Is Bac Intreach é Frithsheasmhacht Apoptóis i gCeall Senescent ar Sheanalú arna Spreagadh ag Gliocóisídí Cairdiacha Cuid 2

Déan teagmháil le do thoiloscar.xiao@wecistanche.comle haghaidh tuilleadh eolais

Mar thoradh ar shuaitheadh ​​ar hoiméastáis K*/Nat de bharr ouabain, bíonn imoibrithe fiseolaíocha éagsúla ann maidir le rialú agus senescent A549 agus END-MSCs

Tar éis dúinn a fháil amach go bhfuil éifeacht senolytic an ouabain ag brath ar chineál cille, rinneamar iarracht a shoiléiriú cad a d'fhéadfadh a bheith mar bhunús leis na difríochtaí a nochtar i bhfreagraí hMSCanna agus A549.Chun na críche sin, rinneamar anailís ar sheansaireacht ocsaídeach strus-spreagtha de END-MSCs agus etoposide. -seansacht spreagtha an A549 níos cruinne.buntáistí cynomoriumIs é an príomh-mheicníocht mhóilíneach gníomhaíochta de gliocóisídí cairdiacha éagsúla ná cosc ​​ar Nat/K móide -ATPase [44]. Is einsím plasma plasma é Nat/K móide -ATPase a phumálann sóidiam amach as an gcill agus potaisiam á phumpáil isteach sa chill i gcoinne grádáin tiúchana. agus mar sin páirt a ghlacadh i gcothabháil K plus agus Na plus homeostasis. Dá bhrí sin, d'fhiafraigh muid an bhféadfadh aon difríochtaí a bheith ann i hoiméastáis ian basal agus ouabain-spreagtha idir cealla rialaithe agus senescent de dhá chineál.

Cliceáil anseo le do thoil chun tuilleadh eolais a fháil

Ba cheart go dtiocfadh scaipeadh ar phoitéinseal an scannáin plasma mar thoradh ar shuaitheadh ​​i K plus agus Na plus homeostasis de bharr ouabain. Mar sin, anuas air sin, d’úsáideamar taiscéalaí fluaraiseacha sainiúla DiBAC4(3) chun acmhainneacht trasmembrane na gceall neamhspreagúil a thomhas. Léiríonn fluaraiseacht méadaithe an dath seo dípolarú membrane.hyacinth fásaighI ngach cineál cille a ndearnadh tástáil air, d'eascair dípolarú membrane intuartha spreagtha ouabain, rud a dhearbhaíonn éagothroime ianach (Fíor 10a). Go háirithe, thugamar faoi deara leibhéil inchomparáide dípolarúcháin membrane i rialú agus END-MSCanna senescent, agus bhí membrane i bhfad níos mó dípolarithe mar thréith ag an sean-A549 i gcomparáid le cealla rialaithe A549.

Iarmhairtí tábhachtacha eile a bhaineann le dírialú ianach ná athruithe ar acmhainneacht membrane mitochondrial (MP).

Mar sin, ag baint úsáide as an taiscéalaí fluaraiseacha JC-1 rinneamar measúnú ar MMP i gcealla rialaithe agus séineachais ar chóireáil ouabain. Ba cheart a thabhairt chun suntais go sonrach gurb iad na tréithe coitianta a bhaineann le cealla séanacha ná laghdú MMP a léiríonn mífheidhmiú miteacoindria, athruithe ar mheitibileacht fuinnimh, agus leibhéil mhéadaithe speiceas ocsaigine imoibríocha[45]. De réir mar a bhíothas ag súil leis, bhí MMP i gcealla END-MSCanna sinescent agus A549 níos ísle ná sna cinn rialaithe,

cé nach ndearna an laghdú seo difear d'inmharthanacht na gceall senescent (Figs. Id, 6a,10b).Modh eastóscadh flavonoid pdfCosúil leis na torthaí thuas, d'eascair dípolarú MMP thar a bheith spreagtha ag ouabain sa senes-cent A549 i gcomparáid lena gcomhghleacaithe iomadaithe, agus ba bheag an éifeacht a bhí ag END-MSCanna rialaithe agus senescent ar MMP (Fíor 10b). Agus achoimre á dhéanamh ar na torthaí a bhfuil cur síos orthu sa chuid seo, is féidir linn a thabhairt ar an gconclúid go n-eascraíonn blocáil Na plus /K plus -ATPase le ouabain go dípolarú suntasach ar membrane plasma agus titim MMP i gcás séanasach A549, contrártha le END-MSCS senescent.

Athruithe ar mheicníochtaí K móide allmhairí ouabain-friotaíocht senescent END-MSCs

Chun meicníochtaí a shoiléiriú a dhéanann idirghabháil ar athruithe de bharr ouabain i bpolarú membrane agus MMP idir séiseach A549 agus END-MSCanna, bhaineamar leas freisin as cur chuige bithfhaisnéiseach ardleibhéil. Ba í aidhm na hanailíse ná gnéithe tras-traipeolaíocha a d’fhéadfadh a bheith ann a dhéanfadh idirghabháil ar chineál cille spleách ouabain-fhriotaíocht nó íogaireacht na gceall sinseach a nochtadh. I bhfocail eile, chuireamar an cheist: cén difríocht atá idir seangacht END-MSC (cealla ouabain-resistant) agus sinescence an A549 (cealla ouabain-íogair)? Chun an cheist seo a fhreagairt, d’úsáideamar trí thacar sonraí seicheamhaithe RNA neamhspleácha (RNA-Seq). Ba é an chéad cheann anailís RNA-Seq

Fíor.6 Bailíochtú samhail seanaoise an A549 arna spreagadh ag étópóisíd. Léiríonn cealla Senescent A549 caillteanas iomadaithe, b faigheann siad méid cille ardaithe, c leibhéal uathfhluaraiseachta, agus d gníomhaíocht SA-b-Gal i gcomparáid leis na cinn rialaithe. e Leibhéil fosfarylation de p53 agus Rb agus leibhéil slonn de phróitéiní p21 agus HMGBI i rialú agus senescent A549. Is ionann na luachanna a chuirtear i láthair agus meán±SD. I gcás grúpaí iolracha cuireadh comparáidí ag ANOVA aontreo i bhfeidhm, n=3, ns gan a bheith suntasach, ***p<0.001. for="" pair="" comparisons="" at="" b,c,="" and="" d="" welch's="" test="" was="" used,n="3" for="" b="" and="" c,n="50" for=""><0.001.>flavonoidsIs é 500 μm barraí scála le haghaidh íomhánna. Baineadh úsáid as GAPDH mar rialú luchtaithe ar rialú agus END-MSC seanaoise a rinne muid. Ba é an dara ceann an tacar sonraí le haghaidh rialaithe agus senescent A549 a íoslódáil ó GEO [43]. Is fiú a thabhairt faoi deara, go raibh na coinníollacha a chothaíonn seanchas ag an am céanna leo siúd a cuireadh i bhfeidhm sa staidéar seo agus sna staidéir phíolótacha ar sheineálú de bharr gliocóisídí cairdiacha. Agus ba é an tríú tacar sonraí le haghaidh IMR-90 rialaithe agus senescent a fuarthas go díreach ón staidéar ar gliocóisídí cairdiacha mar chomhdhúile senolytic [25]. Is é an rud is tábhachtaí ná gur cruthaíodh go raibh IMR-90 seans maith d’anailís a tharlódh ó ouabain. Ba cheart a thabhairt faoi deara go dtiocfadh torthaí míchuí as comparáid a dhéanamh ach le dhá thacar sonraí atá ábhartha do END-MSCanna agus A549, mar go mbeadh an difríocht atá á lorg idir an próiseas seanaoise i END-MSCanna agus A549 do-aitheanta ó na héagsúlachtaí arna n-idirghabháil ag anailís dá leithéid. éifeachtaí baisc teicniúla éagsúla (ie cineál meaisín seicheamhaithe, rith coinníollacha an tsampla). Chun aon éifeachtaí baisc a íoslaghdú, rinneamar comparáid idir tacar sonraí amháin do chealla atá frithsheasmhach in ouabain (END-MSCs) agus péire do chealla atá íogair ó thaobh ouabain (A549, IMR-90). Chun ábharthacht na hanailíse comparáidí breise a bhailíochtú, rinneamar Anailís ar Phríomh-Chomhpháirt don fho-thacar de ghéinte a bhaineann leis an téarma GO “seansacht cheallacha” (GO 0090398) bunaithe ar an tacar sonraí achoimre ina raibh samplaí ó na trí thurgnaimh ar a ndearnadh cur síos. Go deimhin, do gach cineál cille samplaí cnuasaithe ina dhá ghrúpa ar leith - an rialú agus na cinn seanaoise (Fig.10d).

is féidir cistanche frith-aging

Chun anailís a dhéanamh ar ghéinte a chuirtear in iúl go difreálach (DEGanna) le linn na cealla ouabain-dhíonach-dhíonach agus íogair, ghineamar an tsamhail staidrimh a thug achoimre ar dhá thuarthóir agus a n-idirghníomhaíocht. Taispeántar cur i láthair scéimeach na hanailíse i bhFíor 10c.Go hachomair, roinneadh an chéad réamhaithriseoir sa mhúnla na samplaí go léir de réir foghrúpaí rialaithe agus seanteachta, an dara ceann - trí fhriotaíocht ouabain nó íogaireacht ouabain, agus léirigh an chomhpháirt dheireanach sa mhúnla an idirghníomhú an dá thuarthóir. Tá toradh na tástála slonn difreálach don athróg dheireanach curtha i láthair i dTábla Forlíontach 1.

Rinneamar ansin anailís saibhrithe tacair géine (GSEA) i dtéarmaí Ointeolaíocht Ghéin (GO) do Phróisis Bhitheolaíocha (BP) (Tábla Forlíontach 2). Go háirithe, i measc na bpróiseas saibhrithe go suntasach, fuaireamar go raibh 'allmhairiú ian potaisiam' agus 'Rialáil dhearfach ar iompar trasmembrane caitín uasrialaithe le linn seanaoise END-MSCs frithsheasmhach in aghaidh ouabain i gcomparáid le seanaoise cealla íogair ouabain (Fíor 10e). ). I measc na liostaí géine saibhrithe lárnacha a bhaineann leis na próisis seo bhí KCNJ2, KCNJ14, KCNJ8, SLC12A7, SLC12A8, WNK4 a bhí uasrialaithe go suntasach i END-MSCanna senescent (Fíor 10f). Is bealaí potaisiam den chineál ceartaitheoir isteach iad na próitéiní atá ionchódaithe ag géinte KCNJ, a bhfuil claonadh níos mó acu ligean do photaisiam sreabhadh isteach i gcill seachas amach as cill.úsáidí hesperidinSLC12 teaghlach de iompróirí clóiríd cation-you-pled. Ionchódaíonn géine WNK4 le haghaidh serine/treonine kinase a fheidhmíonn mar ghníomhaí ar chomh-iompróirí clóiríd atá cúpláilte le sóidiam agus mar choscóir ar chomh-iompróirí clóiríd atá cúpláilte le potaisiam. Le chéile, thug na torthaí seo le tuiscint gur féidir le END-MSCanna senes-cent END-MSC ídithe K intracellular ídithe a athbhunú ar bhealach níos éifeachtaí ná cealla senescent A549 agus mar sin is féidir iad a bhainistiú le héagothroime ianach de bharr ouabain.

Tá taispeáint Senescent END-MSC ardaithe

apoptosis-friotaíocht i gcomparáid leis na cinn rialaithe, cé nach bhfuil senescent A549

Tá ról na K móide intracellular i rialáil bás cille bunaithe go maith [46]. Spreag na difríochtaí a nochtar idir END-MSCs senes-cent agus cealla A549 sa chumas K intracellular K móide hoiméastáis dúinn comparáid a dhéanamh idir an fhriotaíocht struis iomlán a fuarthas le linn seanaoise an dá chineál cille. Tá sé ar eolas go bhfuil an suaitheadh ​​​​i homeostasis ianach ag gabháil le strusanna exogenous, rud a fhágann go ndéantar iain éagsúla a mhalartú go tapa, lena n-áirítear K móide idir an chill agus a timpeallacht [46]. Braitheann torthaí tionchair struis go mór ar chumas na gceall an chothromaíocht ianach incheallach chuí a athbhunú. Mar a léirítear i bhFíor 10e,f, bhí an t-uasrialú K móide allmhairí ag gabháil le seanaoise END-MSCanna a thugann le tuiscint gur le linn

Fig.10 Tá END-MSCanna sean-fhrithsheasmhach in aghaidh Ouabain in ann suaitheadh ​​hoiméastáis K plus/Nat de bharr ouabain a athbhunú trí iompórtáil éifeachtach K plus, cé go bhfuil an cumas seo in easnamh i gcealla síneacha íogair óuabain. a Cinneadh féideartha membrane ar END-MSCanna rialaithe agus séanacha agus cealla A549 roimh agus 24 h tar éis cóireála ouabain, ag baint úsáide as taiscéalaí fluaraiseacha DiBAC4(3). b Meastóireacht fhéideartha membrane mitochondrial ar chealla END-MSC agus A549 rialaithe agus senescent roimh agus 24 h tar éis cóireála ouabain, ag baint úsáide as taiscéalaí fluaraiseacha JC-1. c Dearadh na hanailíse comparáideacha bithfhaisnéise ar thrí thacar sonraí neamhspleácha RNA-Seq.d Anailís ar Phríomh-Chomhpháirt don fho-thacar de ghéinte a bhaineann leis an téarma GO “seansacht cheallacha” (GO 0090398) bunaithe ar na sonraí comhcheangailte ó thrí thacar sonraí neamhspleácha RNA-Seq . e Torthaí GSEA do na géinte a chuirtear in iúl go difreálach idir na cealla atá frithsheasmhach in aghaidh anailíse ouabain-mheánaithe (END-MSCanna) agus na cinn atá íogair d’anailís trí mheán ouabain (A549 agus IMR-90) le haghaidh ‘Rialachán dearfach ar iompar trasmembrane caitian’ agus 'Próisis bhitheolaíocha allmhairithe ian potaisiam. f Léarscáil teasa a léiríonn na géinte lárnacha saibhrithe do phróisis bhitheolaíocha 'Rialáil dhearfach ar iompar trasmembrane caitian' agus 'Iompórtáil ian potaisiam'. Is ionann luachanna agus meán±SD. Rinneadh measúnú ar thábhacht staitistiúil i dtástáil an Mhic Léinn: ns gan a bheith suntasach,*p<><><>

forbairt seanaoise Cuireann END-MSCs lena gcumas leibhéil K móide a athbhunú. Is díol spéise é nach raibh muid in ann claonadh comhchosúil a nochtadh maidir le seanchas an A549, agus mar sin ba chosúil nach bhfuair an A549 aon ghnéithe sonracha a bhain le hallmhairiú K* le linn dul chun cinn na seanaoise. De réir na sonraí liteartha, tá laghdú de bharr strus ar K* intracellular agus neamhábaltacht a leibhéal a chur ar ais i bhfabhar gníomhachtú caspáis agus núicléas agus mar sin moltar gur fachtóir pro-apoptotic iad [46].

Ag teacht leis an moladh seo, ag baint úsáide as anailís bhithfhaisnéiseach ar na tacair sonraí RNA-seq thuas, nocht muid laghdú suntasach ar na próisis a bhaineann le apoptosis le linn seanaoise END-MSCs i gcomparáid le A549 agus IMR-90 (Fíor lla). . Ina theannta sin, tréithrítear seanaoise A549 agus IMR-90 ag uas-rialáil ghéinte pro-apoptotic, lena n-áirítear BAD, BAX, BOK, BAK-1, agus NOXA (Fíor 11b). Tugann na sonraí seo le fios go bhfaigheann END-MSC feinitíopa atá frithsheasmhach in apoptóis le linn seanaoise, agus go mbíonn IMR -90 agus A549 seanaoise seans maith go apoptóis (Fíor 11b). Chun an bhreathnóireacht seo a neartú, rinneamar anailís chomh maith ar thacar sonraí micrea-eagar le haghaidh AD-MSCanna senescent rialaithe agus macasamhail a rinne réamhfhreastal freisin ar fhriotaíocht ouabain le linn seanaoise mar a léirítear thuas (Fig.4g). Agus anailís á déanamh againn ar leibhéil slonn na ngéinte a bhaineann le apoptóis, thugamar faoi deara feinitíopa ar leith atá frithsheasmhach in aghaidh apoptóis de AD-MSCanna senescent cosúil leis sin de END-MSCanna senescent (Fig.S8a Forlíontach, b).

Chun a fhíorú torthaí na hanailíse transcriptomic, measta againn leibhéil léiriú na géinte a bhaineann le apoptosis agus K móide allmhairiú sa dá chineál cealla senescent-END-MSCs agus A549 ag RT-PCR (Fíor Forlíontach S9). Ina theannta sin, rinneamar anailís ar léiriú an liosta géine céanna ag baint úsáide as samhlacha ceallacha eile atá frithsheasmhach in ouabain agus íogair ó thaobh ouabain, DP-MSCanna senescent cóireáilte doxorubicin, agus SK-Help senescent cóireáilte etoposide, faoi seach (Fíor Forlíontach S9). Mar a léirítear i bhFíor Fhorlíontach S9, léirigh an dá chineál END-MSCanna ouabain-resistant cealla-senescent END-MSCs agus DP-MSCs patrúin léirithe géine comhchosúla, go sonrach KCNJ2, SLC12A agus WNK4 rannpháirteach in K móide athchóiriú a bhí upregulated, bhí íosrialú BAX proapoptotic, agus antiapoptotic MCL-I a bhí upregulated. Ina theannta sin, bhí patrún slonn na ngéinte céanna difriúil leo siúd a breathnaíodh do A549 íogair ó thaobh ouabain agus SK-Hep1. Deimhníonn na torthaí seo ár sonraí tras-traipeolaíocha agus neartaíonn siad an chonclúid maidir le próifílí éagsúla apoptóis a fuarthas le linn seanaoise cineálacha éagsúla cille.

Rinneamar tástáil arís an bhféadfadh tionchar a bheith ag na hidirdhealuithe a breathnaíodh i gcúlra apoptosis le linn seanaoise END-MSC agus A549 ar fhriotaíocht struis iomlán na gceall seanaoise. Chun é sin a dhéanamh, rinneamar measúnú ar inmharthanacht cille ar strus ocsaídiúcháin agus staurosporine, a chuirtear i bhfeidhm go hiondúil chun apoptosis a spreagadh. Go deimhin, d'éirigh le END-MSCanna seanaoise a bheith i bhfad níos resistant don dá strus i gcomparáid lena gcomhghleacaithe rialaithe (Fíor 1lc). Ar an taobh eile, léirigh cealla A549 staid vice versa, toisc go raibh claonadh i gcealla seanaoise a bheith níos íogaire i leith bás cille de bharr strus (Fíor 11d). Aistríonn an bhreathnóireacht seo an paraidím atá ann cheana féin go bhfuil friotaíocht feabhsaithe báis ina ghné choitianta d’aon chineál cealla séiseach, rud a léiríonn a shainiúlacht cille soiléir.

Bunaithe ar na sonraí thuas, ghlacamar leis gur cheart go gcruthódh laghdú "cosaint" apoptosis ar END-MSCanna seanaoise coinníollacha fabhracha le haghaidh tuilleadh anailíse. Maidir leis seo, dhíríomar ar bhall aitheanta antiapoptotic de BCL-2 próitéiní teaghlaigh—MCL-1, ós rud é go raibh a shloinneadh uasrialaithe i END-MSCanna senescent resistant apoptosis (Fíor 1 lb agus Fig. .S9a). Chuige sin, rinneamar réamhchóireáil ar END-MSCanna rialaithe agus séanacha le A-1210477 an t-inhibitor sainiúil MCL{-1, agus ansin chuireamar gliocóisídí cairdiacha i bhfeidhm chun anailís a spreagadh. Is fiú a thabhairt faoi deara, ní raibh aon éifeacht ag A-1210477 féin ar chumas iomadú na gceall rialaithe agus ar inmharthanacht na gceall sinseach mar a léirítear ar na cuair fáis (Fíor 1le). Mar thoradh ar chur i bhfeidhm gliocóisídí cairdiacha ina dhiaidh sin tháinig laghdú ar líon na gceall inmharthana, áfach, bhí an éifeacht níos suntasaí i ESCanna senescent (Fig.11f). Mar sin, nuair a cuireadh cosc ​​ar MCL-1 le A{-1210477 bhí ESCanna seantuiscthe i dtreo báis de bharr ouabain, rud a léirigh anailís. Ba bhac intreach d'anailís éifeachtach arna spreagadh ag gliocóisídí cairdiacha í an fhianaise deiridh ar fhriotaíocht apoptóis a fuarthas le linn seanaoise END-MSC.

Plé

Laistigh den staidéar reatha, rinneamar tástáil ar éifeachtaí senolytic na gliocóisídí cairdiacha, eadhon ouabain agus bufalin, ar HMSCs. Aithníodh le déanaí go bhfuil éifeacht cíteatocsaineach roghnach ag an dá chomhdhúil ar chealla séineachais (samhlacha seandachta a tharchuirtear le oncogene-/ther-apy) de bhunús éagsúla, lena n-áirítear cealla príomhúla IMR-90,HUVEC, ARPE-19,T/ C-28 agus cealla ailse SK-Help,A549,SK-Mel-5,MCF7,HCT116, HaCat,H1299,U373-MG,H1755[25,26]. Gan choinne, táimid ní raibh siad in ann aon éifeachtaí cíteatocsaineacha fabhracha a bhí ag ouabain ná ag bufalin a nochtadh ar END-MSCanna soineantacha i gcomparáid leis na cinn rialaithe. Is é an rud is tábhachtaí ná gur fíoraíodh an easpa anailíse trí úsáid a bhaint as hMSCanna a fuarthas ó fhíochán saille, laíon déidliachta agus glóthach Warton, agus samhlacha seanaoise éagsúla. Mar thoradh ar an dara ceann moladh dúinn go bhféadfadh friotaíocht in aghaidh anailíse spreagtha ag gliocosíd chairdiach a bheith mar ghné choitianta de hMSCanna. Ag an am céanna, bhíomar in ann apoptosis a aslú go fabhrach i senescent A549 agus SK-Help, agus dá bhrí sin atáirgeadh éifeacht senolytic de gliocóisídí cairdiacha a thuairiscítear sna hailt ábhartha [25,26]. Agus cealla frithsheasmhach in aghaidh anailíse ouabain-spreagtha (óuabain-resistant/ouabain-íogair) ar fáil, rinneamar iarracht na bunchúiseanna a bhí mar bhonn leis an difríocht seo a shoiléiriú. Tá meicníocht mhóilíneach choitianta na gníomhaíochta gliocóisídí cairdiacha ceangailteach don Nat/K móide -ATPase agus cuireann sé bac ar a ghníomhaíocht. Trí ATP a hidrealú, cinntíonn an einsím seo caidéalú Na móide amach as an gcill agus iompórtáil K móide isteach sna cealla agus mar sin coinnítear grádán leictriceimiceach fiseolaíoch, hoiméastáis ianach, pH cheallacha, agus toirt cille atá riachtanach do mharthanas agus d'fheidhmiú cille [47]. Mar sin, rinneamar tuairimíocht go bhféadfadh cumas senolytic an ouabain a bheith ag brath ar dhéine an díchothromaithe K plus/Nat sna cealla cóireáilte. Ag teacht leis an moladh seo, thugamar le fios gur tharraing ouabain dípolarú níos suntasaí ar membrane plasma agus titim MMP san A549 a bhí íogair ó thaobh ouabain.

Go ginearálta, léiríodh go raibh an tionchar a bhí ag cosc ​​Nat/K móide -ATPase ar mharthanas cille sainiúil don chineál cille. Mar shampla, léiríodh go raibh ouabain in ann apoptosis a neartú i limficítí, i gcealla Jurkat, agus i gcealla epithelial canine, agus níor éirigh leis bás a spreagadh i gcealla epithelial ón aorta francach, cealla gráinníní cerebral francach, agus limficítí feadánacha LLC-PK1 proximal duánach muc in ainneoin modhnú comhchosúil. den chóimheas cationic [48-54]. Is é ceann de na meicníochtaí molta de ghníomhaíocht proapoptotic ouabain ná ídiú intracellular atá i bhfabhar crapadh apoptotic, gníomhachtú caspases, agus tús a chur le cláir apoptotic [46, 47]. Ag cur san áireamh caillteanas inchomparáide K móide ach éifeacht contrártha ar ionduchtú báis a fuarthas do mhúnlaí atá frithsheasmhach in ouabain agus atá íogair ó thaobh ouabain, mholamar na difríochtaí i gcórais chúitimh an chaidisiúin. Ba cheart go n-eascródh an laghdú ar leibhéal K móide intracellular go bunúsach le gníomhachtú an K móide allmhairiú ón spás eischeallach mar chúiteamh ar an easpa comhcheangail seo. Mar sin, d'fhéadfadh éifeachtacht K plus athchóiriú a bheith mar bhonn le réamhshuíomh apoptosis ar chóireáil ouabain. Chun an moladh seo a thástáil, chuireamar anailís chasta bhithfhaisnéiseach i bhfeidhm ag déanamh comparáide idir athruithe ar shínithe tras-oibre le linn seanaoise cealla atá frithsheasmhach in ouabain (END-MSCs) agus cealla atá íogair ó thaobh ouabain (A549 agus IMR-90). Thugamar faoi deara uas-rialú láidir ar na próisis a bhaineann le hallmhairiú ian potaisiam le linn seanaoise END-MSC, agus le linn seanaoise A549 agus IMR a bhí íogair ó thaobh oua-bain{-90 níor tháinig aon athrú ar na próisis seo nó tháinig laghdú orthu fiú. Bunaithe ar an méid sin is féidir linn tuairimíocht a dhéanamh gur féidir le END-MSCanna senescent déileáil go héifeachtach le ídiú K móide ouabain-spreagtha trí chórais ghníomhacha allmhairithe caitian, a chuireann cosc ​​​​ar ionduchtú apoptosis. Ar an taobh eile de, tá an chuma ar an scéal nach bhfuil ár n-bain-íogair seanaoise A549 agus IMR{-90 in ann dul i ngleic le caillteanas K móide, agus dá bhrí sin tá seans ann go bhfuil apoptosis ann. cealla senescent A549, rud a léiríonn éagothroime ianach fhuaimnithe atá tipiciúil do chealla ag fáil bháis.

Seachas a bheith ina ghné uathúil de apoptosis spreagtha le ouabain, is dócha gurb é titim ábhar intracellular K móide an tréith choitianta de bhás apoptotic a spreagann strusanna éagsúla, m.sh. cóireáil staurosporine agus strus ocsaídiúcháin [46]. Dá réir sin, ba cheart go dtiocfadh laghdú ar fhriotaíocht struis iomlán mar thoradh ar chumas laghdaithe senescent A549 chun cíteaplasma K móide a athbhunú. Mar sin féin, tá an nóisean seo contrártha leis an sainmhíniú nua-aimseartha ar senescence cille, a deir go bhfuil cealla senescent an-resistant a apoptosis [16]. Ba cheart a thabhairt chun suntais go sonrach go raibh friotaíocht feabhsaithe apoptosis mar bhunús d'fhorbairt anailíse [16, 17].

Téann an chéad lua ar fhriotaíocht strus méadaithe na gcealla senescent siar go dtí 1995 nuair a fuarthas amach go raibh fibroblasts senescent macasamhail níos resistant a tharraingt siar serum i gcomparáid leis na cinn rialaithe [55]. Lean an staidéar tosaigh seo le líon teoranta imscrúduithe a léirigh go bhfuil cealla senescent níos resistant do solas UV, staurosporine, thapsigargin, agus strusanna eile ná a gcomhghleacaithe iomadú [56, 57]. Mar sin féin, tá muid i bhfad ó na chéad cheann a d'ardaigh an cheist maidir le friotaíocht feabhsaithe apoptosis mar ghné ghinearálta cealla senescent. Dá bhrí sin, san athbhreithniú a foilsíodh i 2003, tuairiscíodh go "... nach bhfuil friotaíocht apoptosis gné ghinearálta de chealla séiseach, a d'fhéadfadh a bheith chomh maith apoptotic seans maith ag brath ar an gcineál cille agus spreagthaí apoptotic..."[58]. Go deimhin, léirigh roinnt sonraí íogaireacht níos airde de chealla seanaoise i leith apoptosis de bharr strus ná mar a bhí ag cealla rialaithe [59-61]. Mar shampla, bhí HUVECanna senescent níos mó seans maith go apoptosis a tharlódh de bharr LDL ocsaídithe nó TNFa i gcomparáid le cealla rialaithe[61]. In ainneoin na conspóide soiléir, tháinig an t-amhras deireanach le feiceáil in 2015 agus bhí sé mar seo a leanas: "Is cosúil go bhfuil amhras ann go bhfuil friotaíocht apoptosis domhanda ina ghné ghinearálta de chealla seanaoise"[62]. Sa bhliain chéanna, foilsíodh an chéad staidéar a d'aimsigh anailís [16]. ]. Laistigh den staidéar seo, d'aibhsigh na húdair an léiriú méadaithe ar líonraí géine pro-marthanais i gcealla senescent a chuir lena n-aghaidh fheabhsaithe ar apoptosis. Mar sin, ar dtús, b'ionann senolytics agus na drugaí chun díriú ar phróitéiní a chosnaigh cealla seanaoise ó apoptosis. Spreag fionnachtain anailísíochta mar aon le torthaí iontacha ar bhaint cealla senes-cent ag baint úsáide as lucha transgenic INK-ATTAC flurry staidéar ag cuardach na gcomhphunt nua le gníomhaíocht hemolytic [16-26,63]. Le dhá bhliain anuas, foilsíodh neart léirmheasanna ar anailísíocht [13-15,64-66]. Mar sin féin, ós rud é nach raibh 2015 frithsheasmhacht feabhsaithe apoptosis de chealla senescent ina ábhar díospóireachta, ach, i ndáiríre, ní raibh sé tástáil laistigh de na staidéir.

Is díol spéise é, nuair a dhéantar comparáid idir sínithe trascríobhacha de chealla frithsheasmhacha ouabain (END-MSCs) agus cealla atá íogair ó thaobh ouabain (A549 agus IMR-90), fuaireamar amach nach raibh ach seanchas END-MSCanna ag gabháil le fáil fógra infheicthe. próifíl frith-apoptotic. Os a choinne sin, is sainairíonna é seanaoise an A549 agus an IMR-90 ná uas-rialáil ghéinte pro-apoptotic, lena n-áirítear BAD, BAX, BOK, BAK-1, NOXA, agus mar sin de. Rud atá tábhachtach, leathnaíodh na torthaí seo trí úsáid a bhaint as cealla eile ouabatin-resistant DP-MSCs. Ar thaobh amháin, tugann na torthaí seo míniú móilíneach breise ar an easpa anailíse spreagtha ouabain sna hMSCanna, agus, ar an taobh eile, léiríonn siad go soiléir go n-éiríonn an A459 agus IMR{-90 tuartha d’apoptosis le linn seanaoise. Is fiú a thabhairt faoi deara, go raibh ár sonraí maidir le hathruithe tras-trascríobhacha i ngéinte a bhaineann le apoptosis in IMR senescent-90 ag an am céanna leis na torthaí a cuireadh i láthair, ach nár pléadh, san alt a d’fhoilsigh Guerrero et al., mar thacair tacair le haghaidh IMR rialaithe agus senescent{ Tháinig {19}} cill ón staidéar seo [25]. Nocht an anailís bheacht ar an mapa teasa a cuireadh ar fáil sa staidéar seo go raibh BAX, BAD, BAD, BAKI, agus NOXA in IMR senes-cent-90 i gcomparáid leis na cealla rialaithe. Ina theannta sin, tá Baar et al. Nochtadh freisin upregulation "gan choinne" proapoptotic agus downregulation na ngéinte antiapoptotic in IMR seanaoise-90, ag lua gur chóir go mbeadh an IMR seanaoise-90 tús le dul faoi apoptosis [21].

D'fhonn ár mbreathnóireacht a neartú, rinneamar comparáid idir friotaíocht rialaithe agus senescent END-MSCs agus A459 leis an strus spreagthach-ocsaídiúcháin is coitianta a spreagann apoptóis agus staurosporine. De réir thorthaí ár n-anailís bhithfhaisnéiseach, d'éirigh le END-MSCanna seanaoise a bheith i bhfad níos resistant ó thaobh strus de ná cealla rialaithe. Ag an am céanna, léirigh senescent A549 go raibh an t-imoibriú contrártha beagán níos so-ghabhálaí ná cealla rialaithe don dá chineál spreagthaigh struis. Dá bhrí sin, d’fhéadfadh gníomhaíocht senolytic de gliocóisídí cairdiacha, le haghaidh A549 ar a laghad, a bheith idirghabhála ag an réamhshuíomh de chealla síneacha den bhunadh seo chuig apoptosis i gcomparáid lena gcomhghleacaithe rialaithe, ach d’fhéadfadh an méadú ar líon na n-easpa senolysis de bharr ouabain i hMSCanna a mhíniú. friotaíocht apoptotic foriomlán le linn seanaoise na gceall seo. Ina theannta sin, de bharr lagú “cosaint antapoptotic” de bharr cosc ​​MCL-1 bhí END-MSCs réamh-mheasta ar seineolaíocht de bharr gliocóisídí cairdiacha. Cé go raibh muid in ann an senolysis inmhianaithe ar END-MSCanna a bhaint amach trí chosc a chur ar MCL-1, níl an chuma ar an scéal go bhfuil an straitéis chun léiriú na ngéinte frith-apoptotic nithiúla a mhodhnú chun hMSCanna senescent a réamhshuíomh go seinealú an-gealtach, ós rud é go bhfuil an abairt d’fhéadfadh go mbeadh difríocht idir dinimic na ngéinte nithiúla frith- nó pro-apoptotic idir cealla de bhunús éagsúla. Creidimid go bhfuil éadáil na próifíle "frith-apoptotic" mar a thugtar air le linn seanaoise cille, seachas athruithe ar na géinte nithiúla frith- nó pro-apoptotic, freagrach as friotaíocht ouabain, maidir leis seo d'fhéadfadh an fhéidearthacht an phróifíl iomlán a athrú. cuma níos réasúnta.

D’fhéadfaí ár gconclúidí a leagann béim ar fhriotaíocht apoptóis a fuarthas le linn na hMSCanna a bheith ina bhac intreach ar anailís éifeachtach a leathnú i bhfad níos faide ná gliocóisídí cairdiacha. Go háirithe, fuarthas go raibh hMSCanna senescent frithsheasmhach do chomhdhúile senolytic eile. Go deimhin, trí anailís a dhéanamh ar an bhfianaise atá ann cheana féin fuaireamar amach go bhfuil comhdhúile éagsúla leis an ngníomhaíocht senolytic luaite, lena n-áirítear navitoclax, nicotinamide riboside, danazol geldanamycin, ganetespib, fisetin, coscairí BCL-XL, quercetin, etomoxir, antimycin A, FOXO4-DRI ,17-Ní raibh DMAG éifeachtach maidir le baint spriocdhírithe réamhaidéipicítí daonna senescent (cealla réamhtheachtaithe cosúil le fibroblast a dhíorthaítear ó fhíochán adipose daonna) agus HMSC ó smeara [17-19, 36, 40]. Tá na sonraí maidir le heaspa anailíse i hMSCanna ag teacht salach ar a chéile ar na torthaí spreagthacha a fuarthas ag baint úsáide as samhlacha lucha in vivo, rud a léiríonn torthaí dearfacha ar chur i bhfeidhm córasach na hanailíse [37, 38]. Mar shampla, léiríodh go bhféadfadh imréiteach gascheall gland salivary senescent ag baint úsáide as ABT263 cosc ​​a chur ar xerostomia radaiteiripe-spreagtha [38]. Ina theannta sin, chuir deireadh le MSCanna smeara seanaoise trí quercetin foirmiú smeara [37]. Rud atá tábhachtach, léiríodh go bhfreagraíonn lucha seanaoise agus MSCanna francach murab ionann agus hMSCanna d’anailísíocht. Mar shampla, bhain quercetin, quercetin-tin ＋dasatinib, agus ABT263 go suntasach MSCanna luch senescent [16]. Chomh maith leis sin, 17-tá sé léirithe go laghdaíonn DMAG bmMSCanna seanaoise i múnla luiche progeroid [19]. Dá bhrí sin, tá tuairimíocht déanta ar na feabhsuithe ar fheidhmiú orgáin agus córais éagsúla a bhfuil cur síos orthu sna staidéir seo mar thoradh ar bhaint spriocdhírithe gaschealla luiche seanaoise. Mar sin féin, níor léirigh na hanailísí seo aon athnuachan feidhmiúil ar na hMSCanna go fóill. Tugann idirdhealú soiléir den sórt sin idir freagrúlacht lucha agus MSCanna daonna i leith anailíse le fios go mb’fhéidir nach gcaomhnófar feabhsuithe ó theiripí seantalach ar fud an speicis. Is féidir na torthaí a fuarthas don chomhdhúil seno-lytic UBX0101 a mheas mar léiriú maith a dhearbhaíonn an ráiteas deireanach. Tá sé léirithe ag an ngníomhaire seo cealla senescent a ghlanadh i múnla luiche de osteoarthritis, rud a laghdaigh pian go suntasach agus a chuir chun cinn deisiú an cartilage damáiste [20]. Ar an drochuair, theip ar UBX0101 dul chun cinn galair agus pian a mhaolú in othair a raibh osteoarthritis pianmhar measartha le freastal orthu le linn trialacha cliniciúla chéim II [{67-69]. Ardaítear imní den chineál céanna faoi chomhcheangal senolytic dasatinib＋querce-tin[68].

Go hachomair, eascraíonn dhá chonclúid thábhachtacha as na sonraí a fuarthas. Léirigh an chéad cheann nach bhfuil gliocóisídí cairdiacha in ann hMSC seanaoise a ghlanadh. D’fhéadfaí idirghabháil éifeachtach a dhéanamh ar easpa anailíse trí iompórtáil cheallacha éifeachtacha K móide agus friotaíocht méadaithe apoptóis i hMSCanna seanaoise. Tá an dara ceann níos bunúsaí agus taispeánann sé nach gné ghinearálta de chealla senescent í an fhriotaíocht apoptóis, toisc go bhfaigheann cuid de chealla feinitíopa 'apoptosis-resistant' le linn na seanaoise, ach ní fhaigheann cuid eile. Rud atá tábhachtach, ní fhéadfaí ach cealla A549 senescent apoptosis-seans maith a ghlanadh go héifeachtach trí gliocóisídí cairdiacha. Bunaithe ar an méid sin is féidir linn tuairimíocht a dhéanamh go mb’fhéidir go mbraithfeadh éifeachtúlacht cur chuige senolytic eile ar cé acu an bhfuil nó nach bhfuil cealla seanaoise-resistant go deimhin apoptosis i gcomparáid lena gcomhghleacaithe iomadaithe. Ar deireadh, cé gur ábhar mór í an ‘anailís’ agus go bhfoilsítear go leor sonraí spreagúla, ba cheart a bheith cúramach le conclúidí maidir le héifeachtacht na hanailíse toisc go bhfuil ilchineálacht seanaoise cille fós ina ‘bhfreagra’.

Baintear an t-alt seo as Eolaíochtaí Beatha Ceallacha agus Móilíneacha (2021) 78:7757–7776 https://doi.org/10.1007/s00018-021-03980-x