Feabhsaíonn Sliocht Cultúir Cille Oenothera Biennis a bhfuil Gníomhaíocht Frith-Aosaithe Craicinn aige Airíonna Meicniúla Cille

Déan teagmháil le do thoiloscar.xiao@wecistanche.comle haghaidh tuilleadh eolais

Coimriú:Is próiseas an-aitheanta é aosú craiceann a shocraíonn dul chun donais de réir a chéile ar ghnéithe meicniúla craiceann de bharr meath ar tháirgeadh innealra maitrís seach-cheallacha agus athrú comhthráthach ar an bpróiseas crapadh. Chun an dul chun cinn seo a mhoilliú, tá sé ríthábhachtach go spreagfaí roinnt próitéiní atá in ann foirmiú snáithíní leaisteacha agus deisiú fíocháin a chur chun cinn. Anseo, rinneadh imscrúdú ar sliocht uiscí cultúr cille Oenothera bi-Ennis ó thaobh ceimiceach de, agus ansin tástáladh é in vitro, sa chill, agus i dturgnaimh ex vivo mar aidiúvach chun dul i ngleic le dul in aois craiceann Dá réir sin, rinneadh é a thástáil. léirithe go raibh sliocht Oenothera biennis in ann, trí léiriú géine MYLK a mhéadú, crapadh collagen maitrís, polaiméiriú actin, agus táirgeadh próitéiní riachtanacha ECM a chur chun cinn.

Eochairfhocail:meitibileacht; líonraí móilíneacha; sliocht hidrofilic de chultúir cille Oenothera biennis; crapadh collagen maitrís; ag dul in aois craicinn

1. Réamhrá

Próiseas an-aitheanta is ea aosú craicinn a chothaítear de bharr fachtóirí endogenous agus exogenous. Le linn na seanaoise, tagann meath ar na feidhmeanna fiseolaíocha scoite go léir go neamhdhíobhálach, agus déanann an meath forásach seo dochar don chraiceann [1]. Go deimhin, titeann an craiceann de réir a chéile a ghnéithe meicniúla, mar gheall ar laghdú ar tháirgeadh na próitéiní maitrís seach-cheallacha agus an t-athrú comhthráthach ar an bpróiseas crapadh [2]. Is iad na comhpháirteanna maitrís seach-cheallacha dermis is tábhachtaí ná próitéiní cosúil le collagen I agus IIl, laminin, periostin, tenascin, elastin, fibronectin, agus próitéoglycans, toisc go bhfuil ról lárnach ag a méid coibhneasta agus a staid fillte san idirghníomhú idir na cealla agus na cealla. maitrís, ag ráthú uigeacht cheart an deirm [3]. Mar shampla, sa spás eischeallach, tá ról lárnach ag fibronectin i gcomhthionól maitrís mar go gcruthaíonn sé droichead idir gabhdóirí dromchla cille (m.sh., integrins) agus collagen, próiteagáin, agus móilíní greamaitheachta fócasacha eile. Cuireann laminins le struchtúr na maitrís extracellular agus modhnaíonn siad greamaitheacht, idirdhealú, imirce, cobhsaíocht feinitíopa, agus friotaíocht i dtreo apoptosis. Tá Elastin tábhachtach freisin maidir le greamaitheacht cille agus imirce cille, agus tá an cumas aige páirt a ghlacadh i gcomharthaí cille. Mar an gcéanna idirghníomhaíonn fibrillins go dlúth le tropoelastin agus integrins, agus tá siad tábhachtach chun elastiní a chur le chéile i snáithíní leaisteacha. Tá Fabulous ceangailte go docht le seicní íoslach, snáithíní leaisteacha, agus comhpháirteanna eile den mhaitrís extracellular, agus páirt a ghlacadh i bhfoirmiú snáithíní leaisteacha. Is glycoproteiní polymorphic maitrís eischeallach (ECM) iad tenascins a idirghabháil próisis fibrotic chun deisiú éifeachtach fíocháin a chumasú [4] Ina theannta sin, tá an próiseas crapadh craicinn bunaithe freisin ar ghníomh fibroblasts, na cealla is flúirseach sa mhaitrís dheirmeach; socraíonn siad teannas ceart an chraiceann, ag cur chun cinn na dteagmhálacha idir na comhpháirteanna maitrís, atá freagrach as dlúthacht, dlús agus friotaíocht an deirm. Ar bhonn a n-eagraíocht cítea-chnámharlaigh cheallacha, tá an t-innealra actin-myosin, a chinneann athruithe féideartha ar a gcruth agus ar a struchtúr. Go deimhin, spreagann an ceangal actin agus myosin comhfhoirmiú ceallacha níos dlúithe, ag tabhairt na snáithíní níos dlúithe le chéile, ag ráthú forbairt fíocháin shláintiúla agus dhlúth, agus cosc ​​​​a chur ar dhíscaoileadh snáithíní mar thoradh ar roic. Mar sin féin, cailltear cumas fibroblast chun crapadh agus síneadh go páirteach thar na blianta toisc nach bhfuil na cealla d'aois in ann gníomhú i gceart agus go hiomlán a thuilleadh. Mar gheall ar fhórsa meicniúil níos ísle, téann fibroblasts chuig moirfeolaíocht níos cruinne agus níos saobhadh ná an ceann fadaithe [5]. Tá sé léirithe ag roinnt fianaise, le linn dul in aois, tháinig laghdú suntasach ar shintéis próitéine ar a dtugtar MYLK (Myosin Light Chain Kinase). Tá gníomhaíocht kinase ag MYLK a fheidhmíonn fosfarylation fearainn ar leith myosin, ainmnithe an slabhra solais rialála myosin, in ann aslú actin-ceangailteach agus dá bhrí sin contractility cille a chur chun cinn [6].bithfhlavonoidsNuair a aimsíodh gníomhaíocht íseal den phróitéin seo, mar gheall, mar shampla, ar léiriú próitéine níos lú, tomhaiseadh laghdú comhfhreagrach ar chrapadh collagen maitrís [7] agus polaiméiriú actin [8]. Tá cóimeáil cítea-chnámharlaigh actin nasctha ní hamháin le gluaiseacht na gceall agus le cumas crapadh ach freisin le táirgeadh próitéin maitrís ECM trí ghníomhachtú an ghabhdóra TGF -II (TGFBRII)[9]. Baineann TGFBRII le coimpléasc receptor dromchla cille TGF a rialaíonn, trí ghníomhachtú fachtóirí trascríobh Smad, léiriú go leor géinte comhpháirteanna ionchódaithe ECM, lena n-áirítear collagen, laminins, fibronectin, agus proteoglycan [10]. Laghdaíonn díchumhachtú cítosnámhar Actin an receptor TGF -Il. Laghdaíonn an t-íos-rialachán seo, ina dhiaidh sin, táirgeadh collagen agus próitéiní ECM eile, rud a fhágann go gcailltear mais dheirmeach agus leochaileacht craiceann.

I ndáiríre, tá sé mar aidhm ag go leor comhábhair chosmaideacha sintéis roinnt príomhfhachtóirí a spreagadh atá freagrach as dlúthdhlúthacht cheart an mhaitrís deirmeach agus crapadh craiceann maith a chothabháil. Sa chás seo, is díol spéise go forleathan na sleachta a dhíorthaítear ón speiceas Oenothera biennis (Evening Primrose), a bhaineann leis an teaghlach Onagraceae, mar gheall ar a n-ábhar comhdhúile bithghníomhacha amhail aigéid shailleacha, feanóil, triterpenes, agus flavonoids, a bhí cheana féin. thástáil i gcóireáil galair éagsúla paiteolaíocha craicinn [11]. Tuairiscítear go ndéanann cuid de na meitibilítí seo, ar a seal, idirghabhálaithe athlasadh a chosc mar interleukin 1 (IL-1), interleukin 6 (IL-6), cytokines, agus fachtóir neacróis siadaí (TNF-)[12 ]. Ina theannta sin, chosnaigh sleachta de pháirteanna aerga Oenothera biennis cealla HaCaT ó dhamáiste DNA de bharr H, O, agus bás cille trí dhamáiste ceallacha de bharr strus ocsaídiúcháin a bhlocáil trí mheicníocht a bhain le díothú ROS agus cosán comharthaíochta Nrf2/HO{-1 [ 13]. Ina theannta sin, tá ola Oenothera biennis, atá saibhir i lipidí, molta mar thaise maith d'othair eachma a bhuíochas dá chumas dul isteach go héasca ar an gcraiceann [14]. Ar an drochuair, d’fhéadfadh go n-áireofaí roinnt míbhuntáistí in ullmhóidí eastóscacha de phlandaí saothraithe, atá ag gabháil do chosmaidí: ar dtús, is féidir iad a bheith éillithe le substaintí tocsaineacha nó ailléirgineacha amhail lotnaidicídí, leasacháin nó truailleáin; ansin, bíonn na plandaí faoi réir strus dothuartha agus coinníollacha séasúracha nó athruithe ar infhaighteacht cothaitheach, rud a d'fhéadfadh sintéis meitibilítí gan choinne a spreagadh. Ina theannta sin, féadfaidh miocrorgánaigh phataigineacha a bheith sna sleachta, rud a laghdaíonn cáilíocht na dtáirgí deiridh. Tagann na míbhuntáistí seo go léir le chéile, ina dhiaidh sin, isteach sa bhaol go mbeadh ábhar athraitheach meitibilítí tánaisteacha ann agus in-atáirgtheacht íseal. Chun na laigí seo a shárú, tá úsáid cultúir cille plandaí i gcosmaidí ag éirí níos coitianta agus á meas go mór, ós rud é go sáraíonn sé go leor de na míbhuntáistí thuasluaite [15].

Cliceáil anseo le do thoil chun tuilleadh eolais a fháil

Sa staidéar seo, tá sliocht hidreafilic de chultúir chill Oenothera biennis (ObHEx) mar thréith iomlán ag cur chuige ard-mhais-speictriméadrachta-bhunaithe, le cúnamh ó bhithfhaisnéisíocht, agus tástáladh é in iliomad measúnachtaí bithcheimiceacha agus bitheolaíocha. Tá comhdhúile bithghníomhacha de lignans agus triterpenes den chuid is mó sa mheascán, amhail aigéad arjunolic agus Áiseach, a bhí bainteach roimhe seo le táirgeadh pro-collagen I i fibroblasts daonna [16,17]. Imscrúdaíodh an sliocht as a chumas chun léiriú MYLK a mhéadú, crapadh collagen maitrís, polaiméiriú actin a chur chun cinn, agus táirgeadh próitéiní ECM-rialaithe TGF, atá i bhfabhar crapadh an deirm, rud a mhoillíonn dul in aois craiceann.

2. Torthaí

2.1.Anailís Cáilíochtúil agus Cainníochtúil ar an Sliocht Intuaslagtha in Uisce de chultúr ceall Oenothera Biennis

Rinneadh anailís UPLC-MS/MS ar OBHex agus baineadh leas as sonraí speictriméadracha ardtaifigh don tréithriú ceimiceach trí úsáid a bhaint as Líonrú Móilíneach Sóisialta Táirgí Nádúrtha Domhanda (GNPS), córas mais-speictriméadrachta gréasán-bhunaithe a chuidíonn le haithint agus nótáil táirgí nádúrtha. (NPS)[18]. Tá sé mar aidhm aige a bheith ina bhunachar eolais rochtana oscailte d’eagraíochtaí pobail agus chun sonraí mais-speictriméadrachta ilroinnte (MS/MS) a roinnt, amha, próiseáilte nó anótáilte. Go sonrach, rinneadh cuardaigh leabharlainne speictreach GNPS agus post Líonrú Móilíneach Gné-Bhunaithe (FBMN): thug an chéad anailís deis dúinn comhdhúile nádúrtha a aithint, ag déanamh comparáide idir a speictream MS/MS agus iad siúd de mheitibilítí a bhfuil tréithe struchtúracha acu, an dara ceann le comhdhúile a bhain le grúpa. NPanna laistigh de líonra ós rud é go raibh patrúin comhchosúla ilroinnte MS/MS ar taispeáint ag móilíní struchtúracha comhchosúla [19]. Mar a léirítear i bhFíor 1 agus i dTábla 1, aithníodh go leor NPS gan amhras mar a bhaineann le roinnt aicmí meitibilítí tánaisteacha, go príomha lignans (Salvador i leataobh agus liriodendron) agus triterpenes (aigéad muriatach, aigéad ariunólach, aigéad Áiseach, agus heidireagán). Sannadh speicis cheimiceacha nár shainaithin an GNPS dá réir leis an litríocht.

Mar shampla d’úsáid GNPS, tá an líonra díorthaithe ó anailís FBMN tuairiscithe i bhFíor 2a, a thaispeánann go raibh go leor triterpenes neamhthréithrithe eile a bhaineann le haigéad muriatach san OBHex a bhaineann le haigéad muriatach (18, m/z 503.3389, RT 21.89 nóim: tá aithint aigéid mhuirítigh deimhnithe trí chomparáid a dhéanamh lena chaighdeán anailíseach). Mar shampla, sainaithníodh speicis éagsúla nach raibh tréithe roimhe seo ag m/z 701 agus 665 mar fhoirmeacha glycosilated a bhaineann le haigéad muriatach nó lena isiméirí, faoi seach hiodráitithe nó nach bhfuil le dhá mhóilín HO

Ina theannta sin, díorthaíodh iain tuairiscithe ag m/z 729, 703, 699,687,685, 683 faoi seach ón glycosylation móide dhá mhóilín H, O de speicis ag m/z531, 505,501, 489,487, agus 485: níor baineadh amach a n-aitheantas aonghuth, ach tá siad ar fad ceaptha a bheith ina triterpenes, a bhaineann le haigéad muriatach nó a chomhghéin, mar gheall ar a chonair ilroinnte MSMS, Le déanaí, scoite go leor triterpenes le m/ 501 agus 485 ó speiceas eile de Oenothera, Oenothera Maritima, agus tá a struchtúr curtha in iúl ar bhonn sonraí speictreascópacha, ag teacht go maith lenár dtorthaí [20].

Is féidir le Cistanche frith-aging

Chuir anailís FBMN faisnéis ar fáil freisin ar na meitibilítí ag m/z 617.3862 (ian MS2 ag m/z 453,145 agus 119) atá i láthair i líonraí móilíneacha a thaispeántar i bhFíor 2b agus nach bhfuil tuairiscithe sa litríocht do speicis Oenothera. Meaitseálann an luach m/z seo agus a ilroinnt le 2-aigéad aspalach OEp-coumaroyl nó a isiméirí, rud a chruthaíonn, ar a laghad, láithreacht triterpene coumaroyl agus freisin eistir caffeoyl sa sliocht. Go deimhin, léirigh MS-speictream speiceas ag m/z 649 (RT 25.72 agus 27.19) láithreacht na n-ian ag m/z 179, 161, agus 135 mar gheall ar scoilteacht an t-aigéad caiféin, agus i speictream MS2 na speiceas eile. tuairiscithe i bhFíor 2b ag m/z 633 (RT 26.88,27.20,28.12 agus 28.43), 649 (RT24.18,24.65,24.83), agus léirigh 661 (RT 30.28) hiain ag m/z 145 agus 119, a bhí mar shaintréithe le haghaidh couaroyl moiety.

After, the content of some identified lignans and triterpenes was determined. Ouantifi-cation methods were validated as reported in Table2. All calibration curves showed good linearity (R>0.9911) laistigh de na raonta tástáladh. Thairis sin, léirigh an teorainn braite (LOD) agus an teorainn chainníochtaithe (LOO) go raibh na modhanna a úsáideadh idirdhealú ag íogaireacht ard. Léirigh na torthaí a fuarthas ón anailís chainníochtúil (Tábla 3) gurbh iad liriodendron agus heidearagánin na príomh-léirithe lignan agus triterpene, faoi seach.

2.3.Anailís ar Léiriú Géine MYLK i HDF

Rinneadh tástáil ar ghníomhaíocht ObHEx i HDF ar léiriú na géine MYLK, a ionchódaíonn an kinase atá freagrach as fosfarú slabhra solais myosin (Fíor 3a). Léirigh na torthaí gur mhéadaigh an chóireáil leis an sliocht ag an dá chomhchruinniú léiriú géine MYLK thart ar 50 faoin gcéad, cosúil leis an rialú dearfach TGF- .

2.4. Anailís ar Chumas Crapadh Maitrís Collaigine

Chun gníomhaíocht ObHEx a mheas ar chumas conarthach snáithíní collagen, d'úsáidamar HDF scaipthe i dioscaí glóthacha collagen [21]. Mar a léirítear i bhFíor 3b, chothaigh an sliocht, ag an tiúchan níos ísle, méadú suntasach ar chrapadh an diosca collagen, rud a thugann le tuiscint go bhféadfadh tionchar a bheith aige ar dhaingne collaigine. An chóireáil le ML7(1-(5-iodonaphthalene-1-sulfonyl)-1H-hexahydro-1,4-diazepine), coscaire MYLK, cuireadh deireadh leis an méadú seo, rud a thugann le fios go ngníomhaíonn an sliocht agus an TGF araon trí MYLK le haghaidh crapadh diosca collaigine.

2.5.Measure of Actin Polymerization Level

Rinneadh imscrúdú ar chumas ObHEx chun polaiméiriú actin a spreagadh trí leibhéal an actin polaiméirithe sna cealla a thomhas, arna chóireáil leis an sliocht agus leis an rialú dearfach TGF- , ina n-aonar agus i láthair ML7. Mar a léirítear i bhFíor 3c, tháinig méadú thart ar 50 faoin gcéad ar an méid actin polaiméire mar thoradh ar chóireáil an dá thiúchan de na sleachta, i gcomparáid le 33 faoin gcéad de TGF- .ceannaigh cisteanArís, chuir an réamh-goir le ML7com-go hiomlán deireadh leis an éifeacht seo, rud a thugann le tuiscint go raibh baint ag MYLK le polaiméiriú filiméid actin.

2.6. Anailís ar Chonair TGF RII/SMAD i HDF

Chun a fhíorú an raibh baint freisin ag an méadú ar pholaiméiriú actin agus crapadh collagen na gceall atá cóireáilte le ObHEx le gníomhachtú an chosáin aistrithe comhartha arna idirghabháil ag TGF RII, thugamar faoi deara ar dtús léiriú na géine TGF RII agus ansin d'aistrigh muid HDF leis an SMAD{{ 0}}tuairisceoir luciferase plasmid agus rinne sé measúnú ar an méadú ar ghníomhaíocht luciferase mar fhreagra ar chóireáil ObHEx. Léirigh na torthaí, a tuairiscíodh i bhFíor 3d,e, gur mhéadaigh an chóireáil le ObHEx ag 0.002 faoin gcéad agus 0.006 faoin gcéad léiriú TGF RII ar bhealach cosúil leis an TGF- a úsáidtear mar rialú dearfach agus, go comhthreomhar, Méadaíodh an ghníomhaíocht luciferase atá nasctha le SMAD faoi 80 agus 40 faoin gcéad , faoi seach. Fuarthas laghdú suntasach ar chomhartha nuair a rinneadh cóireáil ar na cealla le ML7, rud a léiríonn freisin go raibh an ghníomhaíocht seo nasctha le MYLK.

2.7.Anailís ar Pro-Collagen I, Tropoelastin, agus Periostin

Mar thoradh ar ghníomhachtú aistrithe comhartha TGF RII, rinneamar anailís ar shintéis na bpríomhphróitéiní maitrís extracellular mar procollagen cineál I, tropoelastin, agus periostin i HDF cóireáilte le ObHEx ag 0.002 faoin gcéad . Mar a léirítear i bhFíor 3f, mhéadaigh ObHEx táirgeadh na bpróitéiní léirithe faoi thart ar 98 faoin gcéad ,75 faoin gcéad , agus 51 faoin gcéad , faoi seach, cosúil leis an rialú dearfach TGF- . Is é measúnú ELISA a rinne na bearta, ag baint úsáide as antasubstaintí sonracha i gcoinne pro-collagen I, tropoelastin, agus periostin.

2.8.Anailís ar MYLK, Phospho-Myosin, Collagen I, agus Tropoelastin ar Mhíniúcháin Craiceann Ex-Vivo

Mar a thaispeántar i bhFíor 4a-c, tháirg ObHEx méadú suntasach ar tháirgeadh MYLK agus myosin fosfarlaithe i explants craiceann daonna.

Rinneadh anailís freisin ar Collagen I agus ionduchtú tropoelastin i explants craiceann réamhchóireáilte le ObHEx agus ansin cóireáilte le hydrocortisone ar feadh 8 lá chun insamhail aosú cróineolaíoch [22]. Laghdaigh an chóireáil le hidreacortisone an méid collagen I agus tropoelastin de níos mó ná 1{ { }} 0 faoin gcéad , agus láithreacht 0.002 faoin gcéad OBHEx athchóirigh an méid tropoelastin beagnach 91 faoin gcéad agus collagen faoi 120 faoin gcéad , i gcomparáid leis an ascorbate a úsáidtear mar rialtán dearfach (Fíor 4d-f). Tugann sé seo le fios go bhféadfadh OBHex éifeacht fhrith-aosaithe a bheith ann, go háirithe éifeachtach chun daingne an chraiceann a mhéadú trí ghníomhú ar na comhpháirteanna maitrís deirmeach.

2.9.Micreascópacht Fhórsa Adamhach (AFM) i bhFleathnuithe Craicinn

D'fhonn tuilleadh faisnéise a bhailiú faoi na hairíonna bithmheicniúla craiceann a chuir an chóireáil le ObHEx chun cinn, rinneamar measúnú ar elasticity, maoin mheicniúil intreach de shamplaí craiceann i dtéarmaí moduli Young's [23]. Mar a thuairiscítear i Roinn 4, chun an modulus leaisteacha a ríomh, ar shamplaí craiceann cóireáilte agus neamhchóireáilte, bhailigh muid cuair Fórsa le Micreascóp Fórsa Adamhach (AFM) agus d'oiríomar iad le múnla Hertz [24,25]. Mar a thaispeántar i bhFíor 5, bhí luachanna modúil Young níos ísle ag cóireáil na samplaí craiceann leis an sliocht i gcomparáid le samplaí neamhchóireáilte, rud a thugann le tuiscint go raibh feabhas ar airíonna leaisteacha craiceann. Go háirithe, nocht samplaí craicinn neamhchóireáilte meánluach modulus Young de 0.37±0.15 GPa, agus léirigh samplaí craicinn cóireáilte le OHEx meánluach níos ísle de 0.{{11 }}7±0.02 GPA. Bhí luachanna modulus The Young ar na samplaí craicinn de réir na litríochta [26-28].

3. Plé

Is iad cultúir chealla plandaí an cur chuige is bisiúla maidir le táirgeadh inbhuanaithe meitibilítí tánaisteacha plandaí ar díol spéise tráchtála iad, ag tairiscint soláthar leanúnach ábhair trí bhíthin cultúir ar scála mór agus arb é atá ann córas atá inbhuanaithe agus neamhdhíobhálach don chomhshaol [29,30]. Tá feidhm ag sleachta ó shaothráin chealla plandaí sna hearnálacha cúram sláinte agus cosmaidí, toisc go bhfuil roinnt buntáistí ábhartha ag baint leo; (i)go bhfuil meitibilítí iontu atá bithshintéiseach i gcoinníollacha saotharlainne fáis rialaithe; (i) díorthaíonn siad ó phróisis táirgthe chaighdeánaithe, lena ráthaítear an na saintréithe cáilíochtúla agus cainníochtúla céanna atá ag an speiceas faighte; (ii) go bhfuil na heastóscáin saor ó éillithe amhail miocrorgánaigh, luibhicídí, lotnaidicídí agus múiscnimheanna; (iv) tá siad neamhspleách ar luaineachtaí geografacha nó comhshaoil ​​agus is féidir na speicis phlandaí a chaomhnú don todhchaí glúnta. Sa chomórtas seo, scrúdaíodh sliocht uiscí de chultúr cille Oenothera biennis (ObHEx) mar fhoinse dóchasach de mhóilíní bithghníomhacha a bhfuil gníomhaíocht frith-aosaithe craicinn orthu. Go deimhin, tá OBHEx imscrúdaithe ag anailísí ardtaifigh UPLC-MSMS mar aon le cur chuige bithfhaisnéisíochta chun tréithriú struchtúrach leathan a bhaint amach. Tá tréithriú cumaisc bainte amach go príomha trí GNPS a úsáid chun an próiseas aitheantais a bhrostú, speictream MS/MS a chur i gcomparáid leo siúd de mheitibilítí a bhfuil tréithe struchtúracha acu, agus, ina theannta sin, speicis nua gan choinne a nochtadh, ag grúpáil NPanna comhchosúla laistigh de líonra. Ina theannta sin, rinneadh comparáid freisin idir am coinneála, tomhais chruinne maise, agus anailísí MS2 le caighdeáin, agus meaitseáileadh na sonraí go léir leis an litríocht. Aithníodh lignans agus triterpenes bithghníomhacha, mar shampla Salvador leataobh, liriodendron, aigéad mi-anthemic, aigéad arjunolic, aigéad Asiatic, agus hederagenin. Léirigh Liriodendron [31] agus aigéad muriatic [32] gníomhaíocht láidir frithocsaídeach, agus léirigh hederagenin airíonna frith-aosaithe craiceann mar gheall ar laghdú ar ocsaídiú ceallacha agus gníomhachtú feidhm proteasome [33]. Mar sin féin, measadh go raibh aigéid arjunolic agus Asiatic freagrach go príomha as cuid de na gníomhaíochtaí tástála seo a leanas, ós rud é go spreagann siad sintéis collagen I. Go deimhin, tá sé léirithe gur fheabhsaigh OBHex airíonna bithmheicniúla an chraiceann, a bhraitheann go príomha ar mhéid coibhneasta na gcomhpháirteanna éagsúla den ECM agus ar an gcaoi a bhfuil na fibroblasts in ann conradh a dhéanamh agus an teannas ceart a sholáthar do na snáithíní deirmeacha.cistéirGo deimhin, cuireann OBHex crapadh maitrís collagen agus polaiméiriú actin chun cinn trí léiriú géine MYLK a mhéadú, feabhas a chur ar fhórsa crapadh fibroblasts deirmeach. Déanann comhthionól cíteischnámharlaigh actin uasrialáil gabhdóir TGF-chineál II agus, ag teacht le spreagadh comharthaíochta TGF- /Smad, méadaítear leibhéil na bpróitéiní ECM atá rialaithe ag TGF. Go deimhin, spreagann ObHEx táirgeadh collagen de chineál I, periostin agus tropoelastin. Dá bhrí sin, déanann na hairíonna seo go léir comhábhar iarrthóra dea-gheallta a úsáidfear i bhfoirmíochtaí cosmaideacha chun troid i gcoinne caillteanas a bhaineann le haois de dhaingne agus leaisteachas craiceann. Thacaigh an toimhde seo leis na torthaí a fuarthas san anailís AFM, a léirigh gur tháirg cóireáil slisní craiceann le ObHEx feabhas ar airíonna meicniúla craiceann, a braitheadh ​​​​mar laghdú ar modulus Young, rud a léiríonn laghdú suntasach ar stiffness agus rigidity craiceann.

4. Ábhair agus Modhanna

4.1.Cultúr Fíocháin Plandaí agus Ullmhúchán Sliocht

Chuir GEEL Floricultura ss plandaí Oenothera biennis ar fáil agus ba de bhunadh Iodálach iad (ag seachaint feidhmiú phrótacal Nagoya). Fuarthas saothráin cille ó dhuilleoga phlandaí Oenothera biennis trí iomadú ceall meiristematach a spreagadh ar phlátaí agair soladacha go dtí go bhfaighfí calluses. Aistríodh na cealla chuig an meán fáis leachtach (Gamborg B5, arna fhorlíonadh le 24 aigéad déchlóraphenocsaéiteach (1 mg/L), adenine(1 mg/L), agus cinéitín (0.01 mg/L)). , fásadh na cealla mar chultúir fionraí faoi chroitheadh ​​​​fithiseach. Chomh luath agus a fuarthas na cultúir de thart ar 150 g/L, bailíodh na cealla agus lysed i maolán fosfáit (PBS) ag pH7.4 a ullmhú sliocht intuaslagtha in uisce, a lyophilized. Díscaoileadh an púdar i meáin uisce nó cultúr cille ag na tiúchain chuí le haghaidh tástála.

4.2. Anailís UPLC-MSMS maidir le Tréithriú Ceimiceach

Ullmhaíodh OBHex(5{{1{0}} mg/mL)agus cuireadh isteach é chuig eastóscadh bútánól/uisce déphasic. Triomaíodh an codán bútánól agus tuaslagadh é i meatánól (10mg/mL) roimh an anailís UPLC-MS/MS. Rinneadh é ar Mais-speictriméadar Q-Exactive Clasaiceach ó Thermo-Scientific (Waltham, MA, SAM) a bhí feistithe le córas UPLC Thermo ScientificTM UltiMateTM 3000. Rinneadh na ritheanna crómatagrafaíochta go léir ag baint úsáide as Phenomenex Luna③C18 100 A （150 × 2.0 mm, méid na gcáithníní 3 μm） ag 40 céim C agus ráta sreafa de 0.200 mL/min. Ba é an toirt insteallta ná 5 μL. Is éard a bhí sa chéim shoghluaiste ná A (uisce ó ROMIL Ltd, Convent Drive, Waterbeach, Cambridge, an RA ag aigéad aicéiteach 0.1 faoin gcéad) agus B (100 faoin gcéad aicéataitrile ó ROMIL Ltd, Convent Drive, Waterbeach, Cambridge, RA) ag baint úsáide as elution grádán. de 5 faoin gcéad B ag0-5nóiméad,5-14 faoin gcéad B ag5-8 nóim,14-32 faoin gcéad B ag 8-11 nóim, 32-95 faoin gcéad Ialtóg {{ 26}}nóiméad, 95-98 faoin gcéad Ialtóg32-33 nóim, 98 faoin gcéad B ag 33-38nóiméad,98-5 faoin gcéad Ialtóg38-39 nóim, agus 5 faoin gcéad B ag { {34}} nóim. Rinneadh na hanailísí MS agus MSMS go léir i mód diúltach ESI le ráta sreafa gáis sheath ag 30 (aonaid treallach), an ráta sreafa gáis cúnta ag 5 (aonaid treallach), an voltas spraeála ag 3.2 kV, agus an teocht ribeach agus an teocht téitheoir gáis cúnta ag 300 céim. Fuarthas sonraí le modh Iomlán MS/dd-MS2 (Top5). Ba iad na socruithe MS iomlána: réiteach 70.000, sprioc AGC de 1 × 106, TF uasta de 200ms, agus is féidir leis a bheith idir socruithe 100 go 800 m/z.dd-MS2: taifeach 17.500, sprioc AGC de 2 × 105, uasmhéid IT de 65 ms, fuinneog leithlisithe de 1.5 m/z agus NCE de 35.

a fuarthas a fhíorú de láimh. Próiseáladh sonraí mzXML ag baint úsáide as Mzmine 2.53 roimh an jab um Líonrú Móilíneach Gné-Bhunaithe (FBMN) ar GNPS. Baineadh úsáid as an mbraiteoir mais lárnaithe an chéim bhraite maise agus an leibhéal torainn á choinneáil ag 5 × 1{{1{0}}3. Baineadh amach foirgneamh crómatagram Píblíne Anailíse Sonraí Uathoibrithe (ADAP) leis na socruithe seo a leanas: íosmhéid an ghrúpa i roinnt scananna de 5, tairseach déine grúpa 5 × 1{{2{0}}³, nóiméid an déine is airde de 5×10 móide ,m/z lamháltas de 0.01 m/z nó 10 ppm. Baineadh amach an dí-réimniú crómatagram trí úsáid a bhaint as Wavelets (ADAP) mar algartam, tairseach S/N de 3, airde gné íosta de 1 × 105, comhéifeacht / tairseach achair de 5, raon buaic-ama de 0.{{ 18}}.00 nóim, agus raon tonnfhaid RT de 0.00-0.05. Deiseataíodh crómatagram ag baint úsáide as an algartam grúpálaí buaic iseatópach le lamháltas m/z de 0.001 m/z nó 5.0 ppm agus lamháltas RT de 0.10 nóim. Rinneadh jab FBMN ag baint úsáide as lamháltas mais tuismitheora de 0.02 Da agus lamháltas ian blúirí MS4 de 0.02 Da. Scagadh na himill chun tairseach scór de 0.7 a bheith acu agus 2 bhuaic mheaitseála ar a laghad. Ina theannta sin, socraíodh 10 n-uaslíon na nód comharsan do gach nód.

4.4. Anailís Chainníochtúil ar Lignans agus Triterpenes

Baineadh úsáid as na coinníollacha céanna UPLC a tuairiscíodh don anailís cháilíochtúil chun anailís chainníochtúil a dhéanamh ar lignans, agus le haghaidh triterpenes, rinneadh iad a bharrfheabhsú chun dhá phéire isiméirí, arjunolic agus aigéad Áiseach a scaradh. Rinneadh an anailís ar Mais-speictriméadar Q-Exactive Clasaiceach mar a thuairiscítear roimhe seo. Rinne Phenomenex Kinetex⑧EVO C18 300 A (150 × 2.1 mm) an scaradh, méid na gcáithníní 5 μm）. Is éard a bhí sa chéim shoghluaiste ná tuaslagán uiscí aicéatáite amóiniam A(5 mM, pH 9.00 arna choigeartú ag hiodrocsaíd amóiniam) agus B(1{00 faoin gcéad aicéataitrile) ag baint úsáide as elution grádán de 17-28 faoin gcéad B ag 0-18 nóim, 28-65 faoin gcéad B ag 18-22 nóim, 65-75 faoin gcéad B ag 22-26nóiméad,75-95 faoin gcéad ag {{17 }}, 5 nóim, 95 faoin gcéad ag 26,5-30 nóim, 95-17 faoin gcéad ag 30-30,1 nóim,17 faoin gcéad ag 30,1-42 nóim. Ba é an ráta sreafa ná 0.450 mL/nóiméad agus ba é toirt an insteallta ná 5 ul. I gcás lignans agus triterpenes araon, fuarthas sonraí le modh Iomlán MS-SIM agus PRM. Ba iad seo a leanas socruithe iomlána MS-SIM: taifeach 70.000, sprioc AGC de 3×106, TF uasta de 200ms, agus is féidir leis a bheith idir 200 agus 800 m/z do lignans agus ó 400 go 850 m/z le haghaidh triterpenes. Ba iad na socruithe PRM ná: taifeach 70.000, sprioc AGC de 2 × 10 céim , TF uasta 100 ms, fuinneog leithlisithe 1.0 m/z, agus NCE de 35 i gcás lignans agus 50 sa mhéid sin triterpenes.cistanche AstráilCheannaigh muid Salvador i leataobh (#{{0}}XS172930) ó Biosynth Carbosynth (Staad, St. Gallen, An Eilvéis), liriodendron (#SMB00181), agus aigéad arjunolic (#SMB00119) ó Sigma -Aldrich (St. Louis, MO, SAM), aigéad Áiseach (#0027) ó Extrasynthese (Genay, Lyon, an Fhrainc) agus hederagenin (#89706) ó PhytoLab GmbH & Co.KG (Vestenbergsgreuth, Bayern-Mittelfranken, an Ghearmáin). Bronntanas ón Ollamh Maria Valeria D'Auria, Ollscoil Napoli, a bhí san aigéad miiriantach. Fuarthas na cuair chalabrúcháin trí thuaslagáin chaighdeánacha a instealladh sa raon tiúchana 0.25-25 μM do lignans agus 0.1-25 uM le haghaidh triterpenes. Léirigh Salvador íon ar leataobh agus liriodendron dhá bhuaic LC-MSMS, is dócha mar gheall ar an gcothromaíocht cheimiceach a bunaíodh sa tuaslagán. Socraíodh an teorainn braite (LOD) agus teorainn chainníochtaithe (LOO) do chaighdeáin ar bhonn an chóimheas comhartha-go-torann (S/N).

4.5.Cultúr agus Méaduithe Cille Craicinn

Coinníodh fibroblasts deirmeacha daonna (HDF) i Meán-Iolar Athraithe Dulbecco (DMEM; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, SAM) le 10 faoin gcéad de shéiream bó-ainmhithe féatais (FBS; Sigma-Aldrich, St.Louis, MO, SAM) ) in aer 95 faoin gcéad, 5 faoin gcéad CO, agus atmaisféar tais ag 37 céim. Saothraíodh mínithe craicinn, a fhaightear ó chraiceann deontóirí mná sláintiúla (aois 44-47) ag an ionad máinliachta Villa Cinzia (Napoli, an Iodáil), i 24-phlátaí transwell in DMEM/FBS móide antaibheathaigh san aer- coinníollacha leachtacha ag 37 céim céim i 5 faoin gcéad CO2 aer humidified. De réir Dhearbhú Heilsincí, bhí a dtoiliú feasach i scríbhinn tugtha ag na deontóirí go léir maidir le húsáid na bhfíochán craicinn.

4.6. Tástáil cíteatocsaineachta

Bhí tástálacha cíteatocsaineachta bunaithe ar úsáid an chomhábhair MTT [{{0}}(45-démheitil thiazolyl)-2,5-défheiniltetrazolium-bróimíd][34]. Fásadh na cealla i 96-plátaí tobair i meán cultúir DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium), arna fhorlíonadh le 10 faoin gcéad de shéiream bó féatais, ar feadh thart ar 8 h. Tar éis cóireála le ObHEx idir 0.05 faoin gcéad agus 0.0004 faoin gcéad (500 ug/mL agus 4 ug/mL) ar feadh 48 h, nite na cealla i PBS agus goraíodh iad le 100 μL/tobar de "maolán imoibriúcháin" ina bhfuil ∶ 10 mMof Hepes, 1.3 mM CaCl2, 1mM MgSO,5 mM de ghlúcós, agus 0.5 mg/mL de shubstráit dathmhéadrach MTT i maolán PBS ag pH7.4. Tar éis 3h de gor ag 37 céim C in 5 faoin gcéad CO, cuireadh 100 μLof tuaslagáin intuaslagtha ina raibh 10 faoin gcéad de Triton-X100,0.1 N de HCl in iseaprópánól absalóideach le gach tobar. Tar éis gor 16 h, tomhaiseadh an t-imoibriú dathmhéadrach ag 595 nm leis an léitheoir pláta Victor3 (PerkinElmer, Waltham, MA, SAM).

4.7. Anailís ar Léiriú Géine MYLK agus TGF6RII i HDF

In aghaidh an tobair, méadaíodh céim 1 × 10 HDF i 6-phlátaí tobair i DMEM ag 2 faoin gcéad FBS, tar éis 24 h FBS a chaolú tuilleadh go dtí 0.5 faoin gcéad , agus an déileáladh le cealla le 0.002 faoin gcéad agus 0.006 faoin gcéad de thiúchan ObHEx agus TGF- 2.5ng/mL, agus ina dhiaidh sin gor2h do MYLKand 48 do TGFRII. Le haghaidh eastóscadh RNA, baineadh úsáid as an trealamh "GenEluteM Total RNA Purification" a cheannaigh an chuideachta Merck (Darmstadt, an Ghearmáin). Tar éis na cóireálacha léirithe, nite na cealla le PBS, bailíodh i maolán lysis, agus cuireadh faoi réir an nós imeachta eastósctha mar a tuairiscíodh. Cóireáladh na samplaí le DNase I (Ambion, Austin, TX, USA) ag 37 céim ar feadh 30 nóiméad chun an t-ábhar salaithe DNA géanómach a bhaint. Ó gach sampla, lódáladh 2 μL ar fhoirmiú 1 faoin gcéad agarose i láthair dínádúraithe ruaim luchtaithe chun críche méid RNA a chainníochtú mar thagairt do mharcóir sonrach do RNA (ThermoScientific, Waltham, MA, SAM). Baineadh úsáid as GeneTools (PerkinElmer, Waltham, MA, SAM) mar bhogearraí chun cainníochtú a dhéanamh. Ina dhiaidh sin, rinneadh ais-trascríobh ar 300 ng den RNA iomlán ag baint úsáide as an einsím trascríobh-aisiompaithe (ThermoScientific, Waltham, MA, SAM). Rinneadh RT-PCR leathchainníochtúil ag baint úsáide as an péire primers uilíoch 18S primer/iomaitheoir (Ambion, Austin, TX, USA) mar chaighdeáin inmheánacha. Scaradh na táirgí PCR ar fhoirmiú agarose 1.5 faoin gcéad, breathnaíodh orthu ag baint úsáide as an uirlis Reliance (PerkinElmer, Waltham, MA, SAM), agus rinneadh anailís orthu trí dhlúsiméadracht ag baint úsáide as na bogearraí Genetools. Ba iad seo a leanas seichimh na bpreamaithe a úsáideadh chun aimpliú a dhéanamh: MYLK FW: ATCAAAACTGTCAAGTTCAG, MYLK Rv: AGGCACTGCGTGCAGTCCA, TGFBR2 FW: GTCACTGACAACAGGGT, TGFBR2 RV: ATGTCAGAGCGGTCATCT.

4.8. Anailís ar Chumas Crapadh Maitrís Collaigine

Maidir le cealla HDF, cuireadh 2.0 × 10 céim ar fionraí i meán fáis 5x DMEM (Gibco, Waltham, MA, SAM)i 24-phláta tobair, agus 2 mg/ Cuireadh tuaslagán collaigine mL ó chraiceann bó-ainmhithe (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, SAM) le gach tobar. Coigeartaíodh pH an tuaslagáin go 7.2. Gorradh an pláta ag 37 céim C ar feadh 45 nóiméad chun an glóthach collaigine a sholadú. Forlíontar DMEM le 10 faoin gcéad FBS agus/nó ML7 25 uM, mar choscóir MYLKprotein, níos déanaí. Tar éis 16 h, glanadh ML7 agus cuireadh an tiúchan 0.002 faoin gcéad i DMEM le 2 faoin gcéad FBS le ObHExat. Baineadh úsáid as TGF- 2.5 ng/mL mar rialú dearfach. Scaradh an diosca collaigine a foirmíodh láithreach ón tobar trí spatula micrea steiriúil a úsáid chun a chrapadh a chur chun cinn. Tomhaiseadh réimsí diosca gach cóireála ag am0 agus 5 h agus rinneadh anailís orthu ag baint úsáide as bogearraí Íomhá.

4.9. Anailís ar an gCéim Polymerization Actin

Ansin, fásadh céim 1.5×10 de chealla HDF in aghaidh an tobair i 24-phláta tobair agus an lá dár gcionn cuireadh an meán le 2 faoin gcéad FBS agus an Cytochalasin B, atá ina choscóir ar actin polaiméiriú, ag 2 μM ar feadh 3{{1{{20}}} nóim. Tar éis 30 nóim, ar na cealla, cuireadh ObHEx (0.002 faoin gcéad agus0.006 faoin gcéad) le chéile le TGF- 2.5 ng/mL, a úsáideadh mar rialú dearfach, agus ML7 25μM, mar a rialú diúltach ar an MYLKenzyme. Tar éis 30 nóiméad de chóireáil, socraíodh na cealla le 4 faoin gcéad paraformaildéad (PFA) i fosfáit mhaoláin ar feadh 30 nóiméad ar oighear. Bhí na cealla nite le PBS agus permeabilized le tuaslagán de maolán fosfáit agus Triton-X100 ag 0.2 faoin gcéad ar feadh 30 min. Ina dhiaidh sin, gor na cealla le tuaslagán de 0.4 μM de phalloidin comhchuingeach le rhodamine (Santa-Cruz Biteicneolaíocht, Dallas, TX, SAM) ar feadh 1 h sa dorchadas.sochair cistancheAg am 0 agus tar éis 18h, tomhaiseadh an fhluaraiseacht ag 540/570 nm ag baint úsáide as an léitheoir pláta Victor3 (PerkinElmer, Waltham, MA, SAM). 4.10.Anailís ar Chonair SMAD2

Síolaíodh cealla HDF ag dlús 3 × 103 i 96-plátaí tobair agus tar éis 16 h aistríodh iad ag baint úsáide as imoibrí aistrithe DNA X-tremeGeneTM HP (Roche Diagnostics, Basel, an Eilvéis) le veicteoir tuairisceora Smad2 de réir threoracha an mhonaróra. Tar éis 24 h, cuireadh cóireáil ar na cealla le ObHEx nó TGF- 2.5 ng/mL, ina n-aonar nó i gcomhcheangal le ML7 25 μM ar feadh 24 h. Ag deireadh na gorlainne, nitear na cealla le PBS agus socraíodh gníomhaíocht luciferase trí úsáid a bhaint as córas measúnaithe SteadyGlo Luciferase (Promega Corporation, Madison, WI, SAM) sa Multiwell Plate Reader Victor Nivo (PerkinElmer, Waltham, MA). , SAM).

4.11.Anailís ar Shintéis Pro-Collagen I, Tropoelastin, agus Periostin

De réir an tobair, fásadh 8×103 HDF i 96-phlátaí tobair agus déileáladh leo leis an 0.002 faoin gcéad de ObHEx nó TGF 2.5 ng/mL. Tar éis 24 h, próiseáladh na cealla le haghaidh ELISA ag baint úsáide as antashubstaint phríomhúil mhonaclónach frith-procollagen cineál I(sc-166572, Santa-Cruz Biotechnology, Dallas, TX, USA), agus ina dhiaidh sin gor leis an antasubstaint thánaisteach frith-luiche lipéadaithe. le sárocsaíd (170-6516, Biorad, Hercules, CA, SAM). Brataíodh forshnátháin na gceall ar phláta eile chun tropoelastin agus periostin a bhrath ag baint úsáide as antasubstaint coinín frith-tropoelastin (ab21600, Abcam, Cambridge, U nó antasubstaint luch frith-periostin(sc-398631, Santa-Cruz Biotechnology). , Dallas, TX, SAM), agus gor ina dhiaidh sin le frith-choine antashubstainte tánaisteach lipéadaithe le sárocsaíd (170-6515, Biorad, Hercules, CA, USA). OPD(O-phenylenediamine), 0.35 mg/ml i maolán citrate 50 mm, agus sárocsaíd hidrigine 0.012 faoin gcéad (H2O2) Tar éis 30 nóiméad, tomhaiseadh an t-ionsúiteadh ag 490 nm ag baint úsáide as an léitheoir iolrach Victor Nivo (PerkinElmer, Waltham, MA, USA).

4.12. Tástálacha ex vivo

Measúnaíodh imdhíonHistoFluaraiseacht(IHF) de MYLKand mióisín fosfarlaithe i mínithe craicinn deontóirí {{{0}}bliain d'aois. Gearradh eisitheoirí craiceann daonna le curettes bithóipse punch 8 mm agus saothraíodh iad i 24-phlátaí tobair i DMEM le 10 faoin gcéad FBS agus antaibheathaigh. Cóireáladh na punanna a fuarthas le 0.002 faoin gcéad agus 0.006 faoin gcéad de OBHEX ar feadh 24 h. Bhí siad gor i 15 faoin gcéad shiúcrós, ansin i 30 faoin gcéad shiúcrós, agus ar deireadh reoite. Ansin, fuarthas ailt 10 μm ag baint úsáide as an cryostat CM1520 (Leica Microsystems, Wetzlar, an Ghearmáin). Rinneadh na sleamhnáin le cryosections a hiodráitiú ar feadh 30 nóiméad i PBS agus cuireadh iad i dtuaslagán "blocála" (6 faoin gcéad BSA, 5 faoin gcéad serum, 20 mM MgCl,, 0.2 faoin gcéad Tween) ar feadh 1 h. Goradh cryosections leis an bpríomh-antasubstaint coinín frith-MYLK (1: 100, GeneTex, Irvine, CA, SAM) agus an príomh-frith-fosfa-myosin antashubstainte (1:100, LifeTechnologies, Carlsbad, CA, SAM) ar feadh 16 h. 4 céim . Níodh na sleamhnáin le PBS ar feadh 30 nóiméad agus ansin goraíodh iad leis an antasubstaint thánaisteach frith-coinín Alexa-Fluor 546 (1:1000; ThermoFisher A11035, Waltham, MA, SAM) ar feadh 1 h. Rinneadh na núicléis a dhathú le DAPI(4',6-5 diaimidine{-2-phenylindole)1 ug/mL i PBS ar feadh 10 nóiméad. Fuarthas na híomhánna le micreascóp fluaraiseachta agus rinneadh anailís orthu le bogearraí ImageJ. Le haghaidh IHF de tropoelastin agus collagen I, baineadh úsáid as explosive craicinn de 36-deontóirí baineanna bliain d'aois. Fuarthas bithóipsí craicinn mar a thuairiscítear thuas agus réamhchóireáil le 0.002 faoin gcéad agus 0.006 faoin gcéad de ObHEx ar feadh 24 h. Cuireadh strus le hidreacortisone ag 10 ug/mL ar feadh 8 lá i láthair OBHEx. Ina dhiaidh sin, reoitear bithóipsí mar a thuairiscítear thuas agus goradh na hailt leis an gcoinín antashubstainte príomhúil frith-tropoelastin (1: 1000 ab21600, Abcam, Cambridge, RA) agus frith-collagen I (1: 100 C2456 Merck, Darmstadt, an Ghearmáin) le haghaidh 16h ag 4 chéim. Rinneadh anailís ar na sleamhnáin mar a thuairiscítear thuas agus fuarthas na híomhánna agus rinneadh anailís orthu le bogearraí ImageJ.

4.13. Micreascópacht Fhórsa Adamhach (AFM) i bPlandaí Craiceann

Rinneadh measúnú ar leaisteachas na samplaí craiceann nár cóireáilte agus cóireáilte le ObHEx ag cinntiú modúil a Young ar mhodh scála nanaiméadrach bunaithe ar Mhicreascóip Fhórsa Adamhach (AFM), a forbraíodh ní hamháin do shamplaí bitheolaíocha ach freisin do chinn neamhorgánacha. Tá na cineálacha cur chuige seo bunaithe ar thoimhdí samhlacha Hertz agus breithníodh an sampla agus an cantilever mar dhá spriongaí i sraith i suíomh turgnamh AFM. Go hachomair, eisphlanda craiceann cóireáilte le 0.0Gearradh 06 faoin gcéad de OBHex agus samplaí craicinn neamhchóireáilte le cryostat i slisní de 10 um ar tiús. Stóráladh samplaí ag 12 céim , ansin nite le PBS agus scrúdaíodh iad ag teocht sheasta agus taiseachas coibhneasta de 22 céim agus 55 faoin gcéad , faoi seach . Rinne NanoScope IIA AFM i Mód Aonair Speictreascópachta Fórsa imscrúdú ar gach sampla ag baint úsáide as rinn phirimideach (RESP-20) le tairiseach lingeáin de 0.9 N/m. Chun modal Young a ríomh, fuarthas deich gcuar Fórsa i ndeich bpointe éagsúla de na superficies samplacha céanna. Is cuar sraonaidh (Volta) in aghaidh díláithrithe (nm) é gach cuar Fórsa agus is féidir é a thiontú ina chuar Fórsa (N) i gcoinne deighilte (nm). Go deimhin, tuairiscíonn gach cuar Fórsa cuair luchtaithe agus díluchtaithe. Léiríonn siad treocht an rinn maidir leis an sampla: nuair a bhíonn an rinn i bhfad ón sampla nuair a thagann siad i dteagmháil agus nuair a thosaíonn an rinn ag sraonadh, agus nuair a bhogann sé ar shiúl arís. Ní féidir ach an chéad chuid de na cuair seo a fhiosrú. Bhí gach ceann de na codanna seo de na cuair oiriúnach le múnla caighdeánach Hertzian, go háirithe, an Hertzequation tipiciúil le haghaidh rinn pirimide, chun an modulus leaisteacha ar a dtugtar modal Young i GPa a bhaint as.

4.14. Anailís staitistiúil

B'ionann na luachanna go léir a tuairiscíodh agus an meán de thrí thurgnamh neamhspleácha, agus rinneadh gach ceann díobh i dtrí thurgnamh. Léiríonn na réiltíní suntas staitistiúil arna ríomh i gcomhaontú leis an t-tástáil: *meánluach Níos lú ná nó cothrom le 0.05;** luach p Níos lú ná nó cothrom le 0. 01;***p luach Níos lú ná nó cothrom le 0.001.

Baintear an t-alt seo as Metabolites 2021, 11, 527. https://doi.org/10.3390/metabo11080527 https://www.mdpi.com/journal/metabolites