Cuireann ELOVL2 Dul Chun Cinn Ailse chun Cinn Trí Chosc a chur ar Apoptosis Cille i gCarcanóma Ceall Duánach
Mar 20, 2022
Teibí. DuánachIs éard is carcanóma cille (RCC) ann urchóideacht ghéin-thurasach ionsaitheach a bhfuil baint aige le prognóis lag, go háirithe in othair le meatastasis, is iad na príomhfhochineálacha na gceall soiléir RCC(ccRCC), PCC papillary (pRCC), agus crómafób RCC(chRCC). Meastar go bhfuil láithreacht braoiníní lipid incheallacha (LDs) ina shainmharc de ccRCC. Aithnítear go forleathan an tábhacht a bhaineann le meitibileacht lipid athraithe i ccRCC. Mar gheall ar fhadú aigéid shailligh an-fhada slabhra (ELOVL) catalaíonn sé fadú aigéid shailleacha (FAanna), ag modhnú comhdhéanamh lipid, agus tá sé ag teastáil le haghaidh gnáthfheidhmeanna coirp. Mar sin féin, níl sé soiléir fós an bhaint atá ag fadsí isteach sa RCC. Sa staidéar seo, scrúdaíodh léiriú ELOVL2 i ccRCC; go háirithe, breathnaíodh leibhéil arda de sheacht ELOVLisozymes i tumaí bunscoile. Díol suntais, breathnaíodh leibhéil ardaithe léirithe ELOVL2 i ccRCC, chomh maith le i pRCC agus chRCC. Ina theannta sin, bhí baint shuntasach ag leibhéal níos airde ELOVL2 le minicíocht mhéadaithe droch-prognóis othar le ccRCC agus pRCC. Mar thoradh ar chnagadh ELOVL2 arna idirghabháil ag CRISPR/Cas, cuireadh deireadh le fadú FAnna il-neamhsháithithe slabhra fada agus tháinig méadú ar tháirgeadh LD iduánachcealla ailse. Ina theannta sin, mar thoradh ar ablation ELOVL2 cuireadh cosc ar iomadú cealla trí ionduchtú apoptosis in vitro agus maolú ar fhás siadaí in vivo. Ar an iomlán, tugann an staidéar reatha léargas nua ar na meicníochtaí iomadaithe siadaí a bhaineann le meitibileacht lipid agus molann sé go bhféadfadh ELOVL2 a bheith ina sprioc nua tarraingteach do theiripe RCC.
Eochairfhocail:carcinoma cille duánach, braoinín lipid, iomadú cealla, duán, duánach
Réamhrá
Is éard is carcanóma cille duánach (RCC) ann go coitianta agus marfach marfach, arb ionann é agus ~2 faoin gcéad de na cásanna ailse agus na mbásanna gaolmhara ar fad ar fud an domhain(1), is iad na príomhfhochineálacha ná RCC cille soiléir (ccRCC), PCC papillary (pRCC), agus crómasób. RCC (RCC). De na fochineálacha RCC go léir, is é ccRCC an léiriú histeolaíoch is coitianta agus is sainairíonna é a phaitigineas ná gníomhachtú comhdhéanta fachtóirí hypoxia-inducible (HIFanna) de bharr caillteanas feidhme géine suppressor meall von Hippel-Lindau (VHL). (1). Forbraíodh teiripí spriocdhírithe éagsúla i gcoinne fachtóir fáis inotelial soithíoch (VEGF) nó targaid mamaigh de chomharthaíocht rapamycin (mTOR) agus coscairí seicphointe imdhíonachta do ghalar méadastatach. Mar sin féin, tá dul chun cinn galar dosheachanta i bhformhór na n-othar (1,2).
Feabhsaíonn an CISTANCHE scagdhealaithe duán/duáin
Sainmharc de ccRCC is ea an raidhse braoiníní lipid intracellular (LDs), ar a bhfuil croí lipid neodrach ina bhfuil tríghlicrídí (TGanna) agus eistir colaistéaról (CEanna) timpeallaithe ag monaiteoir fosfailipidí (3). Is orgánailéil dhinimiciúla iad LDanna atá freagrach as glacadh lipidí. agus stórála agus úsáidtear iad chun homeostasis a chothabháil, táirgeadh fuinnimh a éascú agus cosaint i gcoinne cineálacha éagsúla struis nó chun bithgenesis membrane a chothú le linn fás tapa cille meall i roinnt cineálacha ailse (4). Go deimhin, léirigh staidéir roimhe seo go gcuireann LDanna le ccRCC dul chun cinn (5,6).
Tuairiscíodh go bhfeidhmíonn na haigéid shailleacha (FAnna) a chuimsíonn príomh-chomhpháirt lipidí mar fhoshraitheanna le haghaidh stóráil fuinnimh, sintéis membrane, agus táirgeadh móilíní comharthaíochta. Is céimeanna lárnacha iad fadú agus dísháithiú na sintéise de Novo de FAnna fadslabhra (LC-FAanna), is é fad agus méid an neamhsháithiúcháin a chinneann feidhm FA agus cinniúint meitibileach (7). Tá staidéar fairsing déanta ag Stearoyl-CoA desaturase 1(SCD1), ball den teaghlach sailleacha acyl desaturase, i ccRCC(6.8.9). Tá sé léirithe go gcuireann sé faoi chois iomadú cealla in ccRCC(8.9). Thairis sin. Léirigh Yang et al (10) gur chuir stéaról próitéine ceangailteach d’eilimint rialála 1 (SREBP1) chun cinn dí-sháithiú lipid trí dhíshalannú úirse 1 (FADSI) aigéid FA roimh ghníomhachtú comharthaíochta NF-xB chun iomadú cealla a chur chun cinn in ccRCC. Mar sin féin, ní léir aon róil ionchasacha a bhaineann le fadálacha i RCC.
Tuairiscíodh, i mamaigh, go ndéantar na frithghníomhartha comhdhlúthaithe FA tosaigh agus a rialaíonn rátaí a chatalú ag teaghlach d’einsímí elongase dá ngairtear fadú FAnna slabhra-fada (ELOVL). Go dtí seo, sainaithníodh seacht gcomhalta ELOVL, ar féidir iad a roinnt go ginearálta i measc na gcomhaltaí sonracha sin do FAnna sáithithe agus monai-neamhsháithithe (ELOVL1, ELOVL3, ELOVL6 agus ELOVL7) nó do FAnna il-neamhsháithithe (PUFAanna; ELOVL2, ELOVL4 agus ELOVL5). Léirigh Lucarelli et al (9) carnadh suntasach PUFAanna agus léiriú méadaithe de ELOVL2 agus ELOVL5 i ccRCC. Díol suntais, tá sé léirithe go dtáirgtear aigéad docosahexaenoic sistéamach (DHA) go hinchineálach agus go rialaíonn sé de novo lipogenesis, agus ag an am céanna rialaítear stóráil lipid ar bhealach neamhspleách fachtóir trascríobh 1 (SREBPF1) atá ceangailteach le heilimint rialála stéaróil, mar gheall ar ablation ELOVL2 i. lucha(11). Ina theannta sin, tá sé léirithe go gcuireann ró-eisbhrú ELOVL2 carnadh LD chun cinn le hiontógáil FA feabhsaithe i gcealla líne 3T preadipocyte 3T3-LI agus F442A(12). Staidéir in vitro roimhe seo, le DHA, arna riar go exogenously do chealla ailse. Tá sé léirithe go n-oibríonn DHA éifeachtaí frith-tumorigenic, frith-athlastacha agus pro-apoptotic ar chealla ailse(13-15). Mar sin féin, tá aon ról a d’fhéadfadh a bheith ag ELOVL2 i ndul chun cinn ccRCC trí mheitibileacht lipid a mhodhnú den chuid is mó fós gan iniúchadh.
Sa staidéar reatha, rinneadh iniúchadh ar róil ELOVL2inccRCCprogres-sion trí phróifíliú tras-scríobhach a dhéanamh ar ccRCC bunscoile agus gnáth.duánsamplaí, a thabharfadh le fios go bhfuil ELOVL2 róbhrúite i ccRCC agus go bhfuil sé ró-léirithe i measc isimimí ELOVL. Is díol suntais é go raibh ELOVL2 ró-léirithe freisin i ccRCC, agus i pRCCand RCC, agus baint shuntasach aige seo le prognóis lag othar a bhfuil CCR CCR pRCC orthu. Ina theannta sin, léiríodh go gcuireann cosc ELOVL2 isteach ar mheitibileacht lipid agus go gcuireann sé iomadú cealla faoi chois trí apoptosis a chur chun cinn, go páirteach ar a laghad trí chur isteach ar homeostasis reticulum endoplasmic (ER) iailse duánachcealla. Mhol torthaí an staidéir reatha go bhféadfadh ELOVL2 a bheith ina sprioc teiripeach núíosach féideartha do chóireáil RCC.
Feabhsaíonn CISTANCHE TEIP Duán/Duánach
abhair agus modhanna
Línte cille agus cultúir. ceannaíodh línte cille 293T (RCB2202) agus OS-RC-2 (RCB0735) ó RIKEN BioResource Centre agus ceannaíodh línte cille 786-O agus ACHN ó ATCC; Bronntanas cineálta a bhí sna cealla SK-RC-52 ón DrJ.G.Old (Ionad Cuimhneacháin Sloan Kettering Cancer). Líne cille RPTEC, a dhíorthaítear ó chealla epithelial an duineduánachceannaíodh feadán cóngarach ó Lonza Group, Ltd. (CC-2553). Saothraíodh cealla ACHN, 786-O, SK-RC-52 agus OS-RC-2 i meán RPMI-1640 arna fhorlíonadh le serum bó féatais 10 faoin gcéad (FBS) ag 37˚C le atmaisféar CO2 tais 5 faoin gcéad. Saothraíodh na cealla 293T i meán Eagle modhnaithe Dulbecco arna fhorlíonadh le serum bó féatais 10 faoin gcéad (FBS) ag 37˚C le atmaisféar CO2 taisithe 5 faoin gcéad. Saothraíodh na cealla RPTEC iduánachmeán fáis epithelial (REGM™) Bulletkit™ (CC-3190; Lonza Bioscience) ag 37˚C le atmaisféar CO2 tais 5 faoin gcéad.
Othair agus samplaí ccRCC. Fíocháin RCC agus gnáth in aice láimheduánFuarthas fíocháin ó 46 othar a fuair nephrectomies radacacha nó páirteach ó Ospidéal Ollscoil Tsukuba, idir 2006 agus 2015 de réir na bprótacal a d'fhormheas Coiste Eitice Ollscoil Tsukuba (faomhadh uimh. H28-104). Thug gach othar toiliú feasach i scríbhinn roimh dul faoi obráid. Sannadh céimeanna meall de réir chéimniú TNM an Aontais um Rialú Idirnáisiúnta Ailse (16). Aicmíodh gráid phaiteolaíocha, de réir chóras grádaithe ceithre shraith Fuhrman (17). Déantar achoimre ar shaintréithe uile an othair i dTábla SI eastóscadh RNA agus sintéis cDNA. Baineadh RNA iomlán as na fíocháin reoite agusduánachcealla ailse ag baint úsáide as TRIzol® Imoibrí (Thermo Fisher Scientific, Inc.). Tar éis íonú RNA, rinneadh RNA droim ar ais a thrascríobh ina cDNA ag baint úsáide as trealamh Ard-Acmhainne cDNA Droim ar ais Trascríobh (cat. uimh. 4368814; Thermo Fisher Scientific, Inc.), de réir threoracha an déantóra.
Imoibriú slabhra polaiméireáise tras-cainníochtúil droim ar ais (RT-qPCR). Rinneadh leibhéil slonn géine a chainníochtú ag baint úsáide as meaisín 7500 Fast Real-Time PCR le Fast SYBR-Green Master Mix (Thermo Fisher Scientific, Inc.). Ba iad seo a leanas na coinníollacha rothaíochta: Gabháil tosaigh ag 95˚C ar feadh 20 soicind, 40 timthriall ag 95˚C ar feadh 3 sec agus 60˚C ar feadh 30 sec, agus cuar leá ina dhiaidh sin ó 95˚C ar feadh 15 sec go 60˚ C ar feadh 1 nóiméad. Baineadh úsáid as Hypoxanthine phosphoribosyltransferase 1 (HPRT1) mar rialú inmheánach. Tá gach seicheamh primer liostaithe i dTábla SII. D’fhonn géinte a bhaineann le apoptóis a mheas, ba cheart leibhéil slonn choibhneasta na ngéinte pro-apoptotic, próitéin X Bcl-2-ghaolmhar (BAX), antagonist / marú homalógach Bcl-2 (BAK), phorbol-12-myristate-13- Rinneadh anailís ar phróitéin spreagtha aicéatáit 1 (PMAIP1/NOXA) agus p53 modulator upregulated apoptosis (BBC3/PUMA) agus den ghéin frith-apoptotic BCL2 agus géine próitéin difreála cille leoicéime myeloid spreagtha (MCL1). Rinneadh na leibhéil choibhneasta slonn géine a chainníochtú ag baint úsáide as an modh 2-ΔΔCq (18).
Anailís blot an Iarthair. Rinneadh anailís blot an Iarthair mar a thuairiscítear roimhe seo (19). Cuireadh cealla i maolán lysis (20 mM Tris-HCl (pH 7.5), 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1 faoin gcéad SDS agus coscóir protease) agus sonicated ar oighear. Rinneadh na lysáití a lártheifneoiriú ag 1,000 xg ar feadh 20 nóiméad ag 4˚C agus bailíodh na forlíonta mar shamplaí. Rinneadh cainníochtú próitéine ar shamplaí trí úsáid a bhaint as measúnacht Quick Start Bradford Protein (catag. uimh. 5000202JA; Bio-Rad Laboratories, Inc.). Cuireadh samplaí faoi réir 10 faoin gcéad SDS-PAGE agus aistríodh táirgí scartha chuig seicní PVDF ina dhiaidh sin.
Feabhsaíonn an CISTANCHE Ionfhabhtú Duán/Duánach
Cuireadh bac ar na seicní le gníomhaire blocála ECL Prime (cat. uimh. RPN418V; Cytiva) ar feadh 60 nóiméad ag teocht an tseomra. Ansin goradh na seicní thar oíche ag 4˚C leis na hantasubstaintí seo a leanas: Anti-serine/threonine-protein kinase/endoribonuclease inositol-einsím a éilíonn 1 (frith-IRE1; 1:200; #3294, Cell Signaling Technology, Inc.), IRE1 frith-fosfarylated (frith-p-IRE1; 1:200; NB100-2323, Novus Biologicals, LCC), próitéin homalógach frith-C/EBP (frith-CHOP; 1:200; MA1-250, Thermo Fisher Scientific, Inc. .). Glóbailin imdhíonachta frith-choine nó frith-luch G-nasctha le HRP, asal iomlán Ab (cat. uimh. NA934V, NA931VS; GE Healthcare; Cytiva) ag 1:10,000 mar antasubstaintí tánaisteacha. Rinneadh na blots thiar a léirshamhlú le ImmunoStar® Zeta (FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation) ag baint úsáide as íomháóir Fujifilm LAS-4{000 agus LAS400IR (FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation). Baineadh úsáid as -actin mar an rialú inmheánach (1:10,000, cat. uimh. A5316; Sigma-Aldrich).
Anailís bhithfhaisnéisíochta ar léiriú géine. Íoslódáladh sonraí cliniciúla agus RNA-seicheamhaithe (RNA-seq) de siadaí príomhúla a bailíodh ó othair le RCC i mbunachar sonraí The Cancer Genome Atlas (TCGA) ó Thairseach Sonraí Genomic Data Commons (GDC) (20). Scrúdaíodh 1,005 (880 galar agus 125 sampla rialaithe) san iomlán, lena n-áirítear 530 sampla galair agus 71 sampla rialaithe donduánach duánachcohórt carcanóma soiléirchill (KIRC; ccRCC), 286 sampla galair agus 31 sampla sláintiúil don cheirbheacsduánach duánachcohórt carcanóma na gceall papillary (KIRP; pRCC), agus 64 sampla galair agus 23 sampla sláintiúil don chohórt cromafób duáin (KICH; chRCC). Rinneadh anailís ar léiriú géine ELOVL2 sna samplaí den ailse ghéin-thurasaigh ag baint úsáide as an mbunachar sonraí Léiriú Géine de Fhíocháin Ghnáth agus Mheall (GENT2). Íoslódáladh sonraí slonn géine ó stór poiblí omnibus slonn géine (GEO) den ardán U133 Plus 2 (GPL570) (http://gent2.appex.kr/gent2/) (21).
Plasmids agus trasduchtadh lentiviral. Bhí fochlónáil RNAs hairpin bheaga (shRNAs) do ELOVL2 i staidéir roimhe seo (22,23) isteach sa veicteoir lentiviral pLKO.1 (plasmid #8453; Addgene, Inc.). Tá na seichimh oligonucleotide a úsáidtear i dtógáil an veicteora shRNA liostaithe i dTábla SIII. Gineadh lentiviruses i gcealla 293T trí cheithre plasmid a chomhaistriú go tras-, lena n-áirítear an veicteoir lentiviral (pLKO-shControl nó pLKO-shELOVL2), pMDLg/pRRE (plasmid #12251; Addgene, Inc.), pRSV-Rev (plasmid #12253). ; Addgene, Inc.), agus pMD2.G (plasmid #12259; Addgene, Inc.) ag baint úsáide as imoibrí aistrithe Lipofectamine 2000® (Thermo Fisher Scientific, Inc.). Ag 48 h tar éis an aistrithe, bailíodh súiteáin a raibh víreas iontu agus scagadh iad trí scagaire 0.45-µm le haghaidh ionfhabhtaithe. Le haghaidh aistrithe víreasacha, goraíodh lentiviruses pLKO-shControl nó pLKO-shELOVL2 leis na cealla 786-O, ACHN agus SK-RC-52 thar oíche ag 37˚C i gorlann cultúir cille tais. Roghnaíodh cealla i láthair puromycin ag 24 h tar éis an ionfhabhtaithe. Chun fochlóin a chobhsú, saothraíodh cealla go meánach le puromycin ar feadh 1 mhí ag 37˚C i gorlann cultúir cille humidithe agus úsáideadh linnte marthanacha le haghaidh anailísí léirithe agus iomadú.
Le haghaidh turgnaimh overexpression, aistríodh na cealla OSRC-2 le pCMV6 veicteoir folamh (plasmid #PS100001; Origene Technologies, Inc.) nó pCMV6-ELOVL2 (plasmid #RC209232; Origene Technologies, Inc.) ag 37˚C i gcultúr cille taisithe gorlann, ag baint úsáide as imoibrí aistrithe Lipofectamine 3000® (Thermo Fisher Scientific, Inc.), de réir threoracha an mhonaróra. Úsáideadh na cealla le haghaidh na dtástálacha sonraithe ag 48 h tar éis an aistrithe. Dearadh agus clónáil CRISPR/Cas9. Bronntanas ó Feng Zhang (Addgene, Inc.; plasmid #42230) (24) a bhí sa plasmid pX330-U6-Chi- meric{_BB-CBh-hSpCas9 (pX330) . Díríodh seichimh aontreorach CRISPR do ELOVL2 go sonrach ar exon 2 (sgELOVL2 #1) agus exon 3 (sgELOVL2 #2 agus #3) de ELOVL2 ag baint úsáide as Uirlis Dearaidh CRISPR (GE Healthcare Dharmacon, Inc.;‑discovery.com/gene-editing/crispr-cas9/crispr-design-tool/), roimh chlónáil isteach i pX330. Dearadh an seicheamh treorach CRISPR do rialú aontreorach (sgControl) roimhe seo (25). Tá na seichimh oligonucleotide de na RNAanna aontreoracha (sgRNAs) liostaithe i dTábla SIII
Síolaíodh na cealla ACHN ansin isteach i bplátaí 6 tobar (1.4x105 chealla/tobar) agus rinneadh iad a chomhaistriú 2 h níos déanaí le 2 µg de sgRNAs pX330-léirithe agus 0.2 µg veicteoir pCI-neo (Promega Corporation; cat. uimh. E1841) ag 37˚C i gorlann cultúr cille humidified, ag baint úsáide as FuGENE HD (Promega Corporation; cat. uimh. E2312). Ag 24 h tar éis an aistrithe, cuireadh 400 µg/ml G418 i bhfeidhm ar feadh 7 go 10 lá agus ceadaíodh na cealla a ghnóthú ar feadh 2 nó 3 lá. Nuair a bhí na cealla ag druidim le comhluadar, rinneadh iad a athshíolú go tearc i miasa 10 cm. Tar éis 2 nó 3 seachtaine, rinneadh coilíneachtaí inaitheanta a leithlisiú trí úsáid a bhaint as dioscaí clónála (MilliporeSigma; cat. uimh. Z374431-100EA). Leathnaíodh clón aonair agus rinneadh meastóireacht orthu le haghaidh stádas bainte amach trí sheicheamhú Sanger don sprioclimistéar.
Feabhsaíonn CISTANCHE Péine Duán/Duánach
Measúnachtaí iomadú ceall. Rinneadh measúnú ar iomadú ceall trí úsáid a bhaint as measúnacht MTT le Kit Comhairimh Cille-8 (CCK-8; Dojindo Molecular Technologies, Inc.) de réir threoracha an déantóra. Go hachomair, síolaíodh na cealla i bplátaí tobair 96 agus cuireadh 10 µl de WST-8 leis tar éis 72 h.OD460 a thomhas tar éis gor 1-h ag 37˚C. Seineagrafaíocht subcutaneous. Ceannaíodh lucha baineann BALB/c nude (nu/nu) (n=12; 6-8 seachtaine d'aois) ó Charles River Laboratories, Inc. h timthriall éadrom/dorcha, le rochtain ad libitum ar bhia agus ar uisce. Le haghaidh measúnachtaí seineafóiteachta subcutaneous, cuireadh cealla 1x107 ar crochadh i 100 µl PBS isteach go fochraicneach isteach sa chliath dheis trí úsáid a bhaint as snáthaid 24G agus tomhaiseadh toirteanna na siadaí uair sa tseachtain. Ríomhadh toirt meall leis an bhfoirmle: mm3=fad x leithead x airde x 0.52 (26). Tar éis 90 lá, rinneadh na hainmhithe go léir a íobairt, agus cuireadh na siadaí xenograft amach. Rinneadh ainmhithe a ainéistéisiú le 2 faoin gcéad isoflurane sular eotanaíodh iad le díláithriú ceirbheacsach
Gearradh eiseamail seasta foirmeálta agus paraifín-leabaithe (FFPE) de na siadaí xenograft i gcodanna 4-µm-tiubh, roimh díphairifíniú agus athhiodráitiú. Chun antaigin a aisghabháil, rinneadh na hailt a réamhchóireáil le micreathonn ar feadh 21 nóiméad i maolán aigéad citreach. Tar éis an nós imeachta aisghabhála antaigin, cuireadh bac ar ghníomhaíocht sárocsaíde ingenous le 3 faoin gcéad H2O2 ar feadh 25 nóiméad agus goraíodh na sleamhnáin le hantasubstaint Ki-67 (1:200; Dako; Agilent Technologies, Inc.; M7240) ag 4˚C thar oíche. Léiríodh an t-imoibriú imdhíon-histochemical ag baint úsáide as an antasubstaint thánaisteach Histofine Simple Stain MAX PO® (Nichirei Biosciences, Inc; cat. uimh. 424151) trí úsáid a bhaint as diaminobenzidine mar chromogen. D'fhormheas Coiste Turgnaimh Ainmhithe Ollscoil Tsukuba gach staidéar ar ainmhithe agus rinneadh gach turgnamh de réir threoirlínte Rialacháin Ollscoil Tsukuba um Turgnaimh Ainmhithe (faomhadh uimh. 20-370). Measúnachtaí apoptosis. Rinneadh measúnú ar apoptosis trí úsáid a bhaint as Córas Measúnachta Caspase-Glo® 3/7 (Promega Corporation; cat. no. G8090), trealamh staining Annexin-V-FLUOS (Roche Diagnostics; cat. no. 11858777001), agus JC-1 Mitochondrial Membrane Poitéinseal Trealamh measúnaithe (Cayman Chemical Company; cat. uimh. 10009172), de réir threoracha an mhonaróra.
Staining of LDs. Síolaíodh cealla ar dhuillíní gloine i miasa 60mm agus saothraíodh iad le haigéad oiléach (200 µM) – ina raibh meán ag 37˚C thar oíche i gorlann 5 faoin gcéad CO 2. Rinneadh an meán a asú ansin, agus nite na cealla faoi dhó le PBS roimh shocrú le 4 faoin gcéad formaildéad (FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation) ar feadh 5 nóiméad ag teocht an tseomra. Ansin nite na cealla faoi dhó le PBS, agus goraíodh iad le 0.5 µM Lipi-Green (Dojindo Molecular Technologies, Inc.) ar feadh 30 nóiméad sa dorchadas ag 37˚C. Ina dhiaidh sin, nite na cealla faoi dhó le PBS agus cuireadh na clúdaigh chlúdaigh ar shleamhnáin ghloine ag baint úsáide as VECTASHIELD® Antifade Mounting Medium le DAPI (Vector Laboratories, Inc.; cat. uimh. H-1200). Fuarthas íomhánna de na cealla daite le micreascóp fluaraiseachta BZ-X710 (Keyence Corporation). Goradh cealla beo le 0.5 µM Lipi-Green i Réiteach Cothromaithe Salann Hanks (HBSS) ar feadh 30 nóiméad sula níochán iad faoi dhó i HBSS, athchóiríodh iad in 1 mM EDTA/PBS (pH 8.0) le 0.5 faoin gcéad BSA, agus cuireadh trí strainer cille iad. . Rinneadh anailís ar chealla ar chiteiméadar sreafa Gallios (Beckman-Coulter, Inc.) agus rinneadh anailís ar shonraí ag baint úsáide as bogearraí FlowJo v10 (FlowJo LLC).
ER staining lorgaire. Síolaíodh na cealla ACHN (ACHN/sgControl, ACHN/sgELOVL2‑1 agus ACHN/sgELOVL2‑2) ar chlúdaigh ghloine i miasa 6{{2{0}-mm agus saothraíodh iad ag 37˚C ar feadh 48 h in. gorlann 5 faoin gcéad CO 2. Rinneadh an meán rátáil ansin, agus nite na cealla faoi dhó le HBSS roimh shocrú le formaildéad 4 faoin gcéad (FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation) ar feadh 5 nóiméad ag teocht an tseomra. Ansin nite na cealla faoi dhó le HBSS agus goraíodh iad le 500 nM ER Tracker Red (Thermo Fisher Scientific, Inc.; cat. uimh. E34250) ar feadh 2 h sa dorchadas ag 37˚C. Ina dhiaidh sin, nitear na cealla faoi dhó le PBS agus cuireadh na clúdaigh clúdaigh ar shleamhnáin ghloine. Fuarthas íomhánna de na cealla daite le micreascóp fluaraiseachta BZ-X710 (Keyence Corporation). Goraíodh cealla beo le 500 nM ER Tracker i HBSS ar feadh 30 nóiméad sula níochán iad faoi dhó i HBSS, athchuireadh iad in 1 mM EDTA/PBS (pH 8.0) le 0.5 faoin gcéad BSA, agus cuireadh trí strainer cille iad. Rinneadh anailís ar chealla ar chiteiméadar sreafa Gallios agus rinneadh anailís ar shonraí ag baint úsáide as bogearraí FlowJo v10.
Crómatagrafaíocht gháis-oll-speictriméadracht (GC-MS). Rinneadh an eastóscadh lipidí iomlán ó millíní cille mar a thuairiscítear roimhe seo (27). Rinneadh hidrealú agus díorthú na n-sleachta chuig eistir mheitile FA (FAMEanna). Maidir le caighdeáin inmheánacha FAanna comhchuingeacha, C20:4 (ω-6), C20:5 (ω-3), C22:5 (ω-6), C22:5 (ω‑3) agus C22 :6 (ω‑3) Ceannaíodh CLA ó MilliporeSigma nó Cayman Chemical Company. Rinneadh anailís GC-MS ag baint úsáide as GCMS-TQ8040 (Shimadzu Corporation) le Colún GC Omegawax® Ribeach (MilliporeSigma; cat. uimh. 24136). Méadaíodh an grádán teochta ar dtús ó 70 go 150˚C ag ráta 20˚C in aghaidh an nóiméid agus ó 150 go 280˚C ag ráta 8˚C in aghaidh an nóiméid sular laghdaigh sé ó 280˚C go 200˚C ag ráta 15. ˚C in aghaidh an nóiméid. Rinneadh instealladh samplach i mód scoilte agus cuireadh 1.0 µl den sampla instealladh. Le haghaidh anailíse MS, socraíodh an fhoinse ian agus an teocht idir-aghaidh go 200˚ agus 270˚C, faoi seach. Fuarthas na sonraí i mód scanadh iomlán (30-600 m/z) faoi 70 eV de voltas ianúcháin. Sainaithníodh FAMEanna de réir aga coinneála agus meaitseáil speictrim ianúcháin leictreon-MS (EI-MS) le caighdeáin tagartha FAME. Ríomhadh an méid coibhneasta FAMEanna trí chomparáid a dhéanamh idir an meánachar buaic in aghaidh mais an tsampla. Rinneadh gach sampla a thomhas go neamhspleách trí huaire.
Anailís staitistiúil. Cuirtear sonraí in iúl mar mheán ± SD. Rinneadh gach anailís staitistiúil ag baint úsáide as bogearraí JMP 10 (Institiúid SAS, Inc.), GraphPad Prism8 (GraphPad Software, Inc.) nó pacáiste R (leagan 4.0.2; RStudio, Inc.). Rinneadh measúnú ar thábhacht na ndifríochtaí idir an dá ghrúpa trí úsáid a bhaint as tástáil t-dalta neamhphéireáilte nó triail Mann-Whitney. Rinneadh measúnú ar thábhacht na ndifríochtaí idir na trí ghrúpa nó níos mó ag baint úsáide as ANOVA aontreo le comparáidí post hoc ag baint úsáide as tástáil Dunnett nó tástáil Kruskal-Wallis agus tástáil post hoc Dunn ina dhiaidh sin le ceartú Bonferroni. Tógadh cuair marthanais ag baint úsáide as modh Kaplan-Meier agus rinneadh an difríocht idir na cuair a mheas ag baint úsáide as an tástáil log-ranga. Roinneadh othair ina dhá ghrúpa, grúpa léirithe íseal nó grúpa ardléirithe, ag baint úsáide as scoite luachanna abairte airmheánacha. p<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistically="" significant="">
Torthaí
Tá an iomarca brú ar ELOVL2 i RCC. Scrúdaíodh an raidhse de sheacht isimicí ELOVL i bhfíocháin chomhfhreagracha gnáth agus siadaí den chéad uair sa chohórt reatha, ag nochtadh go raibh leibhéil léirithe ELOVL1, ELOVL2, ELOVL5 agus ELOVL7 ardaithe i bhfíocháin ccRCC (Fíor 1 A). Chun na torthaí seo a bhailíochtú, scrúdaíodh léiriú géine isozyme ELOVL i bhfíocháin chomhfhreagracha agus siadaí ag baint úsáide as bunachar sonraí TCGA (cohórt KIRC). Deimhníodh go raibh léiriú mRNA ELOVL2 ardaithe go mór agus go suntasach i bhfíocháin ccRCC (Fíor 1B; P.<0.0001). subsequently,="" elovl2="" mrna="" expression="" was="" investigated="" further="" among="" three="" major="" histological="" subtypes="" of="" rcc="" using="" tcga="" database="" (kirc,="" kirp="" and="" kich="" cohorts).="" this="" revealed="" that="" elovl2="" was="" overexpressed="" in="" the="" prcc="" and="" chrcc="" tissues;="" however,="" its="" expression="" in="" ccrcc="" tissues="" was="" the="" highest="" among="" the="" histological="" subtypes="" (fig.="" 1c).="" moreover,="" the="" elovl2="">
bhí leibhéil slonn ardaithe go mór sna línte cille ACHN, 786-O agus SK-RC-52, cé go raibh na leibhéil slonn mRNA i líne cille OS-RC-2 níos ísle i gcomparáid leo siúd sa líne chill RPTEC (Fig. 1D). . Ina dhiaidh sin, rinneadh imscrúdú ar an athrú a bhaineann le hailse ar léiriú géine ELOVL2 i gcineálacha éagsúla ailse ag baint úsáide as bunachar sonraí GENT2 (Fíor 1E). I gcomparáid le gnáth-fhíocháin, fuarthas amach go raibh léiriú ELOVL2 i bhfad níos airde iduán, ailsí próstatach, scamhóg agus colon, ach bhí an abairt ELOVL2 cosúil le hailse lamhnáin nó chíche. Thug na torthaí seo le fios go raibh difríocht idir róil na n-isiméisí ELOVL de réir an chineáil ailse agus go bhféadfadh baint a bheith ag ró-léiriú ELOVL2 le carcanaigineas nó le dul chun cinn galair an RCC, go háirithe ccRCC.
Tá baint ag ró-léiriú ELOVL2 le dul chun cinn RCC. Scrúdaíodh an baint idir léiriú géine ELOVL2 agus céimeanna meall-nód-metastasis (TNM) sa chohórt KIRC, chun tábhacht chliniciúil ELOVL2 i ccRCC a shoiléiriú. Bhí léiriú ELOVL2 níos airde i ngalar chun cinn go háitiúil agus metastatach, cé nach raibh baint ag a léiriú le stádas metastasis nód linf (Fíor 2A-C). Le chéile, méadaíodh léiriú ELOVL2 de réir na céime cliniciúla (Fíor 2D). Ina dhiaidh sin, rinneadh measúnú ar an gcomhlachas idir léiriú ELOVL2 agus prognóis othar le RCC, chun tionchar cliniciúil ccRCC a shoiléiriú. De réir anailís Kaplan-Meier, tugadh le fios go raibh baint shuntasach ag léiriú ard ELOVL2 le droch-prognóis sa chohórt reatha (P=0.0015, Fíor. 2E). Chun na torthaí seo a bhailíochtú, rinneadh scrúdú breise ar an gcomhlachas idir léiriú ELOVL2 agus prognóis othar le ccRCC i gcohórt KIRC agus léiríodh, mar an gcéanna, go raibh baint shuntasach ag léiriú ard ELOVL2 le prognóis lag (P).<0,01, fig.="" 2f).="" moreover,="" a="" high="" expression="" of="" elovl2="" was="" significantly="" associated="" with="" a="" poor="" prognosis="" of="" patients="" with="" prcc=""><0.0001, fig.="" 2g).="" however,="" this="" was="" not="" observed="" in="" patients="" with="" chrcc="" (fig.="" 2h).="" in="" total,="" the="" aforementioned="" results="" indicated="" that="" elovl2="" may="" mediate="" ccrcc="" and="" prcc="" disease="" progression,="" at="" least="">
Cuireann ELOVL2 iomadú cealla ailse duánach chun cinn. Chun measúnú a dhéanamh ar fheidhm ELOVL2 maidir le iomadú cealla RCC, rinneadh an t-slógadh shRNA de ELOVL2 i gcealla 786-O, ACHN agus SK-RC-52. Rinneadh measúnú ar éifeachtaí gach shRNA ag baint úsáide as RT-qPCR agus deimhníodh laghdú suntasach ar léiriú ELOVL2 (Fíor 3 A). Rinneadh measúnachtaí MTT ansin chun scrúdú a dhéanamh ar na héifeachtaí a bhí ag titim ELOVL2 ar iomadú cealla. Tugadh faoi deara go bhfuil an knockdown de ELOVL2 bac ar an iomadú na cealla go léir i gcomparáid leis na cealla transfected le rialú shRNA ( Fíor. 3 B ).
I gcodarsnacht leis sin, tharlaíodh ró-léiriú ELOVL2 i gcealla OS-RC-2, líne cille le léiriú basal níos ísle de ELOVL2. Rinneadh éifeachtúlacht an aistrithe a mheas ag baint úsáide as RT-qPCR agus deimhníodh léiriú méadaithe go suntasach ar ELOVL2 (Fíor 3C). Léirigh measúnachtaí MTT gur cuireadh chun cinn go mór iomadú cealla ELOVL2-overexpressing, i gcomparáid leis an ngrúpa rialaithe (Fíor 3D), rud a léiríonn go bhféadfadh ELOVL2 a bheith ina thionscnóir ar iomadúduánachcealla ailse.
Cuireann ablation ELOVL2 bac ar fhás siadaí in vivo, sintéis PUFAanna, agus táirgeadh LDanna iduánachcealla ailse. Chun róil ELOVL2 i ndul chun cinn RCC a shoiléiriú tuilleadh, bunaíodh líne chill ACHN chnámh ELOVL2, trí úsáid a bhaint as córas CRISPR/Cas9 (sgELOVL2-1 agus sgELOVL2-2) (Fíor S1). In vitro, tháinig laghdú suntasach ar iomadú ceallacha ag ablation ELVOVL2 i gcealla ACHN ( Fíor. S1 ). Níos tábhachtaí fós, chuir an ablation CRISPR/Cas9-idirghabhála de ELOVL2 fás siad faoi chois nuair a ionchlannaíodh na cealla go subcutaneously i lucha (Fíor 4A). Ba iad 241 agus 109 mm3, faoi seach, na méideanna uasta de na siadaí xenograft subcutaneous san ACHN/control agus ACHN/sgELOVL2-2 ag lá na híobairte. Is fiú a thabhairt faoi deara, d’aischéimnigh gach siadaí xenograft sa ghrúpa ACHN/sgELOVL2-1 go spontáineach ag 14 lá tar éis trasphlandúcháin agus níor aimsíodh iad tráth an díothaithe. Scrúdaíodh an t-innéacs Ki-67 freisin sna siadaí xenograft a aistríodh le rialú nó sgELOVL2 agus tugadh faoi deara go raibh innéacs Ki-67 i bhfad níos ísle ar taispeáint sna cealla ACHN/sgELOVL2-2 ná na cealla ACHN/rialaithe (Fíor 4B agus C). . Thacaigh na torthaí seo leis an bhféidearthacht go gcuirfeadh ELOVL2 le fás siadaí in vivo. Toisc go bhfuil ELOVL2 suite ar chrómasóim 6p24.2 agus go ndéanann sé ionchódú do phróitéin trasmembrane reticulum endoplasmic a rialaíonn fadú PUFAanna C20–C24 (7), rinneadh leibhéil FA iomlána a mheas ansin sna cealla ACHN/sgControl agus ACHN/sGELOVL2 ag baint úsáide as anailís GC-MS (Fig. S2). Léirítear an t-athrú ar leibhéil LC-PUFA i bhFíor 4d. Is einsím riachtanach é ELOVL2 i dtáirgeadh inghineach aigéid docosahexaenoic (DHA, C22:6 n-3) (28,29) agus, mar a bhíothas ag súil leis, tháinig laghdú suntasach ar na leibhéil DHA de bharr ablation ELOVL2 saduánachcealla ailse. Thairis sin, tá an
tháinig laghdú suntasach freisin ar mhéideanna speiceas LC-PUFAanna eile, lena n-áirítear aigéad arachidónach (AA, C20:4 n-6), aigéad eicosapentaenoic (EPA) agus aigéad docosapentaenoic (DPA). Ar an láimh eile, níor athraíodh táirgeadh DPA go seasta sna cealla ACHN/sgELOVL2. Bhí an méid DPA sna cealla ACHN an-íseal agus níor aimsíodh é i roinnt samplaí ( Fíor. S2 ). Ós rud é gur léirigh staidéir roimhe seo go gcuireann ELOVL2 carnadh LDanna chun cinn trí tháirgeadh DHA (11,12), rinneadh measúnú breise ar stóráil LDanna ag baint úsáide as staining neodrach lipid. Is fiú a thabhairt faoi deara, tháinig laghdú suntasach ar raidhse LDanna i gcealla ACHN / sgELOVL2 i gcomparáid leis na cealla ACHN / sgControl (Fíor 4E-4G), rud a thugann le tuiscint go bhféadfadh an t-athrú ar mheitibileacht lipid ag ró-eisbhrú ELOVL2 difear do iomadú cille RCC.
Cothaíonn ablation ELOVL2 an apoptosis deduánachcealla ailse. Léirigh staidéir roimhe seo go gcuireann táirgeadh LDanna intracellular apoptosis chun cinn faoi mhicreathimpeallachtaí meall struis (4). Dá bhrí sin, sa staidéar seo, rinneadh meastóireacht ar apoptosis i gcealla ACHN/sgControl nó ACHN/sgELOVL2 agus braitheadh gníomhaíocht suntasach ardaithe de caspase 3/7 i gcealla ACHN/sgELOVL2 (Fíor 5 A). Mar an gcéanna, aithníodh líon níos mó de chealla apoptotic ACHN/sgELOVL2 i gcomparáid le cealla ACHN/sgControl, mar is léir ón staining Annexin V/PI (Fíor 5 B). Ag brath ar strus ceallacha, mar thoradh ar apoptosis intreach (30) go gcailltear féidearthacht membrane mitochondrial; dá bhrí sin, rinne an staidéar reatha measúnú breise ar acmhainneacht leictreach tras-membrane mitochondrial de chealla ACHN/sgControl nó ACHN/sgELOVL2 ag baint úsáide as fluaraiseacha JC-1. Tháinig laghdú suntasach ar an gcóimheas comhiomlán/monaiméir i gcealla ACHN/sgELOVL2 (Fíor 5C), rud a léiríonn cur chun cinn polarú transmembrane mitochondrial agus gníomhachtú an chosáin apoptotic intreach ag ablation ELOVL2. Níos cruinne, méadaíodh leibhéil slonn géine pro-apoptotic (BAX, BAK, PUMA agus NOXA) go suntasach, agus tháinig laghdú suntasach ar leibhéil slonn géine frith-apoptotic (BCL2 agus MCL1) mar gheall ar ablation ELOVL2 (Fíor 5D). Léirigh na torthaí seo go gcuireann ELOVL2 le maireachtáil cheallacha trí chosc ar apoptosis de chealla ailse duánach
Is féidir le díghrádú toilleadh stórála lipid i bhfoirm LD a bheith ina chúis le titim homeostasis ER, rud a spreagann an fhreagairt próitéin neamhfhillte (UPR) agus apoptosis ceallacha (4,5). Mar sin, chun tacú leis an hipitéis maidir le rannpháirtíocht léiriú ELOVL2 in homeostasis ER, rinneadh staining rianaithe ER i gcealla ACHN/sgControl nó ACHN/sgELOVL2. Léirigh íomháú ER ina dhiaidh sin (Fíor 5E) agus cainníochtú ag baint úsáide as cíteiméadracht sreafa (Fíor. 5F agus G) leathnú ER sna cealla ACHN/sgELOVL2, mar gheall ar strus ER. Ina theannta sin, chuir ablation ELOVL2 fosfarylation IRE1 , gníomhaí braiteoirí UPR chun cinn (Fíor 5H), agus chuir an abairt deRinneadh CHOP, a bhfuil príomhról aige in apoptosis de bharr strus ER, a rialáil le ablation ELOVL2 (Fíor 5H). Le chéile, léirigh na torthaí seo go gcuireann meitibileacht idirghabhála-lipid ELOVL2 faoi chois apoptosis cille iduánachcealla ailse agus mhol sé go bhféadfadh cur isteach ar homeostasis ER a bheith ina mheicníocht ionduchtaithe féideartha.
Plé
Léirigh an staidéar reatha go bhféadfadh ELVOL2 meitibileacht lipid a athrú agus fás siadaí a chur chun cinn trí chosc a chur ar apoptosis cealla ailse duánach. Thairis sin, tugadh faoi deara go raibh léiriú ELOVL2 i bhfíocháin RCC ardaithe agus go
bhí baint shuntasach ag léiriú níos airde ELOVL2 le droch-prognóis othar le RCC. Tá staidéir teoranta ar fáil ar róil ELOVL2 i ndul chun cinn ailse (22,31,32) agus tá a gcuid torthaí conspóideach. Léirigh Simple et al (22) gur chuir ELOVL2 sintéis LC-PUFA chun cinn, ag tacú le comharthaíocht éifeachtach EGFR agus le iomadú gascheall glioblastoma. I gcodarsnacht leis sin, thuairiscigh Kang et al (31) go bhféadfadh ablation ELOVL2 imirce cille agus foirmiú coilíneachta cealla ailse chíche a chur chun cinn agus nocht sé go raibh baint ag léiriú laghdaithe ELOVL2 le prognóis níos boichte na n-othar a bhfuil ailse chíche orthu. Ina theannta sin, thuairiscigh Ding et al (32) go gcuireann ELOVL2 iomadú cealla neuroblastoma faoi chois agus go raibh baint aige le rátaí marthanais fabhracha. De réir na dtorthaí contrártha a tuairiscíodh i staidéir roimhe seo, léiríodh feidhm ilróil do ELOVL2 maidir le dul chun cinn ailse, a athraíonn go soiléir de réir cineáil ailse.
Cuireann meitibileacht athraithe lipid isteach go mór ar dhul chun cinn ailse, éifeacht a breathnaíodh i dtorthaí an staidéir seo, ag teacht le taighde a léiríonn ról ELOVL2 mar phríomhrialaitheoir ar phróiseas fadaithe LC-PUFAanna agus einsím ríthábhachtach i mbithshintéis DHA ( 7). Sa staidéar seo, léiríodh go bhfuil LC-PUFAanna endogenous,
lena n-áirítear AA agus DHA, mar gheall ar ablation ELOVL2 i gcealla ailse duánach. Maidir leis seo, tuairiscíodh roimhe seo go n-eascraíonn cosc ar an gcosán AA ag coscairí lipoxygenase (LOX) apoptosis agus go laghdaíonn sé inmharthanachtduánachcealla ailse in vitro (33,34). Cé go bhfuil torthaí ró-léirithe ELOVL2 an staidéir reatha ag teacht leis na torthaí meicniúla seo, tuairiscíodh roimhe seo, áfach, go bhféadfadh riarachán DHA bac a chur ar iomadú agus ionradh cealla ailse duánach in vitro (35,36). Mar sin féin, is eol go bhfuil éifeachtaí sainiúla agus codarsnacha ag LC-PUFAanna ar dhul chun cinn ailse. Mar sin, d’fhéadfadh baint a bheith ag athrú cothromaíochta íogair i measc LC-PUFAanna éagsúla, mar gheall ar chosc ar ELOVL2, leis na feinitíopaí éagsúla a breathnaíodh i gcineálacha ailse éagsúla. Tá sé léirithe ag staidéir roimhe seo go méadaítear LDanna trí tháirgeadh endogenous DHA ag ELOVL2 i lucha (11,12). Ar an gcaoi chéanna, tugadh le fios go bhféadfadh ablation ELOVL2 táirgeadh DHA agus LDanna i gcealla ailse duánach a chosc, rud a thugann le tuiscint go bhféadfadh ró-eisiúint ELOVL2 táirgeadh LD a chur chun cinn trí tháirgeadh DHA endogenous i RCC. Is minic a aimsítear cealla ailse i gcoinníollacha comhshaoil níos déine (macra agus micrea), lena n-áirítear hypoxia agus díothacht cothaitheach, ach fós féin, fásann siad go tapa faoi strusóirí tromchúiseacha den sórt sin. Léiríodh feidhmeanna LDanna faoi choinníollacha strus ceallacha, amhail cothabháil fuinnimh agus homeostasis redox, rialáil autophagy, cothabháil homeostasis ER, agus cosaint i gcoinne lipotocsaineacht (4).
Thug Ackerman et al (6) le fios go gcuireann LDanna cosc ar charnadh lipidí tocsaineacha sáithithe le linn hypoxia trí sháithiú lipid cheallacha a mhaolánú trí FAnna neamhsháithithe a chónaíonn TG a mhalartú i ccRCC. Féadfaidh lipotocsaineacht cheallacha de bharr FAanna sáithithe (SFA), lena n-áirítear palmitate (C16:0), apoptosis a chur faoi deara, rud a fhágann bás cille ailse (37,38). Le déanaí, ainmníodh ELOVL2 mar einsím criticiúil pro-marthanais, a chuidíonn le cosc a chur ar apoptosis cille glucoileatocsaineacht-spreagtha (39). Díol suntais, is é an toradh a bhíonn ar dheighilt lipid modhnaithe aise ELOVL2/DHA ná úsáid neamh-tocsaineach de phailmítáit SFA trí é a iompar isteach i mitochondria le haghaidh ocsaídiúcháin FA (FAO) trí mheicníocht CPT1-spleách. Ina theannta sin, léirigh Balaban et al go bhfuil cealla ailse próstatach C4-2B agus cealla ailse chíche MCF-7 cosanta ó apoptosis pailmeitáite-spreagtha ag EBT mitochondrial (37,38). Le linn lipotocsaineacht pailmeite-spreagtha, tuairiscíodh gur tháinig laghdú (40,41) ar leibhéil cheallacha próitéiní frith-apoptotic, lena n-áirítear BCL-2 nó MCL-1, agus tuairiscíodh leibhéil próitéiní pro-apoptotic, lena n-áirítear PUMA nó NOXA. a mhéadú (42,43). Tugadh le fios sa staidéar reatha go bhféadfadh ablation ELOVL2 a chur chun cinnduánachapoptosis cille ailse trí athrú ar ghéinte pro- agus frith-apoptotic ar bhealach comhchosúil. Tugann na torthaí seo le fios go bhféadfadh ELOVL2 cealla a chosaint i gcoinne apoptosis lipotocsaineacht chun fás siadaí a chur chun cinn i RCC.
Ina theannta sin, léiríodh go bhféadfadh ablation ELOVL2 i RCC strus ER agus upregulation CHOP a chur chun cinn, íosrialáil BCL-2 agus MCL-1, agus BAK agus BAX á uasrialáil, trí chonair a bhraitheann mitochondria (44). Go deimhin, léirigh torthaí an staidéir reatha gur athraíodh géinte pro-agus frith-apoptotic mar an gcéanna le ablation ELOVL2. Ag teacht leis na torthaí sa staidéar le Qui et al (5), a thuairiscigh go gcuireann LDanna atá ag brath ar HIF2 / PLIN2 friotaíocht chun cinn i gcoinne strus ER agus maireachtáil cille i ccRCC, tá na torthaí comhchoiteanna seo ag tacú le strus ER a chuireann apoptosis ceallacha chun cinn ag ELOVL2 ablation iduánachcealla ailse, LDanna a laghdú agus an maolán ceallacha a bhaint i gcoinne lipidí tocsaineacha.
Mar fhocal scoir, léirigh an staidéar reatha don chéad uair, chomh fada agus is eol dúinn, go gcuireann ELOVL2 fás siadaí chun cinn trí chosc a chur ar apoptosis trí fhadú PUFAanna, go páirteach ar a laghad trí homeostasis ER a chothabháil i.duánachcealla ailse. I dteannta a chéile, moladh go bhféadfadh LDanna arna n-ionsú ag ELOVL2 cur le dul chun cinn ailse mar gheall ar il-éifeachtaí cosanta i gcoinne strus ceallacha i RCC. Ina theannta sin, moladh go bhféadfadh ELOVL2 a bheith ina sprioc teiripeach tarraingteach féideartha d’othair le RCC.