Tionchar Rith II Ar Fhás Agus Metastasis Mheall Trasphlandaithe i lucha ar a bhfuil Ailse Mamó agus a Mheicníocht

Cuspóir:

Staidéar a dhéanamh ar éifeacht Runing II (ullmhú luibhe Síneach le haghaidh ailse mhamach) ar fhás agus ar mheitastasis siadaí trasphlandaithe ailse mhamach MA-891-ar a bhfuil lucha TA2 agus a mheicníocht. Modhanna: Forbraíodh an tsamhail ailse mhamach MA-891 siadaí trasphlandaithe brú cille de lucha TA2 le metastasis scamhóg chun éifeacht Rith II ar fhás agus ar mheitastasis an siadaí trasphlandáilte a urramú. Glacadh leis an modh immunohistochemical agus anailís íomhá chun leibhéil fachtóir fáis endothelial soithíoch (VEGF), receptor fachtóir fáis endothelial soithíoch (VEGFR), comhaireamh micrea-soitheach (MVC), agus limistéar micrea-soitheach (MVA) a bhrath.

Torthaí: Sa ghrúpa Running II, bhí an ráta coiscthe meáchain meall agus an ráta coiscthe metastasis scamhóg 37.3 faoin gcéad agus 65.4 faoin gcéad faoi seach, is léir go raibh bac ar fhás siadaí agus metastasis scamhóg; Agus tháinig laghdú suntasach ar leibhéil VEGF agus VEGFR, MVC, agus MVA i gcomparáid leo siúd sa ghrúpa rialaithe siadaí (P).<0.05). Conclusion: The Chinese herbal preparation Running II can inhibit the metastasis of tumors by inhibiting angiogenesis, and the mechanism is possibly related to the down-regulation of VEGF and VEGFR expression.

Ina theannta sin, ag an am céanna taighde, fuair muid amach go bhfuil éifeacht frith-meall ag echinacea i Cistanche. Chun echinacoside a chur i bhfeidhm i ndrugaí antitumor, cuireann an t-aireagán reatha MTH1, pyrophosphatase neamhorgánach, agus dGTP leis an tuaslagán imoibrithe (100mM pH8.0 Aigéad aicéiteach, 40mM NaCl, 10mM ar dtús). aicéatáit mhaignéisiam, 0.005 faoin gcéad Tween20 agus 1mMDTT) Sa mhodh, gor an einsím agus an tsubstráit ag teocht an tseomra ar feadh 1 uair an chloig agus ansin cuireadh 25 ul den tuaslagán glas malachite leis an imoibriú a fhoirceannadh. Braitheadh ​​an t-ionsúite ag 630 nm le léitheoir micreaphláta BIO-RAD iMark. Léirigh na torthaí go raibh éifeacht coisctheach suntasach ag echinacoside ar ghníomhaíocht einsímeach MTH1; Ar an dara dul síos, braitheadh ​​​​measúnú MTT éifeacht echinacoside ar chealla meall ag an leibhéal ceallacha, agus léirigh na torthaí go bhféadfadh echinacoside bac suntasach a chur ar fhás cealla ailse drólainne SW480 agus cealla osteosarcoma daonna U2OS, agus chuir an t-aireagán reatha bac ar fhás echinacoside. Mar thoradh ar MTH1, einsím ar leith a chothaíonn marthanacht i gcealla siadaí, ionchorpraítear núicléatídí ocsaídithe isteach i DNA, rud a fhágann briseadh marfach snáithe dúbailte DNA i gcealla ailse, rud a chruthaíonn éifeachtaí frith-meall. Leagfaidh an t-iarratas leighis nua an bunús le haghaidh forbairt drugaí antitumor nua sa todhchaí.

Cliceáil ar an táirge éifeachtaí cistanche

Eochairfhocail:

meall mhamach; angiogenesis; fachtóir fáis endothelial soithíoch (VEGF); Running II (ullmhú luibhe Síneach le haghaidh ailse mamaí)

Is meall urchóideach í an ailse mhamach atá ag bagairt go mór ar shláinte na mban agus tá minicíocht an ghalair ar an gcéad dul síos i measc siadaí urchóideacha baineann, le claonadh go méadaítear bliain i ndiaidh bliana. Cé go bhfuil roinnt dul chun cinn déanta ag a modhanna teiripeacha, níor ardaíodh an ráta marthanais fadtéarmach don othar a bhfuil ailse mhamach air mar gheall ar fhás ionrach agus metastasis siadaí. Is coinníoll bunúsach é angiogenesis tumaí d’fhás, ionradh, agus metastasis siadaí.

Dá bhrí sin, is bealach éifeachtach é cosc ​​​​a chur ar angiogenesis siadaí chun táirgeadh agus forbairt siadaí a chosc agus saolré an othair a shíneadh.1 Sa staidéar reatha, meicníocht an druga Síneach Running II le feidhmeanna qi a fhorlíonadh agus ceann cothaitheach, Rinneadh staidéar ar bhealaí agus ar shoithí giniúna a rialáil, mais a réiteach, agus díthocsaineach chun siadaí agus frith-mheiteastasis a chosc ó angiogenesis agus a fhachtóirí rialála i meall trasphlandaithe ailse mhamach MA-891 de lucha TA2 le meatastasis scamhóg.

ÁBHAR

Ceannaíodh seasca lucha SPF baineann TA2, a raibh meáchan (20±2) g, in aois 6-8 seachtain orthu, ón Roinn Ainmhithe Saotharlainne, Ollscoil Eolaíochtaí Leighis Tianjin. Sholáthair an tOll. Luo Liqin, an tSaotharlann Paiteolaíochta, Institiúid Meall, Acadamh Eolaíochtaí Leighis na Síne an brú cille MA{{-891 mhamach den luchóg.

Tá Rith II comhdhéanta de Sheng Huang Qi (Radix Astragali Mongolici), Shan Ci Gu (Pseudobulbus Cremastrae), Tai Zi Shen (Radix Pseudostellariae), Gou Qi Zi (Fructus Lycii), E Zhu (Rhizoma Curcumae Phaeocaulis), Yi Yi Ren ( Seamhan Coicis), Ceann Yang Huo (Herba Epimedii), Dang Gui (Radix Angelicae Sinensis), etc., le cóimheas dáileog de 1.67: 1.67: 1.33: 1.33: 1.33: 1.33: 1.33: 1, a d'ullmhaigh an decoction decoction. Rannóg Cógaisíochta, Ospidéal Longhua, de réir teicníc thraidisiúnta, agus coinnithe ag 4ć le húsáid; Táirgeadh cyclophosphamide (CTX, 200mg/ampule, brainse: 981104) agus tamoxifen (TAM) ag Shanghai Hualian Pharmaceutical Co. Ltd.; Táirgeadh gnáth-seile ag Shanghai Fumin Pharmaceutical Co.

Antashubstaint pholaclónach fachtóir fáis endothelial soithíoch (VEGF) (caoluithe oibre 1:25-1:50), gabhdóir fachtóir fáis inotelial soithíoch (VEGFR, caoluithe oibre 1:30-1:50), agus FVIIIAg antasubstaint polachlónacha (caolú oibre 1:50). ) a ceannaíodh ó Santa Cruz Biotechnology Inc; Ceannaíodh an dara antasubstaint EnVision, antashubstaint VEGF frith-rann coinín, antashubstaint frith-choine gabhar FVIII Ag agus antashubstaint VEGFR frith-choine gabhar, agus EnVision Kit ó Dako Co., an Danmhairg; 3,3- Ceannaíodh Diaminobenzidine (DAB) ó Monarcha Bithinnealtóireacht Shanghai Huamei.

MODHANNA

Múnla ainmhithe a fhorbairt

Forbraíodh an tsamhail ainmhithe le tátal ar mhodhanna Luo agus Gao, et al.2,3. Ailse mhamach saothraithe in vitro MA-891 roghnaíodh cealla na luchóige ag céim mharthana logartamach agus rialaíodh tiúchan na gceall mar 1x107 /ml. Faoi na coinníollacha aiseiptigh, rinneadh na cealla ailse mamaigh a ionaclú isteach i gcuid subcutaneous lucha TA2 den axilla ceart (0.2 ml/luch, ie cealla 2X106/luch).

Grúpáil ainmhithe agus modhanna riaracháin

Dhá lá tar éis ionaclaithe, roinneadh na lucha go randamach i 4 ghrúpa, 15 lucha i ngach grúpa. 1) Grúpa rialaithe a bhfuil meall orthu: 0. Riaradh 4 ml gnáth-seile go hinghéasach, uair amháin gach lá, cúig huaire sa tseachtain. 2) Grúpa Rith II: Caolaíodh rith II le gnáth-seile agus 0.4 ml den chaolú seo a fhreagraíonn do 48 g·kg{{10}·d-1 a bhí arna ríomh de réir an tábla atá ceangailte "Tábla Tiontaithe idir Réimsí Dromchla Coirp Daonna agus Ainmhithe" i "Modheolaíocht Staidéir ar chógaseolaíocht Drugaí na Síne"4 tugadh é go hintragastrach, uair sa lá, cúig huaire sa tseachtain. 3) Grúpa rialaithe CTX: Maidir leis an dáileog a d'úsáid Jiang Bo, caolaíodh 5 CTX le gnáth-seile, agus bhí 0.4 ml ag freagairt do 50 mg·kg-1·d-1 a thugtar go hingastrach, uair amháin gach lá eile, trí huaire sa tseachtain. 4) Grúpa rialaithe TAM: Caolaíodh TAM le gnáth-salanda agus riaradh 0.4 ml a chomhfhreagraíonn do 2.7 mg·kg-1·d-1 go hingastrach, uair sa lá, cúig huaire sa tseachtain. Tugadh na drugaí ar feadh 3 seachtaine i ngach ceann de na ceithre ghrúpa.

Sampláil

Ar an 22ú lá tar éis an riaracháin, rinneadh na lucha a íobairt trí dhíláithriú na veirteabraí ceirbheacsacha agus rinneadh iad a mheá. Ansin tógadh mais an meall agus an scamhóg agus a mheá faoi seach. An meáchan coirp fíor na luiche=an meáchan coirp ualaithe – an meáchan siadaí. Bhí nóid liath ar dhromchla na scamhóg, ie, fócais metastasis, á chomhaireamh ag an tsúil nocht. Cuireadh an mais meall isteach i dtuaslagán formaildéad neodrach 10 faoin gcéad le haghaidh fosaithe, agus ina dhiaidh sin neadú pairifín, gearradh ultra-tanaí, brú dhá chéim inmunhistochemical Envision, agus cinneadh VEGF, VEGFR, comhaireamh microvessel (MVC), agus limistéar micrevessel (MVA).

An ráta cosc ​​meáchain meall

An ráta coiscthe meall=(meáchan meall meánach an ghrúpa rialaithe tar éis cóireála - meánmheáchan siadaí an ghrúpa cógais tar éis cóireála)/meáchan meall meánach an ghrúpa rialaithe tar éis cóireála × 100 faoin gcéad .

An ráta coiscthe metastasis scamhóg

An ráta coiscthe metastasis scamhóg=(meánlíon nód metastasis scamhóg an ghrúpa rialaithe – meánuimhir nód metastasis scamhóg an ghrúpa cógais)/meánlíon nód meatastasis scamhóg an ghrúpa rialaithe x 100 faoin gcéad .

Immunohistochemical Envision staining dhá chéim

Tógadh an t-alt paraifín de 4 μm, agus ina dhiaidh sin deparaffin gnáthamh le xiléin, díhiodráitiú grádán, agus níocháin le PBS, 5 min x 3 huaire; tumadh an chuid i 0.01 mol/L, maolán chiotráite pH6.0, curtha in oigheann micreathonn de 98² ar feadh 10 nóiméad le haghaidh deisiúcháin antaigineach agus fuaraithe go nádúrtha ag teocht an tseomra tar éis tógáil ón oigheann micreathonn; sileadh an chéad antashubstaint (antasubstaint thuasluaite agus caolú antasubstainte comhfhreagrach faoi seach), 37ć, 90 min, níocháin le PBS, 5 min x 3 huaire; sileadh Envasion dara antasubstaint, ag teocht an tseomra ar feadh 60 nóiméad, níocháin le PBS, 5 min x 3 huaire; ag sileadh tuaslagán forbartha dathanna DAB nua-ullmhaithe, ag rialú an dath atá á fhorbairt ar feadh 3-10 nóiméad faoi mhicreascóp, ag frithdhamhnú ar feadh 45 s le campeachy, ag sruthlú le huisce sconna, á thriomú le séidire, gléasta le guma neodrach. Measadh go raibh an chill ina bhfuil an cíteaplasma gráinníní donn-buí nó dubh-donn dearfach. Baineadh úsáid as an gcuid deimhneach ar a dtugtar ailse mhamach mar rialú dearfach, agus úsáideadh an ceann inar cuireadh maolán PBS in ionad an chéad antasubstainte mar rialú diúltach.

Anailís íomhá

Baineadh úsáid as ceamara físe ACE (cumhacht réitigh 930 línte) agus anailísí íomhá LEICAQ500W agus córas anailíse íomhá lán-uathoibríoch LEICA. Faoi mhicreascóp x 200, roghnaíodh 2 réimse radhairc i ngach rannóg go randamach chun VEGF nó 3 réimse radhairc a chinneadh chun VEGFR agus MVA a chinneadh, agus ríomhadh céatadán an limistéir dhearfach go dtí an réimse radhairc iomlán i ngach ceann de na grúpaí. . Chun MVC a chinneadh, roghnaíodh 5 réigiún leis na soithigh fola is saibhre i ngach rannóg faoi mhicreascóp x 100, agus ansin faoi x 400 rinneadh na micrea-soithí i ngach réimse radhairc de 5 réigiún gan forluí a chomhaireamh, agus úsáideadh an meán. mar mheán chuntar micrea-soitheach (MVC) an meall.

Modh staidrimh

Baineadh úsáid as bogearraí SPSS8.0 agus baineadh úsáid as an tástáil chi-cearnóg chun comparáid a dhéanamh idir na rátaí, agus baineadh úsáid as t-tástáil nó ANOVA aontreo chun acmhainní a chur i gcomparáid.

TORTHAÍ

Éifeachtaí coiscthe meall agus frith-mhéadastáis de Rith II ar an meall trasphlandaithe ailse mhamach MA-891-ar a bhfuil lucha TA2 le meatastasis scamhóg

It was shown in Table 1 that the tumor weight inhibition rate was 37.3% in the Runing II group and 86.2% in the CTX control group, both tumor inhibition rates being >30 faoin gcéad , le difríocht shuntasach (an dá P<0.05) as compared with both tumor-bearing control group and TAM control group, indicating that both Runing II and CTX have a certain tumor-inhibiting effect. And there was a significant difference (P<0.05) between the Runing II group and the CTX control group in the tumor inhibition rate, indicating that the tumor-inhibiting effect of Runing II was lower than that of CTX. The lung metastasis inhibition rate was 65.4% in the Runing II group and 43.9% in the CTX control group, with significant difference (both P<0.05) as compared with a tumor-bearing control group and TAM control group, indicating that both Runing II and CTX have a certain tumor metastasis-inhibiting action. And there was a significant difference between the Runing II group and the CTX control group (P<0.05) in the lung metastasis inhibition rate, suggesting that the anti-metastasis action of Runing II is superior to that of CTX.

Éifeachtaí Rith II ar nathanna VEGF agus VEGFR i meall trasphlandaithe MA-891- ar a bhfuil lucha TA2

Mar a léirítear i dTábla 2, bhí na habairtí VEGF agus VEGFR sa ghrúpa Running II agus sa ghrúpa rialaithe CTX i bhfad níos ísle ná iad siúd sa ghrúpa rialaithe a bhfuil meall (P).<0.05), with a significant difference between the two. In the Running II group, the VEGF and VEGFR expressions were not significantly different from those in the CTX control group (P>0.05), bhí slonn VEGF i bhfad níos ísle ná mar a bhí sa ghrúpa rialaithe TAM (P<0.05), and the VEGFR expression was similar to that in the TAM control group (P>0.05). In the CTX control group, the VEGF and VEGFR expression was lower than those in the TAM control group. In the TAM control group, the VEGF expressions were similar to that in the tumor-bearing control group (P>0.05), agus bhí an slonn VEGFR níos ísle ná sin sa ghrúpa rialaithe siadaí (P<0.05).

Éifeacht Rith II ar MVA agus MVC an siadaí trasphlandaithe i lucha TA2 MA-891-ar a bhfuil

Mar a léirítear i dTábla 3, bhí na leibhéil MVA agus MVC san ailse trasphlandaithe sna grúpaí cógas i bhfad níos ísle ná iad siúd sa ghrúpa rialaithe siadaí (P).<0.05); in the Running II group, the levels of MVA and MVC were significantly higher than those in the CTX control group (P<0.05), the level of MVC was lower than that in the TAM control group (P<0.05), and the MVA level was similar to that in the TAM control group (P>0.05).

PLÉ

Is é tuairim leigheas traidisiúnta na Síne go n-eascraíonn géineas agus forbairt an siadaí ó éifeachtaí cuimsitheacha fachtóirí idiopathic agus empathic ach leis an strus ar an gcéad cheann. I staidéar cliniciúil roimhe seo, chinn an tOllamh Lu agus Tang gurb é easnamh ríthábhachtach-qi ar an taobh istigh agus an easaontas de shoithí trasbhealaigh agus ghiniúna na príomhchúiseanna le géineas meall, agus gurb é ionradh inmheánach, bogadh agus scaipeadh pataiginí ailse na príomhchoinníollacha. fás agus metastasis ailse mhamach.6 Mar sin, i gcóireáil, molann siad qi ríthábhachtach a chothú agus maiseanna a bhaint. Is foirmle luibhe Síneach é Running II a achoimrítear trí chleachtas cliniciúil na mblianta fada de réir an phrionsabail cóireála chun friotaíocht an chomhlachta a neartú ar dtús agus deireadh a chur le fachtóirí pataigineacha sa dara háit. Sa fhoirmle, is comhábhair cheannasacha iad Sheng Huang Qi (Radix Astragali Mongolici), Tai Zi Shen (Radix Pseudostellariae), Gou Qi Zi (Fructus Lycii), Ceann Yang Huo (Herba Epimedii), le héifeachtaí qi a fhorlíonadh agus ceann cothaitheach, a rialaíonn soithí cosúlachta agus giniúna, a chloíonn le tréithe a fheictear go coitianta d’ailse mhamach amhail easnamh qi agus ceann agus easaontas idir soithí trasbhealaigh agus soithí giniúna. Go cliniciúil, sroicheann an fhoirmle seo an éifeacht shoiléir a bhaineann le fadú ama marthanais, méadú ar cháilíocht na beatha, fócas meall a chobhsú, agus cosc ​​​​a chur ar metastasis ailse.

Bhunaigh an staidéar reatha an múnla ailse mhamach MA-891 brú cille meall trasphlandaithe de lucha TA2 le meatastasis scamhóg agus breathnaíodh éifeacht Running II ar fhás siadaí soladach agus metastasis scamhóg, agus fuarthas amach go raibh difríochtaí suntasacha idir an meall. ráta coiscthe agus an ráta coiscthe metastasis scamhóg idir an grúpa Running II agus an grúpa a bhfuil meall, agus idir an grúpa Running II agus an grúpa rialaithe CTX, rud a léiríonn go bhfuil feidhmeanna soiléire ag Running II maidir le bac a chur ar fhás siadaí agus ar fhrith-mhéitastasis. Ina theannta sin, níl an fheidhm fhollasach ag tamoxifen (TAM) bac a chur ar fhás siadaí agus ar fhrith-mheatastasis i lucha múnla, toisc go bhfuil sé cosúil leis an toradh go bhfuil ailse mhamach MA-891 faoi bhrú ER-chill agus an tuarascáil faoi ghníomhaíocht dhíreach. de thiúchan íseal TAM thar lear.7

Is galar tipiciúil soithigh fola é an meall, agus braitheann a fhás, a insíothlú agus a metastasis ar angiogenesis. Ag an am céanna, soláthraíonn an neovascularization arís cainéal metastasis do chealla meall, ag cruthú coinníollacha fabhracha le haghaidh fáis, metastasis, agus idirleathadh an meall. Is fachtóir pro-angiogenic é 8, 9 VEGF leis an ngníomh is láidre, uathúil agus sonrach ar chealla endothelial soithíoch, agus is féidir le go leor cealla meall VEGF a secrete, rud a mhéadaíonn tréscaoilteacht soithíoch agus gníomhú go díreach ar chealla endothelial soithíoch trí cheangal a dhéanamh ar an receptor VEGF, spreagadh a roinnt agus a iomadú, aslú angiogenesis meall agus tionchar a imirt ar líon na micrea-soithí, fás agus metastasis meall a chur chun cinn. tá léiriú VEGF níos airde ag na duáin, an ubhagán, etc.. Dá bhrí sin, measann roinnt scoláirí gur féidir VEGF a úsáid mar mharcóirí ar mheitibileacht siadaí agus metastasis12 agus mar chuid sprice níos fearr chun neoangiogenesis a bhlocáil i siadaí,13 agus cur isteach ar fhachtóirí rialála soithíoch siadaí agus a nasc gníomhach, a rialaíonn léiriú fachtóirí angiogenesis, agus cosc angiogenesis b'fhéidir fás agus metastasis meall a rialú.

Tugann torthaí an staidéir seo le fios gur féidir le Rith II nathanna VEGF agus VEGFR a íos-rialáil chun seoladh comhartha d’imirce arna spreagadh ag VEGF agus iomadú cealla endothelial a chosc, agus bac breise a chur ar angiogenesis i siadaí, rud a chuireann éifeachtaí antineoplastic agus frith-mhiotastú. .

Léiríodh i staidéir roimhe seo, i gcúrsa fáis siadaí urchóideacha, go raibh fás ró-ghasta ar an bhfíochán mar thoradh dosheachanta ar anocsa thromchúiseach fíocháin áitiúil, agus go bhféadfadh anocsa sintéis VEGF mRNA a spreagadh agus díghrádú VEGF mRNA a mhoilliú chun géineas a spreagadh. líon mór soithí ribeach nua áitiúla.14,15 Agus iad ag breathnú ar chealla staining dearfacha imdhíonhistochemical, fuair na húdair léiriú soiléir VEGF i gcíteaplasma na gcealla meall necrotic ag fáil bháis, ar a mhalairt, léiriú níos lú nó gan aon VEGF i gcealla meall le iomadú gníomhach , a d'fhéadfadh a bheith bainteach le leibhéal níos airde de fhachtóir aslú anocsa i gcealla meall, i gcomhréir leis an tuarascáil Cainteanna KL, et al.16 Running II tá Dang Gui (ᔧᔦ Radix Angelicae Sinensis), E Zhu (Rhizoma Curcumae Phaeocaulis), Sheng Yi Yi Ren (Semen Coicis), Shan Ci Gu (Pseudobulbus Cremastrae), etc., a fheidhmíonn scaipeadh fola a ghníomhachtú, phlegm a réiteach agus turbid a bhaint. Cuireann siad bac ar shintéis agus ar secretion VEGF b'fhéidir trí mhicro-chiorclú áitiúil an meall a fheabhsú, soláthar ocsaigine a mhéadú do chealla siadaí, rud a chuireann bac ar fhás an siadaí chun frith-mheitastasis a dhéanamh.

TAGAIRTÍ

1.Folkman J. Angiogenesis agus ailse chíche. J Clin Oncol 1994; 12: 441-443.

2. Folkman J. Taighde angiogenesis: ón saotharlann go clinic. Fóram (Genova) 1999; 9: 59-62.

3. Potgens AJ. Bíonn tionchar ag léiriú fachtóir tréscaoilteachta soithíoch ar angiogenesis meall i línte melanoma daonna xenografaithe go lucha nude. Am J Pathol 1995; 5: 775-782.

4.Sauter ER, Nesbit M, Watson JC, et al. Is é an fachtóir fáis endothelial soithíoch margadh ionradh siadaí agus metastasis i carcinomas cille squamous an ceann agus muineál. Ailse Chlin Res 1999; 5: 775-782.

5.Warren RS, Yuan H, Matli MR, et al. Rialáil ag fachtóir fáis endothelial soithíoch ag hypoxia. J Biol Chem 1996; 271:  2746-2753.

6. Tobhach AP, Tobhach NS, Goldberg MA. Rialáil iar-trascríobh ar fhachtóir fáis endothelial soithíoch ag hypoxia. J Biol Chem 1996; 271:  2746-2753.

7.Talks KL, Turley H, Gatter KC, et al. Sloinneadh agus dáileadh na bhfachtóirí hypoxia-inducible HIF-1 alfa agus HIF-2 alfa i ngnáthfhíocháin dhaonna, ailsí, agus macrophages a bhaineann le siadaí. Am J Pathol 2000; 157: 411-421.

For more information:1950477648nn@gmail.com