Éifeachtaí Glyeosides na Cistéise ar Fhoghlaim Cognaíocha agus Plaisteacht Shionaptach i bhFrancaigh Mhúnla Díothachta Codlata

Teibí

Cuspóir: 'Fiosrú an bhfuil angliocóisídí cistéiseis féidir feabhas a chur ar anfoghlama agus feidhm chognaíoch an díothachta codlatafrancaigh samhail aga rialáil plasticity synaptic. Modhanna: Roinneadh caoga francach Wistar fireann go randamach i ngrúpa rialaithe bán (Rialú), grúpa rialaithe ardáin (PC), grúpa múnla (Múnla),gliocóisídí an ghrúpa cistanche(GCanna), agus grúpa estazolam (Est). Ullmhaíodh an tsamhail díothachta codlata de francaigh trí mhodh timpeallachta uisce il-ardán modhnaithe. Baineadh úsáid as lúbra uisce Morris agus tástáil pháirce oscailte chun francaigh a bhrath.feidhm chognaíoch spásúil and athruithe mothúchánacha. Baineadh úsáid as staining Nissl chun na hathruithe ideilbhíocht agus cainníocht na gcealla nervei limistéar hippocampal CAl na bhfrancach. Baineadh úsáid as blot an Iarthair agus R'T - PCl chun na leibhéil slonn de synaptophysin(SYN), substaint dhlúth membrane postsynaptic 95 ( PSD {{ }} ), agus fachtóir neurotrófach a dhíorthaítear ón inchinn (BDNF) a bhrath. Torthaí: Léirigh torthaí lúbra uisce Morris, i gcomparáid leis an ngrúpa Rialaithe, ancumas foghlama agus cognaíochatháinig laghdú suntasach ar na francaigh sa ghrúpa Múnla (P<0. 05 ), and thefeidhm foghlama agus cuimhne na francaighFeabhsaíodh cóireáil GCs (P<0. 05). The results of the open field test showed that compared with the Control group, the movement distance and standing times of the Model group were significantly increased ( P <0. 05 ), the resting time was significantly shortened( P <0.05), and the anxiety was increased, while after GCs treatment, the movement distance and standing times decreased ( P <0. 05), the resting time increased ( P<0. 05), and the anxiety was improved. The results of Western blot and R'T' - PCR showed that the protein and gene expression levels of BDNF, SYN, and PSD -95 in the Model group were significantly decreased ( P <0. 05), while after treatment with GCs, the expression levels of BDNF, SYN and PSD -95 were significantly up-regulated ( P <0.05).

Conclúid: Glicóisídí cistéised’fhéadfadh tionchar a bheith aige ar phlaisteacht shionaptach trí léiriú marcóirí a bhaineann le synaptic a rialáil, agus ar an gcaoi sin feabhas a chur ar fhoghlaim agus ar fheidhm chognaíoch na bhfrancach sa tsamhail díothachta codlata.

PRÍOMHfhocailGlicóisídí cistéise; Hippocampus; Díothacht codlata; Foghlaim agus cuimhne; imní; Plaisteacht shionaptach

Gliocosides ARDLEIBHÉIL NA CISTINE LE DÍOL

Neamhord codlata (SD)tá aneamhord feidhme codlatade bharr sraith fachtóirí casta mar insomnia, aisling go minic, agus múscailt éasca. Tháinig méadú de réir a chéile ar mhinicíocht SD le blianta beaga anuas. Thuairiscigh staidéir ghaolmhara gur féidir le SD a bheith ina chúisgalair cardashoithíoch, mífheidhmiú meitibileach, galair imdhíonachta, agus galair degenerative lárchóras na néaróg, mar shampla galar Alzheimer [1]. Is féidir le SD damáiste ocsaídiúcháin a dhéanamh do néaróin hippocampal, mífheidhm chognaíoch a chur faoi deara, agus athruithe giúmar a tháirgeadh mar imní agus dúlagar [2]. Is ábhar lómhara leighis na Síne é Cistanche deserticola is féidir a úsáid mar leigheas agus bia. Tá éifeachtaí aige tonifying an duáin agus athlánú qi, moistening an intestines a chur chun cinn gluaiseachtaí bputóg, agus yang neartú. Tá éifeachtaí frithocsaídeacha, frith-apoptotic, cosanta ae agus neuroprotective ag príomh-sliocht Cistanche deserticola, glycosides cistanche (GCs). Fuair ​​​​ár dtaighde roimhe seo gur féidir le GCanna feabhas a chur ar fhoghlaim agus ar fheidhm chognaíoch lucha SAMP8 trí ról frithocsaídeach agus frith-apoptotic a imirt [4]. Tá sé léirithe ag staidéir ghaolmhara go bhfuil dlúthbhaint ag mífheidhm chognaíoch de bharr SD le plasticity synaptic [5]. Mar sin féin, is beag tuairiscí ar an meicníocht trína rialaíonn GCanna plaisteacht synaptic agus a fheabhsaíonn lagú foghlama agus cuimhne agus meath cognaíoch i bhfrancaigh de bharr díothachta codlata. Dá bhrí sin, tá sé mar aidhm ag an staidéar seo iniúchadh a dhéanamh an bhfuil tionchar ag GCanna ar phlaisteacht shionaptach trí léiriú marcóirí a bhaineann le synaptic a rialáil, agus ar an gcaoi sin feabhas a chur ar fhoghlaim agus ar fheidhm chognaíoch na bhfrancach sa mhúnla díothachta codlata, agus ag soláthar smaointe cóireála agus pleananna nua maidir le cóireáil foghlama agus lagú cognaíocha de bharr neamhoird codlata le GCanna.

1 Ábhair agus Modhanna

1. 1 Ainmhithe turgnamhacha

Ceannaíodh francaigh fireann Wistar idir 6 agus 8 seachtaine d'aois, ag meáchan 280 go 300 g, ó Beijing Sibeifu, le ceadúnas táirgthe ainmhithe [SCXK (Beijing) 2019-0010]. Coinníodh na hainmhithe go léir in Ionad Turgnaimh Ainmhithe Choláiste Leighis Baotou faoi na coinníollacha seo a leanas: teocht (24 ± 1) céim , taise 50% go 55%, 12 h éadrom agus 12 h dorcha, gan aon srianta ar bhia agus uisce. Cheadaigh coiste eitice na scoile an turgnamh seo [Baoyi Lunshen 2022 No. (63)].

1. 2 Príomh-imoibrithe agus ionstraimí

Ceannaíodh gliocóisídí iomlána Cistanche deserticola ó Shaanxi Baoji Cosmeceuticals Development Co., Ltd. (uimhir bhaisc: KSM20220609011); ceannaíodh táibléid Estazolam ó CSPC Pharmaceutical Group Ouyi Pharmaceutical (uimhir bhaisc: 044220343); ceannaíodh maolán luchtaithe próitéine (P1015), maolán lysis RIPA (R0010), tuaslagán ceimiceach (PE0010), etc. ó Beijing Solebao; substaint dhlús postsynaptic antashubstaint 95 (PSD-95) (AB192757), antashubstaint synaptophysin (SYN) (ab32127), a ceannaíodh ó Abcam, SAM; fachtóir neurotrófach inchinn-díorthaithe (BDNF) (48503-2), -actin (52901), ceannaithe ó SAB, SAM; antashubstaint thánaisteach IgG frith-choine gabhar (SA00001-20), ceannaithe ó Proteintech, SAM; melatonin francach (MT), trealamh ELISA (MM-0657R1), a ceannaíodh ó Jiangsu Einsím Imdhíonachta Tionscal Co., Ltd. Sliseoir pairifín (Leica, an Ghearmáin); micreascóp optúil (Leica, an Ghearmáin); Maze uisce Morris, bosca tástála páirce oscailte (Shanghai Xinruan); ionstraim leictreafóiréis ingearach

(Cuideachta Beijing Liuyi); croiteoir decolorization (Cuideachta Beijing Liuyi); córas anailíse íomháithe próitéin (Shanghai Tanon Technology); fluaraiseacht ionstraim PCR cainníochtúil (Xi'an Tianlong Technology Co., Ltd).

1. 3 Modhanna turgnamhacha

1. 3. 1 Grúpáil ainmhithe agus riaradh drugaí

Roinneadh 50 francaigh fireann Wistar go randamach i ngrúpa rialaithe bán (Grúpa rialaithe), grúpa rialaithe ardáin (rialú ardán-foirm, grúpa PC), grúpa múnla (grúpa múnla), gliocóisídí iomlána de ghrúpa Cistanche deserticola (grúpa GCs). , 50 mg/kg), agus grúpa estazola (Grúpa Est, 0.54 mg/kg), le 10 bhfrancach i ngach grúpa. Tugadh 0.9% salanda don ghrúpa Rialaithe agus don ghrúpa PC trí thomhas. Cuireadh na grúpaí go léir ag 7 am gach lá tar éis don samhaltú tosú, agus mhair an gavage ar feadh 21 lá.

1. 3. 2. Múnla ainmhithe díothachta codlata a ullmhú

Bunaíodh an tsamhail díothachta codlata ag baint úsáide as an modh timpeallachta uisce il-ardán modhnaithe [6]. Ba umar uisce roisín poileitiléin dronuilleogach 130 cm × 50 cm × 45 cm an trealamh turgnamhach. Cuireadh ardán beag le trastomhas 5 cm agus airde 20 cm san umar uisce. Bhí trastomhas 10 cm ar ardán an ghrúpa PC agus airde 20 cm. Líonadh an umar uisce le huisce go dtí doimhneacht de thart ar 18 cm, agus coinníodh an teocht an uisce ag (20 ± 1) céim. Seachtain amháin roimh thús an turgnaimh, cuireadh na francaigh sa bhosca díothachta codlata gach lá ar feadh 60 nóiméad chun iad féin a chur i dtaithí ar an gcomhshaol. Tar éis an tsamhail a bhunú, ach amháin an grúpa Rialaithe, cuireadh francaigh gach grúpa ar an ardán beag in am ó 8 am go 8 pm gach lá le haghaidh díothachta codlata ar feadh 21 lá as a chéile. Bhí cead ag gach francach ithe agus ól faoi shaoirse agus bogadh faoi shaoirse ar an ardán, le 12 uair an chloig de mhalairt éadrom agus dorcha gach lá.

1.3.3 Turgnamh lúbra uisce Morris

Roinneadh an gcathair ghríobháin uisce Morris i 4 réimse, líonadh le huisce, agus cuireadh an t-ardán sa cheathrú 4ú. Bhí an dromchla uisce thart ar 2 cm os cionn an ardáin. Cuireadh melanin inite de ghrád bia leis an uisce, agus coinníodh teocht an uisce ag (25 ± 1) céim . (1) Turgnamh loingseoireachta suite: Roghnaíodh lár gach limistéir agus cuireadh na francaigh go réidh san uisce. Bhí cead acu iniúchadh a dhéanamh faoi shaoirse. Taifeadadh an t-am a thóg sé ar na francaigh an sprioc-ardán a aimsiú laistigh de 60 soicind. Treoraíodh francaigh nár aimsigh an t-ardán chuig an ardán agus d'fhan siad ar feadh 20 soicind. Leanadh den oiliúint ar feadh 5 lá. (2) Tástáil taiscéalaíochta spáis: Ar an 6ú lá, baineadh an t-ardán agus cuireadh na francaigh san uisce ó lár an 2ú ceathrú in aghaidh an bhalla. Taifeadadh an líon uaireanta a ndeachaigh na francaigh thar an ardán laistigh de 120 s agus an t-am ar fhan siad sa 4ú ceathrú.

1.3. 4 Turgnamh páirce oscailte

Baineadh úsáid as bosca turgnamhach 100 cm × 100 cm × 50 cm, agus roinntear bun an bhosca ina 9 greille. Cuireadh gach grúpa francaigh sa seomra turgnamhach páirce oscailte roimh ré chun oiriúnú don timpeallacht faoi dhíon ar feadh 60 min. Ag tús an turgnaimh, cuireadh na francaigh tástála i gcoirnéil sheasta an bhosca turgnamhach réimse oscailte ar a seal, agus taifeadadh líon na n-amanna seasamh, achar gluaiseachta, agus am statach na francaigh laistigh de 5 min ag baint úsáide as bogearraí anailíse iompraíochta. . Bhí gá leis an timpeallacht a bheith ciúin le linn an turgnaimh, agus wiped an gléas turgnamhach le huisce glan agus alcól faoi seach idir dhá thurgnaimh chun boladh an francach roimhe seo a sheachaint a dhéanann difear do bhreithiúnas iompraíochta an chéad francach eile.

1. 3. 5 Measúnacht imdhíonachta-nasctha le heinsím (ELISA)

Brath leibhéil serum MT i bhfrancaigh Rinneadh ainéistéisiú ar francaigh trí instealladh ion-peritoneal, agus bailíodh 5 ml fola ón aorta bhoilg. Tar éis fanacht ar feadh 30 nóiméad ag teocht an tseomra, lártheifneoiríodh an fhuil chun serum a fháil. Cuireadh 40 μL de chaolaitheoir samplach le gach tobar, agus ansin cuireadh 10 μL den sampla a bhí le tástáil leis. Tar éis a bheith ina saothraítear rónta leis an scannán séalaithe, gor ag 37 céim ar feadh 30 nóiméad. Nigh 5 huaire, cuir 50 μL de thuaslagán lipéadaithe einsíme, agus gor ag 37 céim ar feadh 30 nóiméad tar éis é a shéalú leis an scannán séalaithe. Nigh 5 huaire, ansin cuir an tuaslagán a fhorbraíonn dath agus an tuaslagán stad imoibriúcháin ar a seal. Rinneadh luach OD gach tobair a thomhas leis an ionstraim lipéadaithe einsíme ag tonnfhad 450 nm.

１. ３. ６ Nissl staining

Tógadh trí francach as gach grúpa, agus baineadh an fíochán inchinn trí dhíchaipitliú. Socraíodh an fíochán inchinn le tuaslagán polymethyl methacrylate 4%, agus díhiodráitíodh an fíochán, tumtha i dtuaslagán céir, agus leabaithe, agus slisníodh an fíochán trí mhodhanna traidisiúnta. Coinníodh na slices le tiús 5 μm, rinsithe le PBS, dhaite le 0. 1% toluidín gorm le haghaidh 0. 5 h, difreáilte le 95% alcól, díhiodráitithe le halcól 100%, trédhearcach le xiléin, agus séalaithe le guma neodrach. Breathnaíodh na hathruithe ar mhoirfeolaíocht agus ar líon na néaróin sa réigiún CA1 den hippocampus francach faoi mhicreascóp agus bailíodh íomhánna.

１. ３. 7 Turgnamh blot an Iarthair

Roghnaíodh ceithre francach as gach grúpa, agus scoiteadh an hippocampus trí chaipitliú. Meascadh an fíochán hippocampus le maolán RIP A lysis i dtimpeallacht folctha oighir agus lártheifneoiríodh é chun an forshnáthán a fháil. Braitheadh ​​an tiúchan próitéine leis an modh BCA. Cuireadh próitéin 20 ug leis le maolán luchtaithe próitéine le haghaidh leictreafóiréis. Tar éis don leictreafóiréis próitéine a bheith críochnaithe, aistríodh an membrane ag sreabhadh leanúnach 300 mA, blocáilte le púdar bainne bearrtha 5%, goraíodh an príomh-antasubstaint ag 4 céim thar oíche, agus gor an antashubstaint tánaisteach ag teocht an tseomra ar feadh 2 h. Tar éis an réiteach forbartha dath a úsáid, baineadh úsáid as an gcóras anailíse íomháithe chemiluminescence le haghaidh anailís staitistiúil ar bhannaí próitéine.

1. 3. 8 turgnamh RT-PCR

Roghnaíodh trí francach ó gach grúpa chun aonchineálach fíocháin hippocampus a ullmhú. Baineadh an RNA iomlán sa sreabhach fíocháin trí mhodh Trizol agus rinneadh an tiúchan a thomhas. Baineadh úsáid as trealamh sintéise cDNA troscadh le haghaidh tras-scríobh droim ar ais, agus úsáideadh imoibriú aimpliúcháin chainníochtúil fhluaraiseachta chun leibhéal slonn coibhneasta mRNA próitéine a bhaineann le synaptic a bhrath ag baint úsáide as trealamh cainníochtúil fluaraiseachta. Rinneadh anailís ar na torthaí ag baint úsáide as 2-ΔΔCt, agus taispeántar na seichimh primer i dTábla 1.

1.4 Modhanna staidrimh

Cuireadh na torthaí sonraí a bhí i gcomhréir leis an ngnáthdháileadh in iúl mar mheán ± diall caighdeánach (x ± s), agus rinneadh anailís staitistiúil ag baint úsáide as bogearraí GraphPad Prism 9.5. Baineadh úsáid as anailís aonfhachtóir ar athraitheas chun comparáid a dhéanamh idir samplaí iolracha, agus léirigh P < 0.05 go raibh an difríocht suntasach go staitistiúil.