Anailís Comhdhéanaimh Agus Gníomhaíochtaí Imdhíoneolaíocha na n Oligosaccharides Scoite Ó Cistanche Deserticola

Teagmháil: emily.li@wecistanche.com

Teibí.Fuarthas olagasiúicríd (CDOS) óCistanche deserticolatrí eastóscadh alcaile (pH{{0}}), deascadh eatánóil, agus codánaithe ina dhá chodán íonaithe (.i. CDOS-1 agus CDOS-2)le Sephadex G-100 agus crómatagrafaíocht scagacháin colúin Sephadex G-25. Rinneadh comhdhéanamh monaisiúicríde an CDOS a mheas le crómatagrafaíocht leachta ardfheidhmíochta (HPLC). Fuarthas amach nach raibh CDOS-1 comhdhéanta ach de shiúcrós agus go raibh CDOS-2 comhdhéanta den chuid is mó de shiúcrós, rhamnose, agus mannitol, le cóimheas caochÚn de 1:0.73:3.61. Léirigh tástálacha imdhíoneolaíocha gur chuir CDOS éifeacht shuntasach i láthair ar an innéacs spleen luch, ag méadú gníomhaíocht phagocytosis na macrophages agus ag spreagadh iomadú cille a tháirgeann antasubstaintí. Táthar ag súil go ndéanfar an CDOS a fhorbairt ina bhia nó ina leigheas feidhme.

Eochairfhocail:Cistanchefásach, oligosaccharide, íonú, comhdhéanamh, gníomhaíochtaí imdhíoneolaíocha.

Tá go leor éifeachtaí ag Cistanche deserticola, cliceáil anseo chun tuilleadh eolais a fháil

1. Réamhrá

Cistanchedeserticola YCMa. (Family Orobanchaceae) planda seadánacha gearr atá dúchasach in iarthuaisceart na Síne. Tugtar tonic ar an bplanda iomlán triomaithe (gan bláthanna ) agus tugtar "Rou Congrong" air. I leigheas oirthearach, aicmítear é mar bhlas milis agus goirt, te sa nádúr, agus inchurtha i leith bealaí na duáin agus an intestine mór, leis an. feidhm debríomharanduánagus an bunúsach a fhorlíonadh, moisturizing an stéig, agus putóige scíth a ligean [1]-[3]. Léirigh an staidéar cógaseolaíochta nua-aimseartha go bhféadfadh sé sintéis DNA a spreagadh agus moill a chur ar an bpróiseas senility, an frithocsaídeach a mhéadú [4] , galair cardashoithíoch a chosc agus a chóireáil [3]. Ina theannta sin, d’fhéadfadh sé a chur faoi deara freisin analgesic agusfrith-athlastachéifeachtaí [5], feabhas a chur ar fhoghlaim agus ar chuimhne trí fhachtóirí fáis nerve a aslú [6]. Léirigh roinnt staidéir go bhféadfadh eastóscáin C. deserticola feidhm phagocytic macrophage laistigh den bhoilg i lucha a ghníomhachtú [7]-[9] agusfeabhas a chur ar ancomhlacht's díolúine[10]. De réir na staidéar roimhe seo, tá comhábhair ghníomhacha iolracha sa phlanda seo lena n-áirítear gliocóisídí feinileatánóideach, iridoids, lignans, sacairídí, alcalóideach, etc. [11] Mar an C.fásachfeinileatánóideachgliocóisídíagus polaisiúicrídí aitheanta mar na comhpháirteanna gníomhacha móra, tá staidéir iomadúla dírithe ar a struchtúir agus a mbithghníomhaíochtaí le fiche nó tríocha bliain anuas [12]-[17]. Maidir leis na olagaishiúicrídí luachmhara iC. deserticola, tá na tuarascálacha teoranta go leor. Tá Oligosaccharides, saccharide slabhra gearr ina bhfuil homo- nó heitrea-siúcraí, ar eolas go maith as a n-éifeachtaí tairbhiúla ar shaol an duine agus baineadh úsáid as go forleathan ar feadh i bhfad [18]. Feabhsaíonn oligosaccharides feidhmiúla, a bhfuil feidhm fiseolaíoch acu mar fhachtóir fáis cariogenicity íseal agus bifidobacteria [19], sláinte daoine agus ainmhithe. Baineadh úsáid astu mar chomhábhar bia. Le déanaí, tuairiscíodh feidhmeanna nua oligosaccharides, a bhfuil an cumas acu an córas imdhíonachta a mhodhnú i ndaoine, in ainmhithe agus in iasc [20]. Sa pháipéar seo, tuairiscímid an chéad chuid de thorthaí an chláir taighde, an codánúchán. den olagaishiúicrídí iomlána a fhaightear ó eastóscadh alcaile C. deserticola trí mheascán de chromatagrafaíocht tréscaoilteachta ultra-scagtha agus glóthach, agus anailís ar chomhdhéanamh orthu trí chrómatagrafaíocht leacht ardfheidhmíochta (HPLC). Ina theannta sin, cuirimid i láthair freisin gníomhaíochtaí imdhíoneolaíocha na n-oligosaccharides C. deserticola. Go bhfios dúinn, is beag tuairiscí a foilsíodh ar staidéir ghníomhaíochta imdhíon-spreagthachaC. deserticolaolagaishiúicrídí.

2. Turgnamhach

2.1. Ábhair

Saothraíodh agus bailíodh an C. deserticola ó Alxa League (Mongóil Istigh, an tSín). Ceannaíodh lucha Kunming (Grád II, sé seachtaine d'aois) ó Ionad Turgnamhach Cógaseolaíochta Ollscoil Lár Mhongóil. Sephadex G-100,Sephadex G-25, aigéad trífhluara-aicéiteach (TFA), 1-feinil-3-meitil-5- piarazolone(PMP), D-glúcós, D- ceannaíodh galactós, D-fruchtós, D-xylose, D-mannose, aigéad D-galactúrónach, aigéad D-glucuronic, siúcrós, rhamnose, mannitol, fucós, rhamnose, ó Sigma (St. Louis, MO, SAM). Ceannaíodh RPMI meánach-1640 ó Gibco Invitrogen Co. (San Diego, CA, SAM). Bhí gach ceimiceán eile de ghrád anailíseach.

2.2. Eastóscadh oligosaccharides

Gearradh coirp triomaithe C. deserticola ina bpíosaí níos lú agus baineadh a thuilleadh talún ina phúdar le muileann le eatánól ainhidriúil (3 × 5000 ml) ag 70 céim ar feadh 3 h faoi bhrú an atmaisféir. Socraíodh comhdhlúthadán aife chun lipidí a bhaint. Baineadh an t-iarmhar a bhí fágtha ansin le alcaile (pH=10) ag 60 céim ar feadh 3 huaire (2h gach uair). Tar éis lártheifneoraithe (2000 g ar feadh 15 nóiméad, ag 20 céim ), díríodh an comhshó go dtí an deichiú cuid den toirt i evaporator rothlach faoi bhrú laghdaithe ag 50 céim agus scagtha. Ansin díphróitéiníodh an scagáit ag baint úsáide as an imoibrí Sevag [21], agus dídhathaithe le carbón gníomhachtaithe.

2.3. Aonrú agus íonú olagaishiúicrídí

Rinneadh na olagaishiúicrídí amh reoite-triomaithe a thuaslagadh in uisce driogtha, lártheifneoirithe, agus ansin íonaíodh an comhshnámh le colún Sephadex G-100 (1 × 50 cm), cothromaithe le huisce ultrapure. Tar éis é a luchtú leis an sampla, soluíodh an colún le huisce ultrapure ag ráta sreafa 5 ml/nóim. Bailíodh codáin éagsúla ag baint úsáide as tástálafheadáin. Rinneadh ábhar carbaihiodráit iomlán gach feadán a thomhas ag 490nm ag an modh feanól-H2SO4 [22]. Roinneadh an tuaslagán uisce-éalaithe ina dhá chodán CDOS-1 agus CDO-2. Rinneadh dhá chodán faoi seach a íonú tuilleadh ar cholún Sephadex G{-25 (2.7×85 cm) trí úsáid a bhaint as uisce ultraghlan (ag ráta sreafa 1 ml/nóim). Tar éis an codán íonaithe a bhailiú, bhí sé lyophilized.

2.4. Anailís ar chomhdhéanamh monaisiúicríde

Baineadh amach comhdhéanamh monaisiúicríde na CDO trí anailís HPLC. Rinneadh na CDOanna (2 mg) a hidrealú ar dtús le meatánól ainhidriúil ina raibh 2 M HCl ag 80 céim ar feadh 16 h faoi atmaisféar nítrigine agus ansin le 2 M TFA ag 120 céim ar feadh 1 h. Tar éis TFA a bhaint trí ghalú, díorthaíodh na hidrealasáití ina dhiaidh sin le PMP de réir an mhodha tuairiscithe [23] agus rinne HPLC anailís orthu. Rinneadh scaradh HPLC ar chóras HPLC EF-2002 (cuideachta KNAUER, an Ghearmáin). Rinneadh na díorthaigh PMP a chromatagrafaíocht trí úsáid a bhaint as Sugar-PAK volume (6.5×300mm, spéaclaí comhlacht uisce, Meiriceá), agus tomhaiseadh an t-ionsúcht ag 245 nm. Ba é 20µL an méid insteallta, agus baineadh úsáid as an gcéim shoghluaiste, comhdhéanta de PBS (tuaslagóir A) agus acetonitrile (tuaslagóir B), le haghaidh elution isocratic ag an gcóimheas toirte de 82 faoin gcéad (A) go 18 faoin gcéad (B). Ba é an t-am reáchtála iomlán HPLC ná 40 min, agus ba é an ráta sreafa ná 0.5 mL/nóim.

2.5. Gníomhaíochtaí Imdhíon-bhitheolaíocha

2.5.1. Feidhm phagocytic de monocyte-macrophage

Ceannaíodh seasca lucha Kunming (Grád II, sé seachtaine d'aois) ó Ionad Turgnamhach Cógaseolaíochta Ollscoil Lár Mhongóil agus rinneadh iad a oiriúnú ar feadh seachtaine amháin roimh úsáid. Roinneadh gach lucha go randamach i gceithre ghrúpa, comhdhéanta de ghrúpa rialaithe saline, grúpa dáileog ard CDO, grúpa dáileog measartha, agus grúpa dáileog íseal CDO. Instealladh intraperitoneally do na lucha le tuaslagán oligosaccharides 0.5ml uair amháin in aghaidh an lae ar feadh 5 lá. Fuair ​​an grúpa dáileog ard, measartha nó íseal CDOanna 10{{10}}, 50, nó 25 mg/kg/BW CDO, faoi seach; agus instealladh 0.5ml saline sa ghrúpa rialaithe. Ar an seachtú lá rinneadh turgnamh imréitigh cáithníní carbóin, de réir Hou [24], agus rinneadh an t-innéacs spleen agus an t-innéacs thymus a thomhas. Go hachomair, cuireadh dúch India 0.05 mL/10 g/bw isteach i ngach luch tríd an vena caudalis, ansin fuarthas fuil 20μL ón vena orbitalis posterior 3 agus 7 nóiméad tar éis an insteallta. Cuireadh na samplaí fola i bhfeadáin le 2mL 0.1 faoin gcéad Na2CO3, agus tomhaiseadh luachanna OD ag 600 nm. Ríomhadh an t-innéacs imréitigh (K), an t-innéacs phagocytic ( ), agus an t-innéacs orgán imdhíonachta mar seo a leanas(1), ciallaíonn t2 agus t1 7 nóiméad agus 3 nóiméad faoi seach.

2.5.2. Iomadú cille a tháirgeann antasubstaintí

Rinneadh grúpaí de lucha Kunming (cúigear in aghaidh an ghrúpa) a imdhíonadh trí instealladh intraperitoneal de 2 x 107 SRBC i 1.0 ml de PBS a cuireadh leis le 50ug d’ábhair tástála (níl aon cheann sa rialú). Seachtain ina dhiaidh sin, saothraíodh splenocytes (106 cealla in aghaidh 2 ml in aghaidh an tobair) ó lucha Kunming le hábhair tástála nó gan iad ar feadh 72 h i meán 10 faoin gcéad RPMI 1640 faoi 5 faoin gcéad CO2 san aer, i dtríarach do gach cultúr. Socraíodh líon na PFC i gcoinne SRBC in aghaidh an 106 splenocytes [25], [26].

2.6. Anailís staitistiúil

Cuireadh na sonraí in iúl mar mheánluachanna ±SD. Rinneadh anailís ar an difríocht idir grúpaí a ndearnadh tástáil orthu agus rialú ag t-thástáil an Mhic Léinn. Measadh go raibh P < 0.05="">

3. Torthaí agus Plé

3.1. Aonrú agus íonú olagaishiúicrídí

Rinneadh CDO a leithlisiú ó eastóscadh alcaile na gcorp triomaithe C. deserticola le toradh 3.07 faoin gcéad . Rinneadh dhá chodán de CDOS-1 agus CDOS-2 a leithlisiú ó mhionlach an uisce driogtha ag an gcolún Sephadex G-100, faoi seach (Fíor 1). Léirigh na codáin íonaithe de CDOS-1 agus CDOS-2 buaic amháin ar an gcolún Sephadex G-25, rud a thugann le fios nach raibh olagaishiúicrídí ar bith eile i láthair sa sampla. Thaispeáin torthaí cumadóireachta monaisiúicríde nach raibh CDOS-1 comhdhéanta ach de shiúcrós (Fíor 2) agus CDOS-2 comhdhéanta den chuid is mó de shiúcrós, rhamnose, agus mannitol (Fig.3), le cóimheas caochÚn de 1:0.73:3.61.

3.2. Gníomhaíochtaí Imdhíon-bhitheolaíocha na CDO

Léirigh go leor fianaise in vivo agus in vitro gur léirigh olagaishiúicrídí nádúrtha feidhm imdhíonmhodúil trí spreagadh ceallach agus greannacht araon.imdhíonach freagraí[27], [28]. Sa pháipéar seo, mhéadaigh 100 mg/kg/BW CDOs an t-innéacs spleen luiche, ach ní raibh aon difríochtaí suntasacha san innéacs thymus idir na grúpaí cóireáilte agus na grúpaí rialaithe (Tábla 1). Is comhpháirt thábhachtach de chosaintí óstaigh iad macrophages i gcoinne ionfhabhtú víreasach trí mhacasamhlú intracellular víreas a chosc agus trí chealla atá ionfhabhtaithe le víreas a mharú [29]. Nuair a dhéantar iad a ghníomhachtú, scaoiltear éagsúlacht idirmheánacha ocsaigine nó nítrigine agus cytokines ó macrophages agus páirt a ghlacadh i bhfeidhmeanna tábhachtacha bitheolaíocha éagsúla, amhail gníomhaíochtaí frith-athlastacha agus frith-meall [30]-[32]. Dá bhrí sin, tá gníomhaíocht phagocytic macrophages ina tháscaire tábhachtach ar fheidhmeanna imdhíonachta an orgánaigh. Sa staidéar seo, mhéadaigh dáileoga measartha agus ard CDO gníomhaíocht phagocytosis macrophages (Tábla1). Rinneadh staidéar ar iomadú cille a tháirgeann antasubstaintí arna tharlú ag CDOanna trí scrúdú a dhéanamh ar an méadú ar PFC hemolytic i spleens lucha Kunming a imdhíonadh le SRBC móide an t-eiseamal tástála. Léirigh na torthaí go gcuireann dáileoga measartha agus ard CDO go mór le iomadú cille a tháirgeann antasubstaintí (Tábla 2). Tháinig méadú an-suntasach ar chomhaireamh PFC (P < 0.01)="" de="" bharr="" dáileoga="" arda="">

Tagairtí

[1] J. Li, Y. Jiang, R. Fan. Aitheantas Comhartha Bitheolaíochta Measctha Bunaithe ar Anailís Wavelet. I: Y. Jiang, et al (eagráin). Proc. Ceardlann Innealtóireachta Spóirt RA-tSín. Learpholl: Aontas Acadúil an Domhain. 2007, lch. 1-8.

[2] J. Ouyang, XD Wang, B. Zhao, et al. Éifeachtaí eilimintí tearc-chré ar fhás cealla Cistanche deserticola agus táirgeadh gliocóisídí feinileatánóideach. JB i-teicneolaíocht, 2003, 102 (2) : 129-134

[3] Xu Zhaohui, Yang Junshan, Lu Ruimian, et al. Táirge nádúrtha nua ó Cistanche deserticola YCMA. Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences, 1999, 8(2):61-63.

[4] X. Wang, L. Li, Muhuyati, X. Wanag, N. Du. Gníomh frith-ocsaídiúcháin de gliocóisídí Cistanche i bhfíochán lucha. Zhongguo Zhong Yao Za Zhi. 1998, 23(9):554-5.

[5] Lin LW, Hsieh MT, Tsai FH, Wang WH, Wu CRAnti-nociceptive agus gníomhaíocht frith-athlastach de bharr Cistanche deserticola i creimirí. J Eitnopharmacol. 2002, 83(3):177-82.

[6] Choi, JG; gealach, M; Jeong, HU; Kim, MC; Kim, SY; Ó, cuireann MS Cistanches Herba le foghlaim agus le cuimhne trí fhachtóir fáis nerve a aslú. Taighde Inchinn Iompraíochta. 2011, 216 (2): 652–8.

[7] Zong G, He W, Wu G, Chen M, Shen X, Shi M. Comparáid idir Cistanche deserticola YC Ma agus C, tubulosa (Shenk) Wight ar roinnt gníomhartha cógaseolaíochta.Zhongguo Zhong Yao Za Zhi. 1996, 21(7):436-7.

[8] He W, Shu XF, Zeng GZ, et al . Staidéar a fheabhsú potency gnéas de C. deserticola. J Chin Med.1996, 21(9): 534- 537.

[9] Zeng GZ, He W, Wu GL, et al. Comparáidí idir Cistanche deserticola YC Ma agus C.tubulosa meáchan ar roinnt gníomhartha cógaseolaíochta. J Chin Med. 1996, 21(7): 436-438.

[10] Zeng QL, Zheng YF, Lu ZL Éifeachtaí imdhíonachta polaisiúicríd de Cistanche deserticola YC Ma. J Zhejiang Univ, Med Sci. 2002, 31(4): 284- 287.

[11] Li Yuan, Amhrán Yuanyuan, Zhang Hongquan. Dul chun cinn i dTaighde ar Chomhábhair Cheimiceacha agus ar Ghníomhaíocht Íocshláinte na Cistéise. Acmhainní Plandaí Fiáin na Síne, 2010, 29(1):7-11.

[12] Du NS, Wang H, Yi YH. Leithlisiú agus sainaithint gliocóisídí feinileatánóideach ó Cistanche deserticola. Nat Prod T & F, 1993, 5(4): 5- 8.

[13] Lu NS, Liu JL gliocóisídí feinileatánóideach i bhfásach Cistanche a chinneadh trí roisín reticular-speictreafótaiméadracht. Nat Prod T & F, 1993, 5(3): 30-33.

[14]             Xiong QB, Tezuka Y, Kaneko T, et al. Cosc ar ocsaíd nítreach ag feinileatánóidí i macrófaigí gníomhachtaithe.

European Journal of Pharmacology, 2000, 400: 137- 144.

[15] Zhao Wei, Yan Hong, Liang Zhong-Yan, et al. Anailís Struchtúrtha ar SPA Polaisiúicríd Intuaslagtha in Uisce Scoite ó Ghas an Cistanche Deserticola Ma. Iris Cheimiceach Ollscoileanna na Síne, 2005, 26(3):461-463.

[16] Wang Xiangyan. Staidéar ar chógaseolaíocht imdhíonachta agus carachtar ionsú na polaisiúicrídí de Cistanche deserticola. 2011, Uimh.S1, Leigheas agus Eolaíochtaí Sláinte, E057-235-1-70.

[17] Xiong Q, Hase K, Tezuka Y, Tani T, Namba T, Kadota S. Gníomhaíocht hepatoprotective de phenylethanoids ó Cistanche deserticola. Planta Med. 1998, 64(2):120-5.

[18] Lámhleabhar Amaláis agus Einsímí Gaolmhara (in eagar ag The Amylase Research Society of Japan), Pergamon Press (1988)

[19] Araya, S. (eag.) Imeachtaí an 5ú Comhdháil ar Caries Fiaclóireachta agus Siúcra Cúplála (sa tSeapáinis), An Institiúid Náisiúnta Sláinte, Tóiceo (1980)

[20] Kodo Otaka. Oligosaccharide Feidhmeach agus a Ghné Nua mar Mhodhnú Imdhíonachta. J. Biol. Macromol. 2006, 6(1), 3-9.

[21] Navarini L, Gilli R, Gombac V, Abtangelo A, Bosco M, Toffanin R. Polaisiúicrídí ó eastóscáin uisce te de pónairí Coffea arabica rósta: Leithlisiú agus tréithriú. Carbaihiodráit. Polaim.1999, 40:71–81.

[22] Dubois M, Gilles KA, Hamilton JK, Rebers PA, Smith F. Modh dathmhéadrach chun siúcraí agus substaintí gaolmhara a chinneadh. Anal. Ceimic. 1956, 28:350–356.

[23] Yang X, Zhao Y, Wang Q, Wang H, Mei Q. Anailís ar na comhpháirteanna monaisiúicríde i polaisiúicrídí Angelica ag crómatagrafaíocht leacht ardfheidhmíochta. Sci Anal. 2005, 21:1177–1180.

[24]             Yufang Hou, Yubao Hou, Liu Yanyan, et al. Eastóscadh agus Íonú Leictin ó Pónaire Duán Dearg agus Staidéir ar Fheidhmeanna Imdhíonachta Réamh-Imdhíonachta ar an Leictin agus ar na Ceithre Pholaisiúicrídí Luibhe Síneacha. Iris na Bithleighis agus na Biteicneolaíochta, 2010:1-9.

[25] Cunningham, AJ, agus A. Szenberg. Feabhsuithe breise ar an teicníc plaic chun cealla aonair a fhoirmíonn antasubstaintí a bhrath. Imdhíoneolaíocht.1968, 14:599-600.

[26]             Haruhiko Takada, Tomohiko Ogawa, Fuminobu Yoshimura, et al. Gníomhaíochtaí Imdhíon-bhitheolaíocha Codán Porin Scoite ó Fusobacterium nucleatum ATCC 10953 [J]. Ionfhabhtú agus Díolúine. 1988, 56(4): 855-863.

[27] Wang MQ, Guilbert LJ, Ling L, Li J, Wu YQ, Xu SR, Pang P, Shan JJ Gníomhaíocht imdhíonta CVT- E002: sliocht dílseánaigh ó ginseng Mheiriceá Thuaidh (Panax quinque folium). J Pharm Pharmacol.2001, 53:1515–1523.

[28]             Nergard CS, Kiyohara H, Reynolds JC, Thomas-Oates JE, Matsumoto T, Yamada H, Patel T, Petersen D, Michaelsen TE, Diallo D, Paulsen BS Struchtúir agus caidrimh struchtúr-ghníomhaíochta de thrí mitogenic agus comhlánú-shocrú arabinogalactans peictic ó na plandaí antiulcer Malian Cochlospermum tinctorium A. Rich agus Vernonia kotschyana Sch Bip. sean Walp. Bithmacromóilíní. 2006, 7:71–79.

[29] E.—M. Choi, A.-J. Kim, Y.-O. Kim, agus J.-K. Hwang, Gníomhaíocht imdhíonta Arabach Arabinogalactan agus Fucoidan in vitro. Iris Bia Íocshláinte. 2005, 8(4):446–453.

[30] Y. Chen, J.-A. Duan, D. Qian, et al. Measúnú agus comparáid a dhéanamh ar ghníomhaíocht imdhíon-rialaithe ceithre chodán hidrea-intuaslagtha de Angelica Sinensis in vitro ar na macrophages peritoneal i lucha ICR. Imdhíon-chógaiseolaíocht Idirnáisiúnta. 2010, 10:422–430.

[31] YS Lee, OK Han, CW Park, et al. Léiriú géine cítocine pro-athlastach agus rialáil ocsaíd nítreach ar radix Astragali uiscíoch i gcealla macrophage RAW 264.7. Journal of Ethnopharmacology. 2005, 100(3): 289–294.

[32] KY Lee agus YJ Jeon. Spreagann polaisiúicríd atá scoite amach ó sclerotium Poria cocos gníomhachtú NF-κB/ Rel agus léiriú iNOS i macraphages murine. Imdhíon-chógaiseolaíocht Idirnáisiúnta. 2003, 3(10-11):1353–1362.