Próifíl Chuimsitheach ar Fhoirmlithe Rúnda Ó Ghaschealla Sreabhán Amniotic Féatais agus Imbhreithe Daonna Cuid 1

Déan teagmháil le do thoiloscar.xiao@wecistanche.comle haghaidh tuilleadh eolais

Coimriú:Thuairiscigh muid roimhe seo go bhfuil c-KIT móide gaschealla díorthaithe amniotic-sreabhán htaman a fuarthas ó shamplaí fágtha de dhiagnóis réamhbhreithe gnáthaimh Ⅱ trimester (HAFS féatais) endowed le hiarmhairtí tiomána ionchasacha paracrine ar son maireachtáil, frithshnáithíneacha agus iomadaithe. D’fhéadfaí iad a leithlisiú freisin ó shamplaí dramhaíola cliniciúla an tríú trimester le linn rannóga C-sceidealaithe (HAFS imbhreithe), rud a thairgeann rogha eile atá níos inrochtana i gcomparáid le HAFS féatais. Mar sin féin, is beag atá ar eolas faoi phróifíl paracrine na hAFS imbhreithe.Seo a chuirimid ar fáil tréithriú mionsonraithe ar an secretome iomlán HAFS (ie, iomlán na fachtóirí paracrine intuaslagtha scaoileadh ag cealla sa mheán coinníollaithe, HAFS-CM) agus na vesicles extracellular (. HAFS-EVs) laistigh de, ó Ⅱtrimester féatais-versus III cealla imbhreithe trimester. Bhí saintréith de chuid AFS féatais agus imbhreithe agus bhí siad faoi réir réamhchoinníollacha hipocsacha chun a gcumas paracrine a fheabhsú. Rinneadh anailís ar fhoirmlithe AFS-CM agus HAFS-EV le haghaidh ábhar próitéine agus ceimicín/cíteacain, agus rinneadh imscrúdú breise ar an lasta EV trí sheicheamh RNA. Tá feinitíopa na hAFS féatais agus imbhreithe, mar aon lena bhfoirmíochtaí secretome comhfhreagracha, forluiteach; fós, léirigh HAFS féatais gníomhaíocht fosfair ocsaídiúcháin neamhaibí i gcomparáid le cinn imbhreithe. Léirigh próifíliú a gcuid lasta paracrine roinnt difríochtaí de réir na céime iompair agus an réamhchoinníoll hypoxic. Sholáthair an dá fhoinse cille foirmlithe saibhrithe le fachtóirí spreagtha neurotrófacha, inmunomodulatory, frith-fibrotic, agus endothelial, agus sainmhíníodh an secretome hAFS féatais neamhaibí ag próifíl pro-vasculogenic, athghiniúnach, pro-réiteach agus frith-aosaithe níos suntasaí. Léirigh próifíliú RNA beag saibhriú microRNA i lasta féatais agus imbhreithe HAFS-EV, le croí pro-réiteach ar bhealach cobhsaí-léirithe mar shíniú móilíneach tagartha. Deimhnímid anseo gurb ionann AFS agus foinse tharraingteach fachtóirí paracrine athghiniúna; ba cheart meastóireacht a dhéanamh ar an rogha foirmlithe secretome AFS féatais nó imbhreithe le haghaidh teiripe paracrine amach anseo agus an cás cliniciúil sonrach á cur san áireamh.

Eochairfhocail:sreabhach amniotic; gaschealla; éifeachtaí paracrine; vesicles extracellular; meán cille-oiriúnaithe; ceimicín; cítocíní; próitéamaíocht; seicheamhú RNA; microRNA

Cliceáil anseo le do thoil chun tuilleadh eolais a fháil

1. Réamhrá

Forbraíodh leigheas athghiniúna le déanaí mar réimse atá ag teacht chun cinn chun athchóiriú feidhmiúil a dhéanamh ar fhíochán gortaithe trí roinnt straitéisí. De réir mar a chuaigh cur chuige innealtóireachta fíocháin chun cinn go mór le blianta beaga anuas, tá an t-imscrúdú ar éifeachtaí paracrine gascheall tar éis dul i méid i gcónaí. Léiríodh go ginearálta go bhfuil acmhainneacht theiripeach na gcealla gas trasphlandaithe á n-idirghabháil den chuid is mó ag a bhfachtóirí intuaslagtha secreted, ar féidir leo micrea-thimpeallacht pro-athghiniúna a chur i bhfeidhm i bhfíochán óstach agus ag an am céanna spreagtar gníomhachtú meicníochtaí endogenous de ghnóthú feidhme [1,2]. Dá bhrí sin, tá an ghascheall secretome iomlán na móilíní trófacha paracrine scaoileadh cille, chomh maith le membrane-cheangal vesicles seach-cheallacha molta níos mó mar tháirge íocshláinte teiripe nuálach ag staidéir réamhchliniciúla iolracha neamhspleácha a dhíríonn ar cardashoithíoch, néareolaíoch, agus/nó athlastacha. galar. Dá réir sin, d’fhéadfaí gaschealla a shamhlú mar mhonarchana bitheolaíocha chun a rúnaí teiripeach a shaothrú trí chóireálacha athghiniúna atá réidh le húsáid agus as an tseilf a thairiscint. Trí straitéis cealla-bhunaithe den sórt sin, ach saor ó chill a chur i bhfeidhm, féadfar go leor gnéithe teorannacha a bhaineann le teiripe canonical cille a shárú, agus éifeachtaí tairbhiúla á chinntiú ag an am céanna.cad is ciste annSa pheirspictíocht seo, rinneadh tástáil fhorleathan ar chealla mesenchymal stromal (MSC) mar iarrthóirí cille toimhdeacha? Go deimhin, tá MSC agus gaschealla/sinsear innealtóireacht agus/nó spreagtha ag straitéisí réamhchoinníollacha éagsúla chun cur lena n-acmhainn athghiniúnach agus a n-acmhainneacht rúnaíochta [3,4] le spéis sainráite in ábharthacht bhitheolaíoch a bhféitheacha eischeallacha rúnda (EVs).

Cáithníní nana-mhéid is ea EVanna atá teorannaithe ag déchiseal lipid agus a shúdaítear go gníomhach ag gach cineál cille. Áirítear le EVanna an-bheag (<200 nm)="" exosomes,="" medium-sized="" (200-500="" nm)microvesicles="" or="" shedding="" vesicles,="" and="" larger-sized="" apoptotic="" bodies="" (="">500 nm); feidhmíonn siad mar iompróirí bitheolaíocha ríthábhachtacha de chomharthaíocht idircheallacha trína gcuid lasta móilíneach a sheachadadh ó chill tuismitheora go dtí freagróir/spriocfhreagróir [5,6]. Ós rud é go bhfuil a n-acmhainneacht paracrine aisteach maidir le héifeachtaí tairbhiúla a bheith acu inchomparáide lena gcealla tionscnaimh, tá EVanna gascheall tagtha chun cinn mar roghanna teiripeacha tarraingteacha i múnlaí réamhchliniciúla galair, mar ischemia, athlasadh, nó gortú, mar a athbhreithníodh go forleathan i [{{3] }}]. Ó pheirspictíocht aistritheach, anuas ar acmhainneacht mhodhnaithe cille, tá féidearthacht leithlisithe agus féin-athnuachan ardaithe ina ngnéithe ríthábhachtacha d’fhoinse idéalach na EVanna teiripeacha agus fachtóirí intuaslagtha. I gcás den sórt sin, féadfaidh MSC féatais agus imbhreithe rogha spéisiúil a thairiscint i bhfianaise a n-acmhainneacht iomadaithe, agus próifíl neamhaibí forbartha le gnéithe idirmheánacha idir giniúintí sómacha suthacha agus fásta [10,11]. Is féidir MSC féatais a leithlisiú ó iarscríbhinní eis-shuthach le linn iompair mar shampláil fágtha a fhaightear le linn scagthástála réamhbhreithe (.i. villi chorionic [12-14] agus sreabhán amniotic [15,16]) nó a fhaightear mar ghineadóirí imbhreithe tráth breithe, ó dhramhábhar cliniciúil (ie, seicní amniotic agus broghais [17-21], comhpháirteanna corda imleacáin [22-24] agus sreabhán amniotic téarma [25,26]).

Is féidir le Cistanche frith-aging

Go háirithe, aibhsíodh gaschealla sreabhán amniotic daonna (HAFS) mar straitéisí teiripeacha a bhfuil gealladh fúthu sa leigheas athghiniúnach. agus léiríodh go bhfuil siad ilchumhachtach den chuid is mó in vitro agus in vivo [16,27,28], go gcuireann siad leis an lineage hematopoietic tar éis trasphlandú utero [29], agus engraft in orgáin gortaithe agus éifeachtaí imdhíon-mhodúla á bhfeidhmiú [26,30] agus gníomhachtú. freagraí cúlaitheacha ingenous, mar a thuairiscítear go cuimsitheach i [31]. Tá sé léirithe ag ár bhfoireann agus ag daoine eile go n-eisíonn HAFS secretome atá an-saibhrithe le móilíní trófacha bithghníomhacha atá in ann díriú ar mheicníochtaí éagsúla deisiúcháin. Tuairiscíodh go gcuireann fachtóirí paracrine HAFS spreagthaí pro-marthanais ar fáil le múchadh athlasadh [32], soláthraíonn siad cardioprotection i gcoinne ischemia pro-longed [33.34], agus cardiotoxicity [35], agus spreagann siad angiogenesis áitiúil le hathiontráil timthriall cille cardiomyocyte [ 34,36]. Ós rud é gur léirigh riarachán HAFS-EV an chuid is mó de na héifeachtaí seo ina n-aonar, dhírigh staidéir neamhspleácha ar a bpróifíl athghiniúna a dháileadh i gcoinne chúlraí paiteolaíocha éagsúla, lena n-áirítear gortú matáin chnámharlaigh agus cairdiach, galar duáin, osteoarthritis, oistéapóróis, enterocolitis necrotizing agus neurodegenerative. samhlacha [34,37-44].

Cé go bhféadfadh fianaise tacú le haistriúchán cliniciúil HAFS-EVanna le haghaidh teiripe paracrine sa todhchaí, tá sé tábhachtach a mheas go ndearna an chuid is mó de na staidéir seo imscrúdú den chuid is mó ar acmhainneacht mhodúcháin na hAFS féatais a fuarthas le linn scagthástála réamhbhreithe Ⅱ trimester Go deimhin, tá próifíl iomlán den secretome ó níl iniúchadh mionsonraithe déanta go fóill ar an gcomhghleacaí imbhreithe (.i. ó III trimester c-rannóga). Léirigh HAFS imbhreithe tríú trimester airíonna rialála imdhíonachta sainiúla i gcomparáid le cinn mé- agus II-trimester [26], agus acmhainneacht athghiniúna endothelial ábhartha á chothabháil [25].cé mhéad cistanche a ghlacadhIs díol suntais é, sa tuarascáil le déanaí ar mhoirfeolaíocht ilchineálach HAFS féatais[45], tá léargais nua curtha ar fáil ar a bpróifíl gasta agus slonn géine.bithfhlavonoidsTá sé seo tar éis léargas nua a thabhairt ar fad ar luach athghiniúnach na gcodán ceallacha éagsúla de AFS[46]. Mar sin, tá aird mhéadaithe á tarraingt ar thréithriú cuimsitheach na bhfodhaonraí éagsúla de AFS. Thuairiscigh muid roimhe seo go léiríonn spreagadh 24h hypoxic agus serum-saor in aisce straitéis éifeachtach chun cur le cumas paracrine Ⅱ trimester féatais AFS [34,35,37]. Ós rud é nach bhfuil mórán ar eolas faoi chomhdhéanamh an secretome ó III trimester HAFS, tuairiscímid anseo an chomparáid chuimsitheach idir Ⅱ versus Ⅲ trimester HAFS agus a gcodáin secretome (lena n-áirítear hataí-EVs), chun aghaidh a thabhairt ar thionchar na céime iompair agus na cille hypoxic. réamhchoinníoll ar shaintréithe cille agus secretome.

2. Torthaí

2.1.AFS Imbhreithe Cuir Meaitseáil Gar-fheinitíopach i láthair don Fhéatais

Níor léiríodh aon difríocht ábhartha go staitistiúil in aois an deontóra idir samplaí de shreabhán amniotic an fhéatas Il trimester agus imbhreithe III trimester. Féatais c-KIT* Dhearbhaigh HAFS (f-hAFS ó shamplaí sreabhán amniotic an dara ráithe) agus c-KIT* imbhreithe (p-hAFS ó dhramhaíl chliniciúil sreabhán amniotic an tríú trimester) gnéithe comhchosúla le moirfeolaíocht fibroblast-mhaith agus ubhchruthach (Fíor 1A) agus feinitíopa stromal mesenchymal (sonraí nach bhfuil léirithe), mar a tuairiscíodh roimhe seo [16,25]. Thaispeáin f-hAFS agus p-hAFS saothraithe in vitro suas go dtí sliocht 5 leibhéil diomaibhseacha seanaoise ó ghníomhachtú galactosidase (SA- -Gal) i thart ar 4 faoin gcéad de na cealla (Fíor 1B) . Chuir f-hAFS agus p-hAFS araon leibhéal ard comhléirithe i láthair ar na marcóirí mesenchymal CD107a agus CD146, a tuairiscíodh le déanaí chun feinitíopa an-rúnda a shainiú[47]. B'ionann cealla CD107at CD146* agus formhór an daonra f-hAFS (thart ar 64 faoin gcéad ,*p<0.05), while="" p-hafs="" showed="" a="" lower="" enrichment="" for="" this="" subpopulation,="" approximately="" 52%="" of="" total="" cells,="" yet="" this="" disparity="" was="" not="" statistically="" significant="" (figure="">

Fíor 1. Tá meastóireacht feinitíopach ag féatais agus imbhreithe. (A)Íomhánna ionadaíocha de HAFS féatais (f-hAFS, painéal ar chlé) agus AFS imbhreithe (p-hAFS, painéal ar dheis) saothraithe in vitro i gcoinníollacha caighdeánacha; barra scála: 200 um. (B) Anailís ar an marcóir senescent beta-galactosidase (SA- -Gal, i gorm) trí ruaimniú cíteiceimic ar f-hAFS agus p-hAFS tar éis 5 sliocht sa chultúr; tuairiscítear íomhánna ionadaíocha sa phainéal ar chlé, barra scála: 200 um. Tuairiscítear an céatadán comhfhreagrach de chealla/réimse -Gal-dearfach sa ghraf sa phainéal ar dheis (f-hAFS:4.12±0.58 faoin gcéad agus p-hAFS:3.88±2.10 faoin gcéad;p=0.1424,n{ {24}} turgnaimh).(C)Feinitíopa imdhíonachta de HAFS a léiríonn CD146 agus CD107a marcóirí meiseinchymal. Ceapacha citeiméadrachta sreafa ionadaíocha de f-hAFS agus p-hAFS (painéal ar chlé) agus luachanna comhfhreagracha dá dtagraítear CD107a dearfach dúbailte móide cealla CD146 móide; CD107a móide CD146* f-hAFS:63.68±5.82 faoin gcéad ,*p=0.016i gcomparáid le fuílleach36.32±5.82 faoin gcéad f-hAFS (Eile);CD107 ag CD146 móide p-haFS:52.07±6.76 faoin gcéad fágtha 93±56.76 faoin gcéad p-hAFS (Eile); CD107a móide CD146 móide f-hAFS vs CD107a móide CD146 móide p-hAFS p=0.2403,n=4 turgnaimh. Eile: méid iomlán CD107a-CD146~hAFS, CD107a~CD146*hAFS agus CD107 ag CD146-hAFS. Cuirtear na luachanna go léir in iúl mar mheán ± leath de thurgnaimh neamhspleácha. SA- -Gal: Senescence-Associated{- -galactosidase.

2.2.Féatais HAFS Taispeáin Meitibileacht Difriúil ó hAFS Imbhreithe

Chun meastóireacht a dhéanamh an bhféadfadh tionchar a bheith ag an gcéim iompair ar mheitibileacht miteachondrial, rinneadh anailísí bithcheimiceacha ar f-hAFS agus p-hAFS i gcoinníollacha cultúir in vitro caighdeánach. Léirigh meastóireacht ar mheitibileacht aeróbach go raibh an ráta tomhaltais ocsaigine (OCR) agus sintéis ATP níos ísle i f-hAFS maidir le p-hAFS, nuair a spreagtar iad le pyruvate móide malate (P/M; ***p<0.001 for="" ocr,="" and=""><0001, for="" atp="" synthesis),="" and="" with=""><0.01 for="" ocr="" and="" atp="" synthesis,="" figure="" 2a).="" moreover,="" f-has="" displayed="" a="" lower="" oxidative="" phosphorylation="" efficiency="" when="" compared="" to="" p-hafs,="" as="" shown="" by="" thep/o=""><0.001 for="" p/m="" and=""><0001 for="" succinate).="" values="" for="" f-hafs="" were="" lower="" than="" those="" reported="" in="" the="" literature[48],="" and="" suggest="" uncoupling="" between="" oxygen="" consumption="" and="" atp="" production="" (figure="" 2a).="" by="" evaluating="" the="" relative="" contributions="" of="" glutamine,="" long-chain="" fatty="" acid="" oxidation,="" and="" glucose="" in="" oxidative="" phosphorylation="" (oxphos)metabolism,="" we="" noticed="" that="" f-hafs="" were="" sensitive="" to="" the="" addition="" of="" bptes="" (glutaminase="" inhibitor,**="">< 0.01)="" and="" etomoxir(carnitine="" palmitoyl-transferase="" 1a="" inhibitor,=""><0.01), but="" not="" to="" uk5099="" (mitochondrial="" pyruvate="" carrier="" inhibitor).="" by=""><0.0001)and><0.001),but not="" etomoxir,inhibited="" the="" metabolism="" of="" p-hafs="" (figure="" 2b,="" upper="" panel).="" this="" observation="" was="" confirmed="" by="" the="" inhibition="" percentage="" of="" the="" single="" inhibitor="" (figure="" 2b,="" lower="" panel).="" therefore,="" both="" cell="" types="" similarly="" rely="" on="" glutamine="" as="" a="" respiratory="" substrate;="" yet,="" f-hafs="" prefer="" fatty="" acids="" as="" a="" second="" substrate,="" while="" p-hafs="" are="" sustained="" by="" glucose.="" interestingly,="" f-hafs="" showed="" a="" higher="" increment="" of="" glucose="" consumption="" and="" lactate="" release="" when="" compared="" to="" p-hafs=""><0.05><0.001 respectively,="" figure="" 2c),="" which="" indicates="" the="" attempt="" to="" balance="" inefficient="" aerobic="" metabolism="" by="" lactate="" fermentation.="" this="" difference="" could="" also="" explain="" the="" reaction="" of="" f-hafs="" to="" the="" addition="" of="" etomoxir="" and="" uk5099.="" since="" f-has="" favor="" the="" use="" of="" glucose="" during="" anaerobic="" glycolysis(*=""><0.05), they="" are="" likely="" forced="" to="" use="" fatty="" acids="" and="" glutamine="" to="" supply="" the="" aerobic="">

2.3.Ní chuireann Réamhriocht Hipocsach isteach ar Fhéatais agus Imbhreithe - Tá Inmharthanacht ag baint le hinmharthanacht agus coinníonn sé a ngníomhaíocht rúnda

D'fhonn foirmlithe secretome HAFS a shainiú, saothraíodh cealla i gcoinníollacha saor ó shéiream chun aon éilliú ó FBS a sheachaint. Léirigh muid roimhe seo nár athraigh coinníollacha cultúir hypoxic 24 h séiream-saor in aisce (SF) agus 1 faoin gcéad O2 inmharthanacht Ⅱtrimester féatais HAFS (f-dóchas), agus thacaigh siad le scaoileadh fachtóirí paracrine athghiniúnach ina mheán cille-oiriúnaithe. (hAFS-CM) agus i bhfeithiclí eischeallacha (hAFS. EVs)[34,35,37,49]. Anseo, chomh maith le próifíliú a dhéanamh ar chodáin secretome p-haFS den chéad uair, rinneamar meastóireacht ar cibé an bhfuil iompar comhchosúil i láthair ag p faoin réimeas réamhchoinníollach céanna, ag baint úsáide as an riocht cultúir normocsaí mar an rialú. Rinneadh anailís ar inmharthanacht f-hAFS agus p-hAFS tar éis 24 h sna socruithe seo a leanas: coinníoll normocsa (20 faoin gcéad O2) i meán cultúir rialaithe iomlán (Ctrl) (Ctrlf-hAFSnormo agus Ctrl p-haFSnormo), riocht normocsach i meán SF (SF f-hAFSnormo agus SF p-hAFSnormo), riocht hypoxic (1 faoin gcéad O2) i meán rialaithe iomlán (Ctrlf-has hypo agus Ctrl p-hAFSnypo), agus riocht hypoxic i meán SF (SF f-has hypo agus SF p -has hypo, Fíor 3A). Dhearbhaíomar nach raibh aon athrú ar inmharthanacht f-i gcoinníollacha Ctrl agus SF agus faoi spreagadh hipocsaiceach, agus níor cuireadh isteach ar níos mó ná 80 faoin gcéad (suas le beagnach 88 faoin gcéad) de chealla iomlána. Réimsigh cealla apoptotic luatha agus déanacha ó ca. 13 faoin gcéad go 18 faoin gcéad i gcoinníollacha SF, gan aon ábharthacht suntasach go staitistiúil. Mar an gcéanna, bhí inmharthanacht imbhreithe sa raon 80-92 faoin gcéad , agus b'ionann cealla apoptotic luath agus déanach agus suas le 18 faoin gcéad i gcoinníollacha SF. ní raibh tionchar beag ag p-hAFS ach amháin faoi na coinníollacha comhcheangailte hipocsacha agus SF; go deimhin, cé nach raibh tionchar ag réamhchoinníoll ar mharthanas cille nuair a saothraíodh p-hAFS i meán iomlán, léirigh an coinníoll SF comhfhreagrach méadú de ca. 4-huaire (* lch<0.05) of="" late="" apoptotic="" cells(figure="">

Fíor 2. Tréithriú meitibileach féatais agus imbhreithe AFS. (A) Ráta tomhaltais ocsaigine (OCR), sintéis ATP trí F1-F.ATP synthase, agus cóimheas P/O i f-have and-have i láthair pyruvate móide malate (P/M) nó succinate (Succ);***p=0.0005,**p=0.0012,****p<><0.0001.(b)ocr and="" atp="" synthesis="" in="" presence="" of="" bptes,="" etomoxir,="" and="" uk5099(upper="" panel)="" was="" sequentially="" added="" during="" the="" experiments="" to="" evaluate="" the="" relative="" contributions="" of="" glutamine,="" long-chain="" fatty="" acid="" oxidation="" and="" glucose="" in="" oxphos="" metabolism="" in="" f-hafs="" and="" p-hafs.for="" ocr="" experiments:="" f-hafs+bptes**p="0.0014;for" f-hafs="" +="" etomoxir**p="0.0088;for" p-hafs=""><0.0001;for><0.0001. for="" atp="" experiments:="" f-hafs="" +="" bptes****=""><0.0001; for="" f-hafs＋etomoxir**p="0.0013;for"><0.0001;for p-hafs="" +="" uk5099="" **=""><0.0001).>cistanche AstráilTuairiscítear comparáid idir an céatadán de chosc ar shintéis OCR agus ATP i f-agus-hAFS mar gheall ar na coscairí a luaitear thuas sa phainéal íochtair B. I gcás turgnaimh OCR: HAFS móide Etomoxir**** p<0.0001; for="" hafs="" +="" uk5099="" ****=""><0.0001. for="" atp="" experiments:=""><0.0001;for hafs="" +uk5099="" ****=""><0.0001).(c) glucose="" consumption,lactate="" release="" and="" anaerobic="" glycolysis="" yield,="" used="" as="" markers="" of="" the="" anaerobic="" glycolysis,="" in="" f-hafs="" and="" p-hafs.="" all="" values="" are="" expressed="" as="" mean="" ±="" use.m="" of="" n="4" independent="" experiments;*p="">

Rinneamar measúnú ansin ar tháirgeacht na gcodán rúnaim a fuarthas ó f-hAFS in aghaidh p-hAFS bunaithe ar shaibhriú próitéine. Tá rún ag an iomlán, toisc go bhfuil iomlán na bhfachtóirí paracrine rúnda cille, á léiriú anseo ag an HAFS-CM. An tiúchan próitéine de f-hAFS-CM agus p-hAFS-CM i meán SF tar éis réamhchoinníoll cille hypoxic vs rialú riocht normocach mar bhunlíne (is iad sin, f-hAFS-CMnormo, f-hAFS-CMNypo, P has-CMnormo, agus p. -hAFS-CMHypo,) measúnú BCA agus tomhas de réir 10§ cealla.cistéirThug na torthaí a fuarthas le tuiscint gur léirigh f-has-CM agus p-hAFS-CM treocht dhearfach chomhionann i saibhriú próitéine tar éis priming hypoxic (f-hAFS-CMnypo'166.10±22.13 ug/10 cealla céime;p-hAFS-CMNypo∶182.30±29.71 ug/10 cealla céime) thar a gcomhghleacaithe normocsacha (f-hAFS-CMnormo: 105.50 ± 19.89 ug/10 cealla céime; p- Cealla céime HAFS-CMhypoi 91.12 ± 24.39 ug / 10. Mar an gcéanna, rinneadh tiúchan próitéin dromchla HAFS-EVanna a thomhas i f-have-EVSnormo, f-hAFS-EVShypo, p-haFS-EVSnormo, agus p-haFS-EVShypo Léirigh EVanna toradh inchomparáide nuair a fuarthas iad ó f-hAFS nó p-hAFS Maidir le foirmlithe HAFS-CM, bhí treocht dhearfach maidir le méadú ar ábhar próitéine ar f-hAFS-EVs agus p-hAFS. riocht normocsach comhfhreagrach (f-hAFS-EVSHypo∶2.03±0.67 ug/10 cealla céime agus p-hAFS-EVSHypo∶1.85±0.47 ug/10 cealla céime;f-have-EVsnormo∶1.28±0.36ug/10 cealla céime; -hAFS-EVsnormo∶1.19±0.31 ug/10 cealla céime, Fíor 3C).

2.4.Féatais-agus Imbhreithe AFS Scaoileadh DEVanna le moirfeolaíocht Analógach agus Dáileadh Méid

Le hanailís moirfeolaíoch trí mhicreascópacht leictreoin tarchuir (TEM) mhéadaigh sé an iomad ard rúndachta EV-f-hAFS agus p-hAFS (Fíor 4). Rinneamar imscrúdú breise ar mhéid agus ar achar f-hAFS-EVs agus p-hAFS-EVs (Fíor 4B) tar éis réamhchoinníollú hipocsaineach i gcomparáid leis an mbunlíne normocsach. Tá EVanna ilchineálacha i méid, sa raon 40-250 nm scaoilte ag féatais agus imbhreithe, agus mar sin áirítear eiseasóim/TRÉanna beaga agus micribhéisic/vesicles chaillteanais araon. Bhí meánmhéid na EVs/réimse sna grúpaí éagsúla inchomparáide, tomhaistear HAFS-EVanna féatais 90-100 nm (f-hAFS-EVsnormo:104.00 ±3.00 nm;f -have-EVSHvpo:97.10±10.10 nm) agus cinn imbhreithe tomhaiste 70-114 nm (p-hAFS-EVsnormo:94.60±19.53 nm; p-hAFS-EVShypo:76.43±4.86 nm, Fíor 4B, painéal ar chlé). Maidir leis an toradh, léirigh HAFS spreagtha faoi hypoxia treocht dhearfach maidir le méadú ar an méid EVanna beaga, cé nach raibh an méadú seo suntasach go staitistiúil. Thomhais f-hAFS-EVStypo 40-70 nm a bhí beagnach dhá oiread sin i gcomparáid lena gcomhghleacaí normocsa. Bhí perinatal-has-EVSHypo a thomhais 40-70 nm,70-100 nm agus 100-130 nm beagnach faoi thrí an méid a fuarthas i gcultúr normocsach (Fíor 4B).

Léirigh anailís rianaithe nanacháithníní (NTA) líon ardaithe cáithníní in ullmhóidí f-hAFS-EV agus p-hAFS-EV araon, agus dheimhnigh sí méadú ar EVanna sna samplaí hipocsacha, mar a breathnaíodh freisin ó na hanailísí roimhe seo (f-hAFS- EVsnormo:182±0.10'cáithníní/10 cealla céime; f-have-EVshypo: 3.30±0.22×10 cáithníní céime/cealla 10 gcéim ;p-hAFS-EVsnormo:2.43±0.80×10 cáithníní céime/10 gcealla céime;p-hAFS-EVshypo:3.05±0.62×10 cáithníní céime/10 gcealla céime, Fíor 4C).

Fíor 4. Tréithriú moirfeolaíoch na bhféatas agus imbhreithe bhfuil-EVs. (A) Íomhánna ionadaíocha de mhicreascópacht leictreoin tarchuir (TEM) de f-hAFS agus p-hAFS (an painéal uachtarach ar chlé, faoi seach, le saigheada dubha a thaispeánann coirp ilshoithíocha intreachtoplasmacha a bhfuil EVanna beaga/eiseasóim laistigh díobh), agus f -hAFS-EVs agus p-hAFS-EVs (painéal ar dheis uachtarach agus íochtair, faoi seach) a scaoiltear i gcoinníollacha saor ó shéiream agus faoi réamhchoinníollacha normocsacha i gcoinne hypoxic (f-hAFS-EVSnormo; f-have-EVSHypoi p-haFS-EVSnormo; agus f-hAFS-EVshypo, faoi seach), barraí scála: 200 nm. (B) Painéal ar chlé: anailís TEM ar dháileadh méid AFS-EVs; painéal ar dheis: breithníodh dáileadh na huimhreach f-hAFS-EVs agus p-hAFS-EVanna in aghaidh na dtréimhsí méide réimse ó 40 nm suas go 250 nm; cuirtear luachanna in iúl mar mheán±sem de n=3 turgnaimh neamhspleácha. (C) Anailís rianaithe nanacháithníní le haghaidh méid agus dáileadh AFS. Painéal ar chlé: íomhá ionadaíoch den aschur grafach; painéal ar dheis: tiúchan HAFS-EVs arna thomhas mar cháithníní 10 céim in aghaidh na gcealla secreting 10 céim; nm: nanaiméadar; mL: millilítear.

2.5.Tréithriú Próitéamach ar Fhéatais vs. AFS Imbhreithe Aibhsíonn Difríochtaí ina gCumadóireacht Rúnda De réir na hAoise Gestational agus Réamhriocht Hypoxic

Rinneadh tréithriú próitéamach ar fhoirmlithe secretome f-hAFS agus p-hAFS trí bhíthin ardán saor ó lipéad gunna gráin, bunaithe ar chúpláil crómatagrafaíocht nanaleacht agus mais-speictriméadracht ardtaifigh (nLC-HRMS). Fuarthas daichead a hocht próifíl próitéamacha trí anailís dhúblach a dhéanamh ar thrí mhacasamhlú bhitheolaíocha de HAFS-CM agus tá-EVs ó f-hAFS agus p-hAFS ag dul faoi réamhchoinníollú cille hipocsamach i gcomparáid leis an riocht normocsach mar rialú. Sainaithníodh 4179 grúpa próitéine ar leith le peiptíd uathúil amháin ar a laghad agus le meáchain mhóilíneacha ó 2 go 3900 kDa agus pointí isoelectric ó 3.6 go 13. Breathnaíodh léiriú meánphróitéine níos airde i HAFS-EVs i gcomparáid le hAFS-CM . Rinneadh ailíniú na liostaí próitéine go léir a fuarthas ar bhonn próitéiní aitheanta. I gcás gach coinníoll turgnamhach, cruthaíodh liosta uathúil ag normalú agus ag meánú [50] na luachanna meaitseála speictrim peptide (PSManna) a chuirtear i leith na próitéiní, arb ionann iad agus líon na mais-speictrim a shanntar do gach ceann acu agus a léiríonn go hindíreach a bhflúirse sna samplaí. Tá liosta iomlán na bpróitéiní a aithníodh in foirmlithe AFS-CM agus tá-EVa tuairiscithe i dTábla S1.

Cheadaigh cur i bhfeidhm na hanailíse idirdhealaitheach líneach (LDA[51]) ar an máistirliosta seo eastóscadh próitéiní atá suntasach go staitistiúil (Creat Níos mó ná nó cothrom le 4.5 agus** p<0.001)to be="" processed="" by="" hierarchical="" clustering.="" figure="" sla="" shows="" a="" clear="" separation="" and="" different="" behavior="" between="" hafs-cm="" and="" have-ev="" fractions="" generating="" two="" main="" branches,="" as="" highlighted="" by="" the="" heatmap="" color="" code.="" a="" further="" subgrouping="" was="" also="" observed="" according="" to="" the="" gestational="" age="" and="" the="" hypoxic="" preconditioning="" adopted.="" the="" fact="" that="" each="" analyzed="" condition="" presented="" a="" unique="" identity="" is="" confirmed="" by="" the="" venn="" diagrams="" (figures="" 5a="" and="" 6a,="" tables="" s1-s3)="" that="" report="" the="" distribution="" of="" proteins="" identified="" with="" a="" frequency="">1 in HAFS-CM agus foirmlithe have-EV a mheas ar leithligh. Cé go raibh thart ar 69.5 faoin gcéad agus 69.9 faoin gcéad de phróitéiní roinnte i measc coinníollacha HAFS-EVs agus HAFS-CM faoi seach, bhí an chuma ar an ábhar atá fágtha eisiach i gcomhréireanna éagsúla, ag dul ó 3.7 faoin gcéad go 13.4 faoin gcéad, i measc na bhfoirmíochtaí.

Chun na hathruithe próitéamacha a scrúdú go cainníochtúil, rinneadh anailís dhifreálach saor ó lipéad trí úsáid a bhaint as na bogearraí MAProMa de dhéantús baile agus trí dhá algartam a chur i bhfeidhm, DAve (Meán Difreálach) agus DCI (Innéacs Muiníne Difreálach, a léiríonn an cóimheas agus an mhuinín i léiriú difreálach, faoi ​​seach), ar PSManna gach próitéine amháin idir an dá théarma chomparáide. Ag baint úsáide as scagairí déine le haghaidh DAve agus DCI chun muinín aitheantais a uasmhéadú agus chun próitéiní a bhfuil éagsúlacht níos mó acu ná athrú fillte de 1.5 a mheas, comparáidí péirewise idir f-hAFS-CM in aghaidh p-hAFS-CM agus f-hAFS-EVs i gcoinne Rinneadh p-hAFS-EVanna de réir céim iompair na cille. Fuarthas iomlán de 58 agus 109 próitéin in iúl go difreálach sna urranna has-CM agus have-EV, faoi seach, (Fíor S1B, C le haghaidh sonraí roghnaithe agus Táblaí S2-S3 i bhfoirm sínte). Ina measc seo, rinneadh 30 próitéin a uasghrádú i f-hAFS-CM agus uasrialaíodh 28 i p-hAFS-CM (Fíor S1B); mar an gcéanna, mar thoradh ar 44 próitéin ar leith rinneadh uasrialáil i bhf-have-EVs agus uas-rialaíodh 65 i p-hAFS-EVs (Fíor S1C). Go háirithe, ní mór próitéiní as ar eascair uas-rialú i f-have a mheas i d-has agus vice versa.

tuairiscítear luachanna; féach Tábla S2 le haghaidh liosta iomlán agus paraiméadair mhionsonraithe na bpróitéiní tuairiscithe. (C)Anailís saibhrithe próisis bhitheolaíocha ar phróitéiní a aithníodh le minicíocht 2 ar a laghad in HAFS-CM féatais (painéal ar chlé) agus tá-CM imbhreithe (painéal ar dheis) de réir réamhoiriúnú hipoxiceach cille. Bunaithe ar uirlis FunRich, taispeántar téarmaí ontology géine i mbarrchairteacha a thuairiscíonn céatadán na ngéinte saibhrithe do gach catagóir (barraí bándearg le haghaidh-have-CMnormo, barraí corcra le haghaidh barraí gorm éadroma f-hAFS-CMhypor do p-hAFS-CMnormo, agus liathróidí gorm le haghaidh p-hAFS-CMhypo).ceannaigh cisteanNíor cheart ach téarmaí ontology géine le Bonferroni a cheartú le *p<0.05 are="">

Tá an t-alt seo a bhaintear as Int. J. Mol. Sci. 2021, 22, 3713. https://doi.org/10.3390/ijms22073713 https://www.mdpi.com/journal/ijms