Tionchar Tanshinone IIA Ar Fhreagra Athlasta de bharr LPS ar Mhodh Cleithiúnach Athlasta ROS-NLRP3 i gCealla RAW264.7
Mar 10, 2022
Le haghaidh tuilleadh eolais:emily.li@wecistanche.com
Buaicphointí
D’fhéadfadh Tan IIA bac a chur ar an bhfreagairt athlastach agus léiriú NLRP3 arna spreagadh ag LPS nó LPS móide ATP. D’fhéadfadh acetylcysteine (N-acetyl-l-cysteine, NAC), coscaire ROS, bac a chur ar LPS móide méadú spreagtha ATP ar an leibhéal NLRP3. D’fhéadfadh go mbeadh rialáil ar chonair ROS-NF-κB/P38-NLRP3 mar chuid den mheicníocht is bun le héifeachtaí Tan IIA. Chuir an staidéar seo saintréith bhreise ar mheicníocht mhóilíneach Tan IIA agus sholáthair sé smaointe nua dá theiripe chliniciúil.
Teibí
Tá sé léirithe ag fianaise atá ag teacht chun cinn go gcoisceann Tanshinone IIA (Tan IIA) gortú cardiomyocytes, fibroblasts cairdiacha, agus Atherosclerosis. Mar sin féin, níl an mheicníocht mhóilíneach atá mar bhunús le héifeachtaí Tan lA soiléir fós. Imscrúdú a dhéanamh ar ról Tan ll A sa fhreagra athlastach ar bhealach inflammasome-spleách ROS-NLRP3. Earcaíodh cealla RAW264.7 spreagtha le LPS chun samhail cille de fhreagairt athlastach a tháirgeadh. Léirigh ár dtorthaí gur tháinig méadú suntasach ar tháirgeadh NÍL tar éis dó a bheith spreagtha ag LPS. agus laghdaigh Tan IIA cóireáilte go suntasach an leibhéal UIMH. An slonn mRNA de NLRP3. Chuir Tan LLA bac suntasach ar IL-1B agus TNF-a i gcomparáid le cealla cóireáilte LPS. An slonn próitéine de NLRP3. Síníodh IKBa, pp65/p65, agus pp38/p38 laghdaithe go héifeachtach ag Tan IIA, i gcomparáid le grúpaí spreagtha LPS nó LPS móide ATP. Idir an dá linn. Chuir Tan IA bac suntasach ar an leibhéal ROS arna spreagadh ag LPS móide ATP. Agus d’fhéadfadh NAC, coscaire ROS, bac a chur ar léiriú próitéine NLRP3 freisin. Bunaithe ar na torthaí seo d’fhéadfaí tuairimíocht a dhéanamh go bhféadfadh rialáil chonair ROS-NF-kB/P38-NLRP3 a bheith i gceist leis an meicníocht is bun le héifeacht Tan IIA. Chuir an staidéar seo saintréith bhreise ar mheicníocht mhóilíneach Tan IA agus sholáthair sé smaointe nua dá theiripe chliniciúil.
Eochairfhocail: Tanshinone IIA,Athlasadh, NLRP3 inflammasome, ROS
Cúlra
Tá ról tábhachtach ag Macrophages maidir le hoiméastáis cairdiach a choinneáil agus deisiú fíocháin a dheisiú chomh maith le hathmhúnlú. Icroíteipothair, tá cítocíní serum pro-athlastacha ardaithe ceaptha mar bhithmharcóirí réamh-mheastacháin ar thorthaí cliniciúla níos measa, agusathlasadhféadfaidh sé cur le dul chun cinn cliseadh croí [1]. Cé goathlasadhtagtha chun cinn mar sprioc theiripeach chun galair cardashoithíoch a chóireáil, is cosúil, áfach, gur theip ar imdhíonacht leathan feabhas a chur ar thorthaí cliniciúla tar éis infarction miócairdiach (MI) nó cliseadh croí [2,3].
Tá sé léirithe ag roinnt staidéir chliniciúla go bhfuil cosc ar anathlastachcosán, mar shampla anathlastachd’fhéadfadh cítocín, IL-1 , teagmhais chardashoithíocha athfhillteacha a laghdú go héifeachtach [4, 5]. Is féidir tuairimíocht a dhéanamh go bhfuil tábhacht dhiagnóiseach agus theiripeach thábhachtach ag imdhíon-mhodúchán na freagartha athlastacha i bpróiseas na ngalar cardashoithíoch.
Is é NLRP3 inflammasome an ceann is mó staidéar ar gach cineál inflammasomes. Tá sé doiciméadaithe go bhfuil ról ríthábhachtach ag inflammasome NLRP3 i go leor galair, mar scléaróis iolrach (MS), galar Alzheimer (AD), Atherosclerosis, raimhre, agus diaibéiteas mellitus cineál 2 [6], agus léiríonn fianaise níos mó agus níos mó go NLRP3 tá baint ag inflammasome freisin le gortú ischemia miócairdiach/athfhriotú (MI/RI) [7,8]. D’fhéadfadh go n-áireofaí ar mheicníochtaí gníomhachtaithe NLRP3 giniúint speiceas ocsaigin imoibríoch (ROS), eisreabhadh potaisiam, agus scaoileadh cathepsin isteach sa chitosól tar éis díchobhsú lysosomal. Nuair a spreag pataiginí nó comharthaí contúirte cealla, cuireadh NLRP3 i ngníomh agus earcaíodh pro-caspase-1 tríd an próitéin cuibheora ASC. NLRP3. Rinne ASC agus pro-caspase-1 cóimeáil casta inflammasome NLRP3. Faoi ghníomh an NLRP3 inflammasome, cuireadh pro-caspase-1 i ngníomh le bheith ina caspase-1, rud a d’fhág go bhfuil IL-1 agus IL-18 faoi rún, agus ba chúis le sraith imoibrithe athlastacha [9,10].
Is comhábhar lipossoluble de Danshen (Sahia miltiorrhiza Bge) é Tan IIA, ag a bhfuil airíonna bitheolaíocha éagsúla agus ag glacadh páirte i sraith imoibrithe bithcheimiceacha. Tá Tan IAfrith-athlastach, frithocsaídeachagus cuireann sé éifeacht angiogenesis chun cinn, agus tá sé eisithe go forleathan freisin chun cóireáil a dhéanamh ar chóras cardashoithíoch galar [1, 12]. Tá sé léirithe ag fianaise atá ag teacht chun cinn go gcoisceann Tan IIA gortú cardiomyocytes, fibroblasts cairdiacha, atherosclerosis, agusnéar-athlasadh[13-16]. Mar sin féin, níl an mheicníocht mhóilíneach atá mar bhonn le héifeachtaí Tan IIA soiléir fós.
Le linn gortú ischemia/reperfusion, cuireann monocyte/macrophage, neutrophils, agus cealla endothelial tús leis anathlastachfhreagairt, as a dtagann scaoileadh éagsúlaathlastachcytokines, agus mar thoradh ar thréscaoilteacht soithíoch méadaithe, éidéime fíocháin, agus damáiste. Is cineál cille rialaithe athlastach tábhachtach é Macrophage i measc naathlastachspeiceas cille agus tá ról ríthábhachtach aige sa phróiseas infarction miócairdiach [17]. Is féidir le monaicítí/macrophage a earcaítear chuig an miócairdiam damáiste a scaoileadh tuilleadh ROS, idirghabhálaithe athlastacha, agus proteases a chuireann le díobháil miócairdiach [18].
Ar an gcúis go bhfuil ról tábhachtach ag macrophages maidir le hoiméastáis cairdiach a choinneáil agus deisiú fíocháin a chur i gceird, d'earcaigh muid cealla RAW264.7 spreagtha le LPS chun múnla cille de fhreagra athlastach a tháirgeadh. Rinne an staidéar reatha imscrúdú an bhfuil éifeacht ag Tan IIA ar mhacrophages spreagtha LPS, agus na meicníochtaí is bun le héifeachtaí Tan ⅡA ar mhacrophage ar bhealach inflammasome-spleách ar ROS-NLRP3.
Abhair agus modhanna
Cultúir agus Cóireáil Cille
Ceannaíodh cill RAW264.7 ó Ionad Cultúir na gCeall d'Acadamh Eolaíochtaí Leighis na Síne (Beijing, an tSín). Saothraíodh cealla i meán DMEM (glúcós ard), cuireadh 10 faoin gcéad de shéiream bó féatais (FBS), 100 U/mL peinicillin, agus100 ug/mL streiptimícin leis. Saothraíodh cealla ag 37 céim in atmaisféar iomlán taisithe le 5 faoin gcéad CO2. I gcás gach turgnaimh, déileáladh le cealla ag 80-90 faoin gcéad cumar cille. Cóireáladh na cealla le tiúchain éagsúla Tan IIA (ag 10,1, agus 0.1 uM) ar feadh tréimhsí éagsúla, le nó gan 1 ug/mL LPS. Idir an dá linn, déileáladh le cealla sa ghrúpa rialaithe le toirt comhionann 0.1 faoin gcéad DMSO.
Táirgeadh NÍL a thomhas
Baineadh úsáid as NÍL Assay Kit (Beyotime, an tSín) chun táirgeadh NÍL a thomhas de réir threoracha an mhonaróra. Go hachomair, caolaíodh na caighdeáin le DMEM móide 10 faoin gcéad FBS agus cuireadh comhshnaidhm caighdeánach nó saothrán cille 50μL le gach tobar den 96-pláta tobair. Ansin cuireadh 50ul de Imoibrí Griess I agus II isteach i ngach tobar den phláta agus bhraith léitheoir micreaphláta ilmhód Varioskan LUX an dlús optúil (OD) ag 540 nm.
Eastóscadh RNA
Plátáladh cealla RAW264.7 ag dlús 1 × 106 chealla / tobar le 10 faoin gcéad FBS DMEM i bplátaí sé-tobar. 24 uair an chloig ina dhiaidh sin, baineadh an meán agus cuireadh é le meán DMEM saor ó serum, saor ó antaibheathach ina ionad. Cóireáladh cealla RAW264.7 le DMSO (rialú), LPS (1 ug/mL) agus LPS móide Tan IIA(10,1, agus0.1uM ar feadh 6h. Ansin baineadh RNA iomlán chun an leibhéal mRNA de NLRP3, IL{ a bhrath). {18}} , agus TNF- . Baineadh RNA iomlán trí úsáid a bhaint as an imoibrí TRIzol (Ambion) Rinneadh RNA a thomhas de réir comhchruinnithe Va an speictreafótaiméadar ultramicrofluorescence (DeNovix) Baineadh úsáid as trealamh sintéise cDNA HiFiScript (cwbiotech) le haghaidh tras-scríobh droim ar ais. treoracha an mhonaróra Rinneadh 1 ug de shamplaí RNA droim ar ais-trascríobh, agus bhí na céimeanna imoibrithe mar seo a leanas: 42 céim C ar feadh 50 nóiméad, 85 céim C ar feadh 5 nóiméad, agus ansin coinníodh ag 4 céim .
RT-PCR
Rinneadh measúnacht Ouantitative PCR (OPCR) le hionstraim O-PCR (Lightcycler 96, Roche), ag baint úsáide as meascán UltraSYBR (cwbiotech). Ba é an prótacal PCR ná 95 céim ar feadh 10 nóiméad, agus ina dhiaidh sin 40 timthriall de 95 céim ar feadh 10idí, 56 ar feadh 30í, agus 72 ar feadh 32í. Taispeántar na primers a úsáidtear le haghaidh qRT-PCR mar seo a leanas: GADPH-Forward: 5'-AACTTTGGCATTGTGGAAGG-3'; GADPH-Reverse:5'-ACACATTGGGGGTAGGAACA-3',NLRP3-Ar aghaidh: 5'-ATGCTGCTTCGACATCTCCT-3'NLRP3-Cúl:5'-AACCAATGCGATCCTGAC-3';IL-1 -Ar Aghaidh:5'-GCCCATCCTCTGACTCAT-3';IL{ {32}Cúl:5'- mhaighACAGGTATTTTCG-3':TNF- -Ar Aghaidh:5'-GCAGATGGGCTGTACCTTTATC-3'TNF-a-Reverse:5'-GCAGATGGGCTGTACCTTTATC-3 ! Ríomhadh leibhéal slonn géine ag baint úsáid as an modh 2-AACt.
Blotting an Iarthair
Rinneadh blotáil an iarthair leis na nithe seo a leanasantasubstaintí: antashubstaint frith-NLRP3(CST), antashubstaint frith-pp38(CST), antashubstaint frith-p38(CST), antashubstaint frith-pp65(CST), antashubstaint frith-GADPH (teicneolaíocht próitéin), antashubstaint fhrith- -tubulin (teicneolaíocht próitéin), antashubstaint frith-HMGB1 (teicneolaíocht próitéin), antashubstaint frith-p65 (teicneolaíocht próitéine), frith-IKB- antashubstaint (teicneolaíocht próitéine). Baineadh codáin phróitéin as lísáití na gceall saothraithe agus úsáideadh Feiste Measúnaithe Próitéine BCA (Beyotime, an tSín) chun na tiúchan próitéine a thomhas. Dínádúraíodh próitéiní agus réitíodh iad ar SDS-PAGE, agus ansin aistríodh iad chuig membrane PVDF. Tar éis blocáil le QuickBlockTMBlocking Maolán (Beyotime, An tSín) ar feadh 1 h, goraíodh na seicní PVDF ansin le hantasubstaintí príomhúla thar oíche ag 4 chéim . Ansin nite na seicní le Western Wash Maolán (Beyotime, An tSín) trí huaire, agus goraíodh iad le hantasubstaintí tánaisteacha comhchuingeacha HRP ar feadh 1 h ag teocht an tseomra. Baineadh úsáid as trealamh BeyoECL Plus (Beyotime, China) chun na próitéiní a bhrath de réir threoracha an déantóra. Fostaíodh C-DiGit 3600 (Li-Cor, SAM) chun íomhá a dhéanamh agus rinne Image J Software na bannaí a chainníochtú.
Tomhas ar charnadh ROS
Baineadh úsáid as Kit Measúnachta Speiceas Ocsaigin Frithghníomhach probe DCFH-DA (Beyotime, an tSín) chun leibhéil ROS intracellular i gcealla RAW264.7 a thomhas de réir threoracha an mhonaróra. Go hachomair, caolaíodh DCFH-DA le meán DMEM saor ó serum agus coigeartaíodh an tiúchan deiridh go 10μM/L. Tar éis gor le lí 10 μM DCFH-DA ar feadh 30 nóiméad ag 37 céim C, nite cealla RAW264.7 trí mheán DMEM saor ó serum, ionas go mbainfí an iomarca DCFH-DA. Ar mhaithe le rialú dearfach, go maith, cuireadh lμL de Rosup leis na cealla. Rinneadh an fhluaraiseacht a chainníochtú trí úsáid a bhaint as micreascóp inbhéartaithe Nikon IX73. Rinneadh íomhánna de chealla a thomhas ag baint úsáide as Bogearraí Íomhá J.
Anailís staitistiúil
Rinneadh na turgnaimh go léir arís trí huaire ar a laghad. Baineadh úsáid as bogearraí SPSS le haghaidh gach anailíse, agus rinneadh an GraphPad Prism 5 don líníocht ghrafaice. Tugadh na torthaí go léir mar an meánluach ± SD. Baineadh úsáid as ANOVA aontreo chun anailís a dhéanamh ar shonraí i measc grúpaí agus comparáid péireáilte ag baint úsáide as an tástáil SNK-q. A luach P< 0.05="" was="" considered="" statistically="" significant="" in="" all="">
Fíor 1. Bhí éifeacht rialála ag Tan IIA ar tháirgeadh NÍL, NLRP3, IL-1 , TNF- mRNA
léiriú
A. RAW264.7 Cealla NÍL táirgeadh grúpaí éagsúla. Rinneadh na cealla a réamhchóireáil le Tan IIA 10µM, 1µM, agus
{{0}}.1µM ar feadh 30 nóim agus spreagtha le LPS (1 ug/mL) ar feadh 24 uair. * P < 0.05="" vs="" ctrl,="" #="" p="">< 0.05="" vs="" lps.="" bd.="" tan="">
bhí éifeacht rialála aige ar léiriú mRNA de TNF- , NLRP3, agus IL-1 . Bhí na cealla pretreated le Tan IIA
Torthaí
An Éifeacht ar RAW264.7 Cealla NÍL Cóireáil Tan IIA a tháirgeadh
Déanann NÍL, an dara móilín teachtaire, feidhmeanna éagsúla i bpróisis fiseolaíocha agus paiteolaíocha cille. Tá ról tábhachtach ag NO secreted ag macrophages i bhfrithghníomhartha athlastacha, imdhíonachta agus frithvíreasacha [19, 20]. Mar gheall orthu seo, is féidir NÍL a úsáid chun éifeachtaí LPS ar fhreagraí imdhíonachta agus athlastacha a mheas. Cóireáladh na cealla le tiúchain éagsúla Tan IIA (ag 10, 1, agus 0.1 μM) le nó gan 1 ug/mL LPS ar feadh 24h, agus déileáladh leis na cealla sa ghrúpa rialaithe le toirt comhionann de 0.1 faoin gcéad DMSO. Mar a thaispeántar i bhFíor 1A, i gcomparáid leis an ngrúpa rialaithe, sa ghrúpa múnla spreagtha le LPS ar feadh 24h, tháinig méadú suntasach ar tháirgeadh NÍL (P<0.05); and="" various="" concentrations="" of="" taniia="" treatment="" (at="" 10,="" 1,="" and="" 0.1="" μm)="" significantly="" decreased="" the="" no="" production=""><0.05) of="" the="" cells="" stimulated="" with="">
An Éifeacht ar léiriú NLRP3, IL-1 agus TNF- mRNA ar Chóireáil Tan IIA
D'fhéadfadh cealla RAW264.7 a spreagtar le LPS gníomhachtú na freagartha athlastacha a spreagadh, agus d'fhéadfadh Tan IIA é a fheabhsú, lena n-áirítear an abairt mRNA de NLRP3, IL-1 , agus TNF- . Mar a léirítear i bhFíor 1B-D, i gcomparáid leis an ngrúpa rialaithe, sa ghrúpa múnla spreagtha le LPS, méadaíodh go suntasach an slonn mRNA de NLRP3, IL-1 agus TNF- (P < {{1{{14}).="" }}}.05);="" agus="" laghdaigh="" tiúchan="" éagsúla="" de="" chóireáil="" tan="" iia="" (ag="" 10,="" 1,="" agus="" 0.1="" μm)="" go="" suntasach="" an="" abairt="" mrna="" de="" nlrp3,="" il-1="" agus="" tnf-="" (p="">< 0.05)="" i="" gcealla="" spreagtha="" le="">
An Éifeacht ar léiriú próitéine NLRP3 de Chóireáil Tan IIA
Is gníomhaí é ATP, an dara móilín comhartha, a theastaíonn le haghaidh gníomhachtú inflammasome NLRP3. Mar sin, baineadh úsáid as ATP chun gníomhachtú NLRP3 a spreagadh [21, 22]. Léirigh ár dtorthaí gur spreag LPS móide ATP gníomhachtú slonn próitéine NLRP3 agus go bhféadfadh Tan IIA é a fheabhsú. Mar a léirítear i bhFíor 2, i gcomparáid leis an ngrúpa rialaithe, sa mhúnlaghrúpa arna tharlú ag LPS móide ATP, méadaíodh leibhéal slonn próitéine NLRP3 go suntasach (P < 0.05);="" agus="" laghdaigh="" cóireáil="" taniia="" (ag="" 10μm)="" go="" suntasach="" an="" léiriú="" próitéine="" de="" nlrp3="" (p="">< 0.05)="" i="" gcealla="" spreagtha="" le="" lps="" móide="">
D’fhéadfadh Tan IIA gníomhachtú spreagtha LPS NF-κB agus cosán p38 a chosc
Mar a léirítear i bhFíor 2, i gcomparáid leis an ngrúpa rialaithe, sna cealla spreagtha le LPS nó LPS móide ATP, tháinig méadú suntasach ar abairt próitéin IKB , pp65/p65 (P < 0.05);="" agus="" cóireáil="" tan="" iia="" (ag="" 10μm)="" laghdú="" suntasach="" ar="" an="" upregulation.="" rinneadh="" an="" leibhéal="" próitéine="" pp38/p38="" a="" uasrialáil="" i="" gcealla="" spreagtha="" le="" lps="" móide="" atp,="" agus="" chuir="" tan="" iia="" (10μm)="" (fíor="" 2)="" bac="" ar="" an="" upregulation.="" mar="" sin="" féin,="" níor="" tháinig="" athrú="" suntasach="" ar="" an="" leibhéal="" próitéine="" pp38/p38="" i="" gcealla="" spreagtha="" le="" lps.="" ina="" theannta="" sin,="" feabhsaíodh="" léiriú="" próitéine="" hmgb1="" freisin="" i="" gcealla="" a="" tharlódh="" le="" lps="" nó="" lps="" móide="" atp="" ach="" níor="" léirigh="" aon="" difríocht="" staitistiúil.="" tugann="" na="" torthaí="" seo="" le="" fios="" go="" bhféadfadh="" tan="" iia="" bac="" a="" chur="" ar="" ghníomhachtú="" spreagtha="" ag="" lps="" nó="" lps="" móide="" atp="" ar="" chonair="" nf-κb="" agus="">
Bhí éifeacht rialála ag Tan IIA ar ROS
Chun a dhearbhú an bhféadfadh Tan IIA ROS infhéitheach a scamhadh, rinneadh meastóireacht ar tháirgeadh ROS incheallach trí mhicreascópacht fhluaraiseachta ag baint úsáide as Kit Measúnaithe Speiceas Ocsaigin Imoibríoch. Nochtadh na cealla RAW264.7 do LPS ar feadh 6 h, agus cuireadh 1 mM ATP 30min sular baineadh na cealla. Rinneadh na cealla ROS-dearfach a léirshamhlú mar spotaí geala glasa, agus mhéadaigh cóireáil LPS móide ATP leibhéal na ROS intracellular go suntasach, i gcomparáid leis an leibhéal sa ghrúpa rialaithe (Fíor 3). Idir an dá linn, chuir cóireáil le Tan IIA bac suntasach ar an LPS móide méadú ATP-spreagtha ar ROS incheallach (Fíor 3). Mhol na torthaí seo go raibh cumas frithocsaídeach ag Tan IIA.
Fíor 3. Bhí éifeacht rialála ag Tan IIA ar léiriú ROS (barra scála 50μm)
Rinneadh na cealla a réamhchóireáil le Tan IIA 10µM ar feadh 30 nóim agus spreagadh iad le LPS (1 ug/mL) ar feadh 5.5 h. Cuireadh ATP leis 30 nóiméad sular baineadh cealla. A. Íomhánna fluaraiseachta ionadaíocha de léiriú cille ROS. B. Sonraí cainníochtúla an mheáin thar thrí thurgnamh ar leith. * P < 0.05="" vs="" ctrl,="" #="" p="">< 0.05="" vs="" lps/lps="" móide="">
Fíor 4. Bhí éifeacht rialála ag NAC ar léiriú próitéine NLRP3.
Rinneadh na cealla a réamhchóireáil le Tan IIA 10µM ar feadh 330 nóim agus spreagadh iad le LPS (1 ug/mL) / LPS (1 ug/mL) móide NAC (1mM) ar feadh 5.5 h. Cuireadh ATP leis 30 nóiméad sular baineadh cealla. A. Ionadaí blot an Iarthair de NLRP3. B. Sonraí cainníochtúla an mheáin thar thrí thurgnamh ar leith. * P < 0.05="" vs="" ctrl,="" #="" p="">< 0.05="" vs="" lps="" móide="">
Bhí éifeacht rialála ag NAC ar NLRP3
D’fhéadfadh acetylcysteine (N-acetyl-l-cysteine, NAC), scavenger de ROS, bac a chur ar léiriú próitéine NLRP3. Mar a luadh cheana, tháinig méadú suntasach ar léiriú próitéine NLRP3 tar éis spreagtha le LPS móide ATP ar feadh 6h, agus chuir cóireáil le Tan IIA bac ar an LPS móide méadú spreagtha ATP i leibhéal próitéin NLRP3. Ina theannta sin, d'fhéadfadh cóireáil le NAC bac suntasach a chur ar LPS móide méadú de bharr ATP ar leibhéal próitéine NLRP3 (Fíor 4). Léirigh na torthaí seo go bhféadfadh éifeacht rialála Tan IIA ar NLRP3 a bheith ag brath ar chonair ROS-NLRP3.
Plé
Macrophages páirt a ghlacadh i bpróiseas an freagra athlastacha agus tá ról ríthábhachtach acu sa phróiseas infarction miócairdiach. Is féidir le monaicítí / macrophage a earcaítear chuig an miócairdiam damáiste a scaoileadh tuilleadh ROS, idirghabhálaithe athlastacha, agus protease, rud a chuireann gortú miócairdiach níos measa [23]. Breathnaíodh ar chealla RAW264.7 mar mhúnla macrophage turgnamhach ceannasach, agus tá ról tábhachtach acu i dtaighde ar bhealaí comharthaíochta athlastacha ábhartha macrophage [24]. Tá ról ríthábhachtach ag Macrophages maidir le hoiméastáis cairdiach a choinneáil agus deisiú fíocháin a dheisiú chomh maith le hathmhúnlú. Úsáideadh cealla RAW264.7 spreagtha LPS go forleathan chun staidéar a dhéanamh ar dhrugaí a bhfuil airíonna frith-athlastacha agus meicníochtaí bunúsacha [25,26].
Tá an NLRP3 inflammasome ina idirghabhálaí ríthábhachtach ar fhreagraí athlastacha, agus tá fianaise mhéadaithe ann go bhfuil ról ríthábhachtach ag inflammasome NLRP3 i galair croí. I soithí artaireach daonna, rinneadh ard-léiriú NLRP3 a chomhghaolú le fachtóirí riosca galair atherosclerotic agus déine galar artaire corónach [27], agus bhí leibhéal na ngéinte inflammasome NLRP3 bainteach le plaic atherosclerotic [28]. Bhí baint ag gníomhachtú an inflammasome NLRP3 le hathmhúnlú cairdiach díobhálach freisin. Cuireadh NLRP3 i ngníomh i gcridimiicítí i múnla athmhúnlaithe cairdiach díobhálach spreagtha lucha (TAC) a tharlódh ó choinbhleacht aortach (TAC), agus de bharr gníomhachtú NLRP3 inflammasome rinneadh claochlú pro-caspase-1 go dtí a fhoirm ghníomhach [29]. MCC950.a D'fhéadfadh inhibitor inflammasome NLRP3 bac a chur ar éifeacht atherosclerotic, is dócha ar bhealach chun greamaitheacht monocytes a chosc agus carnadh macrophages intraplaic a laghdú [30].
Is monaiméir mór é Tan IIA a bhaintear as Danshen, a bhfuil airíonna bitheolaíocha éagsúla aige. Tá Tan ⅡAfrith-athlastach, frithocsaídeachagus cuireann sé éifeacht angiogenesis chun cinn, agus úsáideadh go forleathan é le haghaidh cóireáil galair an chórais cardio-cerebrovascular [11]. Tá sé léirithe ag fianaise atá ag teacht chun cinn gur chuir Tan A cosc ar ghortú cardiomyocytes, fibroblasts cairdiacha, atherosclerosis, agusnéar-athlasadh[13-16]. Léirigh ár gcuid staidéir roimhe seo go ndearna Tan IIA éifeacht frith-athlastach trí chosc a chur ar chonair chomharthaíochta TLR4-MyD88- NF-KB agus trí léiriú miRNA gaolmhar a choigeartú i gcealla RAW264.7 spreagtha LPS [31] . Ina theannta sin, d'fhéadfadh Tan IIA polarú macrophage a chur chun cinn ó fheinitíopa pro-athlastach M1 i dtreo feinitíopa frith-athlastach M2 [32]. Mar sin féin, ní raibh an mheicníocht mhóilíneach ba bhun le héifeachtaí Tan IIA soiléir fós.
Tá sé léirithe ag ár dtorthaí gur tháinig méadú suntasach ar tháirgeadh NÍL i gcealla RAW264.7 spreagtha le LPS, agus laghdaigh cóireáil Tan IIA (ag 10,1, agus 0.1 uM) táirgeadh NÍL na gceall go suntasach. D'fhéadfadh cealla RAW264.7 a spreagtar le LPS gníomhachtú na freagartha athlastacha a spreagadh, agus d'fhéadfadh Tan IIA é a fheabhsú, lena n-áirítear an abairt mRNA de NLRP3, IL-1 , agus TNF- .ATP an dara móilín comhartha de NLRP3 gníomhachtaithe inflammasome. Sa staidéar, úsáideadh ATP chun gníomhachtú NLRP3 a spreagadh. Léirigh na torthaí gur spreag LPS móide ATP gníomhachtú léiriú próitéine NLRP3 agus go bhféadfadh Tan IIA é a fheabhsú. Sna cealla spreagtha le LPS nó LPS móide ATP tháinig méadú suntasach ar léiriú próitéine IKBa, pp65/p65; agus cóireáil Tan IA (ag 10μM) laghdú suntasach ar an upregulation. Rinneadh leibhéal próitéin pp38/p38 a uasrialáil i gcealla spreagtha le LPS móide ATP, agus chuir Tan IA(10uM) bac ar an upregulation. Ina theannta sin, feabhsaíodh léiriú próitéine HMGB1 freisin i gcealla a tharlódh le LPS nó LPS móide ATP ach níor léirigh aon difríocht staitistiúil. Thug na torthaí seo le tuiscint go bhféadfadh Tan IIA bac a chur ar ghníomhachtú spreagtha ag LPS nó LPS móide ATP ar chonair NF-kB agus p38.
Mhéadaigh cóireáil LPS móide ATP an leibhéal ROS infhéitheach go suntasach, agus chuir Tan IIA bac suntasach ar an méadú LPS móide ATP ar ROS incheallach. Is scavenger de ROS é aicéitilcysteine (N-acetyl-I-cysteine, NAC). D’fhéadfadh NAC bac suntasach a chur ar IPS móide méadú de bharr ATP ar leibhéal próitéine NLRP3. Thug na torthaí seo le fios go raibh an cumas frithocsaídeach ag Tan IIA agus go bhféadfadh éifeacht rialála Tan IIA ar NLRP3 a bheith ag brath ar chonair ROS-NLRP3.
Chun achoimre. D’fhéadfadh Tan IIA bac a chur ar an bhfreagairt athlastach agus léiriú NLRP3 arna spreagadh ag LPS nó LPS móide ATP, agus d’fhéadfadh NAC bac a chur ar LPS móide méadú spreagtha ATP ar leibhéal NLRP3. Leis seo, d’fhéadfaí tuairimíocht a dhéanamh go bhféadfadh rialáil an chonair ROS-NF-kB/P38-NLRP3 a bheith i gceist leis an meicníocht is bun le héifeachtaí Tan IIA. Chuir an staidéar seo saintréith bhreise ar mheicníocht mhóilíneach Tan IA agus sholáthair sé smaointe nua dá theiripe chliniciúil.
Tagairtí
1 M.DeBerge.SJ. Shah, L. Weilbacher, et al Macrophages i cliseadh croí le codáin ejection laghdaithe i gcoinne leasaithe. Treochtaí Mol. Meán 2019, 25: 328-340.
2. GH. Gislason, S. Jacobsen, JN Rasmussen, et al Riosca báis nó athinfarction a bhaineann le húsáid coscairí roghnaíoch cyclooxygenase-2 agus drugaí frith-athlastach neamhstéaróideach neamhroghnacha tar éis infarction miócairdiach géarmhíochaine. Scaipeadh 2006, 113: 2906-2913
3. DM McNamara, R. Holubkov, RCStarling, et al. Triail rialaithe ar globulin imdhíonachta infhéitheach i gcridiomyopathy dilated le déanaí. Ciorclaíocht 2001, 103:2254-2259.
4. PM Ridker, BMEverett, T.Thuren, et al. Teiripe antiinflammatory le canakinumab le haghaidh galar atherosclerotic. N Béarla J Meán 2017,377:1119-1131. PMRidker, JG MacFadyen, T. Thuren, et al.
5. Tionchar coiscthe béite idirleukin le canakinumab ar ailse scamhóige teagmhasach in othair a bhfuil Atherosclerosis orthu: torthaí taiscéalaíochta ó thriail randamach, dhá-dall, faoi rialú phlaicéabó. Lancet 2017,390: 1833-1842. H. Guo, JB Callaway, JP Ting.
6. meicníocht gníomhaíochta, ról i ngalar, agus teiripeacht. Nat Med 2015,21:677-687.
7. L.Minutoli.D.Puzzolo,M.Rinaldi, et al. Gníomhachtú inflammasome NLRP3 ROS-idirghabhála san inchinn. croí. gortú duáin, agus ischemia / reperfusion.Ocsaíd Med Cell Longley 2016.2016:2183026.
8. M.KawaguchiM.TakahashiTHata, et al. Tá gníomhachtú inflammach fibroblasts cairdiacha riachtanach le haghaidh ischemia miócairdiach / gortú reperfusion. Scaipeadh 2011, 123:594-604. G. Trendelenburg. Rialú móilíneach ar chinniúint na gceall
9. in ischemia cheirbreach: ról na cosáin athlastacha agus nasctha. J Cereb Meiteán Sreabhadh Fola 2014,34:1857-1867.
10.C. Jin, RAFlavell. Meicníocht mhóilíneach gníomhachtaithe inflammasome NLRP3.J Clin Immunol 2010,30:628-631.
11.Y. Cai. W, Zhang, Z.Chen, et al. Léargais le déanaí ar ghníomhaíochtaí bitheolaíocha agus córais seachadta drugaí tanshinones. Int J Nanomedicine 2016,11:121-130.
12. M.Akaberi, M.Iranshahi, S. Mehri. Diterpenes conairí comharthaíochta móilíneach taobh thiar d'éifeachtaí bitheolaíocha na speiceas Salvia i néar-chógaiseolaíocht agus cairdeolaíochta. Phytother Res2016.30:878-893.
13. D. Wang, Y.Liu, G.Zhong, et al. Comhoiriúnacht tanshinone IIA agus astragaloside IV maidir le díobháil cardiomyocytes de bharr hypoxia a mhaolú. Eitnopharmacol 2017,204:67-76.
14. Comhchuibhíonn W. Chen, X.Li, S.Guo, et al.Tanshinone IIA crosphlé na n-uathphagy agus polarú i macraphages trí chonair miR-375/KLF4 chun Atherosclerosis a mhaolú. Int Immunopharmacol 2019,70:486-497.
15. YT Tsai, SHLoh, CY Lee, et al. Coscann Tanshinone A sintéis ard-glúcóis-spreagtha collaigine trí erythroid fachtóir núicléach 2-fachtóir gaolmhar 2 i fibroblasts cairdiacha. Bithcheimic Physiol Cille 2018,51:2250 2261.
16.N. Huang, Y.Li, Y. Zhou, et al. Eascraíonn éifeacht néarchosanta cealla mesenchymal tanshinone IA-ghortaithe Abeta25-35-spreagtha 5C Ar neuroinflammation.Behav Brain Res 2019,365:48-55.
17.T. Heidt. G Courtesies, P Dutta, et al. Ranníocaíocht dhifriúil monocytes le macrophages croí i stát seasta agus tar éis infarction miócairdiach. Ciorcal Res 2014,115:284-295.
18. S. Steffens,F. Montecuco, F. Mach. Is é an freagra athlastach sprioc chun an ischemia miócairdiach agus gortú reperfusion a laghdú. Thromb Haemost 2019,102:240-247.
19.J. Mac Micking, OW Xie. C. Nathan Ocsaíd nítreach agus feidhm macrophage Annu Rev Immunol 1997,15: 323-350.
20.SHHH. W, WU NÍL ag Work.Cell 1994.78: 919-925.
21. L. Franchi, T. Eigenbrod, R. Munoz-Planllo, et al The inflammasome: ardán gníomhachtaithe caspase a rialaíonn freagairtí imdhíonachta agus pataigineas galair. Nat Immunol 2009,10:241-247.
22. X. Dong Z. Zheng, P. Lin, et al ACPAs chun cinn IL-1táirgeadh béite in airtríteas réamatóideach trí ghníomhachtú an NLRP3 inflammasome. Cill Mol Imdhíon 2019.
23. PJ. Murray, TA Wynn. Feidhmeanna cosanta agus pataigineacha na bhfo-thacairí macrophage. Nat Rev Immunol 2011,11:723-737.
24. Déanann G Pascual, AL Fong, S.Ogawa, et al.A conair atá cleithiúnach ar SUMOylation idirghabháil ar thrasbhrú géinte freagartha athlastacha trí PPAR-gáma. Nádúr 2005,437:759-763.
25.X. Zhang G.Wang, ECGurley, et al. Coscann apigenin flavonoid freagairt athlastach a chothaíonn polaisiúicríd lipo trí mheicníochtaí iolracha i macrophages. PLoS a hAon 2014,9:e107072.
26. Z. Yuan, MA Syed, D.Panchal, et al. Cuireann modhnú epigenetic trí Curcumin bac ar léiriú TREM-1 mar fhreagra ar lipopolysaccharide. Int J Biochem Cell Biol 2012,44:2032-2043.
27.F.Zheng.S, Xing. Léiríonn inflammasomes Zhong, et al NLRP3 léiriú ard san aorta na n-othar a bhfuil Atherosclerosis orthu. Ciorcal Scamhóg Croí 2013, 22:746-750.
28. G Paramel Varghese, L. Folkersen, RJ Strawbridge, et al. NLRP3 léiriú inflammasome agus gníomhachtú in Atherosclerosis daonna. J Am Heart Association 2015,5.
29.T. Tá Suetomi, A. Willeford, CSBrand, Athlasadh Er al agus gníomhachtú inflammasome NLRP3 tionscanta mar fhreagra ar ró-ualach brú ag Ca(2 móide )/comharthaíocht delta próitéin kinase II atá ag brath ar chalmodulin i gcairdiomyocytes riachtanach d'athmhúnlú díobhálach cairdiach. Scaipeadh 2018, 138:2530-2544.
30. T. van der Heijden, E. Kritikou, W. Venema, et al. Laghdaíonn cosc inflammasome NLRP3 ag MCC950 forbairt lota atherosclerotic in apolipoprotein E-easnamhach tuairisc ghearr ar lucha. Arterioscler Thromb Vasc Biol 2017,37:1457-1461.
31. G Fan.X. Jiang. X. Wu, e1 al. Gníomhaíocht frith-athlastach tanshinone IIA i macrophages RAW264.7 spreagtha ag LPS trí miRNAs agus TLR4-Conair NF-kappaB. Athlasadh 2016,39: 375-384.
32. S. Gao, Y. Wang, D. Li, et al. Maolaíonn Tanshinone IIA freagra athlastach agus stiúrann sé polarú macrophage i gcealla RAW264.7 spreagtha lipopolysaccharide. Athlasadh 2019, 42: 264-275.
