Tionchair Tairbheacha ar Chodán Gliocósíde Feinileatánóideach Iomlán Scoite Ó Mhicreastruchtúr Cistánach Deserticola Ar Chnámh i bhFrancaigh Ovariectomized

1. Réamhrá

Tá oistéapóróis postmenopausal, áit a mbeidh 1 as gach triúr ban níos sine ná 50 bliain ag fulaingt, ag éirí mar phríomhghuais sláinte ag cur isteach ar níos mó ná 200 milliún bean ar fud an domhain [1]. Ag sos míostraithe, mar thoradh ar an meath géar ar an leibhéal estrogen de ghnáth go bhfuil sárú cnámh resorption de bharr osteoclastogenesis feabhsaithe; ansin, cuirtear isteach ar an gcothromaíocht idir foirmiú cnámh a tharchuirtear le osteoblast agus aisú cnámh a tharchuirtear le osteoclast, agus cuirtear isteach ar an bpróiseas luathaithe.resorption cnámhar deireadh ba chúis le oistéapóróis agus fiú briste cromáin nó spine [2]. Creideadh go spreagtar difreáil an osteoclast nuair a bhí an gníomhaí receptor fachtóir núicléach kappa B (RANK) faoi cheangal go RANKL, an ligand de RANK. Mar sin féin, ní féidir an teaglaim de RANK go RANKL a ghníomhachtú ach amháin má tá fachtóir neacróis próitéin meall próitéin receptor-ghaolmhar fachtóir 6 (TRAF6) ceangailte ann [3], agus ina dhiaidh sin spreagadh na cosáin comharthaíochta iartheachtacha lena n-áirítear PI3K/AKT agus NF-κB. Mar fhocal scoir, rialaíodh na léirithe ar an bhfachtóir núicléach de chealla T gníomhachtaithe c2 (NFAT2) agus c-Fos [4] chun idirdhealú a dhéanamh ar an osteoclast chomh maith le resorption cnámh. Mar sin, creideadh na fachtóirí agus na rialtóirí a bhaineann go díreach nó go hindíreach le gníomhachtú agus idirdhealú osteoclast mar spriocanna ríthábhachtacha chun caillteanas cnámh a chosc. Go deimhin, tá roinnt drugaí cliniciúla agus sintéiseacha teiripe athsholáthair hormóin cosúil le valerate estradiol atá éifeachtach i gcóireáil oistéapóróis iarmenopausal. Ar an drochuair, chuir cuid acu seo feabhas ar an mbaol ailse thromchúiseach lena n-áirítear ailse chíche agus ailse endometrial [5], rud a chuir srian lena bhfeidhmeanna cliniciúla. Dá bhrí sin, is gá roghanna eile a roghnú le fo-iarsmaí éifeachtúlachta agus íosta araon. Bhí sé cruthaithe go raibh leigheasanna traidisiúnta Síneacha (TCM), chomh maith leis na comhdhúile agus na codáin bithghníomhacha leithliseacha [6-9], éifeachtach ar ailsí éagsúla lena n-áirítear oistéapóróis iar-menopausal. I measc na gcomhpháirteanna agus na codáin bithghníomhacha seo, creideadh comhdhúile glycosíde feinileatánóideach (PhG) le héifeachtúlacht ionchasach mar ghníomhairí tuar dóchais inti le haghaidh cóireáil oistéapóróis [10-12]. Is éard atá i struchtúir PhGanna aglycone aigéad cinnamic, grúpa hiodrocsaile feanile eitile atá comhcheangailte le -glúcópyranós, apiose, galactose, rhamnose, nó xylose trí nasc glycosidic. Tá siad ann go forleathan i speicis íocshláinte den ghéineas Cistanche [13]. Is TCM oifigiúil é Cistanche deserticola YC Ma a thaifeadtar i Pharmacopoeia na Síne, agus sa bhreis ar a bheith ina TCM tábhachtach [14], is luibh tonic antiaging é C .deserticola freisin le cúpla fo-iarsmaí a forbraíodh i ndeochanna íocshláinte agus leacht cothaitheacha ceadaithe ag an Riarachán Bia agus Drugaí Stáit. Bunaithe ar thaifead pharmacopoeia na Síne, bhí C. deserticola in úsáid go traidisiúnta ag daoine dúchasacha chun déileáil le fadhbanna easnaimh bunúsacha duán cosúil le laige matán agus laige lumbar, agus comhdhúile glycosíde feinileatánóideach lena n-áirítearechinacosideagus acteoside na príomh-chomhábhair bhithghníomhacha sa luibh seo. De réir an teoiric TCM ar "duáin-rialú-cnámh," tá an córas cnámh á rialú ag bunúsach duáin [15], agus d'fhéadfadh trioblóidí a bhaineann le cnámh cosúil le oistéapóróis a aisghabháil le luibheanna nó comhdhúile a bhfuil an ghníomhaíocht acu maidir le cothú bunúsach na duáin. Dá bhrí sin, rinneamar hipitéis go raibh an codán glycosíde feanilethanoid iomlán scoite ó C. deserticola, go páirteach ar a laghad, tairbheach i gcóireáil oistéapóróis. Ceapadh an turgnamh reatha mar sin chun ár hipitéis a bhailíochtú trí úsáid a bhaint as samhail francach ovarectomized (OVX); sa bhreis ar na marcóirí aisghabhála cnámha agus foirmithe nach mór a mheas, úsáideadh an t-innéacs frithocsaídiúcháin chomh maith le cosáin chomharthaíochta spreagtha RANKL/RANK/TRAF6- spreagtha PI3K/AKT agus NF-κB chun imscrúdú a dhéanamh ar phríomh-mheicníochtaí na bithghníomhaíochta antaiteiripeach. .

2. Ábhair agus Modh

2.1. Ábhair Plandaí agus Ullmhúchán.

Bailíodh iomlán de 30 kg gas de Cistanche deserticola YC Ma ó Yongning County i Meán Fómhair 2015 leis na comhordanáidí 106.026597 agus 38.262816, Cúige Ningxia, an tSín. D’aithin an Dr Lin Dong (An Roinn Pharmacognosy, Ollscoil Leighis Ningxia) an luibh, agus caomhnaíodh eiseamal comhfhreagrach (#2{{015{0901) i Roinn na Gaeltachta). Anailís Cógaisíochta. Ar an gcéad dul síos, baineadh 30.0 kg de C. deserticola púdraithe trí úsáid a bhaint as an modh aife le 70% eatánól mar thuaslagóir; Socraíodh an cóimheas idir an t-ábhar agus an tuaslagóir mar 1 : 10, agus ba é an t-am aife 2 h ar feadh 3 huaire. Ansin, cuireadh na scagáití go léir le chéile agus comhdhlúite faoi bhrú laghdaithe ag 60 céim C. Ar an dara dul síos, baineadh úsáid as colúin roisín macroporous AB-8 don réamhscaradh, agus cóimheasa éagsúla eatánóil in uisce (0%, 20%, Fostaíodh 30%, 40%, 50%, agus 60%, gach 60 L) le haghaidh eluting. Ar an tríú dul síos, rinneadh na héilitheoirí 40% agus 50% a chomhcheangal agus a íonú tuilleadh trí úsáid a bhaint as colúin roisín macraporous AB-8 arís agus arís eile le elents de 0%, 20%, 30%, 40%, agus 50% eatánól in uisce, agus B'ionann gach eluent agus 12 L. Ar deireadh, bailíodh an codán 40% agus comhdhlúthaíodh é faoi bhrú laghdaithe chun 150 g de chodán glycosíde feinilethanoid dríodar buí pale de C. deserticola (CDP, bhí an toradh 0.5%) a fháil. I gcás turgnaimh in vivo, fostaíodh tuaslagóir 0.5% CMC-Na chun CDP a thuaslagadh; socraíodh riarachán béil d'ainmhithe mar 1 ml/100 g de mheáchan coirp; le haghaidh anailíse in vitro blot an Iarthair, díscaoileadh CDP le DMSO agus ansin caolaíodh é le DMEM chun na tiúchain deiridh de 0.1 mg/mL, 0.01 mg/mL, agus 0.001 mg/mL a fháil. 

Sliocht CISTANCHE NÁDÚRTHA LE hAGHAIDH FÁS CnámhGLYCOSIDES PHENYLETHANOID 75% ECHINACOSIDE 30% ACTEOSIDE 12%

2.2. Ceimiceáin agus Tuaslagóirí.

Ba as Delpharm Lille SAS na Fraince é Estradiol valerate (EV); phosphatase alcaileach (ALP), gla-próitéin cnámh (BGP), fosfatase aigéad tartrate-resistant (TRAP), agus trealamh crosslink ELISA deoxypyridinoline (DPD) ó Xinyu Biological Engineering Co. Ltd., Shanghai, An tSín, 201605; malondialdehyde (MDA, 20181221), super oxide dismutase (SOD, 20121218), agus feisteáin imoibrí glutathione (GSH, 20181221) ó Institiúid Innealtóireachta Bitheolaíochta Nanjing Jiancheng, Nanjing, an tSín; lntact parathormone (l-PTH, NEWASHE7UZ), calcitonin (2L9ISN7AIU), agus estrogen-ghaolmhar receptor alfa (ERR , Y3AY8QEWB3) trealamh crosslink ELISA ó Elabscience Biotechnology Co. Ltd., Wuhan, an tSín; trealamh imoibrí cathepsin K ELISA ó BioVision, Meiriceá, 1l300141; antasubstaintí príomhúla RANKL (GR3193842-5), RANK (AA02113656), TRAF6 (2), c-Fos (AG12059411), NFAT2 (AO11015648), NF-κB p65 (AH04138226), PI3 kinase (AG12059411) , AKT 1 (AF05173234), -actin (17AV0411), agus antasubstaintí tánaisteacha horseradish peroxidase-conjugated gabhar frith coinín ó ZSGB-BIO, an tSín, 136080; trealamh measúnaithe pro tein iomlán BCA agus an trealamh tráchtála chun foirmiú oste oclast agus séiream bó féatais a bhrath agus meán Eagle's modhnaithe (DMEM) Dulbecco ó HyClone, Logan, UT, SAM; membrane fluairíd pholaivinilideéin (PVDF) ó Eolaíochtaí Beatha Millipore, Billerica, MA, SAM; peinicillin agus streptomycin ó Gibco, Rockville, MD, SAM. Ba de ghrád AR iad na hoibreáin cheimiceacha eile go léir a úsáideadh.

2.3. HPLC Cainníochtú CDP.

Úsáideadh ionstraim HPLC Agilent 1220 chun comhdhéanamh CDP a aithint agus a chainníochtú. Ba iad seo a leanas na coinníollacha crómatagrafaíochta: colún C18 (TSK-GEL, 4.6.id × 250 mm, 5 μm); bhí tuaslagóirí A (aicéatóintríle) agus B (uisce ina bhfuil 0.5% aigéad aicéiteach) (0-10 nóim: 17-20%A; 10-30 nóim: 20-25 % A; agus 30-40 nóim: 25-30 %A); ba é an tonnfhad braite ná 333 nm; teocht chomhthimpeallach; ba é an ráta sreafa ná 1.0 mL/nóim; Ba é an méid insteallta samplach ná 5 μL. Aithníodh ocht gcomhdhúil PhG, eadhon, cistanoside F, echinacoside, 6′-aicéitilacteoside, cistanoside C, cistanoside A, acteoside, 2′-aicéitilacteoside, agus isoacteoside; trí úsáid a bhaint as na substaintí tagartha comhfhreagracha agus modh caighdeánach seachtrach, rinneadh inneachar na 8 PhG thuas a chainníochtú trí anailís HPLC (Fíor 1).

Fíor 1: méarloirg HPLC CDP. Fuarthas ocht gcomhdhúil gliocóisíde feinileatánóideach sa chodán seo, agus rinneadh an t-ábhar iomlán a chainníochtú mar 50.7%. Ba iad seo a leanas na comhdhúile agus a n-ábhar: (1) acteoside F (3.6%), (2) echinacoside (8.8%), (3) cistanoside A (5.0%), (4) acteoside (13.3%), (5) isoacteoside (3.3%), (6) aicteóisíd C (3.6%), (7) 2′-aicéitilacteoside (9.9%), agus (8) 6′-aicéitilacteoside (3.2%).

2.4. Prótacal Turgnamhach Ainmhithe.

Cuireadh iomlán de 60 francach mná fásta Sprague-Dawley d'aois 3 mhí d'aois chun críche ó lár na tástála ainmhithe in Ollscoil Leighis Ningxia, le meánmheáchan tosaigh coirp de thart ar 234 ± 25 g. Bhí na francaigh lonnaithe i dtimpeallacht chaighdeánach shainiúil saor ó phataigin chun a bheith ag luí ar feadh seachtaine amháin. Ansin, rinneadh ainéistéitic ar na francaigh go léir (hiodráit chloral, 100 mg/kg, ip) amháin nó sham ovariectomized (SHAM), nó baineadh dhá ubhagán agus ansin roinnte go randamach i 5 fhoghrúpa: cóireáilte ó bhéal le feithicil (0.5% CMC- Na) mar ghrúpa múnla (OVX), valerate estradiol (1 mg / kg / lá) mar ghrúpa dearfach (EV), agus 60, 120, agus 240 mg / kg / lá de CDP chomh híseal (CDPL), grúpaí dáileog measartha (CDPM), agus ard (CDPH), faoi seach. Riaradh na francaigh go léir ó bhéal go laethúil agus mhair siad ar feadh 3 mhí agus coigeartaíodh an dáileog gach 2 sheachtain, rud a bhí ag brath ar athrú meáchain iomlán an choirp. Ar an lá deiridh den turgnamh ainmhithe, fuarthas 24-uair an chloig fual trí úsáid a bhaint as cáiseanna meitibileach; bailíodh serum ó artaire femoral na francaigh ainéistéiseach; Rinneadh an femora ceart, an tibia, agus na horgáin go léir a scaradh agus a stóráil ag -80 céim C le haghaidh tuilleadh anailíse. D'fhaomh an Coiste Institiúideach um Chúram agus Úsáid Ainmhithe de chuid Ollscoil Leighis Ningxia na turgnaimh ainmhithe a rinneamar.

2.5. Cinneadh Dlúis Mhianraí Cnámh agus Anailís Micrea-CT.

Ar an gcéad dul síos, úsáideadh meaisín ionsúite X-gha défhuinnimh (Lunar, SAM) chun dlús mianraí cnámh iomlán femur ceart gach francaigh a mheas; ar an dara dul síos, baineadh úsáid as an femur céanna chun íomhá 3D de mhicreastruchtúr cnámh trabecular a mheas trí ghaireas scanóir micrea-CT (GE, Meiriceá) a fhostú. Socraíodh an taifeach isotrópach mar 14 μm chun íomhá idéalach 3D a fháil; roghnaíodh an réigiún leasa (ROI) trí na comhordanáidí céanna a shocrú i bpláta fáis femur gach sampla; agus na paraiméadair morphometric cnámh lena n-áirítear scaradh trabecular (Tb.Sp), uimhir trabecular (Tb.N), tiús trabecular (Tb.Th), ábhar mianraí cnámh (BMC), dlús mianraí fíocháin (TMD), agus ábhar mianraí fíocháin (TMC). ) a fuarthas trí anailís a dhéanamh ar an bPoblacht na hÉireann.

Figiúr 2: Éifeachtaí OVX agus 12 seachtaine de chóireáil le CDP nó EV ar dhlús mianraí cnámh iomlán i femur ceart na bhfrancach a ndéantar measúnú orthu trí úsáid a bhaint as ionsúite défhuinnimh X-ghathaithe (n=10/grúpa). Cuireadh sonraí i láthair mar an meán ± SD; ∗p < 0 05, ∗∗p < 0 01, agus ∗∗∗p < 0 001 i gcoinne an ghrúpa OVX; ###p < 0 001 in aghaidh an ghrúpa SHAM.

Figiúr 3: Íomhánna scanadh micrea-CT de mhicrea-ailtireacht femur ceart na bhfrancaigh atá cóireáilte le CDP; léirigh na grianghraif a taispeánadh 4 francach dhifriúla i ngach grúpa: (A) grúpa OVX; (B) grúpa SHAM; (C) grúpa EV; (D) grúpa CDPH; (E) grúpa CDPM; (F) grúpa CDPL. Áirítear ar na paraiméadair tomhaisteábhar mianraí cnámh(BMC), ábhar mianraí fíocháin (TMC), dlús mianraí fíocháin (TMD), scaradh trabecular (Tb.Sp), uimhir trabecular (Tb.N), agus tiús trabecular (Tb.Th). Léirigh na francaigh OVX laghdú suntasach ar an limistéar microarchitecture agus ar an uimhir trabecular. D'aisiompaigh francaigh cóireáilte CDP agus francaigh cóireáilte le EV na torthaí thuasluaite ag an leibhéal céanna tar éis 12 sheachtain de chóireáil. Cuireadh gach luach i láthair mar an meán ± SD. ∗p < 0 05, ∗∗p < 0 01, agus ∗∗∗p < 0 001 i gcoinne an ghrúpa OVX; ###p < 0 001 in aghaidh an ghrúpa SHAM.

Fíor 4: Éifeachtaí OVX agus 12 sheachtain de chóireáil le CDP nó EV ar fhual agus serum Ca agus P chomh maith le PTH agus calcitonin francaigh (n=10/grúpa). Cuireadh na sonraí go léir in iúl mar mheán ± SD. ∗p < 0 05, ∗∗p < 0 01, agus ∗∗∗p < 0 001 i gcoinne an ghrúpa OVX; # p < 0 05, ##p < 0 01, agus ###p < 0 001 i gcoinne an ghrúpa SHAM.

2.6. Measúnacht Bithcheimiceach Séiream agus Fual.

Socraíodh gníomhaíochtaí serum catepsin K, TRAP, SOD, agus GSH, chomh maith le hábhar serum PTH, calcitonin, ERR, MDA, BGP, agus fual DPD, trí fheisteáin imoibrí comhfhreagracha a fhostú de réir threoir an mhonaróra, agus an measadh leibhéal fosfatase alcaileach (ALP) agus ábhar cailciam serum agus fual (Ca) agus fosfar (P) trí mheaisín uathoibríoch a fhostú (Ciba-Corning 550 Diagnostics Corp., Oberlin, OH, USA).

2.7. Anailís Blot an Iarthair.

Cothaíodh oistéaclaistí trí úsáid a bhaint as cealla RAW 264.7 a cuireadh leis le fachtóir a spreagann coilíneacht macrophage (MCSF) agus RANKL. Go hachomair, saothraíodh cealla 1 × 107 RAW 264.7 i 6-phláta tobair i láthair 30 ng/mL de MCSF agus 25 ng/mL de RANKL. Tar éis 6 lá ionduchtaithe, aithníodh na cealla osteoclast aibithe trí úsáid a bhaint as an modh dhaite TRAP leis an trealamh comhfhreagrach, ansin cóireáilte le CDP (0.1, 0.01, agus 0.001 mg/mL , faoi seach) ar feadh 24 h; ansin, bhí na cealla lysed le maolán lysis ina bhfuil 0.5 mmol feinilmethylsulfonyl fluairíd, protease, agus coscairí phosphatase. Scaradh an lysate ansin trí úsáid a bhaint as 10% SDS-PAGE agus aistríodh é chuig membrane PVDF, a ndearnadh iniúchadh air le AKT1, NF-κB-p65, RANKL, PI3K p85, RANK, NFAT2, TRAF6, c-Fos, agus -actin ( 1 : 400) tar éis blocála le bainne neamh-saill 5% ar feadh 2 h. Baineadh agus scrúdaíodh na seicní céanna arís leis na 9 n-antasubstaintí comhfhreagracha thuas, faoi seach, agus ansin aimsíodh iad ag an deireadh ag na bogearraí Image Lab. Rinneadh na turgnaimh arís trí huaire.

2.8. Anailís staitistiúil.

Rinneadh anailís ar na sonraí go léir a fuarthas ó thurgnaimh in vivo agus in vitro, ar a dtugtar an meán ± SD, trí úsáid a bhaint as ANOVA aontreo agus tástáil Dunnett ina dhiaidh sin (bogearraí SPSS 22.0, SPSS, USA); p < 0 05 suntasach go staitistiúil.

3. Torthaí

3.1. Comhdhéanamh Ceimiceach CDP.

Ag baint úsáide as an modh HPLC, ochtcomhdhúile glycosíde phenylthanoidFuarthas sa chodán seo, mar a léiríonn Fíor 1. Trí úsáid a bhaint as tagairtí caighdeánacha agus modh caighdeánach seachtrach, aithníodh agus cainníochtaíodh na comhdhúile agus a n-ábhar mar seo a leanas: (1) acteoside F (3.6%), (2) echinacoside (8.8%), (3)cistanosideA (5.0%), (4) aicteóisíd (13.3%), (5) isoacteoside (3.3%), (6) aicéatóisíd C (3.6%), (7) 2′-aicéiti-ocsaíd (9.9% ), agus (8) 6′-aicéitileacteóisíd (3.2%). Rinneadh inneachar iomlán na n-ocht gcomhpháirt seo a chainníochtú mar 50.7%.

Sliocht CISTANCHE feadán NÁDÚRTHALE hAGHAIDH FÁS CnámhGLYCOSIDES PHENYLETHANOID 75% ECHINACOSIDE 30% ACTEOSIDE 12%

3.2. Éifeachtaí CDP ar Dhlús Mianra Cnámh agus Micriailtireacht Trabecula.

Léirítear dlús mianraí cnámh iomlán na bhfrancach i bhfoghrúpaí éagsúla i bhFíor 2. Breathnaíodh treocht laghdaithe san ábhar dlús mianraí cnámh i bhfrancaigh d’oibríocht mhúnla OVX i gcomparáid le francaigh an ghrúpa SHAM (p < {{ 1}}). Thaispeáin gach francach cóireáilte CDP méadú suntasach ar dhlús mianraí cnámh de 11.2%, 12.0%, agus 10.7% (p < 0 01), faoi seach, i gcomparáid le francaigh an ghrúpa múnla OVX. Ina theannta sin, ag teacht leis na sonraí ar dhlús mianraí cnámh iomlán, léirigh atógáil micrea-CT, chomh maith le cinneadh histomorphometric an femur, gur léirigh na francaigh sa ghrúpa OVX meath soiléir ar ailtireacht trabecular mar fhianaise ar an laghdú suntasach ar líon agus ar réimse na trabecula. chomh maith le méadú suntasach ar Tb.Sp i gcomparáid le francaigh an ghrúpa SHAM. Chuir cóireáil le CDP cosc ​​ar mheathlú OVX san ailtireacht trabecular; mar a léiríonn Fíor 3, méadaíodh luachanna BMC, TMC, agus Tb.N go suntasach, agus tháinig laghdú suntasach ar réimse Tb.Sp, cé nach raibh an chuma air go raibh tionchar suntasach ag oibríocht OVX agus ar luachanna TMD agus Tb.Th. Idirghabháil CDP.

Fíor 5: Éifeachtaí cóireála OVX agus 12-seachtain le CDP nó EV ar ghníomhaíochtaí serum TRAP, catepsin K, DPD, ALP, agus BGP ar francaigh OVX (n=10/grúpa). Cuireadh gach luach i láthair mar an meán ± SD. ∗p < 0 05, ∗∗p < 0 01, agus ∗∗∗p < 0 001 i gcoinne an ghrúpa OVX; # p < 0 05, ##p < 0 01, agus ###p < 0 001 i gcoinne an ghrúpa SHAM.

3.3. Éifeachtaí CDP ar Pharaiméadair Bithcheimiceacha Fual agus Séiream.

Mar a léiríonn Fíor 4, braitheadh ​​treochtaí laghdaithe suntasacha ar leibhéal urinary P agus cion séiream calcitonin i bhfrancaigh den ghrúpa samhail OVX, a bhí beagnach 30% agus 60% níos lú ná na francaigh SHAM (p < 0 001 ), faoi seach, ach níor tugadh faoi deara aon threochtaí soiléire méadaithe nó laghdaithe i leibhéil urinary Ca agus serum Ca chomh maith le serum P agus serum PTH idir grúpaí OVX agus SHAM. Chuir cóireáil le CDP cosc ​​suntasach ar chaillteanas serum P agus Ca i bhfrancaigh OVX, is léir ó na leibhéil serum P agus Ca atá uasrialaithe go háirithe (p < 0 05) i gcomparáid le francaigh ghrúpa samhail OVX. Ina theannta sin, breathnaíodh treochtaí méadaithe calcitonin ach nach raibh suntasach go staitistiúil sna grúpaí dáileog íseal agus ard-dáileog de CDP i gcomparáid leis an ngrúpa samhail OVX.

Fíor 6: Éifeachtaí cóireáil OVX agus 12-seachtain le CDP nó EV ar léiriú ERR, meáchan coirp, agus meáchain útarach agus faighne na bhfrancach (n=10/grúpa). Cuirtear sonraí i láthair mar mheán ± SD. ∗p < 0 05, ∗∗p < 0 01, agus ∗∗∗p < 0 001 i gcoinne an ghrúpa OVX; ###p < 0 001 in aghaidh an ghrúpa SHAM.

3.4. Éifeachtaí CDP ar Fhoirmiú Cnámh agus Marcóirí Ath-Aisithe Cnámh.

Éifeachtaí tairbhiúla CDP ar an innéacs foirmiú cnámh chomh maith le tionchair choisc arresorption cnámhRinneadh cur síos ar na marcóirí i bhFíor 5. Maidir leis na marcóirí foirmiú cnámh, ní raibh tionchar beagnach ag an máinliacht ovarectomized ar leibhéil serum BGP mar gheall ar athruithe neamhsuntasacha a breathnaíodh i ngach grúpa cóireáilte, ach fuarthas feabhsuithe suntasacha staitistiúla de serum ALP araon i íseal (6). 0 mg/kg) agus dáileoga measartha (120 mg/kg) de ghrúpaí idirghabhála CDP i gcomparáid le francaigh an ghrúpa SHAM (p < 0 01). Maidir leis an innéacs ath-ionsú cnámh, feabhsaíodh go mór na leibhéil serum catepsin K agus DPD, chomh maith le TRAP i bhfrancaigh den ghrúpa múnla OVX, thart ar 75.0%, 41.4%, agus 21.0%, faoi seach, i gcomparáid le francaigh SHAM. , agus nuair a dhéileáiltear le CDP, go háirithe an dáileog íseal de 60 mg/kg, cuireadh bac suntasach ar airíonna cathepsin K agus DPD chomh maith le TRAP sa ghrúpa samhail OVX ag 67.3%, 41.4%, agus 25.9%, faoi seach, mar i gcomparáid leis na francaigh sa ghrúpa samhail OVX.

CISTANCHE Tube NÁDÚRTHA LE hAGHAIDH FÁS CnámhGLYCOSIDES PHENYLETHANOID 75% ECHINACOSIDE 30% ACTEOSIDE 12%

3.5. Éifeachtaí CDP ar an Vagina agus útarach chomh maith le Meáchain Iomlána an Choirp.

Breathnaíodh difríochtaí neamhsuntasacha i meáchan coirp iomlán tosaigh na bhfrancach roimh chóireáil i sé ghrúpa (Fíor 6). Mar sin féin, tháinig méadú suntasach ar mheáchan coirp deiridh na bhfrancach sa mhúnla OVX de bharr na hoibríochta ovarectomized, sin beagnach 36.0%, ach tháinig laghdú suntasach beagnach 9{{4} ar mheáchain fhliucha an úiréadra agus na faighne. }.0% agus 60.0%, faoi seach, i gcomparáid le francaigh SHAM (p < 0 001). Cé nár léirigh ábhar ERR aon difríocht shuntasach idir grúpaí OVX agus SHAM, mhéadaigh na grúpaí cóireála go léir lena n-áirítear CDP agus EV go suntasach an leibhéal ERR . Ina theannta sin, nuair a cuireadh cóireáil orthu le EV, fuair an méid thuas meáchain iomlán an choirp chomh maith le cailliúint na vagina agus meáchain útarach francaigh OVX aisiompaíodh go páirteach (p < 0 001) ​​ach ní raibh tionchar ag idirghabháil CDP orthu.

3.6. Éifeachtaí CDP ar Leibhéil Séiream MDA, SOD, agus GSH.

Ní raibh aon difríocht shuntasach staitistiúil in airíonna serum SOD agus GSH idir na grúpaí samhail SHAM agus OVX; mar a chuirtear síos i bhFíor 7, is féidir treocht mhéadaitheach i GSH a thabhairt faoi deara idir an dá ghrúpa thuas. Ina theannta sin, bhí leibhéal an serum MDA uasrialaithe beagnach 50% i bhfrancaigh an tsamhailghrúpa OVX i gcomparáid le francaigh SHAM. Ní raibh tionchar ag cóireáil CDP ar ghníomhaíocht SOD, ach feabhsaíodh maoin GSH go mór le hidirghabháil CDP, agus laghdaigh CDP go háirithe leibhéal MDA 33.9% agus 42.4% ag dáileoga 60 agus 240 mg / kg, faoi seach ( p < 0 001).

3.7. Éifeachtaí CDP ar Leibhéil Léirithe Próitéine.

Mhol ár sonraí, a thaispeántar i bhFíor 8, gur laghdaigh cóireáil CDP go suntasach leibhéil próitéin TRAF6, RANK, agus RANKL i gcomparáid leis an rialú. Cuireadh na conairí comhartha iartheachtacha lena n-áirítear NF-κB faoi chois, agus spreag idirghabháil CDP PI3K/AKT, is léir ón léiriú ar íosrialáil NF-κB-p65, ach rinneadh PI3K p85 agus AKT1 a rialáil. Mar thoradh air sin, tháinig laghdú suntasach ar léiriú NFAT2, agus méadaíodh c Fos tar éis cóireála le CDP ag tiúchan 0.001-0.1 mg/mL. Déantar cur síos ar mheicníocht mholta i bhFíor 9, áit ar laghdaigh CDP na leibhéil RANKL agus RANK, ag laghdú cainníochtaí ceangailteach an ligand seo lena gabhdóir. Laghdaíodh nasc RANKL le RANK tuilleadh trí íosrialáil TRAF6, agus ina dhiaidh sin cuireadh faoi chois na cosáin le sruth lena n-áirítear an cosán NF-κB. I gcodarsnacht leis sin, spreag an cosán comhartha PI3K / AKT, rud a d'eascair ar deireadh le laghdú ar léiriú NFAT2 agus méadú ar an leibhéal c-Fos.

4. Plé

Gliocóisídí feinileatánóideachis comhpháirteanna intuaslagtha in uisce iad atá le fáil go nádúrtha agus atá go forleathan i ríocht na bplandaí íocshláinte [11]. Go dtí seo, tá níos mó agus níos mó taighdeoirí á mealladh ag comhdhúile gliocóisídí feinileatánóideach mar gheall ar a ról soiléir i láimhseáil tinnis agus neamhghnáchaíochtaí daonna éagsúla [13]. Aithníodh líon na gcodán agus na gcomhdhúile bithghníomhacha antasteapórótach, lena n-áirítear gliocóisídí polyphenol agus feinileatánóideach, agus scoiteadh iad ó na iliomad luibheanna míochaine nádúrtha [5, 10, 12, 16, 17]

Fíor 8: Éifeachtaí tiúchain éagsúla CDP ar léirithe próitéine TRAF6 (a), RANKL (b), RANK (c), PI3K (d), AKT (e), NF- κBIA (f), NFAT2 (g), agus c-Fos (h) (n=3/group); normalaíodh an abairt próitéine go -actin, agus léiríodh sonraí cainníochtúla gach próitéine comhartha mar chéatadáin de luach an rialaithe. Cuireadh síos ar shonraí mar an meán ± SD. ∗p < 0 05, ∗∗p < 0 01, agus ∗∗∗p < 0 001 i gcoinne an ghrúpa rialaithe.

Tugtar "ginseng an fhásaigh" ar C. deserticola a thugann próifíl sábháilteachta an TCM inite seo [18, 19] le tuiscint. Mar luibh tonach ginearálta agus bia sláinte nádúrtha a úsáideadh le fada i dtíortha na hÁise, léirigh C. deserticola feidhm thairbheach chun neart na duáin a fheabhsú. Fuarthas amach go raibh TCM, a úsáidtear go traidisiúnta chun fuinneamh agus éirim na duáin a choinneáil, á úsáid go hiondúil chun oistéapóróis a chóireáil, agus chruthaigh sonraí in vitro agus in vivo araon gníomhaíocht fhrith-asteapóróis C. deserticola [20–23], agus is iad comhábhair gliocóisíde feinileatánóideach lena n-áirítear echinacoside agus acteoside na príomh-chomhpháirteanna bithghníomhacha atá sa phlanda íocshláinte inite seo; agus thug gach ceann díobh le tuiscint go measadh ní hamháin echinacoside agus aicteóisíd iad féin ach freisin comhpháirteanna glycosíde feinileatánóideach eile atá i C. deserticola a bhí freagrach as maoin fhrith-asteapóróis an luibh seo. Inár staidéar faoi láthair, baineadh úsáid as roisín macra scagach sábháilteachta fabhrach chun an codán feiniletha noid glycosíde ó C. deserticola a leithlisiú agus a shaibhriú, agus trí úsáid a bhaint as an modh HPLC, tá ocht bpríomh-chomhpháirt glycosíde feinileatánóideach, eadhon, acteoside F, echinacoside, cistanoside A, Fuarthas amach go raibh acteoside, isoacteoside, acteoside C, 2′-acetylacteoside, agus 6′-acetylacteoside, sa chodán glycosíde lethanoid feinile scoite, agus b'ionann an t-ábhar 3.6%, 8.8%, 5.0%, 13.3%, 3.6%, 3.3%. 9.9%, agus 3.2%, faoi seach. Echinacoside, ceann de na príomh-chomhdhúile gníomhaíochta a taifeadadh i C. deserticola [14], bhí sé cruthaithe go raibh gníomhaíocht antiosteoporotic aige; áfach, bhí an dáileog de 270 mg/kg chomh hard sin gur chuir sé teorainn lena chur i bhfeidhm cliniciúil breise [24]. Sna turgnaimh reatha, baineadh úsáid as an gcodán glycosíde feanilethanoid iomlán le dáileog níos ísle de 60-240 mg/kg meáchan coirp/- lá ar fhrancaigh OVX, agus bhí ábhar na gcomhábhar sainaitheanta beagnach 50% íon sa chodán seo trí úsáid a bhaint as. an modh HPLC.

Bhí a fhios go maith gur féidir le OVX oistéapóróis a chur faoi deara, agus creideadh francach OVX mar mhúnla clasaiceach agus oiriúnach chun insamhail a dhéanamh ar oistéapóróis postmenopausal daonna. Ag an am céanna, breathnaíodh laghdú suntasach ar dhlús mianraí cnámh, microarchitecture cnámh trabecular, meáchain fliuch útarach agus faighne, agus leibhéal estrogen, chomh maith leis an bhfeabhsú soiléir ar aisú cnámh agus meáchan coirp, tar éis máinliacht ovariectomy, a bhí i. chuid de bharr caillteanas estrogen [25]. Léirigh ár gcuid sonraí, go dtí seo, go soiléir gur spreag OVX oistéapóróis iarmenopausal go deimhin agus go mbíonn laghdú géar i gcónaí ar cháilíocht na gcnámh, microarchitecture cnámh, agus meáchain fhliucha útarach agus faighne. Toisc gur gníomhaire athsholáthair hormóin ghinearálta é EV a úsáideadh i gcleachtas cliniciúil, úsáideadh é mar rialú dearfach inár dturgnamh in vivo, agus fuarthas meáchan coirp agus meáchain uterus atrophied chomh maith le dlús mianraí cnámh meathlaithe agus microarchitecture cnámh trabecular. táthar ag súil leis aisiompú le forlíonadh EV. Difriúil ó rialú dearfach, ní raibh tionchar ag cóireáil CDP ar na meáchain laghdaithe vagina agus útarach, chomh maith le meáchan coirp iomlán na bhfrancach a fuarthas sa ghrúpa múnla OVX, rud a thug le tuiscint go bhféadfadh CDP foirmiú cnámh a fheabhsú gan na fo-iarsmaí a spreagadh. ar chorp agus fíocháin orgánacha útarach. Cé go raibh leibhéil ERR uasrialaithe go suntasach ag cóireáil CDP, bhí sé díreach cosúil le héifeacht fítea-estrogen nár breathnaíodh aon fo-iarmhairtí ar fhíocháin orgánacha útarach agus faighne. Ina theannta sin, neartaigh cóireáil CDP cáilíocht na gcnámh i bhfrancaigh OVX a chuaigh in olcas le máinliacht ovariectomy.

Ina theannta sin, baineadh úsáid as leibhéil P agus Ca i bhfual agus serum francaigh OVX freisin chun an éifeacht antisteoporotic a léiriú, agus de ghnáth bhí na tiúchain Ca agus P neamhorgánacha ag brath ar leibhéil calcitonin agus PTH [26]. Sa staidéar seo, cé nach bhfuil aon laghdú suntasach nó treochtaí méadaithe i leibhéal eisfhearadh fuail Ca,

Fíor 9: Meicníocht mhóilíneach hipiteáite: D’fhéadfadh CDP cosc ​​a chur ar chaillteanas cnámh ar an francach OVX trí RANKL/RANK/TRAF6-díghníomhú spreagtha NF-κB agus gníomhachtú bealaí PI3K/AKT chomh maith le spreagadh c-Fos agus cosc ​​NFAT2. , is léir ón íosrialáil ar leibhéil slonn TRAF6, RANKL, RANK, NF-κBIA, agus NFAT2, ach rinneadh c-Fos, AKT, agus PI3K a uasrialáil go mór le cóireáil CDP i gcomparáid leis an ngrúpa rialaithe

Fuarthas serum P, serum Ca, agus PTH i bhfrancaigh den ghrúpa múnla OVX, agus breathnaíodh leibhéil urinary suntasacha P agus calcitonin (p < 0 001). Ag teacht leis na sonraí a foilsíodh go raibh laghdú ar leibhéal calcitonin san fhuil mar thoradh ar easnamh estrogen mar gheall ar mháinliacht ovariectomy i gcónaí, tháinig méadú ar leibhéal PTH ar deireadh mar thoradh ar an laghdú calcitonin serum seo, áit ar creideadh Ca mar phríomhrialaitheoir an secretion PTH. Toisc nár léirigh an tiúchan PTH aon difríocht shuntasach idir na grúpaí OVX agus SHAM sa staidéar seo, níor léirigh an leibhéal Ca sa serum agus fual araon aon athruithe soiléire idir an dá ghrúpa thuas. Mar sin féin, fuarthas laghdú suntasach ar chlaonadh ar an leibhéal calcitonin idir na grúpaí OVX agus SHAM, agus dá bhrí sin, tháinig laghdú suntasach ar ábhar P i bhfual OVX. Creidimid go bhféadfadh na sonraí thuas míniú a thabhairt ar an bhfeiniméan contrártha maidir le cén fáth nár léirigh eisfhearadh urinary an leibhéal Ca i bhfrancaigh OVX aon athrú soiléir i gcomparáid le francaigh SHAM, agus d'fhéadfadh baint a bheith ag an bhfeiniméan seo freisin leis an ráta méadaithe láimhdeachais cnámh [27] . Tar éis cóireála le CDP, bhí leibhéil P agus Ca i serum uasrialaithe go háirithe, agus laghdaíodh an t-ábhar P i bhfual i bhfrancaigh OVX, rud a léirigh go bhféadfadh CDP ní hamháin eisfhearadh eilimint mianraí cnámh a chosc ach freisin an t-ábhar serum a fheabhsú. eilimintí, rud a shochtadh go hindíreach caillteanas cnámh.

Ina theannta sin, fostaíodh foirmiú cnámh agus marcóirí ath-ionsú chomh maith leis na heinsímí frithocsaídeacha lena n-áirítear SOD agus GSH chun meicníochtaí bunúsacha frith-aistéapóróis CDP a mhíniú. Cosúil leis na sonraí a foilsíodh, léirigh an leibhéal ALP i bhfrancaigh den ghrúpa samhail OVX treocht méadaithe neamh-suntasach go staitistiúil a léiríonn ráta luathaithe de láimhdeachas cnámh in oistéapóróis postmenopausal [10]. Mar sin féin, tar éis cóireála leis an CDP (60, 120, agus 240 mg / kg / lá), feabhsaíodh maoin ALP go suntasach. Bhí sé ar eolas go maith go raibh meath géar ar leibhéil estrogen mar thoradh ar OVX, rud a fhágann go n-eascraíonn ionsú cnámh sáraithe agus strus ocsaídiúcháin de ghnáth [28], is léir ó na leibhéil TRAP, cathepsin K, agus DPD chomh maith le MDA go háirithe upregulated i bhfrancaigh den. OVX grúpa samhlacha. Mar sin féin, tháinig feabhas i bpáirt ar na meathlúcháin sin ag idirghabháil CDP. Ina theannta sin, léirigh cóireáil francach OVX le CDP (60 agus 240 mg/kg) méadú suntasach ar ghníomhaíocht GSH (p < 0 05). Thug na torthaí thuas le tuiscint gur léirigh CDP éifeacht theiripeach ar oistéapóróis a tharchuirtear le OVX, agus bhí na héifeachtaí seo trí fhoirmiú cnámh a fheabhsú agus ionsú cnámh a shochtadh chomh maith leis an gcóras frith-ocsaídeach cnámh a fheabhsú.

Spreag gníomhachtú RANK ag a ligand RANKL na habairtí NFAT2 agus c-Fos trí chomharthaíocht PI3K/AKT agus NF-κB [29]. Cruthaíodh go raibh NF-κB riachtanach le haghaidh osteoclastogenesis mar go bhféadfadh idirdhealú osteoclast lagaithe le feinitíopa oistéapóróis a bheith mar thoradh ar chur isteach ar NF-κB, agus c-Fos NF-κB uasrialaithe agus léirithe NFAT2 dírialaithe le linn osteoclastogenesis RANKL/RANK/TRAF-spreagtha. Chun tionchar tairbheach CDP ar osteoclastogenesis NFAT2 agus c-Fos-mediated a mheas, rinneadh anailís ar leibhéil léirithe RANKL agus RANK. Bhíothas ag súil leis, chuir CDP bac suntasach ar NFAT2 agus spreag sé leibhéil c-Fos trí na habairtí RANKL agus RANK a íosrialáil. Idir an dá linn, ní raibh maoin intreach kinase ag RANK féin mura ndeachaigh TRAF6 leis chun an chomharthaíocht iartheachtach a spreagadh [3]. Rinne CDP íosrialáil freisin ar léiriú TRAF6, rud a d'eascair laghdú suntasach ar chainníochtaí ceangailteacha RANKL agus RANK. Chlúdaigh meicníocht frith-steoporotic hipitéiseach CDP ar francaigh OVX na conairí comharthaíochta thuas, agus rinneadh cur síos ar rialtóirí i bhFíor 9. Go beacht, laghdaigh CDP leibhéil TRAF6, RANKL, agus RANK, rud a chuir cosc ​​ar na cosáin chomharthaíochta le sruth lena n-áirítear PI3K/AKT agus NF-κB a á spreagadh ag RANKL/RANK, agus ar deireadh laghdaigh siad slonn agus gníomhaíochtaí na bpríomhphróitéiní osteoclastogenic NFAT2 agus c-Fos. Mar sin, thug leideanna iolracha sonraí le tuiscint go bhfuil éifeacht thairbheach CDP ar mheitibileacht chnámh francaigh OVX go príomha trí RANKL/RANK/TRAF6-idirghabháil PI3K/AKT agus bealaí NF-κB.

5. Conclúid

Go hachomair, léirigh na gliocóisídí feanilethanoid iomlán, scoite ó C. deserticola, éifeachtaí tairbhiúla suntasacha ar oistéapóróis postmenopausal de francaigh OVX, agus ba é an acmhainneacht theiripeach maidir le caillteanas cnámh a shochtadh go príomha trí fhoirmiú cnámh a spreagadh agus cosc ​​a chur ar athsorptadh cnámh chomh maith le feabhas a chur ar an frithocsaídeoir cnámh. córas; d’fhéadfadh go mbeadh baint ag na meicníochtaí le RANKL/RANK/TRAF6-gníomhachtú NF-κB spreagtha agus díghníomhú PI3K/AKT chomh maith le spreagadh c-Fos agus cosc ​​NFAT2, agus ar deireadh, cuireadh bac ar dhifreáil osteoclast.

CISTANCHE Tube NÁDÚRTHA LE hAGHAIDH FÁS CnámhGLYCOSIDES PHENYLETHANOID 75% ECHINACOSIDE 30% ACTEOSIDE 12%