An féidir le Cistanche Deserticola Extract Freagairt Imdhíonachta a Chur Chun Cinn?

Déan teagmháil le:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Shuangshuang Feng a,1, Xiumei Yang a, Xiang Weng a,1, Bin Wang b, Ailian Zhang a,*

Príomhshaotharlann Xinjiang um Acmhainní Bitheolaíochta agus Innealtóireachta Géiniteacha, Coláiste na hEolaíochta Beatha agus na Teicneolaíochta, Ollscoil Xinjiang, Urumqi, 830046, Xinjiang, an tSín

b Príomh-Saotharlann Víreolaíochta Móilíneach Leighis, Scoil na Bun-Eolaíochta Míochaine, Coláiste Leighis Shanghai, Ollscoil Fudan, Shanghai, 200032, an tSín

Ábharthacht eitnopharmacological:Tá cumas iontach feabhsaithe imdhíonachta léirithe ag polaisiúicrídí luibhe. Is príomhuirlis iad aidiúvach chun vacsaíní éifeachtúla a fhorbairt. In ár staidéar roimhe seo, polaisiúicríd intuaslagtha in uisce a bhaintear as fiáinCistanchefásachLéirigh YC Ma gníomhaíocht inmunostimulatory potent.

Aidhm an staidéir:Sa staidéar seo, na próifílí imdhíonachta agus éifeachtúlacht sleachta uiscí de saothraitheCistanchefásachFiosraíodh YC Ma (AECCD) ar lucha ICR in aghaidh ubhchruthacha (OVA). I dturgnaimh in vitro, rinneadh measúnú ar mheicníocht gníomhachtaithe DC féideartha ag AECCD.

Abhair agus modhanna:Baineadh AECCD trí úsáid a bhaint as uisce te agus ina dhiaidh sin rinne eatánól na polaisiúicrídí amh a deascadh. Ar dtús imdhíonadh lucha go subcutaneously le OVA (10 ug an luch) ina n-aonar nó OVA (10 ug an luch) faoi seach ina raibh dáileoga éagsúla AECCD (200, 400, agus 800 ug an luch) ar Laethanta 1 agus 14 agus an méid agus cinéitic de Rinneadh measúnú ansin ar antasubstaintí agus ar fhreagraí trí mheán cille.

Torthaí:Fuair ​​AECCD freagraí bríomhara agus fadtéarmacha IgG le freagraí measctha Th1/Th2 agus leibhéil uas-rialaithe de chitocíní a bhaineann le Th (CD4 móide IL-4, CD4 móide IFN- , agus CD8 móide IFN- ). Ina theannta sin, tharlódh AECCD an cheallacha láidirimdhíonachfreagraarb iad is sainairíonna é iomadú splenocyte méadaithe chomh maith leis an bhfreagra cille T gníomhachtaithe. Go háirithe, chuir AECCD go mór le haibiú cealla dendritic (DCanna) agus chuir sé bac ar Tregs. Turgnaimh in vitro, léirigh Réamhthástálacha gur spreag AECCD gníomhachtú DC trí aibiú feinitíopach, alt cítocine, agus gníomhaíocht allostimulatory a chur chun cinn. Bhí gabhdóir cosúil le dola 4 (TLR4) ina ghabhdóir riachtanach do DCanna chun AECCD a cheangal go díreach. Laghdaigh coscairí NF-κB na leibhéil slonn CD40, CD80, CD86, agus MHC-II agus táirgeadh IFN- , TNF- , agus IL-6 trí DCS.

Conclúidí:Ar deireadh, thug na torthaí seo le tuiscint go bhféadfadh AECCD a bheith sainiúil in antaigin láidir agus marthanachimdhíonachfreagraítrí ghníomhachtú DC, a bhí bainteach le rialáil marcóirí aibithe agus slonn cítocine tríd an gcosán NF-κB a bhaineann le TLR. Léiríonn an staidéar gur imdhíonmodulator féideartha é AECCD.

Eochairfhocail:Aidiúvach polaisiúicríde Saothraithe,Cistanchefásach, Immunomodulator, cealla dendritic Gabhdóir cosúil le dola 4, cosán comharthaíochta NF-κB

Cistanche fásachsliocht a chur chun cinnimdhíonachfreagra

1. Réamhrá

Tá sé molta ag go leor staidéir gur féidir le aidiúvaigh éifeachtúlacht vacsaíní a fheabhsú i gcoinne galair thógálacha éagsúla cosúil le VEID, COVID{0}}, fliú, agus galar crúb agus béil (Cao et al., 2020; Giuseppe et al., 2018 ). Féadfaidh aidiúvach cineálacha agus méideanna éagsúla a aslúimdhíonachfreagraí, mar sin féadfaidh aidiúvach a roghnófar go cuí animdhíonachfreagraag teastáil le haghaidh pataigin nó antigen tugtha (Reed et al., 2013). Baineadh úsáid as sleachta luibheacha nádúrtha le fada sa saol laethúil nó i gcúram sláinte. I go leor cásanna, chuir leigheas traidisiúnta na Síne (TCM) agus a chomhpháirteanna gníomhacha, go háirithe aidiúvaigh il-díorthaithe TCM polaisiúicrídí, go mór le héifeachtúlacht na vacsaíní. Bhí roinnt buntáistí ag polaisiúicrídí TCM (Advax ™, polaisiúicríd Astragalus, polaisiúicríd Ginseng, polaisiúicríd Lycium barbarum, agus polaisiúicríd Ganoderma lucidum) thar aidiúvach eile, mar shampla sábháilteacht níos fearr, bith-chomhoiriúnacht, feabhsú imdhíonachta láidir, agus imoibríocht íseal (Li agus Wang, 2015; Schijns; et al., 2020). Dá bhrí sin, tá an poitéinseal ag comhdhúile agus foirmlithe polaisiúicríde TCM mar iarrthóirí aidiúvacha.

Cistanche fásachIs leigheas traidisiúnta Síneach é YC Ma (Roucongrong i Sínis) a thaifeadtar i Pharmacopeia na Síne agus tá sé in úsáid mar bhia tonic leis na céadta bliain sa tSín (Coimisiún Pharmacopoeia na Síne, 1992). Léirigh staidéir chógaseolaíochta nua-aimseartha a ilfheidhmchláir chógaseolaíochta agus inmunomodulatory (Dong et al., 2007; Fu et al., 2017). In ár staidéar roimhe seo, na polaisiúicrídí amh a dhíorthaítear ó fiáinCistanchefásachChuir YC Ma na freagraí greannacha agus ceallacha a bhaineann go sonrach le antigen chun cinn agus rialaigh sé aibiú cealla dendritic (DCanna) (Zhang et al., 2018; Zhao et al., 2019). Mar sin féin, fiáinCistanchefásachRinneadh ró-iniúchadh ar YC Ma agus liostaítear é mar speiceas i mbaol.CistanchefásachTá YC Ma curtha ar scála mór agus úsáidtear go forleathan é i bhforbairt agus i gcur i bhfeidhm acmhainní TCM. Mar sin féin, an acmhainneacht aidiúvach saothraitheCistanchefásachNíl YC Ma soiléir fós.

Is rialtóirí riachtanacha iad DCS i gcoinne galair thógálacha. Tar éis DCanna a bheith gníomhachtaithe, idirghníomhaíonn móilíní dromchla agus cítocíní pro-athlastacha ar DCanna le gabhdóirí comhfhreagracha chun cealla T a ghníomhachtú agus freagraí sainiúla antaigin a fháil agus táirgeadh cítocíní a threoraíonn oiriúnaitheach.imdhíonachfreagraí(Banchereau agus Steinman, 1998). Tuairiscíodh go bhfeidhmíonn receptor cosúil le dola 4 (TLR4) ar DCanna mar receptor polaisiúicríde tábhachtach (Park et al., 2014; Qi et al., 2016). Go deimhin, is féidir le go leor polaisiúicrídí idirghníomhú go díreach nó go hindíreach le TLR4 ar DCanna chun an fachtóir núicléach iartheachtach-kappa B (NF-κB) a ghníomhachtú, rud a d'fhéadfadh léiriú géinte proinflammatory éagsúla mar IFN- , TNF- , agus IL{11 }} agus an freagra athlastach chun deireadh a chur le pataiginí (Tian et al., 2019; Zhou et al., 2017; Zhu et al., 2013). Mar sin, rinneadh staidéar forleathan ar DCS agus NF-κB mar spriocanna féideartha le haghaidh teiripe galair.

Sa staidéar, leis an straitéis in vivo (ICR lucha), rinneamar meastóireacht ar dtús ar na héifeachtaí inmunostimulatory a bhaineann le sleachta uiscí de shaothraithe.CistanchefásachYC Ma (AECCD) le dáileoga éagsúla (íseal, meánach agus ard) chun animdhíonachfreagrain aghaidh OVA agus mínigh an bealach in vitro chun DCanna agus cosáin a bhaineann le gabhdóirí iartheachtacha a ghníomhachtú. Le múnla luiche, nocht muid gur chuir AECCD an fhreagairt fhadtéarmach antashubstainte chun cinn le titers IgG méadaithe agus ceallachaimdhíonachfreagra. Rud atá tábhachtach, ba chúis le AECCD cítocíní a bhaineann le Th, go háirithe táirgeadh IFN, as a dtáinig freagra Th1 ar ionfhabhtuithe. Rinneadh an éifeacht ionduchtaithe a chomhghaolú go dlúth le haibiú DC feabhsaithe agus laghdaigh Tregs. Go meicniúil, chuir AECCD gníomhachtú DC chun cinn trí chonair NF-κB a bhaineann le TLR. Go hachomair, dheimhnigh an staidéar gníomhaíocht chumhachtach aidiúvach AECCD maidir leis an bhfreagra oiriúnaitheach a chur chun cinn. Leag an staidéar bunús le haghaidh aidiúvaigh polaisiúicríde AECCD a fhorbairt.

2. Ábhair agus modhanna

2.1. Imoibrithe

Ovalbúimín (OVA), 3-(4, 5-démheitilthiazol-2-il)-2, 5-bróimíd défheiniltetrasóiliam (MTT), polaimísín B (PMB), concanavalin Fuarthas A (ConA), lipopolysaccharide (LPS), mitomycin C agus 3,3′,5,5′-Tetramethylbenzidine (TMB) ó Sigma (SAM). Ceannaíodh séiream bó féatais (FBS) ó Thionscail Bhitheolaíochta. Ceannaíodh Kit Counting Cell-8 (CCK-8) ó Biosharp (tSín). Tháinig comhchuingeacha frith-luiche gabhar IgG/IgG1/IgG2a-HRP ó Southern Biotech (SAM). Tháinig Inject Alum ó Thermo Scientific Pierce (SAM). Ba as Peprotech (SAM) GM-CSF. Antasubstaintí fluaraiseacha (frith-CD3-PE, frith-CD4-APC, frith-CD8a-FITC, frith-CD44-PE, frith-CD62L-PE, frith-MHCII -FITC/Percp-cy5.5, frith-IL-4-PE, frith–IFN– -PE, frith-CD86-APC, frith-CD40-FITC/PE, frith- Tháinig CD11c-PE/FITC, frith-CD{80-APC), Golgistop, Cytofix/Cytoperm, agus maolán Perm/Wash go léir ó BD Bitheolaíocht (SAM). Is ó eBith-eolaíochtaí (SAM) a tháinig an trealamh ruaimnithe rialála T-chealla. Tháinig TAK-242 ó MedchemExpress (Shanghai, an tSín). Bhí PDTC ó Beyotime Biteicneolaíocht (tSín). Ba ó Biolegend (SAM) an trealamh measúnaithe sreafa il-anailítí.

2.2. Ullmhú AECCD C. deserticola

(D'aithin an tOllamh Jiang He eiseamal dearbhán Uimh. CD10041602). Fuarthas AECCD trí eastóscadh uisce, deascadh eatánóil, agus an modh díphróitéinithe le roinnt mionathruithe (Zhang et al., 2018). Go hachomair, saothraitheCistanchefásacheastósctar é ar dtús le huisce go minic agus ansin rinneadh polaisiúicrídí amh a deascadh thar oíche trí eatánól a chur leis de réir cóimheas toirte 1:4. Ansin díphróitéiníodh na polaisiúicrídí amh a fuarthas trí mhodh Sevag (Liu et al., 2012). Braitheadh ​​gurb é an cion iomlán siúcra ná 76.82 faoin gcéad leis an modh aigéid antrane-sulfair (Dubois et al., 1951).

2.3. Anailís speictreascópach infridhearg

Chun críche anailís a dhéanamh ar ghrúpaí feidhme orgánacha, rinneadh AECCD le KBr a bhrú isteach i millíní chun an speictream infridhearg (IR) a thomhas. Cinneadh speictream IR na samplaí laistigh de 4000–400 cm− 1.

Cistancheluibhea chur chun cinnimdhíonachfreagra

2.4. Turgnaimh in vivo

2.4.1. Imdhíonadh ainmhithe

Cuireadh lucha baineann C57BL/6 agus lucha ICR (6 seachtaine d'aois) ó Ollscoil Leighis Xinjiang (Urumqi, an tSín) i dtaithí ar feadh 3 lá. Rinneadh na nósanna imeachta turgnamhacha go léir i gcomhréir le rialacháin an Choiste um Eitic um Thurgnaimh Ainmhithe de chuid Xinjiang Eochair-Saotharlann Acmhainní Bitheolaíochta agus Innealtóireachta Géiniteacha in Ollscoil Xinjiang (BRGE-AE001).

Rinneadh imdhíonadh subcutaneously do lucha le OVA ina n-aonar nó le OVA le tiúchain éagsúla AECCD agus treisíodh iad ar Lá 14 de réir grúpaí éagsúla mar seo a leanas (6 lucha i ngach grúpa): Grúpa rialaithe (0.9 faoin gcéad NaCl), grúpa OVA ( 10 ug OVA), grúpa AECCD-H (AECCD 800 ug), grúpa OVA/ AECCD-L (10 ug OVA, AECCD 200 ug), grúpa OVA/AECCD-M (10 ug OVA, AE CCD 400 ug ), grúpa OVA/AECCD-H (10 ug OVA, AECCD 800 ug), agus grúpa OVA/Alum (10 ug OVA, Alum100 ug). Instealladh foirmlithe vacsaíne i 100 μL de 0.9 faoin gcéad NaCl ag dhá shuíomh éagsúla (50 μL ag gach suíomh) i gcraiceann chúl gach luch. Tar éis an vacsaínithe, bailíodh samplaí fola ón plexus aisfhithiseach, agus fuarthas agus stóráil séara ag − 80 ◦C chun anailís bhreise a dhéanamh ar bhrath IgG. Rinneadh iomadú splenocyte agus braite cítocine, fo-thacair cille T, marcóirí dromchla DC, agus Tregs tar éis an phrótacail vacsaínithe céanna.

2.4.2. Anailís antasubstainte

Chinn ELISA titers IgG i serum in aghaidh OVA ar Laethanta 14, 28, 42, agus 56 tar éis vacsaíniú príomhúil a luadh cheana (Zhang et al., 2018). Tomhaiseadh IgG1 agus IgG2a ar Lá 21. Fuarthas an ionsúiteacht ag 450 nm/630 nm trí úsáid a bhaint as léitheoir (Bio-Rad, SAM). Cuirtear torthaí na freagartha antasubstainte in iúl mar titers IgG agus cuirtear isitíopaí IgG1 agus IgG2a in iúl mar ionsúcháin chomhfhreagracha.

2.4.3. Measúnacht iomadú splenocyte

Rinneadh measúnacht ar iomadú splenocyte i lucha le trealamh measúnachta CCK-8 de réir threoracha an déantóra. Ar Lá 21 tar éis an chéad imdhíonta, scoiteadh na splenocytes ó spleen na lucha imdhíonta agus rinneadh na erythrocytes a lí tar éis meilt. Spreagadh splenocytes (1 × 106 cealla / tobar) le OVA (10 ug/mL), OVA323-339 (10 ug/mL), ConA (10 ug/mL), agus LPS (10 ug/mL) le haghaidh dhá lá agus baineadh úsáid as cealla bána mar an rialú. Cuireadh an ghníomhaíocht iomadú in iúl mar innéacs spreagtha (IR), a ríomhadh an cóimheas ionsúcháin de chill spreagtha go cill neamhspreagtha faoin tonnfhad 570/630 nm.

2.4.4. Anailís ar fheinitíopáil T-limficítí i ndraenáil nóid linf agus spleen

Fuarthas fionraí splenocyte ó nóid limfe agus spleen i lucha imdhíonta de réir an mhodha thuasluaite (Zhang et al., 2018). Tar éis níocháin, dathaíodh samplaí (1 × 106 cill/tobar) ar feadh 30 nóiméad le hantasubstaintí le haghaidh marcóirí dromchla, lena n-áirítear frith-CD3-PE, frith-CD4-APC, frith-CD8a-FITC, frith-CD44-PE, agus frith-CD62L-PE. Scrúdaíodh leibhéil T-limficítí trí chiteiméadracht sreafa. Cuirtear torthaí feinitíopaí T-limficítí in iúl mar chéatadáin de chill T-CD4 móide T ( faoin gcéad ), CD8 móide cill T ( faoin gcéad ), CD44 móide cill T ( faoin gcéad ) agus cill T CD62L móide ( faoin gcéad ).

2.4.5. Anailís sreafa-cítiméadrach ar leibhéil chitocine

Chun críche anailíse staining cítocine intracellular, scartha agus próiseáladh limficítí splenic isteach i bhfionraí aonchealla ar Lá 21 tar éis an chéad imdhíonta (Zhang et al., 2017). Goradh samplaí (2 × 106 cealla / mL) spreagtha le OVA (10 ug / mL) ar feadh 4 u. Cuireadh Golgistop leis ina dhiaidh sin ar feadh 12 h. Ansin nite, blocáladh agus dathaíodh samplaí le hantasubstaintí frith-CD4-APC nó frith-CD8a-FITC ar feadh 30 nóiméad. Tar éis fosaithe agus tréscaoilteachta le Cyto fix/Cytoperm, lipéadaíodh na samplaí ansin le hantasubstaintí frith-IL{-4-PE nó frith –IFN– -PE. Rinneadh anailís sreafa chun leibhéal na cítocín a chinneadh.

2.4.6. Meastachán ar ghníomhachtú DC agus cealla Treg i spleen

Iniúchadh a dhéanamh an bhfuil ról ag DCs agus Tregs sa fheabhsúimdhíonachfreagrain aghaidh OVA, ar Lá 3 tar éis an chéad vacsaínithe, baineadh limficítí splenic ó lucha imdhíonta le haghaidh measúnú ar aibiú DC (Zhang et al., 2017). Cuireadh bac ar chealla faoi seach agus goradh iad le frith-CD11c-PE/FITC, frith-CD{6}PE, frith-CD{8}}APC, frith-CD80-APC, agus frith-MHCII- FITC ar feadh 30 nóiméad. Rinneadh anailís ar chealla de réir cíteiméadracht sreafa. Ar Lá 21 tar éis an chéad imdhíonta, tástáladh Tregs leis an trealamh staining T-chealla rialála luiche. Rinneadh splenocytes a dhathú le frith-CD4-FITC le haghaidh marcóirí dromchla cille, agus ina dhiaidh sin staining intracellular le frith-CD25-APC agus frith-Foxp{3-PE de réir threoracha an déantóra. Socraíodh leibhéal na gcealla CD4 móide CD25 móide Foxp3 trí chitoiméadracht sreafa.

Cistanche planda sliocht spreagann animdhíonachfreagra

2.5. Turgnaimh in vitro

2.5.1. Giniúint DCanna, inmharthanacht cille, agus leibhéil endotoxin

Fuarthas DCanna díorthaithe ó smeara lucha C57BL/6 de réir an mhodha ar cuireadh síos air roimhe seo (Inaba et al., 1992). Go hachomair, saothraíodh cealla le meán iomlán RPMI-1640 (20 ng/mL GM-CSF agus 5 ng/mL IL-4). Tar éis sé lá, bailíodh gach cill ar fuaidreamh mar DCanna neamhaibí le haghaidh measúnachtaí ina dhiaidh sin. Cinneadh an céatadán de CD11c móide DCs sna cealla neamh-ghreamaitheacha a bheith 94 faoin gcéad de réir cíteiméadracht sreafa.

Braitheadh ​​inmharthanacht cille DCanna agus splenocytes ó lucha ar AECCD leis an trealamh CCK{{{0}} de réir threoracha an déantóra. Fuarthas na cealla ó DCS agus splenocytes agus ansin spreagadh iad le tiúchain éagsúla AECCD (0, 10, 100, 400, 800, agus 1600 ug/mL). Cuireadh in iúl inmharthanacht na cille mar an cóimheas idir an absorbance an ghrúpa cóireáilte le ionsú an ghrúpa rialaithe) × 100 faoin gcéad .

Chun éifeacht endotoxin in AECCD a eisiamh, tar éis AECCD (100, 200 agus 400 ug/mL) agus LPS (100 ng/mL) réamhchóireáladh le PMB (100 ug/mL) ar feadh 60 nóiméad, DCs (5 × Gortaíodh 105 cill/mL) le AECCD réamhchóireáilte (100, 200 agus 400 ug/mL) agus LPS ar feadh 12 u. Tar éis na cóireála thuas, rinneadh na leibhéil CD40, CD86, CD80, agus MHCII a mheas.

2.5.2. Anailís ar fheinitíopa DC

Socraíodh leibhéil na móilíní comhspreagthacha chun aibiú a mheas trí thurgnaimh in vitro. Ar Lá a sé, déileáladh le DCanna le AECCD (20, 100, 200 agus 400 ug/mL) nó LPS (100 ng/mL) ar feadh 12 uair an chloig. Ansin, rinneadh DCanna a dhaite le móilíní dromchla agus rinneadh anailís orthu de réir cíteiméadracht sreafa.

2.5.3. Táirgeadh cítocine ag DCanna in vitro

Bailíodh forshuíomh saothrán na gceall chun leibhéal na gcítocíní a thomhas trí threalamh ELISA nó trealamh measúnaithe sreafa il-anailítí a úsáid leis an modh CBA. Rinneadh na céimeanna turgnamhacha go léir de réir threoracha an mhonaróra.

2.5.4. Imoibriú limficítí measctha allogeneic (MLR)

Fuarthas splenocytes ó lucha BALB/c go aiseipteach i meán RPMI- 1640 (Zhang et al., 2018). Rinneadh réamhchóireáil ar DCanna aibí C57BL/6 (aibithe i láthair tiúchain éagsúla AECCD nó LPS) le 50 ug/ml Mitomycin C ar feadh 60 nóiméad ag 37 ◦C. Tar éis níocháin, rinneadh DCanna a mheascadh le splenocytes de réir cóimheas 1:5 nó 1:10 ar feadh 2 lá. Socraíodh iomadú cille le measúnacht MTT.

2.5.5. Turgnaimh neodrúcháin inhibitor

Chun cosán TLR NF-κB a bhaineann le TLR a fhiosrú, rinneadh na DCanna a bailíodh a lódáil ar 24-phláta tobair agus ansin iad a réamhchóireáil le TAK-242 (5 μM) nó PDTC (5 μM) , faoi seach. Tar éis 1-h goir, spreagadh cealla le tiúchain éagsúla AECCD (100, 200 agus 400 ug/mL) nó LPS (100 ng/mL) ar feadh 24 h. Ansin, socraíodh leibhéil slonn na móilíní dromchla agus na cítocíní sna supernatants cultúir de réir na modhanna a thuairiscítear thuas.

3. Torthaí

3.1. Speictreascópacht FTIR

Ba iad na buaiceanna ionsúcháin is mó de AECCD i bhFíor 1 ná beanna ionsúcháin saintréithe struchtúir glycosidic a fhreagraíonn don tonnchrith síneadh O-H ag 3342.95 cm - 1. Bhí an t-ionsú lag sainiúil de chreathadh síneadh C-H ag an mbanda ag 2933.54 cm− 1. Cuireadh an bhuaic ag 1657.39 cm− 1 i leith creathadh flexural OH. Tugadh an t-ionsú ag 1411.00 cm− 1 do chreathadh síneadh O–H nó C–H agus C–O. Léirigh na beanna ag 1018.38 cm− 1 freisin creathadh banna glycosidic CO agus C–O–C.

Fíor 1. Speictream FTIR AECCD.

3.2. Freagairt antashubstainte serum a bhaineann go sonrach le OVA

Tástáladh sera ó na lucha imdhíonta le seiceáil an raibh antasubstaintí ginte (IgG, IgG1, agus IgG2a) ann in aghaidh OVA. Mar a léirítear i bhFíor 2A, d'eascair IgG iomlán níos airde ag titers IgG i lucha a bhí imdhíonta le OVA/AECCD-M (teidil: 220,000, 25{{30}}, 000 agus 250,000) i gcoibhneas leo siúd den ghrúpa OVA (teidil: 100,000, 100,000 agus 120,000), agus bhí gar do ghrúpa Alum (titers: 250,000, 250,000 agus 270,000) ar Laethanta 28, 42 agus 56 tar éis an vacsaínithe príomhúil. Chuir OVA/AECCD-M/H go mór le leibhéil IgG1 i gcomparáid leis an ngrúpa OVA (P <0.05) agus="" ní="" raibh="" an="" difríocht="" idir="" an="" grúpa="" ova/aeccd-m/h="" agus="" an="" grúpa="" alum="" suntasach="" (p=""> 0.05). Chuir OVA/AECCD-M/H feabhas suntasach freisin ar leibhéil IgG2a i gcomparáid leis an ngrúpa OVA agus an grúpa Alum (Fíor 2B agus C) (P < 0.05).="" d'fhéadfadh="" leibhéil="" fheabhsaithe="" igg2a="" cosc="" ​​a="" chur="" ar="" ghalar="" óna="" dteastaíonn="">imdhíonachfreagra.

Fíor 2. Títer antashubstaintí a bhaineann go sonrach le OVA agus isitíopaí IgG i serum. Bailíodh samplaí séirim tar éis imdhíonadh príomhúil agus teanndáileog d’antasubstaintí le ELISA. (A) Rinneadh measúnú ar shraitheanna IgG de shéiream comhthiomsaithe ar Laethanta 14, 28, 42, agus 56 tar éis an chéad imdhíonta. (B–C) Tomhaiseadh IgG1 agus IgG2a ar Lá 21 tar éis an chéad imdhíonta. Cuirtear sonraí i láthair mar mheán ± SD (n=6). *P < 0.05="" i="" gcomparáid="" le="">

3.3. Freagraí imdhíonachta ceallacha

Rinne measúnacht MTT imscrúdú ar iomadú limficítí an spleen faoi athspreagadh le OVA nó OVA{{{{{{{{0}}). Léirigh anailís ar iomadú gur mhéadaigh OVA/AECCD-M araon iomadú splenocyte go suntasach tar éis nochtadh do OVA, OVA323-339, Con A, nó LPS i gcoibhneas leis an ngrúpa OVA. D'fheabhsaigh OVA agus OVA323-339 an freagra iomadaithe níos airde ná mar a bhí sa ghrúpa Alum (Fíor 3) (P <>

Fíor 3. Iomadú splenocyte ar chóireáil AECCD in vivo. Ath-spreagthaíodh splenocytes le OVA, OVA323-339, ConA nó LPS agus tomhaiseadh iad trí mhodh MTT ar Lá 21 tar éis an chéad imdhíonta. Taispeánadh iomadú cille mar innéacs spreagtha (SI): (A–B) Innéacs spreagtha OVA agus OVA323-339. (C–D) Innéacs spreagtha ConA agus LPS. Cuirtear sonraí i láthair mar mheán ± SD (n=5). *P<0.05, **p="" <="" 0.01,="" and="" ***p="" <="" 0.001="" compared="" to="" ova;="" #p="" <="" 0.05="" and="" ##p="" <="" 0.01="" compared="" to="" ova/="">

3.4. Fo-thacair na gcealla T a ghníomhachtú chun na nóid limfe agus an spleen a dhraenáil

Baineadh nóid limfeach agus spleen ó lucha imdhíonta chun fo-thacair T chealla T a bhrath ar Lá 21 tar éis an vacsaínithe príomhúil. Bhí céatadán na bhfo-thacairí cille T (CD4 móide , CD8 móide , CD44 móide cealla T) ó nóid limfe sa ghrúpa OVA/AECCD-M i bhfad níos airde ná an céatadán den ghrúpa OVA agus an ghrúpa Alum (Fíor 4A–D) (P. < 0.05).="" bhí="" na="" céatadáin="" de="" na="" fo-thacairí="" cille="" t="" (cd4="" móide="" ,="" cd8="" móide="" ,="" cd44="" móide="" ,="" agus="" cd62l="" móide="" cealla="" t)="" i="" spleen="" i="" bhfad="" níos="" airde="" ná="" iad="" siúd="" den="" ghrúpa="" ova="" (="" fíor.="" 4e="" -="" j="" )="" (="" p="">< 0.05="" ).="" léirigh="" na="" torthaí="" seo="" gur="" chuir="" aeccd="" idirghabháil="" cille="" chun="">imdhíonachfreagra.

Fíor 4. Leibhéil na bhfo-thacairí cille T i nóid limfe agus an spleen in vivo a dhraenáil. Ar Lá 21 tar éis an chéad vacsaínithe, baineadh úsáid as cealla ó nóid linf agus spleen chun fo-thacair cille T a bhrath trí chitoiméadracht sreafa. (A–D) Céatadáin na gcealla CD4 móide , CD8 móide agus CD44 móide T sna nóid linfacha. (E–J) Céatadáin na gcealla CD4 móide , CD8 móide , CD44 móide agus CD62L móide T i spleen. Cuirtear sonraí i láthair mar mheán ± SD (n=5). *P < {{10}}.05,="" **p="">< 0.01,="" agus="" ***p="">< 0.001="" i="" gcomparáid="" le="" ova;="" #p="">< 0.05="" agus="" ##p="">< 0.01="" i="" gcomparáid="" le="">

3.5. Cítocíní secreted ag splenocytes athspreagtha in vivo

Cinntíodh cítocíní Th1/Th2 ó spleen lucha imdhíonta trí smálú incheallach ar Lá 21 tar éis an chéad vacsaínithe. Bhí leibhéil CD4 móide IL-4, CD4 móide IFN- , agus CD8 móide IFN- sa ghrúpa OVA/AECCD-M i bhfad níos airde ná mar a bhí sa ghrúpa OVA agus sa ghrúpa Alum (P < 0="" .05,="" fíor="" 5).="" léirigh="" na="" difríochtaí="" go="" bhféadfadh="" aeccd="" freagraí="" th1/="" th2="" a="" spreagadh,="" go="" háirithe="" trí="" idirghabháil="">imdhíonachfreagra.

Fíor 5. Anailís cíteicne antaigin-shonrach i gcealla T in vivo. Scrúdaíodh splenocytes ó lucha imdhíonta ar Lá 21 tar éis an chéad imdhíonta trí staining cítocine intracellular. (A) Céatadáin CD4 móide IL-4. (B–C) Céatadáin CD4 móide IFN- agus CD8 móide IFN- . Cuirtear sonraí i láthair mar mheán ± SD (n=5). *P < {{10}}.05="" agus="" **p="">< 0.01="" i="" gcomparáid="" le="" ova;="" #p="">< 0.05="" i="" gcomparáid="" le="">

3.6. Aibiú DC agus Tregs in vivo

Is féidir le gníomhachtú DC díolúine oiriúnaitheach a thionscnamh. Rinneadh measúnú ar éifeachtaí AECCD ar aibiú DC i lucha imdhíonta ar Lá 3 tar éis an chéad imdhíonta. Ba é OVA/AECCD-M a d’eascair na leibhéil is airde de CD40, CD80, CD86, agus MHCII ar DCanna i gcoibhneas leis an ngrúpa OVA, agus an difríocht idir OVA/AECCD-M grúpa agus grúpa Alum suntasach (Fíor 6A–D) (P < 0.05).="" bhí="" minicíocht="" cd4="" móide="" cd25="" móide="" foxp3="" móide="" tregs="" sa="" ghrúpa="" ova/aeccd-m="" i="" bhfad="" níos="" ísle="" ná="" mar="" a="" bhí="" sa="" ghrúpa="" ova="" (fíor="" 6e)="" (p="">< 0.05).="" mhol="" na="" sonraí="" seo="" go="" bhféadfadh="" aeccd="" dcanna="" a="" ghníomhachtú="" agus="" minicíocht="" treg="" a="">

Fíor 6. Éifeachtaí AECCD ar aibiú DC agus Tregs in vivo. Baineadh úsáid as splenocytes ó lucha ICR chun móilíní costimulatory a bhrath ar DCs agus Tregs ar Lá 3 nó 21 tar éis an chéad imdhíonta. (A–D) Céatadáin CD40, CD86, CD80, agus MHCII ar CD11c móide DCanna. (E) Céatadáin CD4 móide CD25 móide Foxp3 móide Tregs. Cuirtear sonraí i láthair mar mheán ± SD (n {{10}}). *P < 0.05="" agus="" **p="">< 0.01="" i="" gcomparáid="" le="" ova;="" #p="">< 0.05="" agus="" ##p="">< 0.01="" i="" gcomparáid="" le="">

3.7. Measúnachtaí cíteatocsaineachta agus éilliú endotoxin

Tar éis cóireála le tiúchain éagsúla AECCD ar feadh 2 lá, úsáideadh na cealla ó DCS agus splenocytes lucha chun cíteatocsaineacht fhéideartha leis an trealamh CCK-8 a chinneadh. Ní raibh aon fhreagra suntasach ar iomadú coiscthe in inmharthanacht cille DCanna agus splenocytes i gcomparáid le hinmharthanacht na ngrúpaí rialaithe (Fíor 7A-B) (P > 0.05). Léirigh na torthaí seo nár léirigh AECCD ag an tiúchan de 10–1600 ug/mL aon cíteatocsaineacht suntasach do DCanna agus splenocytes i gcomparáid leis an rialú (P > 0.05). Mar sin, socraíodh go mbeadh an tiúchan de AECCD i dturgnaimh ina dhiaidh sin faoi 1600 ug/mL.

Chun cur isteach ar éilliú endotoxin in éifeachtaí AECCD ar ghníomhachtú DC a eisiamh, baineadh úsáid as PMB, antaibheathach a aithníodh go forleathan mar gheall ar a éifeacht neodraithe LPS, chun éilliú endotoxin a eisiamh (Morrison agus Jacobs, 1976). Mar a léirítear i bhFíor 7C–F, CD40, CD80, CD{5}} nó leibhéil slonn MHC-II i DCanna cóireáilte le AECCD i láthair PMB níor léirigh aon athrú suntasach ( P > 0.05). Mar sin féin, breathnaíodh laghdú suntasach de CD40, CD80 CD86, agus leibhéil slonn MHC-II i DCanna cóireáilte LPS i láthair PMB (P < 0.001).="" léirigh="" na="" torthaí="" seo="" go="" raibh="" aeccd="" saor="" ó="" éilliú="">

Fíor 7. Cíteatocsaineacht agus éifeachtaí PMB ar aibiú DC spreagtha ar AECCD. (A-B) Saothraíodh DCS agus splenocytes lucha i láthair AECCD ar feadh 2 lá chun inmharthanacht na gceall a chinneadh leis an modh MTT. (C–F) goradh DCanna ar feadh 12 u le AECCD nó LPS réamhchóireáilte i láthair/éagmais PMB ar feadh 60 nóim. Cinneadh na céatadáin CD40, CD80, CD86, agus MHCII ar CD11c móide DCanna. Cuirtear sonraí i láthair mar mhodh ± SD (n =3). **P < 0.01="" agus="" ***p="">< 0.001="" i="" gcomparáid="" leis="" an="" ngrúpa="" le="">

3.8. Aibiú feinitíopach agus gníomhachtú feidhmiúil DCanna in vitro

Bunaithe ar thurgnaimh imdhíonta thuas, rinneadh tuilleadh iniúchta ar aibiú feinitíopach DCanna tar éis na cóireála le AECCD in vitro. Ar Lá 6, spreagadh DCanna neamhaibí le tiúchan áirithe de AECCD nó LPS chun anailís a dhéanamh ar mhóilíní dromchla. Aibiú cille spreagtha AECCD arb iad is sainairíonna é méadú suntasach ar na céatadáin CD40, CD80 CD86, agus MHC II ar bhealach dáileog-spleách (P < 0.001,="" fíor="" 8a–d).="" breathnaíodh="" freisin="" aibiú="" feinitíopach="" den="" chineál="" céanna="" ar="" dcanna="" tar="" éis="" an="" spreagtha="" le="" 100="" ng/ml="" lps.="" léirigh="" na="" sonraí="" anailíse="" gur="" fheabhsaigh="" aeccd="" aibíocht="">

Ó na torthaí thuas, chuir AECCD feabhas ar aibiú feinitíopach DCanna. Chun éifeacht AECCD ar fheidhm DC in vitro a urramú, bhí cumas DCanna cóireáilte le AECCD chun iomadú cealla T allogeneic a spreagadh i MLR ag cóimheas DC-splenocyte de 1:5 nó 1:10 fiosraithe. D'eascair iomadú cille T suntasach i gcomparáid le DCanna neamhchóireáilte (Fíor 8E–F) (P < {0.001)="" de="" bharr="" dcanna="" cóireáilte="" le="" tiúchain="" éagsúla="" aeccd.="" d'fhéadfadh="" aibiú="" dc="" táirgeadh="" cítocíní="" a="" spreagadh.="" ina="" dhiaidh="" sin,="" braitheadh="" ​​trealamh="" elisa="" na="" supernatants="" dcs="" cóireáilte="" le="" aeccd="" nó="" lps.="" méadaíodh="" go="" mór="" na="" leibhéil="" il-12="" agus="" tnf-="" sna="" supernatants="" de="" dcanna="" ar="" bhealach="" dáileog-spleách="" (p="">< 0.001,="" fíor="">

Fíor 8. Aibiú feinitíopach agus gníomhachtú feidhme DCanna ar chóireáil in vitro AECCD. (A-D) Ar Lá 6, déileáladh le DCanna le tiúchan áirithe de AECCD nó LPS ar feadh 12 h. Bhí na cealla dhaite le antasubstaintí agus arna chinneadh ag cítoiméadracht sreafa. Meán-déine fhluaraiseachta (MFI) de CD40, CD80, CD86 agus MHCII ar CD11c móide DCanna. (E–F) C57BL/6 DCanna cóireáilte le tiúchain éagsúla AECCD nó LPS a mheascadh le splenocytes ó BALB/c lucha ag cóimheas de 1:5 nó 1:10 i MLR ar feadh 2 lá. Socraíodh iomadú cille le measúnacht MTT. (G–H) Rinneadh measúnú ar shárshaothair chultúir DCanna le haghaidh IL-12 agus TNF-a le trealamh ELISA. Cuirtear sonraí i láthair mar acmhainn ± SD (n =3). *P < 0.05,="" **p="">< 0.01,="" agus="" ***p="">< 0.001="" i="" gcomparáid="" le="" dcanna="" neamhchóireáilte;="" #p="">< 0.05="" i="" gcomparáid="" le="">

3.9. TLR4, receptor do AECCD ar DCanna

Is féidir le DCS comharthaíocht cheallacha a thionscnamh ag gabhdóirí membrane. Chunchinneadhról TLR4 maidir le páirt a ghlacadh in aibiú DC arna chóireáil ag AECCD, tar éis an réamhchóireála le TLR4 inhibitor TAK-242, spreagadh DCanna le tiúchan áirithe de AECCD, agus ansin scrúdaíodh stádas gníomhachtúcháin DCanna ag cítoiméadar sreafa . Rinneadh anailís ar leibhéil slonn na gcítocíní i bhfostóirí cultúir trí threalamh measúnaithe sreafa ilanailíse. Cuireadh bac suntasach ar uasrialáil CD40, CD80, CD86, agus MHC-II a tharlódh ó AECCD trí bhealaí TLR4 a bhlocáil (P <0.01, fíor="" 9a–d).="" ina="" theannta="" sin,="" i="" gcomparáid="" le="" rialú="" neamhchóireáilte,="" bhí="" éifeacht="" coiscthe="" níos="" suntasaí="" ag="" blocáil="" tlr4="" le="" tak-242="" ar="" tháirgeadh="" ifn-="" ,="" tnf-="" ,="" agus="" il-6="" (p="">< 0.01,="" fíor="" 9e–g)="">

Fíor 9. Comharthaíocht TLR4 a ghníomhachtú i DCanna arna gcóireáil ag AECCD. Tar éis cóireáil a dhéanamh ar DCanna neamhaibí le AECCD in éagmais nó láithreacht TAK-242 ar feadh 12 h, scrúdaíodh an t-aibiú feinitíopach le cíteaiméadar sreafa agus rinneadh leibhéil na gcítocíní in ollnótaí ag an modh CBA. (A–D) Céatadáin CD40, CD80, CD86 agus MHCII ar CD11c móide DCanna. (E–G) Leibhéil IFN- , TNF- agus IL-6. Cuirtear sonraí i láthair mar mhodh ± SD (n=3). **P < 0.01="" agus=""><0.001 compared="" to="" the="" group="" with="">

3.10. Gníomhachtú DC ag AECCD trí chonair NF-κB a bhaineann le TLR

Chun imscrúdú a dhéanamh an raibh na léirithe de mhóilíní dromchla agus cítocíní DCanna cóireáilte le AECCD á rialú ag NF-κB tar éis DCanna neamhaibí réamhchóireáilte le NF-κB inhibitor PDTC a spreagadh le AECCD ar feadh 12 h, rinneadh leibhéil slonn na móilíní costimulatory agus cytokines a thomhas ag cíteaiméadar sreafa. Tháinig laghdú suntasach ar leibhéil CD40, CD80 CD86, agus MHC-II a tharlódh ó AECCD i gcomparáid leis an rialú neamhchóireáilte trí bhac a chur ar bhealaí NF-κB le coscairí comhfhreagracha (P < 0.001,="" fíor="" 10a–d).="" ag="" an="" am="" céanna,="" chuir="" pdtc="" bac="" suntasach="" ar="" léiriú="" ifn-="" ,="" tnf-="" agus="" il-6="" (p="">< 0.05,="" fíor="">

Fíor 10. Baint NF-κB le gníomhachtú DC spreagtha ag AECCD. Cuireadh cóireáil ar DCanna le AECCD in éagmais nó i láthair PDTC ar feadh 24 h. (A–D) Rinneadh na céatadáin CD40, CD80, CD86, agus MHCII ar CD11c móide DCanna a chinneadh ag cíteiméadracht sreafa. (E–G) Is é modh an CBA a chinn leibhéil IFN- , TNF- , agus IL-6 san chomhshuíomh. Cuirtear sonraí i láthair mar acmhainn ± SD (n=3).*P < 0.05,="" **p="">< 0.01,="" agus="" ***p="">< 0.001="" i="" gcomparáid="" leis="" an="" ngrúpa="" le="">

4. Plé

Faoi láthair, rinneadh imscrúdú ar pholaisiúicrídí éagsúla ó TCM mar aidiúvaigh do vacsaíní daonna agus ainmhithe (Sun et al., 2018; Rey- Ladino et al., 2011). Sa staidéar seo, rinneadh imscrúdú in vivo agus in vitro ar éifeachtaí imdhíonachta modhnaithe AECCD agus ar mheicníocht gníomhachtaithe príomhúil DCanna le sraith turgnamh chun an oiriúnaitheach a mheas.imdhíonachfreagrain aghaidh OVA agus stádas gníomhachtúcháin DCS. Thug turgnaimh in vivo le fios gur chuir AECCD go mór chun cinn táirgeadh isitíopaí OVA-shonracha IgG agus IgG, iomadú splenocyte feabhsaithe, agus gníomhachtú cille T spreagtha agus cítocíní (IL-4/IFN- ). Ina theannta sin, chuir AECCD feabhas ar aibiú DC agus léirigh Tregs laghdaithe. Thug na torthaí seo le tuiscint gur baineadh feidhm AECCD mar aidiún éifeachtach trí aibiú DC a chur chun cinn agus trí chosc a chur ar Tregs. Léirigh turgnaimh in vitro gur chuir AECCD aibiú feinitíopach DCanna, rannán cítocine, agus gníomhaíocht allospreagthach chun cinn trí chosán NF-κB a bhaineann le TLR4-. Thug na torthaí turgnamhacha seo le fios go raibh cumas suntasach ag AECCD mar spreagthóir feabhsaithe imdhíonachta.

Tá tréithe uathúla imdhíonachta ag gach aidiúvach i gcoinne antaiginí éagsúla, rud a thugann le fios go bhfuil cumas feidhmithe ag aidiúvaigh i galair éagsúla. Ar an gcéad dul síos, rinneadh tástáil ar na hairíonna aidiúvacha a bhaineann le comhriarachán AECCD le OVA trína n-éifeachtaí ar oiriúnaitheach a chinneadh.imdhíonachfreagrai lucha. Léirigh go leor staidéir go raibh na gníomhaíochtaí imdhíonachta-spreagtha comhréireach go díreach leis an dáileog laistigh de raon áirithe (Li et al., 2020; Reed et al., 2020; Zhang et al., 2017). Mar an gcéanna, sa staidéar, léirigh an anailís ar antashubstaint agus isitíopa gur chuir AECCD i raon dáileog áirithe feabhas ar fhreagraí OVA-shonracha IgG, IgG1, agus IgG2a agus gurbh í an dáileog mheánach de AECCD an dáileog optamach. I dturgnaimh ina dhiaidh sin, rinneamar imscrúdú go príomha ar éifeacht spreagthach AECCD ag dáileog mheán optamach. Mhéadaigh meán-dáileog AECCD go suntasach an freagra iomadú splenocyte i lucha imdhíonta, rud a léiríonn gur chuir AECCD ceallach chun cinnimdhíonachfreagraíin aghaidh OVA. Thug na torthaí seo le fios gur chuir AECCD feabhas ar ghreann agus ar chealla araonimdhíonachfreagraí, a bhain le poitéinseal aidiúvach.
D’fhéadfadh gníomhaíocht shubstaintiúil T-chealla a bheith fabhrach do dhíothú galair. Le linn animdhíonachfreagra, féadfaidh cealla T gníomhachtaithe fíocháin linfóideacha tánaisteacha a bhaint amach, lena n-áirítear spleen agus nóid limfe (Steinman, 2012). D'fheabhsaigh meán-dáileog AECCD éifeachtúlacht vacsaíne go héifeachtach mar go bhféadfadh sé feabhas suntasach a chur ar fhreagraí cille CD4, CD8, CD44, agus CD62L T maidir le nóid limfe agus spleen a dhraenáil. Rinne cealla CD8 T gníomhachtaithe idirghabháil ar dhíothú pataigin trí IFN- . Rinneadh cealla iomadaithe CD4 T a dhifreáil i gcealla Th1 agus cealla Th1. Rinne cealla Th1 cítocín Th1 a scaoileadh chun iomadú lymphocyte a spreagadh agus rinne cealla Th2 cítocín Th2 a scaoileadh chun táirgeadh antashubstainte a fheabhsú (Seder et al., 2008). Sa staidéar, mhéadaigh AECCD na leibhéil CD4 móide IL-4, CD4 móide IFN- , agus CD8 móide IFN- ag dáileog mheánach ag AECCD. Spreag AECCD freagra cothrom Th1/Th2 agus stiúraigh animdhíonachfreagratríd an líonra cítocín a athrú.

Ba cheart d’ aidiúvach díolúine ar leith a aslú agus toradh naimdhíonachfreagratrí stádas DCanna a rialáil ag pointí iomadúla (Carrera Silva et al., 2013). Is táscaire ríthábhachtach é léiriú na móilíní dromchla ar DCanna chun aibiú DC a mheas agus go hiondúil déantar é a chomhghaolú le difreáil limficítí T (Steinman, 2012). Sa staidéar seo, d'fheabhsaigh AECCD léiriú na móilíní costimulatory agus d'éascaigh aibiú DC nuair a úsáideadh é mar aidiúvach i gcoinne OVA. B’fhéidir gurb é seo ceann de na bealaí a chuir AECCD greannacht agus cheallacha chun cinnimdhíonachfreagraí. Idir an dá linn, laghdaigh AECCD minicíocht CD4 móide CD25 móide Foxp3 móide Tregs, rud a chuir díolúine cothromaithe ar fáil tar éis an vacsaínithe. Thacaigh ár dtorthaí le torthaí le déanaí gurb iad polaisiúicrídí éagsúla ó TCM an rialtóir ar aibiú DC (Bo et al., 2019; Li et al., 2015; Zhu et al., 2016).

Gníomhachtú oiriúnaitheachimdhíonachfreagraídéantar idirghabháil ag aidiúvaigh polaisiúicríde go príomha trína n-aithint ag gabhdóirí sainiúla DCanna (Akira, 2004). Is féidir le DCanna a chuirtear i ngníomh trí chosáin a bhaineann le TLR4-d’ imdhíon-mhodóirí éagsúla a cheilt mar an t-idirghabhálaí ríthábhachtach in aghaidh ionfhabhtuithe (Akira, 2007). Dá bhrí sin, i dturgnaimh ina dhiaidh sin, rinneamar réamhscrúdú ar mheicníocht mhóilíneach éifeacht spreagthach AECCD ar DCanna in vitro. D'fhonn cítotocsaineacht AECCD a urramú, rinneadh inmharthanacht cille DCanna agus splenocytes ó lucha a chinneadh ar dtús. Níor léirigh AECCD ag 10–1600 ug/mL aon chiteatocsaineacht do DCanna agus splenocytes. Chun éilliú LPS a chur as an áireamh, rinneamar réamhchóireáil ar AECCD le PMB. Níor laghdaíodh leibhéil slonn CD40, CD80 CD86, agus MHC-II i DCanna cóireáilte le AECCD, ach chuir PMB bac go héifeachtach ar léiriú móilíní comhspreagthacha i DCanna a raibh cóireáil LPS orthu. Léirigh sé seo go raibh AECCD saor ó éilliú endotoxin. Ansin, rinneadh iniúchadh breise ar stádas gníomhachtúcháin DCanna. Cosúil le DCanna cóireáilte LPS, ar bhealach dáileog-spleách, mhéadaigh DCanna cóireáilte le AECCD na leibhéil CD40, CD80 CD86, agus MHC II chomh maith le táirgeadh an chitocín pro-athlastach, a bhí ina paraiméadar aibithe feidhme DCanna. I MLR, rinneadh measúnú ar chumas iomadúcháin na gcealla T allogeneic i DCanna cóireáilte le AECCD. D'fhéadfadh AECCD cealla T allogeneic a phríomhshuim agus a ghníomhachtú. Ar dtús rinneadh réamhchóireáil ar DCanna le Mitomycin C agus ansin nite go críochnúil chun an t-imoibrí seo a bhaint, agus mar sin ní dócha go gcuirfí éifeachtaí AECCD ar DCanna i leith na gníomhaíochta mitoigineach. Léirigh sonraí turgnamhacha go bhféadfaí aibiú feinitíopach DC agus gníomhachtú feidhmiúil a chur i leith an spreagadh ó AECCD.

D'fhéadfadh roinnt polaisiúicrídí TCM aibiú DCanna a spreagadh trí TLR4. Tá ról tábhachtach ag NF-κB mar bhall den chosán iartheachtach a bhaineann le TLR maidir le haibiú feinitíopach agus feidhmiúil DCanna a rialáil agus léiriú géinte éagsúla a bhfuil baint acu leis a spreagadh.imdhíonachfreagraí(Qi et al., 2016; Re agus Strominger, 2001; Wei et al., 2016; Zhu et al., 2013). Trí thurgnaimh in vitro, fuaireamar amach gur chuir AECCD aibiú DC chun cinn agus gur laghdaigh TAK-242 (coiscín TLR4) agus PDTC (inhibitor NF-κB) na leibhéil slonn CD40, CD80, CD86, agus MHC. -II agus leibhéil secretion IFN- , TNF- , agus IL-6 ar DCanna cóireáilte le AECCD, Léirigh na torthaí seo go raibh baint ag TLR4 agus NF-κB le gníomhachtú DC spreagtha ag AECCD agus le secretion cytokine. Bhí na torthaí seo comhsheasmhach le staidéir a tuairiscíodh roimhe seo toisc go raibh AECCD mar aidiún feabhsaithe antaigin ag díriú ar DCanna.

Go hachomair, thaispeáin ár dtorthaí gur spreag AECCD freagraí marthanacha agus Th1/Th2, go háirithe trí idirghabháil T-cheallaimdhíonachfreagrain aghaidh OVA. Chuir AECCD DCanna i ngníomh tríd an gcosán NF-κB idirghabhála TLR4-, rud a chuir feabhas ar tháirgeadh imdhíonmodulators agus iomadú cealla T allogeneic. Féadfar AECCD a úsáid mar aidiúvach éifeachtach i bhforbairt vacsaíne. Mar sin féin, déanfar anailís chruinn ar chomhpháirteanna chun a chinneadh cé acu comhpháirt i DCanna gníomhachtaithe AECCD. Le fócas ar na meicníochtaí maidir le conas a threisíonn AECCD imdhíon-ghineacht, lena n-áirítear leas iomlán a bhaint as foirmlithe aidiúvacha agus an bealach riartha vacsaíne, déanfaimid tuilleadh iniúchta ar na comhpháirteanna inmunomodulatory agus ar airíonna aidiúvacha sonracha AECCD chun aidiúvaigh vacsaíne éifeachtacha a dhearadh i gcoinne galair thógálacha.

Cistanche sochair deserticolachur chun cinn animdhíonachfreagra

Ranníocaíochtaí údair

Fáil, anailís, agus léirmhíniú Sonraí: Shuangshuang Feng, Xiumei Yang, Xiang Weng. Scríobh dréacht bunaidh: Shuangshuang Feng, Xiang Weng.

Maoiniú a fháil:Ailian Zhang.

Imscrúdú:Ailian Zhang.

Modheolaíocht:Ailian Zhang, Bin Wang.

Maoirseacht:Ailian Zhang.

Dearbhú leasa iomaíoch

Níl aon choinbhleacht leasa ag na húdair a bhaineann leis an staidéar seo.

Buíochas

Thacaigh Fondúireacht Náisiúnta Eolaíochta Nádúrtha na Síne leis an obair seo [uimhreacha deontais 31960164 agus 31660259] Ní raibh ról ar bith ag na maoinitheoirí i ndearadh staidéir, bailiú sonraí, agus anailís, cinneadh a dhéanamh ar fhoilsiú, ullmhú, nó ar an lámhscríbhinn.

Gabhann na húdair buíochas leis an Ollamh Xingguo Zheng agus Jiang He (Urumqi, an tSín) as ábhair agus aitheantais a sholáthar go cineálta.

Tagairtí

Akira, S., 2004. Teaghlaigh ghlacadóirí dola: struchtúr agus feidhm. Seimineár. Imdhíonól. 16, 1–2.

Akira, KS, 2007. Comharthaíocht chuig NF-κB ag gabhdóirí cosúil le dola. Treochtaí Mol. Med. 18, 156–163.

Banchereau, J., Steinman, RM, 1998. Cealla dendritic agus rialú díolúine. Nádúr 392, 245–252.
Bo, R., Liu, Z., Zhang, J., Gu, P., Ou, N., Sun, Y., Hu, Y., Liu, J., Wang, D., 2019. meicníocht Lycium liposomes polaisiúicrídí barbarum ar ghníomhachtú cealla dendritic murine. Carbaihiodráit. polaim. 205, 540–549.
Cao, P., Wu, S., Wu, T., Deng, Y., Zhang, Q., Wang, K., Zhang, Y., 2020. Ról tábhachtach polaisiúicrídí ó leigheas traidisiúnta Síneach-Glanadh na Scamhóg agus Díthocsainiú i gcoinne na paindéime COVID-19. Carbaihiodráit. polaim. 240,m116346
Carrera Silva, EA, Chan, PY, Joannas, L., Errasti, AE, Gagliani, N., Bosurgi, L., Jabbour, M., Perry, A., Smith-Chakmakova, F., Mucida, D., Cheroutre, H., BurstynCohen, T., Leighton, JA, Lemke, G., Ghosh, S., Rothlin, CV, 2013. T cealla-díorthaithe
Baineann próitéin S úsáid as comharthaíocht receptor TAM i gcealla dendritic chun méid animdhíonachfreagra. Díolúine 39, 160–170.
Coimisiún Pharmacopoeia na Síne, 1992. Caighdeán Drugaí Aireacht Sláinte na Síne Leigheas Luibhe na Síne, imleabhar a haon. preas Choimisiún Pharmacopoeia na Síne, Beijing, lch. 1.

Dong, Q., Yao, J., Fang, J., Ding, K., 2007. Tréithriú struchtúrach agus gníomhaíocht imdhíoneolaíoch dhá pholaisiúicrídí inbhainte uisce fuar óCistanchefásachYC Ma. Carbaihiodráit. Res. 342 (10), 1343–1349.
Dubois, M., Gilles, K., Hamilton, JK, Rebers, PA, Smith, F., 1951. Modh dathmhéadrach chun siúcraí a chinneadh. Nádúr 168, 167 .
Fu, Z., Fan, X., Wang, X., Gao, X., 2018.cistéirHerba: forbhreathnú ar a chuid maoine ceimice, cógaseolaíochta, agus cógas-chinéitice. J. Ethnopharmacol. 219, 233–247.
Giuseppe, DG, Rino, R., Didierlaurent, AM, 2018. Comhghaolú aidiúvacht: athbhreithniú ar aidiúvach i vacsaíní ceadúnaithe. Seimineár. Imdhíonól. 39, 14–21.
Inaba, K., Inaba, M., Romani, N., Aya, H., Deguchi, M., Ikehara, S., Muramatsu, S., Steinman, RM, 1992. Giniúint líon mór cealla dendritic ó luch saothráin smeara agus fachtóir a spreagann coilíneacht granulocyte/macrophage. J. Cait. Med. 176, 1693–1702.
Li, P., Wang, F., 2015. Polaisiúicrídí: iarrthóirí aidiúvach vacsaínithe tuar dóchais inti. Diosca Drugaí Ther 9, 88–93.
Li, X., Zhao, R., Li, H., De, Z., Wu, H., 2012. Deproteinization polaisiúicrídí ón stiogma maydis ag an modh Sevag. Adv. Mater. Res. 340, 416–420.
Li, J., Li, J., Zhang, F., 2015. Éifeachtaí inmunoregulatory leigheas luibhe na Síne ar aibiú agus feidhm cealla dendritic. J. Ethnopharmacol. 171, 184–195.
Li, T., Zhang, L., Jin, C., Xiong, Y., Cheng, YY, Chen, K., 2020. Rialaíonn sliocht bláth pomegranate go déthreorach iomadú, difreáil, agus apoptosis 3T3- Cealla L1 trí rialú slonn PPAR arna idirghabháil ag cosán comharthaíochta PI3K-AKT. Biomed. Cógaiseoir. 131, 110769.
Morrison, DC, Jacobs, DM, 1976. Polymyxin B a cheangal leis an gcuid lipid A de lipopolysaccharides baictéarach. Imdhíoncheimic 13, 813–818.
Park, MJ, Ryu, HS, Kim, JS, Lee, HK, Kang, JS, Yun, J., Kim, SY, Lee, MK, Hong, JT, Kim, Y., 2014. Platycodon grandiflorum polysaccharide induces cell dendritic aibithe trí chomharthaíocht TLR4. Ceimic Bhia. Tocsain. 72, 212–220.
Qi, C., Guo, Y., Zhou, W., Zhang, Y., 2016. Glacadóir cosúil le dola 4-polasiúicrídí inmunostimulatory gaolmhara: struchtúr príomhúil, caidreamh gníomhaíochta, agus samhlacha idirghníomhaíochta féideartha. Carbaihiodráit. polaim. 149, 186–206.
Re, F., Strominger, JL, 2001. Gníomhaíonn receptor cosúil le dola 2 (TLR2) agus TLR4 cealla dendritic daonna go difreálach. J. Biol. Ceimic. 276, 37692–37699.
Reed, SG, Orr, MT, Fox, CB, 2013. Príomhróil aidiúvach i vacsaíní nua-aimseartha. Nat. Med. 19, 1597–1608.
Reed, SG, Tomai, M., Gale, MJ, 2020. Léargas nua in aidiúvaigh d’fhorbairt vacsaíní. Curr. Tuairim. Imdhíonól. 65, 97–101.
Rey-Ladino, J., Ross, AG, Cripps, AW, Mcmanus, DP, Quinn, R., 2011. Táirgí nádúrtha agus cuardach aidiúvach núíosacha vacsaíne. Vacsaín 29, 6464–6471.
Schijns, V., Fernandez ´ Ejada, A., Barjaktarovi, A., Bouzalas, I., Lavelle, EC, 2020. Modhnú arimdhíonachfreagraíaidiúvach a úsáid chun vacsaíniú teiripeach a éascú. Imdhíonól. Ath. 296, 169–190.
Seder, RA, Darrah, PA, Roederer, M., 2008. Cáilíocht T-chill mar chuimhne agus cosaint: impleachtaí do dhearadh vacsaíne. Nat. Ath. Immunol. 8, 247–258.
Steinman, RM, 2012. Cinntí faoi chealla dendritic: san am a chuaigh thart, san am i láthair agus sa todhchaí. Annú. Ath. Immunol. 30, 1–22.
Sun, B., Yu, S., Zhao, D., Guo, S., W, X., Zhao, K., 2018. Polaisiúicrídí mar aidiúvach vacsaín. Vacsaín 36, 5226–5234.
Tian, ​​H., Liu, Z., Pu, Y., Bao, Y., 2019. Éifeachtaí imdhíonachta a chuireann polaisiúicrídí Poria Coco i bhfeidhm trí chomharthaíocht in vitro agus in vivo TLR4/TRAF6/NF-κB. Biomed. Cógaiseoir. 112, 108709.
Wei, W., Xiao, HT, Bao, WR, Ma, DL, Leung, CH, 2016. Féadfaidh TLR-4 bealaí comharthaíochta de chealla RAW264.7 polaisiúicríd polaisiúicríde Astragalus a chur in iúl trí mheán RAP a léiriú. J. Ethnopharmacol. 179, 243–252.
Zhang, A., Yang, Y., Wang, Y., Zhao, G., Yang, X., Wang, D., Wang, B., 2017. Feabhsaítear sleachta uiscí adjuvantactive ó Artemisia rupestris L.imdhíonachfreagraítríd an gcosán comharthaíochta TLR4. Vacsaín 35, 1037–1045
Zhang, A., Yang, X., Li, Q., Yang, Y., Zhao, G., Wang, B., Wu, DC, 2018. Gníomhaíocht inmunostimulatory polaisiúicrídí uisce-inbhainte óCistanchefásachmar aidiúvach plandaí in vitro agus in vivo. PloS a hAon 13, e0191356.
Zhao, B., Lian, J., Wang, D., Li, Q., Zhang, A., 2019. Meastóireacht ar shleachta uiscí deCistanchefásachis aidiúvach polaisiúicríde é don vacsaín fliú séasúrach i lucha aosach óga. Imdhíonól. Lett. 213, 1–8.
Zhou, L., Liu, Z., Wang, Z., Yu, S., Long, T., Zhou, X., Bao, Y., 2017. Feidhmíonn polaisiúicrídí Astragalus éifeachtaí imdhíonmhodúla trí TLR4-idirghabhála MyD88-bealaí comharthaíochta cleithiúnacha in vitro agus in vivo. Sci Rep-UK 7, 44822.
Zhu, J., Zhang, Y., Shen, Y., Zhou, H., Yu, X., 2013. Polysaccharides barbarum Lycium aslú receptor cosúil le Dola 2- agus 4-idirghabháil feinitíopach agus feidhmiúil aibiú cealla dendritic murine trí ghníomhachtú NF-κB. Mol. Med. 8, 1216-1220.
Zhu, N., Lv, X., Wang, Y., Li, J., Liu, Y., Lu, W., Yang, L., Zhao, J., Wang, F., Zhang, LW, 2016 Comparáid idir éifeachtaí imdhíonrialaithe polaisiúicrídí ó thrí luibh nádúrtha agus glacadh ceallacha i gcealla dendritic. Int. J. Biol. Macromol. 93, 940–951.