Fágann Vacsaín Adenovirus ina bhfuil SARS-CoV teasctha-2 Fo-aonad Próitéin Spike S1 Freagairt Imdhíonachta Sonrach i Lucha

AbstraNameCt% 3AIs cur chuige ríthábhachtach é forbairt vacsaíne éifeachtach agus sábháilte don ghalar coronavirus 2019 (COVID-19) chun paindéim géar-ghéar-ghalar riospráide coróinvíreas 2 (SARS-CoV-2) a bhainistiú i bhfianaise na gcoinníollacha reatha. Sa staidéar seo, tháirgeamar teascán giorraithe den ghéin spike optamaithe SARS-CoV-2 (2043 bp, ar a dtugtar S1) a bhí in ann próitéin teasctha S1 a ionchódú. Tástáladh an phróitéin le fáil amach an bhféadfadh sé imdhíonadh éifeachtach a fháil i lucha i gcoinne SARS-CoV-2. Deimhníodh láithreacht an phróitéin S1 le immunofluorescence agus blotáil an Iarthair. Tugadh vacsaín adenovirus ar a raibh an blúire géine S1 (Ad-S1) go ionmhatánach do lucha ceithre huaire thar 4 seachtaine. SARS-CoV-2 Léiríodh díolúine greannach próitéine S1 i lucha imdhíonta ar fad. Léirigh an serum ó lucha imdhíonta gníomhaíocht frith-ionfhabhtaithe den scoth in vitro. Breathnaíodh freagairt imdhíonachta láidir humoral i gcoinne SARS-CoV-2 i lucha tar éis an vacsaínithe le Ad-S1, rud a thugann le tuiscint go bhféadfadh an vacsaín adenovirus cuidiú le forbairt vacsaíní i gcoinne SARS-CoV-2 agus eile atá sainiúil go géiniteach. víris.

cistanche tubulosa-feabhas a chur ar chóras imdhíonachta

Eochairfhocail: SARS-CoV-2; vacsaíní; veicteoir adenoviral; géine S1; díolúine

1. Réamhrá

Is minic a bhaineann galar coronavirus 2019 (COVID-19) le cliseadh orgán iolrach agus rátaí arda mortlaíochta [1] agus is bagairt mhór é do shábháilteacht an phobail ar fud an domhain. Ón 15 Iúil 2022, bhí an phaindéim COVID-19 fós ann ar fud an domhain, le 557,917,904 cás deimhnithe, lena n-áirítear 6,358,899 bás, tuairiscithe don Eagraíocht Dhomhanda Sláinte (WHO). Ina theannta sin, tugadh iomlán de 12,130,881,147 dáileog vacsaíne amhail an 11 Iúil 2022. Dá bhrí sin, tá dearadh agus forbairt vacsaíní nua don choróinvíreas (nCoV) thar a bheith tábhachtach agus tá siad ar cheann de na príomhthosaíochtaí sláinte domhanda. Is príomhfhachtóir í an próitéin S maidir le hiontráil SARS-CoV-2 géarghalar riospráide géarchorparáideach 2 (SARS-CoV-2) isteach i gcealla óstaigh [2,3]. Ceanglaíonn an próitéin leis an ngabhdóir óstaigh agus ligeann don víreas dul isteach sa chill óstaigh go réidh [4]. Téann glycáin N-nasctha isteach ón dromchla trimer agus maisíonn siad an próitéin S go forleathan, ag cur isteach ar fhilleadh próitéine S, díolúine humoral, agus próiseáil protease cille óstach [5]. Tá dlús glycan N-nasctha níos ísle ag an bpróitéin SARS-CoV-2S ná ag próitéiní pataigineacha S eile arna n-spreagtha ag an choróinvíreas [6]. Mar sin, féadfaidh an próitéin S a bheith an-imdhíon-ghineach agus is mór-sprioc é antasubstaintí a neodrú. Tá trí réimse struchtúracha ag an próitéin S, ina measc is é fearann ​​​​S1 an antigen dromchla próitéin S is tábhachtaí [4]. Mar gheall ar an deacracht a bhaineann le próitéiní móra athchuingeacha a tháirgeadh (tá thart ar 1300 aimínaigéid i bhfearann ​​extracellular an próitéin S) agus an baol ionfhabhtaithe feabhsaithe antasubstainte-spleách (ADE), S1 (thart ar 700 aimínaigéid) agus a fhearann ​​ceangailteach ar ghabhdóirí. (RBD, thart ar 200 aimínaigéad) go forleathan mar na spriocanna féideartha is tarraingtí do vacsaín coronavirus [7,8]. Úsáidtear séiritíopa adenovirus daonna 5 (HAdV-C5) go forleathan i víreolaíocht bhunúsach mar veicteoir géinteiripe agus seachadta vacsaíne [9]. Tá éagsúlacht nádúrtha ag HAdV-C5 agus féadann sé an chuid is mó de na hóstach a pharasadh, atá mar bhunús le forbairt turgnaimh ainmhithe. Baineadh úsáid go forleathan as veicteoirí adenovirus athchuingreach le lochtanna macasamhlú agus macasamhlú déanta as HAdV-C5 i seachadadh vacsaíní agus i géinteiripe [9,10]. Faoi láthair, tá adenoviruses ceadaithe mar vacsaíní i gcoinne ionfhabhtuithe géara riospráide agus rinneadh go leor trialacha ar vacsaíní den sórt sin, mar shampla le haghaidh maláire agus VEID-1 [9]. Sa pháipéar seo, déanaimid cur síos ar vacsaín veicteoir adenovirus daonna SARS-CoV-2 atá easnamhach i leith macasamhlú daonna agus ar a hullmhú agus a chur i bhfeidhm. Sa staidéar seo, tógadh an vacsaín adenovirus mar seo a leanas: ba é an veicteoir adenovirus macasamhlú daonna HAdV-C5 le scriosadh E1 agus E3, bhí an plasmid cnámharlach adenovirus athchuingreach le pBHGlox∆E1,3Cre, ba é an líne cille pacáistithe ná cealla HEK293, agus ba é an ghéin teasctha próitéine S1 de SARS-CoV-2 an spriocghéine. Aithníodh léiriú próitéine S1 sa vacsaín ag measúnachtaí blotála an Iarthair agus imdhíonfhluaraiseachta. Chun cáilíocht na bhfreagairtí imdhíonachta a tharlódh ó na hiarrthóirí vacsaíne spíc-bhunaithe a chinneadh, scrúdaíodh go mion an freagra antashubstainte iar-vacsaínithe. Rinneadh measúnú ar shochar imdhíonachta na vacsaíne le tástáil cheangailteach antashubstainte (measúnacht imdhíon-ionsorbent atá nasctha le heinsím [ELISA]) agus tástáil antasubstainte neodraithe. Soláthraíonn ár dtorthaí an bonn d’fhorbairt agus do mheasúnú vacsaíní agus cóireálacha COVID{-19 bunaithe ar phróitéin S1.

2. Ábhair agus Modh

2.1. Cealla agus Ainmhithe

Baineadh úsáid as línte cealla duáin moncaí HEK293 agus Vero E6 sa staidéar seo. Fásadh an dá líne chill i meán modhnaithe Eagle Dulbecco (DMEM) arna fhorlíonadh le 2% serum bó féatais (FBS) agus 1% peinicillin agus streiptimícin ag 37 ◦C le 5% CO2 agus taise sáithithe. Ceannaíodh fiche lucha baineann C57BL/6 (6–8 seachtaine) ó Ionad Turgnamhach Ainmhithe Zhejiang, Cúige Zhejiang. Roinneadh na lucha go randamach ina dhá ghrúpa agus 10 lucha i ngach grúpa. Tugadh imdhíonadh do ghrúpa amháin (instealladh intraperitoneal 100 µL) le veicteoir Ad5 a léirigh an spícphróitéin SARS-CoV (Ad{5-S) agus an ceann eile le PBS (instealladh inperitoneal 100 µL) mar rialú. Ba é méid iomlán an víris ná 5 × 109 VP. Rinneadh imdhíonadh ar gach lucha le hinstealladh ionmhatánach D0/D14 [11,12]. Ag D14, glacadh fola imeallach de 100 µL, scartha serum, agus tugadh an dara instealladh dhá uair an chloig tar éis bailiú fola. Ag D28, bailíodh fuil trí phuncture ais-fhithiseach agus scaradh séiream. Braitheadh ​​antasubstaintí ceangailteacha 3 lá tar éis gach bailiúchán fola, aimsíodh antasubstaintí neodraithe 7 lá tar éis gach bailiúchán fola, agus braitheadh ​​cytokines 7 lá tar éis an dara bailiúchán fola. Bhí euthanized gach lucha; rinneadh na tástálacha go léir i gcomhréir dhlúth leis na "Treoirlínte um Chúram agus Úsáid Ainmhithe Turgnamhach Dhaon-Phoblacht na Síne" agus faomhadh ag Comhairle Eiticiúil Ollscoil Zhejiang Shuren.

2.2. Vacsaíní

Bailíodh na cineálacha SARS-CoV-2 go léir a úsáideadh sa staidéar seo ó othair COVID-19 le toiliú. D’fhorbair an tSaotharlann Lárnach Stáit um Fháthmheas agus Chóireáil Ghalair Thógálacha vacsaín adenovirus (Vero cell, strain WuHan, uimhir GISAID: EPI_ISL_415711) i gcoinne SARS-CoV-2 agus ansin an Rinneadh an vacsaín i suíomh a chomhlíon an leibhéal bithshábháilteachta (BSL). Is é 0.5 mL/dáileog sonraíocht na vacsaíne agus tá Tris, NaCl, siúcra cána, MgCl2.6H2O, C6H9N3O2, eatánól absalóideach, agus an próitéin SARS-CoV-2 S1 inti.

2.3. Tógáil Adenovirus athchuingreach

Fuarthas an seicheamh próitéin SARS-CoV-2 S1 (uimh. QRU91950.1) ó PubMed. De réir an degeneracy géine, dearadh an seicheamh núicléitíd codon optamaithe atá oiriúnach do léiriú cille mamaigh bunaithe ar an mbonn gur fhan an t-ord aimínaigéad den phróitéin táirge atá ionchódaithe ag an próitéin SARS-CoV-2 S1 gan athrú. Ba é an fad iomlán ná 2043 bp. Rinneadh an seicheamh réamhtheachtaithe 50 a shintéisiú le gníomhachtóir plasminogen fíocháin (tPA) agus ligeadh an seicheamh ionchódaithe SARS-CoV-2 S1 aimínaigéad 2-688 agus an t-ord réamhtheachtaithe tPA. Cuireadh seicheamh Kozak agus suíomh srianta SpeI os comhair an chódóin tosaithe agus cuireadh suíomh srianta XbaI leis tar éis an chódú foirceanta. Rinne Sangon Biotech na seichimh núicléitíde de na géinte thuas a shintéisiú agus a chlónáil isteach i pUC18 chun plasmid clónáilte na géine sintéiseacha a fháil. Rinneadh an seicheamh géine S1 sintéiseithe agus veicteoir pDC316 a dhíleá le endonucleases srianta SpeI agus XbaI. Aisghabhadh an spriocbhlúire agus an veicteoir ón nglóthach agus ceanglaíodh iad chun plasmid tointeála a dhéanamh. Pacáladh an plasmid tointeála SARS-CoV-2 le cnámharlach an chórais adenovirus AdMax plasmid pBHGloxd∆E1 agus 3Cre trí chomh-aistriú cealla HEK293. Fuarthas an príomh-réiteach víreas tar éis reo-leá agus lártheifneora arís agus arís eile, agus aimplíodh agus saothraíodh an víreas tar éis íonú plaic.

sochair cistanche do na fir-neartú chóras imdhíonachta

Cliceáil anseo chun táirgí Cistanche Feabhsú Díolúine a fheiceáil

【Iarr tuilleadh】 Ríomhphost:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

2.4. Cinneadh an Adenovirus Titer

Roghnaíodh cealla HEK293 i ndea-shláinte agus cuireadh ar fionraí iad arís chun fionraí cille 5.{2}} × 1{05 cealla/mL a ullmhú, a síolaíodh i 24-pláta tobair (1 mL/tobar ) agus saothraithe ag 37 ◦C i dtimpeallacht 5% CO2. Caolaíodh an sampla go sraitheach faoi dheich agus rinneadh sampla caolaithe (0.1 mL) de 10 -5 go 10−8 cill a ionaclú ar 24-phláta tobair . Ansin, bhí na plátaí faoi lé ionfhabhtú ag 37 ◦C le 5% CO2 ar feadh 48 h. Ina dhiaidh sin, baineadh an meán cultúir, cuireadh meatánól réamh-fhuaraithe (0.5 mL), agus socraíodh na samplaí ag −20 ◦C ar feadh 20 nóiméad. Tar éis an tsocraithe, nite na samplaí le saline maolánach fosfáit (PBS) agus bac le 1% albaimin serum bó (BSA, 0.2 mL) ag 37 ◦C ar feadh 1 h. Ansin, cuireadh na príomhantasubstaintí (Luch Frith-Adenovirus Hexon, AbD Serotec 04000079, 1:2000) agus tánaisteacha (Gabhar pAb go MS IgG2a(HRP), Abcam ab97245, 1:1000) leis agus gor iad ar feadh 1 h, lena linn sin PBS Baineadh úsáid as le haghaidh níocháin. Tar éis goir, cuireadh tuaslagán oibre nua-ullmhaithe (0.2 mL) leis agus gor é ar feadh 5-10 nóiméad ag teocht an tseomra. Ansin, caitheadh ​​amach an tuaslagán oibre, nite na samplaí le PBS, agus cuireadh PBS (1 mL) leis arís. Ríomhadh meánlíon na gcealla dearfacha sa réimse micreascópach (cat. CKX53, OLYMPUS Research Inverted System Microscope), áit ar roghnaíodh grádán le 5-50 cealla dearfacha sa réimse radhairc agus roghnaíodh cúig réimse ar a laghad go randamach le haghaidh comhaireamh. . Ríomhadh líon na réimsí amhairc i ngach tobar de 24-phláta an tobair. Ansin, ríomhadh titer an víris de réir na Foirmle (1):

2.5. PCR Fíor-ama

Chun léiriú mRNA cille HEK293 a bhrath tar éis ionfhabhtú víreasach, bhaineamar RNA idirmheánach amach de réir threoracha oibriúcháin TRIzol (Invitrogen, Waltham, MA, SAM). Baineadh RNA iomlán amach ag baint úsáide as TRIzol agus próiseáilte le RQ1 RNase-DNase I (Promega, Madison, WI, USA) chun deireadh a chur DNA iarmharach. Fuarthas DNA comhlántach (cDNA) trí thrascríobh droim ar ais den RNA a bhaintear úsáid as Kit Imoibrí PrimerScript™ RT le gDNA Eraser Kit (Takara, Kusatsu, an tSeapáin). Gineadh blúirí DNA leis na primers sonracha P1 (50 -GGTGATTCTTCTTCAGGTTGGA-30 ) agus P2 (50 - GTTTCTGAGAGAGGGTCAAGTG-30 ) den spriocghéine (S1). Aimplíodh an ghéin le primers P3 ( 1GTCTTCACCACCATGGAGAA-30 ) agus P4 (50 -TAAGCAGTTGGTGGTGCAG-30 ) mar an rialú inmheánach (GAPHD).

2.6. Blot an Iarthair

Scaradh an lysate cille agus an forshuiteán le leictreafóiréis glóthach dodeicile sulfáit-polyacrylamide sóidiam (SDS-LEATHANACH) agus ansin aistríodh chuig seicní fluairíd pholaivinilideine (PVDF). Rinneadh na blots a léirshamhlú le trealamh íomháithe blot an Iarthair (Bio-Rad, Hercules, CA, USA). Go hachomair, aistríodh na seicní go TBST (50 mL Tris-HCl, pH 7.5, 8 g NaCl [0.5 mL], 0.2 g KCl, 0.5 mL Tween -20) le 5% púdar bainne tirim neamh-saille agus croith ar shaker dídhathaithe ag teocht an tseomra ar feadh 1 h. Baineadh seicní na ngrúpaí turgnamhacha agus rialaithe den tuaslagán séalaithe agus goradh iad leis an bpríomhantasubstaint: [SARS-CoV-2 (2019-nCoV) Spike Antibody (1:5000, #40591- T62, Sino Biological, Beijing, An tSín)] ag teocht an tseomra. Croitheadh ​​agus goradh na príomhantasubstaintí thar oíche ar chroiteoir dídhathaithe ag 4 ◦C. Nigh an blot le tuaslagán TBST agus gor é ar feadh 2 h leis an antasubstaint thánaisteach [glóbailin imdhíonachta frith-choine gabhar G (IgG) H&L (HRP) (1:10,000, cat. #ab6721, Abcam, Cambridge, RA)]. Tar éis sruthlaithe, goradh na blotaí ar feadh 1 nóiméad le trealamh tuaslagáin LumiBest Substrate ECL (cat. #4AW011-100, 4A Biotech), agus ansin breathnaíodh in íomháóir.

2.7. Measúnacht Imdhíonfhluaraiseachta

Síolaíodh cealla HEK293 (3 × 106/tobar) i 12-phlátaí tobair. Tar éis 48 h, bhí na cealla ionfhabhtaithe le adenovirus ina raibh an ghéin S1 (Ad-S1). Tar éis 48 h, asúite an mheán, agus nite na cealla uair amháin le PBS ina raibh 2% BSA, agus seasta ar feadh 15 nóiméad le meatánól a bhí réamh-fuaraithe ar feadh 15 nóiméad ag −20 ◦C. Tar éis trí nite le 2% BSA i PBS, tréscaoilteadh na cealla le 0.5% Triton X-100 ar feadh 10 nóiméad. Ansin, cuireadh bac ar na cealla ar feadh 1 h le 2 mL 2% BSA, scriosadh an réiteach blocála, agus nitear na cealla trí huaire le PBS. Ina dhiaidh sin, cuireadh 2 mL antashubstaint phríomhúil [SARS-CoV-2 (2019-nCoV) Spike Antibody (1:2000, cat. #40591-T62, Sino Biological)] le gach tobar agus gortha ag teocht an tseomra ar feadh 1 h nó 4 ◦C thar oíche. Ansin, rinsíodh an sampla trí huaire le 2% BSA ar feadh 5 nóiméad in aghaidh an sruthlaithe. Ansin, cuireadh antashubstaint thánaisteach 2 ml [gobhar frith-choine IgG H&L (Alexa Fluor 488) (1:1000, cat. #550037, ZenBio)] le gach tobar agus gor é ag teocht an tseomra ar feadh 1 h. Ina dhiaidh sin, rinsíodh na samplaí trí huaire le 2% BSA ar feadh 5 nóiméad in aghaidh an sruthlaithe. Cuireadh 40,6-diamidino-2-tuaslagán feinilindole (DAPI) (2 mL, 1 mg/mL) (1:400, cat. #S0001, Bioss, Woburn, MA, USA) le gach tobar agus d'imoibrigh sé ar feadh 10 nóiméad sa dorchadas. Breathnaíodh an anailís le córas íomháithe EVOS™ M7000 (cat. #AMF7000, Invitrogen).

2.8. ELISA

Brataíodh próitéin SARS-CoV-2 S (1 µg/mL) thar oíche i 96-plátaí tobair (100 µL/well) le 0. 0Maolán décharbónáite 5 M. Tar éis níocháin le PBST (0.2 g KH2PO4, 2.9 g Na2HPO4·12H2O, 8.0 g NaCl, 0.2 g KCl, 0.5 mL Tween-20, cuir uisce go 1000 mL) cúig uaireanta, cuireadh réiteach blocála leis agus gor é ag 37 ◦C ar feadh 1 h. Caolaíodh an sampla serum agus cuireadh le gach tobar é (100 µL/tobar). Tar éis gor 1 h ag 37 ◦C, nigh na samplaí le PBST cúig huaire. Cuireadh an príomh-antasubstaint [SARS-CoV-2 ({2019-nCoV) Spike Antibody (1:2000, cat. #40591-T62, Sino Biological)] leis agus goradh é ar feadh 1 h, ansin nite na samplaí cúig huaire le PBST, agus ina dhiaidh sin gor 1 h ag 37 ◦C le antashubstaint tánaisteach comhchuingeach horseradish peroxidase [gobhar frith-choineach IgG H&L (HRP) (1:10,000, cat. #ab6721, abcam)] agus cúig nite le PBST. Tar éis 3, 30, 5, agus 50-anhydride tetramethyl défheinile a chur leis ar feadh 5 nóiméad, cuireadh stop leis an imoibriú le haigéad sulfarach 2 M. Rinneadh an dlús optúil a thomhas ag 450 nm agus 630 nm ag ionstraim lipéadaithe einsím (Feistí Móilíneacha, SpectraMax 190) agus ansin feistiú go dtí cuar caighdeánach.

Buntáistí cistanche tubulosa- an córas imdhíonachta a neartú

2.9. Cinneadh Cytokine 

Rinneadh an pláta (cat. #T-k15048D-1, MSD) a ní trí huaire le maolán 150 µL/níochán tobair agus cuireadh sampla ullmhaithe 50 µL le gach tobar. Ansin, séalaithe an pláta le séala pláta ghreamaitheach agus gor ag teocht an tseomra le croitheadh ​​ar feadh 2 h. Ansin, nite an pláta trí huaire le maolán 150 µL/níochán tobair agus cuireadh tuaslagán antashubstaint braite 25 µL le gach tobar. Séalaíodh an pláta arís agus goradh ag teocht an tseomra le croitheadh ​​​​ar feadh 2 h. Ansin, nite an pláta trí huaire le maolán 150 µL/níochán tobair ar a laghad; Cuireadh 150 µL 2 × Read Buffer T (MSD) le gach tobar, agus rinneadh anailís ar an pláta ar ionstraim MSD.

2. 10. Antashubstaint neodraithe

2.10.1. Measúnacht Neodraithe Pseudovirus

Tástáladh gníomhaíocht neodrú serum luiche ag baint úsáide as córas pseudoviral víreas stomatitis vesicular (VSV). Díghníomhaíodh an serum i ndabhach uisce ar feadh {{{0}}.5 h ag 56 ◦C, agus ansin caolaíodh é go sraitheach go dtí an raon riachtanach. Plátáladh cealla HEK293 i 96-phláta tobair. Meascaíodh an séiream caolaithe le 200 CCID50 (an dáileog víreas ar féidir léi 50% de chultúr na cille)/100 µL den fhionraí víreas a ionfhabhtú i gcóimheas 1:1 agus a chur i gorlann CO2 (37 ± 1 ◦C) le haghaidh 2 h. Ansin, cuireadh 100 µL de thuaslagán cothabhála víreas ina raibh 0.5% antashubstaint dhúbailte peinicillin-streptomycin le gach tobar, agus rinneadh an meascán neodraithe a ionaclú i 96-pláta tobair ina raibh cealla ag 100 µL in aghaidh an tobair, le dhá thobar athdhéanta do gach caolú. Ag an am céanna, socraíodh gnáth-rialú cille, agus goraíodh na cealla i gorlann CO2 (37 ± 1 ◦C) ar feadh 96 h. Ansin, caolaíodh 200 CCID50/100 µL de thuaslagán víreas go 10-1~10-3. Caitheadh ​​an meán saothraithe cille sa 96-pláta tobair, cuireadh 150 µL den tuaslagán cothabhála víreas le gach tobar, agus ionaclaithe an caolú tuaslagáin víreas ag tiúchan de 10-1~{{33} } isteach i toibreacha an 96-pláta tobair (50 µL an tobar). Rinneadh gach caolú arís agus arís eile in 8 dtobar; socraíodh gnáthrialú cille ag an am céanna, agus ina dhiaidh sin cultúr ar feadh 96 h. Breathnaíodh na hathruithe ar CPE cille faoi mhicreascóp inbhéartaithe. Níor cheart go mbeadh aon athruithe cíteapatacha ag an ngnáth-rialú cille, agus ba cheart go mbeadh athruithe CPE ag an rialú dearfach. Ríomhadh críochphointí neodraithe (caoluithe serum a tiontaíodh go logartamaí) tríd an CPE a bhreathnú. Ba é an critéar seronegative/dearfach ná 1:12 mar an critéar dearfach/diúltach,<1:12 was negative, and ≥1:12 was positive. 

2.10.2. Measúnacht Beo Neodraithe

Rinneadh measúnú ar ghníomhaíocht neodrú serum luiche le tástáil neodraithe beo. Meascaíodh an séiream caolaithe le SARS-CoV-2 agus goradh é ag 37 ◦C ar feadh 1 h. Cuireadh an meascán le 96-pláta tobair chun na cealla Vero E6 a ionfhabhtú. Tar éis 72-h goir ag 37 ◦C, breathnaíodh éifeacht cíteapatach an víris (CPE) faoi mhéadú ×40 agus ríomhadh an titer neodraithe (caolú cómhalartach de 50% de shéiream a theastaíonn chun ionfhabhtú víreas a neodrú). Rinneadh na nósanna imeachta thuas go léir i dtimpeallacht bithshábháilteachta leibhéal 3.

2. 11. Anailís staitistiúil

Rinneadh anailís staitistiúil trí thástáil t dhá shampla ag baint úsáide as SPSS 26. P-luachanna Measadh go raibh luach níos lú ná nó cothrom le 0.05 suntasach. Tomhaiseadh an claonadh lárnach leis an meántiter geoiméadrach (GMT).

3. Torthaí

3.1. Tógáil Adenovirus athchuingreach

Fuarthas an tointeáil adenovirus athchuingreach plasmid pAdeno-CMV-S1 le cur isteach ceart; tá a léaráid struchtúir léirithe i bhFíor 1. San adenovirus athchuingreach bhí an genome HAdV-C5 nach bhfuil sa réigiún E1/E3 ann. Taispeántar léaráid scéimreach den veicteoir adenovirus athchuingreach a fuair an t-aistriú tointeála plasmid agus cítoskeleton plasmid i gcealla HEK293 i bhFíor 1.

3.2. Tréithriú Adenovirus Athchuingreach

D'aithin PCR an plasmid athchuingreach ina raibh an spriocghéine (féach Fíor 2A le haghaidh torthaí leictreafóiréis glóthach). Turgnamh arís agus arís eile a bhí anseo. Ba iad na seichimh primer ná MCMV-F ggtataagaggcggaccag agus S1-R acaataagtagggactgggtc, agus dheimhnigh seicheamhú go raibh an seicheamh comhsheasmhach leis an dearadh. Braitheadh ​​SARS-CoV-2 slonn S1 sna cealla le blotting an Iarthair (Fíor 2B) agus imdhíonfluaraiseacht indíreach (Fíor 2C). Braitheadh ​​dathú an bhanna (~75 kDa) le blotting an Iarthair agus bhí sé comhsheasmhach le suíomh an bhanna ionchais. Ag an leibhéal tras-scríofa, braitheadh ​​PT-PCR an léiriú in vitro de S1. Léirigh na torthaí go raibh slonn S1 mRNA i gcealla HEK-293 i bhfad níos airde ná mar a bhí sa ghrúpa rialaithe.

Fíor 1. Tógáil vacsaín adenovirus athchuingreach agus straitéis thurgnamhach. (A) Is plasmid tointeála adenovirus athchuingreach é pAdeno-CMV-S1 ina bhfuil an spriocghéine S1. pBHGlox∆E1,3Cre is ea an cnámharlach adenovirus plasmid. pBHGlox∆E1,3Cre agus pAdeno-CMV-S1 a bhaintear le trealamh eastóscadh plasmid QIAGEN (Beijing North Yitao Trading Co., LTD., Beijing, an tSín). Lá amháin roimh an aistriú, cuireadh cealla HEK293 i bhfleascán saothraithe cille 25 cm2. Ba é DMEM an meán cultúir ina raibh 5% FBS gan antaibheathaigh. Ar an dara lá, roghnaíodh 60-80% de na cealla agus cuireadh an tuaslagán aistrithe leis na cealla. Tar éis 7 lá tar éis aistrithe, scríobadh na cealla, lártheifneoiríodh iad, cuireadh deireadh leis an súthach, agus rinneadh na cealla a athbheochan le PBS. Rinneadh na cealla a reo-leá arís agus arís eile ag −80 ◦C agus 37 ◦C. Tar éis lártheifneoraithe, bhí an tuaslagán víreas príomhúil san shástán. Rinneadh an brú adenovirus athchuingreach a íonú, a aimpliú, agus a fháil tar éis tuilleadh próiseála agus ainmníodh Ad-S1. Instealladh an vacsaín go ionmhatánach isteach sna lucha le haghaidh staidéir leantacha. (B) An scála ama léirithe maidir le himdhíonadh agus tarraingt siar fola.

3.3. Adenovirus Titer

Sa turgnamh seo, ríomhadh sé chill dhearfach ar an meán i gcúig réimse micreascópacha, agus caolaíodh an víreas sa tobar 108 uair. Bunaithe ar an bhfoirmle a bhfuil cur síos déanta uirthi sa rannán Ábhair agus Modh, ba é an titer adenovirus ná 4.74 × 1011 aonad foirmithe plaic (pfu)/ml (Fíor 2D).

3.4. Díolúine Cheallach Iar-Vacsaínithe

Le linn na tréimhse tástála, bhí athruithe suntasacha staitistiúla i gcítocíní serum (p Níos lú ná nó cothrom le 0.05), a léirigh go príomha go raibh an tiúchan de chemoattractant Keratinocyte / oncogene daonna-rialaithe (KC/GRO) ann. laghdaigh, agus tháinig laghdú ar na tiúchana IFN- , IL-10, IL-12p70, IL-1 , IL-2, IL-4, IL{{10} } agus TNF-, agus níor athraíodh an tiúchan IL-6 go suntasach (Fíor 3).

Fíor 2. Próitéin athchuingreach HAdV-C5-SARS-CoV-2 S1 a shainaithint agus an titer adenovirus a chinneadh. (A) PCR a bhrath an plasmid athchuingreach leis an spriocghéine S1. (B) Brath blota thiar ar SARS-CoV-2. Bhí cealla fás easpónantúil HEK293 ionfhabhtaithe le SARS-CoV-2 ar feadh 48 h, ansin baineadh an próitéin cheallacha amach agus scartha le SDS-PAGE. Deimhníodh slonn SARS-CoV-2 le blotáil an Iarthair le IgG frith-choine gabhar. (C) Micreascópacht imdhíonfhluaraiseachta de chealla HEK-293 atá ionfhabhtaithe le Ad-S1 (glas). Rinneadh cealla a fhrithdhaite le 40, 6-diamidino{- 2-phenylindole (DAPI) chun na núicléis a stainiú. Barra scála 1000 µm. (D) Baineadh úsáid as measúnú plaic le haghaidh tomhais. Micreagraif a thaispeánann caolú 10-5, 10-6, 10-7, agus 10-8 (ó chlé go deas).

Fíor 3. Leibhéil plasma athraithe spreagtha Ad-S1 de chitocíní cineál 1/2, interferons de chineál 1, agus cítocíní eile. Braitheadh ​​​​na torthaí trí fhuil a tharraingt ó na lucha 7 lá tar éis an chéad imdhíonta. Cuirtear na sonraí i láthair mar scatterplots bosca agus guairneáin. Seasann gach ciorcal do dhuine aonair. Rinneadh p-luachanna a ríomh trí úsáid a bhaint as t-tástáil dhá shampla.

3.5. Brath Iar-Imdhíonta Frith-SARS-CoV-2 Antasubstaintí S1

Thug ELISA le fios go raibh antasubstaintí sonracha SARS-CoV-2-i láthair sna lucha a instealladh leis an gcéad agus an dara Ad-S1, ach ní iad siúd a instealladh leis an capsid adenovirus rialaithe nó réiteach PBS (Ad/PBS) (Fíor 4A). Braitheadh ​​titers IgG de 1:210 agus 1:212 i lucha vacsaínithe Ad-S dhá sheachtain tar éis an chéad agus an dara imdhíonadh, faoi seach. Ba é an titer caolúcháin ag 28 lá tar éis an vacsaínithe (D28, GMT 2297.4) ná 6.1-huaire níos airde ná é sin ag D14 (GMT 378.9).

Figiúr 4. Ad-S1 ardleibhéil antasubstaintí spreagtha (A) agus gníomhaíocht neodraithe (B, C) i lucha. (A) ELISA de SARS-CoV-2-séiream IgG sonrach ó Ad-S{1-lucha imdhíonta. (B) Anailís ar ghníomhaíochtaí pseudovirus serum ó lucha imdhíonta Ad-S. (C) Anailís ar ghníomhaíochtaí neodraithe serum ó lucha imdhíonta Ad-S

3.6. Measúnacht Antashubstainte Neodraithe

Chuir dúshlán SARS-CoV-2 cealla Vero E6 ar chumas gníomhaíocht neodraithe a bhrath sa serum luiche imdhíonta (Fíor 4B, C). Ba iad 1:24.3 agus 1:26.3, faoi seach, na leibhéil neodraithe D14 agus D28 de chealla Vero E6 a imdhíonadh in aghaidh SARS-CoV{{10}} in vitro. Bhí torthaí comhchosúla ag an measúnacht pseudovirus agus iad siúd a bhain leis an measúnú víreas beo, agus bhí leibhéil neodraithe suas le 1:28.1 agus 1:29.6 ag D14 agus D28, faoi seach. Bhí an titer neodraithe pseudovirus D28 (GMT 769.0) 2.7-huaire níos airde ná é sin i D14 (GMT 283.7).

4. Plé

We have been working to develop vaccines to stop the COVID-19 pandemic and its rapid spread. The hunt for an effective vaccination against SARS-CoV-2 continues and existing vaccine development strategies include whole virus particle vaccines, live attenuated virus vaccines, purified virus subunit vaccines, and genetic vaccines [13–17]. The epitopes on spike proteins detected in infected serum are highly antigenic, with the ability to induce a strong humoral immune response and neutralize antibodies in individuals infected with SARS-CoV-2 and recovered from COVID-19 [18,19]. The S protein appears to be an ideal target for vaccination against SARS-CoV-2 infection [20]. The S protein S1 subunit induced effective immunity against SARS-CoV-2 and protected against SARS-CoV-2 in animal models [21,22]. The SARS-CoV-2 truncated N protein has a better expression effect than the N protein [23]. Based on this, we selected the truncated S1 protein in this experiment. In other studies, more than 90% of the neutralization activity of the Moderna mRNA vaccine was caused by the RBD antibody, and the neutralization titer directly decreased from >1000 go<25 after the RBD antibody had been eliminated [24]. Higher levels of RBD-specific IgG were associated with increased serum neutralization [25]. Evidently, the S protein demonstrates a greater immune response to the RBD region, and the S1 protein containing RBD can induce neutralizing antibodies with a higher titer than the S protein [26]. Antigens delivered by adenovirus vectors induce strong cellular and humoral immunity after a single immunization, making them useful as an emergency prevention tool in a pandemic [27]. Adenovirus-based vaccine strategies are therefore an important part of the fight against SARS-CoV-2 infection.

Sa staidéar seo, rinneamar vacsaín adenovirus SARS-CoV-2 athchuingreach ina raibh an fo-aonad SARS-CoV-2 S1 agus d’ainmnigh muid Ad-S1 é. Cosúil le CanSinoBIO, atá ceadaithe le haghaidh margaíochta [28], d’úsáideamar HAdV-C5 sa vacsaín seo. Úsáidtear adenovirus go forleathan i géinteiripe athchuingreach agus mar veicteoir vacsaíne. Mar sin féin, tá an ráta seropositive de HAdV-C5 chomh hard le 75-80% sa ghnáthdhaonra [29]. Tugann sé seo le tuiscint go laghdaíonn díolúine réamhstórála i gcoinne veicteoirí HAdV-C5 go suntasach an díolúine de bharr vacsaíne. Arna fhorbairt ag Ollscoil Oxford sa Ríocht Aontaithe, úsáideann ChAdOx1 nCoV-19 veicteoir adenovirus chimpanzee a bhfuil, i gcodarsnacht leis sin, ráta séirpositive níos ísle i ndaoine, agus nuair a bhíonn sé dearfach, cuireann sé titer antashubstaintí serum níos ísle i láthair de ghnáth [30] . Dá bhrí sin, is féidir veicteoirí adenovirus atá in ann imdhíonacht atá ann cheana a imghabháil chun éifeachtúlacht chosanta na vacsaíne adenovirus a fheabhsú. Sa staidéar reatha, chinn ELISA agus tástálacha neodraithe stádas serum lucha roimh agus tar éis an imdhíonta agus fuarthas fianaise ar dhíolúine humoral d'iarrthóirí vacsaíne. Thug an serum a tháirgtear tar éis instealladh ionmhatánach den vacsaín i lucha cosaint éifeachtach do chealla Vero E6 ó ionfhabhtú SARS-CoV-2 in vitro (Fíor 4). Braitheadh ​​​​muid freagra imdhíonachta níos láidre agus cosaint níos fearr sna lucha tar éis an dara imdhíonadh (Fíor 4). Tá ár dtorthaí turgnamhacha cosúil le torthaí turgnamhacha príomhshrutha.

De réir mar a leanann taighde SARS-CoV-2, tá sé léirithe ag roinnt staidéar go bhféadfadh tionchar a bheith ag stoirme cítocine tánaisteach don ionfhabhtú SARS-CoV-2 ar tháirgeadh T-chealla, rud a fhágann go bhfuil sé deacair d’othair imdhíonacht fhadtéarmach a choinneáil. SARS-CoV-2 [31]. Dá bhrí sin, is gá a chinneadh an féidir le Ad-S1 díolúine T-ceall-idirghabhála a chothú i lucha. Léirigh ár dtorthaí gur tháinig méadú ar thiúchan IFN- agus IL{-12, agus tháinig laghdú ar thiúchan IL{{-2 sa ghrúpa Ad-S1, rud a thugann le fios gur tháinig méadú ar mharthanas agus ar fhás cille Th1 de bharr vacsaíne sna lucha. Mhéadaigh IL-12, IL-10, agus TNF- secretion ag na cealla Th1 beagán sa ghrúpa turgnamhach. Léirigh na torthaí seo gur tharraing Ad-S1 freagra T-chealla claonta Th{1-i lucha [32]. Léirigh an méadú IL-5 go bhfuil cealla Th2 rannpháirteach freisin sa fhreagairt imdhíonachta agus go mbíonn éifeachtaí áirithe acu. Laghdaíodh an tiúchan KC/GRO sa ghrúpa turgnamhach go suntasach i gcomparáid leis an ngrúpa rialaithe PBS, a d'fhéadfadh a bheith mar gheall ar an chemotaxis neutrophil laghdaithe a chuir an freagra athlastach faoi chois agus a cheadaigh fo-iarmhairtí na vacsaíne a rialú beagán. Bheadh ​​sé seo níos tairbhí do dhaoine a bhfuil imdhíon-chomhbhrú orthu, amhail daoine scothaosta nó othair atá ag fáil ceimiteiripe. Li M., et al. [29] d’fhorbair vacsaín adenovirus ag baint úsáide as Ad68 mar veicteoir. Léirigh na torthaí go bhféadfaí gníomhaíocht neodraithe in vivo SARS-CoV-2 a bhrath laistigh de dhá sheachtain tar éis an imdhíonta ionmhatánach ar lucha BALB/c agus gur lean sé ag méadú ansin, agus shroich an titer antashubstainte neodraithe (PRNT ID50) 957.3 ag ocht seachtaine. Idir an dá linn, i staidéar Liu J., et al. [33], forbraíodh vacsaíní a úsáideann AdC6 agus AdC68 mar veicteoirí; gineadh idir fhreagraí ceangailteacha agus neodraithe antashubstainte tar éis an imdhíonta 14 lá tar éis an dáileog, le titer IgG de 7108 (meánthír geoiméadrach, GMT; AdC6) agus 5489 (GMT, AdC68). Ba é an titer neodraithe 50 (NT50) den mheasúnú um neodrú pseudovirus ná 125 (GMT, AdC6) agus 67 (GMT, AdC68).

cistanche tubulosa-feabhas a chur ar chóras imdhíonachta

Sa staidéar seo, bhí titers IgG de 1:1{{{{{{1010}10 agus 1:122 braite ag ELISA ar lucha a vacsaíníodh le Ad-S1 dhá sheachtain tar éis an chéad agus an dara imdhíonadh, faoi seach. Ba é an titer caolaithe de ad-s1 ná 378.9 (GMT) ag 14 lá tar éis ionaclaithe agus 2297.4 (GMT) ag 28 lá tar éis ionaclaithe. Sa tástáil antashubstainte neodraithe, léirigh cealla Vero E6 a imdhíonadh le Ad-S1 neodrú 1:24.3 agus 1:26.3 ag D14 agus D28 i gcoinne dúshlán víreas beo SARS-CoV-2 in vitro, faoi seach. Ba iad na leibhéil neodraithe den pseudovirus ag D14 agus D28 ná 283.7 (GMT) agus 769.0 (GMT), faoi seach. Mar sin, bhí an vacsaín sa staidéar seo níos éifeachtaí maidir leis an bhfreagra imdhíonachta sa mhúnla luch.

Mar gheall ar theorannú na gcoinníollacha turgnamhacha, ní dhearnamar anailís ar an láthair imdhíon-sorbentach einsím-nasctha (ELISpot) ar chealla imdhíonachta spleen na lucha turgnamhacha. Ina theannta sin, níorbh fhéidir turgnaimh cosanta ionsaí SARS-CoV-2 a dhéanamh ar lucha mar gheall ar theorainneacha na saotharlainne um chosaint fhisiciúil. Chinneamar, áfach, go raibh ardéifeachtúlacht ag baint leis an vacsaín i múnlaí luiche agus go bhféadfaí í a úsáid mar bhrú vacsaíne cúltaca idéalach. Ina theannta sin, ba cheart imdhíon-ghineacht, sábháilteacht agus éifeachtúlacht na n-iarrthóirí vacsaíne SARS-CoV{-2 ionchasacha a scrúdú i múnlaí breise ainmhithe (eg, coiníní, príomhaigh, racúin, madraí), toisc go bhféadfadh sé nach ndéanfaí samhlacha luiche a mhacasamhlú go hiomlán imdhíoneolaíoch daonna. gnéithe.

cistanche córas imdhíonachta a mhéadú plandaí

5. Conclúidí

Léirigh na sonraí a fuarthas ónár staidéir réamhchliniciúla ar an vacsaín adenovirus go bhfuil sábháilteacht agus éifeachtacht leordhóthanach ag an vacsaín. Mar sin, d’fhéadfadh sé a bheith ina vacsaín phróifiolacsach atá tuar dóchais inti agus indéanta i gcoinne ionfhabhtú SARS-CoV-2.

Tagairtí

1. Trougakos, IP; Stamatelopoulos, K.; Terpos, E.; Tsitsilonis, OE; Aivalioti, E. ; Paraskevis, D.; Kastritis, E.; Pavlakis, GN; Dimopoulos, Léargas MA ar shaolré SARS-CoV-2, paiteolaíocht, agus cóireálacha cuíchóirithe a dhíríonn ar aimhréití cliniciúla COVID-19. J. Biomed. Sci. 2021, 28, 9. [CrossRef]

2. Pillay, TS Gin na míosa: An 2019-nCoV/SARS-CoV-2 phróitéin spíc úrnua don choróinvíreas. J. Clin. Paitól. 2020, 73, 366–369. [CrossRef]

3. Sheinín, M. ; Jeong, B. ; Paidi, RK; Pahan, K. Aischéimniú Ailse Scamhóg i Lucha trí Riarachán Intranasal ar SARS-CoV-2 Spike S1. Ailsí 2022, 14, 5648. [CrossRef]

4. Kadam, SB; Sukhramani, GS; Bishnoi, P.; Pable, AA; Barvkar, VT SARS-CoV-2, an choróinvíreas paindéimeach: Léargais mhóilíneacha agus struchtúracha. J. Micribhithín Bunúsach. 2021, 61, 180–202. [CrossRef]

5. Sternberg, A .; Naujokat, C. Gnéithe struchtúracha de phróitéin spíc coronavirus SARS-CoV-2: Spriocanna le haghaidh vacsaínithe. Sci Saol. 2020, 257, 118056. [CrossRef] [PubMed]

6. Ballaí, AC; Tortorici, MA; Freins, B. ; Snijder, J. ; Li, W. ; Rey, FA; DiMaio, F. ; Bosch, BJ; Sciath Veesler, D. Glycan agus chumhdach epitope de spíc phróitéin choróinvíris a breathnaíodh trí mhicreascópacht chrió-leictreoin. Nát. Struchtúr. Mol. Biol. 2016, 23, 899–905. [CrossRef] [PubMed]

7. Wang, Y. ; Wang, L.; Cao, H.; Liu, C. SARS-CoV-2 Tá S1 níos fearr ná an RBD mar antaigin vacsaíne fo-aonad COVID-19. J. Med. Víreas. 2021, 93, 892–898. [CrossRef]

8. Theoharides, TC; Conti, P. Bí feasach ar phróitéin spíc SARS-CoV-2: Tá níos mó i gceist ná mar a oireann. J. Biol. Rial. Homeost. Gníomhairí 2021, 35, 833–838. [CrossRef] [PubMed]

9. Guo, X.; Deng, Y. ; Chen, H.; Lan, J. ; Wang, W.; Zou, X.; Crochadh, T. ; Lu, Z. ; Tan, W. Díolúine sistéamach agus mucosal i lucha a fuarthas mar gheall ar imdhíonadh amháin le vacsaíní adenovirus daonna cineál 5 nó 41 veicteoir-bhunaithe a iompraíonn an spíc-phróitéin de choróinvíreas siondróm riospráide an Mheán-Oirthir. Imdhíoneolaíocht 2015, 145, 476–484. [CrossRef] [PubMed]

10. Gao, J. ; Mise, K. ; Bunz, O.; Ehrhardt, A. Veicteoireolaíocht adenovirus daonna úrscothach le haghaidh cuir chuige teiripeacha. FEBS Lett. 2019, 593, 3609–3622. [CrossRef]

11. Xing, K. ; Tu, XY; Liu, M.; Liang, ZW; Chen, JN; Li, JJ; Jiang, LG; Xing, Ceisteanna Coitianta; Jiang, Y. Éifeachtúlacht agus sábháilteacht na vacsaíní COVID-19: athbhreithniú córasach. Zhongguo Dang Dai Er Ke Za Zhi 2021, 23, 221–228. [CrossRef]

12. Voysey, M. ; Clemens, SAC; Madhi, SA; Weckx, LY; Folegatti, PM; Aley, PK; Aonghas, B. ; Baillie, VL; Barnabas, SL; Bhorat, QE; et al. Sábháilteacht agus éifeachtúlacht na vacsaíne ChAdOx1 nCoV-19 (AZD1222) i gcoinne SARS-CoV-2: Anailís eatramhach ar cheithre thriail rialaithe randamach sa Bhrasaíl, san Afraic Theas, agus sa RA. Lancet 2021, 397, 99–111. [CrossRef] [PubMed]

13. Li, C. ; Guo, Y.; Fang, Z.; Zhang, H.; Zhang, Y.; Chen, K. Anailís ar Éifeachtúlacht Chosanta na vacsaíní COVID-cheadaithe-19 i gCoinne Sóiteáin Éagsúla. Tosaigh. Imdhíonól. 2022, 13, 804945. [CrossRef] [PubMed]

14. Tanriover, MD; Déan ˘ganay, HL; Akova, M.; Güner, Acmhainní Daonna; Azap, A. ; Akhan, S.; Köse, ¸S.; Erdinç, F.; Acalın, EH; Tabak, Ö.F.; et al. Éifeachtúlacht agus sábháilteacht na vacsaíne SARS-CoV-2 uile-vír neamhghníomhaithe (CoronaVac): Torthaí eatramhacha ar thriail chéim 3 dhá-dall, randamach, rialaithe phlaicéabó sa Tuirc. Lancet 2021, 398, 213–222. [CrossRef]

15. Xia, S. ; Zhang, Y.; Wang, Y.; Wang, H.; Yang, Y.; Gao, GF; Tan, W. ; Wu, G. ; Xu, M.; Lou, Z. Sábháilteacht agus imdhíon-ghineacht vacsaíne SARS-CoV-2 neamhghníomhaithe, BBIBP-CorV: Triail chéim 1/2 randamach, dhá-dall, rialaithe phlaicéabó. Lancet infect. Dis. 2021, 21, 39–51. [CrossRef] [PubMed]

16. Yang, S.; Li, Y. ; Dai, L. ; Wang, J.; sé, P.; Li, C. ; Fang, X. ; Wang, C. ; Zhao, X.; Huang, E. ; et al. Sábháilteacht agus imdhíon-ghineacht vacsaíne fo-aonaid próitéin diméir-bhunaithe RBD-bhunaithe (ZF2001) in aghaidh COVID-19 athchuingreach i gcoinne COVID-19 i measc daoine fásta: Dhá thriail randamach, dhá-dall, faoi rialú phlaicéabó, chéim 1 agus 2. Lancet infect. Dis. 2021, 21, 1107–1119. [CrossRef]

17. Mallapaty, S. India's DNA COVID-vacsaín tá an chéad domhan ag teacht níos mó. Nádúr 2021, 597, 161–162. [CrossRef]

18. Grifoni, A. ; Weiskopf, D. ; Ramirez, IR; Mateus, J. ; Dan, JM; Moderbacher, CR; Rawlings, SA; Sutherland, A.; Premkumar, L. ; Jadi, RS; et al. Spriocanna Freagraí T Cell ar SARS-CoV-2 Coronavirus i nDaoine le Galar COVID-19 agus Daoine Aonair Gan Nochtadh. Cill 2020, 181, 1489–1501.e1415. [CrossRef]

19. Cao, Y. ; Su, B. ; Guo, X.; Grian, W. ; Deng, Y. ; Bao, L. ; Zhu, Q.; Zhang, X. ; Zheng, Y .; Geng, C. ; et al. Antashubstaintí Potent Neodraithe i gcoinne SARS-CoV-2 Arna aithint ag Seicheamhú Aonchealla Ard-Thrách ar Chealla B na nOthar Téarnaimh. Cill 2020, 182, 73–84.e16. [CrossRef]

20. Amanat, F. ; Krammer, F. SARS-CoV-2 Vacsaíní: Tuarascáil Stádais. Díolúine 2020, 52, 583–589. [CrossRef]

21. Li, Y. ; Bi, Y. ; Xiao, H.; Yao, Y.; Liu, X. ; Hu, Z.; Duán, J. ; Yang, Y.; Li, Z.; Li, Y. ; et al. Soláthraíonn foirmiú vacsaíne nua DNA agus teaglaim próitéin COVID-19 cosaint iomlán i gcoinne SARS-CoV-2 i macaques rhesus. Chun cinn. Miocróib Infect. 2021, 10, 342–355. [CrossRef]

22. Du, L. ; sé, Y. ; Zhou, Y.; Liu, S.; Zheng, BJ; Jiang, S. An spícphróitéin de SARS-CoV–sprioc d’fhorbairt vacsaíne agus theiripeach. Nát. An tUrr. Micribhith. 2009, 7, 226–236. [CrossRef] [PubMed]

23. Yue, L. ; Cao, H.; Xie, T.; Fada, R. ; Li, H. ; Yang, T.; Yan, M.; Xie, Z. Próitéin nucleocapsid teasctha N-deireadh de SARS-CoV-2 mar mharcóir séireolaíoch níos fearr ná próitéin nucleocapsid iomlán chun imdhíon-ghineacht SARS-CoV neamhghníomhaithe a mheas-2. J. Med. Víreas. 2021, 93, 1732–1738. [CrossRef] [PubMed]

24. Greaney, AJ; Lios, AN; Daoine uaisle, LE; Crawford, KHD; Starr, TN; Malone, KD; Chu, HY; Bloom, JD Fágann an vacsaín SARS-CoV-2 mRNA{-1273 neodrú níos dírithe ar RBD ach le ceangal antashubstainte níos leithne laistigh den RBD. bioRxiv 2021. [CrossRef]

25. Mantus, G. ; Nyhoff, LÉ; Kaufman, RC; Edar, VV; Lai, L. ; Floyd, K.; Shi, PY; Menachery, VD; Edupuganti, S.; Scherer, EM; et al. Léirítear Tábhacht Fheidhmiúil an Fhearainn Ceangailteach leis an nGlacadóir i Measúnú ar Fhreagraí Ceallacha agus Séareolaíocha ar Ghéar-Ionfhabhtú SARS-CoV-2. J. Imdhíon. 2021, 206, 2605–2613. [CrossRef]

26. sé, Y. ; Zhou, Y.; Liu, S.; Kou, Z.; Li, W. ; Farzan, M.; Jiang, S. Iondaíonn fearann ​​gabhdóra-cheangailteach de phróitéin spíc SARS-CoV antasubstaintí neodraithe an-chumhachtacha: Impleacht maidir le vacsaín fo-aonad a fhorbairt. Bithcheimic. Bithfhis. Res. Cumann. 2004, 324, 773–781. [CrossRef]

27. Deng, S. ; Liang, H. ; Chen, P.; Li, Y. ; Li, Z.; Fan, S.; Wu, K.; Li, X. ; Chen, W.; Qin, Y.; et al. Forbairt agus Feidhmiú Vacsaín Veicteoir Víreasach le linn Phaindéime COVID-19. Miocrorgánaigh 2022, 10, 1450. [CrossRef]

28. Zhu, FC; Guán, XH; Li, YH; Huang, JY; Jiang, T.; Hou, LH; Li, JX; Yang, BF; Wang, L.; Wang, WJ; et al. Imdhíonacht agus sábháilteacht vacsaín athchuingreach adenovirus de chineál adenovirus-5-veicteoraithe COVID-19 i ndaoine fásta sláintiúla 18 mbliana d'aois nó níos sine: Triail chéim 2 randamach, dhá-dall, faoi rialú phlaicéabó. Lancet 2020, 396, 479–488. [CrossRef]

29. Li, M. ; Guo, J.; Lu, S.; Zhou, R.; Shi, H. ; Shi, X. ; Cheng, L. ; Liang, Q. ; Liu, H.; Wang, P.; et al. Spreagann Imdhíonadh Dáileoige Aonair Le Vacsaín Bunaithe ar Aidéanivíreas Simpansí Díolúine Chosanta agus Chosanta i gCoinne Ionfhabhtaithe SARS-CoV-2. Tosaigh. Imdhíonól. 2021, 12, 697074. [CrossRef]

30. Guo, J. ; Mondal, M. ; Zhou, D. Forbairt veicteoirí vacsaíne núíosacha: veicteoirí adenoviral chimpanzee. Hum. Vacsaíní Imdhíonachta. 2018, 14, 1679–1685. [CrossRef]

31. Kaneko, N. ; Kuo, HH; Boucau, J. ; Feirmeoir, JR; Allard-Chamard, H.; Mahajan, VS; Piechocka-Trocha, A.; Lefteri, K.; Osborn, M.; Bals, J. ; et al. Cailliúint Bcl-6-Cealla Cúntóra Follicular T agus Ionaid Geirmeacha á gcur in iúl i COVID-19. Cill 2020, 183, 143–157.e113. [CrossRef] [PubMed]

32. Lexberg, MH; Taubner, A.; Albrecht, I.; Lipíní, I. ; Richter, A.; Kamradt, T. ; Radbruch, A. ; Déanann Chang, HD IFN- agus IL-12 sineirgíocht chun Th17 ginte in vivo a thiontú go cealla Th1/Th17. Eur. J. Imdhíon. 2010, 40, 3017–3027. [CrossRef] [PubMed]

33. Liu, J. ; Xu, K.; Xing, M.; Zhuo, Y.; Guo, J.; Du, M.; Wang, Q.; An, Y.; Li, J. ; Gao, P.; et al. Faightear imdhíonadh heitreolaíoch a ardaíonn an t-am ar fad le veicteoirí adenoivíreacha chimpanzee imdhíonacht chumhachtach agus chosanta i gcoinne ionfhabhtú SARS-CoV-2. Cill Diosca. 2021, 7, 123. [CrossRef] [PubMed]