh an t-alt seo san irisleabhar Dove Press seo a leanas: Drug Design, Development, and Therapy