Poitéinseal Cosmeceutical Sleachta Díorthaithe Ó Iarmhair an Tionscail Iascaigh: Dramhaíl Sairdín agus Frámaí Troscéisc Cuid 1

Teibí: Gineann an tionscal iascaigh méideanna móra dramhaíola (20–75 faoin gcéad (w/w) de mheáchan iomlán na n-iasc a ghabhtar). Is deis í an mhargaidh a bhfuil tuar dóchais inti sa mhargadh é aisghabháil comhdhúile bithghníomhacha ó iarmhair agus a n-ionchorprú i gcosmaidí agus d’fhéadfadh sé rannchuidiú le luacháil inbhuanaithe na hearnála. Sa saothar seo, aithníodh sleachta ar mhórán próitéine a fhaightear trí theicneolaíochtaí ardbhrú (CO2 sárchriticiúil agus uisce subcritical) ó dhramhaíl sairdín (Sardina pilchardus) agus frámaí troisc (Gadus morhua) maidir lena n-acmhainneacht chosmaíoch. Rinneadh gníomhaíochtaí frithocsaídeacha, frith-athlastacha agus antibacterial a mheas trí mheasúnacht cheimiceach (ORAC), einsímeach (cosc ar elastase agus tyrosinase), so-ghabhálacht fhrithmhiocróbach (Klebsiella pneumoniae, Staphylococcus aureus, agus Cutibacterium acnes) agus measúnachtaí cille-bhunaithe (i keratinocytes-HaCaT). . Chuir eastóscáin sairdín an ghníomhaíocht antibacterial is airde i láthair, agus léirigh an chuid a fuarthas ag baint úsáide as teochtaí eastóscadh níos airde (250 ◦C) agus gan an chéim díshaillte na luachanna íosta tiúchana coisctheach (MIC) (1.17; 4.6; {{24}). }.59 mg/mL do K. pneumoniae, S. aureus, agus C. acnes, faoi seach). Ba iad samplaí troisc a bhaintear ag teochtaí níos ísle (90 ◦C) na gníomhairí frith-athlastacha is éifeachtaí (laghdaigh tiúchan 0.75 mg/mL leibhéil IL-8 agus IL{{-6 faoi 58 faoin gcéad agus 47 faoin gcéad, faoi seach). , i gcoibhneas leis an rialú dearfach). Leagadh béim ar threonine, valine, leucine, arginine, agus cion próitéine iomlán sna sleachta chun comhghaol ard a bheith acu leis na bithghníomhaíochtaí tuairiscithe (R2 Níos mó ná nó cothrom le 0.7). Tacaíonn na torthaí seo le cur i bhfeidhm féideartha eastóscáin ó dhramhaíl an tionscail iascaigh i dtáirgí cosmeceutical le gníomhaíochtaí bithghníomhacha.

Is féidir le glycoside cistanche méadú freisin ar ghníomhaíocht SOD i bhfíocháin chroí agus ae, agus laghdaítear go mór an t-ábhar lipofuscin agus MDA i ngach fíocháin, ag scavening go héifeachtach fréamhacha ocsaigine imoibríocha éagsúla (OH-, H₂O₂, etc.) agus a chosaint i gcoinne damáiste DNA a dhéantar. ag OH-radacach. Tá cumas láidir scavenging fréamhacha saor in aisce ag gliocóisídí cistanche feinileatánóideach, cumas laghdaithe níos airde ná vitimín C, feabhas a chur ar ghníomhaíocht SOD i bhfionraí sperm, laghdaigh ábhar MDA, agus tá éifeacht chosanta áirithe acu ar fheidhm membrane sperm. Is féidir le polaisiúicrídí cistanche feabhas a chur ar ghníomhaíocht SOD agus GSH-Px in erythrocytes agus fíocháin scamhóg lucha senescent turgnamhacha de bharr D-galactós, chomh maith le hábhar MDA agus collagen sa scamhóg agus plasma a laghdú, agus ábhar elastin a mhéadú. éifeacht scavenging maith ar DPPH, fadú am hypoxia i lucha senescent, feabhas a chur ar ghníomhaíocht SOD i serum, agus moill a chur ar dhíghiniúint fiseolaíoch na scamhóg i lucha senescent turgnamhach Le díghiniúint moirfeolaíoch cheallacha, tá sé léirithe ag turgnaimh go bhfuil an cumas frithocsaídeach maith ag Cistanche. agus tá an cumas aige a bheith ina dhruga chun galair aosaithe craicinn a chosc agus a chóireáil. Ag an am céanna, tá cumas suntasach ag echinacoside i Cistanche fréamhacha saor in aisce DPPH a scavening agus tá an cumas aige speicis ocsaigine imoibríocha a scaveneáil agus cosc ​​a chur ar dhíghrádú collagen saor ó radacach saor in aisce, agus tá éifeacht mhaith deisiúcháin aige freisin ar damáiste anion radacach saor ó thymine.

Cliceáil ar Fhorlíonadh Cistanche Tubulosa

【Le haghaidh tuilleadh eolais:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

Eochairfhocail: sruthanna dramhaíola éisc a luacháil; gníomhaíocht frithocsaídeach; gníomhaíocht frith-athlastach; gníomhaíocht fhrithmhiocróbach; frith-aosú; frith-hiperpigmentation; cosmaidí

1. Réamhrá

Agus cuardach leanúnach á dhéanamh ar nuálaíocht, go háirithe maidir le comhábhair ghníomhacha, tá an tionscal cosmaideach ag fás agus tá sé léirithe go bhfuil sé beartaithe comhpháirteanna a dhíorthaítear ó pheitriliam a athsholáthar ag bogadh ar aghaidh i dtreo comhdhúile nádúrtha [1]. Is féidir le hairíonna frithocsaídeacha na gcomhábhar gníomhacha nádúrtha cuidiú le roinnt saincheisteanna craiceann a chosc de bharr strus ocsaídiúcháin agus dul in aois [2,3]. Is féidir le haosú craicinn a bheith mar thoradh ar fhachtóirí intreacha (cosúil le athlasadh nó giorrú telomere) agus eistreach (comhshaoil) [4]. Mar thoradh ar aosú craiceann cailltear collagen aibí agus athruithe ar an maitrís extracellular (ECM) a chuireann isteach ar an bhfeidhm bhacainn, rud a fhágann go bhfuil cuma tirim agus so-ghabhálacht ag ionsaitheoirí seachtracha, rud a mhéadaíonn an baol maidir le neamhoird chraiceann [5]. Is féidir an próiseas seo a luathú le roinnt einsímí, mar shampla elastais, metalloproteinases maitrís (MMPanna), agus hyaluronidase a d'fhéadfadh díghrádú ECM a spreagadh [6], nó fiú trí charnadh speiceas ocsaigin imoibríoch cúlaithe (ROS) a d'fhéadfadh an gnáthfheidhm cille a chomhréiteach. [7]. Mar thoradh ar fhachtóirí comhshaoil, cosúil le nochtadh do radaíocht UV, gintear cainníochtaí arda ROS a chothaíonn na freagairtí móilíneacha agus ceallacha céanna le haosú intreach, ach le héifeachtaí méadaithe. Rud atá tábhachtach, is féidir le ROS gníomhaíocht na n-einsímí a bhaineann le dul in aois craiceann nó próisis pigmentation craiceann [8,9] a dhianú, agus mar sin tá ról tábhachtach ag láithreacht frithocsaídeoirí n sa réimse cosmaideacha.

In 2018, mheas an EBT go raibh tomhaltas iasc an domhain ag 20.5 kg in aghaidh an pita [10], rud a fhágann go bhfuil líon mór seachtháirgí ann, craiceann agus cnámha den chuid is mó. Freagraíonn na hiarmhair a ghintear do 20–75 faoin gcéad (w/w) de mheáchan iomlán na n-iasc a ghabhtar, rud a d’fhéadfadh fadhbanna comhshaoil ​​a chruthú [11,12]. Mar sin féin, tá méid suntasach lipidí, próitéiní agus mianraí fós sna hiarmhair seo agus ba cheart iad a luacháil go leordhóthanach. Le blianta beaga anuas, léirigh sleachta as dramhaíl a ghineann an tionscal éisc airíonna gníomhacha mar antihypertensive, antioxidative, antimicrobial, neuroprotective, antihyperglycemic, anti-aging, and anti-inflammatory [13-19]. Tá troisc an Atlantaigh (Gadus rhea) agus sairdín (Sardina pilchardus) i measc na n-iasc is mó a itear sa Phortaingéil agus léirigh réimsí a dhíorthaítear óna iarmhair acmhainneacht nútraiceodach a bhfuil gealladh fúthu, amhail gníomhaíochtaí frithocsaídeacha, frith-iomaíocha nó frith-athlastacha [11,20–22]. Mar sin féin, ós rud é go bhfuil saothrú agus luacháil dramhaíola an tionscail éisc fós ag céim luath, tá go leor spáis ann chun deiseanna a iniúchadh don tionscal chun an dramhaíl seo a thiontú ina bhiththáirgí ardluacha sa mhargadh, lena n-áirítear comhábhair chosmaideacha.

In obair roimhe seo, rinneamar iniúchadh ar úsáid teicneolaíochtaí ardbhrú (CO2 supercritical agus uisce subcritical), chun codáin bithghníomhacha a leithlisiú ó dhramhaíl sairdín agus frámaí troisc le sochair sláinte tuar dóchais inti [11,22]. Maidir le dramhaíl sairdín, léirigh muid, trí chéad chéim a chur i bhfeidhm le carbón sárchriticiúil (ScCO2) (chun codán lipid a bhaint) agus próiseas eastósctha ina dhiaidh sin le huisce subcritical (SW) go raibh sé indéanta hidrealasáití próitéine a fháil a bhfuil ard-acmhainneacht frithocsaídeach agus éifeacht fhrithiomadaitheach acu i. cealla ailse cholaireicteach [22]. Eastóscadh/hidrealú uisce subcritical chuireamar i bhfeidhm freisin chun sleachta saibhrithe próitéiní, peptídí- agus aimínaigéad a fháil ó fhrámaí troisc agus thaispeáin muid go bhfuil teochtaí próiseála níos ísle (90 ◦C) i bhfabhar eastóscadh comhdhúile a bhfuil poitéinseal frith-athlastach acu i gcill epithelial intestinal daonna. samhail [11]. Is blúirí collaigine agus collaigine an chuid is mó de na próitéiní atá i bhfráma troisc éisc. Áirítear le comhdhúile eile mionchainníochtaí lipidí, fuinseog, agus roinnt siúcraí. Bhí sleachta sairdín saibhir i peptídí agus aimínaigéid, agus bhí lipidí, fuinseog agus siúcraí i láthair freisin. Ós rud é go bhféadfadh próitéiní agus peiptídí a dhíorthaítear ó iasc a bheith ina n-acmhainn thábhachtach do thionscail chosmaideacha, tá sé mar aidhm ag an staidéar seo measúnú breise a dhéanamh ar acmhainneacht ghníomhach na n-eastóscán seo a dhíorthaítear ó dhramhaíl próiseála éisc agus seachtháirgí de bharr measúnú a dhéanamh ar a n-acmhainneacht chosmeolaíochta [23] . Chun na críche sin, cuireadh raon measúnachtaí ceimiceacha, einsímeacha agus ceall-bhunaithe i bhfeidhm chun iniúchadh a dhéanamh ar éifeachtaí frithocsaídeacha, frith-aosaithe, frith-hiperpigmentation, frith-athlastacha agus frithmhiocróbacha na samplaí a bhaintear. Rinneadh staidéir chomhghaolaithe freisin chun na príomh-chomhábhair bhithghníomhacha a bhfuil poitéinseal cosmeceutical acu a shainaithint.

2. Ábhair agus Modhanna

2.1. Imoibrithe

3,4-dé-hiodrocsai-l-feiniolalainín (L-DOPA), tyrosinase muisiriún, elastase pancreatach muc (PPE) cineál III, N-succinyl-Ala-Ala-Ala-p-nitroanilide (AAAPVN), Tris ({ {11}}aimín- 2-hiodrocsaimeitil-própán-1,3-diol), 2,20 -asóbais (2-meitilpropionamidine)déhidreaclóiríd (AAPH), agus 20 ,70 -déchlórafluorescein diacetate (DCFH-DA) ó Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, SAM). Ceannaíodh brat Mueller Hinton (CAMHB) coigeartaithe cailciam ó BD (Sparks, MD, SAM). Ceannaíodh insileadh croí-inchinn (BHI) ó Avantor (Radnor, PA, SAM). Ceannaíodh saicíní Dlúth AnaeroGen™ ó Oxoid (Hampshire, RA). Fuarthas PrestoBlue™, Meán-Iolar Athraithe Dulbecco (DMEM), Séiream Buaibheach Féatais Fhéatais (FBS), agus Peinicillin-Streptomycin ó Invitrogen (San Diego, CA, SAM). Fuarthas HaCaT líne cheallacha ceireatinocyte neamh-tumorigenic neamhbhásaithe daonna ó Cell Line Service (Eppelheim, an Ghearmáin). Fuarthas Trealamh Forbartha ELISA Mini TMB ó Peprotech (Londain, an RA). Ba de ghrád anailíse iad na himoibrithe agus na tuaslagóirí eile go léir a úsáideadh sa staidéar seo agus ceannaíodh iad ó na soláthróirí a bhí ar fáil.

2.2. Samplaí

Ba iad na sleachta a úsáideadh san obair seo na cinn a forbraíodh inár staidéir roimhe seo dírithe ar optamú próisis [11,22]. Go hachomair, sholáthair Pascoal agus Filhos SA (Gafanha da Nazaré, an Phortaingéil) frámaí troisc éisc agus is éard a bhí iontu cnámh droma éisc agus matán greamaithe. Ba iad Conservas A Poveira SA (Póvoa de Varzim, an Phortaingéil) a sholáthair dramhaíl sairdín, déanta de chinn, spíne, agus viscera. Tá comhdhéanamh cóngarach na n-amhábhar a úsáideadh curtha i láthair inár n-oibreacha níos luaithe [11,22]. Próitéin (47 faoin gcéad ) agus fuinseog (39 faoin gcéad wt) na comhpháirteanna móra de frámaí trosc, le cainníochtaí beaga de lipidí agus carbaihiodráití (2 wt faoin gcéad agus 0.3 wt faoin gcéad , faoi seach). Faightear amach gurb é collagen an phríomhphróitéin i bhfrámaí trosc, agus sa chás seo, is ionann é agus ca. 65 faoin gcéad den ábhar próitéine iomlán de dhramhaíl bhunaidh. I gcodarsnacht leis sin, is iasc olúil é sairdín, dá bhrí sin tá a chuid dramhaíola i bhfad níos saibhre i lipidí ná frámaí troisc. Léirigh dramhaíl sairdín cion lipid de 26 wt faoin gcéad agus cion próitéine de 52 wt faoin gcéad , fuinseog (17 wt faoin gcéad) agus carbaihiodráití (3 wt faoin gcéad) sa chuid eile.

Fuarthas na sleachta as frámaí troisc éisc (Cf1, Cf2, Cf3, agus Cf4) agus dramhaíl sairdín (S1, S2, agus S3) a roghnaíodh don obair seo trí theicneolaíocht ardbhrú i bhfearas ar scála saotharlainne mar a thuairiscítear roimhe seo [11,22 ,24] ag baint úsáide as na coinníollacha a bhfuil achoimre orthu i dTábla 1. Go hachomair, rinneadh 60 g de fhrámaí troisc mheilte nó de dhramhaíl sairdín (mímhillte nó neamh-mhillte) a luchtú isteach in imoibreoir ardbhrú a cuireadh taobh istigh d'oigheann. Cuireadh an caidéal uisce ar siúl ag an ráta sreafa inmhianaithe (thart ar 10 ml/nóiméad) agus socraíodh an brú go 100 bar. Chomh luath agus a shroich an brú an luach sin, cuireadh an oigheann leictreach ar siúl, agus cuireadh tús leis an turgnamh. Bailíodh na sleachta éagsúla ar feadh 30 nóiméad ag teochtaí difriúla (90-250 ◦C). Fuarthas eastóscáin S1 agus S3 tar éis próisis díshaillte den dramhaíl sairdín le ScCO2 roimh eastóscadh SW. Rinneadh tástálacha subcritical eastóscadh uisce a mhacasamhlú. I gcás gach sampla a bhaintear, tógadh 25 ml i dtrí chóip, lyophilized, agus a mheá chun an toradh eastósctha comhfhreagrach a ríomh. Sloinntear sonraí anailíse – cion próitéine – mar mheán ± diall caighdeánach (SD) de thrí-dhiallta. Déantar cur síos ar an bhfaisnéis maidir le tréithriú na n-sleachta seo i dtéarmaí ábhar próitéine, próifíl aimínaigéad, comhdhúile mianraí móra, nó miotail tocsaineacha agus troma inár n-oibreacha roimhe seo [11,22].

Ullmhaíodh réitigh stoic de Cf1, Cf2, Cf3, Cf4, agus S2 i Milli-Q H2O ag tiúchan 100 mg/mL. Tuaslagadh na samplaí eile, eadhon S1 agus S3, i DMSO (300 agus 550 mg/mL, faoi seach) mar gheall ar a dtuaslagthacht níos ísle in uisce. Reoiteadh samplaí agus coinníodh iad ag −20 ◦C go dtí go n-úsáidfí a thuilleadh iad. Maidir le measúnachtaí ceallacha, rinneadh na samplaí a steiriliú roimhe seo le teas (121 ◦C, 15 min) in uathchlábh (Tuttnauer 3870 el, Breda, an Ísiltír).

2.3. Measúnacht ar Acmhainn Ionsúite Radach Ocsaigin (ORAC).

Rinneadh measúnacht ORAC chun cumas frithocsaídeach na samplaí i dtreo fréamhacha sárocsaile (ROO•) a mheas, de réir an mhodha a d’fhorbair Huang et al. [25], le roinnt coigeartuithe mar a tuairiscíodh roimhe seo [26]. Go hachomair, i 96-mhicreaplate tobair dubh, cuireadh 150 µL déshóidiam fluaraiseach (0.3 µM) le 25 µL de chaoluithe samplacha agus goraíodh é ar feadh 10 nóiméad ag 37 ◦C. Ina dhiaidh sin, cuireadh tús leis an imoibriú trí 25 µL de 2,20 - Azobis (2-amidinopropane) déhidreaclóiríd (AAPH, 153 mM), agus fluaraiseacht (Ex/Em 485 ± 20/528 ± 20) a chur leis an imoibriú. nm) a thomhas ar feadh 40 nóiméad ag 37 ◦C i léitheoir microplate fluaraiseachta FLx800 (FL800 Bio-Tek Instruments, Winooski, VT, USA). Ullmhaíodh cuar caighdeánach ag baint úsáide as 5, 10, 20, 30, agus 40 µM de (6-hiodrocsa-2,5,7,8-tetramethylchroman-2- aigéad carbocsaileach (Trolox). )). Ullmhaíodh na réitigh go léir i saline maolánach fosfáit (PBS), 75 mM, pH 7.4. Cuirtear na torthaí in iúl mar mhicreamóil de chumas frithocsaídeach coibhéiseach Trolox in aghaidh gach graim eastóscáin (µ mol TEAC/g eastóscán).

2.4. Measúnachtaí Einsímeacha

2.4.1. Measúnacht um Chosc ar Elastase

Bhí an measúnú seo bunaithe ar obair Wittenauer et al. [27] le roinnt modhnuithe mar a thuairiscítear roimhe seo [6]. Déantar gníomhaíocht coisctheach elastase a chinneadh trí mhodh speictrophotiméadrach ag baint úsáide as elastase pancreatic porcine (PPE) agus N-succinyl-Ala-Ala-Ala-p-nitroanilide (AAAPVN) mar an tsubstráit einsím, trí mhonatóireacht a dhéanamh ar scaoileadh p-nitroaniline ag 41{. {19}} nm. Díscaoileadh PPE i 100 mM Tris (2-aimín-2-hiodrocsaimeitil-própán-1,3-diol)-HCl maolán (pH=8.0) go dtí tiúchan 1 mg/mL agus stóráilte ag 20 ◦C i slánchuid. Ar lá na measúnachta, tógadh slánchuid agus caolaíodh é sa mhaolán go tiúchan 0.03 U/mL, lódaíodh 10 µL i dtoibreacha na bplátaí micrititer mar aon le 100 µL den mhaolán Tris-HCl, agus 30 µL de gach sampla. Tar éis 20 nóiméad de réamh-goir ag 25 ◦C, cuireadh tús leis an imoibriú trí 40 µL den tsubstráit AAAPVN (0.55 mM) a chur leis. Tomhaiseadh ionsú ar feadh 20 nóiméad tar éis AAAPVN a chur leis ag léitheoir microplate speictreafótaiméadar BioTek Instruments EPOCH 2. Rinneadh na ríomhanna mar a thuairiscítear i gcothromóid (1), áit a seasann A rialú agus Asample an ionsúiteacht ag 410 nm in éagmais nó láithreacht an tsampla, faoi seach. Ós rud é gur úsáideadh DMSO chun samplaí S1 agus S3 a thuaslagadh, tástáladh an tuaslagóir seo freisin agus úsáideadh é mar rialú do na samplaí seo. Rinneadh measúnú ar chumas na n-sleachta bac a chur ar elastase le comhchruinnithe méadaithe, chun caidreamh dáileog-spleách a chinneadh agus luachanna leath-uasmhéid na dtiúchan coisctheach (IC50) a bhunú, rud a léiríonn cumas gach sampla maidir le cosc ​​ar ghníomhaíocht einsímeach go feadh méid 50 faoin gcéad .

Sloinntear na torthaí go léir mar mheánluachanna IC50 agus na teorainneacha íochtair agus uachtaracha d’eatramh muiníne 95 faoin gcéad, faighte ó thrí thurgnamh neamhspleácha ar a laghad.

2.4.2. Measúnacht um Chosc ar Tyrosinase

Rinneadh acmhainneacht coisctheach tyrosinase na n-sleachta a mheas go speictrophotometrically ag baint úsáide as tyrosinase muisiriún agus L-DOPA mar an tsubstráit [28]. Tiontaíonn Tyrosinase L-DOPA go dopaquinone, a rothóidh go seicheamhach chun dopachrome a fhoirmiú. Is féidir an foirmiú dopacrómach a fheiceáil trí ionsúchán a thomhas ag 475 nm. Cuireadh an tsubstráit leis an einsím i láthair na caoluithe samplacha, le tiúchan deiridh de 30 U/mL tyrosinase agus 2.5 mM L-DOPA. Ós rud é gur úsáideadh DMSO chun samplaí S1 agus S3 a thuaslagadh, tástáladh an tuaslagóir seo freisin agus úsáideadh é mar rialú do na samplaí seo. Tar éis goir ag 37 ◦C ar feadh 30 nóiméad, tomhaiseadh ionsúiteacht ag 475 nm ar speictreafótaiméadar micreaphláta EPOCH 2 BioTek Instruments. Ullmhaíodh na himoibrithe go léir i maolán fosfáit sóidiam (SPB; 0.1 M, pH 6.8), arna ullmhú trí dhihiodráit dibasic fosfáit sóidiam agus monohydrate monobasic fosfáit sóidiam a mheascadh, agus rinneadh na ríomhanna mar a thuairiscítear i gcothromóid (1). Sloinntear na torthaí go léir mar mheánluachanna IC50 agus na teorainneacha íochtair agus uachtaracha d’eatramh muiníne 95 faoin gcéad, faighte ó thrí thurgnamh neamhspleácha ar a laghad.

2.5. Tástáil So-ghabhálacht Frithmhiocróbach

Ba iad na miocrorgánaigh sprice a roghnaíodh do na measúnachtaí gníomhaíochta antibacterial ná na baictéir gram-diúltacha Klebsiella pneumoniae CECT 8453 agus na baictéir ghram-dearfach Staphylococcus aureus ATCC 6538 agus Cutibacterium acnes ATCC 6919T. Maidir le K. pneumoniae CECT 8453 agus S. aureus ATCC 6538, rinneadh measúnachtaí de réir mhodh micrchaolaithe brat de threoirlínte CLSI M07-A10 mar a chuir Rodrigues et al. [29]. I mbeagán focal, dáileadh tuaslagáin stoic eastóscáin i micrititer bun cruinn 96-pláta tobair agus 2-fillte go sraitheach i brat Mueller Hinton coigeartaithe cailciam (CAMHB; BD, Sparks, MD, SAM) chun a raon tiúchan réitigh. Ullmhaíodh an inoculum ag baint úsáide as an modh fáis chun fionraí aonchineálach a bhaint amach i dtuaslagán seile. Caolaíodh an t-ionaculum coigeartaithe freisin i CAMHB chun a chinntiú, tar éis ionaclaithe, go raibh timpeall 5 × 104 CFU i ngach tobar. Goradh na plátaí faoi choinníollacha aeróbach ag 37 ◦C ar feadh 16 go 20 h. Maidir le C. acnes, rinneadh na measúnachtaí mar a thuairiscítear roimhe seo trí úsáid a bhaint as brat insileadh inchinn-chroí (BHI) (Avantor, Radnor, PA, USA) in ionad CAMHB agus trí na plátaí microtiter a chothú ar feadh 70-74 h ag 37 ◦ C i prócaí anaeróbach ina bhfuil an córas giniúna atmaisféar AnaeroGen™ Compact (Oxoid, Hampshire, RA).

I gcás gach réiteach stoic a ndéantar anailís air, rialtán dearfach (CAMHB nó BHI agus ionaculum caolaithe), rialú steiriliúcháin mheánmhéide (CAMHB nó BHI neamh-inocraithe), agus rialú steiriliúcháin eastóscáin (stoc eastóscáin fillte 2-neamh-inocraithe in CAMHB nó BHI) rinneadh dá réir sin. Ba iad na luachanna íosta comhchruinnithe coisctheacha (MIC) an tiúchan ab ísle de shampla a chuir bac go feiceálach ar fhás miocróbach tar éis goir. Nuair ba ghá, deimhníodh luachanna MIC ag baint úsáide as an imoibrí inmharthanachta cille PrestoBlue™ (Invitrogen, San Diego, CA USA) de réir threoirlínte an déantóra. Bunaíodh luach MIC breise, ainmnithe MIC*, freisin agus sainmhíníodh é mar an tiúchan is ísle de shampla ag a raibh tionchar amhairc agus difreálach ar fhás baictéarach i gcomparáid leis an rialú dearfach. Tuairiscíodh go raibh luachanna íosta tiúchana baictéaricídeacha (MBC) mar an tiúchan is ísle de shampla as a dtáinig laghdú 99.9 faoin gcéad ar a laghad ar chomhaireamh baictéarach inmharthana i gcomparáid leis an ionaclúm tosaigh agus le haghaidh am chothaithe comhionann. Cuireadh torthaí in iúl mar airmheánach de na luachanna a fuarthas tar éis trí mhacasamhlú bitheolaíochta. Ós rud é gur úsáideadh DMSO chun samplaí S1 agus S3 a thuaslagadh, rinneadh tástáil ar an tuaslagóir seo freisin chun a chinntiú nach gcuirfeadh an tiúchan deiridh a úsáideadh isteach ar an sprioc-mhiocrorgánach, agus mar sin an measúnú.

2.6. Measúnachtaí Cealla

2.6.1. Cultúr na Cille

Saothraíodh líne chill keratinocyte daonna HaCaT (CLS, an Ghearmáin) i Meán-Iolar Athraithe caighdeánach Dulbecco (DMEM) arna fhorlíonadh le 10 faoin gcéad (v/v) séiream bó féatais (FBS) agus 1 faoin gcéad (v/v) peinicillin-streiptimícin. Coinníodh na cealla go rialta mar mhonaiteoirí i bhfleascáin chultúir 75 cm2 agus goraíodh iad ag 37 ◦C le 5 faoin gcéad CO2 in atmaisféar tais.

2.6.2. Cíteatocsaineacht in Vitro

Rinneadh measúnachtaí citotocsaineachta de réir oibreacha roimhe seo [6]. Go hachomair, síolaíodh cealla HaCaT ag dlús 1.4 × 1{45 cealla/cm2 i 96 pláta tobair. Tar éis 3 lá, goradh cealla le tiúchain éagsúla de gach sampla (Cf1; Cf2; Cf3; Cf4; S2—50, 25, 12.5, 6.25, 3.13, 1.56, {{30} }.78, 0.39; S1—3, 1.5, 0.75, 0.38, {{40}}.19, {{51 }}.09, 0.05, 0.02; S3—5.5, 2.75, 1.38, 0.69, 0.34, 0.17, 0.09, 0.04 mg/mL) caolaithe i meán cultúir (meán DMEM ina bhfuil 0.5 faoin gcéad FBS). Baineadh úsáid as toibreacha a raibh cealla iontu gortha le meán saothraithe amháin arna fhorlíonadh le 0.5 faoin gcéad (v/v) de FBS mar rialú. Rinneadh rialuithe tuaslagóirí le 50 faoin gcéad uisce nó 1 faoin gcéad DMSO i meán cultúir freisin chun tocsaineacht tuaslagóra a eisiamh. Tar éis 24 h de gor, rinneadh measúnú ar inmharthanacht na cille ag baint úsáide as PrestoBlue® (5 faoin gcéad v/v i meán cultúir) ar feadh 2 h ag 37 ◦C, 5 faoin gcéad CO2, de réir threoracha an mhonaróra. Tar éis seo, tomhaiseadh fluaraiseacht gach tobair (Ex./Em. 560 ± 20/590 ± 20 nm) i léitheoir microplate fluaraiseachta FLx800 (BioTek Instruments, Winooski, VT, USA). Cuireadh inmharthanacht cille in iúl mar chéatadán na gceall inmharthana i gcoibhneas leis an rialú. Rinneadh trí thurgnaimh neamhspleácha i dtrí shraith.

2.6.3. Gníomhaíocht Frithocsaídeach Ceallach

Rinneadh measúnú ar ghníomhaíocht cheallacha frithocsaídeacha tar éis modhanna a thuairiscítear roimhe seo [6,30], le roinnt modhnuithe. Go hachomair, síolaíodh cealla HaCaT ag dlús 1.4 × 1{{305 chealla/cm2 i 96 pláta tobair agus rinneadh monatóireacht ar fhoirmiú ROS incheallach ag baint úsáide as 20,70 -dichlorofluorescein diacetate ( DCFH-DA) mar thaiscéalaí fluaraiseacha. 72 h tar éis síolú, nite cealla le PBS agus gortha le tiúchan neamh-tocsaineach de na samplaí (0.1875 mg/mL; 0.375 mg/mL; 0.75 mg/mL) móide 25 µM DCFH-DA i PBS ar feadh 1 h. Ina dhiaidh sin, nite cealla arís le PBS agus gortha leis an ionduchtóir struis (600 µM AAPH i PBS) ar feadh 1 h. Tar éis sin, tomhaiseadh an fhluaraiseacht i léitheoir fluaraiseachta micreaphláta FL800 (Bio-Tek Instruments, Winooski, VT, USA) (Ex/Em 485 ± 20/528 ± 20 nm). Cuirtear na torthaí in iúl mar chéatadán ROS i gcoibhneas leis an rialú neamhchóireáilte (cealla atá cóireáilte le DCFH-DA agus AAPH). Rinneadh trí thurgnaimh neamhspleácha i dtrí shraith.

2.6.4. Meastóireacht ar Rúnaíocht IL-6 agus IL-8

Rinneadh turgnaimh mar a thuairiscítear roimhe seo [31], le roinnt modhnuithe. Go hachomair, síolaíodh cealla HaCaT ag dlús 1 × 105 cealla/cm2 i 12 pláta tobair. Tar éis 3 lá, spreagadh cealla le 15 µg/mL de lipopolysaccharides (LPS) ó Escherichia coli agus comh-ghlais le trí thiúchan éagsúla de gach sliocht ({{10}}.1875 mg/mL; {{ 14}}.375 mg/mL; 0.75 mg/mL) caolaithe i meán cultúir (meán DMEM ina bhfuil 0.5 faoin gcéad FBS). Baineadh úsáid as cealla gortha le LPS amháin agus cealla gortha le meáin chultúir amháin mar rialuithe dearfacha agus diúltacha, faoi seach. Tar éis 24 h, bailíodh súnna, lártheifneoirithe ar feadh 10 nóiméad ag 2000 g, agus stóráil ag −80 ◦C go dtí go ndéanfar anailís bhreise orthu. Rinneadh measúnú ar leibhéil IL-6 agus IL-8 trí mheasúnacht imdhíon-ionsorbaigh atá nasctha le heinsím (ELISA), ag baint úsáide as feisteáin atá ar fáil ar bhonn tráchtála (PeproTech; London, UK), de réir threoracha an déantóra, agus an t-ionsúcht a thomhas ag 450 nm. le ceartú tonnfhad socraithe ag 620 nm i speictreafótaiméadar microplate (EPOCH 2, BioTek Instruments, Winooski, VT, USA). Cuirtear na torthaí in iúl mar chéatadán IL-6 nó IL{-8 i gcoibhneas leis an rialú dearfach (cealla spreagtha le LPS). Rinneadh trí thurgnaimh neamhspleácha i dtrí shraith.

2.7. Anailís staitistiúil

Cuirtear torthaí measúnaithe ORAC agus ceall-bhunaithe in iúl mar mheánluach ± ​​SD, a fhaightear ó thrí thurgnamh neamhspleách ar a laghad. Maidir leis na measúnachtaí einsímeacha agus cíteatocsaineachta, socraíodh na luachanna IC5{50 ó chuair dáileoige-fhreagartha trí cheapacha log10 ag baint úsáide as GraphPad Prism 8.4.3. bogearraí (GraphPad Software, Inc., La Jolla, CA, USA). Cuirtear na torthaí i láthair mar IC50 le eatramh muiníne 95 faoin gcéad. Rinneadh anailís staitistiúil ar na torthaí ag baint úsáide as na bogearraí a bhí ann roimhe seo. Nuair a fíoraíodh éagsúlacht aonchineálach agus dáileadh gnáth ar na sonraí, rinneadh anailís ar na torthaí trí anailís aontreo ar athraithis (ANOVA), agus ina dhiaidh sin tástáil Tukey le haghaidh comparáidí iolracha. I gcás athraithis ilchineálacha nó mura ndéantar na sonraí a dháileadh de ghnáth, rinneadh tástáil t oiriúnach neamhphéireáilte le fáil amach an raibh difríocht shuntasach idir na hacmhainní. Glacadh le p-luach Níos lú ná nó cothrom le 0.05 mar luach suntasach go staitistiúil i ngach cás. Sloinntear torthaí tástála so-ghabhálacht frithmhiocróbaigh mar an luach airmheánach, a fhaightear ó thrí thurgnamh neamhspleácha ar a laghad.

3. Torthaí agus Plé

This study aims to investigate the cosmeceutical potential of protein-rich extracts that were produced by high-pressure technologies from fishery industry wastes, namely sardine wastes and codfish frames [11,22]. The selection of extracts was based on previous results regarding their characterization and process conditions. For codfish, all extracts were selected aiming at evaluating the impact of the extraction temperature on the recovery of compounds with promising bioactive effects on the skin. For sardine extracts, only three extracts derived from both defatted and non-defatted raw materials, processed at higher temperatures (190  and 250 ◦C) and with the highest extraction yield (>Roghnaíodh 45.7 g/100 g). Tá na torthaí maidir le cion próitéine iomlán gach eastóscáin léirithe i dTábla 1.

3.1. Gníomhaíochtaí Frithocsaídeacha, Frith-Aosaithe, agus Frith-Hipirpigmentation

Rinneadh éifeacht cosmeceutical féideartha na n-sleachta a scagadh ar dtús trí úsáid a bhaint as measúnachtaí ceimiceacha agus einsímeacha chun a n-éifeachtaí frithocsaídeacha, frith-aosaithe agus frith-hiperpigmentation a mheas. Maidir leis an gcumas frithocsaídeach, roghnaíodh measúnacht ORAC mar go ndéanann sé tomhas ar chumas samplaí chun ROS atá ábhartha go bitheolaíoch a scaveneáil, eadhon fréamhacha perocsaile, a mheastar a bheith ar cheann de na príomh-ionduchtóirí d'aosú craiceann [2,32]. Rinneadh an éifeacht frith-aosaithe a mheas freisin trí chosc ar elastase ós rud é go bhfuil tuairisc ar an einsím seo a bheith freagrach as díghrádú elastin agus próitéiní ECM eile [6]. Chun an éifeacht frith-hiperpigmentation, baineadh úsáid as an measúnacht tyrosinase, chun meastóireacht a dhéanamh ar chumas na samplaí bac a chur ar tháirgeadh melanin. Déanann Tábla 2 achoimre ar luachanna ORAC agus IC50 de na sleachta go léir.

Léiríonn ár dtorthaí gur léirigh eastóscáin sairdín agus troisc gníomhaíocht frithocsaídeach agus éifeachtaí coiscthe ar ghníomhaíocht einsímí elastase agus tyrosinase. I measc samplaí sairdín, léirigh S1 an luach ORAC ab airde (1.94 ± 0.08 µmol sliocht TEAC/mg) agus S3 agus S2 ina dhiaidh sin. Déantar na torthaí seo trí mheastóireacht fhrithocsaídeach roimhe seo trí mhodh eile (2,2-measúnú défheinile-1-picrylhydrazyl-DPPH) inar léirigh sliocht S1 na luachanna IC50 is ísle [22]. D'fhéadfaí an cumas scavenging níos airde i dtreo fréamhacha sárocsaile an tsampla S1 a dhíorthú ó pheptídí le seichimh aimínaigéad éagsúla atá i láthair sna sleachta ós rud é go bhféadfadh idirghníomhaíochtaí ina measc tionchar a imirt ar an gcumas scavenging radacach [33]. Ina theannta sin, d'fhéadfadh go mbeadh tionchar ag comhdhúile a ghintear i Maillard nó imoibrithe teirme-ocsaídiúcháin eile ar ghníomhaíocht frithocsaídeach na samplaí [34]. In ainneoin an luach ORAC is ísle, ba iad samplaí S2 agus S3 na cinn a raibh an cumas is airde acu maidir le gníomhaíochtaí tyrosinase agus elastase a chosc, faoi seach.

I measc sleachta troisc, léiríodh go bhfuil na gníomhaíochtaí frithocsaídeacha agus frith-hiperpigmentation is airde ag Cf4. Léirigh anailís SEC-GPC ar na sleachta go bhfuarthas peptides de mheáchan móilíneach laghdaithe nuair a mhéadaigh an teocht eastósctha suas le 250 ◦C [11]. Tá cumas coiscthe elastáis an tsampla seo laistigh den raon luachanna a aimsítear le haghaidh sleachta Cf eile, eadhon Cf1 agus Cf3. Maidir leis na tiúchain a tástáladh, áfach, níor léirigh an dá sliocht seo aon ghníomhaíocht choiscthe i dtreo tyrosinase.

Sa litríocht, tá roinnt tuarascálacha á léiriú go gcuireann sleachta as seachtháirgí mara gníomhaíocht frithocsaídeach ábhartha agus cosc ​​ar tyrosinase i láthair. Mar shampla, léirigh eastóscáin a dhíorthaítear ó sheachtháirgí muirí (Scophthalmus maximus) trí hidrealú alcaileach, gníomhaíocht frithocsaídeach a bhfuil rochtain uirthi trí thástálacha ceimiceacha éagsúla: 1,1-défheinile-2- picrylhydrazil (DPPH) cumas radacach-scavenála ( 36.12 faoin gcéad faoi rialú), modh ABTS (2,20 -azinobis-(3-ethyl-benzothiazoline-6-aigéad sulfónach) (12.81 µg BHT/mL) agus measúnacht tuaradh crócáin (8.{ {28}}3 µg Trolox/mL) [35] I staidéar eile, léirigh eastóscadh einsímeach smugairle róin alúm-saillte (Lobonema smithii) hidrealáití a tháirgeadh le gníomhaíocht ard frithocsaídeach (IC{{2{0}}. 9 mg/mL do thástálacha ABTS e DPPH) agus poitéinseal coisctheach tyrosinase, le luachanna IC50 idir 14.1 agus 24.5 mg/mL [36], atá san ord céanna méide leis na cinn a fhaightear sa saothar seo Ina theannta sin, fuarthas eastóscáin le luachanna frithocsaídeacha comhchosúla (luachanna ORAC – 0.4 go 3.5 µmol TEAC/mg) ó iarmhair de chineál eile sa tionscal bia, eadhon sruthanna dramhaíola déanta fíona [6]. Mar sin féin, léirigh na sleachta iarmhair winery seo cumais coisctheacha níos airde tyrosinase (IC50 ó 4.0 go 0.14 mg / mL) agus elastase (IC50 ó 3.4 go 0.1 mg sliocht / ml) ná iad siúd a fuarthas san obair seo, is dócha mar gheall ar láithreacht comhdhúile feanólacha. a aithnítear go bhfuil roinnt bithghníomhaíochtaí acu. Tá sé tábhachtach a lua gur úsáideamar tyrosinase muisiriún inár staidéar chun éifeacht frith-hiperpigmentation sleachta a scagadh, toisc gur úsáideadh an einsím seo go forleathan i dtástálacha tréchur ard [37]. Mar sin féin, ós rud é go bhfuil roinnt conspóidí ann maidir le cosúlacht agus homaleolaíocht na heinsíme seo le tyrosinase mamaigh/daonna [38–40], ba cheart staidéir sa todhchaí a bhaineann le línte cille mamaigh a mheas chun éifeacht fhrith-hiperpigmentation eastóscáin sairdín agus trosciasc a mheas.

Chun a aithint cé na comhdhúile a d'fhéadfadh a bheith freagrach as freagairt bithghníomhach sleachta, rinneadh staidéir chomhghaolaithe idir sonraí bithghníomhaíochta agus comhdhéanamh aimínaigéad na n-eastóscáin a tuairiscíodh roimhe seo [11,22] (Tábla S1). Maidir le gníomhaíocht frithocsaídeach, fuarthas na comhghaolta is airde (R2 Níos mó ná nó comhionann le 0.7) idir luach ORAC agus threonine iomlán, valine saor in aisce, chomh maith le leucine saor in aisce agus iomlán do gach sliocht. I gcás samplaí sairdín, fuarthas comhghaol ard (R2 Níos mó ná nó cothrom le 0.94) freisin le haghaidh ábhar tryptophan saor in aisce agus iomlán. Dá réir sin, tuairiscíodh roimhe seo go bhfuil airíonna frithocsaídeacha ag na aimínaigéid seo go léir i roinnt córais samhail [41-43]. Maidir le gníomhaíochtaí coiscthe elastase agus tyrosinase, fuarthas na comhéifeachtaí comhghaolaithe is airde (R2 Níos mó ná nó cothrom le 0.8) le haghaidh cion iomlán próitéine agus arginine saor in aisce, faoi seach, rud a thugann le tuiscint go bhféadfadh ról tábhachtach a bheith ag na comhdhúile seo san acmhainneacht. éifeacht frith-aosaithe agus frith-hiperpigmentation na n-sleachta sruthanna dramhaíola tionscal éisc.

【Le haghaidh tuilleadh eolais:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】