Núicléi Thalamacha Anterior: Foshraith Chriticiúil Do Chuimhne Comhlach Neamhspásúil i bhFrancaigh Cuid 2

2|ABHAIR AGUS MODHANNA

2.1|Ainmhithe agus coinníollacha tithíochta

Bhí francaigh fireanna Long-Evans (12 mhí d’aois; meán 630 g) lonnaithe i ngrúpaí de thriúr nó de cheathrar i gcliabháin Makrolon (48 28 22 cm) ar thimthriall éadrom-dorcha droim ar ais 12-(soilse ar siúl ag 8 pm ).

Tharla tástáil iompraíochta sa chéim dhorcha den timthriall solais, cúig sheisiún in aghaidh na seachtaine; dhearbhaigh tuairimí go raibh francaigh sách níos gníomhaí le linn na céime dorcha. Coinníodh francaigh ag 85% de mheáchan coirp a bheathú saor in aisce le huisce ad libitum; bhí bia ad libitum roimh agus tar éis obráid le haghaidh aisghabháil iarobráide.

Is é máinliacht an próiseas chun galair a chóireáil agus chun sláinte fhisiciúil a fheabhsú. Éilíonn an próiseas a ghnóthú tar éis obráid aird ar leith. Chomh maith le téarnamh fisiceach, ní mór díriú ar aisghabháil cuimhne freisin chun mothú go maith. Tá nasc láidir idir aisghabháil iar-obráide agus cuimhne.

Le linn na hoibríochta, is minic go mbíonn tionchar ag fachtóirí ar nós freagairt dochail an chomhlachta agus éifeachtaí drugaí ainéistéiseach ar fheidhm chuimhne na hinchinne. Tar éis don chomhlacht a ghnóthú, aird a thabhairt ar aiste bia maith, cleachtadh measartha agus codlata leordhóthanach a chothabháil. Le linn na tréimhse aisghabhála lasmuigh den ospidéal, ní mór duit leanúint de ghníomhaíochtaí iomarcacha a sheachaint agus staid chompordach an chomhlachta a choinneáil.

Chomh maith le nósanna maireachtála, tá coigeartuithe síceolaíochta réasúnta cabhrach freisin chun sláinte agus cuimhne a athchóiriú. Scíth a ligean duit féin, coinnigh aigne shíochánta, agus cuidigh leat féin dul i dtaithí ar aisghabháil cuimhne. Ag an am céanna, ba cheart duit páirt ghníomhach a ghlacadh i ngníomhaíochtaí áineasa agus cumarsáid a dhéanamh le gaolta agus cairde chun d'inchinn a choinneáil gníomhach agus do chumas cognaíocha agus cuimhne a fheabhsú. Is féidir an ghníomhaíocht seo a mhéadú de réir a chéile agus is féidir é a dhéanamh go bunúsach uair sa tseachtain.

I mbeagán focal, éilíonn an próiseas athshlánaithe tar éis obráid aird ar fad. Tá ról an-tábhachtach ag cothabháil dea-nósanna maireachtála agus coigeartuithe síceolaíochta maidir le téarnamh fisiceach agus aisghabháil cuimhne a chur chun cinn. Lig dúinn aghaidh a thabhairt air go dearfach, le muinín iomlán agus dóchas. Ní mór dúinn cuimhne a fheabhsú, agus is féidir le Cistanche deserticola feabhas mór a chur ar chuimhne, mar is féidir le Cistanche deserticola cothromaíocht neurotransmitters a rialáil freisin, mar shampla leibhéil acetylcholine agus fachtóirí fáis a mhéadú. Tá na substaintí seo an-tábhachtach don chuimhne agus don fhoghlaim. Ina theannta sin, is féidir le Feola sreabhadh fola a fheabhsú freisin agus seachadadh ocsaigine a chur chun cinn, rud a d'fhéadfadh a chinntiú go bhfaigheann an inchinn go leor cothaithigh agus fuinnimh, rud a fheabhsóidh beogacht agus seasmhacht na hinchinne.

Cliceáil fios bealaí chun feidhm na hinchinne a fheabhsú

Chomhlíon na nósanna imeachta go léir treoirlínte faofa ó Choiste Eitice Ainmhithe Ollscoil Canterbury. Bunaíodh ceithre ghrúpa francaigh trí shannadh randamach tar éis taithí réamh-mháinliachta sa chathair ghríobháin gathacha (RAM) agus rúidbhealach. Loit déthaobhacha ATN a bhí sna ceithre ghrúpa, gan rian idir boladh agus spreagadh réad nuair a cuireadh oiliúint orthu sa tasc péireáilte agus sa dá ghrúpa comhfhreagracha loit Sham.

Ba iad méideanna an tsampla deiridh ná (1) Sham-No Trace=7 (.i. grúpa Sham-lesion gan aon eatramh idir spreagthaigh boladh agus oibiachta a úsáideadh sa tasc péireáilte); (2) Sham-Trace=7 (Grúpa Shamlesion tugtha rian 10-s idir chur i láthair an boladh agus na spreagthaí oibiachta); (3) ATN-No Trace=8; agus (4) ATN-Trace=9. Eisíodh ráta loit ATN breise toisc nár chomhlíon sé na critéir lotna (féach thíos).

2.2|Máinliacht

Rinneadh ainéistéitic ar na francaigh le isoflurane (ionduchtú 4%; cothabháil 2.5%) agus cuireadh iad i bhfearas steiréatachtach le barraí cluaise atráma (Kopf, Tujunga, CA). Socraíodh barra Theincisor go 7.5 mm faoi bhun an damáiste fornix líne interaural tominimise.

I ngach leathsféar, díríodh dhá insileadh ar an núicléas anteroventral (AV; uachtair agus íochtair), agus díríodh insileadh amháin ar núicléas ananteromedial (AM). Bhain gach máinliacht úsáid as comhordanáidí urghnách roimhe seo (AP) i gcoibhneas le fad Bregma-Lambda francach aonair (gach luach inmm). Maidir le loit AV, ba iad na comhordanáidí AP ná: 2.20 do BL–L 6.9–7.2; 2.25 do B–L 7.3 go 7.6; 2.30 do B–L Níos mó ná nó cothrom le 7.7. Rinneadh na insiltí AV ag 5.68 agus 5.73 faoi bhun an dura agus 1.52 cliathánach go dtí an lárlíne.

Rinneadh insileadh TheAM {{0}}.1 mm níos faide ná an comhordanáid AV, ag 5.76 faoi bhun an dura agus 1.16 cliathánach; rinneadh an chéad lot AM tar éis gach AVinfusions a chríochnú agus thosaigh sé contrártha leis an suíomh loit AV deiridh. 0.15 M N-meitil-d-aspartate (NMDA; Sigma, CastleHill, NSW) i 0.1 M maolán fosfáit (pH 7.20) wasinfused isteach gach suíomh ag 0.04 ul in aghaidh an nóiméid trí a 2.5-ulHamilton steallaire (Reno, NV, USA) ag baint úsáide as caidéal insileadh micrea (Stoelting, Wood Dale, IL).

Fuair ​​​​an leathsféar suímh AV {{{0}}.12 agus 0.10 ul do na suíomhanna ventral dorsaland, faoi seach; Baineadh úsáid as 0.06 ul do shuíomh eachAM. D'fhan an tsnáthaid steallaire in situ ar feadh 3 thaobh minper, iar-insileadh.
Baineadh úsáid as an nós imeachta céanna i lialanna sham-loit, ach íslíodh an tsnáthaid go 1 mm os cionn an AV uachtarach agus na láithreacha loit AM agus tugadh noinfusion.

2.3|Tascanna iompraíochta

Dhearbhaigh RAM ocht lámh an lagú cuimhne spásúil i bhfrancaigh a bhfuil lot ATN orthu tar éis máinliachta. Baineadh úsáid as gaireas rúidbhealaigh chun na francaigh a oiliúint ar gach tasc neamhspásúil, is é sin, boladh simplí agus idirdhealú ar rudaí simplí agus tascanna a bhaineann le boladh-réad agus boladh-rian-réada péireáilte.

Roimh an obráid, bhí gnáthchónaí ar fhrancaigh a raibh srianadh bia orthu go dtí an RAM ocht lámh, a gcuirtear síos air thíos, chun 0.1 g píosaí seacláide (Foodfirst LTD Auckland, NZ) a fháil agus iad a oiriúnú d'oscailt agus do dhúnadh doirse lámh. I rúidbhealach dearg Peirspéacs (Fíor 1), rinneadh na francaigh a mhúnlú freisin chun caipín plaisteach bán ciorclach 2-cm a mhúscailt a bhí 10 cm os cionn leibhéal an urláir agus i lár spúinse tanaí ar ionsáiteán soiléir Perspex a bhí ceangailte de. an balla deiridh.

Múnlaíodh iad freisin chun rud a bhrú (ag baint úsáide as srón nó cos) a bhí insí ar chúl a bhonn go barr tobair bia a bhí cuasaithe i lár bloc adhmaid 5 8.5 3 cm. Bhí píosaí seacláide sa bhia (agus bhí bia dorochtana aige faoin sos). Níor úsáideadh an réad a úsáideadh le haghaidh réamhoiliúint arís. Tar éis máinliachta, cuireadh an RAM agus an rúidbhealach i dtaithí ar fhrancaigh téarnaimh.

2.4|Cuimhne spásúil oibre sa RAM

Tar éis máinliachta, tástáladh cuimhne oibre spásúil ag baint úsáide as an RAM atá suite i lár seomra gan fhuinneog (3 3 m). Bhí mol lárnach adhmaid péinteáilte liath 35 cm ar leithead ag an gcathair ghríobháin agus ocht ngéag alúmanaim (65 cm ar fad 8.6 cm ar leithead, le teorainneacha 4.5 cm ar airde), ardaithe 67.5 cm os cionn urlár an tseomra. Leathnaigh ballaí soiléire Peirspéacs (19 cm ar fad agus 25 cm ar airde) feadh thaobh amháin de gach géag ón mol chun cosc ​​a chur ar fhrancaigh léim idir lámha.

Cuireadh tobar dubh adhmaid bia (5 8.5 3 cm), le bia dorochtana faoi bhun, ag deireadh gach lámh.Le linn tástála, bhí 2 0.1 g píosaí seacláide i láthair ineach bia go maith ag tús gach triail. Rinne doirse soiléire Peirspeicguilitín, a d'fhéadfaí a ardú ón mol trí chóras ulóige, rochtain ar na géaga fear céile a rialú.

Baineadh úsáid as deich lá as a chéile d’oiliúint fhoirmiúil san RAM chun cuimhne oibre spásúil a thástáil. Cuireadh an francach sa mhol lárnach, agus 10 soicind ina dhiaidh sin, osclaíodh na hocht n-arm ar fad, agus ligeadh don francach rogha sainithe a dhéanamh mar an dá chos deiridh thar thairseach na láimhe. Nuair a chuaigh an francach isteach ina lámh, dúnadh na doirse go léir, agus bhí sé teoranta don ghéag ar feadh 15 soicind is cuma cé acu an ndearna sé rogha ceart.

Ceadaíodh an francach ar ais isteach sa mhol lárnach ansin agus coinníodh ann ar feadh 10 soicind sular athosclaíodh na doirse go léir chun rogha láimhe eile a cheadú. Tháinig an triail chun críche nuair a thug an bóthar cuairt ar na hocht ngéag go léir, go raibh 20 rogha láimhe déanta nó go raibh 10 nóiméad caite.

2.5|Tascanna neamhspásúla: Idirdhealú simplí agus foghlaim chomhpháirteach

Baineadh úsáid as an rúidbhealach Peirspéacs dearg céanna (93 26 26 cm) a cuireadh ar bhord 75-cm ar airde (Fíor 1). D’fhéadfaí an rúidbhealach a roinnt ar thrí dhoras inbhainte go ceartingearach (redPerspex, 26 26 cm) a roghnaíodh bunaithe ar an tasc iompraíochta sonrach. Maidir leis an gcur amach, shealbhaigh an spúinse tanaí 6.5 6 8 mm leis an gcaipín ina lár duais bia seacláide (Fíor 1).

Ceanglaíodh an spúinse le doras inbhainte sa rúidbhealach (le haghaidh tascanna comhghaolmhara) nó le balla deiridh an rúidbhealaigh (don tasc idirdhealaithe simplí). Baineadh úsáid as spúinse doorplus difriúil le haghaidh gach boladh, a insileadh in aice leis an ngabhdán le 5 ml d'ola lus na gréine measctha le 20 ul de shubstaint Olaí Riachtanach na Nua-Shéalainne.

Ba líomóidí agus clóibh iad na bolaithe do na tascanna comhghaolmhara, agus cainéal agus aol do na tascanna idirdhealaithe simplí, nó a mhalairt i ngrúpaí frithchothromaithe. Ceanglaíodh rudaí éadroma agus sainiúla ó thaobh amhairc (Fíor 1) le hinge ar chúl a bhonn le barr an tobair bia ionas go bhféadfadh francach an rud a bhrú siar go héasca (srón nó lapa) chun an tobar a chuardach le haghaidh luach saothair bia.

Fráma adhmaid (1.8 m ar airde ón urlár 1.3 m ar leithead), clúdaithe i cuirtíní dubha, faoi iamh ar gach taobh den limistéar tástála chun leideanna spásúla a laghdú le linn tástála.

Bhain na hidirdhealú simplí (boladh amháin; oibiacht amháin) agus na tascanna comhghaolmhara úsáid as nós imeachta ‘dul/gan dul’.

Cuireadh tús leis an gcéad triail do gach seisiún tríd an francach a shrianadh sa limistéar tosaithe ar feadh 120 s chun dul i dtaithí arís ar theamaze; trialacha ina dhiaidh sin a úsáidtear 20 s sa réimse tosaithe. Fuair ​​Allrats 12 thriail ollmhóra in aghaidh an tseisiúin laethúil, le sixgo (bronnadh) agus sé thriail neamh-gos (neamhduaisithe) in ord aipseodó-randamach. Níor reáchtáladh níos mó ná trí thriail gan dul ar aghaidh i ndiaidh a chéile i seisiún.

Ní dhearnadh aon cheann de na ceithre phéire spreagthacha boladh-réada arís agus arís eile ar thrialacha as a chéile. Rinneadh míreanna cearta sna tascanna simplí idirdhealaithe agus na péirí spreagtha cearta sna tascanna comhghaolmhara a fhrithchothromú trasna na bhfrithchothrom.

Maidir leis an idirdhealú boladh simplí, sainíodh freagra mar phúca srón isteach sa chaipín i lár an spúinse theodoraithe; measadh gur freagra gan cead é sniffing an spúinse amháin. Bhí bia i láthair i gcónaí sa chaipín i lár an spúinse le haghaidh na dtascanna a bhaineann le boladh agus péire rudaí; tagraíonn an ghné dul/gan dul anseo do cibé ar brúdh an réad chun a thaispeáint an raibh luach saothair bia faoi, ag deireadh an rúidbhealaigh.

Maidir le hábhair, sainmhíníodh freagra mar bhrú ar bith le dílleacht srón a chlaonadh an réad ar gcúl. Bhí an fhoighne ón am gur tógadh an doras deiridh agus nuair a d’idirghníomhaigh an francach leis an mboladh (poc srón sa chuas; le haghaidh idirdhealaithe simplí) nó leis an réad (brúite ar ais ar an inse, le haghaidh idirdhealaithe réad simplí agus tascanna comhghaolmhara) a bhí ann. tomhaistear le stopuaireadóir ciúin (Dick Smith, An Nua-Shéalainn).

Bhí an breathnóir ina shuí laistigh de na cuirtíní agus in aice leis an rúidbhealach chun na doirse a oibriú agus chun iompar a thaifeadadh. Ainmníodh triail mar 'cheart' má d'fhreagair an francach i níos lú ná 8 gcinn de thrialacha ar dul nó murar thug sé freagra roimh thrialacha neamh-dul 8 n.

2.6|Idirdhealuithe simplí

Fuair ​​leath de na francaigh oiliúint sa tasc idirdhealaithe boladh simplí agus ansin an t-idirdhealú simplí oibiachta agus vice versa don leath eile. Taifeadadh an fhoighne idir Doras X (Fíor 1a) agus an t-idirghníomhú leis an ábhar boladh ag deireadh an rúidbhealaigh. Cuireadh oiliúint ar fhrancaigh ar an tasc simplí boladh agus leithcheal oibiachta go dtí gur shroich siad an critéar (80% ceart thar 2 lá as a chéile).

Maidir leis an tasc idirdhealaithe boladh simplí, cuireadh boladh amháin i láthair i ngach triail. An bóthar chun idirdhealú a dhéanamh ar cé acu de dhá bholadh a bhí péireáilte le luach saothair bia a cuireadh i láthair sa spúinse ag deireadh Roinn B (Fíor 1a).

Sa tasc simplí idirdhealaithe oibiachta, cuireadh réad amháin i láthair ar gach triail ag deireadh Roinn B (ní thaispeántar i bhFíor 1). Bhí ar Therat a fháil amach cé acu de dhá réad a péireáladh le luach saothair bia a cuireadh i láthair faoin réad.

2.7|Tascanna gaolmhara beirte (rian agus gan rian) Bhain na tascanna seo úsáid as leagan amach nua de dhoirse inbhainte go ceartingearach (Fíor 1). D'fhoghlaim na francaigh cé acu péire de dhá bholadh-réad a thabharfaí luach saothair (m.sh. Boladh 1 + ObjectA agus Odor 2 + Object B) agus cé na péireálacha nár bronnadh (.i. Boladh 1 + Object B agus Odor 2 + Cuspóir A).

Beag beann ar an bpéireáil, fuair francaigh duais i gcónaí as an mboladh a chur i láthair nuair a ceadaíodh é isteach sa dara urrann den rúidbhealach. Ba é seo urrann C don riocht 'gan rian' inar úsáideadh Roinn A agus ba é RoinnB an urrann tosaigh. Bhí an boladh ag deireadh Roinn B don riocht 'rian', ar úsáideadh Rannán A mar bhosca tosaigh dó.

Bhí francaigh sa riocht rianaithe faoi 10-mhoill idir léirithe ar an mboladh agus spreagthaí réada, nuair a coinníodh iad in Roinn C, cé gur nochtaíodh francaigh sa riocht gan rian don réad díreach tar éis a n-idirghníomhaithe leis an mboladh (tar éis ag ithe an luach saothair). Sa dá rian agus coinníollacha gan-rian, rinneamar taifead ar latency trasnú Roinn D, ón am a tógadh DoorZ go dtí go raibh an francach idirghníomhú leis an réad nó staon ó idirghníomhú leis ar feadh 8 soicind.

Cuireadh oiliúint ar dhá ghrúpa de francaigh (Sham-lesion agus ATN-lesion) ar thascanna gaolmhara-péireáilte ó thaobh theodour-réad (Grúpaí Gan Rian), agus cuireadh oiliúint ar dhá ghrúpa chomhfhreagracha ar thasc comhlach-phéireáilte idir theodour-rian-réad (Leanghrúpaí) go dtí go raibh siad. bainte amach critéar (80% trialacha cearta thar 3 lá) nó uasmhéid de 50 lá.

2.8|Tástáil coinneála iar-fhála

Rinneadh an tasc péire-chomhlach a choinneáil d'aon francach 5 lá tar éis an critéar a bhaint amach nó tar éis 50 lá oiliúna. Bhain an seisiún seo úsáid as 12 triail ollmhór ar luaíocht/neamhluaíocht ar aon lá amháin ar an mbealach céanna a úsáideadh don francach sin roimhe seo.

2.9|Histeolaíocht

2.9.1|Bailiúchán perfusion agus fíocháin

Ar na 3 lá roimh an tástáil choinneála, cuireadh cage glan folamh ar fhrancaigh shingil ar feadh 90 nóiméad i seomra dorcha ciúin. Díreach tar éis na trialach deiridh sa tástáil coinneála, cuireadh an francach ina chliabhán sa seomra ciúin dorcha a bhí ar eolas 90 nóiméad roimh perfusion.

Rinneadh ainéistéiseach mór ar francaigh le peantobarbít sóidiam (125 mg/kg) agus perfused go trascairdiach le saline ina dhiaidh sin paraformaldehyde [4% PFA i 0.1 M maolán fosfáit(PB)] chun an inchinn a dheisiú. Rinneadh na hinchinne a iar-shocrú i 4% PFA agus 48 h ar a laghad i dtuaslagán fadtéarmach ina dhiaidh sin (20% gliocról i 0.1 M PB). Bailíodh na hailt corónach 40-μm ag baint úsáide as micreatóim reo (Thermo Fisher, RA) agus a stóráil i dtuaslagán cryo-protectant (30% gliocról, 30% glycol eitiléine i 0.1 M PB) ag 20 C go dtí go próiseáilte le haghaidh imdhíon-histochemistry.

Bailíodh na hailt corónach i dhá shraith ar leith. Ghlac an chéad sraith codanna as a chéile i gcúig chrióivial do imdhíon-histochemistry (.i. ceann as gach cúigear). Áiríodh leis an tsraith seo bloc roimhe ailt ón cortex réamhbhríoch go dtí an limistéar seipteach (thart ar {{{0}}.7 go 0.6 mm óBregma) agus bloc ón taobh thiar den thalamus meánach (thart ar 3.5 mm ó Bregma) go dtí an eireaball cortex retrosplenial.

Ghlac an dara sraith codanna as a chéile le haghaidh fíorú lota. Bailíodh na hailt seo i gceithre chrióivial ó díreach roimhe sin go dtí an ATN go dtí an thalamus meándrófach posterior (thart ar 0.6 go 3.5 mm ó Bregma).

2.9.2|staining Neu-N agus fíorú ATN-lesion

Nite ailt saorshnámh ar fud an réigiúin ATN (3 10 nóim) i 0.1 M saline maolánach fosfáite le Triton-X (0.2%; PBSTx) roimh gor i maolán blocála sárocsaídáis inghineach ar feadh 30 min [1% sárocsaíd hidrigine (H2O2), 50% meatánól (CH3OH) i 2%PBSTx].

Goradh codanna thar oíche ag antashubstaint phríomhúil 4 C inanti-NeuN (1:5000; monaclónach-MouseCat# MAB377; Millipore, California USA) i PBSTx le 1% gnáthshéiream gabhar (NGS; Life Technologies, NZ).

Baineadh maolán antashubstainte barrachais le PBSTx agus ina dhiaidh sin rinneadh gor in antashubstaint thánaisteach frith-luiche gabhar biotinylated (1:1000 Cat# BP-9200-50: VectorLaboratories, California USA) thar oíche ag 4 C i PBSTxagus 1% NGS. Cuireadh codanna in ExtrAvidin (peroxidase conjugated; 1:1000; Sigma, NSW Astráil), PBSTxagus 1% NGS ar feadh 2 h ag teocht an tseomra.

Chun an iomarca a bhaint de ExtrAvidin agus Triton X{{{{0}}, nite na hailt i PBS, PB, agus ansin Tris maolán (pH 7.4 i H2 driogtha0) chun na hailt a ullmhú le haghaidh léirshamhlú le diaminobenzidine ullmhaithe go húr ( DAB 0.05%; Sigma, i 0.01% H2O2 i maolán Tris).

Stopadh an t-imoibriú DAB (thart ar 5 nóim) trí úsáid a bhaint as maolán Tris (1 10 nóim nigh), agus cuireadh na codanna i PB ag 4 C thar oíche roimh é a ghléasadh ar shleamhnáin geilitínithe agus ceadaíodh iad a thriomú. Díhiodráitíodh alcól tréghrádaithe ar na sleamhnáin (70%–100%) sular glanadh inxiléin iad agus gléasadh iad le DPX (06522; Sigma-Aldrich) agus duillín clúdaigh.

Úsáideadh líon na gceall Neu-N-dearfach san ATN chun méid an loit a chinneadh. D’úsáid sé seo codanna ón leathsféar clé agus ar dheis le haghaidh gach ceann as gach ceithre mhír μm ar fud an ATN agus an limistéar arna chainníochtú ag baint úsáide as ImageJ (NIH, SAM). Grianghraif de chealla NeuN-dearfach ag 5 chuspóir ar mhicreascóp díreach LeicaDM6 B agus ceamara DFC7000T (Leica Microsystems, an Ghearmáin).

Fuarthas comhaireamh uathoibrithe de na cealla trí ImageJ (bogearraí anailíse íomhá, An Institiúid Náisiúnta Sláinte, NIH, SAM). Roghnaíodh an limistéar timpeall ar néaróin sa réigiún ATN de láimh agus tiontaíodh na híomhánna go scála beag, baineadh an cúlra (rollta=40), aistríodh go masc é agus cuireadh feidhm an tairseach uisce i bhfeidhm, agus áiríodh gach cill néaránach os cionn na tairsí (tairseach 'MaxEntropy', ciorclaíocht 0.5–1.0).

Bhí an tairseach braite mar an gcéanna do na hailt go léir. Áiríodh núicléis ceall daite NeuN uathoibrithe i naoi gcinn de na francaigh sham (cúig cinn sa ghrúpa Sham-Trace agus ceithre cinn sa ghrúpa Sham-No Trace) chun comhaireamh cille san ATN a chur in iúl.

Rinneadh comparáid idir comhairimh uathoibrithe de núicléis dhaite NeuN de chealla spártha i ngach francach loit ATN i gcoibhneas leis an meánchomhaireamh cealla NeuN a breathnaíodh sna francaigh shalacha. Sainmhíníodh go raibh loit inghlactha ag baint amach an chritéar maidir le caillteanas 50% de chealla san ATN, le híosmhéid 25% in aghaidh na leathsféar. Tá sé seo comhsheasmhach le critéir lot ATN i staidéir roimhe seo (Mitchell & Dalrymple-Alford, 2005, 2006; Perryet al., 2018).

2.9.3|Imdhíon-histochemistry Zif268

Próiseáladh codanna saorshnámhacha ar an mbealach céanna le NeuN, ach goradh iad in antashubstaint phríomhúil polaclónach coinín Zif268 (Egr-1; 1:1000 Cat# sc-110; Santa CruzBiotechnology, USA) ar feadh 72 h ag 4 C i PBSTx le 1% NGS, agus ina dhiaidh sin gor in antashubstaint thánaisteach antaibheathaigh gabhar biotinylated (1:1000: Vector LaboratoriesBA-1000) thar oíche i PBSTx agus 1% NGS.

Tar éis léirshamhlú DAB (18 nóim), grianghrafadh Zif268-staining cille dearfach i ngach réigiún spéise le cuspóir 10 le micreascóp solais (Leica, An Ghearmáin). Fuarthas comhaireamh uathoibrithe de na cealla tríImageJ ( NIH, SAM) ar an mbealach céanna le cealla NeuNpositive, ach amháin socraíodh ciorclán ag 0.65–1.0.

D'úsáid comhaireamh cealla dearfacha Zif do gach réigiún an t-algartam tairsí céanna, le idir dhá agus sé chuid in aghaidh an réigiúin spéise i ngach francach cainníochtaithe. Baineadh úsáid as an meánáireamh Zif268-ceall dearfach in aghaidh an mm2 trasna codanna (ón dá leathsféar) laistigh de réigiún spéise.

2. 10|Anailís sonraí

Rinneadh ANOVA ag baint úsáide as Statistica (v13; Dell Inc.) chun meándifríochtaí thar na ceithre ghrúpa francaigh a thástáil (Sham-No Trace, Sham-Trace, ATN-No Trace agus ATNTrace). Cuireadh fachtóirí bearta arís agus arís eile le haghaidh laethanta (RAM agus idirdhealú simplí), bloic trialacha (tascanna gaolmhara péireáilte), agus comhaireamh Zif268 thar réigiúin nó fo-réigiúin leasa ghaolmhara.

Chuir an ANOVA do thascanna idirdhealaithe RAM agus simplí araon ceithre ghrúpa i gcomparáid lena dhearbhú go raibh an dá ghrúpa Sham-lesion agus twoATN-lesion comhsheasmhach lena chéile, ach tugadh faoi deara nach raibh aon rian-chomhpháirt sna tascanna idirdhealaithe RAM nó simplí. Le haghaidh tascanna simplí idirdhealaithe agus comhghaolmhara sa rúidbhealach, baineadh úsáid as claochlú cómhalartach ar shonraí latency i dtrialacha aonair chun aonchineálacht athraithis a chinntiú.

Ar lá na tástála ar bith, ghin na folaigh chlaochlaithe foighne meánach do gach ceann de na sé thriail neamh-duais agus na sé thriail ar luaíocht. Maidir leis na tascanna idirdhealaithe simplí, rinneamar anailís ar an meánscór difríochta latency (meán na dtrialacha ar luaíocht lúide meán na dtrialacha nár bronnadh luach saothair orthu) ach ní dhearnamar na trialacha ar luaíocht agus nár bronnadh ar leithligh de bharr teip stórála sonraí.

Bhí na trí bheart folaigh ar fáil le haghaidh na dtascanna cuimhne comhpháirtí péire (trialacha neamh-duais, trialacha luach saothair agus difríocht latency). Chun cuntas a thabhairt ar ilchomparáidí agus chun earráidí de Chineál I agus Chineál II a chothromú, d'úsáideamar an leibhéal suntasachta p < 0.02 le haghaidh anailísí iompraíochta toisc go raibh trí bheart ghaolmhara sa tasc gaolmhar (trialacha neamhdhuais, trialacha luach saothair agus meándifríocht latency).

Bhí sé phríomh-anailís ann do réigiúin spéise maidir le slonn Zif268, socraíodh suntas sna hanailísí seo ag p < 0.01. Rinne tástálacha Posthoc Newman–Keuls (NK) measúnú ar dhifríochtaí de réir a chéile. Baineadh úsáid as anailís shimplí ar phríomhthionchar nuair a bhí idirghníomhaíochtaí suntasacha ann a bhain le fachtóirí athbhearta.

3|TORTHAÍ

3.1|Fíorú lesion

Chomhlíon gach ceann seachas ceann amháin de na 18 bhfrancach a raibh loit ATN orthu an critéar apriori maidir le damáiste déthaobhach 50% don ATN agus 25% ar a laghad in aghaidh na leathsféar. Ba é an damáiste déthaobhach airmheánach ná 76% ar fud an dá ghrúpa loit ATN (raon: ATN-No Trace, 61%–93%; ATN-Trace, 63%–93%; Fíor 2). Ní raibh ach leathsféar sásúil lesion ag an bhfrancach eisiata (48% san iomlán, 75% ar chlé agus 20% ar dheis).

Léiríonn Fíor 2d go raibh na háirimh NeuN do néaróin ATN sna francaigh loit ATN (M=3388, SD=2024) i bhfad níos ísle ná na luachanna a fuarthas sna francaigh lesion (M=15, 339, SD=1065; bhí an comhaireamh seo cosúil leis an gceann a thuairiscigh Frost et al., 2020). Ní dhearna ocht gcinn de na 17 bhfrancach loit (ceathrar sa ghrúpa Trace agus ceithre cinn sa ghrúpa No-Trace) aon damáiste do na núicléis thalamus meándóideach(MD) nó athaontú/rhombóideach (Re/Rh), agus ba bheag an damáiste a rinneadh do na struchtúir seo i naonúr francach le loit.

Nuair a tharla damáiste MD, bhí sé sna gnéithe roimhe atá suite in aice leis an ATN. Mar sin, rinneadh damáiste MD a mheasúnú ó thart ar {{0}}.72 go +2.10 mm ó Bregma, áit a raibh sé idir 0% agus 41% de chaillteanas cealla ar fud an iomlán grúpa (airmheán=21%). Nuair a tharla damáiste Re/Rh, bhí sé in aice leis an réigiún ATN freisin, mar sin rinneadh é a mheasúnú thart ar 1.08 go 2.04 mm ó Bregma, áit a raibh sé idir 0% agus 33% (airmheán=6%). Tabhair faoi deara nach ionann na luachanna per centinjury seo agus an MD iomlán agus Re/Rhregions, toisc go raibh réigiúin posterior an dá núicléas slán i ngach francach loit ATN.

For more information:1950477648nn@gmail.com