Caibidil 5 Athruithe ar ghníomhaíocht einsím le linn coipeadh einsímí

Caibidil 5 Athruithe ar ghníomhaíocht einsím le linn coipeadh einsímí

 

Protease, lipase agusDismutase superoxide (SOD)is iad na príomh -einsímí feidhmiúla deBianna sláinte einsím miocróbach. Ina measc,prótoghsáilimríonn ról ian hidrealú próitéine i mbia a chur chun cinni gcorp an duine. Ina theannta sin, is féidir leis roinnt cealla atá ag fáil bháis a dhianscaoileadh, salachar a bhaint ar dhromchla an chraicinn agus ar phiocháin, agus ról a imirt i exfoliation, mar sin úsáidtear go forleathan é i dtáirgí folctha. Feidhmíonn Lipase ar an mbanna eistir idir aigéid shailleacha agus gliocról, agus is olaí nádúrtha é an tsubstráit hidrealú go ginearálta. Dá bhrí sin, feictear é i go leor bianna meáchain caillteanas agus táirgí sláinte. Tá go leor ban an -bhuartha faoin ábhar a bhaineann le meáchain caillteanas, agus sin an fáth go bhfuil an -tóir ar einsímí ar fud an domhain.Tá einsímí saibhir i lipase, rud a chiallaíonn go bhfuil luach ard taighde agus ionchais feidhmithe acu.Sádis einsím miotail speisialta í a dhéanann catalaíoch ar imoibriú dí -dhíscaoilteFréamhacha anion superoxide, ar an gcaoi sinFréamhacha anion superoxide a bhaintsa chorp. Is bac cosanta é d'orgánaigh, mar sin úsáidtear go forleathan é sa réimse leighis.
Tógann an chaibidil seo einsím Apple mar shampla. Ag tosú ón gcéad chéim den choipeadh, anGníomhaíochtaí dismutase superoxide.

Luibheanna nua cistanche

Cliceáil chun tuilleadh sonraí a fháil

 

Seirbhís thacúil de Wecistanche-an onnmhaireoir Cistanche is mó sa tSín:
Ríomhphost: wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/Teil: +86 15292862950

 

 

 

 

 

 

5.1 Ábhair agus Modhanna

5.1.1 Ábhair

(1) Ábhair thurgnamhacha

Nigh úlla úra le huisce steiriúil faoi choinníollacha steiriúla, triomaigh iad go nádúrtha ar bhord oibriúcháin steiriúil, scaoil iad, agus slice iad lena n -úsáid níos déanaí. Cuir siúcra bán agus úlla le próca gloine steiriliú ag cóimheas maise de 1: 1. Gníomhaigh na baictéir a theastaíonn don turgnamh agus iad a ionaclú isteach san einsím de réir na scéime is fearr (fágtar an chéim oibríochta seo ar lár don ghrúpa rialaithe), é a shéalú agus é a chur in áit fhuar agus thirim. Tar éis 3 mhí de choipeadh teocht an tseomra, tóg sampla chun an leacht einsím iomlán a fháil ina bhfuil an laíon agus scagaire é. Tóg an supernatant mar an sampla turgnamhach. Tar éis an sampla a lártheifneáil ag 10, {000 rpm ar feadh 15 nóiméad i lártheifneoir ardluais, úsáidtear é chun sonraí ábhartha a thomhas. Is fiú a thabhairt faoi deara go ndearnadh ár n -oibríochtaí go léir faoi choinníollacha steiriúla nuair a dhéantar einsímí a dhéanamh, chun éilliú neamhriachtanach a sheachaint.

(2) Príomh -Ionstraimí
Tá na hionstraimí a theastaíonn don turgnamh mar an gcéanna le 3.1.1 (2).

 

5.1.2 Modhanna

(1) Gníomhaíocht dismutase superoxide (SOD) a chinneadh [66]
Rinneadh an tuaslagán pyrogallol a réamhthéamh i ndabhach uisce teochta tairiseach 25 céim ar feadh tréimhse ama. De réir Tábla 5.1, cuireadh méid cuí maoláin, uisce driogtha agus an méid céanna d'aigéad hidreaclórach nó de thuaslagán pyrogallol leis an bhfeadán tástála. Socraíodh an folcadh uisce teochta tairiseach go 25 céim do 2 {0 min. Tar éis an leacht measctha a chroitheadh ​​go tapa, cuireadh isteach é láithreach sa chuvette. Tomhaiseadh an luach ionsúite A0 den sampla gach 30 soicind ag tonnfhad 325nm ag baint úsáide as speictreafóiméadar.

Tab.5.1 Cuir méid na n -imoibrí feanóil beinséine in aice láimhe leis chun an ráta uath -ocsaídiúcháin a chinneadh

 

Tá an modh chun gníomhaíocht SOD a chinneadh mar an gcéanna leis an oibríocht thuas go bunúsach. Is é an t -aon difríocht ná, sula gcuireann tú pyrogallol leis, {{{{0}}. 5 ml de thuaslagán samplach einsímí de thiúchain éagsúla a chur leis ar dtús. Ag an am céanna, cuirtear an méid céanna d'uisce driogtha leis. Is é ASOD an t -ionsúiteacht tomhaiste. The inhibition rate and SOD enzyme activity are calculated according to formula 5.1 and formula 5.2: Inhibition rate (%)=(△A0-△ASOD)/△A0×100 (5.1) Enzyme activity (U/mL)=inhibition rate/50% × V1/V2×n (5.2) i gcás: is é V1 toirt iomlán an tuaslagáin, ml; Is é V2 toirt an tuaslagáin sampla einsíme, ML; △ Is é A0 an ráta uathoibríoch ocsaídiúcháin pyrogallol; △ Is é ASOD an ráta athraithe ar an luach ionsúite sampla; Is é n an il-chaolú il (2) a chinneadh ar ghníomhaíocht amylase D'úsáid an staidéar seo an modh dathmhéadrach iaidín-réalta chun gníomhaíocht amylase a chinneadh. Tagraíonn na céimeanna sonracha oibríochta don "nós imeachta oibríochta cliniciúil náisiúnta" [67]. Tá sé roinnte den chuid is mó sa dá phointe seo a leanas:

 

① Réiteach a ullmhú
Réiteach stáirse maolánaithe ({{{0}}. 4g/l): 9g de chlóiríd sóidiam a mheá go cruinn, 22.6g de fhosfáit hidrigine ainhidriúil, agus 12.5g de photaisiam ainhidriúil pophasium dihydrogen, tuaslaitear iad i 5 {{{{{{}}}}}}} {} {}}}}} an t -uisce a dhíscaoileadh iad i 5}}}}}}}}}}}}}} boils; Meáigh 0.4g de stáirse intuaslagtha go cruinn, tuaslaig é i 10ml d'uisce driogtha, meascadh go cothrom, agus téann sé i dtaithí ar ghreamú; Instealladh an tuaslagán stáirse arna choigeartú ar ghreamú isteach sa tuaslagán fiuchta thuas, agus nigh an t -eascra arís agus arís eile go dtí go n -aistrítear an stáirse go hiomlán chuig an tuaslagán fiuchta uisce. Tar éis é a chasadh go cothrom le slat ghloine, fuarú go teocht an tseomra, cuir 5ml de thuaslagán formaildéad gruaige 37%, agus caolaigh go 1L le huisce driogtha. Is é luach pH an tuaslagáin ná 7.0 ± 0.1, agus cuirtear é sa chuisneoir le húsáid.
Réiteach Stoc Iaidín (0. 1 mol/L): Meáchan 1.7835g iodate potaisiam agus iaidíd photaisiam 22.5g i 500ml glan i 500ml glan
Cuireann an t -eascra, go mall agus go cothrom 4.5ml aigéad hidreaclórach comhchruinnithe, ag casadh go leanúnach le linn an phróisis bhreise, caolaigh an scála le huisce driogtha, agus corraigh go cothrom. Cuir é sa chuisneoir lena úsáid agus a stóráil i mbuidéal imoibrí donn.
Réiteach Iarratais IODINE ({{0}}.

② Céimeanna oibríochta turgnamhacha
Tóg an tuaslagán einsím agus caolaigh é 10 n -uaire le salanda fiseolaíoch, agus oibrigh de réir Tábla 5.2. Measc go maith, is é tonnfhad an speictreafóiméadar 660nm, agus is é 10mm cosán solais an chupáin dathmhéadrach. Nialas le huisce driogtha agus léigh ionsúiteacht gach feadáin. Ríomh an ghníomhaíocht amylase bunaithe ar an bhfoirmle ríofa bhunúsach 5.3.

 

Tab.5.2 Céimeanna Oibríochta Cinneadh Amylase

 

(3) Gníomhaíocht lipase a chinneadh

Rinneadh an modh cinntithe de réir QB/T {{{0}} [68]. Ullmhaíodh tuaslagán tástála einsím 2% le {0. Ríomhadh an ghníomhaíocht lipase bunaithe ar mhéid na hiodrocsaíde sóidiam a caitheadh ​​sa turgnamh. Is é an riail ná: ag pH de 7.5 agus teocht chomhthimpeallach de 40 céim, déanann 1 ml de thuaslagán einsím leachtach lipase ar feadh 1 nóiméad chun 1 μmol d'aigéad sailleach a tháirgeadh, ar aonad gníomhaíochta lipase amháin é, arna shloinneadh mar U/ml. Ansin, ríomhadh an ghníomhaíocht lipase de réir Foirmle 5.4: gníomhaíocht einsím (u/ml)=(BA) × C/0.05 × 50 × 1/15 × N=200/3 × (ba chaighdeánach) × ML; Is é A an méid de thuaslagán caighdeánach sóidiam hiodrocsaíde a chaitear sa ghrúpa rialaithe bán, ML; Is é C an tiúchan de thuaslagán caighdeánach hiodrocsaíde sóidiam, mol/L; Is é 0.05 an fachtóir tiontaithe i dtiúchan tuaslagáin chaighdeánach hiodrocsaíde sóidiam; Is é 50 an t -ábhar aigéad sailleach de thuaslagán hiodrocsaíde sóidiam; Is é 15 nóiméad an t -am imoibriúcháin; Is é n an iolrú caolaithe.

(4) Gníomhaíocht próitéine a chinneadh

Déan tagairt do GB/T 23527-2009 [69] le modhnuithe beaga.
① Ullmhú cuar caighdeánach
Tóg 1ml de thuaslagán caighdeánach tyrosine le comhchruinnithe éagsúla, arb iad {0, 1 0, 20, 30, 40, agus 50mg/L, agus cuir 5ml de thuaslagán carbónáit sóidiam 0.4mol/L agus 1ml de thuaslagán imoibrithe Folin air. Imoibríonn sé ar feadh 20 nóiméad ag teocht 40 céim. Tar éis don imoibriú a bheith críochnaithe, bain an tuaslagán imoibriúcháin agus tomhais luach ionsúite an tuaslagáin ag tonnfhad 680Nm ag baint úsáide as speictreafóiméadar. Tarraing cuar caighdeánach tyrosine le tiúchan tyrosine mar an ais chothrománach agus an luach ionsúite mar an ais ingearach.

Luibheanna Nua Cistanche le cumhacht láidir antioxidant

② Gníomhaíocht próitéine a chinneadh
Grúpa Turgnamhach: Tóg 1mL de thuaslagán cáiséin le tiúchan de 10 g/L agus déan é a mheascadh go cothrom le 1mL den tuaslagán samplach atá le tástáil, agus imoibríonn sé ar feadh 10min ag teocht chomhthimpeallach de 40 céim; Scagadh agus faigh an scagáit tar éis seasamh, tóg 1ml den scagáit, 5mL de thuaslagán carbónáit sóidiam agus 1mL d'imoirt folin, meascán go cothrom, agus imoibríonn siad ar feadh 20min ag teocht chomhthimpeallach de 40 céim; Bain úsáid as speictreafóiméadar chun luach ionsúite an tuaslagáin a thomhas ag tonnfhad 680nm.
Grúpa Rialaithe Blank: Tóg 1ml den tuaslagán samplach atá le tástáil, cuir aigéad trichloroacetic leis, imoibrigh go hiomlán chun an próitéin a dhíghníomhachtú, agus tá modhanna oibríochta eile mar an gcéanna leis an ngrúpa turgnamhach.

Ríomh an ghníomhaíocht protease de réir Foirmle 5.5:
Gníomhaíocht próitéine (u/ml)=ak × 4/10 (5.5) áit a bhfuil: A an bhfuil an tuaslagán einsím sa ghrúpa turgnamhach; Is é K an méid tyrosine nuair a bhíonn an t -ionsúiteacht cothrom le 1; Is é 4 toirt iomlán an tuaslagáin imoibriúcháin, ml; Is é 10 an t -am imoibriúcháin, min.

(5) Gníomhaíocht ceallalóis a chinneadh [70]

Is iondúil go gcuirtear gníomhaíocht na cellulase in einsímí in iúl de réir an méid glúcóis a scaoiltear le méid áirithe de thuaslagán einsíme in aghaidh an aonaid ama. Is é an prionsabal a bhaineann le modh an pháipéir scagtha a úsáid chun gníomhaíocht ceallalóis a thomhas ná gur féidir le ceallalós ceallalós a dhianscaoileadh sa pháipéar scagtha chun meitibilítí tánaisteacha a tháirgeadh amhail glúcós, agus is féidir le glúcós freagairt le 3, 5- aigéad dinitrosalicylic chun coimpléasc buí a chruthú. Tá dath an imoibriúcháin seo sách geal, ar féidir leis an méid glúcóis agus siúcraí eile a tháirgtear a chinneadh go maith.

 

①3, 5- Gníomhaire dathmhéadrach aigéad dinitrosalicylic
Meáigh go cruinn 1 {0 g de 3, {5- aigéad dinitrosalicylic le leáphointe de chéim 168-169, é a thuaslagadh le huisce driogtha, cuir 20g de hiodrocsaíd sóidiam agus 200g de shóidiam potaisiam, cuir an t -uisce go dtí go bhfuil an t -uisce ag diotú go hiomlán le huisce a dhriogadh le 500m le huisce a dhriogadh le 500m. agus 0.5g de shulfite sóidiam ainhidriúil, corraigh go leanúnach le linn an phróisis bhreise go dtí go ndíscaoiltear go hiomlán é, stop a chur le téamh tar éis é a mheascadh go cothrom, a fhuarú go teocht an tseomra, aistrigh go dtí fleascán toirtmhéadrach 1000ml, caolaigh an marc le huisce driogtha, cuir ag teocht an tseomra ar feadh seachtaine, scagaire, faigh an supernatant, agus stórálann tú i mbuidéal donn.Hydrolysis eenzymatic
Pípéad go cruinn {{0}}, 0. 5, 1. Tar éis 5 nóiméad de folcadh uisce teochta tairiseach ag 40 céim, cuir 6 phíosa de pháipéar scagtha crómatagrafaíochta le achar 1 × 1cm2 faoi seach, agus tosaíonn an t -am láithreach chun an t -am imoibriúcháin a dhéanamh cruinn go 60 nóiméad. Aistrigh láithreach chuig folctha fiuchphointe uisce le haghaidh imoibriúcháin ar feadh 10 nóiméad, agus cailleann an ceallaire a ghníomhaíocht.

 

 

③ Imoibriú datha
Tóg an tuaslagán samplach einsím, cuir 3ml de 3, {5- gníomhaire dathmhéadrach aigéad dinitrosalicylic ullmhaithe i ①, teas i ndabhach uisce fiuchta ar feadh 15 nóiméad, tóg amach, fuaraigh go teocht an tseomra, cuir 10ml d'uisce driogtha, meascadh go cothrom, bain úsáid as speictreafóiméadar agus déanann sé an t -ionbraíocht a thomhas chun a chuid ionbála a thomhas.
④ Cuar caighdeánach glúcóis a tharraingt
Ullmhaigh tuaslagán caighdeánach glúcóis le tiúchan 1mg/ml go cruinn, agus bain úsáid as uisce driogtha chun an tuaslagán caighdeánach glúcóis a dhéanamh le toirt {0, 0. 2, {{{4}. 4, 0. de 3, 5- Gníomhaire dathmhéadrach aigéad dinitrosalicylic ullmhaithe i ① chun imoibriú forbartha datha a dhéanamh. Cuir an cuar caighdeánach le tiúchan glúcóis mar an ais chothrománach agus an t -ionsúiteacht mar an ais ingearach.
⑤Colulation
Bain úsáid as an luach ionsúite le forbairt tar éis datha le tuaslagán einsím, agus ansin ríomh an méid scaoilte glúcóis m de réir an chuar caighdeánach glúcóis, agus ríomh de réir Foirmle 5.6:
Gníomhaíocht Cellulase (u/ ml)=m/ (t · m) (5.6) i gcás: m an méid scaoilte glúcóis, ug; Is é T an t -am hidrealú einsímeach, min; Is é M an t -ábhar einsím san imoibriú, ug/ml.