HRMS UPLC-Q-Orbitrap in éineacht le Áit Mhóilíneach chun Imscrúdú a dhéanamh ar Bhunús Ábhar Blas Searbh agus Gaol Éifeacht Blas i Cistanchia Desertica ⅱ
Dec 18, 2024
2 mhodh agus torthaí
2.1 Sainaithint Substaintí Cistanche Deserticola
2.1.1 UPLC-Q-Oritrap HRMS Coinníollacha Braite Coinníollacha Crómatagrafaíochta:
Colún phenomenex kinetex c18 (2.1 mm × 1 0 0 mm, 2.6 μm); Céim soghluaiste A (céim uiscí, ina bhfuil 0.1% aigéad aicéiteach), b (isopropanol-acetonitrile 1: 1), díbirt grádáin ({{{11} min, 1% B; 1-8 min, 1% {{}}% B; 99% -1% b; ráta sreafa 0.2 ml · min {-1; teocht an cholúin 30 céim; toirt insteallta 2 μl.
Coinníollacha mais -speictriméadrachta: Baineadh úsáid as mais -speictriméadar Orbitrap Exproris 120 chun sonraí mais -speictriméadrachta príomhúla agus tánaisteacha a bhailiú faoi rialú bogearraí (Thermo Scientific Xcalibur Software, leagan: 4.4). Ba é an voltas spraeála 3.8 kV (dearfach) nó {-3. 4 kV (diúltach), ba é an teocht foinse ian ná 320 céim, ba é an ráta sreafa gáis 50 ARB, ba é an ráta sreafa gáis cúnta ná 15 ARB, agus ba é an teocht feadán aistrithe ian 320 céim. Ba é an modh scanála scanadh iomlán/scanadh tánaisteach a bhí ag brath ar shonraí (MS/DD-MS2 iomlán), ba é an rún príomhúil ná 60 000, ba é an réiteach tánaisteach ná 15 000, ba é an raon scanadh ian m/z100 ~ 1 500, agus bhí an gráinniú fuinnimh imbhuailte 20, 30, 40, 40.
Ábhair Cistanche ardcháilíochta le níos airdeEchinacoside, verbascoside, tubuloside A, glycoside isoverbaceous
2.1.2 Réiteach tagartha a ullmhú
Méideanna cuí deEchinacoside, verbascoside, tubuloside A, glycoside isoverbaceous, gentianoside, agus substaintí tagartha geniposide, cuir 50% meatánól leis chun tuaslagán tagartha measctha a dhéanamh le tiúchan maise de 500 ng · ml {-1, croith go maith, agus faigh.
2.1.3 Réiteach Tástála a Ullmhú
Meáchan 1. 0 g de phúdar samplach (M1) a bailíodh san earrach agus 1. r · min {-1 ar feadh 10 nóiméad, agus scagaire chun sliocht alcóil de Cistanche Deserticola a fháil.
2.1.4 Substaintí a aithint
Trí chomparáid a dhéanamh idir na sonraí faisnéise mais -speictriméadrachta príomhúla agus tánaisteacha de gach sampla Cistanche Deserticola, agus ábhair ábhartha litríochta agus tagartha a chomhcheangal, aithníodh go bhfuil 69 comhpháirt cheimiceach i gcoitinn i samplaí difriúla de Cistanche Deserticola, féach Tábla 2, agus léirítear an léaráid iomlán sreafa ian de Cistanche Deserticola i bhFíor 2.
Tábla 2 Comhpháirteanna Sleachta Cistanche Deserticola Aithníodh bunaithe ar HRMS UPLC-Q-Orbitrap HRMS
| . | Comhdhúil | Foirmle mhóilíneach | Luach tomhaiste (m/z) | Earráid (× 10⁻⁶) | Modh ian | Ian blúire | Tíopáil |
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 0.02 | Isomenthone | C₁₀H₁₈O | 223.06 | -8.7 | [M + H]⁺ | 223.06, 207.02, 137.02 | Monoterpenoids |
| 0.57 | Úireacha | C₄H₄N₂O₂ | 157.04 | 1.8 | [M + H]⁺ | 157.03, 59.02, 49.01 | Nach iad |
| 0.67 | Glucosamine | C₆h₁₃no₅ | 195.05 | 1.1 | [M + H]⁺ | 75.01, 195.05, 59.01 | Carbaihiodráití |
| 0.68 | Galactosamine | C₆h₁₃no₅ | 181.07 | 1.1 | [M + H]⁺ | 181.07, 71.01, 89.02 | Carbaihiodráití |
| 0.81 | Aigéad Caprylic | C₈H₁₆O₂ | 144.11 | 1.0 | [M + H]⁺ | 104.11, 103.08, 87.03 | Nach iad |
| 0.83 | L - Aigéad Aspartach | C₄h₇no₄ | 132.03 | 0.7 | [M + H]⁺ | 132.03, 115.00, 71.01 | Aimínaigéid |
| 0.97 | Aicéatáit eitile | C₄H₈O₂ | 198.19 | 1.4 | [M + H]⁺ | 197.02, 54.02, 153.02 | Nach iad |
| 0.98 | Aigéad maliceach | C₄H₆O₅ | 155.00 | 0.0 | [M + H]⁺ | 111.00, 49.00, 68.99 | Aigéid orgánacha |
| 0.99 | D - Galactós | C₆H₁₂O₆ | 180.16 | 1.1 | [M + H]⁺ | 179.06, 89.02, 59.01 | Carbaihiodráití |
| 1.00 | L - Aigéad glutamic | C₅h₉no₄ | 188.09 | -0.4 | [M + H]⁺ | 118.09, 119.09, 72.08 | Aimínaigéid |
| 1.01 | L - Isoleucine | C₆h₁₃no₂ | 132.10 | -0.9 | [M + H]⁺ | 132.10, 86.03, 115.07 | Aimínaigéid |
| 1.05 | Glicín | C₂h₅no₂ | 182.08 | -0.9 | [M + H]⁺ | 182.08, 95.04, 29.03 | Aimínaigéid |
| 1.48 | Fual | C₉H₁₂N₂O₆ | 243.06 | 0.3 | [M + H]⁺ | 243.06, 103.01, 102.10 | Nucleosides |
| 1.93 | Meitil D - iaidíd | C₂H₅I | 131.03 | 0.0 | [M + H]⁺ | 131.03, 59.00, 41.01 | Nach iad |
| 2.29 | Narú | C₂₇H₃₂O₁₄ | 345.12 | 3.2 | [M + H]⁺ | 345.12, 327.11, 147.05 | Flavonoids |
| 3.29 | Aigéad protocatechuic | C₇H₆O₄ | 153.02 | 1.1 | [M + H]⁺ | 153.02, 109.02, 41.00 | Aigéid feanólacha |
| 3.46 | Trí thró -contanól | C₃₀H₆₂O | 445.10 | 2.7 | [M + H]⁺ | 445.10, 271.08, 101.00 | Alcaúnach |
| 3.47 | Kaempferol - 3 - o - Glucoside | C₂₁H₂₀O₁₁ | 373.11 | 2.3 | [M + H]⁺ | 123.01, 149.06, 167.07 | Flavonoids |
| 3.48 | Quercetin | C₁₅H₁₀O₇ | 109.03 | 0.6 | [M + H]⁺ | 109.03, 79.05, 77.03 | Flavonoids |
| 3.66 | Aigéad clóraigineach | C₁₆H₁₈O₉ | 375.09 | -0.7 | [M + H]⁺ | 375.11, 359.07, 309.03 | Aigéid feanólacha |
| 3.70 | Aigéad spinóideach | C₉H₈O₂ | 347.13 | 4.1 | [M + H]⁺ | 347.13, 181.09, 113.07 | Aigéid feanólacha |
| 3.74 | {8 - epigallocatechin - 3 - Gallate | C₂₂H₁₈O₁₁ | 315.37 | 13.6 | [M + H]⁺ | 315.37, 136.05, 103.04 | Flavonoids |
| 3.76 | Limnachéin | C₁₀H₁₆ | 163.04 | 0.2 | [M + H]⁺ | 163.04, 93.07, 62.03 | Monoterpenoids |
| 3.77 | Hesperidin | C₂₈H₃₄O₁₅ | 299.11 | -1.9 | [M + H]⁺ | 299.11, 181.08, 101.04 | Flavonoids |
| 3.91 | Vanillin | C₈H₈O₃ | 307.81 | 3.8 | [M + H]⁺ | 307.83, 173.03, 149.02 | Aigéid feanólacha |
| 4.11 | Isoquercitrin | C₂₁H₂₀O₁₂ | 419.13 | 4.1 | [M + H]⁺ | 419.13, 149.02, 101.00 | Flavonoids |
| 4.21 | Meitilphenidate isopropyl | C₁₄h₂₁no₂ | 221.08 | -0.8 | [M + H]⁺ | 221.08, 205.09, 104.00 | Nach iad |
| 4.22 | Aigéad steallaice | C₉H₁₀O₅ | 785.25 | 1.4 | [M + H]⁺ | 785.25, 663.21, 661.19 | Aigéid feanólacha |
| 4.30 | Eugenol | C₁₀H₁₂O₂ | 179.04 | 0.2 | [M + H]⁺ | 179.04, 153.03, 113.03 | Aigéid feanólacha |
| 4.40 | Caiféin | C₈H₁₀N₄O₂ | 769.26 | 1.4 | [M + H]⁺ | 769.26, 629.24, 622.14 | Alcalóidigh |
| 4.43 | Chrysin | C₁₅H₁₀O₄ | 442.05 | 1.1 | [M + H]⁺ | 442.05, 173.03, 113.03 | Flavonoids |
2.2 Scagadh Áis Mhóilíneach ar Substaintí Searbh i Cistanche Deserticola
2.2.1 Bunachar Sonraí ligand a thógáil
De réir na gcomhpháirteanna ceimiceacha de Cistanche Deserticola a aithníodh i 2.1.4, íoslódáladh a struchtúir SDF ó bhunachar sonraí PubChem chun leabharlann cumaisc mhóilín beag ligand a bhunú. Rinneadh gach móilíní beag ligand a uasmhéadú go struchtúrtha ag baint úsáide as an gclár meicnic mhóilíneach a íoslaghdú.
2.2.2 gabhdóirí searbh a roghnú
Tá an gabhdóir blas searbh (TAS2R) ina bhall den teaghlach GPCRS agus déanann sé idirghabháil ar an bpróiseas braistint blas searbh a bhaineann le blas cealla blas ar an teanga. Tá 25 fotheideal gabhdóra ann. Ina measc, is féidir TAS2R1, TAS2R7, TAS2R8, agus TAS2R14 a ghníomhachtú le héagsúlacht substaintí searbh agus baineann siad leis na gabhdóirí braistint searbh speictream leathan [{{11}]. Dá bhrí sin, roghnaigh an staidéar seo TAS2R1, TAS2R7, TAS2R8, agus TAS2R14 próitéiní gabhdóra blas searbh le haghaidh duga le comhpháirteanna ceimiceacha Cistanche Deserticola, agus fuarthas an struchtúr criostail próitéine searbh ón mbunachar sonraí ALCACHAFOLD.
2.2.3 Áirse Mhóilíneach
Baineadh úsáid as an gcomhpháirt cheimiceach de Cistanche Deserticola a d'aithin HRMS UPLC-Q-Orbitrap mar ligand, agus baineadh úsáid as na fotheidil ghabhdóra blas searbh TAS2R1, TAS2R7, TAS2R8, agus TAS2R14 mar ghabhdóirí próitéine. Rinneadh an t -ábhar móilíneach ag baint úsáide as bogearraí Autodock Vina. Dá lú an scór Áirithe, is amhlaidh is fearr an fuinneamh ceangailteach. Rinneadh an próitéin ghabhdóra a réamhphróiseáil roimh ré ag baint úsáide as uirlisí duga uathoibríoch (ADT), lena n-áirítear díhiodráitiú agus hidriginiú. Próiseáladh an ligand freisin ag baint úsáide as ADT, lena n -áirítear hidriginiú, ríomh muirir, braite, agus roghnú na mbannaí inúsáidte. Socraíodh suíomh gníomhach an ghabhdóra ag baint úsáide as ADT, agus socraíodh an bosca duga chun a chinntiú go raibh méid an bhosca leordhóthanach chun an suíomh gníomhach a bheith ann. Tar éis an t -ábhar a chríochnú, baineadh úsáid as na bogearraí léirshamhlaithe Pymol chun na torthaí duga a fheiceáil agus a anailísiú. D'fhonn na torthaí dearfacha bréagacha a bhaineann le duga mhóilíneach a laghdú, d'úsáid an staidéar seo an scór duga de chuinín ligand dearfach searbh mar an critéar scagthástála agus na comhpháirteanna ceimiceacha roghnaithe a cheanglaíonn go maith le dhá ghabhdóir searbh ar a laghad mar shubstaintí searbh Cistanche Deserticola. Mar thoradh air sin, ba shubstaintí searbh ionchasacha iad 20 comhpháirt cheimiceacha, lena n -áirítear 6 gliocóisídí phenylethanoid, 5 flavonoids, 3 aigéad feanólach, 2 terpenes éitear cyclopentadiene, 2 alcalóideach agus 2 chomhpháirt eile, ag léiriú go bhfuil glycosides feinilitéiní agus flavonoidss ina bpríomhshuitíní. Taispeántar na scóir Áirithe i dTábla 3.
Tábla 3 Scóir Árthais Mhóilíneach de Shubeanna Searbh Searbh Sleachta Cistanche Deserticola le gabhdóirí blas searbh kcal · mol -1
| . | Substaint searbh | TAS2R1 | TAS2R7 | TAS2R8 | TAS2R14 |
|---|---|---|---|---|---|
| 1 | Prunasin | -7.6 | -6.6 | -7.8 | -7.1 |
| 2 | Trifolirhizin | -8.8 | -7 | -8.7 | -8.5 |
| 3 | Aigéad beansóch | -7.9 | -6.9 | -8.2 | -7.1 |
| 4 | Vitexin | -7.6 | -6.8 | -8.5 | -7.1 |
| 5 | Trifolin | -8.4 | -7.5 | -8.2 | -7.7 |
| 6 | Isoquercitrin | -9.2 | -7.5 | -8.1 | -7.8 |
| 7 | Isomenthone | -7.3 | -6.7 | -7.4 | -6.9 |
| 8 | Curcumin | -9.2 | -8.1 | -8.3 | -7.4 |
| 9 | Aigéad dehydroacetic | -6.6 | -6 | -7.8 | -7.9 |
| 10 | Ginsenoside | -7.3 | -7.9 | -8.8 | -8.3 |
| 11 | Píobéirín | -8.8 | -7.9 | -7.9 | -7.9 |
| 12 | Epicatechin | -9.8 | -6.9 | -9.1 | -8.7 |
| 13 | Isoquercitrin (arís) | -8.1 | -8 | -8.2 | -8 |
| 14 | Retach | -8.7 | -7 | -8.9 | -8.5 |
| 15 | Aigéad isosalicylic | -8.7 | -6.5 | -8.3 | -9.3 |
| 16 | Pinacembrin | -9.1 | -7.6 | -8.1 | -8.6 |
| 17 | Eiriocitrin | -7.9 | -7.6 | -8.2 | -8.4 |
| 18 | Genistin | -8.1 | -8.2 | -9.1 | -8.2 |
| 19 | Kaempferol | -8.4 | -8.1 | -9.1 | -8.4 |
| 20 | Isoquercitrin (an tríú lua) | -8.2 | -8.4 | -7.9 | -8.7 |
2.3 Meastóireacht teanga leictreonach ar searbhas Cistanche Deserticola
2.3.1 Fáil Comharthaí
Déan tagairt don mhodh litríochta agus déan é a bharrfheabhsú [16]. Is iad na paraiméadair ná: Teocht Bailiúcháin 25 Céim, Am Bailiú Sonraí 120 s, Tréimhse Bailiúcháin 1 s, luas a chasadh 1 r · S -1, ag baint úsáide as uisce ultrapure mar an sreabhán glantacháin, sula nglan gach tomhas samplach an braiteoir ar feadh 10 soicind.
2.3.2 Cinneadh Samplach
Meáigh 1. Cuir an sampla ullmhaithe isteach in eascra caighdeánach 100 ml den ionstraim agus déan an tomhas. Déan an tomhas arís trí huaire do gach sampla.
2.3.3 Torthaí meastóireachta searbhas ag baint úsáide as teanga leictreonach
Tar éis cigireachta modheolaíochta, bhí an diall caighdeánach coibhneasta (RSD) den chruinneas, den in -atrialltacht, agus {{{0}} h 1.7%, 3.6%, agus 1.4%faoi seach, níos lú ná 5.0%, ag léiriú go bhfuil an modh seo indéanta. Bhí na luachanna searbhas cainníochtúla de shamplaí difriúla Cistanche Deserticola idir 8.856 agus 27.32, mar a thaispeántar i dTábla 4, le difríochtaí suntasacha.
3 Plé
Sa staidéar seo, aithníodh 69 comhpháirt cheimiceacha i Cistanche Deserticola ag baint úsáide as teicneolaíocht HRMS UPLC-Q-Orbitrap, agus rinneadh scagadh amach ar 20 substaint searbh a spreagann gabhdóirí blas searbh i Cistanche deserticola trí theicneolaíocht dumha mhóilíneach a chomhcheangal, 2 aigneoids fenidoids, 2 aigneoids feinylethanol, 2 aigneoids fenidoids, 2 fenidoids fenidoids, feinitídí feinitea-fhiacla, 3 fhlathanach, 2 aigneoids feinitea-fhiadhúile, 2 fenidoids fenidoids, i dtréimhse feinitídí feinitea-fhíolta, 2, i n-aigéad feinitídí, 2 fhiyythanol, 2 ghlycosids, i dteicneolaíocht fhlathanach, 2 ghliceasóga flavonoids, alcalóidigh agus 2 chomhpháirt eile, lena n -áirítear echinacoside, verbascoside, tubuloside A, isoverboscoside, geniposide, etc.; Bailíodh agus roinn siad 9 mbaisc de shamplaí úra Cistanche Deserticola ón mbunús céanna i míonna éagsúla agus roinn siad i míonna éagsúla agus i gcodanna éagsúla. Baineadh úsáid as an modh teanga leictreonach chun luach cainníochtúil searbhas na samplaí a chinneadh, agus baineadh úsáid as HPLC chun na 6 chomhpháirt cógaseolaíochta searbh a d'fhéadfadh a bheith ann (echinacoside, verbascoside, tubuloside) sna samplaí. Baineadh úsáid as ábhar A, iso-verbascoside, jinshicanoside, geniposide), agus speictreafótaiméadracht UV-infheicthe chun na gliocóisídí phenylethanoid iomlán, na polaisiúicrídí iomlána, na alcalóidigh iomlána, na flavonoids iomlána, agus an t-ábhar aigéad feanólach iomlán sna samplaí sna samplaí a chinneadh. Ar an mbonn seo, in éineacht le hanailís cheimiméadrach, baineadh úsáid as anailís comhghaoil Pearson, anailís ar chomhghaol liath, OPLS-DA, etc. chun na comhpháirteanna searbh i Cistanche Deserticola a aimsiú. Léirigh torthaí na hanailíse comhghaoil go raibh comhghaol dearfach idir an t -ábhar a bhaineann le gliocóisídí phenylethanoid iomlán agus flavonoids iomlána i Cistanche Deserticola agus an luach freagartha searbh, agus go raibh comhghaol diúltach ag polaisiúicrídí iomlána Cistanche Deserticola leis an luach freagartha critter. Ina measc, bhí an t -ábhar a bhaineann le comhpháirteanna gliocóisíd feinilítéitíd echinacoside, verbascoside, agus Jinshicanoside comhghaolaithe go dearfach leis an luach freagartha searbh, a bhí ag teacht leis na torthaí duga móilíneacha, ag fíorú cruinneas na dtorthaí móilíneach. Thacaigh an dá mhodh lena chéile agus thug siad tagairt do cheartú agus blas a cheartú ina dhiaidh sin ar Cistanche Deserticola.
Trí thuar cógaseolaíochta líonra, fuarthas 245 sprioc substaintí searbh, agus ba iad na príomhspriocanna ná EGFR, PIK3CB, PTK2, PIK3CD, PIK3R1, PTPN11, IK3CA, SRC, JAK2, PDGFRB, etc.; Léirigh torthaí saibhrithe an chosáin Kegg agus an fheidhmeanna go bhfuil na spriocanna substaintí searbh go raibh friotaíocht insline, ról chonair chomharthaíochta PI3K-AKT i ndeacrachtaí diaibéitis, agus cosán comharthaíochta agr-rage i ndeacrachtaí diaibéitis na príomhbhealaí de na spriocanna substainte searbh de Cistanche Deserticola. Fuarthas 267 feidhm GO san iomlán do na spriocanna substaintí searbh. Lena n -áirítear 123 próiseas bitheolaíoch, 75 feidhm mhóilíneach agus 69 comhpháirt cille; by performing Wayne analysis on the bitter substance targets and the disease targets of the bitter effect of Cistanche deserticola, the results showed that 54.69%, 65.30%, 48.16%, 40.40%, 20.40% and 19.59% of the bitter substance targets may have bitter effects of anti-diabetic nephropathy, neuroprotection, immunomodulation, anti-oxidation, anti-aging and Frith-Osteoporosis. Taispeánann sé seo go bhfuil bonn ábhartha áirithe ag na substaintí searbh i Cistanche Deserticola le haghaidh éifeachtaí searbh.
Sa staidéar seo, baineadh úsáid as an sliocht de Cistanche Deserticola mar an réad taighde, agus scrúdaíodh na substaintí searbh i Cistanche Deserticola ag RMS UPLC-Q-q-orbitrap agus ag duga mhóilíneach; Baineadh úsáid as HPLC chun ábhar na bpríomh-chomhpháirteanna míochaine searbh a chinneadh, agus baineadh úsáid as speictreafótaiméadracht UV-infheicthe chun ábhar gach mórchatagóir de shubstaintí searbh a chinneadh. Baineadh úsáid as an teanga leictreonach chun an méid searbhas a mheas, agus fíoraíodh na comhpháirteanna searbh ag ceimiméadracht. Baineadh úsáid iomlán as modhanna taighde teicniúla nua -aimseartha chun iniúchadh a dhéanamh ar fhaisnéis blas Cistanche Deserticola agus chun a bhonn searbh ábhartha a nochtadh, a thabharfaidh tagairt do cheartú cistanche deserticola ina dhiaidh sin. Trí staidéar a dhéanamh ar chógaseolaíocht líonra, rinneadh iniúchadh roimh ré ar mheicníocht ghníomhaíochta na substaintí searbh i Cistanche Deserticola agus a chaidreamh leis an sprioc éifeachtúlachta searbh, rud a chuirfidh smaointe agus tagairtí ar fáil don staidéar amach anseo ar an gcaidreamh "blas-éifeacht" de na cúig bhlasanna de leigheas na Síne. Mar sin féin, tá roinnt easnamh ann fós: níor roghnaigh an turgnamh seo ach plandaí a bhfuil dea -chaighdeán acu sa séasúr fómhair traidisiúnta chun an t -ábhar substainte searbh agus searbhas na gcodanna éagsúla a thomhas. Tá méid áirithe de mhéid an tsampla neamhleor ann, agus níl iontaofacht áirithe ag torthaí na ndifríochtaí i searbhas na gcodanna éagsúla. Tá sé beartaithe samplaí mórscála a úsáid chun taighde níos córasaí a dhéanamh amach anseo; Creidtear go ginearálta go bhfuil comhpháirteanna alcalóideach searbh, ach léirigh an anailís chomhghaoil ar an turgnamh seo go bhfuil comhghaolú diúltach idir alcalóidigh agus searbhas, a d'fhéadfadh a bheith mar gheall go bhfuil an chomhpháirt alcalóideach i Cistanche Deserticola den chuid is mó, agus léiríonn Áilleacht Mhóilíneach go gceanglaíonn sé go dona le gabhdóirí searbh. Ina theannta sin, níl na torthaí searbh a scrúdaíodh ag duga mhóilíneach ar fáil maidir le meastóireacht chainníochtúil searbhas ar shonraí fíoraithe turgnamhacha, agus d'fhéadfadh go mbeadh rudaí dearfacha bréagacha ag na torthaí scagtha, agus tá gá le tuilleadh taighde agus iniúchadh ar an turgnamh.
