Forbairt Uachtair Cosmaideacha Ilfheidhmeach ag Úsáid Ábhair Bhithghníomhacha Ó Streptomyces

Ram Hari Dahal1 , Tuan Manh Nguyen1,2, Dong Seop Shim3, Joon Óg Kim4, Jangyul Laoi4 agus Jaisoo Kim1,*

Coimriú:Tá níos mó úsáide á baint as cosmaidí éagsúla a bhfuil feidhm amháin acu, ach tá teorainn le gníomhaíochtaí ilfheidhmeacha i gcónaí. Bhí sé mar aidhm againn uachtar cosmaideacha ilfheidhmeach a fhorbairtfrithocsaídeach, gníomhaíochtaí frith-tyrosinase, frith-aging agus frithmhiocróbach. Rinneadh gníomhaíochtaí frithmhiocróbacha tríd an modh idirleathadh diosca. Rinneadh measúnú ar thocsaineacht cille agus ar iomadú cille i 96-phláta tobair le línte cille éagsúla ar nós HaCaT, RAW264.7, CCD-986Sk, B16F1, agus B16F10. Rinneadh measúnú ar chosc ar tyrosinase muisiriún, ar chosc elastáis, agus ar ghníomhaíochtaí scabhála radacacha 1,{11}}défheinile{-2-picrylhydrazil (DPPH) agus ríomhadh IC50. Rinneadh cáithnín shilice mesoporous a shintéisiú ag baint úsáide as Pluronic P123 agus tetraethyl ortho-silicate (TEOS). Ghlac VISIA-CR (Córas Íomháithe Facial for Clinical Research) pictiúir den aghaidh. Rinne bogearraí PRIMOS anailís ar gharbhaireacht na híomhá agus rinne Chromameter CR-400 anailís ar ghile na híomhá. Chuir an táirge amh de phéine T65 bac ar na baictéir phataigineacha daonna éagsúla mar Bacillus subtilis, Escherichia coli, acnes Propionibacterium, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, agus Staphylococcus epidermidis. Ba é an táirge amhola IC50 de T65 le haghaidh gníomhaíochtaí scavening radacach muisiriún tyrosinase, elastase, agus DPPH 58.73, 14.68, agus 6.31 ug/mL, faoi seach. T65 táirge amhola iomadaithe collaigine cineál I i CCD-986Sk cill suas go dtí 145.91 faoin gcéad ± 9.11 faoin gcéad (meán ± SD; meán 24, 48, agus 72 h) ag 250 pg/mL. Dheimhnigh cáithníní mesoporous sintéisithe (SBA-15) an fheidhmíocht inbhuanaithe trí scaoileadh rialaithe ar feadh trí lá. Laghdaigh uachtar cosmaideacha feidhmiúil foirmlithe ina raibh T65 leabaithe SBA{-15, go suntasach gairbhe an chraiceann 4.670 faoin gcéad agus mhéadaigh sé gile an chraiceann 0.472 faoin gcéad tar éis é a chur i bhfeidhm 4 seachtaine. Chuir táirge amh T65 bac ar phataiginí Gram-dearfach agus Gram-diúltacha araon. Dheimhnigh an cáithnín mesóprach sintéisithe, SBA-15, gur scaoileadh an tsubstaint atá gníomhach go fiseolaíoch i riocht scaoilte inbhuanaithe. Léirigh táirge amh T65 frithmhiocróbach impeccable,frithocsaídeach, frith-aosú, agus gníomhaíochtaí whitening le héifeachtaí neamh-cíteatocsaineacha ar línte cille éagsúla a bhaineann le craiceann an duine.

Eochairfhocail: frithocsaídeach; cíteatocsaineacht; frith-tyrosinase; frith-aosú; frithmhiocróbach ; cáithníní shilice mesoporous; foirmlithe cosmeceutical; iarratas aeistéitiúil

cistanche luibheanna impireacht cailltefreisin tá aéifeacht whitening craiceann.

1. Réamhrá

Is é an craiceann an t-orgán is mó agus an clúdach seachtrach de chorp an duine. Ceadaíonn cuma amhairc an chraiceann aois, inscne, sláinte, tarraingteacht agus áilleacht a mheas [1,2]. Úsáidtear táirgí cosmaideacha go forleathan chun cuma an chraiceann a fheabhsú agus chun dul in aois craiceann a laghdú. Ina theannta sin, léiríonn cur i bhfeidhm tráthúla cosmaidí conas tarraingteacht a mhéadú trí fhachtóirí áilleachta a bhaineann le codarsnacht aghaidhe a ionramháil [3,4]. Tá tionscail chosmaideacha i gcónaí ag cuardach ábhair bhithghníomhacha núíosacha agus nádúrtha le hairíonna frith-aosaithe, frithocsaídeacha, frith-tyrosinase, agus frithmhiocróbacha le haghaidh foirmlithe cosmeceutical chun cur chuige cúram craicinn a fheabhsú [5,6].

Is próiseas casta bitheolaíoch é aosú craiceann de bharr fachtóirí intreacha agus eistreacha éagsúla as a dtagann mífheidhm fiseolaíoch agus caillteanas sláine struchtúrach an chraiceann. Baineann aosú intreach, ar a dtugtar aosú nádúrtha (aosú ainsealach) an chraiceann le hathruithe hormónacha bunaithe ar aois, ach baineann aosú eistreach le gluaiseacht na matán, truailliú, nicotín, nochtadh do radaíocht na gréine, caiféin, teocht, stíleanna maireachtála den sórt sin. mar aiste bia (cothú), easpa codlata, strus, agus coinníollacha sláinte eile [7-9]. Cuidíonn Elastin leis an gcraiceann filleadh ar a shuíomh bunaidh tar éis gluaiseachta, ach díghrádaíonn elastase a tháirgtear i gcealla acinar an elastin agus mar thoradh ar aosú craiceann [9]. Coscann frith-elastase an elastase agus coinníonn sé elastin ina stádas tosaigh, rud a chuireann cosc ​​​​ar chraiceann dul in aois. Bíonn tionchar dearfach ag táirgí cosmaideacha nó cúram craicinn a bhfuil airíonna frith-aosaithe acu ar aosú craicinn [10–13].

De ghnáth gintear fréamhacha saor in aisce le linn meitibileacht cheallacha. Tá speicis ocsaigin imoibríoch (ROS) agus speicis nítrigine imoibríocha (RNS), mar shampla radacach anion, superoxide, sárocsaíd, radacach hiodrocsaile, ocsaíd nítreach (NO), sárocsaitrít, agus aigéad fochlórach freagrach as damáiste ocsaídiúcháin do na cealla, lipidí, próitéiní, agus DNA, as a dtagann Atherosclerosis, carcinogenesis, galair cardashoithíoch, aosú cheallacha, athlasadh ainsealach, diaibéiteas, Hipirtheannas, mutagenesis, neurodegenerations, airtríteas réamatóideach, stróc, turraing seipteach, agus galair degenerative eile [7,14-17]. Coscann frithocsaídeoirí ocsaídiú próitéiní agus giniúint ROS agus RNS a d'fhéadfadh damáiste radacach saor in aisce a laghdú do ghnáth-fhíocháin trí strus ocsaídiúcháin a chomhrac [17-19].

Táirgeann an craiceann lí dorcha ar a dtugtar melanin. Coscann táirgeadh melanin an craiceann ó dhamáiste UV-spreagtha [9]. Mar sin féin, tá ró-tháirgeadh agus carnadh melanin ina chúis le hipearpigmentú cutaneous, rud a fhágann go bhfuil deacrachtaí aeistéitiúla cosúil le melasma, freckles, lentigines senile, nevus, agus ephelis [9,20]. Is glycoprotein é Tyrosinase a fhaightear i seicní meileanosomes atá freagrach as bithsintéis melanin trí hiodrocsailiú l-tyrosinase go 3, 4-dihydroxyphenylalanine (l-DOPA) agus ocsaídiú l-DOPA go dopaquinone ina dhiaidh sin [21]. Mar gheall ar an polaiméiriú spontáineach, déantar dopaquinone a thiontú go melanin ar deireadh [22]. Ba cheart melanin ró-tháirgthe a rialú chun sláine an chraiceann a choinneáil. Sin é an fáth go bhfuil suim mhór faighte ag fionnachtain coscairí tyrosinase núíosacha chun foirmlithe cosmeceutical a fhorbairt [23-25].

Cuirtear leasaithigh fhrithmhiocróbacha le táirgí cosmaideacha chun íonacht micribhitheolaíochta a chothabháil le linn thréimhse iomlán a n-iarratas [26]. In ionad leasaithigh cosmaidí a úsáid mar methylparaben, tá comhdhúile frithmhiocróbach nádúrtha a bhfuil feidhmeanna eile acu níos fearr agus níos tairbhí do shláinte an duine [27–29]. D’fhéadfadh go mbeadh airíonna leasaitheacha agus frithmhiocróbacha araon ag na meitibilítí tánaisteacha atá scoite amach ó acmhainní baictéaracha a chuireann bac ar choilíniú pataiginí baictéaracha (Propionibacterium acnes, Staphylococcus epidermidis, agus Staphylococcus aureus) sa chraiceann [9,26,28].

Tá comhdhúile bithghníomhacha arna dtáirgeadh ag baictéir ithreach nó mara, go háirithe actinobacteria, gan saothrú agus fós gan iniúchadh [23,30]. Tá acmhainneacht mhór le haghaidh úsáidí núíosacha ag comhdhúile bithghníomhacha éagsúla atá infheidhme sa tionscal cosmeceutical agus cosmaideacha, lena n-áirítear iad siúd a bhfuil airíonna frith-aosaithe, frithocsaídeacha, frith-tyrosinase, frithmhiocróbacha agus neamh-cíteatocsaineacha acu.

Tá staidéir iomadúla ar ábhair bhithghníomhacha scoite amach ó phlandaí a úsáidtear faoi láthair i bhfoirmíochtaí cosmeceutical, ach is beag staidéar ar ábhair bhithghníomhacha ó bhaictéir atá ar fáil [9,21,24-27,31]. Bhí sé mar aidhm ag an staidéar seo acmhainneacht cosmeceutical na n-eastóscáin aicéatáit eitile ón tréithchineál baictéarach Streptomyces sp. T65 le haghaidh gníomhaíochtaí frithocsaídeacha, frith-aosaithe, frith-tyrosinase, agus antibacterial agus aon éifeachtaí citotocsaineacha ar línte éagsúla lucha agus cealla daonna. Ina theannta sin, bhí sé mar aidhm againn cáithníní mesoporous silica a shintéisiú. Ar deireadh, ba é príomhsprioc an staidéir seo ná an táirge cosmaideach deiridh a fhorbairt lena chur i bhfeidhm go tráthrialta ag baint úsáide as ábhar bithghníomhach a bhaintear as miocrorgánaigh ithreach.

2. Ábhair agus Modhanna

2.1. Imoibrithe, Línte Cille, agus Trealamh

Bhain na tuaslagóirí go léir a úsáideadh de ghrád anailíseach. Ceannaíodh líne ceall meileanóma B16-F10, líne chill meileanóma luch B16-F1, agus líne ceall keratinocyte daonna (HaCaT) ó American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, USA). Ceannaíodh meán Eagles modhnaithe Dulbecco (DMEM), peinicillin-streptomycin, agus séiream bó féatais teas-dhíghníomhaithe (HI FBS) ó Gibco (Thermo Fisher Scientific Korea Ltd., Seoul, An Chóiré Theas). Ceannaíodh an Kit Comhaireamh Ceall-8 (CCK-8) ó Dojindo (Kumamoto, an tSeapáin). Ceannaíodh líne chill mhacrafáis luiche RAW264.7 agus CCD-986Sk fibroblasts daonna ó Bhanc Líne na gCeall na Cóiré (Seoul, An Chóiré Theas). Lipopolysaccharide (LPS, Escherichia coli, séiritíopa O11:B4), sulfanilamide, déhidreaclóiríd naftile eitiléinediamine, tyrosinase muisiriún, elastase pancreatic muc, l-tyrosine, aigéad ascorbic, arbutin, N-Succ-(Ala){{16}p- , 3-{4,5-démheitilthiazol-2-il)-2,5-bróimíd tetrazolium défheinile (MTT), cineál collaigine I, Tween 20, tetramethylbenzidine (TMB ), tetraethyl ortho-silicate (TEOS), pluronic P-123 (polai(glycol eitiléine)-bloc-pola(glycol próipiléine)-bloc-pola(glycol eitiléine); PEG-PPG-PEG), agus -melanocyte -cheannaíodh hormone spreagúil ( -MSH) ó Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, SAM). Ceannaíodh 1,1-défheinile-2-phicricrihidrazil (DPPH) agus aigéad oileanólach ó Aldrich (St. Louis, MO, SAM). Ceannaíodh antashubstaint phríomhúil COL1A1 (Collagen, cineál I, alfa 1) agus antashubstaint thánaisteach comhchuingeach le HRP (Horseradish peroxidase) ó Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA, SAM). Baineadh úsáid as Léitheoir Microplate SpectraMax 340PC384 (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA) le haghaidh 96-léamh pláta toibreacha.

2.2. Amhrán Baictéarach Pataigineach

Ceannaíodh Staphylococcus epidermidis KACC 13234 agus Pseudomonas aeruginosa KACC 10185 ó Bhailiúchán Cultúir Talmhaíochta na Cóiré (KACC, Jeonju, An Chóiré Theas); Fuarthas Bacillus subtilis KEMB 51201-001, Escherichia coli KEMB 212-234, agus Staphylococcus aureus KEMB 7301-069 ó Bhanc Miocrorgánaigh Chomhshaoil ​​na Cóiré (KEMB, Suwon An Chóiré Theas); agus ceannaíodh Propionibacterium acnes KCTC 3314 ó Bhailiúchán na Cóiré um Chineál Cultúir (KCTC, Jeongeup, An Chóiré Theas).

2.3. Leithlisiú agus Caomhnú

Bailíodh samplaí ithreacha éagsúla ó thailte féaraigh athghinte i Hwaseong (37◦16′10" N 126◦45′43" E), agus foraoise Ollscoil Kyonggi (37◦18′1" N 127◦2′20" E) sa Chóiré. Rinneadh baictéir a leithlisiú ag baint úsáide as modh a thuairiscítear roimhe seo [9]. Bhí stríoc coilíneachtaí ar phlátaí R2A gach seachtain 1 le haghaidh caomhnú gearrthéarmach agus a stóráil ag −80 ◦C mar fhionraí i brat R2A fhorlíonadh le 20 faoin gcéad (v / v) gliocról le haghaidh caomhnú fadtéarmach.

2.4. Scagadh, Aithint, agus Staid Phylogenetic de Thraenacha Aonraithe

Críochnaíodh scagthástáil le haghaidh gníomhaíochtaí cosmaidí agus frithmhiocróbacha tréithchineálacha iargúlta mar a thuairiscítear roimhe seo [9]. Aithníodh baictéir a raibh feidhmeanna acu trí úsáid a bhaint as seicheamh géine rRNA 16S. Baineadh DNA genomic de tréithchineálacha ag baint úsáide as trealamh Maitrís InstaGene (Bio-Rad, Hercules, CA, USA), agus rinneadh an ghéin rRNA 16S a aimpliú le PCR ag baint úsáide as an primer baictéarach uilíoch 27F agus 1492R [32]. Glanadh an táirge PCR le pláta scagairí ilscáileáin (Millipore Corp., Bedford, MA, SAM), agus seicheamhaíodh é le hanailíseoir DNA 3770XL Applied Biosystems ag baint úsáide as trealamh seicheamhaithe timthriallta BigDye Terminator v.3.1 (Applied Biosystems, Foster City, CA, SAM). Chloígh seicheamh beagnach iomlán le bogearraí SeqMan (DNASTAR Inc., Madison, WI, SAM). Aithníodh an brú is gaire de tréithchineálacha feidhmiúla iargúlta ag baint úsáide as EzBioCloud [33] agus bunachar sonraí GenBank NCBI [34]. Fuarthas seichimh rRNA gaolmhara 16S ó GenBank, agus rinneadh anailís phylogenetic ag baint úsáide as MEGA7 [35].

2.5. Cultúr na Baictéar

Saothraíodh P. acnes trí gor ag 37 ◦C ar feadh 3-4 lá go hanaeróbach i brat anaerób Schaedler (Oxoid). Maidir leis an gcultúr anaeróbach, baineadh úsáid as próca anaeróbach BBL le GasPak EZ Gas Generating Container System (Becton Dickinson, NJ, USA). Saothraíodh S. eipideirm agus S. aureus i meán TSB (brat soighe triptic) (Oxoid) ag 37 ◦C ar feadh 24 h go haeróbach. Saothraíodh E. coli, P. aeruginosa, agus B. subtilis i meán LB (Luria-Bertani) (Oxoid). Saothraíodh tréithchineálacha baictéaracha scoite in R2A ag 28 ◦C ar feadh 4-5 lá.

2.6. Coipeadh

Le haghaidh an phróisis choipeadh, ullmhaíodh an inoculum i brat R2A ag 28 ◦C ar feadh 4-5 lá ag 150 pm. Coipeadh strain T65 ag baint úsáide as ionaculum 1-2 faoin gcéad i meán ISP2 (Tionscadal Streptomyces Idirnáisiúnta 2) ag 28 ◦C ar feadh seachtaine 1 ag 140 pm.

2.7. Eastóscadh

Lártheifneoiríodh an brat cultúir bainte ag 11,305 × g ar feadh 20 nóiméad ag 4 ◦C le lártheifneoir mór-acmhainn 1736R (LABOGENE, Seoul, an Chóiré). Scagtha an forshuiteán cultúir le páipéar scagaire méid 150 mm (Whatman 1001-150, GE Healthcare, Maidstone, UK) chun smionagar cille a dhíchur agus comhchruinníodh é le evaporator rothlach ag 40 ◦C. Baineadh an táirge amh tiubhaithe ansin faoi dhó le toirt chomhionann ag baint úsáide as cúig thuaslagóir éagsúla (n-heacsán, éitear dé-eitile, déchlóraimeatán, clóraform, agus aicéatáit eitile). Fuarthas amach go raibh aicéatáit eitile ar an tuaslagóir is fearr, agus rinneadh anailísí breise ag baint úsáide as sliocht aicéatáit eitile. Scaradh an ciseal orgánach le tonnadóir deighilte agus galaithe go triomacht. Ar deireadh, tuaslagadh an táirge amh triomaithe i meatánól le haghaidh tuilleadh measúnaithe.

sliocht cisteanche

2.8. Bailiúchán Codán Gníomhach ag HPLC Ullmhúcháin (Prep-HPLC)

Bailíodh codáin ghníomhacha d’eastóscadh saothraithe amh de T65 agus úsáid á baint as HPLC ullmhúcháin (sraith Agilent 1200). Baineadh úsáid as colún droim ar ais Shim-pack-PREP-ODS (K) C18 (30 mm id × 25 cm) le méid cáithníní 15 μm mar chéim stadach. Maidir leis an gcéim shoghluaiste, baineadh úsáid as 0.1 faoin gcéad uisce HCHOOH (tuaslagóir A) agus acetonitrile (tuaslagóir B). Bhí tiúchan tuaslagóir B 10 faoin gcéad go 100 faoin gcéad ó 0 min go 60 min agus úsáideadh 100 faoin gcéad ó 60 min go 75 min. Ba é an ráta sreafa ná 15 mL/nóim. Baineadh úsáid as brathadóir iltonn (MWD) le 208, 230, 254, agus 280 nm. Galú codáin a bailíodh ó 14 nóiméad go 21 nóiméad go triomacht agus tuaslagtha i meatánól (táirge amh T65) le haghaidh tuilleadh measúnaithe.

2.9. Inmharthanacht Cille na Cille HaCaT

Cinneadh inmharthanacht cille cealla HaCaT le measúnacht CCK-8 (Cell Counting Kit-8) de réir threoracha an déantóra. Síolaíodh na cealla HaCaT i 96-phlátaí tobair ag 104 cill in aghaidh an tobair agus ansin goraíodh iad ag 37 ◦C ar feadh 24 h i meán modhnaithe Eagles (DMEM) ag Dulbecco ina raibh 10 faoin gcéad de shéiream bó féatais (FBS). Cóireáladh cealla le tiúchain éagsúla de tháirge amh T65 (10 mg/mL, 1 mg/mL, 100 ug/mL, 10 ug/mL, 1 ug/mL, 100 ng/ml, agus 1 ng/mL), agus goradh ag teocht an tseomra ar feadh 2 h in atmaisféar taisithe ina bhfuil 5 faoin gcéad CO2 agus 10 μL d'imoibrí CCK-8 curtha leis. Rinneadh ionsúchán an mheascáin imoibriúcháin a thomhas le speictreafótaiméadar micreaphláta ag 450 nm agus ríomhadh céatadán inmharthanacht na gceall.

2. 10. Measúnú ar Ghníomhaíochtaí Frithocsaídeacha

2.10.1. Measúnú ar Thocsaineacht i gCealla RAW264.7

Coinníodh cealla RAW264.7 i DMEM ina raibh 10 faoin gcéad FBS, 100 U/ml de pheinicillin, agus 100 ug/mL de streiptimícin ag 37 ◦C i gorlann 5 faoin gcéad CO2. Síolaíodh cealla RAW264.7 i 96-phláta micriteora bun cothrom ag dlús 104 cill in aghaidh an tobair le tiúchain éagsúla (0–1 mg/mL) de tháirge amh T65 agus goraíodh iad ag 37 ◦C le haghaidh 24 h i gorlann 5 faoin gcéad CO2. Tar éis gor 24 h, nite cealla faoi dhó le saline maolánach fosfáit (PBS), agus cuireadh 190 μL de mheán úr agus 10 μL de thuaslagán oibre MTT (5 mg / mL) le gach tobar, agus goraíodh an pláta ansin ag 37 ◦C ar feadh 4 h i gorlann 5 faoin gcéad CO2. Ansin, baineadh an supernatant, agus tuaslagadh na criostail formazan a foirmíodh trí 150 μL de DMSO (sulfoxide dimethyl) a chur i ngach tobar ar feadh 10 nóiméad ag 37 ◦C i gorlann 5 faoin gcéad CO2. Rinneadh déine na criostail formazan tuaslagtha a chainníochtú ag baint úsáide as léitheoir microplate ag 570 nm.

2.10.2. Cinneadh Ocsaíd Nítreach

Rinneadh réamhchóireáil ar na cealla RAW264.7 (105 cealla / ml) le tiúchain éagsúla de tháirge amh T65 (15.5-125 ug / mL) ar feadh 30 nóiméad, agus spreagadh ina dhiaidh sin le 1 ug / ml LPS ar feadh 24 h. Chinn an tiúchan NÍL a scaoileadh ó na cealla ag imoibrí Griess ag baint úsáide as an gcuar caighdeánach NO2 - [36]. Goradh céad micrilítear de shubstaintí cultúir le 100 μL d'imoibrí Griess (meascán de N-1-nafeitil dé-hidreaclóiríd ethylenediamine (NEDHC) agus sulfanilamide) ag teocht an tseomra ar feadh 20 nóiméad sa dorchadas. Tomhaiseadh an ionsúchán ag 540 nm.

2.10.3. DPPH Measúnacht Scagtha Radacach Saor in Aisce

Rinneadh gníomhaíochtaí scavenging radacach saor in aisce DPPH de réir modh a thuairiscítear roimhe seo [9]. Caolaíodh amhtháirge eastóscán cultúir T65 go tiúchan 600, 200, 100, 20, agus 4 ug/mL i meatánól. Rinneadh an meascán imoibrithe de 180 μL le 90 μL de 0.1 mM DPPH (tuaslagtha i MeOH) agus 90 μL de réitigh samplacha de thiúchan éagsúla (Tábla S1). Meascadh imoibrithe tástála go críochnúil i 96-plátaí tobair, gortha ag 37 ◦C ar feadh 30 nóiméad, agus tomhaiseadh ionsú ag 516 nm le speictreafótaiméadar. Ríomhadh an céatadán den chosc DPPH mar seo a leanas:

Cosc ( faoin gcéad )=[1 − (ODexp − ODcon) / (ODstd − ODbln)] × 100 (1)

i gcás inarb é ODexp ionsúchán an tsampla turgnamhaigh; Is é ODcon ionsú an rialaithe; ODstd, ionsúiteacht an chaighdeáin; agus ODbln, ionsúiteacht an bhána.

2. 11. Meastóireacht ar Ghníomhaíochtaí Frith-Aosaithe

2.11.1. Meastóireacht ar Chitotocsaineacht i gCealla Sk CCD-986

Cinntíodh cíteatocsaineacht cille de thiúchan éagsúla (0–1 mg/mL) de tháirge amh T65 i gcealla fibroblast craiceann daonna (CCD-986Sk) le measúnacht MTT mar a thuairiscítear roimhe seo do mheasúnú MTT de RAW264.7 cealla.

2.11.2. Iomadú Fibroblast Daonna ag Úsáid -986Cealla Sk CCD

Cinneadh iomadú cille fibroblast deirmeach daonna (HDF) i gcealla CCD ag baint úsáide as measúnacht CCK-8. CCD-986Síolaíodh cealla Sk i 96-phlátaí tobair ag 5 × 103 cill/tobar agus ansin goraíodh iad ag 37 ◦C ar feadh 24 h i DMEM ina raibh 10 faoin gcéad FBS. Cóireáladh cealla le tiúchain éagsúla amhtháirge T65 (0-1 mg/mL) agus goraíodh iad ag teocht an tseomra ar feadh 2 h in atmaisféar humidithe ina raibh 5 faoin gcéad CO2 agus cuireadh 10 μL d'imoibrí CCK-8 leis. Rinneadh ionsúchán an mheascáin imoibriúcháin a thomhas le léitheoir microplate ag 450 nm agus socraíodh céatadán na gcealla inmharthana i gcomparáid le ionsú na gceall neamhchóireáilte.

Tá Cistanche frith-aging.

2.11.3. Measúnacht Sintéise Cineál I Collagen

Rinneadh measúnú ar shintéis de chineál collagen I trí mheasúnacht imdhíon-ionsorbent einsím-nasctha (ELISA). CCD-986Síolaíodh cealla Sk i 96-plátaí tobair ag dlús 5 × 103 chealla/tobar i DMEM ina raibh 10 faoin gcéad FBS agus goraíodh iad ag 37 ◦ C ar feadh 24 h. Cuireadh tiúchain éagsúla de tháirge amh T65 (31.25–25{{30}} pg/mL) leis i meán saor ó FBS ar feadh 24 h. Ansin, cuireadh 100 μL de mheán cultúir agus cineál collaigine I isteach i bplátaí tobair 96- atá brataithe le collagen agus goraíodh é ag 37 ◦C ar feadh 24, 48, agus 72 h. Niteadh gach tobar le 0.05 faoin gcéad de shaile maolánach fosfáite le 0.1 faoin gcéad Tween 20 (PBST) agus cuireadh an príomh-antasubstaint COL1A1 leis agus gor é ar feadh 1 h. Arís, nite na toibreacha le 0.05 faoin gcéad PBST, agus cuireadh antashubstaint tánaisteach comhchuingeach le HRP (horseradish peroxidase) agus gor ar feadh 1 h. Niteadh gach tobar le 0.05 faoin gcéad PBST, agus cuireadh TMB (tetramethylbenzidine). Tar éis an déine dath atá ag teastáil (gorm) a fháil, cuireadh deireadh leis an imoibriú trí 0.5N H2SO4 a chur leis, rud a d'iompaigh dath an tuaslagáin buí. Tomhaiseadh an absorbance ag 450 nm le léitheoir microplate, agus socraíodh táirgeadh collagen cineál I.

2.11.4. Measúnacht um Chosc ar Elastase

Rinneadh gníomhaíochtaí coiscthe elastase pancreatic muc (PPE) a mheas de réir nós imeachta ar cuireadh síos air roimhe seo [9]. Caolaíodh an táirge amh T65 go tiúchain de 30{{10}}0, 1000, 500, agus 100 ug/mL i meatánól. Ullmhaíodh an meascán imoibriúcháin le maolán 0.2 M Tris-HCl (pH 8.0), 0.5 mM N-Succ-(Ala)3-ρ-nitroanilide (SANA) mar fhoshraith, elastase pancreatach muc (3.5 U/mL in). 0.2 M maolán Tris-HCl; pH 8.0), agus an t-inhibitor (sampla). Bhí gach sampla réamh-goradh ag 37 ◦C ar feadh 15 nóiméad, agus gor an meascán imoibriúcháin iomlán ag 37 ◦C ar feadh 20 nóiméad. Tomhaiseadh an ionsú ag 400 nm. Ullmhaíodh an meascán imoibrithe iomlán de 150 μL mar a thaispeántar i dTábla S2. Ba iad na tiúchain deiridh den sampla sa mheascán imoibriúcháin ná 300, 100, 50, agus 10 ug/mL. Ríomhadh an céatadán de chosc TCP ag baint úsáide as Foirmle (1).

2.12. Meastóireacht ar Ghníomhaíochtaí Bánaithe

2.12.1. Meastóireacht ar Chitotocsaineacht i gCealla B16F1

Rinneadh cítotocsaineacht amhtháirge T65 do chealla melanóma B16F1 a chinneadh le measúnacht MTT. Síolaíodh cealla B16F1 i 96-phlátaí tobair ag 104 chealla in aghaidh an tobair agus ansin goraíodh iad ag 37 ◦C ar feadh 24 h i DMEM ina raibh 10 faoin gcéad FBS. Cóireáladh cealla le tiúchain éagsúla de tháirge amh T65 (0-1 mg / ml) agus gor iad ag teocht an tseomra ar feadh 2 u in atmaisféar humidithe ina raibh 5 faoin gcéad CO2. Rinneadh ionsúchán an mheascáin imoibriúcháin a thomhas le speictreafótaiméadar micreaphláta ag 450 nm agus ríomhadh céatadán inmharthanacht na gceall.

2.12.2. Cosc ar Shintéis Melanin i gCealla B16F10

Rinneadh réamhchóireáil ar chealla B16F10 le -MSH i 6-plátaí tobair ag 105 cill in aghaidh an tobair agus goraíodh iad ag 37 ◦C ar feadh 24 h i DMEM ina raibh 10 faoin gcéad FBS chun sintéis melanin a chur chun cinn. Bhí gor na cealla le tiúchain éagsúla de T65 táirge amh (31.25-125 ug/ml) agus 100 ug/ml de arbutin mar rialú dearfach i láthair nó easpa -MSH ar feadh 48 u. Breathnaíodh an cosc ​​​​ar shintéis melanin i gcealla melanoma B16F10.

Cuireann cistanche bac ar fhoirmiú melanin.

2.12.3. Measúnacht um Chosc ar Muisiriún Tyrosinase

Socraíodh gníomhaíochtaí coiscthe tyrosinase muisiriún mar a thuairiscítear roimhe seo [9]. Caolaíodh an táirge amh T65 go tiúchain 3000, 1000, 500, agus 100 ug/mL i meatánól. Ullmhaíodh an meascán imoibriúcháin le maolán fosfáit photaisiam 0.1 M (pH 6.8), tuaslagán l-tyrosine 3 mM [tuaslagtha i DW (uisce driogtha)], agus tyrosinase muisiriún 2000 U/mL (tuaslagtha i maolán fosfáit photaisiam 0.05 M, pH 6.8). ; Sigma) i 96-phlátaí tobair. Meascán tástála iomlán de 150 μL (maolán fosfáit 120 μL, 10 μL l-tyrosine, tuaslagán samplach 15 μL, agus 5 μL tyrosinase muisiriún; Tábla S3) gor ag 37 ◦C ar feadh 10 min agus tomhaiseadh ionsú ag 475 nm. Ba iad na tiúchain deiridh den sampla sa mheascán imoibriúcháin ná 300, 100, 50, agus 10 ug/mL. Bhí an caighdeán gan réiteach samplach, bhí an rialú gan l-tyrosine, agus bhí an bán gan l-tyrosine agus an réiteach samplach. Ríomhadh an céatadán de chosc tyrosinase trí Fhoirmle (1) a chur i bhfeidhm.

2.13. Anailís ar Aimínaigéid

Chinn an modh GC-FID (braite ianúcháin crómatagrafaíocht gháis-lasair) an aimínaigéad saor in aisce de tháirge amh T65 ag Institiúid Tástála agus Taighde Polaiméirí na Cóiré (Koptri). Maidir leis an modh GC-FID, ba é Agilent 6890N GC-FID an meaisín a úsáideadh; colún, ZB-AAA (10 m × 0.25 mm); teocht an chuid insteallta, 250 ◦C; colún insteallta, 2 μL; cóimheas scoilte, 5:1; riocht teochta, 110 ◦C → 32 ◦C/nim → 320 ◦C; brathadóir, FID @ 320 ◦C; iompróir, gás nítrigine, 1.5 mL/nóim; déantóir, Phenomenex; caighdeán aimínaigéad; agus tiúchan, 200 μmol/L.

Chinn an modh GC-FID (braite ianúcháin crómatagrafaíocht gháis-lasair) ag Institiúid Tástála agus Taighde Polaiméirí na Cóiré (Koptri) na aimínaigéid chomhchodacha de tháirge amh T65. Maidir le GC-FID, ba é Agilent 6890N GC-FID an meaisín a úsáideadh; colún, ZB-AAA (10 m × 0.25 mm); teocht an chuid insteallta, 250 ◦C; colún insteallta, 2 μL; cóimheas scoilte, 5:1; riocht teochta, 110 ◦C → 32 ◦C/nim → 320 ◦C; brathadóir, FID @ 320 ◦C; iompróir, gás nítrigine, 1.5 mL/nóim; déantóir, Phenomenex; caighdeán aimínaigéad; agus tiúchan, 200 μmol/L.

2.14. Aigéad Sailleach

Cinneadh aigéad sailleach de tháirge amh T65 ag an modh GC-FID (braite ianúcháin crómatagrafaíocht gháis-lasair) ag Institiúid Tástála agus Taighde Polaiméirí na Cóiré (Koptri). Maidir le GC-FID, ba é Agilent 6890N GC-FID an meaisín a úsáideadh; colún, Supelco SP–2500 (100 m × 0.25 mm × 0.20 μm); teocht an chuid insteallta, 250 ◦C; colún insteallta, 1 μL; cóimheas scoilte, 50:1; riocht teochta, 100 ◦C (4 min) → 3 ◦C/nóim → 240 ◦C (15 min); brathadóir, FID @ 285 ◦C; iompróir, gás nítrigine, 0.8 mL/nóim; déantóir, SUPELCO 37 Comhpháirt FAME Mix; agus tiúchan, 0.5 mg/mL.

2.15. Gníomhaíochtaí Frithmhiocróbacha

Rinneadh cosc ​​ar bhaictéir phataigineacha tríd an modh idirleata diosca. Scaipeadh agus goraíodh céad micrilítear de chultúr P. acnes ag 108 CFU (aonad foirmithe coilíneachta)/mL ag 35 ◦C go hanaeróbach ar feadh 2-3 lá ar phlátaí agar Schaedler mar aon le diosca 6 mm (Whatman) ina raibh 15 ug. d'eastóscadh amh tuaslagtha i meatánól, agus tomhaiseadh na criosanna coiscthe. Mar an gcéanna, scaipeadh agus gor 100 μL de S. eipideirm, S. aureus, B. subtilis, E. coli, agus P. aeruginosa ag 108 CFU/mL ag 35 ◦C aeróbach ar phlátaí R2A nó LBA le haghaidh 1-2 tomhaiseadh laethanta agus na criosanna coiscthe.

2. 16. Sintéis de Cháithníní Mesoporous Silica

Tuaslagadh an polaiméir astaithe struchtúir in uisce dí-ianaithe chun tuaslagán micelle a ullmhú. Rinneadh ábhair shilice mesoporous a shintéisiú de réir na modhanna a thuairiscítear sa litríocht [37]. Chun cáithníní mesoporous silica a shintéisiú (SBA-15), díscaoileadh 10 g de Pluronic P123 (EO20PO70EO20, BASF Corporation, Florham Park, NJ, SAM), i 55 mL de 2 M HCl, agus ina dhiaidh sin corraigh an seomra teocht ar feadh 30 nóiméad. Ina theannta sin, cuireadh 22 g de tetraethylorthosilicate (TEOS) leis an réiteach agus corraigh tuilleadh ar feadh 30 nóiméad agus a chur ar 36 ◦C ar feadh 24 h agus ansin é a chur san oigheann, inar coinníodh an teocht ag 100 ◦C, agus fágadh é le haghaidh 4 lá faoin riocht statach. Tar éis 4 lá, d'athraigh an réiteach go tuaslagán scamallach sa bhuidéal. Scagtha an tuaslagán scamallach leis an dá shraith de pháipéar scagtha ceallalóis agus nite le huisce EtOH (dhá uair) agus DI (dí-ianaithe) (dhá uair). Triomaíodh an púdar scagacháin mar thoradh air san oigheann comhiompar 120 ◦C agus cuireadh isteach sa foirnéis muffle (Hanyang Scientific Equipment Co., Ltd., Seoul, An Chóiré Theas). Rinneadh sé shampla a shintéisiú leis na coinníollacha céanna ach i mbaisc eile. Tógadh leictreonmhicreagraif tarchurtha (TEM) de SBA-15 sintéiseithe in Ollscoil Náisiúnta Seoul trí mhicreascóp leictreoin tarchurtha (Talos L120C; FEI).

2. 17. Anailís ar Achar Dromchla BET

Rinneadh méid na gcáithníní de shilice a thomhas ag an Mastersizer 2000 (Malvern Instruments Lt., Malvern, an Ríocht Aontaithe). Chun anailís BET (Brunauer–Emmett-Teller) a ullmhú mar shampla, cuireadh 5 g de P-123 le 76 g de 2M HCl agus corraíodh é ag 250 rpm ar feadh 24 h. Tar éis 24 h, nuair a bhí P-123 tuaslagtha go hiomlán, cuireadh 160 mL uisce DI (dí-ianaithe) agus TEOS go haonfhoirmeach (15 mL/nóiméad) leis agus corraigh iad ag 750 rpm ar feadh 24 h. Tar éis sin, scartha an púdar foirmithe trí scagadh agus cuireadh an púdar scartha isteach i thimble agus nite le Soxhlet ar feadh 24 h. Ansin, nitear é le huisce DI agus dóitear é i bhfoirnéis muffle (Hanyang Scientific Equipment Co., Ltd., An Chóiré Theas). Rinneadh anailísí achar dromchla BET chun feidhmíocht an phúdair a tháirgtear trí shintéis SBA{-15 a dhearbhú. Chuir Ollscoil Inha agus Ollscoil Náisiúnta Changwon anailísí BET i gcrích.

Fostaíodh an anailíseoir súthaithe gáis (Autosorb iQ, Quantachrome Instruments, Ashland, OR, USA) chun scrúdú a dhéanamh ar achar dromchla agus ar dháileadh póir na n-ábhar shilice mesoporous ullmhaithe. Ríomhadh an t-achar dromchla agus dáiltí méid póir ag baint úsáide as bogearraí ASiQwin (Anton Paar Quanta Tech Inc., Boynton Beach, FL, USA) bunaithe ar isotherms asaithe-dí-asú. Degassed na cáithníní pristine sintéiseithe ag 300 ◦C/3h, ansin N2 asaithe agus dí-asú isotherms a thomhas ag teocht de -196 ◦C. Cuireadh anailís ilphointe BET i bhfeidhm chun an t-achar dromchla iomlán a ríomh.

2. 18. Measúnú Inbhuanaitheachta

Chun láithreacht T65 a dhearbhú i SBA-15 leabaithe, rinneadh an fheidhmíocht seo a leanas mar seo a leanas: Rinneadh 12 g de SBA-15 agus 1.2 g de tháirge amh T65 a mheascadh in aicéataitrile 500 ml. Tosaíodh an réiteach ar feadh 18 h faoi 30 ◦C. Tar éis scagacháin, rinneadh an meascán a scagadh agus triomaíodh na cáithníní scagtha in oigheann comhiompair 100 ◦C. Chun an cáithnín T65 é féin a fháil in SBA-15, rinneadh 1 g de T65 triomaithe atá leabaithe in SBA-15 a thuaslagadh in aicéataitrile agus cuireadh 25 mL d'aigéad fluarach 3 M leis. Togadh an meascán ag teocht an tseomra ar feadh 24 h go dtí go raibh an réiteach soiléir. Ansin, scagadh an réiteach, agus baineadh úsáid as an réiteach scagáit mar shampla. Rinne HPLC anailís ar shamplaí a fuarthas ó na turgnaimh thuas.

Chun maoin an scaoilte rialaithe a chinneadh, doirteadh 35 ml de SBA-15 leabaithe isteach i 50 ml d'ola mhianra (M3516; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, SAM) agus meascadh go maith é. Ansin, cuireadh 50 mL uisce DI leis an meascán agus chroith faoi teocht an tseomra ar feadh 6 h, agus ansin fág ar an deasc ar feadh 12 h. Nuair a bhí an ciseal leachtach scartha, cuireadh an ciseal uisce i leataobh, agus bailíodh 1 mL de chiseal ola mar shampla le haghaidh anailíse HPLC. Rinneadh an turgnamh céanna arís ar an dara agus an tríú lá agus rinneadh anailís ar an sampla arís trí úsáid a bhaint as HPLC.

2. 19. Foirmiú agus Feidhm Cosmaideacha

2.19.1. Foirmiú agus Tástáil Cobhsaíochta

Ceapadh táirge cosmaideach as uachtar de chineál eiblithe. Cinneadh cobhsaíocht foirmithe cosmaideacha tríd an táirge cosmaideach a choinneáil ag teochtaí éagsúla (37, 45, agus 60 ◦C) lena n-áirítear sa reoiteoir, sa chuisneoir, agus ag teocht an tseomra ar feadh suas le 28 lá. Breathnaíodh cobhsaíocht uachtar cosmaideacha sa chéad, sa dara, sa tríú agus sa cheathrú seachtaine.

2.19.2. Trialacha Cliniciúla, Oibrithe Deonacha, agus Modhanna Iarratais

Cuireadh uachtar cosmaideach feidhmiúil ina raibh táirge amh T65 i bhfeidhm ar 21 oibrí deonach baineann chun feabhas a chur ar wrinkle agus éifeachtúlacht whitening a chinneadh trí gharbh an chraiceann agus gile an chraiceann. D'fhaomh Bord Athbhreithnithe Institiúideach Elad (IRB) (EL-P-7400) an nós imeachta turgnamhach ar fad maidir le rannpháirtíocht an duine don staidéar seo. Fuarthas toiliú feasach ó gach rannpháirtí aonair. Rinneadh tástálacha roimh chur i bhfeidhm an táirge, tar éis 2 sheachtain agus tar éis 4 seachtaine. Cuireadh thart ar 5 mg de tháirge cosmaideacha i bhfeidhm dhá uair sa lá (maidin agus tráthnóna) ar an duine tar éis an duine a ghlanadh, agus scaipeadh go bog é de réir uigeacht an chraiceann. Ní raibh cead ag na hoibrithe deonacha aon uachtair nó táirgí eile a úsáid seachtain amháin roimh an triail agus le linn na trialach.

2.19.3. Modhanna Gabhála agus Próiseála Íomhánna

Ghlac VISIA-CR na pictiúir. Rinne bogearraí PRIMOS anailís ar gharbhaireacht na n-íomhánna (PRIMOS leagan 5.8E, Canfield Scientific, Inc., Parsippany-Troy Hills, NJ, USA). Ríomhadh meánghairbhe (Ra) agus uasdoimhneacht gharbh (Rmax) ag baint úsáide as an bhfoirmle seo a leanas:

Ráta Ra nó Rmax ( faoin gcéad )=(luach roimh chóireáil − luach tar éis cóireála)/luach roimh chóireáil × 100 (2)

Rinne Chromameter CR-400 anailís ar ghile na n-íomhánna. Is é L* an paraiméadar gile agus déantar é a thomhas leis an bhfoirmle seo a leanas:

L* ráta méadaithe ( faoin gcéad )=(luach roimh chóireáil − luach tar éis cóireála)/luach roimh chóireáil × 100 (3)

2. 20. Anailís staitistiúil

Rinne bogearraí staidrimh OriginPro 8.5 (OriginLab Corporation, Northampton, MA, USA) ríomh staidrimh ar luach IC50. Rinneadh na turgnaimh go léir i dtrí thurgnamh, agus cuireadh na torthaí go léir i láthair mar mheán ± SD de thrí thurgnamh ar leith. Rinneadh anailís ar na sonraí trí anailís aontreo neamhspleách t-thástáil ar athraitheas (ANOVA aontreo), agus ansin tástáil iar-hoc Tukey ag baint úsáide as OriginPro 8.5. Measadh go raibh difríochtaí suntasacha ag p <>

3. Torthaí agus Plé

3.1. Leithlisiú, Roghnú, agus Phylogeny de Thraenacha Gníomhacha Roghnaithe

Rinneadh 2285 tréithchineál de bhaictéir a leithlisiú ó na samplaí ithreach a bailíodh. Léirigh torthaí scagtha go raibh feidhmeanna ag 102 tréithchineál de bhaictéir a bhain leis na cosmeceuticals (Tábla S4). Ar bhonn scagadh bunscoile, tá Streptomyces sp. Fuarthas go raibh gníomhaíochtaí níos airde ag T65 do gach iarratas cosmaideacha, eadhon, gníomhaíochtaí frith-oxidant, frith-elastase, frith-tyrosinase, agus frithmhiocróbach. Ar deireadh, roghnaíodh brú T65 le haghaidh tuilleadh measúnaithe chun a fheidhmiú féideartha i gcosmaidí a shainaithint. Léirigh anailís phylogenetic gur chruthaigh brú T65 clade le Streptomyces bungoensis DSM 41781T (an brú is gaire ar bhonn seicheamh géine rRNA 16S) le luach láidir bootstrap (Fíor S1).

3.2. Ábhar Bithghníomhach a Bhrath agus a Bhailiú

Bailíodh ábhair mheasctha bithghníomhacha ó sliocht cultúir aicéatáit eitile T65 ó Prep-HPLC. Tomhaiseadh ábhair bhithghníomhacha ag 208, 230, 254, agus 280 nm ag brathadóirí. Bailíodh na codáin ar bhonn ama (ó 14 min go 21 min). Galú na codáin a bailíodh go triomacht agus tuaslagadh iad i meatánól (amhtháirge T65) agus úsáideadh iad le haghaidh na measúnuithe go léir, lena n-áirítear gníomhaíochtaí frithmhiocróbacha.

3.3. Citetocsaineacht i gCill HaCaT

Níor chuir táirge amh T65 suas le 10 mg/mL isteach ar inmharthanacht cille sa líne chill keratinocyte daonna (cill HaCaT). Ar an láimh eile, mhéadaigh inmharthanacht na gceall ar bhealach dáileog-spleách nuair a cuireadh tiúchan 10 ng/mL go 10 mg/mL den táirge amh T65 i bhfeidhm (Fíor S2). Mar thoradh ar an raon tiúchana seo bhí níos mó ná 100 faoin gcéad inmharthanacht cille, rud a léiríonn gur chuir sé iomadú cealla HaCaT chun cinn agus, dá bhrí sin, go raibh sé neamh-tocsaineach do líne cille HaCaT.

3.4. Gníomhaíochtaí Frithocsaídeacha

3.4.1. Citetocsaineacht i gCill RAW264.7

Rinneadh cítotocsaineacht an táirge amh T65 a mheasúnú trí inmharthanacht cille i macrófagáin RAW264.7 trí mhodh measúnaithe MTT. Níor léirigh táirge amh T65 aon éifeacht cíteatocsaineach ar línte cille RAW264.7.

Os a choinne sin, chabhraigh táirge amh T65 le cealla RAW264.7 a iomadú ar bhealach a bhí ag brath ar dháileog nuair a cuireadh cóireáil air le 13.5 go 1000 ug/mL. Nuair a úsáideadh táirge amhola 1000 ug/mL T65, b'ionann inmharthanacht cille cealla RAW264.7 agus 118.7 faoin gcéad (p < 0.05).="" léirigh="" na="" torthaí="" seo="" go="" raibh="" an="" comhdhúil="" amh="" t65="" neamh-tocsaineach="" suas="" go="" dtí="" 1="" mg/ml="" agus="" go="" bhféadfaí="" é="" a="" úsáid="" i="" bhfoirmíochtaí="">

3.4.2. Cosc ar Tháirgeadh Ocsaíd Nítreach (NÍL).

Baineadh úsáid as imoibrí Griess chun na leibhéil NÍL a chinneadh. Chun an cosc ​​NÍL a chinneadh, RAW264.7déileáladh le cealla le 1 ug/mL LPS (lipeaplaisiúicríd) mar aon le tiúchain éagsúla de tháirge amh T65. Cuireadh cealla RAW264.7 i ngníomh ag LPS, agus rinneadh táirgeadh NÍL a thomhas mar thiúchan nítrít sa mheán cultúir. I gcomparáid le LPS amháin, chuir táirge amh T65 go suntasach (p < 0.001)="" bac="" suntasach="" ar="" an="" tiúchan="" nítrít="" i="" gcealla="" raw264.7="" spreagtha="" lps="" ar="" bhealach="" a="" bhraitheann="" tiúchan="" nuair="" a="" úsáidtear="" é="" ó="" 15.5="" go="" 125="" ug/ml="" (fíor="" 2).="" ba="" iad="" na="" macrophages="" léiriú="" cosúil="" le="" lps-toll="" de="" inducible="" no="" synthase="" (inos)="" trí="" chomharthaíocht="" gníomhachtaithe="" cille="" trí="" gabhdóirí="" [38].="" is="" gníomhaí="" macrophages="" é="" lps="" agus="" tá="" ról="" tábhachtach="" aige="" i="" dtáirgeadh="" níl="" i="" gcealla="" mamaigh="" [39].="" is="" radacach="" saor="" in="" aisce="" é="" níl="" a="" tháirgtear="" trí="" chealla="" inmunocompetent="" cosúil="" le="" macrophages="" [40].="" tá="" éifeacht="" phagocytic="" ar="" mhacrophages="" ag="" táirgeadh="" níl.="" mar="" sin,="" roghnaíodh="" líne="" chill="" macrophage="" raw264.7="" le="" haghaidh="" measúnacht="" frithocsaídeach.="" le="" fada="" an="" lá,="" tugadh="" aird="" nach="" beag="" ar="" an="" tóir="" ar="" fhrithocsaídeoirí="" nádúrtha="" chun="" táirgeadh="" níl="" a="" chosc="" [41].="" ag="" 125="" ug/ml,="" laghdaigh="" táirge="" amh="" t65="" na="" leibhéil="" níl="" 57.4="" faoin="" gcéad="" i="" gcomparáid="" leis="" an="" níl="" a="" tháirgtear="" le="" 1="" ug/ml="" lps.="" ar="" bhonn="" cosc="" ​​ar="" níl="" a="" tháirgtear="" sa="" líne="" chill="" macrophage="" raw264.7="" spreagtha="" ag="" lps,="" d'fhéadfaí="" an="" sliocht="" cultúir="" t65="" a="" mheas="" mar="" fhrithocsaídeoir="">

DPPPHrRaaddiciacal lsScacvaveenggininggpAerccteivnitayges ag tiúchana éagsúla agus luach IC50 amhtháirge T65 tugtha i dTábla S5. Baineadh úsáid as aigéad ascorbic (vitimín C) mar chaighdeán toisc go n-úsáidtear é i lóiseanna, uachtair, séirim, agus paistí, a bhfuil a fhios go maith go bhfuil gníomhaíochtaí cumhachtacha frithocsaídeacha acu le haghaidh feidhmeanna tráthúla [42]. Fuarthas amach go raibh IC50 le haghaidh gníomhaíochtaí scavening radacach DPPH do tháirgí tánaisteacha vitimín C agus T65 ag 5.01 agus 6.31 ug/mL, faoi seach (Fíor 3).

Níl ach cúpla staidéar ar ghníomhaíochtaí frithocsaídeacha ó aonráití baictéaracha i gcomparáid leo siúd ó ábhair phlandaí agus dhírigh formhór na staidéar ar tháirgí plandaí seanbhunaithe [43-49]. Bhí tiúchan de tháirge 10 ug/ml in ann 68.66 ± 2.83 faoin gcéad de radacach saor ó DPPH a scamhadh. Bhí táirge amhola IC50 de T65 beagnach inchomparáide leis an vitimín C frithocsaídeach is láidre, rud a léirigh go bhféadfaí é a úsáid mar ghníomhaire frithocsaídeach i bhfoirmiú cosmeceuticals.

3.5.1. Citetocsaineacht i gCealla Sk CCD

Rinneadh measúnú ar chiteatocsaineacht na gcomhdhúile amh T65 i gcealla fibroblast deirmeach daonna (HDF) i líne cille CCD-986Sk ag baint úsáide as an measúnú MTT. Nuair a soláthraíodh tiúchan amhtháirge T65 ó 0 go 1 mg/mL, mhéadaigh na cealla HDF ar bhealach a bhí ag brath ar dháileog go dtí an tiúchan de 500 ug/mL. Léirigh an toradh seo go raibh na comhdhúile amh ó T65 neamh-chitotocsaineach do chealla HDF. Mar sin féin, fuarthas go raibh tiúchan níos mó ná 1 mg/mL citotocsaineach, agus níor mhair ach 81.34 faoin gcéad de na cealla i gcomparáid leis an rialú (Fíor 4).

3.5.2. Iomadú HDF

Cinneadh an t-iomadú cealla HDF trí úsáid a bhaint as líne chealla Sk CCD{{{{{{}}}}. Rinne táirge amhola T65 na cealla HDF a iomadú ar bhealach a bhí ag brath ar thiúchan ó 0 go 500 ug/mL (Fíor 5). Mar sin féin, bhí sé cíteatocsaineach ag tiúchan 1 mg/mL. Dhearbhaigh fás cille epithelial deirmeach an duine cumas feabhsaithe wrinkle tríd an athrú ar na cealla saothraithe bunscoile atá scoite ó chealla deirm daonna agus collagen secreted [50,51].

3.5.3. Sintéis Cineál I Collagen

Sintéis de chineál collagen I braitheadh ​​ELISA. Mhéadaigh táirge amhola T65 ag 250 pg/mL an tiúchan de chineál collaigine I ar bhealach dáileog-spleách suas go dtí 145.91 faoin gcéad ± 9.11 faoin gcéad (meán ± SD; meán 24, 48, agus 72 h). Léirigh toradh trí thurgnaimh ag 24, 48, agus 72 h sintéis collagen cineál I (Fíor 6).

3.6. Gníomhaíochtaí Bánaithe

3.6.1. Citetocsaineacht i gCealla B16F1

Léirítear toradh cíteatocsaineachta amhtháirge T65 ar chealla melanóma B16F1 ag an measúnacht MTT i bhFíor 8. Léirigh toradh gor táirge amh T65 i gcealla B16F1 éifeachtaí neamhthocsaineacha suas le tiúchan 1 mg/mL. Tháinig iomadú cealla B16F1 ar bhealach dáileog-spleách suas go dtí tiúchan 62.5 ug/mL, ach measadh laghdú suntasach (p < 0}.05)="" ag="" brath="" ar="" dháileog="" ar="" inmharthanacht="" cille="" ó="" 125="" go="" 1000="" ug/ml.="" mar="" sin="" féin,="" ag="" tiúchan="" de="" 1="" mg="" ml,="" breathnaíodh="" 99.12="" faoin="" gcéad="" ±="" 4.16="" faoin="" gcéad="" de="" chealla="" inmharthana="" (fíor="" 8).="" léirigh="" na="" torthaí="" turgnamhacha="" go="" raibh="" an="" sliocht="" aicéatáit="" eitile="" de="" chultúr="" brú="" t65="" neamh-cíteatocsaineach="" do="" líne="" cille="" melanoma="" b16f1="" agus="" d'fhéadfaí="" é="" a="" úsáid="" i="" bhfoirmiú="" táirgí="" cosmaideacha="" le="" haghaidh="" whitening="" craicinn="">

3.6.2. Cosc ar Shintéis Melanin i gCealla B16F10

Chun an éifeacht whitening a dhearbhú, cealla B16F10, líne cille a secretes agus a tháirgeannmelanin i gcealla, baineadh úsáid as. Chun sintéis melanin a chur chun cinn, forlíontar B16F10 le 1 ug de -MSH. Baineadh úsáid as Arbutin (100 ug/ml; gníomhaire whitening tráchtálaithe) mar an rialú dearfach. Léirigh breathnóireacht mhicreascópach an turgnaimh seo cosc ​​beagnach iomlán ar mheileanin trí 125 ug/mL de eastóscán cultúir T65 a chur i 48 h (Fíor 9A, B). Chruthaigh an turgnamh seo go bhfuil an poitéinseal ag eastóscán cultúir T65 cosc ​​a chur ar shintéis melanin ar bhealach a bhraitheann ar dháileog agus gur féidir é a úsáid mar oibreán whitening chun táirgí cosmaideacha a fhoirmiú le haghaidh feidhmeanna tráthúla.

3.7. Ábhair Shilice Mesoporous

Is ábhar é ábhar mesoporous ina bhfuil pores le trastomhas 2 go 50 nm de réir ainmníocht IUPAC (Aontas Idirnáisiúnta na Ceimice agus na Ceimice Feidhmí), agus mar sin is ábhar silica é ábhar mesoporous silica a bhfuil pores 2-50 nm ar trastomhas. Tuairiscíodh an t-ábhar seo sna 1970idí ar dtús i bpaitinní na Stát Aontaithe, ach níor tugadh faoi deara go maith é sna réimsí gaolmhara, agus mar sin rinne an tSeapáin taighde neamhspleách ar ábhar den chineál céanna agus rinne an tSeapáin é a shintéisiú arís i 1990 [69]. Rinne Mobil Corporation Laboratories taighde níos mionsonraithe ina dhiaidh sin, agus d’ainmnigh siad an t-ábhar seo MCM (ábhar criostalach Mobil), le samplaí mar MCM-41 nó MCM-48, a bhfuil an trastomhas mesópóir sa raon ó 2 go 6. nm [70,71]. D’éirigh le grúpa taighde eile in Ollscoil California, Santa Barbara, méid pore níos mó (5–30 nm) de shilice mesoporous a shintéisiú 6 bliana ina dhiaidh sin, agus thug siad SBA (ábhar éagruthach Santa Barbara) air-15 [72] . Dearadh ábhar Mesopore silica ar dtús le húsáid mar chriathar móilíneach mar gheall ar a charachtar struchtúrach féin, ach le déanaí d'aimsigh sé raon leathan iarratas i seachadadh drugaí, catalaíoch, biosensor, stóráil fuinnimh, agus mar sin de.

Tá difríochtaí éagsúla ann idir ábhair dhéshópacha SBA-15 agus MCM-41. Mar sin féin, is é an bealach is simplí chun idirdhealú a dhéanamh idir an dá cheann seo ná tiús bhalla shilice. Tá struchtúr níos cobhsaí agus níos docht ag an SBA-15 le balla shilice níos tiús i gcomparáid leis an MCM-41, a bhfuil tiús balla níos tanaí aige. Ina theannta sin, tá modh sintéiseach SBA-15 níos simplí ná modh MCM-41. De bharr na ndifríochtaí seo, roghnaíodh SBA-15 chun amhtháirge T65 bithghníomhach a iompar taobh istigh de mheiseapóir an ábhair shilice.

3.8. Sintéis na gCáithníní Mesoporous Silica

Tar éis an próiseas cailcínithe a dhéanamh faoi 200 ◦C ar feadh 2 h agus 600 ◦C ar feadh 3 h go leanúnach, fuarthas an púdar mesoporous silica bán mar thoradh air. Rinneadh SBA-15 de phiocháin 8 nm a shintéisiú sa phróiseas seo. Fuarthas amach go raibh méideanna na gcáithníní de SBA-15 11.539–13.630 mm ar trastomhas (Fíor S4) agus socraíodh iad ag dhá áis éagsúla: Saotharlann Ollscoile Inha agus Saotharlann Ollscoile Náisiúnta Changwon. Ina theannta sin, rinneadh na sé shampla go léir i bhFíor S4 a shintéisiú ar an modh céanna ach ar bhaisc eile.

Nuair a coinníodh an meascán ag 60 ◦C agus nuair a fágadh é ar feadh 4 lá faoi choinníollacha statacha de réir an mhodha thuas, cuireadh eolas ar SBA-15 de phiocháin 5 nm. Ina theannta sin, nuair a rialaíodh an teocht ag 120 ◦C, rinneadh SBA-15 de 10 nm a shintéisiú. De réir na dtorthaí, is féidir méid mesopore a rialú ag brath ar an bpróiseas ag dul in aois [73]. Baineadh úsáid as SBA-15 de phóire 10 nm (Fíor 11) le haghaidh próiseála breise toisc go bhfuil gníomhartha seachadta níos fearr ag nana-ábhair shilice móra mesoporous pore le haghaidh bithmhóilíní ná an pore caol [74].

3.9. Measúnú Feidhmíochta Inbhuanaithe

Chun a chinneadh an bhfuil cumas scaoileadh rialaithe ag an SBA-15 mesoporous, cuireadh SBA-15 agus an táirge amhola T65 le chéile in uisce DI, meatánól, aicéataitrile, nó tuaslagóir glycol eitiléine. Nuair a meascadh SBA-15 agus uisce, rinneadh sciodar den tuaslagán mar gheall ar an téachta idir an dromchla shilice agus an t-uisce. Ba tuaslagóir maith é meatánól do shilice agus táirge amh T65 araon. Mar sin féin, mar gheall ar thocsaineacht, cuireadh meatánól in ionad aicéataitrile. Socraíodh na cáithníní don chóimheas tumoideachais T65 ag an luach PV (Tábla S13). Mar a léirítear i dTábla S13, tháinig laghdú ar luach PV SBA-15 tar éis an tumoideachais leis an táirge amh T65. Léirigh sé seo go raibh na hábhair T65 tumtha go maith taobh istigh de na cáithníní mesoporous silica.

Chun a chinneadh an raibh T65 taobh istigh den cháithnín, rinne HPLC (Fíor S5) imscrúdú ar T65 féin. Mar a léiríonn na sonraí, bhí dhá bhuaic shonracha (taobh istigh den bhosca dearg) a bhí le feiceáil i gcónaí i gcás na sleachta cultúir T65, cé gur athraíodh an bhaisc ullmhúcháin T65. Bhí amanna coinneála de 10 nóiméad ag an dá bhuaic seo agus 12 nóiméad ag 230 nm. Rinneadh imscrúdú ar an sampla scagáit in HPLC chun a fháil amach an raibh T65 i láthair laistigh den SBA leabaithe-15. Mar a léirítear i bhFíor S6, breathnaíodh dhá bhuaic shonracha in aice le 10 min agus 12 min. Ina theannta sin, chonacthas buaic bheag in aice le 18 nóiméad d'am coinneála, rud atá an-tábhachtach chun na táirgí T65 a bhfuil am scaoilte acu a rianú.

Léiríonn Fíor 12 scaoileadh rialaithe na tástála inbhuanaithe de SBA leabaithe T65-15 ó 0 go 3 lá. Bhí buaic shonrach T65 le feiceáil in aice le 15 agus 20 min ó laethanta 0 go 3. Bhí na táirgí amh T65 tumtha i gceart agus bhí siad secreted de réir a chéile le himeacht ama. Ina theannta sin, d’fhéadfadh na hábhair shilice mesoporous (SBA-15) atá molta sa staidéar seo substaintí gníomhacha fiseolaíocha a iompar sa táirge amhola T65 agus dheimhnigh siad gur scaoileadh na substaintí atá gníomhach go fiseolaíoch ar bhealach scaoilte marthanach tar éis iad a luchtú. Ina theannta sin, d'fhéadfaí an t-ábhar mesoporous silica atá molta sa staidéar seo a úsáid, sa todhchaí, mar iompróir maith chun ábhair fheidhmiúla éagsúla a líonadh agus mar ábhar scaoilte marthanach trí thacú le substaintí gníomhacha fiseolaíocha éagsúla.

4. Conclúidí

Is díol spéise iad ábhair bhithghníomhacha tánaisteacha a bhaintear as na miocrorgánaigh ithreach d’fheidhmchláir chosmaideacha mar gheall ar a ngníomhaíochtaí frithmhiocróbacha, frithocsaídeacha, frith-roic, gealú craicinn agus frithmhiocróbacha. Déanann an staidéar seo cur síos ar ghníomhaíocht núíosach sliocht aicéatáit eitile de chultúr brú T65 do na comhábhair fheidhmiúla i bhfoirmíochtaí cosmaideacha. Bhí an táirge amh T65 neamh-tocsaineach do na línte cille éagsúla, mar shampla HaCaT (keratinocyte daonna), RAW264.7 (macrophage cell), CCD-986Sk (cill fibroblast craiceann daonna), agus cealla melanoma B16F1 agus B16F10. . Ina theannta sin, léirigh táirge amh T65 upregulation de shintéis collagen cineál I, rud atá an-tábhachtach chun wrinkles a laghdú ar an gcraiceann. Ina theannta sin, chuir an táirge amh T65 bac leordhóthanach ar na baictéir phataigineacha daonna mar B.subtilis, E. coli, P. acnes, S. aureus, agus S. epidermidis, rud a d'fhéadfadh cabhrú le cosc ​​a chur ar mhilleadh an táirge chosmaidigh agus ar choilíniú baictéir phataigineacha. foirmiú acne vulgaris ar chraiceann an duine. Ina theannta sin, chuir an táirge amh T65 bac ar an tyrosinase muisiriún le haghaidh éifeacht whitening agus elastase pancreatach muc le haghaidh gníomhaíochtaí frith-aosaithe, agus chuir sé bac ar NÍL agus scavened fréamhacha DPPH le haghaidh gníomhaíochtaí frithocsaídeacha. Chruthaigh sintéis de cháithníní mesoporous silica, SBA-15, go mbeadh an táirge amh T65 éifeachtach sna foirmlithe cosmeceutical a bhfuil airíonna scaoilte rialaithe éifeachtacha aige. Ar deireadh, chruthaigh feidhmiú in vivo táirge chosmaidigh foirmlithe mar aon le táirge amh T65 ar aghaidheanna oibrithe deonacha éifeacht whitening agus frithroctha T65. Mar sin féin, tá ceimic na gcomhdhúile bithghníomhacha éagsúla agus na meicníochtaí móilíneacha a bhaineann leis na gníomhaíochtaí coiscthe einsímí agus coiscthe pataiginí éagsúla le fáil fós. Mar fhocal scoir, thacaigh ár staidéar go láidir leis an smaoineamh gur féidir acmhainní baictéaracha a chur le táirgí cosmaideacha a fheidhmítear go topically le haghaidh éifeacht whitening, foirmiú frith-wrinkle, éifeacht frith-ocsaídeach, agus gníomhaíochtaí frithmhiocróbacha.

cistanche pharma speisialta

Le haghaidh tuilleadh sonraí, cliceáil anseo le do thoil.