Athruithe ar Phróifílí Aimínaigéid agus Comhdhúile Bithghníomhacha de Chócúin Shíoda Téalainnis mar a Chuireann Eastóscadh Uisce isteach Cuid 2

Déan teagmháil le do thoiloscar.xiao@wecistanche.comle haghaidh tuilleadh eolais

2.8. Comhghaolta

Baineadh úsáid as anailís chomhghaolaithe (tástáil Pearson) chun comparáidí a dhéanamh (mar chomhéifeachtaí comhghaolaithe,r) i measc agus idir luachanna maidir le hábhar feanólach iomlán, ábhar iomlán flavonoid, gníomhaíocht scavening DPPHradical, ABTS móide , measúnacht FRAP, frith- -amaláis , frith- -glúcosidase, agus frith-ghlication SPE i dtréithchineálacha Nangsew agus Eri (Táblaí 5 agus 6). Léirigh gach paraiméadar a fuarthas ón staidéar comhghaolta dearfacha láidre idir TPC, TFC, DPPH, ABTS, FRAP frith- -amaláis, frith- -glúcosidáis, agus frith-ghlication. B’fhéidir gurb é an fáth atá leis seo ná go bhfuil na comhdhúile bithghníomhacha atá sa sliocht síoda in ann fréamhacha saor in aisce éagsúla agus frith- -amaláis, frith- -glúcóisidáis, agus frithghlication a scaveneáil. Tá sé léirithe ag ár dtorthaí freisin go bhfuil comhghaol líneach an-suntasach idir torthaí don dá shraith. Bhí na torthaí seo ar aon dul leo siúd de Benzie agus Stezo [29], a fuair comhghaol láidir dearfach idir ábhar feanólach iomlán agus measúnacht FRAP. Fuarthas torthaí comhchosúla freisin idir TPC agus DPPH(R2=0.711) agus FRAP (R2=0.948), faoi seach i gourd searbh mar a thuairiscigh Kubola [30]. Kumar et al.[31] rinne sé meastóireacht ar ghníomhaíocht frithocsaídeach agus feanól iomlán i gcineálacha éagsúla duilleoga Lantana Camara. Léirigh na sleachta comhghaolta láidre idir ábhar feanólach agus gníomhaíochtaí scavening DPPH, FRAP, agus ABTS. Fuarthas an comhghaol is airde(r=0.998, R2=0.997) idir an t-ábhar feanólach iomlán agus measúnacht scabhála ABTS. Ina theannta sin, tá comhghaolta dearfacha idir ABTS agus TPC(R2=0.885) agus DPPH(R2=0.999), faoi seach, i nduilleoga Gynura procumbens thuairiscigh Kaewseejan et al. [32].

Fuarthas na comhghaolta idir airíonna bitheolaíocha agus gníomhaíocht choisctheach i dtaighde Quan et al.[33] a rinne imscrúdú ar airíonna coisctheacha frithocsaídeacha agus diaibéitis a d'fhéadfadh a bheith ag sleachta coirt C.tramdenum. Fuair ​​​​a gcuid torthaí amach freisinfrithocsaídeachbhí comhghaolú láidir idir measúnachtaí (lena n-áirítear DPPH, ABTS, cumhacht laghdaitheach, agus ocsaíd nítreach) leis an measúnacht coisctheach -amaláis agus -glucosidase ag p<>

Cliceáil anseo le do thoil chun tuilleadh eolais a fháil

3. Ábhair agus Modhanna 3.1.Silk Coc00ns

Bailíodh cineálacha Nangsew agus Eri de chocúin síoda Téalainnis. Tá anbrú Nangsew(cocún buí)a fuarthas ó Baan Hua Saban, Dúiche Phutthaisong, Buriram Cúige, An Téalainn. Tháinig brú Eri (cocún bán) ó Phobal Nong Ya Plong, Mancha Khiri, Cúige Khon Kaen, An Téalainn.

3.2. Ceimiceáin agus Imoibrithe

Fuarthas na caighdeáin go léir ó Sigma-Aldrich Co. (St. Louis, MO, SAM), lena n-áirítear na aimínaigéid riachtanacha: feiniolalainín, valine,tryptophan, threonine, isoleucine, meitiainín, histidine, arginine, lísín, agus leucine. Ba iad na aimínaigéid neamhriachtanacha a ndearnadh staidéar orthu ná glicín, aigéad glútamach, aigéad aspartic, glutamine, serine, tyrosine, alanine, agus asparagine. Fuarthas na himoibrithe cinnidh gníomhaíochta frithocsaídeacha ó imoibrí Sigma-Aldrich Co:Folin-Ciocalteu, 2, 2-défheinile-1-picrylhydrazyl(DPPH),2,4,6-tripiridyl-s-triazine (TPTZ), 2,2'-agus-bis (3-thylbenzthiazoline-6-aigéad sulfónach)(ABTS). Ceannaíodh na tuaslagóirí agus na himoibrithe a úsáideadh san anailís HPLC ó Merck (Darmstadt, an Ghearmáin). Ceannaíodh an -amaláis (ó Aspergillus oryzae), -Glucosidase (ó Bacillus stearothermophilus), p-nitrophenyl- -D-glucopyranoside (PNP-G), albaimin séiream buaibheach (BSA), agus azíd sóidiam ó Sigma-Aldrich Co.

Is féidir le Cistanche díolúine a fheabhsú

3.3. Eastóscadh le Uisce Driogtha

Baineadh úsáid as an modh deSangwong et al. [34]. Gearradh cocún síoda i bpíosaí beaga. Baineadh dhá ghram de na píosaí seo le 200 ml d'uisce driogtha ag 100 céim le haghaidh na n-amanna eastósctha sonraithe. Lártheifneoiríodh na sleachta ag 5000 × g ar feadh 10 nóiméad trí lártheifneoir (Universal 320/320R, Hettich, Boucherville, QC, Ceanada). Scagadh na sleachta trí pháipéar Whatman Uimh.1 faoi fholús chun ábhar dothuaslagtha a bhaint, rud a tháirgeann an sliocht próitéin síoda (SPE).

3.4. Cinneadh Próitéin

Rinneadh cur síos ar chinneadh próitéine ag measúnacht Bradford [35]. Cuireadh SPE (0.5 mL)le 1.0ml de thuaslagán Bradford agus gor é ag teocht an tseomra ar feadh 5 nóiméad. Baineadh úsáid as albaimin serum bó (BSA) mar phróitéin thagartha chaighdeánach. Rinneadh ionsúchán na samplaí a thomhas ag 595 nm le speictreafótaiméadar infheicthe (Speictrifhótaiméadar Inaistrithe DR 2700rM, Hach, Loveland, CO, SAM).

3.5.Amin0-Inneachar Aigéad le LCMS/MS

Bhain an anailís aimínaigéad le mais-speictriméadar trí-cheathairpholach LC-MS-MS (Shimadzu LCMS-8030), modh ianaithe leictreaspré (ESI), agus anailís ina dhiaidh sin i gcóras Shimadzu HPLC (Shimadzu, Kyoto, an tSeapáin) (Chumroenphat et al. [36). Bhí ráta sreafa de 0.2 mL/nóiméad i gceist le hanailís HPLC; ba é 38 céim an teocht san oigheann colún agus bhí an t-autosampler ag 4 céim. Ullmhaíodh na céimeanna soghluaiste (A) aigéad formach uiscí {{10}}.1 faoin gcéad (o/o) agus (B) an meatánól-uisce (50:50); ansin bhí an meascthóir aigéad formach 0.1 faoin gcéad (o/v). Glanadh an tsnáthaid uathshampler le meatánól roimh asú an tsampla agus ina dhiaidh. Rinneadh na hanailísí faoi thrí.

3.6. Ábhar Feanólach Iomlán (TPC)

Rinneadh anailís ar an ábhar feanólach iomlán sa sliocht próitéin síoda tar éis modh Folin-Ciocalteu [30]. Go hachomair, meascadh 0.3 ml de SPE le 2.25 ml d'imoibrí Folin-Ciocalteu 10 faoin gcéad tuaslagtha in uisce driogtha. Tar éis gor 5 nóiméad, cuireadh 2.25 ml de thuaslagán de charbónáit sóidiam 6 faoin gcéad (NazCO) leis agus fágadh na meascáin chun seasamh ar feadh 90 nóiméad ag teocht an tseomra. Rinneadh ionsúcht na samplaí tuaslagáin a thomhas ag 725 nm ag baint úsáide as speictreafótaiméadar. Cuireadh an TPC i pónairí in iúl mar mg coibhéis d’aigéad gaileach (GAE) in aghaidh g meáchan tirim (mg GAE/g DW). Rinneadh na hanailísí faoi thrí.

3.7. Ábhar Flavonoid Iomlán (TFC)

Socraíodh inneachar flavonoid iomlán an SPE de réir Kubota agus [30], modhnaithe. Go hachomair, meascadh0.5 ml de gach tuaslagán samplach le 2.25 ml d'uisce driogtha agus 0.15 ml de 5 faoin gcéad NaNO, tuaslagán (w/v). Ceadaíodh don réiteach seasamh ar feadh 6 nóiméad agus ansin cuireadh 0.3 ml de 10 faoin gcéad AlCl3(w/v) leis an réiteach. Cuireadh Tar éis 5 min, 0.1 mL de thuaslagán 1 M NaOH (w/ø) leis agus ansin tomhaiseadh an t-ionsúcht ag 510 nm ag baint úsáide as speictreafótaiméadar. Cuireadh na torthaí in iúl mar choibhéis mg rutin (RE) in aghaidh g meáchan tirim (mg RE/g DW).

3.8. Gníomhaíocht Scavening Radacach DPPH

De réir Brand-Williams et al.[37], socraíodh gníomhaíochtaí frithocsaídeacha an SPE mar ghníomhaíocht scavening an chobhsaí 1,{1}}défheinile-2-picrylhydrazyl (DPPH) radacach saor in aisce.[37]. Cuireadh eastóscán próitéin shíoda 0.1 mL le 3 ml de mheatánól0.001 M DPPHin. Coinníodh an meascán ar feadh 30 min sa dorchadas ag teocht an tseomra. Socraíodh ionsú ag 517 nm ag baint úsáide as speictreafótaiméadar. Ba é seo a leanas an chothromóid chun an cosc ​​DPPH a ríomh:

(1) Cosc ( faoin gcéad )=[(Abs. control- Abs.sample)/Abs. rialaithe]×100)

áit a bhfuil na ABS. is é an sampla ionsúiteacht an tsampla agus Abs. Is é an rialú ionsú an rialaithe.

3.9.Gníomhaíocht Frithocsaídeach ag Measúnú ABTS

Cuireann modh radacach an ABTS de Re et al. (1999) [22] chun meastóireacht a dhéanamh ar na héifeachtaí scavening radacach saor in aisce. Ullmhaíodh an tuaslagán oibre ATBS trí 7.4 mM ABTS agus 2.6 mM sársulfáit photaisiam a chomhcheangal ag cóimheas 1:1(v/v), rud a ligeann dó imoibriú sa dorchadas ar feadh 12 h ag teocht an tseomra, agus ansin é a chaolú le huisce dí-ianaithe. . Cinneadh an ionsúiteacht ag 734 nm ag baint úsáide as speictreafótaiméadar go dtí gur shroich sé 1.1 ±0.02. Ansin imoibríodh 150 μL den SPE agus 2850 μL de thuaslagán oibre ATBS sa dorchadas ar feadh 2 h le meascadh, agus an ionsúiteacht ag 734 nm ag baint úsáide as speictreafótaiméadar; úsáideadh meatánól 100 faoin gcéad mar rialú. Ba é an chothromóid chun an cosc ​​a ríomh ná Cothromóid(1).

3.10. Laghdú Ferric / Measúnacht Cumhachta Frithocsaídeach (FRAP)

Bhí cumhacht laghdaitheach na n-sleachta bunaithe ar mheasúnú FRAP [23]. Ullmhaíodh an t-imoibrí FRAP úr trí 100 ml de mhaolán aicéatáite a mheascadh (0.3 mol LI, pH 3.6), 10 mL de TPTZsolution tuaslagtha i 10 mL de 40 mmol L-1HCland 10 ml de 20mmolL -1FeCl; i gcóimheas 10∶1∶1 agus, 120 ml d’uisce driogtha ag 37 céim . Go hachomair, cuireadh 60 μL de SPE agus 180uL d'uisce dí-ianaithe le 1.8 ml d'imoibrí FRAP. Rinneadh an réiteach a chroitheadh ​​​​trí mheascadh vortex. Tar éis an tuaslagán a ghoradh i ndabhach uisce ag 37 céim ar feadh 4 nóiméad, tomhaiseadh an t-ionsúcht ag 593 nm i gcoinne rialaithe. Taispeánadh luachanna FRAP mar mg FeSO4 in aghaidh g bonn tirim (mg FeSO4/g DW).

3.11.Gníomhaíocht Chosc in aghaidh an Einsíme -Amaláis

-Tomhaiseadh gníomhaíocht coisctheach einsím amylase ag baint úsáide as modh Xiao et al. (2006)[38] le mionathruithe. Ullmhaíodh an tsubstráit trí stáirse prátaí 100 mg a fhiuchadh i maolán fosfáit 5 ml (pH 7.0) ar feadh 5 nóiméad, agus ansin fuarú go teocht an tseomra. Measctha SPE (50μL), substráit (300μL) agus tuaslagán 5ug/mL -amaláis (20μL) agus goraíodh an tuaslagán ag 37 céim ar feadh 15 nóiméad. Stopadh an t-imoibriú trí 50 μL 1 M HCl a chur leis, agus ansin cuireadh tuaslagán iaidín 50μL leis. Rinne léitheoir micreaphláta an t-ionsúcht a thomhas ag 650nm. Baineadh úsáid as acarbose mar rialú dearfach. Rinneadh measúnú ar an gcéatadán coiscthe de x-amaláis mar chothromóid (1).

3.12.Gníomhaíocht Chosc in aghaidh an Einsíme -Glúcosidase

Rinneadh an measúnú coiscthe einsím -glucosidase de réir mhodh Wang agus Zhao[39].SPE (2ml tuaslagtha i démheitiolsulfocsaíd; DMSO) agus 0.5 U/mL a-glucosidase(40). mL)a mheascadh i 120 mL de mhaolán fosfáite 0.1 M (pH 7.0). Tar éis 5 nóiméad réamh-goir, cuireadh 5 mM p-nitrophenyl- -D-glucopyranoside tuaslagán (40 mL) leis, agus gor an tuaslagán ag 37 céim ar feadh 30 nóiméad. Tomhaiseadh an t-ionsúcht ag 405 nm ag léitheoir micreaphláta speictreafótaiméadar ionsúcháin UV/Vis. Rinneadh measúnú ar an gcéatadán coiscthe -glucosidase mar chothromóid (1).

3.13.Meastóireacht ar Ghníomhaíocht Fhoirmithe Frith-AOIS

Tomhaiseadh cumais coisctheacha foirmiú AGEanna na próitéine síoda agus a codáin ag baint úsáide as modh Vinson agus Howard [40]. Ullmhaíodh an toirt iomlán de thuaslagán imoibrithe glycation (2.5 mL) trí mheascadh 5{{10}} 0 μL de SPE, 500 μL de 20 mg/mL BSA i maolán fosfáit, 500 μL de 0.5 M glúcóis i maolán fosfáite agus 1ml de mhaolán fosfáite 0.1 M ag pH 7.4 ina bhfuil 0.02 faoin gcéad (w/v)azide sóidiam. Goradh an meascán seo ag 37 céim ar feadh 5 lá sa dorchadas agus ansin rinneadh an líon AGEanna fluaraiseacha a foirmíodh trí úsáid a bhaint as speictriméadar fluaraiseacha le tonnfhad excitation de 330 nm agus tonnfhad astaíochta de 410 nm. Ríomhadh an céatadán foirmithe frith-AGEanna bunaithe ar an déine fluaraiseachta (FI) a bhí mar thoradh air agus úsáid á baint as an gcothromóid seo a leanas:(2) n =[1-(FIsample - FIsample blank)/(control-control blank )]×100 nuair is é an Flsample déine fluaraiseacha an tsampla, is é an sampla bán déine fluaraiseacha an tsampla bán, is é an rialú déine fluaraiseacha an rialaithe agus is é FIcontrol blank an déine fluaraiseacha den rialú samplach bán.

3.14. Anailís staitistiúil

Rinne bogearraí SPSS (IBM SPSS, Chicago, IL, USA) anailís ar na sonraí go léir. Tuairiscítear na torthaí mar an meán ± diall caighdeánach (SD) de thrí mhacasamhlú agus rinneadh anailís ar na sonraí trí úsáid a bhaint as anailís aontreo ar athraithis (ANOVA) leis an tástáil difríochta is lú suntasaí (LSD) chun an tábhacht a bhaineann leis an rialú agus comhghaol Pearson a chinneadh. tástáil chun na comhghaolta idir na hacmhainní a mheas. I ngach cás, lch<0.05 was="" considered="">

4. Conclúidí

Bhain ár staidéar ar na héifeachtaí a bhaineann le próitéin shíoda a bhaint astu le huisce driogtha ag 100 céim ar feadh sé huaire; chuir an nós imeachta seo na luachanna is airde ar fáil maidir le cion próitéine, aimínaigéid, cion feanólach iomlán (TPC), cion iomlán flavonoid (TFC), gníomhaíocht scavening radacach DPPH, measúnacht ar chumas scavening radacach ABTS, measúnacht FRAP, frith- -aimaláis, frith-a-glucosidase, agus frith-glycation i gcomparáid le hamanna eastóscadh eile. Ina theannta sin, chuir SPE na tréithchineálacha Nangsew inneachar níos airde ar fáil de na substaintí cothaitheacha seo go léir, i gcomparáid le sleachta de na tréithchineálacha Eri. Tugann na torthaí le tuiscint gurb é Nangsew na cineálacha roghnaithe dár bpleananna leanúnacha chun breiseán nádúrtha a fhorbairt do bhianna feidhmiúla, bunaithe ar sericin a bhaintear le linn cóireála cocún, a sholáthraíonn deiseanna le haghaidh rogha eile i dtáirgeadh deochanna feidhmiúla.

Ranníocaíochtaí Údair:Coincheapú, CBand SS; Modheolaíocht, CBand SS; Bailíochtú, CBand SS; Anailís Fhoirmiúil, CBand SS; Imscrúdú, CBand SS; Scríbhneoireacht - Dréacht-Ullmhúchán Bunaidh, CBand SS; Scríbhneoireacht - Athbhreithniú agus Eagarthóireacht, CBand SS; Amharcléiriú, CBandS.S. Tá an leagan foilsithe den lámhscríbhinn léite agus aontaithe ag gach údar.

Maoiniú:Maoiníodh an taighde seo ag Téalainn Science Research and Innovation (TSRI) agus Siam Natural Products Co., Ltd.

Ráiteas an Bhoird Athbhreithnithe Institiúideach:Neamhbhainteach.

Ráiteas Toilithe Feasach:Neamhbhainteach. Ráiteas Infhaighteachta Sonraí: Neamhbhainteach.

Buíochas:Ionad Trealamh Saotharlainne Ollscoil Mahasarakham le haghaidh comhair agus áiseanna eolaíocha ar fáil. Buíochas freisin le Colin Wrigley, Ollscoil Queensland, an Astráil, as léamh profaí Béarla.

Coinbhleachtaí Leasa:Ní dhearbhaíonn na húdair aon choinbhleacht leasa.

Baintear an t-alt seo as Molecules 2021, 26, 2033. https://doi.org/10.3390/molecules26072033 https://www.mdpi.com/journal/molecules